CN105181405A - 一种茶叶或茶青中农药残留的检测方法 - Google Patents
一种茶叶或茶青中农药残留的检测方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN105181405A CN105181405A CN201510422117.3A CN201510422117A CN105181405A CN 105181405 A CN105181405 A CN 105181405A CN 201510422117 A CN201510422117 A CN 201510422117A CN 105181405 A CN105181405 A CN 105181405A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- reagent
- add
- sample
- shake
- tea
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Abstract
本发明公开了一种茶叶或茶青中农药残留的检测方法，针对茶叶或茶青样品中的内源物质对测试产生特殊干扰，研发出一种专用于提取茶叶中的残留农药的农药提取试剂，用此试剂提取茶叶中的农药残留，无需调节pH﹑过层析柱以及氧化过程，所用试剂安全环保且用量少。首创将胆碱酯酶与DTNB复合成Et试剂，在检测时直接将其与样品待测液进行酶抑制反应，使得操作过程中少加一种试剂，检测方法更加简便，并减少实验器材的使用。该方法简单快速，从样品处理到报告检测结果全流程20分钟，并可实现多通道同时检测。
Description
技术领域
本发明属于分析化学领域，具体涉及一种茶叶或茶青中农药残留的检测方法。
背景技术
目前可查阅的茶叶中的农药快速检测方法有以下两种，但都存在着检测步骤烦琐，耗时长，及所用试剂有毒有害的问题，因此无法在基层实验室和种植、生产、销售现场推广应用。下面简单介绍两种方法的操作步骤加以说明：
1．2002年发布了一个推荐性国家标准《茶中有机磷及氨基甲酸酯农药残留量的简易检验方法酶抑制法》GB/T18625-2002，但因为茶叶样品会对测试产生特殊的干扰，分析方法中仍无法避免冗长繁杂、并且耗费大量有机试剂的提取、净化等前处理步骤，其分析操作时间甚至不会少于在实验室仪器分析方法。因此这个分析方法并不能很好解决实际应用中的问题。
其分析步骤是：
（1）样品提取：0.5g茶加5ml丙酮浸泡5分钟再加0.2g碳酸钙。
（2）氧化：取0.5mL丙酮提取液于5mL烧杯中，吹干后加入0.3mL缓冲液溶解。加入氧化剂（预先配制）0.1mL，摇匀后放置10min，再加入还原剂（预先配制）0.3mL摇匀。
（3）酶解：加入酶液（预先制备）0.2mL摇匀，放置10min，再加入底物0.2mL，显色剂（预先配制）0.1mL，放置5min后测定。
（4）测定：在分光光度计波长调至600nm测定，当测定值在1.0以下时，为未检出。当测定值在1.0～1.3之间时，为可能检出，但残留量较低。当测定值为1.3以上时，为检出。测定值越高，说明农药残留量越高。
2、另有资料显示使用农药速测卡测定茶叶中的农药残留
操作作步骤如下：
（1）样品处理
绿茶样品：取2g绿茶适当剪碎，放入带盖瓶中，加入10mL纯净水，充分摇匀后，静止15min。
铁观音、茉莉花、乌龙、普洱、红茶样品：取2g茶叶适当剪碎，放入带盖瓶中，加入10mL纯净水，加入5滴试剂A充分摇匀，静止15min。
（2）预反应
绿茶样品：取3mL浸泡液加入反应管中，摇匀；直接过滤（或4000rpm离心3min），取1mL滤液或上清液于小烧杯中，用酸性调节剂调节pH值为4~5之间。
铁观音、茉莉花、乌龙、普洱、红茶样品：取3mL浸泡液加入反应管中，摇匀；静置3min，取1mL上清液或滤液于小烧杯中，用酸性调节剂调节pH值为4~5之间。
（3）过柱
先取1mL纯净水加入层析柱中，用针管加压排空后，再取1mL上述处理液加入层析柱中，用针管缓慢加压，（弃去第一滴）收集无色澄清滤液即为待测液。滴2滴（80ul）待测液于速测卡白色药片上。
（4）反应
将速测卡置于40℃恒温装置中放置10min进行预反应，预反应后恒温装置恒温3min，使红色药片与白色药片叠合发生反应，根据白色药片的颜色变化判断结果。每批测定应设一个纯净水或蒸馏水的空白对照卡。
以上两种方法在具体操作时步骤烦琐，国标法使用的试剂繁多，既有有机溶剂，又有氧化剂和还原剂。许多试剂还须预先配制。而用农药速测卡时其操作要过滤样品提取液，还须用酸调节待测液的pH，并且要经过层析柱处理。因此在实际应用中不能达到快速简便的目的。
发明内容
本发明的目的在于提供一种茶叶或茶青中农药残留的检测方法，针对茶叶或茶青样品中的内源物质对测试产生特殊干扰，研发出一种专用于提取茶叶中的残留农药的农药提取试剂，用此试剂提取茶叶中的农药残留，无需调节pH﹑过层析柱以及氧化过程，所用试剂安全环保且用量少。首创将胆碱酯酶与DTNB复合成Et试剂，在检测时直接将其与样品待测液进行酶抑制反应，使得操作过程中少加一种试剂，检测方法更加简便，并减少实验器材的使用。该方法简单快速，从样品处理到报告检测结果全流程20分钟，并可实现多通道同时检测。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种茶叶或茶青中农药残留的检测方法，茶叶或茶青中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的检测步骤：
