CN109211889A - 亚硝态氮快检试剂盒及其制备方法与亚硝态氮快检方法 - Google Patents

亚硝态氮快检试剂盒及其制备方法与亚硝态氮快检方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种亚硝态氮快检试剂盒及其制备方法与亚硝态氮快检方法。本发明的亚硝态氮快检试剂盒包括包装容器以及容置于所述包装容器中的显色水剂、显色粉剂、标准比色卡、注射器、具有刻度线的检测瓶、装有稀释水的第二容器；所述显色水剂与所述显色粉剂分别使用不透光的眼药滴瓶与不透光的第一容器盛装；所述显色水剂为稀盐酸；所述显色粉剂为包含对‑氨基苯磺酰胺、N‑(1‑萘基)‑乙二胺二盐酸盐、氯化钠、柠檬酸和/或其水合物的混合粉剂。本发明的亚硝态氮快检试剂盒使用方便，能实现现场快速检测，具有较强的实用性，对缺乏检测设备的检验场所能够提供极大的便捷。

Description

亚硝态氮快检试剂盒及其制备方法与亚硝态氮快检方法
技术领域
本发明涉及水质检测领域，尤其涉及一种亚硝态氮快检试剂盒及其制备方法与亚硝态氮快检方法。
背景技术
亚硝酸盐是氮循环的中间产物，不稳定；根据水环境条件，可被氧化成硝酸盐，也可被还原为氨。因此，通过测定亚硝态氮(NO2 --N)的含量，同时了解水中硝酸盐氮与氨氮的含量，则可以判断污染水体中氮化合物的总量是否超标，当水体中氮化合物的总量被判定为超标时，需要采取必要的减量措施，例如利用生化技术控制污水中硝酸盐氮的含量，通过反硝化来降低硝酸盐氮的浓度。如果反硝化过程控制不当，会导致亚硝态氮积累，不能转化为最终产物氮气，导致反硝化失败，因此需要适时监测亚硝态氮的含量，进而采取有效的措施，降低其含量，提高反硝化成功率。
腌制食品(例如泡菜、腊鱼、腊肉等)中的亚硝氮超标对人体健康也有直接危害。这是由于这些食物在发酵过程中会产生亚硝酸盐。过量的亚硝酸盐可使人体正常的血红蛋白(低铁血红蛋白)氧化成高铁血红蛋白，出现高铁血红蛋白症，由于血红蛋白丧失了在人体内运送氧的能力，因此会导致人体出现组织性缺氧症状。另外，过量的亚硝酸盐与食物中的蛋白质结合易形成致癌物亚硝胺，所以亚硝态氮的检测对食品安全显得至关重要。
在水产养殖中，由于消毒剂的使用，把有害的和有益的细菌杀灭，再加上氧气供应不足，造成亚硝态氮向硝态氮转化的过程受阻，导致水体亚硝态氮含量超标。亚硝态氮对鱼虾的危害也是通过使正常的血红蛋白氧化成高价的血红蛋白，从而导致输氧能力受阻，出现组织缺氧，而导致鱼虾死亡。
目前，国标采用N-(1-萘基)-乙二胺光度法(GB 7493-87)测定亚硝酸盐氮的含量。国标GB 7493-87法中，亚硝酸盐与对-氨基苯磺酰胺发生重氮反应，生成重氮盐，再与N-(1-萘基)-乙二胺二盐酸盐偶联生成品红色染料，该品红色染料的颜色深浅与亚硝态氮的浓度成正比。该方法要求仪器设备齐全，检测器具例如分光光度仪、比色管、移液管需一一俱全，过程复杂、高成本、耗时、耗材，不适应原位污染现场的快速诊断和污水处理站(厂)的日常检验。总结一下，国标GB 7493-87亚硝酸盐氮测定中存在以下缺陷：
1)配制的N-(1-萘基)-乙二胺二盐酸盐溶液不稳定，需贮于棕色瓶内，置冰箱中保存；当色泽明显加深时，需重新配制；
2)稳定时间过长，为20分钟，需要适当的减少稳定时间，以达到快速检测的目的；
3)采用磷酸溶液作为显色水剂的主要成分；磷酸能与多种金属离子结合产生沉淀，干扰测定，不适应工业废水等含金属离子比较多的复杂水样的测定；
4)国标法反应需要在强酸性条件下进行，pH不能超过2，并且反应体系没有提供适当的酸性缓冲环境，以应对复杂的水体环境；
5)国标法操作过程复杂，需要用到移液管移取溶液，还要配合分光光度计测定浓度，因此急需简化过程。
发明内容
本发明的目的在于提供一种亚硝态氮快检试剂盒的制备方法，制备成本低，使用方便，检测结果准确可靠。
本发明的目的还在于提供一种亚硝态氮快检试剂盒，使用方便，能实现现场快速检测，具有较强的实用性，对缺乏检测设备的检验场所能够提供极大的便捷。
本发明的目的还在于提供一种亚硝态氮快检方法，该方法操作简单，反应时间短，检测结果准确可靠。
为实现以上目的，本发明提供一种亚硝态氮快检试剂盒的制备方法，包括：
制备显色水剂，采用不透光的眼药滴瓶对所述显色水剂进行包装；其中，制备显色水剂的步骤包括：将去离子水与浓盐酸混合，得到显色水剂；
制备显色粉剂，采用不透光的第一容器对所述显色粉剂进行包装；其中，制备显色粉剂的步骤包括：将对-氨基苯磺酰胺、N-(1-萘基)-乙二胺二盐酸盐、氯化钠、柠檬酸和/或其水合物混合均匀，得到显色粉剂；
所述不透光的眼药滴瓶与所述不透光的第一容器的透光率均小于10％；
制作标准比色卡，制作标准比色卡的步骤包括：配制多种不同浓度的标准亚硝态氮水溶液，取一种浓度的标准亚硝态氮水溶液于检测瓶中，在所述检测瓶中滴入所述显色水剂，混匀；加入所述显色粉剂，溶解完全；静置一段时间后，对所述检测瓶中的溶液进行拍照；之后将所述多种不同浓度的标准亚硝态氮水溶液的反应颜色汇集在一起，打印后得到标准比色卡；
其中，在所述检测瓶中加入的所述显色水剂与所述显色粉剂的量能够满足最高浓度的标准亚硝态氮水溶液的反应需求；
