CN1931378A - 用于骨组织工程的微支架及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明用于骨组织工程的微支架及其制备方法和应用，属于医学用材料技术领域。该微支架的外形为球形，该球径在利于细胞在其表面黏附和生长的50～400μm范围内，多个微支架的平均球径为100～350μm。其制备方法为：将壳聚糖粉溶于乙酸水溶液中，加入交联剂水溶液，再将倾倒于非挥发性油性液体分散介质中形成乳液；加入交联剂水溶液进行交联；经氯仿清洗、过滤、乙醇抽提、干燥后得到球形壳聚糖微支架。本发明所制备的微支架材料表面大小和结构适宜细胞生长，具有良好的细胞相容性，植入体内后可降解，因此可用作骨组织工程的支架材料，同时还可用于药物缓释载体等，在临床医学上具有非常广阔的应用前景。
Description
技术领域：
本发明属于医学用材料技术领域，尤其涉及用于骨组织工程的微支架及其制备方法。
背景技术
骨组织工程作为骨缺损修复的一种方法，避免了自体骨移植等传统骨修复方法在取材、加工等方面的缺点，正日益成为一种蓬勃发展而有效的修复骨缺损的治疗方法。骨组织工程中支架材料作为人工细胞外基质，为细胞的停泊、生长、繁殖提供生存空间及获取营养、进行新陈代谢的场所，因此随着组织工程的发展，组织工程对支架材料的要求也提出了更高的要求和新的挑战。目前，支架材料的研究主要集中于材料体系的选择、材料与细胞的相互作用等方面，取得了一定的成果，部分成果已进入临床应用阶段。
在材料体系选择方面，支架材料的选择范围越来越广，包括聚合物材料、金属材料、无机非金属材料、复合材料等都可以用来制备支架材料，其中由于壳聚糖和β-磷酸三钙(β-TCP)的独特而优异的机械性能、生物学性能和体内降解特性而得到越来越多的关注和认可。
支架材料的外形也是骨组织工程支架材料的研究重点之一。目前大部分的研究工作都是选择多孔的块状材料作为支架材料，这种外形可以较好的满足组织工程对支架材料的机械性能方面的要求，但是同时带来了一些难以克服的缺陷，主要表现在：
(1)材料成型困难，难以制备出完全符合修复部位的形状要求的支架材料；
(2)细胞难以进入支架材料内部，造成材料内外生物学性能差异明显。种植于支架材料表面的成骨细胞在骨组织再生过程中起着非常重要的作用，让细胞进入到支架材料内部成为了亟待解决的问题。目前的解决方案主要从材料设计和细胞培养两方面入手，但由于受到材料厚度和孔隙尺度的限制，目前尚无令人兴奋的结果。
(3)支架材料的高孔隙率、大孔径的要求难以与其初始强度的要求达到一致，大的孔径和高的孔隙率往往造成材料强度的大幅度下降，如孔隙率达到75％强度。
发明内容
本发明的目的是为克服已有技术的不足之处，提供一种可用于骨组织工程的微支架及其制备方法，该微支架具有良好的生物相容性和细胞相容性，在旋转生物反应器中可在其表面培养和增殖成骨细胞，并可植入体内，修复骨缺损部位。同时本发明所制备的微球还可用于药物缓释载体等，在临床医学上具有非常广阔的应用前景。
本发明提出的骨组织工程微支架，其特征在于：该微支架的外形为球形，该球径在利于细胞在其表面黏附和生长的80～400μm范围内，多个微支架的平均球径为100～350μm。本发明提出的可用于骨组织工程的微支架材料的制备方法，其特征在于：其特征在于：选用壳聚糖作微支架材料，包括以下步骤：
(1)将壳聚糖粉溶于浓度为1～3％的乙酸水溶液中，所述乙酸体积(ml)∶壳聚糖质量(g)＝(25～50)∶1；
(2)在步骤(1)获得的溶液中加入浓度为0.5～4％的二醛类有机试剂的交联剂水溶液，搅拌8～10分钟，交联剂的体积(ml)∶壳聚糖质量(g)＝(2～5)∶1；