（1）试剂的配制：
Et试剂：无需配制，直接开封启用；
Sub试剂：在10mL蒸馏水中加入10-60mg碘化硫代乙酰胆碱，摇匀使之溶解；
农药提取液：在20-80mL磷酸盐或碳酸盐缓冲溶液中加入50-300mL丙三醇，混匀后再加入100-300mL95wt.%乙醇溶液，混匀；
缓冲液：在500mL蒸馏水中加入5-15g磷酸氢二钠和0.2-0.8g磷酸二氢钾，混匀；
（2）检测
样品提取：
称取0.5克茶叶样品，加入1.0mL农药提取液，使样品充分浸润并静置10分钟，底部溶液即为待测液；
对照测定：
吸取Et试剂100μL，加入1.5mL缓冲液，摇匀，加入200μL农药提取液，摇匀，静置10分钟，加入100μLSub试剂，摇匀后移入0.5cm比色皿，及时放在农药残留测试仪上进行对照测试；
样品测定：
吸取Et试剂100μL，加入1.5mL缓冲液，摇匀，加入200μL待测液，摇匀，静置10分钟，加入100μLSub试剂，摇匀后移入0.5cm比色皿，及时放在农药残留测试仪上进行样品测试；
测定结果的判定：
当检测结果的酶抑制率读数超过50%时，表明样品农药残留毒性可能超过安全标准，应当确认操作步骤无误、仪器工作正常、试剂没有污染失效，重新进行对照测试并对此样品进行2次以上的重复检测，如检测结果重复并仍然超过50%，则需用气相色谱作进一步的确认。
所述的Et试剂为胆碱酯酶和5,5'-二硫代双(2-硝基苯甲酸)的混合液，两者的重量比为1︰40~100。
本发明的显著优点在于：针对茶叶或茶青样品中的内源物质对测试产生特殊干扰，研发出一种专用于提取茶叶中的残留农药的农药提取试剂，用此试剂提取茶叶中的农药残留，无需调节pH﹑过层析柱以及氧化过程，所用试剂安全环保且用量少。首创将胆碱酯酶与DTNB复合成Et试剂，在检测时直接将其与样品待测液进行酶抑制反应，使得操作过程中少加一种试剂，检测方法更加简便，并减少实验器材的使用。该方法简单快速，从样品处理到报告检测结果全流程20分钟，并可实现多通道同时检测。以3~8通道为例，每样品平均检测时间只有3-8分钟。
具体实施方式
一种茶叶或茶青中农药残留的检测方法，茶叶或茶青中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的检测步骤：
（1）试剂的配制：
Et试剂：无需配制，直接开封启用；所述的Et试剂为胆碱酯酶和5,5'-二硫代双(2-硝基苯甲酸)的混合液，两者的重量比为1︰0.002。
Sub试剂：在10mL蒸馏水中加入10-60mg碘化硫代乙酰胆碱，摇匀使之溶解；
农药提取液：在20-80mL磷酸盐或碳酸盐缓冲溶液中加入50-300mL丙三醇，混匀后再加入100-300mL95wt.%乙醇溶液，混匀；
缓冲液：在500mL蒸馏水中加入5-15g磷酸氢二钠和0.2-0.8g磷酸二氢钾，混匀；
（2）检测
样品提取：
称取0.5克茶叶样品，加入1.0mL农药提取液，使样品充分浸润并静置10分钟，底部溶液即为待测液；
对照测定：
吸取Et试剂100μL，加入1.5mL缓冲液，摇匀，加入200μL农药提取液，摇匀，静置10分钟，加入100μLSub试剂，摇匀后移入0.5cm比色皿，及时在农药残留测试仪上进行对照测试；
样品测定：
吸取Et试剂100μL，加入1.5mL缓冲液，摇匀，加入200μL待测液，摇匀，静置10分钟，加入100μLSub试剂，摇匀后移入0.5cm比色皿，及时在农药残留测试仪上进行样品测试；
测定结果的判定：
当检测结果的酶抑制率读数超过50%时，表明样品农药残留毒性可能超过安全标准，应当确认操作步骤无误、仪器工作正常、试剂没有污染失效，重新进行对照测试并对此样品进行2次以上的重复检测，如检测结果重复并仍然超过50%，则需用气相色谱作进一步的确认。
实施例1
一种茶叶或茶青中农药残留的检测方法，茶叶或茶青中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的检测步骤：
（1）试剂的配制：
Et试剂：2mg（或1ku）胆碱酯酶溶解于500ml磷酸盐缓冲溶液（称取磷酸氢二钠5~15g和磷酸二氢钾0.2~0.9g于试剂瓶中加入500mL蒸馏水溶解，混匀；）中，加入2～10g牛血清白蛋白和3～15g海藻糖搅拌溶解；另称取80～200mg的DTNB和0.5～5g的牛磺胆酸钠加入，并搅拌至完全溶解后即成为Et试剂，将其封装在5ml的安瓿中并置于冰箱（0～5℃）保存。使用时取出开封即可。
Sub试剂：在10mL蒸馏水中加入30mg碘化硫代乙酰胆碱，摇匀使之溶解；
农药提取液：在50mL磷酸盐或碳酸盐缓冲溶液中加入200mL丙三醇，混匀后再加入200mL95%乙醇溶液，混匀；
缓冲液：在500mL蒸馏水中加入10g磷酸氢二钠和0.5g磷酸二氢钾，混匀；
（2）检测
样品提取：
