CN104267026B

CN104267026B - 基于纳米铂模拟过氧化物酶的汞离子检测方法及其试剂盒

Info

Publication number: CN104267026B
Application number: CN201410487581.6A
Authority: CN
Inventors: 陈伟; 何少斌; 吴钢伟; 邓豪华; 彭花萍
Original assignee: Fujian Medical University
Current assignee: Fujian Medical University
Priority date: 2014-09-22
Filing date: 2014-09-22
Publication date: 2017-05-10
Anticipated expiration: 2034-09-22
Also published as: CN104267026A

Abstract

本发明公开了一种基于纳米铂模拟过氧化物酶的汞离子检测方法及其试剂盒。本发明利用纳米铂与汞离子的特异性相互作用后其模拟过氧化物酶活性的抑制变化，通过纳米铂催化过氧化氢氧化3,3’,5,5’‑四甲基联苯胺盐酸盐显色，提供了一种快速、简便、超灵敏的汞离子检测新方法。该检测新方法所用纳米铂制备简便易得，可以实现对汞离子可视化便捷分析，具有操作简便、检测时间短、灵敏度高、特异性强等优点，易于推广使用。

Description

基于纳米铂模拟过氧化物酶的汞离子检测方法及其试剂盒

技术领域

本发明涉及一种基于纳米铂模拟过氧化物酶的汞离子比色检测方法及其检测试剂盒，属于分析化学和纳米技术领域。

背景技术

众所周知汞是高毒的全球性环境污染物，尤其是其具有高迁移性、持久性、甲基化作用性、生物富集性及食物链放大性的特点，即便是极微量的存在于环境中，对动植物及人类的健康也是极大的威胁。医学研究早已证实一定程度的汞暴露将严重损伤人的大脑、心脏、肾、肺及免疫系统。而在全球工业化进程当中，人为活动造成环境中的汞含量日益增加，污染范围日益扩大,据统计，目前大气、水、土壤中汞含量比数年前提高了3倍。美国环境保护署规定饮用水中汞离子的最大允许量不得超过10 nmol/L。目前，汞离子的常规检测方法主要有原子吸收法、原子荧光光谱法、电感耦合等离子体发射光谱法等。但是这些方法操作繁琐，需要麻烦的前处理、专门的分析技术人员以及昂贵的仪器，不利于现场快速分析及低浓度汞的检测。

发明内容

鉴于上述的现有技术中的不足，本发明的一个目的在于提供一种基于纳米铂模拟过氧化物酶的汞离子比色检测方法。其中包括利用纳米铂与汞离子的特异性相互作用后其模拟过氧化物酶活性的抑制变化，通过纳米铂催化过氧化氢氧化3,3’,5,5’-四甲基联苯胺盐酸盐显色，随着汞离子的含量增加，显色体系在最大吸收波长652 nm处的吸收值（A）降低。

为了实现上述检测方法的目的，本发明采用以下技术方案：

本发明所述的基于纳米铂模拟过氧化物酶的汞离子比色检测方法，其特征是纳米铂与汞离子的特异性相互作用后其模拟过氧化物酶活性的抑制变化，通过纳米铂催化过氧化氢氧化3,3’,5,5’-四甲基联苯胺盐酸盐显色，根据显色体系溶液颜色判断或紫外吸收光谱特征的变化，来测定汞离子浓度，所述纳米铂由以下步骤制成的：在0.01~5 ml、浓度为5~200 mmol/L柠檬酸三钠溶液中加入0.01~5 ml、浓度为1~100 mmol/L氯铂酸水溶液，混匀搅拌一段时间后，加入0.05~0.5 ml、浓度为10~400 mmol/L硼氢化钠水溶液，继续混匀搅拌得到柠檬酸修饰的铂纳米材料，将水溶液冷冻干燥即得到铂纳米材料粉末。优选的纳米铂制备方法为：将1 ml 浓度为16 mmol/L 氯铂酸水溶液与1 ml 浓度为40 mmol/L的柠檬酸三钠混合，并用38 ml的双蒸水稀释，暗处搅拌30分钟，随后加入0.2 ml浓度为50 mmol/L的硼氢化钠水溶液，加入时间控制在2分钟内，反应溶液颜色从浅黄色变成棕黄色，暗处继续搅拌1小时。