(3)将步骤(2)获得的溶液倾倒于体积为步骤(1)所述乙酸水溶液体积的1.5～3倍的非挥发性油性液体分散介质中，以300～700转/分钟的速度搅拌1～2小时后，加入1/15倍分散介质体积的司班-80，继续以相同的速度搅拌2～5小时，形成乳液；
(4)在步骤(3)中获得的乳液中加入浓度为15～30％的二醛类有机试剂的交联剂水溶液，搅拌均匀后置于40～60℃的水浴中，0.5～2小时后取出并加入浓度为10～20％的NaOH溶液，搅拌0.5～1小时后再次放入水浴中处理5～24小时，进行交联；
(5)经氯仿清洗、过滤、乙醇抽提、干燥后得到球形壳聚糖微支架。
本发明还提出制备所述微支架的方法，其特征在于：选用壳聚糖和β-磷酸三钙作微支架材料，包括以下步骤：
(1)按壳聚糖∶β-磷酸三钙＝(14～100％)∶(86～0％)质量分数称量适量的壳聚糖粉，并将其溶于浓度为1～3％的乙酸水溶液中，所用乙酸体积(ml)∶壳聚糖质量(g)＝(25～50)∶1；
(2)按上述质量分数称相应量的β-磷酸三钙粉，然后将其加入步骤(1)中获得的溶液中，并形成均匀的浆料；
(3)在步骤(2)获得的浆料中加入浓度为0.5～4％的二醛类有机试剂的交联剂水溶液，搅拌8～10分钟，交联剂的体积(ml)∶壳聚糖质量(g)＝(2～5)∶1；
(4)将步骤(3)获得的浆料倾倒于1.5～3倍浆料体积的非挥发性油性液体分散介质中，以300～700转/分钟的速度搅拌1～2小时后，加入1/15倍分散介质体积的司班-80，继续以相同的速度搅拌2～5小时，形成乳液；
(5)在步骤(4)中获得的乳液中加入浓度为15～30％的二醛类有机试剂的交联剂水溶液，搅拌均匀后置于40～60℃的水浴中，0.5～2小时后取出并加入浓度为10～20％的NaOH溶液，搅拌0.5～1小时后再次放入水浴中处理5～24小时，进行交联；
(6)经氯仿清洗、过滤、乙醇抽提、干燥后得到球形壳聚糖和β-磷酸三钙复合微支架。
本发明还提出将所述球形微支架作为增殖成骨细胞的微载体和在其表面种植成骨细胞并植入体内的组织工程支架材料的应用。
本发明的特点及技术效果：
本发明所制备的微支架材料外形为球形，且球径分布均匀，并具有满足细胞在其表面生长所需的表面积，为细胞的种植提供了物质基础；同时，此微支架具有良好的生物相容性和细胞相容性，又为细胞的种植提供了生物学基础，因此可用于骨组织工程，同时本发明所制备的微球还可用于药物缓释载体等，在临床医学上具有非常广阔的应用前景。
本发明提出用微球作为骨组织工程的支架材料，为了与块状多孔支架材料相区别，称之为微支架材料。这种微支架材料在外形和一些性能上与用作培养细胞的微载体一致，因此本发明中将此微支架材料同时用作培养细胞微载体，在旋转生物反应器中增殖和种植细胞，这样就将组织工程中培养细胞与种植细胞两步合二为一，简化了工艺过程，降低了组织工程法治疗骨缺损的成本。
同时，用微球作为骨组织工程支架，还具有如下独特的优势：
(1)可适应一定尺度范围内各种形状的骨缺损要求；
(2)结构设计灵活性，用于不同部位的微支架可以采用不同的细胞进行培养，在植入时再将其按照缺损部位的需要进行组配，就可实现不同部位对骨修复的不同要求；
(3)手术可操作性强，微支架尺寸较小，在手术过程中只需要根据缺损部位的大小填入适量的微支架即可；
(4)相对于块体支架，本微支架的比表面积大幅度增加，导致细胞培养的粘附量和均匀性大大增加；
另外，本发明涉及的微支架材料还可与一些药物、生长因子等与骨修复相关的生物学因子复合，加快骨修复的速度，也是其重要应用之一。
具体实施方式
本发明提出的用于骨组织工程的微支架及其制备方法和应用结合实施例详细说明如下：
本发明提出的一种用于骨组织工程的微支架，其特征在于：该微支架的外形为球形，该球径在利于细胞在其表面黏附和生长的50～400μm范围内，多个微支架的平均球径为100～350μm。
