CN108152286A - 一种快速合格判定燕窝中亚硝酸盐含量的试剂盒及其检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种快速合格判定燕窝中亚硝酸盐含量的试剂盒及其检测方法。试剂盒包括盒体，内部嵌有用于固定物件的海绵体衬底、研钵、钵杵、直筒定量药匙、比色管、显色试剂瓶A、显色试剂瓶B和质控燕窝试剂瓶C；试剂瓶A装有4g/L的对氨基苯磺酸溶液；试剂瓶B装有盐酸萘乙二胺溶液2g/L；试剂瓶C装有从燕窝样品筛查出含30mg/kg原生亚硝酸盐的燕窝质控样品。本发明还提供了一种检测方法，包括制样取样、亚硝酸盐的溶出、显色反应、结果判定。本发明适合于燕窝中亚硝酸筛查、现场快检等，本发明准确度高，减少误差，大大降低了对操作场地和人员的要求，查验和通关速度提高、节省检测费用和样本成本、便于携带和使用。

Description

一种快速合格判定燕窝中亚硝酸盐含量的试剂盒及其检测 方法

技术领域

本发明涉及亚硝酸盐快速检测领域，尤其涉及一种快速合格判定燕窝中亚硝酸盐含量的试剂盒及其检测方法。

背景技术

燕窝是一种高经济价值的补品，燕窝因生长在不同地域的山洞，山洞矿物质组成不同，燕窝可能原生亚硝酸盐。再者，亚硝酸是很好的发色剂，生产商再加工过程，为追求商品的卖相，人为添加亚硝酸盐。国家卫生部出台的燕窝中亚硝酸盐临时限量措施中，规定亚硝酸盐不得超过30毫克/千克，因此，中国对进口燕窝的检验把关都以此为限量，东南亚燕窝原产地加工也以此限量进行燕窝质量安全控制。目前我国针对燕窝这种高经济价值食品没有检测标准，对燕窝中亚硝酸盐的实验室检测定性定量的通用方法采用现有的国家标准GB 5009.33-2016《食品安全国家标准食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定》。

《实施条例草案》第十章第一百九十五条定义：食品快速检测方法，指具有快速、简便、灵敏等特点，用于安全相关项目的检测手段。所谓“快速检测”，是包括样品制备在内的，检测人员在短时间内，如几分钟、十几分钟，采用不同方式方法检测出被检物质是否超出标准规定值的一种检测、筛查行为。目前在食品安全检测方面，食药监管总局抽查检测周期长，结果出来一般需要一个月时间，通常是消费者已经消费完商品，没办法召回问题产品。如果消费者在购买时用随身携带的“快检试剂盒”现场测试此商品的安全性，初筛后再购买和消费，可以挽回消费者经济损失，保障身体健康。《食品安全法》第四条规定：食品生产经营者对其生产经营的食品安全负责，即“谁生产，谁负责；谁经营，谁负责”，所以生产者和经营者备有“快检试剂盒”可以保障食品生产经营者避免官司和法律责任。因此，近年来，有毒有害物质“快检”试剂盒的研发一直是科研工作者的热点和难点，解决的关键是检测方法需要满足如下四点：1、检测成本低；2、操作要求低，非专业人员可以傻瓜式操作；3、检测周期短，几分钟内可以出结果；4、设备轻便易携带。

据文献记载，食品中亚硝酸盐检测方法除了离子色谱法、分光光度法以外，还有荧光法、示波极谱法，目前使用最广泛的是分光光度法。近年来食品中亚硝酸盐的快速检测方法也有很多，比如用比色卡代替标准曲线，实现半定量。以上这些方法各有缺点和局限性：