所述的检测方法，其特征是能根据显色体系溶液颜色判断汞离子的浓度。

所述的检测方法，其特征是能根据紫外吸收光谱的最大吸收波长652 nm处的吸收值以判断汞离子的浓度。

所述的检测方法，其特征是将纳米铂溶液用双蒸水稀释50倍得浓度为1.56 mg/L的纳米铂溶液，在0.1 ml浓度为1.56 mg/L的纳米铂溶液中，加入0.4 ml不同浓度的汞离子样品溶液，混合后在室温放置2分钟，在混合溶液中加入2.3 ml的双蒸水、1 ml浓度为2mol/L的过氧化氢、0.2 ml浓度为16 mmol/L的3,3’,5,5’-四甲基联苯胺盐酸盐，混合后45℃水浴10分钟，目视观察溶液颜色的变化或测定最大吸收波长652 nm处的吸收值，当不含汞离子时，溶液显深蓝色，随着汞离子浓度的增大，体系溶液颜色逐渐变浅，肉眼观察的检测限为1.5 nmol/L，随着汞离子浓度的增大，在最大吸收波长652 nm处的吸收值逐渐减小，吸收光谱逐渐下降；根据空白吸收值A₀与含有汞离子吸收值A的差值（A₀-A）绘制标准曲线，在0.01~4 nmol/L 汞离子浓度范围内A₀-A与汞离子浓度呈线性关系，检测限为8.5 pmol/L。

所述的检测方法，其特征是纳米铂溶液和含不同浓度的汞离子样品溶液混合后室温放置时间为1~10分钟，选择最优时间为2分钟。

本发明所述的基于纳米铂模拟过氧化物酶快速测定水样中汞离子的方法，其特征是包括如下步骤：在0.1 ml浓度为1.56 mg/L的纳米铂溶液中，加入0.4 ml待测水样，混合后在室温放置2分钟，在混合溶液中加入2.3 ml的双蒸水、1 ml浓度为2 mol/L的过氧化氢、0.2 ml浓度为16 mmol/L的3,3’,5,5’-四甲基联苯胺盐酸盐，混合后45℃水浴10分钟，目视观察溶液颜色的变化或测定溶液最大吸收波长652 nm处的吸收值，根据溶液颜色判断待测水样中的汞离子含量或根据空白吸收值A₀与含有汞离子吸收值A的差值（A₀-A）定量计算待测水样中的汞离子含量。

本发明所述的基于纳米铂模拟过氧化物酶的汞离子检测试剂盒，其特征是试剂盒中包括柠檬酸修饰的纳米铂的a液，显色底物过氧化氢和3,3’,5,5’-四甲基联苯胺盐酸盐的b液；所述a液包括制备后稀释50倍的纳米铂溶液，其浓度为1.56 mg/L；所述b液包括过氧化氢及3,3’,5,5’-四甲基联苯胺盐酸盐，过氧化氢浓度为0.571 mol/L，3,3’,5,5’-四甲基联苯胺盐酸盐浓度为0.914 mmol/L。

所述的一种基于纳米铂模拟过氧化物酶的汞离子检测试剂盒的应用，其特征是将0.4 ml待检测的样品溶液中加入0.1 ml的a液，混合后在室温放置2分钟，在混合溶液中加入3.5 ml的b液，混合后45℃水浴10分钟，目视观察溶液颜色的变化或测定最大吸收波长652 nm处的吸收值；根据溶液颜色目视判断或通过吸光度测定的空白吸收值A₀与含有汞离子吸收值A的差值（A₀-A）绘制的标准曲线进行定量；所述目视观察的检测限为1.5 nmol/L，所述吸光度测定的检测限为8.5 pmol/L。

上述所使用的柠檬酸修饰的纳米铂的制备方法优选为：将1 ml 浓度为16 mmol/L氯铂酸水溶液与1 ml 浓度为40 mmol/L的柠檬酸三钠混合，并用38 ml的双蒸水稀释，暗处搅拌30分钟，随后加入0.2 ml浓度为50 mmol/L的硼氢化钠水溶液，加入时间控制在2分钟内，反应溶液颜色从浅黄色变成棕黄色，暗处继续搅拌1小时。

本发明采用如下的具体技术方案为：

（一）纳米铂的制备：首先，将1 ml 浓度为16 mmol/L 氯铂酸水溶液与1 ml 浓度为40 mmol/L的柠檬酸三钠混合，并用38 ml的双蒸水稀释，暗处搅拌30分钟。随后加入0.2ml浓度为50 mmol/L的硼氢化钠水溶液（加入时间控制在2分钟内），反应溶液颜色从浅黄色变成棕黄色，暗处继续搅拌1小时。所得的纳米铂浓度为78 mg/L，平均粒径为2.5±0.4 nm。制备过程中使用的所有玻璃器皿均经过王水浸泡，并用双蒸水彻底清洗，晾干。