该微支架的材料可选用壳聚糖或β-磷酸三钙之中的一种，或两种，各成分所占质量百分比为：
壳聚糖：0％，14～100％；
β-磷酸三钙：100％，86～0％。
本发明提出制备上述微支架的方法，其特征在于：选用壳聚糖作微支架材料，包括以下步骤：
(1)将壳聚糖粉溶于浓度为1～3％的乙酸水溶液中，所述乙酸体积(ml)∶壳聚糖质量(g)＝(25～50)∶1；
(2)在步骤(1)获得的溶液中加入浓度为0.5～4％的二醛类有机试剂的交联剂水溶液，搅拌8～10分钟，交联剂的体积(ml)∶壳聚糖质量(g)＝(2～5)∶1；
(3)将步骤(2)获得的溶液倾倒于体积为步骤(1)所述乙酸水溶液体积的1.5～3倍的非挥发性油性液体分散介质中，以300～700转/分钟的速度搅拌1～2小时后，加入1/15倍分散介质体积的司班-80，继续以相同的速度搅拌2～5小时，形成乳液；
(4)在步骤(3)中获得的乳液中加入浓度为15～30％的二醛类有机试剂的交联剂水溶液，搅拌均匀后置于40～60℃的水浴中，0.5～2小时后取出并加入浓度为10～20％的NaOH溶液，搅拌0.5～1小时后再次放入水浴中处理5～24小时，进行交联；
(5)经氯仿清洗、过滤、乙醇抽提、干燥后得到球形壳聚糖微支架。
本发明还提出一种制备上述微支架的方法，其特征在于：选用壳聚糖和β-磷酸三钙作微支架材料，包括以下步骤：
(1)按壳聚糖∶β-磷酸三钙＝(14～100％)∶(86～0％)质量分数称量适量的壳聚糖粉，并将其溶于浓度为1～3％的乙酸水溶液中，所用乙酸体积(ml)∶壳聚糖质量(g)＝(25～50)∶1；
(2)按上述质量分数称相应量的β-磷酸三钙粉，然后将其加入步骤(1)中获得的溶液中，并形成均匀的浆料；
(3)在步骤(2)获得的浆料中加入浓度为0.5～4％的二醛类有机试剂的交联剂水溶液，搅拌8～10分钟，交联剂的体积(ml)∶壳聚糖质量(g)＝(2～5)∶1；
(4)将步骤(3)获得的浆料倾倒于1.5～3倍浆料体积的非挥发性油性液体分散介质中，以300～700转/分钟的速度搅拌1～2小时后，加入1/15倍分散介质体积的司班-80，继续以相同的速度搅拌2～5小时，形成乳液；
(5)在步骤(4)中获得的乳液中加入浓度为15～30％的二醛类有机试剂的交联剂水溶液，搅拌均匀后置于40～60℃的水浴中，0.5～2小时后取出并加入浓度为10～20％的NaOH溶液，搅拌0.5～1小时后再次放入水浴中处理5～24小时，进行交联；
(6)经氯仿清洗、过滤、乙醇抽提、干燥后得到球形壳聚糖和β-磷酸三钙复合微支架。
上述步骤中还包括：
(7)将步骤(6)得到的微球在空气气氛下，先以＜5℃/分钟的速度慢速升温至600℃，保温(2～4)小时进行脱脂处理，待壳聚糖有机物完全排尽后，以5～20℃/分钟的速率继续升温，至1150～1250℃，保温时间为1～3小时进行烧结，然后自然冷却至室温，得到β-磷酸三钙微支架。
所述二醛类有机试剂选用戊二醛、丁二醛或乙二醛之一种。
所述非挥发性油性液体选用液体石蜡或食用油之一种。
本发明还提出将所述球形微支架作为增殖成骨细胞的微载体和在其表面种植成骨细胞并植入体内的组织工程支架材料的应用。
实施例1
壳聚糖微支架材料的制备。将2g的壳聚糖粉在转速为500转/分钟的搅拌下溶于70ml2.5％的乙酸水溶液中，30分钟后形成透明均一的溶液；然后加入4ml 2.0％的戊二醛溶液，搅拌9分钟后，将此溶液倾倒于150ml的液体石蜡中，以300转/分钟的速度搅拌1小时后加入10ml的Span 80，继续搅拌2小时，然后加入6ml25％的戊二醛水溶液，搅拌30分钟使之分散均匀，停止搅拌，将装有此混合液的烧杯置于40℃的水浴中处理0.5小时，随后将其取出，在搅拌下加入25ml10％NaOH水溶液，搅拌30分钟后再次放入水浴中交联，5小时后取出。过滤掉油性液体后用氯仿清洗三次，再次过滤后用酒精抽提24小时，然后在烘箱中于60℃下烘干，得到组成为纯壳聚糖的球形微支架材料。微支架颜色呈褐色，经光学显微镜和电子扫描显微镜观察以及粒度分析仪测量，所获得的微支架材料球形良好，球径主要分布在120～250μm范围内，平均球径为174μm。细胞培养实验表明获得的壳聚糖微支架材料具有良好的细胞相容性，成骨细胞可在其表面黏附、生长和增殖。