以目前亚硝酸盐的实验室检测定性定量的通用方法，国家标准GB 5009.33-2016《食品安全国家标准食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定》为例：针对燕窝的检测，前处理参照国标中12.2.4步骤，具体为：称取5g(精确至0.001g)匀浆试样(如制备过程中加水,应按加水量折算),置于250mL具塞锥形瓶中,加12.5mL50g/L饱和硼砂溶液,加入70℃左右的水约150mL,混匀,于沸水浴中加热15min,取出置冷水浴中冷却,并放置至室温。定量转移上述提取液至200mL容量瓶中,加入5mL 106g/L亚铁氰化钾溶液,摇匀,再加入5mL220g/L乙酸锌溶液,以沉淀蛋白质。加水至刻度,摇匀,放置30min,除去上层脂肪,上清液用滤纸过滤,弃去初滤液30mL,滤液备用。测定参照国标中12.3步骤，具体为：吸取40.0mL上述滤液于50mL带塞比色管中,另吸取0.00mL、0.20mL、0.40mL、0.60mL、0.80mL、1.00mL、1.50mL、2.00mL、2.50mL亚硝酸钠标准使用液(相当于0.0μg、1.0μg、2.0μg、3.0μg、4.0μg、5.0μg、7.5μg、10.0μg、12.5μg亚硝酸钠),分别置于50mL带塞比色管中。于标准管与试样管中分别加入2mL4g/L对氨基苯磺酸溶液,混匀,静置3min～5min后各加入1mL2g/L盐酸萘乙二胺溶液,加水至刻度,混匀,静置15min,用1cm比色杯,以零管调节零点,于波长538nm处测吸光度,绘制标准曲线比较。同时做试剂空白。按国标方法操作存在很大局限性：(1)检测成本昂贵，由于检测过程所需成本涉及到仪器折旧、化学试剂的消耗、实验场地，专业人员的工资等，每个样品的亚硝酸盐检测费用通常在250元左右。(2)检测周期长，一般需要5天左右才能拿到检测报告，如果不合格复检，需要更长时间。消费者拿到检测报告时候，燕窝可能已经被消费掉，问题产品无法召回，消费者的经济利益和身体健康造成的损害已经不可逆转，所以，虽然此检测报告和数据具有法律效力，但是对于普通的消费者而言，已经没有现实意义。(3)该方法并非以燕窝产品为检测目标，相反，该方法繁琐的提取步骤更合适腊肉、香肠等脂肪含量高、非水溶性蛋白质含量大的食品。(4)取样量大，一般取样量在5g左右，但是报检时，要求样品量至少50g,才会被受理。这对于经济价值较高的食材燕窝来说，浪费现象严重。检测成本也无形中再次被拉高。所以这种破坏性的检测，是普通消费者较难接受的。

以目前市面上亚硝酸盐的快检试剂盒为例，比如王硕的发明专利《亚硝酸盐快速测定试剂盒及其应用》，程金生的文献《燕窝中亚硝酸盐快速检测技术及高灵敏试剂盒的研制》及相关专利，张洁的《亚硝酸盐快速检测试纸的研制》。此类方法省去了标准曲线的绘制，直接前处理提取液显色、比色，从而实现快检，但依然存在如下缺点：(1)比色卡在制作过程中本身因为工艺的问题会出现色差，此色差会影响到亚硝酸盐含量高低的判读。(2)溶液和比色卡比对，会出现肉眼视觉误差。(3)此办法无法扣本底影响，比如快检试剂盒应该使用容易取到的水，通常对水没有要求，所以如果水本身含有亚硝酸盐，则没办法消除此本底影响。(4)因为制作曲线和样品的不是同一个人，不是同一个环境，会产生系统误差。(5)有的专利提出燕窝溶于水后过柱子净化，滤液再显色，跟比色卡比对；但事实上，燕窝溶于水后是胶状物质，过柱子要很长时间，所以此类试剂盒也失去了“快检”的意义。

市面上的食品中亚硝酸盐检测的各种试剂盒，此类试剂盒适用范围是肉制品和腌制菜类，针对燕窝这种食品，目前没有一种成品快检试剂盒，所以此类快检试剂盒如果用在燕窝上，会有如下缺陷：(1)前处理方法过程繁杂，多有不必要的环节，导致过程中有目标物的流失。比如，有的试剂盒，要等样品沉淀，取上清液去比色，本试剂盒直接在比色管里比色，既省时又准确。(2)前处理不合理，导致提取不干净。很多试剂盒影响定量的技术关键点细节做的不好，比如试剂盒里面没配研钵，这样对于燕窝这些干脆的食品，没办法粉碎样品，直接影响前处理提取不干净。(3)称样量不准，这样会严重影响定量。比如试剂盒里没有配制定量药匙，说明书只说称量0.1g,于是消费者理解成用日常做西点的蛋糕称来称，但是蛋糕称不能准确称量出来0.1g。(4)对实验场地和操作者的专业知识有一定的要求，此类快检试剂盒合适在实验室使用。或者前处理提取亚硝酸过程，或者后续显色在分光光度计定量阶段还是离不开实验室。

综上，此类快检试剂盒相对国标方法，缩短了一定检测时间，但前处理方法对燕窝并不合适，只适合专业人员在实验室对肉类或者腌制菜类做初筛，并不合适普通消费者。

目前还没有针对燕窝这种名贵食材量身定做的检测要求低的合适的快检方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种快速合格判定燕窝中亚硝酸盐含量的试剂盒及其检测方法，针对燕窝中的亚硝酸盐合格判定的限量，优化提取方案，质控精准比对，实现快速合格判定，方法对实验条件和人员要求低。

本发明的试剂盒原理:在弱酸条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，再与盐酸萘乙二胺偶合形成红色染料。根据颜色的深浅与亚硝酸盐含量为30mg/kg质控燕窝比色样比色。

本发明的一种快速合格判定燕窝中亚硝酸盐含量的试剂盒，包括盒体，所述盒体内部嵌有用于固定物件的海绵体衬底、研钵、钵杵、直筒定量药匙、比色管、显色试剂瓶A、显色试剂瓶B和质控燕窝试剂瓶C；所述研钵通过研钵凹槽嵌入所述海绵体衬底；所述钵杵通过钵杵凹槽嵌入所述海绵体衬底；所述直筒定量药匙通过药匙凹槽嵌入所述海绵体衬底；所述比色管通过比色管凹槽嵌入所述海绵体衬底；所述显色试剂瓶A、显色试剂瓶B和质控燕窝试剂瓶C通过试剂瓶凹槽分别嵌入所述海绵体衬底；所述显色试剂瓶A为深色瓶，内装有4g/L的对氨基苯磺酸溶液，所述对氨基苯磺酸溶液用体积百分比为20％的HCL配制而成；所述显色试剂瓶B为深色瓶，内装有盐酸萘乙二胺溶液2g/L；所述质控燕窝试剂瓶C为深色瓶，内装有纯天然质控燕窝研磨粉。

优选的，所述研钵为口径5cm不锈钢材质研钵。

优选的，所述直筒定量药匙规格为一平勺燕窝样品取样量为0.1g，所述药匙为两只。

优选的，所述比色管规格为10ml，有塞密闭，所述比色管凹槽有两个，每个凹槽放置两只比色管；所述比色管为4只。

优选的，所述试剂瓶凹槽与所述显色试剂瓶A、所述显色试剂瓶B和质控燕窝试剂瓶C底部的形状相匹配，可使所述显色试剂瓶A、所述显色试剂瓶B和质控燕窝试剂瓶C的底部嵌入所述试剂瓶凹槽内。

优选的，所述质控燕窝研磨粉为从燕窝样品筛查出含30mg/kg原生亚硝酸盐的燕窝质控样品。

本发明还提供了一种检测方法，包括如下步骤：

(1)制样取样：取待检测的燕窝样品半盏，放在所述研钵中用所述钵杵研磨粉碎，用所述直筒药匙取用1平勺放入所述比色管中；换用另一只所述直筒药匙取所述质控燕窝粉1平勺，放入另一只所述比色管中；

(2)亚硝酸盐的溶出：在所述步骤(1)中的两只比色管中分别加入纯净水至10毫升刻度线下1cm处，盖上所述比色管塞，手摇震摇5分钟；

(3)显色反应：5分钟后在所述步骤(2)中的两只比色管中分别加入2滴溶液A，震摇后再分别加入1滴溶液B，再加纯净水至10ml刻度线，观察两个比色管颜色；

(4)结果判定：如果待检测样品的比色管的颜色是无色或者淡粉色，颜色比质控燕窝的比色管的颜色淡，则说明待检测样品不含或者少量含有亚硝酸盐，判定待检样品合格；

如果待检测样品的比色管的颜色和质控燕窝的比色管的颜色相同或者相近，说明待检测样品含量在限量值附近，需要重做一次，或者送检实验室进一步检测是否合格；

如果待检测样品的比色管的颜色比质控燕窝的比色管的颜色浓艳，证明所述待检测样品中亚硝酸盐超过限量，判定不合格产品。

本发明适合于燕窝原料收购时的亚硝酸筛查、燕窝加工产品的亚硝酸盐控制和贸易采购方的现场快速检测等，大大提高快速查验和通关速度，适合消费者购买前对名贵食材的品质评估，降低经济损失，保障消费者身体健康。

本发明具有如下有益效果：

(1)准确度高：样品取样量和浸泡液体积是影响判定的两个关键因素。本发明用定量小药匙，一平匙就是0.1g，操作简单、快速，确保初筛层面上的准确称量。由于使用带刻度的比色管，显色在比色管里进行，通过刻度准确控制浸泡液体积，可以省略转移样品的环节，避免转移样品带来目标物亚硝酸盐的损失而导致的结果的偏差。本实验与其他试剂盒的区别在于，引入研钵到试剂盒中，充分粉碎样品，使燕窝释放亚硝酸盐更彻底。引入定量小药匙到试剂盒，使定量准确。

(2)减少系统误差和视觉误差：操作人员同时做质控燕窝样品和待测燕窝的检测，显色后颜色比对，消除系统误差；本实验与其他试剂盒的区别在于，并未使用比色卡，因此避免了使用比色卡可能造成的视觉误差。质控燕窝的引入可以消除本底干扰，使判定更准确。

(3)大大降低了对操作场地和操作人员的要求：本发明由于优化样品的前处理方法和并不需采用分光光度计，因此不受实验场地和操作人员专业知识和实验技能的限制，可以完全脱离实验室，普通人员可采用本试剂盒，结合本发明的操作方法判定燕窝的亚硝酸盐是否合格。本实验与其他试剂盒的区别在于，完全脱离实验室，操作者可以进行傻瓜式操作。

(4)快速查验和通关：可由原来的3-5天检测周期，缩短到8分钟内完成。因为燕窝主要成分是唾液酸，蛋白质是水溶性的，溶解后可以充分释放亚硝酸盐，本发明加入室温纯净水，手摇提取亚硝酸盐，由于水温低，省去加入硼酸钠缓冲溶液维持亚硝酸盐稳定的步骤；针对零脂肪含量的燕窝来说，省去“加入亚铁氰化钾、乙酸锌，省去静止30分钟”，省去“过滤”脂肪的时间；因为不用分光光度计，省去“配置曲线，用分光光度计读数计算”的时间，因为我们引入燕窝中原生亚硝酸盐质控样品直接颜色比对，省去扣除本底的时间。本实验与其他试剂盒的区别在于，8分钟完成操作，给出判定结果，所用最少的检测时间。

(5)节省检测费用：由于本试剂盒和检测方法省去多个步骤和部分专业设备，因此，每个样品的成本只有几块钱。

(6)节省了检测成本：本方法燕窝取用量仅需0.1g，剩余燕窝可以回收，对于高经济价值的燕窝来说，更是节省了检测成本。

(7)便于携带和使用：本发明试剂盒尺寸小，不占储存空间，便于消费者携带和使用。

附图说明

图1为本发明的一种燕窝中亚硝酸盐合格判定的快检试剂盒的一个优选实施例的结构示意图；

图2为本发明的一种燕窝中亚硝酸盐合格判定的快检试剂盒凹槽的一个优选实施例的示意图。

具体实施方式

实施例1：本发明的一种燕窝中亚硝酸盐合格判定的快检试剂盒的结构说明的一个优选实施例

本发明的一种燕窝中亚硝酸盐合格判定的快检试剂盒的一个优选实施例的结构图，如图1所示，图1为本发明的一种燕窝中亚硝酸盐合格判定的快检试剂盒的一个优选实施例的结构示意图，图2为本发明的一种燕窝中亚硝酸盐合格判定的快检试剂盒一个优选实施例凹槽部分的示意图。由图1和图2可见，本试剂盒包括盒体1，盒体1内部嵌有用于固定物件的海绵体衬底2、研钵3、钵杵4、直筒药匙5、比色管6、显色试剂瓶A7、显色试剂瓶B8和质控燕窝试剂瓶C9。

研钵3通过研钵凹槽31嵌入海绵体衬底2；钵杵4通过钵杵凹槽41嵌入海绵体衬底2；直筒药匙5通过药匙凹槽51嵌入海绵体衬底2；比色管6通过比色管凹槽61嵌入海绵体衬底2；显色试剂瓶A7、显色试剂瓶B8和质控燕窝试剂瓶C9通过试剂瓶凹槽71、81、91分别嵌入海绵体衬底2。

