CN111122268A - 一种保存液体样品中硫酸酯结合体和葡萄糖苷醛酸结合体的方法 - Google Patents

一种保存液体样品中硫酸酯结合体和葡萄糖苷醛酸结合体的方法 Download PDF

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张俊
钟姝姝
党志
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Abstract

本发明属于环境和医学领域，公开了一种保存液体样品中硫酸酯结合体和葡萄糖苷醛酸结合体的方法。其包括如下步骤：在液体样品中加入氯化汞，氯化汞溶解得到溶液，所述氯化汞的质量：液体样品的质量≥0.2wt％。本发明具有操作方便、成本低、保存效果好等优点，可广泛应用污水和人体尿液等液态样品的保存，具有一定的应用前景。

Description

一种保存液体样品中硫酸酯结合体和葡萄糖苷醛酸结合体的 方法
技术领域
本发明属于环境和医学领域，具体涉及一种保存液体样品中硫酸酯结合体和葡萄糖苷醛酸结合体的方法。
背景技术
天然雌激素是对一类甾醇类化合物的总称。目前已知的天然雌激素已多达17种，主要包括雌酮(estrone,E1)，雌二醇(17β-estradiol,E2)和雌三醇(estriol,E3)。天然雌激素的基本作用是维持人体和动物的内分泌功能正常运行。近二十年来，天然雌激素作为一类环境干扰化学物质得到了全球性的广泛关注。环境中的天然雌激素主要来自于人体和动物的排泄，并主要随尿液排出体外。为有效保护水体环境，提高城市污水处理工艺对天然雌激素的去除效率刻不容缓。污水原水中既有天然雌激素，又有天然雌激素结合体，尤其是以硫酸酯结合体为主。为准确评价污水处理厂的去除性能，需精确测定污水中的天然雌激素浓度。因在芳基硫酸酯酶(arylsulfatase)或者葡萄糖苷醛酸酶(β-glucuronidase)的作用下，天然雌激素硫酸结合体和葡萄糖苷醛酸结合体可以转化为对应的天然雌激素。因此，为了有效保持污水样品的完整性，需要对污水样品中的芳基硫酸酯酶和葡萄糖苷醛酸酶进行有效抑制，即污水样品中硫酸酯结合体和葡萄糖苷醛酸结合体的有效保存。
通常污水样品大多在低温下保存(4摄氏度)，但芳基硫酸酯酶和葡萄糖苷醛酸酶即使在4度低温下仍具有很高的酶活性。也有通过加入叠氮钠或者甲醛等抑制剂，以及低pH(<3)等保存条件，但效果并不理想。与此同时，申请人的前期工作表明，高pH值条件下(pH＝11)具有很好的芳基硫酸酯酶抑制效果。然而，高pH条件下，污水的其它物理化学性质可能会发生变化，对其它参数的测定不利。此外，尿液中天然雌激素和其结合体的相对比例对于医学临床诊断具有重要的作用，在测定前需保持天然雌激素结合体的完整性，尽量避免天然雌激素结合体转化为天然雌激素，因此亟需建立有效保存方法。
发明内容
针对以上问题，本发明的目的在于提供了一种保存液体样品中硫酸酯结合体和葡萄糖苷醛酸结合体的方法。
本发明的目的通过以下技术方案实现：
一种保存液体样品中硫酸酯结合体和葡萄糖苷醛酸结合体的方法，包括如下步骤：在液体样品中加入氯化汞，氯化汞溶解得到溶液即可，所述氯化汞的质量：液体样品的质量≥0.2wt％。
优选的，所述液体样品为城市污水、尿液或血液。
与现有技术相比，本发明具有以下优点和有益效果：
本发明具有操作简单，效果好，价格低廉等优点，对样品中的芳基硫酸酯酶和葡萄糖苷醛酸酶具有较好的抑制作用，对样品中硫酸结合体和葡萄糖苷醛酸结合体能够有效保存48小时。
附图说明
图1为实施例1中污水样品中，对硝基苯酚硫酸酯结合体随保存时间的变化趋势图，其中插图为污水样品的不同保存条件的线型标识，其中pNPS表示对硝基苯酚硫酸酯结合体。
图2为实施例2中污水样品中，对硝基苯酚葡萄糖苷醛酸结合体随保存时间的变化趋势图，其中插图表为污水样品的不同保存条件的线型标识，其中pNPS表示对硝基苯酚葡萄糖苷醛酸结合体。
具体实施方式
下面结合实施例和附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
实施例所述对硝基苯酚硫酸酯结合体(纯度>98％)购买于Sigma Aldrich公司；所述对硝基苯酚葡萄糖苷醛酸结合体(纯度>98％)购买于Sigma Aldrich公司；所述污水为取自广州市某城市污水的原水；所述室温为25℃，但在25-37℃的温度条件并不影响保存效果。
污水中本含有少量的芳基硫酸酯酶和葡萄糖苷酸酶，但为了验证本发明的保存效果明显性并节约实验时间，人为加入额外的芳基硫酸酯酶和葡萄糖苷酸酶。
实施例1
取4份城市污水样品(20mL)，在每份污水样品中，按50μmol/L的标准加入对硝基苯酚硫酸酯结合体，分别在以下条件下保存：
1.污水不加入任何物质在室温保存；
2.污水不加任何物质在4℃保存；
3.污水用HCl调节pH在室温下保存，污水最终pH为1；
4.污水加入氯化汞并在室温保存，所述氯化汞加入量占污水的0.1wt％。
5.污水加入氯化汞并在室温保存，所述氯化汞加入量占污水的0.2wt％；
每隔一定时间，即分别在保存1h，2h，4h，8h，12h，24h，36h和48h的时刻测定对硝基苯酚的含量，根据对硝基苯酚的含量可以计算出结合体剩余量。若样品保存条件好，则其含量基本无变化，反之对硝基苯酚硫酸酯结合体的含量随保存时间增加而不断减少。
实施例1中污水样品中对硝基苯酚硫酸酯结合体随保存时间的变化趋势如图1所示，(图中的C0和C分别为对硝基苯酚硫酸酯结合体的初始浓度和不同时间点的测定浓度)从图1可以得出：在上述5个不同样品保存条件下，只有加入占污水质量0.2wt％的氯化汞展现出理想的保存效果，其它保存条件均出现了一定的脱结合体。在常温条件下，由于污水样品中微生物的存在，会降解生成的对硝基苯酚，当对硝基苯酚的分解量大于生成量时，会造成结合体的计算量增大，造成图中曲线上升的情况。
实施例2
取4份城市污水样品(20mL)，在每份污水样品中，按50μmol/L的标准加入硝基苯酚葡萄糖苷醛酸结合体，分别在以下条件下保存：
1.污水不加入任何物质在室温保存；
2.污水不加任何物质在4℃保存；
3.污水用HCl调节pH在室温下保存，污水最终pH为1；
4.污水加入氯化汞并在室温保存，所述氯化汞加入量占污水的0.1wt％。
5.污水加入氯化汞并在室温保存，所述氯化汞加入量占污水的0.2wt％；
每隔一定时间，即分别在保存1h，2h，4h，8h，12h，24h，36h和48h的时刻测定不同保存条件下对硝基苯酚葡萄糖苷醛酸结合体的含量，若样品保存条件好，则其含量基本无变化，反之对硝基苯酚葡萄糖苷醛酸结合体的含量随保存时间增加而不断减少。
实施例2中污水样品中对硝基苯酚葡萄糖苷醛酸结合体随保存时间的变化趋势如图2所示，(图中的C0和C分别为对硝基苯酚葡萄糖苷醛酸结合体的初始浓度和不同时间点的测定浓度)。从图2可以得出：在上述5个不同样品保存条件下，只有加入占污水质量0.2wt％的氯化汞有理想的保存效果，其它保存条件均出现了一定的脱结合体。在常温条件下，由于污水样品中微生物的存在，会降解生成的对硝基苯酚，当对硝基苯酚的分解量大于生成量时，会造成结合体的计算量增大，造成图中曲线上升的情况。
因此，为确保污水中硫酸结合体和葡萄糖苷醛酸结合体均保持完整，加入0.2％氯化汞是最适保存条件。由于本方法是通过加入氯化汞来抑制两种酶的活性从而阻止其对结合体的分解，当氯化汞的加入量为0.2％时，对两种酶已经有良好的抑制效果，故当氯化汞加入量大于0.2％依旧有效；用在尿液或血液样品时，此法同样适用。
不受上述实施例的限制，其它的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (2)

1.一种保存液体样品中硫酸酯结合体和葡萄糖苷醛酸结合体的方法，其特征在于，包括如下步骤：在液体样品中加入氯化汞，氯化汞溶解得到溶液即可，所述氯化汞的质量：液体样品的质量≥0.2wt％。
2.根据权利要求1所述一种保存液体样品中硫酸酯结合体和葡萄糖苷醛酸结合体的方法，其特征在于，所述液体样品为城市污水、尿液或血液。
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