提供具有刻度线的检测瓶、注射器、包装容器、装有稀释水的第二容器，将装有所述显色水剂的眼药滴瓶、装有所述显色粉剂的第一容器、所述剪刀、所述注射器、所述检测瓶、所述装有稀释水的第二容器均置于所述包装容器中，得到亚硝态氮快检试剂盒。
可选的，所述显色水剂中，浓盐酸与去离子水的质量比为0.9-1.4:7.2-10.8；所述显色粉剂中，对-氨基苯磺酰胺、N-(1-萘基)-乙二胺二盐酸盐、氯化钠、柠檬酸和/或其水合物的质量比为16-24:0.8-1.2:32-48:32-48。
可选的，制作标准比色卡的步骤中，所述多种不同浓度的标准亚硝态氮水溶液包括亚硝态氮浓度分别为0mg/L、0.02mg/L、0.05mg/L、0.08mg/L、0.12mg/L、0.3mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L的8种标准亚硝态氮水溶液。
可选的，所述不透光的第一容器为不透光包装袋，所述不透光包装袋中装入显色粉剂后抽真空密封；所述包装容器内还设有剪刀；所述注射器包括1ml注射器与10ml注射器；所述检测瓶中设有10ml刻度线。
本发明还提供一种亚硝态氮快检试剂盒，包括包装容器以及容置于所述包装容器中的显色水剂、显色粉剂、标准比色卡、剪刀、注射器、具有刻度线的检测瓶、装有稀释水的第二容器；所述显色水剂与所述显色粉剂分别使用不透光的眼药滴瓶与不透光的第一容器盛装；
所述显色水剂为稀盐酸；
所述显色粉剂为包含对-氨基苯磺酰胺、N-(1-萘基)-乙二胺二盐酸盐、氯化钠、柠檬酸和/或其水合物的混合粉剂；
所述不透光的眼药滴瓶与所述不透光的第一容器的透光率均小于10％；
所述标准比色卡上显示有多种不同颜色以及与每种颜色对应的标准亚硝态氮水溶液的浓度值，所述多种不同颜色分别由多种不同浓度的标准亚硝态氮水溶液与所述显色水剂和所述显色粉剂反应产生。
可选的，所述显色水剂由浓盐酸与去离子水混合得到，浓盐酸与去离子水的质量比为0.9-1.4:7.2-10.8；所述显色粉剂中，对-氨基苯磺酰胺、N-(1-萘基)-乙二胺二盐酸盐、氯化钠、柠檬酸和/或其水合物的质量比为16-24:0.8-1.2:32-48:32-48。
可选的，所述多种不同浓度的标准亚硝态氮水溶液包括亚硝态氮浓度分别为0mg/L、0.02mg/L、0.05mg/L、0.08mg/L、0.12mg/L、0.3mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L的8种标准亚硝态氮水溶液。
可选的，所述不透光的第一容器为不透光包装袋，所述不透光包装袋中装入显色粉剂后抽真空密封；所述包装容器内还设有剪刀；所述注射器包括1ml注射器与10ml注射器；所述检测瓶中设有10ml刻度线。
本发明还提供一种亚硝态氮快检方法，包括：
提供如上文所述的亚硝态氮快检试剂盒与原水水样；
对所述原水水样进行稀释或者不稀释，得到亚硝态氮浓度位于所述亚硝态氮快检试剂盒中的标准比色卡的检测范围的待检测水样；
取所述待检测水样到检测瓶刻度线处，在所述检测瓶中滴加所述显色水剂，摇匀；加入所述显色粉剂，混匀溶解；静置一段时间后，将所述待检测水样的反应颜色与所述标准比色卡上的颜色进行比对，判定所述待检测水样中的亚硝态氮的浓度，或者根据稀释比例换算后得到所述原水水样中的亚硝态氮的浓度；
在所述检测瓶中加入的所述显色水剂与所述显色粉剂的量能够满足标准比色卡所能检测的最高亚硝态氮浓度的反应需求。
可选的，当所述原水水样为悬浊液时，需要先将所述原水水样静置10分钟-20分钟，再取上清液进行检测；
当所述原水水样中的亚硝态氮浓度大于所述亚硝态氮快检试剂盒中的标准比色卡的最高检测浓度时，需要对所述原水水样进行稀释，得到待检测水样；当所述原水水样中的亚硝态氮浓度位于所述亚硝态氮快检试剂盒中的标准比色卡的检测范围中时，不需要对所述原水水样进行稀释，所述原水水样即为待检测水样。
本发明的有益效果：本发明的亚硝态氮快检试剂盒的制备方法步骤简单，成本低；本发明的亚硝态氮快检试剂盒使用方便，检测试剂稳定，保质期长。本发明的亚硝态氮快检方法采用上述亚硝态氮快检试剂盒对水体中的亚硝态氮含量进行检测，操作简单，稳定时间短(只需10分钟)，检测结果准确。本发明的亚硝态氮快检方适用于检测食品腌制过程中亚硝态氮含量是否超标，水产养殖水体中亚硝态氮是否过量(硝态氮过量会引起鱼虾死亡)，以及污水处理厂的污水处理水中的亚硝态氮残留是否超标等检测项目。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对本发明范围的限定。
图1为本发明亚硝态氮快检试剂盒的制备方法的一实施例的流程图；
图2为本发明亚硝态氮快检试剂盒中的标准比色卡的一实施例的结构示意图；
图3为本发明亚硝态氮快检试剂盒中的显色水剂和显色粉剂与3种不同亚硝态氮浓度的水样反应后的颜色对比图；
图4为本发明亚硝态氮快检方法的一实施例的流程图。
具体实施方式
如本文所用之术语：
“由……制备”与“包含”同义。本文中所用的术语“包含”、“包括”、“具有”、“含有”或其任何其它变形，意在覆盖非排它性的内容。例如，包含所列要素的组合物、步骤、方法、制品或装置不必仅限于那些要素，而是可以包括未明确列出的其它要素或此种组合物、步骤、方法、制品或装置所固有的要素。
连接词“由……组成”排除任何未指出的要素、步骤或组分。如果用于权利要求中，此短语将使权利要求为封闭式，使其不包含除那些描述的材料以外的材料，但与其相关的常规杂质除外。当短语“由……组成”出现在权利要求主体的子句中而不是紧接在主题之后时，其仅限定在该子句中描述的要素；其它要素并不被排除在作为整体的所述权利要求之外。
当量、浓度、或者其它值或参数以范围、优选范围、或一系列上限优选值和下限优选值限定的范围表示时，这应当被理解为具体公开了由任何范围上限或优选值与任何范围下限或优选值的任一配对所形成的所有范围，而不论该范围是否单独公开了。例如，当公开了范围“1～5”时，所描述的范围应被解释为包括范围“1～4”、“1～3”、“1～2”、“1～2和4～5”、“1～3和5”等。当数值范围在本文中被描述时，除非另外说明，否则该范围意图包括其端值和在该范围内的所有整数和分数。
“质量份”指表示多个组分的质量比例关系的基本计量单位，1份可表示任意的单位质量，如可以表示为1g，也可表示2.689g等。假如我们说A组分的质量份为a份，B组分的质量份为b份，则表示A组分的质量和B组分的质量之比a:b。或者，表示A组分的质量为aK，B组分的质量为bK(K为任意数，表示倍数因子)。不可误解的是，与质量份数不同的是，所有组分的质量份之和并不受限于100份之限制。
“和/或”用于表示所说明的情况的一者或两者均可能发生，例如，A和/或B包括(A和B)和(A或B)；
此外，本发明要素或组分前的不定冠词“一种”和“一个”对要素或组分的数量要求(即出现次数)无限制性。因此“一个”或“一种”应被解读为包括一个或至少一个，并且单数形式的要素或组分也包括复数形式，除非所述数量明显旨指单数形式。
本发明亚硝态氮快检试剂盒的工作原理是：在盐酸介质中，pH值为1.8±0.3时，亚硝酸盐与对-氨基苯磺酰胺发生重氮反应，生成重氮盐，重氮盐再与N-(1-萘基)-乙二胺二盐酸盐偶联生成品红色染料，该品红色染料的颜色深浅与亚硝态氮(亚硝酸根离子)的浓度成正比。
请参阅图1，本发明提供一种亚硝态氮快检试剂盒的制备方法，包括如下步骤：
步骤1、制备显色水剂，采用不透光的眼药滴瓶对所述显色水剂进行包装；其中，制备显色水剂的步骤包括：将去离子水与浓盐酸混合，得到显色水剂。
具体的，所述眼药滴瓶为能够通过捏或者挤压的方式来控制滴出的液滴数量的液体容器。
具体的，所述步骤1包括：向洁净容器中添加一定体积的去离子水，再混合一定体积的浓盐酸，之后定量分装到不透光的眼药滴瓶中；
具体的，所述显色水剂中，浓盐酸与去离子水的质量比为0.9-1.4:7.2-10.8；
具体的，所述浓盐酸的浓度(质量分数)为36-38％。
具体的，每个眼药滴瓶中显色水剂的体积为5ml-20ml，例如10ml；每个亚硝态氮快检试剂盒中共设置1瓶显色水剂。
具体的，所述不透光的眼药滴瓶为塑料滴瓶。
步骤2、制备显色粉剂，采用不透光的第一容器对所述显色粉剂进行包装；其中，制备显色粉剂的步骤包括：将对-氨基苯磺酰胺、N-(1-萘基)-乙二胺二盐酸盐(C10H7NHC2H4NH2·2HC1)、氯化钠、柠檬酸和/或其水合物混合均匀，得到显色粉剂；
所述不透光的眼药滴瓶与所述不透光的第一容器的透光率均小于10％。
具体的，所述显色粉剂中，对-氨基苯磺酰胺、N-(1-萘基)-乙二胺二盐酸盐、氯化钠、柠檬酸和/或其水合物的质量比为16-24:0.8-1.2:32-48:32-48。
具体的，所述对-氨基苯磺酰胺、N-(1-萘基)-乙二胺二盐酸盐、氯化钠、柠檬酸和/或其水合物均为分析纯试剂。
具体的，所述柠檬酸的水合物可以为一水合柠檬酸。
优选的，所述不透光的眼药滴瓶与所述不透光的第一容器的透光率均为零，即完全不透光。
可选的，所述不透光的第一容器为不透光包装袋，所述不透光包装袋中装入显色粉剂后抽真空密封，通过对不透光包装袋进行抽真空密封，能够显著提升显色粉剂的保质期，提升本发明亚硝态氮快检试剂盒的使用寿命。
优选的，所述不透光包装袋为铝箔袋。
具体的，所述不透光包装袋的尺寸可以为(3.0-4.0)cm×(3.0-4.0)cm，例如3.5cm×3.5cm；可选的，每个不透光包装袋中显色粉剂的质量为0.08g-0.12g；每个亚硝态氮快检试剂盒中共设置50包显色粉剂。
可选的，所述步骤2包括：分别定量称取对-氨基苯磺酰胺、N-(1-萘基)-乙二胺二盐酸盐、氯化钠、柠檬酸和/或其水合物，混合均匀后，定量分装到铝箔袋内，再用真空包装机封口。
步骤3、制作标准比色卡，制作标准比色卡的步骤包括：配制多种不同浓度的标准亚硝态氮水溶液，取一种浓度的标准亚硝态氮水溶液于检测瓶中，在所述检测瓶中滴入所述显色水剂，混匀；加入所述显色粉剂，溶解完全；静置一段时间后，对所述检测瓶中的多个溶液进行反应和拍照；之后将所述多种不同浓度的标准亚硝态氮水溶液的反应颜色汇集在一起，打印后得到标准比色卡；
其中，在所述检测瓶中加入的所述显色水剂与所述显色粉剂的量能够满足最高浓度的标准亚硝态氮水溶液的反应需求。
具体的，所述步骤3中，配制多种不同浓度的标准亚硝态氮水溶液的方法为：配置亚硝态氮浓缩液，经过逐级稀释后，得到一系列不同浓度的标准亚硝态氮水溶液。
可选的，所述步骤3中，可以采用photoshop软件将所述多种不同浓度的标准亚硝态氮水溶液的反应颜色汇集在一起，打印并过塑后，得到标准比色卡。
在本发明的一实施例中，所述步骤3中，制作标准比色卡的步骤包括：
称取在110℃下烘干2h的优级纯亚硝酸钠(NaNO2)配制成亚硝态氮浓度为250mg/L的浓缩液，逐级稀释成亚硝态氮浓度为0.02mg/L、0.05mg/L、0.08mg/L、0.12mg/L、0.3mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L的标准亚硝态氮水溶液；同时取去离子水作为亚硝态氮浓度为0mg/L的标准亚硝态氮水溶液；
取一种浓度的标准亚硝态氮水溶液到检测瓶中，添加至刻度线处，加入4滴显色水剂，每滴显色水剂的体积约为0.05ml，摇匀；然后用剪刀剪开1包显色粉剂，添加到所述检测瓶中，每包显色粉剂的质量为0.08-0.12g，摇匀溶解；静置10分钟后，对所述检测瓶中的溶液进行拍照、取色；对上述8种不同浓度的标准亚硝态氮溶液分别进行反应、拍照、取色后，用photoshop合成，打印过塑后得到标准比色卡。
步骤4、提供具有刻度线的检测瓶、注射器、包装容器、装有稀释水的第二容器，将装有所述显色水剂的眼药滴瓶、装有所述显色粉剂的第一容器、所述注射器、所述检测瓶、所述装有稀释水的第二容器均置于所述包装容器中，得到亚硝态氮快检试剂盒。
具体的，所述不透光的第一容器为不透光包装袋，所述不透光包装袋中装入显色粉剂后抽真空密封，所述包装容器内还设有剪刀，用于对剪开所述不透光包装袋，方便快检操作。显色粉剂包使用时用剪刀剪开，倒入检测瓶中进行显色。
可选的，所述第二容器为150ml塑料瓶子，PE材质。
具体的，所述稀释水为去离子水。
具体的，所述注射器、装有稀释水的第二容器用于与所述检测瓶配合使用，在亚硝态氮检测过程中对亚硝态氮浓度较高的原水水样进行稀释。
具体的，所述注射器的数量为四个，1ml注射器与10ml注射器各两个。
具体的，所述检测瓶中设有10ml刻度线。
优选的，所述包装容器的透光率小于10％，以进一步提升试剂盒的避光性能，提升所述显色水剂与显色粉剂的保质期。
更优选的，所述包装容器的透光率为0。
基于上述亚硝态氮快检试剂盒的制备方法，本发明还提供一种亚硝态氮快检试剂盒，包括包装容器以及容置于所述包装容器中的显色水剂、显色粉剂、标准比色卡、注射器、具有刻度线的检测瓶、装有稀释水的第二容器；所述显色水剂与所述显色粉剂分别使用不透光的眼药滴瓶与不透光的第一容器盛装；
所述显色水剂为稀盐酸；
所述显色粉剂为包含对-氨基苯磺酰胺、N-(1-萘基)-乙二胺二盐酸盐、氯化钠、柠檬酸和/或其水合物的混合粉剂；
所述不透光的眼药滴瓶与所述不透光的第一容器的透光率均小于10％；
所述标准比色卡上显示有多种不同颜色以及与每种颜色对应的标准亚硝态氮水溶液的浓度值，所述多种不同颜色分别由多种不同浓度的标准亚硝态氮水溶液与所述显色水剂和所述显色粉剂反应产生。
具体的，所述多种不同颜色为多种不同深度的品红色。
具体的，所述显色水剂由浓盐酸与去离子水混合得到，所述浓盐酸与去离子水的质量比为0.9-1.4:7.2-10.8。
具体的，所述浓盐酸的浓度(质量分数)为36-38％。
具体的，所述显色粉剂中，对-氨基苯磺酰胺、N-(1-萘基)-乙二胺二盐酸盐、氯化钠、柠檬酸和/或其水合物的质量比为16-24:0.8-1.2:32-48:32-48。
具体的，所述柠檬酸的水合物可以为一水合柠檬酸。
具体的，所述对-氨基苯磺酰胺、N-(1-萘基)-乙二胺二盐酸盐、氯化钠、柠檬酸和/或其水合物均为分析纯试剂。
优选的，所述不透光的眼药滴瓶与所述不透光的第一容器的透光率均为零，即完全不透光。
可选的，所述不透光的眼药滴瓶为塑料滴瓶。
可选的，所述不透光的第一容器为不透光包装袋，所述不透光包装袋中装入显色粉剂后抽真空密封。
优选的，所述不透光包装袋为铝箔袋。
具体的，所述不透光包装袋的尺寸可以为(3.0-4.0)cm×(3.0-4.0)cm，例如3.5cm×3.5cm；可选的，每个不透光包装袋中显色粉剂的质量为0.08g-0.12g；每个亚硝态氮快检试剂盒中共设置50包显色粉剂。
具体的，每个眼药滴瓶中显色水剂的体积为5ml-20ml，例如10ml；每个亚硝态氮快检试剂盒中共设置1瓶显色水剂。
具体的，本发明的亚硝态氮快检试剂盒需置于避光阴凉处保存。
请参阅图2，在本发明的一实施例中，所述多种不同浓度的标准亚硝态氮水溶液包括亚硝态氮浓度分别为0mg/L、0.02mg/L、0.05mg/L、0.08mg/L、0.12mg/L、0.3mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L的8种标准亚硝态氮水溶液。
具体的，所述不透光的第一容器为不透光包装袋时，所述包装容器内还设有剪刀，用来剪开所述不透光包装袋，方便快检操作。
可选的，所述第二容器为塑料PE瓶子。
具体的，所述稀释水为去离子水。
具体的，所述注射器的数量为四个，1ml注射器与10ml注射器各两个。
具体的，所述检测瓶中设有10ml刻度线。
本发明中，所述显色水剂采用稀盐酸代替如GB 7493-87中的磷酸溶液，由于稀盐酸能增大对-氨基苯磺酰胺和N-(1-萘基)-乙二胺二盐酸盐在水样中的溶解度，从而使本发明能够检测的亚硝态氮的浓度范围更广。另外，现有的GB 7493-87测定方法中，磷酸根能与多种金属离子反应产生沉淀，从而干扰测定结果；实际废水的成分复杂，含有多种重金属离子(例如Ca2+、Fe3+、Mg2+、Al3+等)，这些重金属离子能与磷酸根产生沉淀，干扰测定；而盐酸能够避免因沉淀而产生的干扰，从而扩大了本发明的适用范围。
所述显色水剂采用眼药滴瓶盛装的作用在于：实现了一种较为便捷的方式来定量移取试剂，省去了对检测设备和装置如移液管、移液枪等的依赖，使本发明亚硝态氮快检试剂盒的使用更方便，提高了本发明亚硝态氮快检试剂盒的适用性，尤其适合于实验条件简陋的现场快速检测。
盛装显色水剂的眼药滴瓶的材质要求具有一定的韧性和硬度，而且不透光，开口需满足滴出来的液滴的体积与滴数可控。
具体的，所述显色粉剂中的N-(1-萘基)-乙二胺二盐酸盐在干燥避光环境中比较稳定，遇光则颜色加深，吸潮后易变质，因此本发明中N-(1-萘基)-乙二胺二盐酸盐与其他显色试剂以粉剂形式被分装在铝箔袋内，有利于试剂的长期稳定保存。
所述显色粉剂中的柠檬酸和/或其水合物含三个羧基，具有络合能力，能与水样中多种常见金属离子络合。柠檬酸能掩盖水质中金属离子的干扰，从而提高本发明的亚硝态氮快检方法的适用性。此外，柠檬酸具有较强的缓冲性能，其水溶液pH显酸性，所以其还能作为水样的缓冲剂与pH调节剂，使反应溶液的pH值满足1.8±0.3的要求。
所述显色粉剂中添加的氯化钠对反应显色无影响，但是氯化钠能增加显色粉剂的重量，从而方便显色粉剂的分装。
所述显色粉剂采用铝箔纸真空封口包装，能进一步延长显色粉剂的保质期。
图3为本发明亚硝态氮快检试剂盒中的显色水剂和显色粉剂与3种不同亚硝态氮浓度的水样反应后的颜色对比图，从图3中可以看出，本发明亚硝态氮快检试剂盒用于亚硝态氮检测时反应灵敏，亚硝态氮浓度不同的三个水样的反应颜色呈现出明显的差异。
请参阅图4，基于上述亚硝态氮快检试剂盒，本发明还提供一种亚硝态氮快检方法，包括如下步骤：
步骤1'、提供上述亚硝态氮快检试剂盒与原水水样；
对所述原水水样进行稀释或者不稀释，得到亚硝态氮浓度位于所述亚硝态氮快检试剂盒中的标准比色卡的检测范围的待检测水样；
步骤2'、取所述待检测水样到检测瓶刻度线处，在所述检测瓶中滴加所述显色水剂，摇匀；加入一袋所述显色粉剂，混匀溶解；静置10分钟后，将所述待检测水样的反应颜色与所述标准比色卡上的颜色进行比对，判定所述待检测水样中的亚硝态氮的浓度，或者根据稀释比例换算后得到所述原水水样中的亚硝态氮的浓度；
在所述检测瓶中加入的所述显色水剂与所述显色粉剂的量能够满足标准比色卡所能检测的最高亚硝态氮浓度的反应需求。
具体的，所述步骤1'中，当所述原水水样为悬浊液时，需要先将所述原水水样静置10分钟-20分钟，再取上清液进行检测。
具体的，所述步骤1'中，当所述原水水样中的亚硝态氮浓度大于所述亚硝态氮快检试剂盒中的标准比色卡的最高检测浓度时，需要对所述原水水样进行稀释，得到待检测水样；当所述原水水样中的亚硝态氮浓度位于所述亚硝态氮快检试剂盒中的标准比色卡的检测范围中时，不需要对所述原水水样进行稀释，所述原水水样即为待检测水样。
具体的，所述步骤2'中，首先在检测瓶的待检测水样中滴入显色水剂，摇匀后，剪开一包显色粉剂，倒入检测瓶中，混匀溶解。先加入显色水剂后加入显色水剂的原因为：先在检测瓶中加入含有盐酸的显色水剂，有利于后续加入的显色粉剂中对-氨基苯磺酰胺的溶解，这是因为对-氨基苯磺酰胺不溶于冷水，溶于盐酸溶液。
在本发明的一实施例中，所述步骤2'中，取10ml所述待检测水样置于检测瓶中，加入4滴显色水剂，摇匀，每滴显色水剂的体积为0.05ml；再用剪刀剪开一包显色粉剂，倒入检测瓶中，混匀溶解，每包显色粉剂的质量为0.08-0.12g；静置10分钟后，将所述待检测水样的反应颜色与所述标准比色卡上的颜色进行比对。
具体的，所述步骤1'中利用注射器和稀释水对所述原水水样进行稀释。
可选的，对所述原水水样进行稀释的方式包括：
对所述原水水样稀释10倍的方式为：用1ml注射器移取1ml原水水样到检测瓶中，再用10ml的注射器从第二容器中移取稀释水到检测瓶10ml的白色刻度线处，得到稀释10倍的水样；
对所述原水水样稀释100倍的方式为：用1ml注射器移取0.1ml原水水样到检测瓶中，再用10ml的注射器从第二容器中移取稀释水到检测瓶10ml的白色刻度线处，得到稀释100倍的水样。
当所述原水水样中的亚硝态氮浓度较大，例如超过100mg/L时，可能需要两次稀释，例如第一次稀释100倍，第二次稀释10倍，才能得到氮浓度位于所述亚硝态氮快检试剂盒的标准比色卡的检测范围中的待检测水样。
实施例1
深圳市龙岗区坪地街道某水产养殖渔店水样亚硝态氮的监测—0.65mg/L NO2 --N。
1、亚硝态氮快检试剂盒的制备方法包括：
1)显色水剂的制备：
溶解10ml浓盐酸到90ml去离子水中，混合均匀，用10ml的不透光眼药滴瓶分装混合溶液，避光、阴凉处保存。
2)显色粉剂的制备：
分别称取2g对-氨基苯磺酰胺、0.1g N-(1-萘基)-乙二胺二盐酸盐、4g氯化钠、4g一水合柠檬酸四种药品，倒入研钵混匀。真空干燥箱干燥12小时，分装到铝箔袋，每袋药剂的重量为0.08g，铝箔袋的尺寸为3.5cm×3.5cm。最后用真空封口机对铝箔袋封口。
3)标准比色卡的制作：
称取在110℃下烘干2h的优级纯亚硝酸钠(NaNO2)配制成亚硝态氮浓度为250mg/L的亚硝态氮浓缩液，所述亚硝态氮浓缩液需要现配现用，不能保存，将所述亚硝态氮浓缩液逐级稀释成亚硝态氮浓度为0.02mg/L、0.05mg/L、0.08mg/L、0.12mg/L、0.3mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L的7种标准亚硝态氮水溶液；同时取去离子水作为亚硝态氮浓度为0mg/L的标准亚硝态氮水溶液；
取10ml一种浓度的标准亚硝态氮水溶液加入检测瓶中，滴入4滴显色水剂，混匀；用剪刀剪开一袋显色粉剂包，倒入检测瓶中，摇匀溶解；静置10分钟，对所述检测瓶中的溶液进行拍照、取色；
对8种不同浓度的标准亚硝态氮水溶液分别进行反应、拍照、取色后，将8种不同浓度的标准亚硝态氮溶液的反应颜色汇集在一起，制成0mg/L、0.02mg/L、0.05mg/L、0.08mg/L、0.12mg/L、0.3mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L亚硝态氮浓度的色谱条，印刷过塑做成标准比色卡。
2、实际水样检测：
取10ml废水水样加入检测瓶中，向检测瓶中滴入4滴显色水剂，摇匀；用剪刀剪开一袋显色粉剂包，倒入检测瓶中，盖上盖子，摇匀溶解；静置10分钟，获得的品红色液体的色度介于标准比色卡上的0.5mg/L与1.0mg/L之间。因此这个养殖废水水体的浓度范围为0.5-1.0mg/L PO4 3--P，与标准结果相一致。
实施例2
深圳长隆科技有限公司生物除总氮项目小试(水样主体为广东佛山高明某生活污水厂废水)。亚硝态氮的浓度—2.71mg/L NO2 --N。
1、亚硝态氮快检试剂盒的制备方法包括：
1)显色水剂的制备：
溶解20ml浓盐酸到180ml去离子水中，混合均匀，用10ml的不透光眼药滴瓶分装混合溶液，避光、阴凉处保存。
2)显色粉剂的制备：
分别称取2.4g对-氨基苯磺酰胺、0.12g N-(1-萘基)-乙二胺二盐酸盐、4.8g氯化钠、4.8g一水合柠檬酸四种药品，倒入研钵混匀。置于真空干燥箱干燥12小时，分装到铝箔袋，每袋药剂的重量为0.12g，铝箔袋的尺寸为3.5cm×3.5cm。最后用真空封口机对铝箔袋进行封口。
3)标准比色卡的制作：
称取在110℃下烘干2h的优级纯亚硝酸钠(NaNO2)配制成亚硝态氮浓度为250mg/L的亚硝态氮浓缩液，所述亚硝态氮浓缩液需要现配现用，不能保存，将所述亚硝态氮浓缩液逐级稀释成亚硝态氮浓度为0.02mg/L、0.05mg/L、0.08mg/L、0.12mg/L、0.3mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L的7种标准亚硝态氮水溶液；同时取去离子水作为亚硝态氮浓度为0mg/L的标准亚硝态氮水溶液；
取10ml一种浓度的标准亚硝态氮水溶液加入检测瓶中，滴入4滴显色水剂，混匀；用剪刀剪开一袋显色粉剂包，倒入检测瓶中，摇匀溶解；静置10分钟，对所述检测瓶中的溶液进行拍照、取色；
对8种不同浓度的标准亚硝态氮水溶液分别进行反应、拍照、取色后，将8种不同浓度的标准亚硝态氮溶液的反应颜色汇集在一起，制成0mg/L、0.02mg/L、0.05mg/L、0.08mg/L、0.12mg/L、0.3mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L亚硝态氮浓度的色谱条，印刷过塑做成标准比色卡。
2、实际水样检测：
取0.2ml废水水样加入检测瓶中，用去离子水补到10ml刻度线，即水样被稀释50倍。向检测瓶中滴入4滴显色水剂，摇匀；用剪刀剪开一袋显色粉剂包，倒入检测瓶中，盖上盖子，摇匀溶解；静置10分钟，将获得的品红色液体的色度介于标准比色卡上的0.05mg/L与0.08mg/L之间，根据稀释比例换算后得到所述废水水样的亚硝态氮浓度范围为2.5-4.0mg/L，与标准结果相一致。
实施例3
深圳市龙岗区某实验室亚硝化菌发酵液废水—3800mg/L NO2 --N。
1、亚硝态氮快检试剂盒的制备方法包括：
1)显色水剂的制备：
溶解20ml浓盐酸到180ml去离子水中，混合均匀，用10ml的不透光眼药滴瓶分装混合溶液，避光、阴凉处保存。
2)显色粉剂的制备：
分别称取1.8g对-氨基苯磺酰胺、0.09g N-(1-萘基)-乙二胺二盐酸盐、3.6g氯化钠、3.6g一水合柠檬酸四种药品，倒入研钵混匀。真空干燥箱干燥12小时，分装到铝箔袋，每袋药剂的重量为0.10g，铝箔袋的尺寸为3.5cm×3.5cm。最后用真空封口机对铝箔袋封口。
3)标准比色卡的制作：
称取在110℃下烘干2h的优级纯亚硝酸钠(NaNO2)配制成亚硝态氮浓度为250mg/L的亚硝态氮浓缩液，所述亚硝态氮浓缩液需要现配现用，不能保存，将所述亚硝态氮浓缩液逐级稀释成亚硝态氮浓度为0.02mg/L、0.05mg/L、0.08mg/L、0.12mg/L、0.3mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L的7种标准亚硝态氮水溶液；同时取去离子水作为亚硝态氮浓度为0mg/L的标准亚硝态氮水溶液；
取10ml一种浓度的标准亚硝态氮水溶液加入检测瓶中，滴入4滴显色水剂，混匀；用剪刀剪开一袋显色粉剂包，倒入检测瓶中，摇匀溶解；静置10分钟，对所述检测瓶中的溶液进行拍照、取色；
对8种不同浓度的标准亚硝态氮水溶液分别进行反应、拍照、取色后，将8种不同浓度的标准亚硝态氮溶液的反应颜色汇集在一起，制成0mg/L、0.02mg/L、0.05mg/L、0.08mg/L、0.12mg/L、0.3mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L亚硝态氮浓度的色谱条，印刷过塑做成标准比色卡。
2、实际水样检测：
将亚硝化菌发酵液废水的水样稀释20000倍后，取10ml稀释水样加入检测瓶，向检测瓶中滴入4滴显色水剂，摇匀；用剪刀剪开一袋显色粉剂包，倒入检测瓶中，盖上盖子，摇匀溶解；静置10分钟，获得的品红色液体的色度介于标准比色卡上的0.12mg/L与0.3mg/L之间，根据稀释比例换算后得到所述亚硝化菌发酵液废水的浓度范围为2400-6000mg/L NO2 --N，与标准结果匹配。
上述实施例1至实施例3中，所述显色水剂采用相同规格相同材质的眼药滴瓶盛装，所述眼药滴瓶滴出的每滴显色水剂的体积为0.05ml。
综上所述，本发明的亚硝态氮快检试剂盒具有以下优点：
1、本发明的亚硝态氮快检试剂盒将国标GB7493-87检测方法中的N-(1-萘基)-乙二胺二盐酸盐水溶液换成粉剂，解决了N-(1-萘基)-乙二胺二盐酸盐溶液易变质、常温下保存时间短的难题，扩大了亚硝态氮快检试剂盒的适应性；
2、本发明的亚硝态氮快检试剂盒的显色粉剂包含柠檬酸，所述柠檬酸能为检测提供良好的酸性缓冲环境，能防止干扰因素对酸度的冲击，保证显色顺利进行；另外柠檬酸还是金属离子的掩盖剂，能够屏蔽金属离子对测定的干扰，从而扩大本发明亚硝态氮快检方法的适用范围；
3、本发明的亚硝态氮快检试剂盒的显色水剂采用盐酸取代国标GB7493-87中的磷酸，能防止水体中常见金属离子(如Ca2+、Fe3+、Mg2+、Al3+等)与磷酸根反应产生沉淀而造成干扰，扩大了本发明亚硝态氮快检方法的适应性；
4、本发明的亚硝态氮快检试剂盒能够检测亚硝态氮浓度范围较广的原水水样，在原水水样不稀释的情况下，本发明的亚硝态氮快检试剂盒能够对亚硝态氮浓度范围为0-1mg/L的原水水样进行检测；另外，本发明还配置了稀释器具，例如稀释水、1ml&10ml注射器，从而对高浓度范围的亚硝态氮原水水样也能够进行有效的检测；
5、本发明的亚硝态氮快检试剂盒采用不透光的眼药滴瓶对显色水剂进行盛装，检测时只需要挤压数滴即可，方便快捷，易于操作，简化了亚硝态氮检测的操作过程，摒弃对实验室仪器(例如移液管或移液器、比色管、试管架、分光光度仪等)的依赖，从而能为一般的用户节省成本；
6、本发明的亚硝态氮快检试剂盒的制备成本低；
7、本发明的亚硝态氮快检方法操作简便，技术要求低。一般的操作工就能快速的掌握操作方法，该法能广泛应用于生活污水、地表水、地下水、饮用水和工业污水中亚硝态氮含量的半定量测定。进一步的，其他对亚硝态氮有要求的水体(例如水产养殖、食品腌制行业中涉及的水体)也能利用本发明的亚硝态氮快检试剂盒进行快速诊断；
8、待检测水样与检测试剂混合后的稳定时间缩短，由国标GB7493-87的20分钟减少到10分钟，从而提高了工作效率。
由于本发明中所涉及的各工艺参数的数值范围在上述实施例中不可能全部体现，但本领域的技术人员完全可以想象到只要落入上述该数值范围内的任何数值均可实施本发明，当然也包括若干项数值范围内具体值的任意组合。此处，出于篇幅的考虑，省略了给出某一项或多项数值范围内具体值的实施例，此不应当视为本发明的技术方案的公开不充分。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的详细工艺设备和工艺流程，但本发明并不局限于上述详细工艺设备和工艺流程，即不意味着本发明必须依赖上述详细工艺设备和工艺流程才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式选择等，落在本发明的保护范围内。

Claims (10)

1.一种亚硝态氮快检试剂盒的制备方法，其特征在于，包括：
制备显色水剂，采用不透光的眼药滴瓶对所述显色水剂进行包装；其中，制备显色水剂的步骤包括：将去离子水与浓盐酸混合，得到显色水剂；
制备显色粉剂，采用不透光的第一容器对所述显色粉剂进行包装；其中，制备显色粉剂的步骤包括：将对-氨基苯磺酰胺、N-(1-萘基)-乙二胺二盐酸盐、氯化钠、柠檬酸和/或其水合物混合均匀，得到显色粉剂；
所述不透光的眼药滴瓶与所述不透光的第一容器的透光率均小于10％；
制作标准比色卡，制作标准比色卡的步骤包括：配制多种不同浓度的标准亚硝态氮水溶液，取一种浓度的标准亚硝态氮水溶液于检测瓶中，在所述检测瓶中滴入所述显色水剂，混匀；加入所述显色粉剂，溶解完全；静置一段时间后，对所述检测瓶中的溶液进行拍照；之后将所述多种不同浓度的标准亚硝态氮水溶液的反应颜色汇集在一起，打印后得到标准比色卡；
其中，在所述检测瓶中加入的所述显色水剂与所述显色粉剂的量能够满足最高浓度的标准亚硝态氮水溶液的反应需求；
提供具有刻度线的检测瓶、注射器、包装容器、装有稀释水的第二容器，将装有所述显色水剂的眼药滴瓶、装有所述显色粉剂的第一容器、所述注射器、所述检测瓶、所述装有稀释水的第二容器均置于所述包装容器中，得到亚硝态氮快检试剂盒。
2.如权利要求1所述的亚硝态氮快检试剂盒的制备方法，其特征在于，所述显色水剂中，浓盐酸与去离子水的质量比为0.9-1.4:7.2-10.8；所述显色粉剂中，对-氨基苯磺酰胺、N-(1-萘基)-乙二胺二盐酸盐、氯化钠、柠檬酸和/或其水合物的质量比为16-24:0.8-1.2:32-48:32-48。
3.如权利要求1所述的亚硝态氮快检试剂盒的制备方法，其特征在于，制作标准比色卡的步骤中，所述多种不同浓度的标准亚硝态氮水溶液包括亚硝态氮浓度分别为0mg/L、0.02mg/L、0.05mg/L、0.08mg/L、0.12mg/L、0.3mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L的8种标准亚硝态氮水溶液。
4.如权利要求1所述的亚硝态氮快检试剂盒的制备方法，其特征在于，所述不透光的第一容器为不透光包装袋，所述不透光包装袋中装入显色粉剂后抽真空密封；所述包装容器内还设有剪刀；所述注射器包括1ml注射器与10ml注射器；所述检测瓶中设有10ml刻度线。
5.一种亚硝态氮快检试剂盒，其特征在于，包括包装容器以及容置于所述包装容器中的显色水剂、显色粉剂、标准比色卡、注射器、具有刻度线的检测瓶、装有稀释水的第二容器；所述显色水剂与所述显色粉剂分别使用不透光的眼药滴瓶与不透光的第一容器盛装；
所述显色水剂为稀盐酸；
所述显色粉剂为包含对-氨基苯磺酰胺、N-(1-萘基)-乙二胺二盐酸盐、氯化钠、柠檬酸和/或其水合物的混合粉剂；
所述不透光的眼药滴瓶与所述不透光的第一容器的透光率均小于10％；
所述标准比色卡上显示有多种不同颜色以及与每种颜色对应的标准亚硝态氮水溶液的浓度值，所述多种不同颜色分别由多种不同浓度的标准亚硝态氮水溶液与所述显色水剂和所述显色粉剂反应产生。
6.如权利要求5所述的亚硝态氮快检试剂盒，其特征在于，所述显色水剂由浓盐酸与去离子水混合得到，浓盐酸与去离子水的质量比为0.9-1.4:7.2-10.8；所述显色粉剂中，对-氨基苯磺酰胺、N-(1-萘基)-乙二胺二盐酸盐、氯化钠、柠檬酸和/或其水合物的质量比为16-24:0.8-1.2:32-48:32-48。
7.如权利要求5所述的亚硝态氮快检试剂盒，其特征在于，所述多种不同浓度的标准亚硝态氮水溶液包括亚硝态氮浓度分别为0mg/L、0.02mg/L、0.05mg/L、0.08mg/L、0.12mg/L、0.3mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L的8种标准亚硝态氮水溶液。
8.如权利要求5所述的亚硝态氮快检试剂盒，其特征在于，所述不透光的第一容器为不透光包装袋，所述不透光包装袋中装入显色粉剂后抽真空密封；所述包装容器内还设有剪刀；所述注射器包括1ml注射器与10ml注射器；所述检测瓶中设有10ml刻度线。
9.一种亚硝态氮快检方法，其特征在于，包括：
提供如权利要求5至8中任一项所述的亚硝态氮快检试剂盒与原水水样；
对所述原水水样进行稀释或者不稀释，得到亚硝态氮浓度位于所述亚硝态氮快检试剂盒中的标准比色卡的检测范围的待检测水样；
取所述待检测水样到检测瓶刻度线处，在所述检测瓶中滴加所述显色水剂，摇匀；加入所述显色粉剂，混匀溶解；静置一段时间后，将所述待检测水样的反应颜色与所述标准比色卡上的颜色进行比对，判定所述待检测水样中的亚硝态氮的浓度，或者根据稀释比例换算后得到所述原水水样中的亚硝态氮的浓度；
在所述检测瓶中加入的所述显色水剂与所述显色粉剂的量能够满足标准比色卡所能检测的最高亚硝态氮浓度的反应需求。
10.如权利要求9所述的亚硝态氮快检方法，其特征在于，当所述原水水样为悬浊液时，需要先将所述原水水样静置10分钟-20分钟，再取上清液进行检测；
当所述原水水样中的亚硝态氮浓度大于所述亚硝态氮快检试剂盒中的标准比色卡的最高检测浓度时，需要对所述原水水样进行稀释，得到待检测水样；当所述原水水样中的亚硝态氮浓度位于所述亚硝态氮快检试剂盒中的标准比色卡的检测范围中时，不需要对所述原水水样进行稀释，所述原水水样即为待检测水样。
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