研钵3口径5cm，为不锈钢材质研钵。

直筒药匙5规格为一平勺燕窝样品取样量为0.1g，药勺5有两只。

比色管6规格为10ml，有塞密闭，比色管凹槽61有两个，每个凹槽61放置两只比色管6，比色管6共有4只。

显色试剂瓶A7为深色瓶，内装有4g/L的对氨基苯磺酸溶液，对氨基苯磺酸溶液是用体积百分比为20％的HCL配制而成的。

显色试剂瓶B8为深色瓶，内装有2g/L盐酸萘乙二胺溶液。

试剂瓶凹槽71、81、91与显色试剂瓶A7、所述显色试剂瓶B8和燕窝质控试剂瓶C9的底部的形状相匹配，可使显色试剂瓶A7、显色试剂瓶B8和燕窝质控试剂瓶C9的底部嵌入凹槽内。

质控燕窝为从燕窝样品筛查出含27-33mg/kg原生亚硝酸盐的燕窝质控样品。

在另一个优选实施例里，质控燕窝为从燕窝样品筛查出含30mg/kg原生亚硝酸盐的燕窝质控样品。

在本实施例试剂盒中的质控燕窝是燕窝样品筛查出含30mg/kg原生亚硝酸盐燕窝，因为是燕窝原生质控样品，排除人工制作质控样品的不均匀性和蛋白质溶解释放亚硝酸盐速度的差异。如果取量是一平匙0.1g制备成溶液后，内含30mg/kg的亚硝酸盐，此颜色用于比色标准，有了质控燕窝的颜色比对，相对于比色卡，可以消除人的视觉误差。相对于操作者，可以消除系统误差，使合格判定更精准。

在本实施例试剂盒中的小研钵用于粉碎燕窝样品，保证制样均匀，保证浸泡充分。

在本实施例试剂盒中的0.1g药匙，1平匙燕窝样品，刚好是0.1g，代替天平称量。0.1g定量勺的配放，使称样量准确，保证后面的计算结果准确。

在本实施例试剂盒中的10ml具塞比色管4只。有塞密闭，加入燕窝后，可以手动震摇，使充分浸泡后的燕窝里的亚硝酸盐溶解完全，游离于水溶液中提取充分。10ml比色管的应用，具塞比色管上有10ml定容线，确保比色精准。比色管浸泡震摇样品后，显色就在样品比色管里进行，中间不设移液环节，减少目标物的损失。

考虑到每次待检测样品可以多个，共用一只质控燕窝样品比色，每盒多配送2只比色管，所以本产品均摊到每个样品的时间成本和耗材费用会更少。

本实施例整个盒子的尺寸相当于信封大小，便于携带和存放。

小研钵、药匙和比色管都可以用水洗净重复使用，取样0.1g后剩余燕窝可以回收。

实施例2：本发明的一种燕窝中亚硝酸盐合格判定的快检试剂盒的检测方法的一个优选实施例

本发明的一种燕窝中亚硝酸盐合格判定的快检试剂盒的检测方法的一个优选实施例。取待检测的燕窝样品，分别用本试剂盒、杭州泰熙(TESTSEALABS)亚硝酸盐快检试剂盒、国标方法进行检测，本试剂盒按如下步骤进行操作：

(1)制样取样：取待检测的燕窝样品半盏，放在实施例中的研钵中，用钵杵研磨粉碎，用直筒药匙取用1平匙放入比色管中；为避免交叉污染，换用另一个直筒药匙取质控燕窝1平匙，放在另一个比色管中；