实施例2
壳聚糖微支架的制备。将2g的壳聚糖粉在转速为500转/分钟的搅拌下溶于100ml1.5％的乙酸水溶液中，30分钟后形成透明均一的溶液；然后加入8ml 0.5％的丁二醛溶液，搅拌8分钟后，将此溶液倾倒于300ml的液体石蜡中，以600转/分钟的速度搅拌2小时后加入30ml的Span 80，继续搅拌4小时，然后加入10ml15％的丁二醛水溶液，搅拌30分钟使之分散均匀，停止搅拌，将装有此混合液的烧杯置于60℃的水浴中处理2小时，随后将其取出，在搅拌下加入20ml10％NaOH水溶液，搅拌30分钟后再次放入水浴中交联，24小时后取出。过滤掉油性液体后再用氯仿清洗三次，再次过滤后用酒精抽提48小时，然后在烘箱中于60℃下烘干，得到组成纯壳聚糖的球形微支架材料。微支架颜色呈褐色，经光学显微镜和电子扫描显微镜观察以及粒度分析仪测量，所获得的微支架材料球形良好，球径主要分布在50～180mm范围内，平均球径为110μm。将2g获得的微支架材料放入旋转生物反应器中，在密度为1×106的骨髓基质细胞悬液中进行培养，2周后观察发现微支架表面有大量细胞黏附生长。
实施例3
壳聚糖/β-TCP复合微支架材料，质量组成为：50％壳聚糖+50％β-TCP。将2g的壳聚糖粉在转速为500转/分钟的搅拌下溶于60ml2％的乙酸水溶液中，30分钟后形成透明均一的溶液；称量2gβ-TCP粉，在同样的搅拌速度下分散于壳聚糖溶液中，然后加入4ml1.5％的戊二醛溶液，搅拌8分钟后，将此溶液倾倒于150ml的食用油中，以500转/分钟的速度搅拌1小时后加入10ml的Span 80，继续搅拌3小时，然后加入6ml30％的戊二醛水溶液，搅拌30分钟使之分散均匀，停止搅拌，将装有此混合液的烧杯置于45℃的水溶中处理1小时，随后将其取出，在搅拌下加入20ml15％NaOH水溶液，搅拌30分钟后再次放入水浴中交联，10小时后取出。过滤掉油性液体后用氯仿清洗三次，再次过滤后用酒精抽提48小时，然后在烘箱中于60℃下烘干，得到壳聚糖/β-TCP复合微支架材料。再经过40目筛子和100目筛子的筛分后，获得分布更为集中的微支架材料。观察发现，所获得微支架颜色呈黄褐色，经光学显微镜和电子扫描显微镜观察以及粒度分析仪测量，所获得的微支架材料球形良好，球径主要分布在100～350μm范围内，平均球径为189μm。细胞培养实验表明获得的壳聚糖微支架材料具有良好的细胞相容性，成骨细胞可在其表面黏附、生长和增殖。
实施例4
壳聚糖/β-TCP复合微支架材料，质量组成为：20％壳聚糖+80％β-TCP。将2g的壳聚糖粉在转速为400转/分钟的搅拌下溶于70ml2％的乙酸水溶液中，30分钟后形成透明均一的溶液；称量8gβ-TCP粉，在同样的搅拌速度下分散于壳聚糖溶液中，然后加入6ml1.5％的乙二醛溶液，搅拌10分钟后，将此溶液倾倒于200ml的液体石蜡中，以600转/分钟的速度搅拌2小时后加入10ml的Span 80，继续搅拌3小时，然后加入8ml25％的乙二醛水溶液，搅拌30分钟使之分散均匀，停止搅拌，将装有此混合液的烧杯置于50℃的水浴中处理1小时，随后将其取出，在搅拌下加入25ml10％NaOH水溶液，搅拌30分钟后再次放入水浴中交联，10小时后取出。过滤掉油性液体后用氯仿清洗三次，再次过滤后用酒精抽提24小时，然后在烘箱中于60℃下烘干，得到壳聚糖/β-TCP复合微支架材料。再经过40目筛子和100目筛子的筛分后，获得分布更为集中的微支架材料。观察发现，所获得微支架颜色呈浅褐色，经光学显微镜和电子扫描显微镜观察以及粒度分析仪测量，所获得的微支架材料球形良好，球径主要分布在160～400μm范围内，平均球径为210μm。细胞培养实验表明获得的壳聚糖微支架材料具有良好的细胞相容性，成骨细胞可在其表面黏附、生长和增殖。
实施例5
壳聚糖/β-TCP复合微支架材料，质量组成为：14％壳聚糖+86％β-TCP。将2g的壳聚糖粉在转速为400转/分钟的搅拌下溶于70ml2％的乙酸水溶液中，30分钟后形成透明均一的溶液；称量12gβ-TCP粉，在同样的搅拌速度下分散于壳聚糖溶液中，然后加入10ml1.0％的戊二醛溶液，搅拌10分钟后，将此溶液倾倒于200ml的液体石蜡中，以700转/分钟的速度搅拌2小时后加入15ml的Span 80，继续搅拌5小时，然后加入12ml25％的戊二醛水溶液，搅拌30分钟使之分散均匀，停止搅拌，将装有此混合液的烧杯置于50℃的水浴中处理1小时，随后将其取出，在搅拌下加入30ml10％NaOH水溶液，搅拌30分钟后再次放入水浴中交联，10小时后取出。过滤掉油性液体后用氯仿清洗三次，再次过滤后用酒精抽提12小时，然后在烘箱中于60℃下烘干，得到壳聚糖/β-TCP复合微支架材料。再经过40目筛子和100目筛子的筛分后，获得分布更为集中的微支架材料。观察发现，所获得微支架颜色接近白色，经光学显微镜和电子扫描显微镜观察以及粒度分析仪测量，所获得的微支架材料球形良好，球径主要分布在200～400μm范围内，平均球径为345μm。细胞培养实验表明获得的壳聚糖微支架材料具有良好的细胞相容性，成骨细胞可在其表面黏附、生长和增殖。
实施例6
β-TCP无机微支架材料。将实施例5中获得的壳聚糖/β-TCP复合微球放入烧结炉中，在空气气氛下先以3℃/分钟的升温速率缓慢升温至600℃，保温4小时进行脱脂处理；然后继续以5℃/分钟的升温速率升至1250℃，保温3小时进行烧结，保温结束后自然冷却至室温。得到的多孔β-TCP无机微支架材料依然保持球形，存在少量破碎现象，球径主要分布在130～330μm范围内，平均球径为162μm，XRD结果证明材料中仅存在β-TCP相，经电子扫描显微镜观察微支架表面和内部均为多孔结构，其中内部的孔隙率大于外表面孔隙率，压汞仪测试所制备的微支架材料孔隙率为58.8％，比表面积为0.9m2/g，表观密度为1.80g/cm3。细胞培养实验表明获得的壳聚糖微支架材料具有良好的细胞相容性，成骨细胞可在其表面黏附、生长和增殖。将细胞培养后的微支架材料植入新西兰白兔体内股缺损处，4周后取出观察发现微球周围有骨组织生成，表明所制备的微支架材料具有较强的成骨能力。
实施例7
β-TCP无机微支架材料。将实施例6中获得的壳聚糖/β-TCP复合微球放入烧结炉中，在空气气氛下先以5℃/分钟的升温速率缓慢升温至600℃，保温2小时进行脱脂处理；然后继续以15℃/分钟的升温速率升至1150℃，保温2小时进行烧结，保温结束后自然冷却至室温。得到的多孔β-TCP无机微支架材料形状仍然保持球形，几乎无破碎现象，球径主要分布在160～330μm范围内，平均球径为260μm，XRD结果证明材料中仅存在β-TCP相，经电子扫描显微镜观察微支架表面和内部均为多孔结构，其中内部的孔隙率大于外表面孔隙率，压汞仪测试其平均孔隙率为48.0％，比表面积为0.2m2/g，表观密度为2.45g/cm3。细胞培养实验表明获得的壳聚糖微支架材料具有良好的细胞相容性，成骨细胞可在其表面黏附、生长和增殖。
Claims (8)
1、一种用于骨组织工程的微支架，其特征在于：该微支架的外形为球形，该球径在利于细胞在其表面黏附和生长的50～400μm范围内，多个微支架的平均球径为100～350μm。
2、如权利要求1所述的微支架，其特征在于：该微支架的材料选用壳聚糖或β-磷酸三钙之中的一种，或两种，各成分所占质量百分比为：
壳聚糖：0％，14～100％；
β-磷酸三钙：100％，86～0％。
3、一种制备如权利要求1所述微支架的方法，其特征在于：选用壳聚糖作微支架材料，包括以下步骤：
(1)将壳聚糖粉溶于浓度为1～3％的乙酸水溶液中，所述乙酸体积(ml)∶壳聚糖质量(g)＝(25～50)∶1；
(2)在步骤(1)获得的溶液中加入浓度为0.5～4％的二醛类有机试剂的交联剂水溶液，搅拌8～10分钟，交联剂的体积(ml)∶壳聚糖质量(g)＝(2～5)∶1；
(3)将步骤(2)获得的溶液倾倒于体积为步骤(1)所述乙酸水溶液体积的1.5～3倍的非挥发性油性液体分散介质中，以300～700转/分钟的速度搅拌1～2小时后，加入l/15倍分散介质体积的司班-80，继续以相同的速度搅拌2～5小时，形成乳液；
(4)在步骤(3)中获得的乳液中加入浓度为15～30％的二醛类有机试剂的交联剂水溶液，搅拌均匀后置于40～60℃的水浴中，0.5～2小时后取出并加入浓度为10～20％的NaOH溶液，搅拌0.5～1小时后再次放入水浴中处理5～24小时，进行交联；
(5)经氯仿清洗、过滤、乙醇抽提、干燥后得到球形壳聚糖微支架。
4、一种制备如权利要求1所述微支架的方法，其特征在于：选用壳聚糖和β-磷酸三钙作微支架材料，包括以下步骤：
(1)按壳聚糖∶β-磷酸三钙＝(14～100％)∶(86～0％)质量分数称量适量的壳聚糖粉，并将其溶于浓度为1～3％的乙酸水溶液中，所用乙酸体积(ml)∶壳聚糖质量(g)＝(25～50)∶1；
(2)按上述质量分数称相应量的β-磷酸三钙粉，然后将其加入步骤(1)中获得的溶液中，并形成均匀的浆料；
(3)在步骤(2)获得的浆料中加入浓度为0.5～4％的二醛类有机试剂的交联剂水溶液，搅拌8～10分钟，交联剂的体积(ml)∶壳聚糖质量(g)＝(2～5)∶1；
(4)将步骤(3)获得的浆料倾倒于1.5～3倍浆料体积的非挥发性油性液体分散介质中，以300～700转/分钟的速度搅拌1～2小时后，加入1/15倍分散介质体积的司班-80，继续以相同的速度搅拌2～5小时，形成乳液；
(5)在步骤(4)中获得的乳液中加入浓度为15～30％的二醛类有机试剂的交联剂水溶液，搅拌均匀后置于40～60℃的水浴中，0.5～2小时后取出并加入浓度为10～20％的NaOH溶液，搅拌0.5～1小时后再次放入水浴中处理5～24小时，进行交联；
(6)经氯仿清洗、过滤、乙醇抽提、干燥后得到球形壳聚糖和β-磷酸三钙复合微支架。
5、如权利要求4所述的方法，其特征在于：还包括：
(7)将步骤(6)得到的微球在空气气氛下，先以＜5℃/分钟的速度慢速升温至600℃，保温(2～4)小时进行脱脂处理，待壳聚糖有机物完全排尽后，以5～20℃/分钟的速率继续升温，至1150～1250℃，保温时间为1～3小时进行烧结，然后自然冷却至室温，得到β-磷酸三钙微支架。
6、根据权利要求3、4或5所述的制备方法，其特征在于：所述二醛类有机试剂选用戊二醛、丁二醛或乙二醛之一种。
7、根据权利要求3、4或5所述的制备方法，其特征在于：所述非挥发性油性液体选用液体石蜡或食用油之一种。
8、将权利要求1所述球形微支架作为增殖成骨细胞的微载体和在其表面种植成骨细胞并植入体内的组织工程支架材料的应用。
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