（二）汞离子的检测方法：在0.1 ml浓度为1.56 mg/L的纳米铂溶液中加入0.4 ml汞离子样品溶液，混合后在室温放置2分钟，在混合溶液中加入2.3 ml的双蒸水、1 ml浓度为2 mol/L的过氧化氢、0.2 ml浓度为16 mmol/L的3,3’,5,5’-四甲基联苯胺盐酸盐，混合后45℃水浴10分钟，目视观察颜色的变化或测定最大吸收波长652 nm处的吸收值（A）。根据显色体系溶液颜色判断或通过根据A₀（空白）与A（含有汞离子）的差值（A₀-A）绘制的标准曲线进行定量。目视观察的检测限为1.5 nmol/L，吸光度测定的检测限为8.5 pmol/L。

本发明的另一个目的在于提供一种基于纳米铂模拟过氧化物酶的汞离子检测试剂盒。试剂盒中包括提供柠檬酸修饰的纳米铂（a液），过氧化氢和3,3’,5,5’-四甲基联苯胺盐酸盐（b液）。

为了实现上述试剂盒的目的，本发明采用以下技术方案：

（三）a液包括上述技术方案（一）制备后用双蒸水稀释50倍的纳米铂溶液，其浓度为1.56 mg/L。b液包括过氧化氢和3,3’,5,5’-四甲基联苯胺盐酸盐，过氧化氢浓度为0.571mol/L，3,3’,5,5’-四甲基联苯胺盐酸盐浓度为0.914 mmol/L。

（四）样品中汞离子的检测方法：0.4 ml样品溶液中加入0.1 ml技术方案（三）的a液，混合后在室温放置2分钟，在混合溶液中加入3.5 ml技术方案（三）的b液，混合后45℃水浴10分钟，目视观察颜色的变化或测定最大吸收波长652 nm处的吸收值（A）。根据显色体系溶液颜色初步判断或通过根据A₀（空白）与A（含有汞离子）的差值（A₀-A）绘制的标准曲线进行定量。通过肉眼观察颜色的检测限为1.5 nmol/L，分光光度法测定的检测限为8.5 pmol/L。

相比现有技术的不足，本发明的优点：

（1）本发明利用纳米铂与汞离子的特异性相互作用后其模拟过氧化物酶活性的抑制变化，通过纳米铂催化过氧化氢氧化3,3’,5,5’-四甲基联苯胺盐酸盐显色，从而表现出溶液颜色和紫外吸收光谱特征的变化，可以用于汞离子的含量检测。检测工作可在10-15分钟内完成并得到检测结果。

（2）本发明所使用的纳米铂由柠檬酸作为稳定剂修饰在表面，硼氢化钠还原氯铂酸得到，其制备过程简单快速。

（3）本发明在检测汞离子中无需加入稳定剂稳定纳米铂。每次检测所需纳米铂用量极少，显色底物（过氧化氢和3,3’,5,5’-四甲基联苯胺盐酸盐）容易获得，检测成本低。

（4）本发明对样品的处理要求低，对汞离子的检测特异性高。

（5）本发明检测汞离子的检测线性范围为0.01~4 nmol/L，检测的灵敏度高，通过肉眼观察颜色变化的检测限为1.5 nmol/L，分光光度法检测的检测限为8.5 pmol/L。

本发明的测定方法，可以通过紫外吸收光谱仪测定出样本中汞离子的浓度水平，测试灵敏度高，特异性好，精确度好。同时还可通过溶液颜色的变化，肉眼观察颜色变化的检测限为1.5 nmol/L。此外，本发明提供的汞离子检测试剂盒，检测过程简便，稳定性好，具有操作简便、检测时间短、灵敏度高、特异性强等优点，易于推广使用。