称取0.5克茶叶样品，加入1.0mL农药提取液，使样品充分浸润并静置10分钟，底部溶液即为待测液；
对照测定：
吸取Et试剂100μL，加入1.5mL缓冲液，摇匀，加入200μL农药提取液，摇匀，静置10分钟，加入100μLSub试剂，摇匀后移入0.5cm比色皿，及时在农药残留测试仪上进行对照测试；
样品测定：
吸取Et试剂100μL，加入1.5mL缓冲液，摇匀，加入200μL待测液，摇匀，静置10分钟，加入100μLSub试剂，摇匀后移入0.5cm比色皿，及时在农药残留测试仪上进行样品测试；
测定结果的判定：
当检测结果的酶抑制率读数超过50%时，表明样品农药残留毒性可能超过安全标准，应当确认操作步骤无误、仪器工作正常、试剂没有污染失效，重新进行对照测试并对此样品进行2次以上的重复检测，如检测结果重复并仍然超过50%，则需用气相色谱作进一步的确认。
应用上述检测方法，在铁观音茶叶和实验室栽种的无农药的茶青进行农药加样测定，得到上述方法的不同农药的检测灵敏度如下：
以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。
Claims (2)
1.一种茶叶或茶青中农药残留的检测方法，其特征在于：茶叶或茶青中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的检测步骤：
（1）试剂的配制：
Et试剂：无需配制，直接开封启用；
Sub试剂：在10mL蒸馏水中加入10-60mg碘化硫代乙酰胆碱，摇匀使之溶解；
农药提取液：在20-80mL磷酸盐或碳酸盐缓冲溶液中加入50-300mL丙三醇，混匀后再加入100-300mL95wt.%乙醇溶液，混匀；
缓冲液：在500mL蒸馏水中加入5-15g磷酸氢二钠和0.2-0.8g磷酸二氢钾，混匀；
（2）检测
样品提取：
称取0.5克茶叶或茶青样品，加入1.0mL农药提取液，使样品充分浸润并静置10分钟，底部溶液即为待测液；
对照测定：
吸取Et试剂100μL，加入1.5mL缓冲液，摇匀，加入200μL农药提取液，摇匀，静置10分钟，加入100μLSub试剂，摇匀后移入0.5cm比色皿，放入农药残留检测仪及时进行对照测试；
样品测定：
吸取Et试剂100μL，加入1.5mL缓冲液，摇匀，加入200μL待测液，摇匀，静置10分钟，加入100μLSub试剂，摇匀后移入0.5cm比色皿，放入农药残留检测仪及时进行样品测试；
测定结果的判定：
当检测结果的酶抑制率读数超过50%时，表明样品农药残留毒性可能超过安全标准，应当确认操作步骤无误、仪器工作正常、试剂没有污染失效，重新进行对照测试并对此样品进行2次以上的重复检测，如检测结果重复并仍然超过50%，则需用气相色谱作进一步的确认。
2.根据权利要求1所述的茶叶或茶青中农药残留的检测方法，其特征在于：所述的Et试剂为胆碱酯酶和5,5'-二硫代双(2-硝基苯甲酸)的混合液，两者的重量比为1︰40~100。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510422117.3A CN105181405B (zh) | 2015-07-18 | 2015-07-18 | 一种茶叶或茶青中农药残留的检测方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510422117.3A CN105181405B (zh) | 2015-07-18 | 2015-07-18 | 一种茶叶或茶青中农药残留的检测方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN105181405A true CN105181405A (zh) | 2015-12-23 |
| CN105181405B CN105181405B (zh) | 2018-04-10 |
Family
ID=54903643
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201510422117.3A Active CN105181405B (zh) | 2015-07-18 | 2015-07-18 | 一种茶叶或茶青中农药残留的检测方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN105181405B (zh) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106053454A (zh) * | 2016-05-30 | 2016-10-26 | 西华大学 | 一种有机磷农药的快速增敏检测方法 |
| CN106353418A (zh) * | 2016-08-15 | 2017-01-25 | 贵州省农产品质量安全监督检验测试中心 | 一种用气相色谱‑三重四级杆二级质谱同时测定茶青中28种农药残留的方法 |
| CN106779427A (zh) * | 2016-12-23 | 2017-05-31 | 常州市农畜水产品质量监督检验测试中心 | 一种农残快速检测结果上传、平行、复检处理方法 |
Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100715717B1 (ko) * | 2005-11-25 | 2007-05-08 | 전남대학교산학협력단 | 꿀벌유래 ＡＣｈＥ 및 그 항체를 이용한 잔류농약 진단키트 |
| CN101614671A (zh) * | 2008-06-25 | 2009-12-30 | 汤新华 | 一种茶叶安全快速检测方法 |
| CN201501880U (zh) * | 2009-09-11 | 2010-06-09 | 上海瑞鑫科技仪器有限公司 | 农药残留速测管 |
| JP2011045313A (ja) * | 2009-08-28 | 2011-03-10 | Satake Corp | 残留農薬測定方法 |
| CN102353670A (zh) * | 2011-06-27 | 2012-02-15 | 天津大学 | 利用酶抑制法检测含硫蔬菜中农药残留的方法 |
| CN102565240A (zh) * | 2011-12-29 | 2012-07-11 | 烟台大学 | 一种对食品中有机氯农药残留检测的样品前处理方法 |
| CN103352032A (zh) * | 2013-07-16 | 2013-10-16 | 广州甘蔗糖业研究所 | 丁酰胆碱酯酶及其制备方法和其制得的快速检测农药残留试剂盒 |
-
2015
- 2015-07-18 CN CN201510422117.3A patent/CN105181405B/zh active Active
Patent Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100715717B1 (ko) * | 2005-11-25 | 2007-05-08 | 전남대학교산학협력단 | 꿀벌유래 ＡＣｈＥ 및 그 항체를 이용한 잔류농약 진단키트 |
| CN101614671A (zh) * | 2008-06-25 | 2009-12-30 | 汤新华 | 一种茶叶安全快速检测方法 |
| JP2011045313A (ja) * | 2009-08-28 | 2011-03-10 | Satake Corp | 残留農薬測定方法 |
| CN201501880U (zh) * | 2009-09-11 | 2010-06-09 | 上海瑞鑫科技仪器有限公司 | 农药残留速测管 |
| CN102353670A (zh) * | 2011-06-27 | 2012-02-15 | 天津大学 | 利用酶抑制法检测含硫蔬菜中农药残留的方法 |
| CN102565240A (zh) * | 2011-12-29 | 2012-07-11 | 烟台大学 | 一种对食品中有机氯农药残留检测的样品前处理方法 |
| CN103352032A (zh) * | 2013-07-16 | 2013-10-16 | 广州甘蔗糖业研究所 | 丁酰胆碱酯酶及其制备方法和其制得的快速检测农药残留试剂盒 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 王林等: "《中华人民共和国国家标准-GB/T5009.199-2003 蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测》", 1 January 2004, 中华人民共和国卫生部，中国国家标准化管理委员会 * |
| 贾玮等: "粮油作物及茶叶中农药多残留检测的前处理技术进展", 《分析测试学报》 * |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106053454A (zh) * | 2016-05-30 | 2016-10-26 | 西华大学 | 一种有机磷农药的快速增敏检测方法 |
| CN106353418A (zh) * | 2016-08-15 | 2017-01-25 | 贵州省农产品质量安全监督检验测试中心 | 一种用气相色谱‑三重四级杆二级质谱同时测定茶青中28种农药残留的方法 |
| CN106353418B (zh) * | 2016-08-15 | 2019-04-02 | 贵州省农产品质量安全监督检验测试中心 | 一种用气相色谱-三重四级杆二级质谱同时测定茶青中28种农药残留的方法 |
| CN106779427A (zh) * | 2016-12-23 | 2017-05-31 | 常州市农畜水产品质量监督检验测试中心 | 一种农残快速检测结果上传、平行、复检处理方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN105181405B (zh) | 2018-04-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Guo et al. | Visual detection of melamine in milk products by label-free gold nanoparticles | |