(2)亚硝酸盐的溶出：在步骤(1)中的两只比色管中分别加入纯净水至10毫升线下1厘米处，盖上比色管的塞子，用手震摇5分钟；

(3)显色反应：分别在步骤(2)中的两只比色管中加入2滴溶液A，震摇后再分别加入1滴溶液B，再加纯净水至10毫升刻度线，观察两个比色管颜色；

(4)合格判定：如果待检测样品的比色管的颜色是无色或者淡粉色，颜色比质控燕窝的比色管的颜色淡，则说明待检测样品不含或者少量含有亚硝酸盐，判定待检样品合格；

如果待检测样品的比色管的颜色和质控燕窝的比色管的颜色相同或者相近，说明待检测样品含量在限量值附近，需要送检实验室进一步的测定是否合格；

如果待检测样品的比色管的颜色比质控燕窝的比色管的颜色浓艳，证明所述待检测样品中亚硝酸盐超过限量，判定不合格产品。

杭州泰熙(TESTSEALABS)快检试剂盒按说明书进行操作。

国标方法按国家标准GB 5009.33-2016《食品安全国家标准食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定》方法进行检测。

结果如表1所示，表1为本试剂盒、杭州泰熙(TESTSEALABS)快检试剂盒和国标方法对比试验结果分析表。

表1

由上述结果可以看出，本试剂盒检测耗时最短，成本最低。

利用本试剂盒进行检测，如果燕窝如果比较湿润，不容易研磨，可以考虑将燕窝用风扇或者电吹风吹干，然后再研磨。

本发明以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.一种快速合格判定燕窝中亚硝酸盐含量的试剂盒，所述试剂盒包括盒体，其特征在于，所述盒体内部嵌有用于固定物件的海绵体衬底、研钵、钵杵、直筒定量药匙、比色管、显色试剂瓶A、显色试剂瓶B和质控燕窝试剂瓶C；

所述研钵通过研钵凹槽嵌入所述海绵体衬底；所述钵杵通过钵杵凹槽嵌入所述海绵体衬底；所述直筒定量药匙通过药匙凹槽嵌入所述海绵体衬底；所述比色管通过比色管凹槽嵌入所述海绵体衬底；每个所述比色管凹槽放入两只所述比色管；所述显色试剂瓶A、显色试剂瓶B和质控燕窝试剂瓶C通过试剂瓶凹槽分别嵌入所述海绵体衬底；

所述显色试剂瓶A为深色瓶，内装有4g/L的对氨基苯磺酸溶液，所述对氨基苯磺酸溶液用体积百分比为20％的HCL配制而成；

所述显色试剂瓶B为深色瓶，内装有盐酸萘乙二胺溶液2g/L；

所述质控燕窝试剂瓶C为深色瓶，内装有纯天然质控燕窝研磨粉。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述研钵为口径5cm不锈钢材质研钵。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述直筒定量药匙规格为一平勺燕窝样品取样量为0.1g，所述药匙为两只。

4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述比色管规格为10ml，有塞密闭；所述比色管凹槽有两个。

5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂瓶凹槽与所述显色试剂瓶A、所述显色试剂瓶B和质控燕窝试剂瓶C底部的形状相匹配，可使所述显色试剂瓶A、所述显色试剂瓶B和质控燕窝试剂瓶C的底部嵌入所述试剂瓶凹槽内。

6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述质控燕窝研磨粉为从燕窝样品筛查出含30mg/kg原生亚硝酸盐的燕窝质控样品。

7.一种权利要求1-6之一所述的试剂盒的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)制样取样：取待检测的燕窝样品半盏，放在所述研钵中用所述钵杵研磨粉碎，用所述直筒药匙取用1平勺放入所述比色管中；换用另一只所述直筒药匙取所述质控燕窝粉1平勺，放入另一只所述比色管中；

(2)亚硝酸盐的溶出：在所述步骤(1)中的两只比色管中分别加入纯净水至10毫升刻度线以下1cm处，盖上所述比色管塞，手摇震摇5分钟；

(3)显色反应：5分钟后在所述步骤(2)中的两只比色管中分别加入2滴溶液A，震摇后再分别加入1滴溶液B，再加纯净水至10ml刻度线，观察两个比色管颜色；

(4)结果判定：如果待检测样品的比色管的颜色是无色或者淡粉色，颜色比质控燕窝的比色管的颜色淡，则说明待检测样品不含或者少量含有亚硝酸盐，判定待检样品合格；

如果待检测样品的比色管的颜色和质控燕窝的比色管的颜色相同或者相近，说明待检测样品含量在限量值附近，需要重做一次，或者送检实验室进一步检测是否合格；

如果待检测样品的比色管的颜色比质控燕窝的比色管的颜色浓艳，证明所述待检测样品中亚硝酸盐含量超过限量，判定不合格产品。