附图说明

图1为纳米铂催化过氧化氢氧化3,3’,5,5’-四甲基联苯胺盐酸盐显色的紫外吸收光谱图。

图2为与5 nmol/L的汞离子作用后的纳米铂催化过氧化氢氧化3,3’,5,5’-四甲基联苯胺盐酸盐显色的紫外吸收光谱图。

图3为不同浓度汞离子存在时显色体系的颜色变化图，具体颜色变化：当不含汞离子时，溶液显深蓝色，随着汞离子浓度的增大，溶液颜色逐渐变浅。

图4为不同浓度汞离子存在时显色体系的紫外吸收光谱图。汞离子浓度（nmol/L）：0，0.01，0.05，0.1，0.5，1，1.5，2，3，4。

图5为汞离子的标准曲线图，纵坐标表示A₀（空白）与A（含有汞离子）的差值。

图6为汞离子检测的干扰性实验，对比了除汞离子外的17种不同的阳离子，纵坐标表示A（含有阳离子）与A₀（空白）的比值关系图。

具体实施方式

本发明的一个方面在于提供一种基于纳米铂模拟过氧化物酶的汞离子比色检测方法。其中包括利用纳米铂与汞离子的特异性相互作用后其模拟过氧化物酶活性的抑制变化，通过纳米铂催化过氧化氢氧化3,3’,5,5’-四甲基联苯胺盐酸盐显色，随着汞离子的含量增加，显色体系在最大吸收波长652 nm处的吸收值（A）降低。取一系列含有不同浓度汞离子的标准样品加入体系中反应，根据显色体系溶液颜色判断或根据A₀（空白）与A（含有汞离子）的差值（A₀-A）绘制标准曲线，从而实现汞离子的检测。

以下结合附图及若干实施例对本发明检测方法的技术方案作进一步的说明。

实施例1：

将1 ml 浓度为16 mmol/L 氯铂酸水溶液与1 ml 浓度为40 mmol/L的柠檬酸三钠混合，并用38 ml的双蒸水稀释，暗处搅拌30分钟。随后加入0.2 ml浓度为50 mmol/L的硼氢化钠水溶液（加入时间控制在2分钟内），反应溶液颜色从浅黄色变成棕黄色，暗处继续搅拌1小时。所得的纳米铂浓度为78 mg/L，平均粒径为2.5±0.4 nm。以上过程中使用的所有玻璃器皿均经过王水浸泡，并用双蒸水彻底清洗，晾干。

实施例2：

将实施例1所得纳米铂溶液用双蒸水稀释50倍得浓度为1.56mg/L的纳米铂溶液。取0.1 ml浓度为1.56 mg/L的纳米铂溶液，加入2.7 ml的双蒸水、1 ml浓度为2 mol/L的过氧化氢、0.2 ml浓度为16 mmol/L的3,3’,5,5’-四甲基联苯胺盐酸盐，混合后45℃水浴10分钟，体系显色后为深蓝色，该体系最大吸收波长在652 nm（见图1）。

实施例3：

将实施例1所得纳米铂溶液用双蒸水稀释50倍得浓度为1.56 mg/L的纳米铂溶液。在0.1 ml浓度为1.56 mg/L的纳米铂溶液中，加入0.4 ml浓度为50 nmol/L的汞离子样品溶液，混合后在室温放置2分钟，在混合溶液中加入2.3 ml的双蒸水、1 ml浓度为2 mol/L的过氧化氢、0.2 ml浓度为16 mmol/L的3,3’,5,5’-四甲基联苯胺盐酸盐，混合后45℃水浴10分钟，体系显色后为浅蓝色，该体系在652 nm的吸收值较实施例2明显降低（见图2）。

实施例4：

将实施例1所得纳米铂溶液用双蒸水稀释50倍得浓度为1.56 mg/L的纳米铂溶液。在0.1 ml浓度为1.56 mg/L的纳米铂溶液中，加入0.4 ml不同浓度的汞离子样品溶液，混合后在室温放置2分钟，在混合溶液中加入2.3 ml的双蒸水、1 ml浓度为2 mol/L的过氧化氢、0.2 ml浓度为16 mmol/L的3,3’,5,5’-四甲基联苯胺盐酸盐，混合后45℃水浴10分钟，目视观察颜色的变化。如图3所示，当不含汞离子时，溶液显深蓝色，随着汞离子浓度的增大，体系溶液颜色逐渐变浅，肉眼观察的检测限为1.5 nmol/L。