| Tolcha et al. | Low‐density extraction solvent based solvent‐terminated dispersive liquid–liquid microextraction for quantitative determination of ionizable pesticides in environmental waters | |
| Shabani et al. | Indirect spectrophotometric determination of ultra trace amounts of selenium based on dispersive liquid–liquid microextraction–solidified floating organic drop | |
| CN105181405A (zh) | 一种茶叶或茶青中农药残留的检测方法 | |
| CN101614671B (zh) | 一种茶叶安全快速检测方法 | |
| CN103091314B (zh) | 食品中水溶性偶氮染料快速检测方法 | |
| Ghaedi et al. | Design of an efficient uranyl ion optical sensor based on 1′-2, 2′-(1, 2-phenylene) bis (ethene-2, 1-diyl) dinaphthalen-2-ol | |
| Tan et al. | A novel optical ammonia sensor based on reflectance measurements for highly polluted and coloured water | |
| Tavallali et al. | A highly selective optode for determination of Hg (II) by a modified immobilization of indigo carmine on a triacetylcellulose membrane | |
| CN102353667A (zh) | 一种面粉中过氧化苯甲酰含量的检测方法 | |
| CN105403612A (zh) | 一种基于植物酯酶快速检测农残的方法 | |
| CN105067537A (zh) | 一种颗粒物中微量铅的检测方法 | |
| CN104697976A (zh) | 一种豆干中二乙基黄的快速提取和检测方法 | |
| CN102353668A (zh) | 一种测定地表水中阴离子表面活性剂的方法 | |
| Mahmoudian et al. | Ultra-trace determination of cadmium in water and food samples by a thin-film microextraction using a supported liquid membrane combined with smartphone-based colorimetric detection | |
| CN101914059A (zh) | 一种测定痕量铅的分析试剂及其制备方法和应用 | |
| Sadeghi et al. | Novel PVC membrane bulk optical sensor for determination of uranyl ion | |
| Firooz et al. | Development of a highly sensitive and selective mercury optical sensor based on immobilization of bis (thiophenal)-4, 4′-methylenedianiline on a PVC membrane | |
| CN105021436A (zh) | 一种农药提取液及其应用 | |
| CN101672793A (zh) | 一种苯二胺类物质的快速半定量检测试剂盒 | |
| Amin | Optical chemical sensor of lutetium (III) in water based on 2-nitro-6-(thiazol-2-yldiazenyl) phenol immobilized on polymethyl methacrylate and 2-nitrophenyl octyl ether matrix | |
| CN106324241A (zh) | 一种凋落物中总多酚含量的测定方法 | |
| CN107064125A (zh) | 一种海洋孔隙水中营养盐及硫化物含量的测定方法 | |
| CN106596539B (zh) | 快速检测敌草快的超分子试剂盒及方法 | |
| CN105486651A (zh) | 一种铅基合金中镧的化学分析方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |