CN101413897B - 一种乳中亚硝酸盐屏蔽剂的检测方法及检测试剂盒 - Google Patents

一种乳中亚硝酸盐屏蔽剂的检测方法及检测试剂盒 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种乳中亚硝酸盐屏蔽剂的检测方法及根据该方法的试剂盒。本发明的方法包括如下步骤：取空白乳样和待测乳样，分别加入亚硝酸盐溶液，混匀；分别检测空白乳样和待测乳样中的亚硝酸盐含量；待测乳样与所述空白乳样中检测出的亚硝酸盐含量相同，则判定所述待测乳样中无亚硝酸盐屏蔽剂；待测乳样中检测出的亚硝酸盐含量低于所述空白乳样中的亚硝酸盐含量，则判定所述待测乳样中含有亚硝酸盐屏蔽剂。此法具有成本低廉，操作方便快捷，检验时间短，检出限为0.01％，为快速检测方法。

Description

一种乳中亚硝酸盐屏蔽剂的检测方法及检测试剂盒 
技术领域
本发明涉及一种乳中掺假的检测方法及其检测试剂盒，特别是乳中亚硝酸盐屏蔽剂的检测方法以及根据该方法的检测试剂盒。 
背景技术
收购的鲜奶由于各种原因可能会混入某些对人体有害的物质，当其含量超过规定的数值时就应当视其为不合格奶而处理掉。另外，所收购的鲜牛奶也存在一些掺假的情况，例如在鲜牛奶中掺入亚硝酸盐等可以使收购的鲜牛奶保鲜，通常掺假亚硝酸盐含量不超过5mg/kg；为了使亚硝酸盐不被检出，又向牛奶中加入亚硝酸盐屏蔽剂，例如抗坏血酸钠、抗坏血酸等，这会导致鲜奶中的亚硝酸盐不能被正常的检测出来，对掺假的检测和人体健康均十分不利。因此，在对鲜牛奶的掺假检测过程中，除了需要检测是否含有亚硝酸盐外，还需要检测是否添加了亚硝酸盐屏蔽剂。目前关于牛奶掺假检测的国家标准中还没有关于乳中亚硝酸盐屏蔽剂的标准检测方法，不能满足实际需求。 
发明内容
本发明要解决的技术问题在于提供一种对乳中掺入亚硝酸盐屏蔽剂以掩盖掺入亚硝酸盐的检测方法及检测试剂盒。其成本低廉、操作方便快速，且现象明显、灵敏度高，能够满足生产企业的广泛需要。 
本发明提供了一种乳中亚硝酸盐屏蔽剂的检测方法，包括如下步骤： 
1)取空白乳样和待测乳样，分别加入亚硝酸盐溶液，混匀； 
2)分别检测所述空白乳样和待测乳样中的亚硝酸盐含量； 
3)所述待测乳样与所述空白乳样中检测出的亚硝酸盐含量相同，则判定所述待测乳样中无亚硝酸盐屏蔽剂；所述待测乳样中检测出的亚硝酸盐含量低于所述空白乳样中的亚硝酸盐含量，则判定所述待测乳样中含有亚硝酸盐屏蔽剂。
其中，所述步骤2)中的检测方法为向所述空白乳样和待测乳样中分别添加亚硝酸盐显色剂，对比所述待测乳样与空白乳样的显色结果，得到所述待测乳样中的亚硝酸盐含量。 
优选的，所述步骤1)中待测乳样和空白乳样的取样量范围为1mL-2mL，亚硝酸盐为亚硝酸钠，其浓度范围为质量浓度8mg/L-12mg/L。优选的，待测乳样与所加入亚硝酸钠的比例为体积与体积比2∶1。 
亚硝酸盐显色剂可以为液体显色剂，其配制方法为：取0.1g 1-萘酚，0.2g1-萘胺，0.6g无水对胺基苯磺酸，加入200mL水溶解，溶解后再加入200mL冰乙酸，充分混匀。优选的，待测乳样与所添加的液体显色剂体积与体积比2∶1。 
其中，所述步骤2)中的检测方法为向所述空白乳样和待测乳样中分别添加亚硝酸盐显色剂，对比所述待测乳样与空白乳样的显色结果，得到所述待测乳样中的亚硝酸盐含量。 