实施例5：

将实施例1所得纳米铂溶液用双蒸水稀释50倍得浓度为1.56 mg/L的纳米铂溶液。在0.1 ml浓度为1.56 mg/L的纳米铂溶液中，加入0.4 ml不同浓度的汞离子样品溶液，混合后在室温放置2分钟，在混合溶液中加入2.3 ml的双蒸水、1 ml浓度为2 mol/L的过氧化氢、0.2 ml浓度为16 mmol/L的3,3’,5,5’-四甲基联苯胺盐酸盐，混合后45℃水浴10分钟，测定体系的吸收光谱。如图4所示，随着汞离子浓度的增大，体系在最大吸收波长652 nm处的吸光值（A）逐渐减小，吸收光谱逐渐下降。如图5所示，根据A₀（空白）与A（含有汞离子）的差值（A₀-A）绘制标准曲线，在0.01 ~4 nmol/L 范围内A₀-A与汞离子浓度呈线性关系，检测限为8.5 pmol/L。

实施例6：

将实施例1所得纳米铂溶液用双蒸水稀释50倍得浓度为1.56 mg/L的纳米铂溶液。在0.1 ml浓度为1.56 mg/L的纳米铂溶液中，加入0.4 ml含有不同的阳离子的溶液，混合后在室温放置2分钟，在混合溶液中加入2.3 ml的双蒸水、1 ml浓度为2 mol/L的过氧化氢、0.2 ml浓度为16 mmol/L的3,3’,5,5’-四甲基联苯胺盐酸盐，混合后45℃水浴10分钟，测定体系在652 nm处的吸收值（A）。如图6所示，纵坐标为A（含有阳离子）与A₀（空白）的比值，与10 nmol/L的汞离子产生的抑制作用相比，1 μmol/L的其它阳离子的影响均可以忽略不计（横坐标从左至右为NH₄ ⁺, Na⁺, K⁺, Ba²⁺, Ca²⁺, Cd²⁺, Co²⁺, Cu²⁺, Mg²⁺, Mn²⁺, Ni²⁺, Pb² ⁺, Fe²⁺, Zn²⁺, Al³⁺, Cr³⁺, Fe³⁺）。

实施例7：

将实施例1所得纳米铂溶液用双蒸水稀释50倍得浓度为1.56 mg/L的纳米铂溶液。在0.1 ml浓度为1.56 mg/L的纳米铂溶液中，加入0.4 ml自来水样品，混合后在室温放置2分钟，在混合溶液中加入2.3 ml的双蒸水、1 ml浓度为2 mol/L的过氧化氢、0.2 ml浓度为16 mmol/L的3,3’,5,5’-四甲基联苯胺盐酸盐，混合后45℃水浴10分钟，测定体系在652 nm处的吸收值。结合实施例5的标准曲线计算汞离子的含量，自来水样品的加标回收率在93-103%，相对标准偏差为0.6~2.9%。

本发明的另一个方面在于提供一种基于纳米铂模拟过氧化物酶的汞离子检测试剂盒。试剂盒中包括提供柠檬酸修饰的纳米铂（a液），过氧化氢和3,3’,5,5’-四甲基联苯胺盐酸盐（b液）。具体实施如下：

实施例8：

a液包括上述实施例1制备后用双蒸水稀释50倍的纳米铂溶液，其浓度为1.56 mg/L。b液包括过氧化氢及3,3’,5,5’-四甲基联苯胺盐酸盐，过氧化氢浓度为0.571 mol/L，3,3’,5,5’-四甲基联苯胺盐酸盐浓度为0.914 mmol/L。

实施例9：

0.4 ml待测的含汞离子样品溶液中加入0.1 ml实施例8的a液，混合后在室温放置2分钟，在混合溶液中加入3.5 ml实施例8的b液，混合后45℃水浴10分钟，目视观察颜色的变化或测定最大吸收波长652 nm处的吸收值（A）。根据结合实施例4的显色体系溶液颜色判断和实施例5的标准曲线进行汞离子的定量。目视观察的检测限为1.5 nmol/L，吸光度测定的检测限为8.5 pmol/L。

Claims

1.一种基于纳米铂模拟过氧化物酶的汞离子比色检测方法，其特征是纳米铂与汞离子的特异性相互作用后其模拟过氧化物酶活性的抑制变化，通过纳米铂催化过氧化氢氧化3,3’,5,5’-四甲基联苯胺盐酸盐显色，根据显色体系溶液颜色判断或紫外吸收光谱特征的变化，来测定汞离子浓度，所述纳米铂由以下步骤制成的：将1 ml 浓度为16 mmol/L 氯铂酸水溶液与1 ml 浓度为40 mmol/L的柠檬酸三钠混合，并用38 ml的双蒸水稀释，暗处搅拌30分钟，随后加入0.2 ml浓度为50 mmol/L的硼氢化钠水溶液，加入时间控制在2分钟内，反应溶液颜色从浅黄色变成棕黄色，暗处继续搅拌1小时；能根据紫外吸收光谱的最大吸收波长652 nm处的吸收值以判断汞离子的浓度。