所述亚硝酸盐显色剂也可以为固体格里斯千显色试剂，其配制方法为：取酒石酸(C4H6O6)89克、无水对氨基苯磺酸(C6H4(NH2)(SO3H))10克、α-萘胺(C6H7NH2)1克，充分混合，研磨成无可见颗粒的均匀细致的白色粉末，密封保持干燥避光保存。优选的，待测乳样与所添加的固体格里斯千显色剂的体积与质量比为2∶0.3。 
所述步骤2)中加入显色剂混匀后观察空白乳样和待测乳样颜色变化时间为：待反应30秒后并在1分钟内观察。 
具体的说，如果待测乳样显示的颜色与空白乳样的相同，则表明其中亚硝酸盐的检出含量与空白乳样中的亚硝酸钠的检出含量相同，表明其中不含亚硝酸盐屏蔽剂。 
如果待测乳样的颜色比空白乳样的颜色深，则表明其中亚硝酸盐的检出含量大于空白乳样中的亚硝酸钠的检出含量，表明其中本身就含有亚硝酸盐。 
如果待测乳样的颜色比空白乳样的颜色浅，则表明其中亚硝酸盐的检出含量小于空白乳样中的亚硝酸钠的含量，表明其中有部分亚硝酸盐被屏蔽不能被检出，因而含有亚硝酸盐屏蔽剂。 
实际检测中，通常检测结果为不含亚硝酸盐屏蔽剂时记为阴性，含有亚硝酸盐屏蔽剂则记为阳性。采用上述显色剂进行检测时，当待测乳样的显色为粉色、深粉色或深于空白乳样的颜色判为阴性；当待测乳样的显色为浅于粉色的颜色，例如淡粉色、微粉色、白色时判为阳性。 
由于每次不同待测乳样品本身的性质有异，空白乳样和待测乳样的显色会轻微差异，而且试验人员操作也会有细微的差异，显示为粉色不能判为阳 性，仍判断为阴性。 
本发明还提供了一种乳中亚硝酸盐屏蔽剂的检测试剂盒，包括质量浓度范围为8mg/L-12mg/L的亚硝酸盐溶液和亚硝酸显色剂，所述检测试剂盒进一步包括比色卡，并采用上述方法进行结果判定。 
本发明的乳中亚硝酸盐屏蔽剂的检测方法及检测试剂盒具有如下优点： 
1)成本低廉，适合用于牛奶收购在线质量监控。 
2)操作方便快捷，检验时间短。单个样品的检验用时约为1分钟，非常快捷方便，适用于乳品企业的大规模检测。 
3)检出限低，为0.01％。 
4)检测现象明显、检测灵敏度高。 
具体实施方式
下面将结合具体实施方案对本发明的方法做更详细的说明。本领域技术人员应当理解，下述实施例均用于对本发明所要求保护的范围进行实例性的描述，以此概括本发明的各参数的相对范围，因而不能将之理解为对本发明的一种具体限制。 
实施例1 
本实施例给出了一种乳中亚硝酸盐屏蔽剂的检测方法，该方法需要添加亚硝酸盐显色剂检测乳中亚硝酸盐的含量，下面对亚硝酸盐显色剂的配置步骤进行详细说明。 
1、配置液体显色剂 
在根据本发明的一个具体实施例中，可以使用液体显色剂来检测乳中亚硝酸盐的含量，所述液体显色剂的配制方法为：取0.1g 1-萘酚，0.2g 1-萘胺，0.6g无水对胺基苯磺酸，加入200mL蒸馏水溶解，溶解后再加入200mL冰乙酸，充分混匀。该显色剂遇不同浓度的亚硝酸盐显示为不同深浅的粉色。 
该液体亚硝酸盐显色剂配制好后应低温保存备用，例如，可以置于冰箱中保存。 
2、配置固体显色剂 
在根据本发明的另一个具体实施例中，可以使用固体显色剂来检测乳中 亚硝酸盐的含量，所述固体显色剂是一种固体格里斯千显色试剂，其配制方法为：取酒石酸(C4H6O6)89克、无水对氨基苯磺酸(C6H4(NH2)(SO3H))10克、α-萘胺(C6H7NH2)1克，充分混合，在研磨仪中研成无可见颗粒的均匀细致的白色粉末。该显色剂遇不同浓度的亚硝酸盐显示为不同深浅的粉色。 
该固体亚硝酸盐显色剂配置好后应密封保持干燥避光保存备用，例如存放于棕色瓶中。 
实施例2 
本实施例给出了一种乳中亚硝酸盐屏蔽剂的检测方法，下面对该方法的具体检测步骤进行详细说明。本实施例中，分别采用液体显色剂和固体显色剂分别检测亚硝酸盐的含量。 
1、样品测定： 
(1)可以采用液体显色剂来检测，方法如下： 
取1ml待测乳样于试管中，加入10mg/L亚硝酸钠溶液0.5ml，充分混匀，反应5-10秒，加入0.5ml液体显色剂，混匀，在0.5-1分钟之间观察显色现象。 
在每批待测乳样检测时，同时取不含亚硝酸盐及亚硝酸盐屏蔽剂的空白乳样按照同样的方法做阴性空白对照实验。 
待测乳样中含有亚硝酸盐屏蔽剂的检测结果记为阳性(+)，不含亚硝酸盐屏蔽剂的检测结果记为阴性(-)。 
依据下表进行判定： 
其中，待测乳样的颜色深于空白乳样的颜色表示原待测乳样中含有亚硝酸盐，属于不合格乳，不能收购。 
检测结果为阳性的待测乳不合格，不能收购。
(2)采用固体格里斯千显色试剂来检测，方法如下： 
取待测乳样2ml于试管中，加入10mg/L亚硝酸钠溶液1ml，充分混匀，反应5-10秒，取约0.3g的格里斯千试剂，加入试管中，避免试剂挂壁，振荡混匀，在0.5—1分钟之间观察显色现象。 
在每批待测乳样检测时，同时取空白乳样按照同样的方法做阴性空白对照实验。 
待测乳样中含有亚硝酸盐屏蔽剂的检测结果记为阳性(+)，不含亚硝酸盐屏蔽剂的检测结果记为阴性(-)。 
依据下表进行判定： 
Figure G2008102278374D00051
其中，待测乳样的颜色深于空白乳样的颜色表示原待测乳样中含有亚硝酸盐，属于不合格乳，不能收购。检测结果为阳性的待测乳不合格，不能收购。 
具体的说，如果待测乳样显示的颜色与空白乳样的相同，则表明其中亚硝酸盐的检出含量与空白乳样中的亚硝酸钠的检出含量相同，表明其中不含亚硝酸盐屏蔽剂。 
如果待测乳样的颜色比空白乳样的颜色深，则表明其中亚硝酸盐的检出含量大于空白乳样中的亚硝酸钠的检出含量，表明其中本身就含有亚硝酸盐。当待测乳样颜色深于空白乳样的颜色时待测乳中的亚硝酸盐含量是0.2mg/kg，上述两种显色方法对亚硝酸盐的检出限是0.2mg/kg。 
如果待测乳样的颜色比空白乳样的颜色浅，则表明其中亚硝酸盐的检出含量小于空白乳样中的亚硝酸钠的含量，表明其中有部分亚硝酸盐被屏蔽不能被检出，因而含有亚硝酸盐屏蔽剂。 
实际检测中，通常检测结果为不含亚硝酸盐屏蔽剂时记为阴性，含有亚硝酸盐屏蔽剂则记为阳性。采用上述显色剂进行检测时，当待测乳样的显色为粉色、深粉色或深于空白乳样的颜色判为阴性；当待测乳样的显色为浅于粉色的颜色，例如淡粉色、微粉色、白色时判为阳性。 
由于每次不同待测乳样品本身的性质有异，空白乳样和待测乳样的显色 会轻微差异，而且试验人员操作也会有细微的差异，显示为粉色不能判为阳性，仍判断为阴性。 
2、检测结果： 
人为加入亚硝酸盐后的乳样中掺入不同浓度的亚硝酸盐屏蔽剂，分别按上述的方法检测，检测结果如下： 
Figure G2008102278374D00061
由于每批不同待测乳样品本身的性质有异，空白乳样和待测乳样的显色会轻微差异，而且试验人员操作也会有细微的差异，显示为粉色不能判为阳性，仍判断为阴性。 
3、方法验证： 
(1)空白乳样的阴性对照验证实验： 
取空白乳样分别采用液体显色剂和固体格里斯千显色试剂检测，检测结果如下： 
Figure G2008102278374D00062
(2)检出限验证 
人为加入亚硝酸盐后的待测乳样中掺入不同浓度的亚硝酸盐屏蔽剂，分别按上述方法检测，检测结果如下：
Figure G2008102278374D00071
由于每批不同待测乳样品本身的性质有异，空白乳样和待测乳样的显色会轻微差异，而且试验人员操作也会有细微的差异，显示为粉色不能判为阳性，仍判断为阴性。本方法检出限为0.01％。 
实施例3 
本实施例给出了根据本发明的另一个具体实施方式的一种乳中亚硝酸盐屏蔽剂的检测方法，下面对该方法的具体检测步骤进行详细说明。 
检测乳中亚硝酸盐屏蔽剂，按照如下步骤进行： 
1、亚硝酸盐显色剂的配制方法与实施例1相同。 
2、样品测定： 
(1)采用液体显色剂来检测，方法如下： 
取1ml待测乳样于试管中，加入12mg/L亚硝酸钠溶液0.5ml，充分混匀，反应5-10秒，加入0.5ml液体显色剂，混匀，在0.5-1分钟之间观察显色现象。 
在每批待测乳样检测时，同时取空白乳样按照同样的方法做阴性空白对照实验。 
待测乳样中含有亚硝酸盐屏蔽剂的检测结果记为阳性(+)，不含亚硝酸盐屏蔽剂的检测结果记为阴性(-)。 
依据下表进行判定： 
(2)采用固体格里斯千显色试剂来检测，方法如下： 
取待测乳样2ml于试管中，加入12mg/L亚硝酸钠溶液1ml，充分混匀，反应5-10秒，取约0.3g的格里斯千试剂，加入试管中，避免试剂挂壁，振荡混匀，在0.5—1分钟之间观察显色现象。 
在每批待测乳样检测时，同时取空白乳样按照同样的方法做阴性空白对照实验。 
待测乳样中含有亚硝酸盐屏蔽剂的检测结果记为阳性(+)，不含亚硝酸盐屏蔽剂的检测结果记为阴性(-)。 
依据下表进行判定： 
Figure G2008102278374D00081
3、检测结果： 
人为加入亚硝酸盐后的乳样中掺入不同浓度的亚硝酸盐屏蔽剂，分别按上述的方法检测，检测结果如下： 
Figure G2008102278374D00082
由于每批不同待测乳样品本身的性质有异，空白乳样和待测乳样的显色会轻微差异，而且试验人员操作也会有细微的差异，显示为粉色不能判为阳性，仍判断为阴性。 
实施例4 
本实施例给出了一种根据本发明的乳中亚硝酸盐屏蔽剂的检测方法的检测试剂盒，该试剂盒包括8mg/L的亚硝酸钠溶液，以及液体显色剂。其中液 体显色剂采用实施例1中的方法配制。 
可按照如下步骤利用上述检测试剂盒检测乳中的硝酸盐屏蔽剂： 
1ml乳样，加入8mg/L亚硝酸钠溶液0.5ml，充分混匀，反应5-10秒，加入0.5ml液体显色剂，混匀，在0.5-1分钟之间观察显色现象。 
在每批待测乳样检测时，同时取不含亚硝酸盐及亚硝酸盐屏蔽剂的空白乳样按照同样的方法做阴性空白对照实验。 
待测乳样中含有亚硝酸盐屏蔽剂的检测结果记为阳性(+)，不含亚硝酸盐屏蔽剂的检测结果记为阴性(-)。 
依据下表进行判定： 
实施例5 
本实施例给出了另一种根据本发明的乳中亚硝酸盐屏蔽剂的检测方法的检测试剂盒，该试剂盒包括10mg/L的亚硝酸钠溶液，以及固体格里斯千显色试剂0.3g每份，其中固体格里斯千显色试剂采用实施例1中的方法配制。 
可按照如下步骤利用上述检测试剂盒检测乳中的硝酸盐屏蔽剂： 
取乳样2ml，加入10mg/L亚硝酸钠溶液1ml，充分混匀，反应5-10秒，取一份格里斯千试剂，振荡混匀，在0.5-1分钟之间观察显色现象。 
在每批待测乳样检测时，同时取不含亚硝酸盐及亚硝酸盐屏蔽剂的空白乳样按照同样的方法做阴性空白对照实验。 
待测乳样中含有亚硝酸盐屏蔽剂的检测结果记为阳性(+)，不含亚硝酸盐屏蔽剂的检测结果记为阴性(-)。 
依据下表进行判定： 
Figure G2008102278374D00092
实施例6 
人为往加入亚硝酸盐后的乳样中掺入不同浓度的亚硝酸盐屏蔽剂，分别 采用实施例4和实施例5中的上述试剂盒检测，检测结果如下： 
Figure G2008102278374D00101
试剂盒中还可以包含具有上述各颜色的比色卡，检测人员在待测乳检测显色后即可与比色卡比对，而不需要再进行空白乳样的阴性对照实验。在大规模检测时可提高检测速度。 
上述实施例中，亚硝酸盐采用的是亚硝酸钠，实际操作中，也可以采用其它相同含量的亚硝酸盐来代替，例如亚硝酸钾。

Claims (9)

1.一种乳中亚硝酸盐屏蔽剂的检测方法，包括如下步骤：
1)取空白乳样和待测乳样，分别加入亚硝酸盐溶液，混匀；
2)分别检测所述空白乳样和待测乳样中的亚硝酸盐含量；
3)所述待测乳样与所述空白乳样中检测出的亚硝酸盐含量相同，则所述待测乳样中无亚硝酸盐屏蔽剂；所述待测乳样中检测出的亚硝酸盐含量低于所述空白乳样中的亚硝酸盐含量，则所述待测乳样中含有亚硝酸盐屏蔽剂。
2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述步骤1)中的亚硝酸盐为亚硝酸钠，所述亚硝酸钠的浓度范围为质量浓度8mg/L-12mg/L。
3.如权利要求2所述的检测方法，其特征在于：所述待测乳样与所加入亚硝酸钠的比例为体积与体积比2∶1。
4.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述步骤2)中的检测方法为向所述空白乳样和待测乳样中分别添加亚硝酸盐显色剂，对比所述待测乳样与空白乳样的显色结果，得到所述待测乳样中的亚硝酸盐含量。
5.如权利要求4所述的检测方法，其特征在于：所述亚硝酸盐显色剂为液体显色剂，其配制方法为：取0.1g 1-萘酚，0.2g 1-萘胺，0.6g无水对胺基苯磺酸，加入200mL水溶解，溶解后再加入200mL冰乙酸，充分混匀。
6.如权利要求5所述的检测方法，其特征在于：所述待测乳样与所添加的液体显色剂体积与体积比2∶1。
7.如权利要求4所述的检测方法，其特征在于：所述亚硝酸盐显色剂为固体格里斯千显色试剂，其配制方法为：取酒石酸(C4H6O6)89克、无水对氨基苯磺酸(C6H4(NH2)(SO3H))10克、α-萘胺(C6H7NH2)1克，充分混合，研磨成无可见颗粒的均匀细致的白色粉末。
8.如权利要求7所述的检测方法，其特征在于：所述待测乳样与所添加的固体格里斯千显色剂的体积与质量比为2ml∶0.3g。
9.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述步骤2)中加入显色剂混匀后观察空白乳样和待测乳样颜色变化时间为：待反应30秒后并在1分钟内观察。
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