2.根据权利要求1所述的基于纳米铂模拟过氧化物酶的汞离子比色检测方法，其特征是将纳米铂溶液用双蒸水稀释50倍得浓度为1.56 mg/L的纳米铂溶液，在0.1 ml浓度为1.56 mg/L的纳米铂溶液中，加入0.4 ml不同浓度的汞离子样品溶液，混合后在室温放置2分钟，在混合溶液中加入2.3 ml的双蒸水、1 ml浓度为2 mol/L的过氧化氢、0.2 ml浓度为16 mmol/L的3,3’,5,5’-四甲基联苯胺盐酸盐，混合后45℃水浴10分钟，目视观察溶液颜色的变化或测定最大吸收波长652 nm处的吸收值，当不含汞离子时，溶液显深蓝色，随着汞离子浓度的增大，体系溶液颜色逐渐变浅，肉眼观察的检测限为1.5 nmol/L，随着汞离子浓度的增大，在最大吸收波长652 nm处的吸收值逐渐减小，吸收光谱逐渐下降；根据空白吸收值A₀与含有汞离子吸收值A的差值（A₀-A）绘制标准曲线，在0.01~4 nmol/L 汞离子浓度范围内A₀-A与汞离子浓度呈线性关系，检测限为8.5 pmol/L。

3.一种基于纳米铂模拟过氧化物酶快速测定水样中汞离子的方法，其特征是包括如下步骤：在0.1 ml浓度为1.56 mg/L的纳米铂溶液中，加入0.4 ml待测水样，混合后在室温放置2分钟，在混合溶液中加入2.3 ml的双蒸水、1 ml浓度为2 mol/L的过氧化氢、0.2 ml浓度为16 mmol/L的3,3’,5,5’-四甲基联苯胺盐酸盐，混合后45℃水浴10分钟，目视观察溶液颜色的变化或测定溶液最大吸收波长652 nm处的吸收值，根据溶液颜色判断待测水样中的汞离子含量或根据空白吸收值A₀与含有汞离子吸收值A的差值（A₀-A）定量计算待测水样中的汞离子含量；所使用的纳米铂的制备方法为：将1 ml 浓度为16 mmol/L 氯铂酸水溶液与1ml 浓度为40 mmol/L的柠檬酸三钠混合，并用38 ml的双蒸水稀释，暗处搅拌30分钟，随后加入0.2 ml浓度为50 mmol/L的硼氢化钠水溶液，加入时间控制在2分钟内，反应溶液颜色从浅黄色变成棕黄色，暗处继续搅拌1小时。

4.一种基于纳米铂模拟过氧化物酶的汞离子检测试剂盒，其特征是试剂盒中包括柠檬酸修饰的纳米铂的a液，显色底物过氧化氢和3,3’,5,5’-四甲基联苯胺盐酸盐的b液；所述a液包括制备后稀释50倍的纳米铂溶液，其浓度为1.56 mg/L；所述b液包括过氧化氢及3,3’,5,5’-四甲基联苯胺盐酸盐，过氧化氢浓度为0.571 mol/L，3,3’,5,5’-四甲基联苯胺盐酸盐浓度为0.914 mmol/L，所使用的柠檬酸修饰的纳米铂的制备方法为：将1 ml 浓度为16mmol/L 氯铂酸水溶液与1 ml 浓度为40 mmol/L的柠檬酸三钠混合，并用38 ml的双蒸水稀释，暗处搅拌30分钟，随后加入0.2 ml浓度为50 mmol/L的硼氢化钠水溶液，加入时间控制在2分钟内，反应溶液颜色从浅黄色变成棕黄色，暗处继续搅拌1小时；

将0.4 ml待检测的样品溶液中加入0.1 ml的a液，混合后在室温放置2分钟，在混合溶液中加入3.5 ml的b液，混合后45℃水浴10分钟，目视观察溶液颜色的变化或测定最大吸收波长652 nm处的吸收值；根据溶液颜色目视判断或通过吸光度测定的空白吸收值A₀与含有汞离子吸收值A的差值（A₀-A）绘制的标准曲线进行定量；所述目视观察的检测限为1.5nmol/L，所述吸光度测定的检测限为8.5 pmol/L。