CN1882676A - 制备包括不饱和化合物的组合物的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及制备包括不饱和化合物、特别是多不饱和化合物的组合物的方法，包括通过使化合物与硅和/或铝衍生物接触来使其浓缩和纯化的步骤。本发明方法代表了一种能很好替代常用蒸馏法的方法，可联用或不联用色谱法，并能将极性副产物分离和移出。

Description

制备包括不饱和化合物的组合物的方法
本发明涉及制备包括不饱和化合物、特别是多不饱和化合物的组合物的方法，包括将所述化合物浓缩和提纯的步骤。
已知不饱和化合物、特别是多不饱和化合物很不稳定，因其自身双键的活性和易氧化性，故现象之一是易被大气媒介破坏，继而生成氧化副产物并诱发聚合反应。
在本发明方法得到的组合物所包括的绝大部分不稳定不饱和化合物中，可提及的是动物和植物来源的天然和非天然油及其化学改性处理的产物，像鱼油和种子油(甘油三酸酯)，脂肪酸和其水解过程得到的盐、其合成过程或酯交换过程得到烷基酯，以及它们的任何衍生物。
特别要提出的是衍生自ω-3系列多不饱和脂肪酸的化合物类，例如亚麻酸(ALA，C18:4ω-3全顺式)、廿碳五烯酸(EPA，C20:5ω-3全顺式)和廿二碳六烯酸(DHA，C22:6ω-3全顺式)，和衍生自ω-6系列多不饱和脂肪酸的化合物类，及其药物学和营养学可接受的衍生物，一般为它们的盐和C1-C3烷基酯。
所述衍生物中，特别令人感兴趣的是以单独或混合物形式、甚或其中存在其它少量ω-3系列化合物乙酯的EPA乙酯和/或DHA乙酯，因其可应用于制药领域和作为营养合剂。
通常要对含甘油酯形式脂肪酸的天然油进行一些诸如萃取、漂白、脱臭等标准处理。与大量饱和及单不饱和化合物混合的多不饱和化合物如上述酸通常是通过甘油酯的水解或酯交换反应被分离出来，并例如通过用尿素络合(complexing)低不饱和组分步骤或通过其它技术化学改性成衍生物的方法进行浓缩，若需要的话，之后再通过蒸馏法进行纯化，但是所有这些步骤会很严重地同时破坏多不饱和化合物的结构，导致形成大量的带极性结构的副产物，合并到天然油内先前存在的或衍生自环境污染剂的杂质中。
在不稳定因素中，要提及的是大气媒介，主要是空气中的氧气以及其它氧化剂、氧化催化剂如铜和铁、日光照射、水解剂等。实际上，还有很多在从天然物萃取这些不饱和化合物的步骤以及浓缩还有纯化步骤中使用的化学和物理试剂会诱发降解反应，形成氧化和聚合产物。加热的结果也会有很大的危害性，因此蒸馏过程-此时要弃去油底物中低沸点和高沸点馏分-也会引起其自身高度降解和形成聚合物残渣。
为部分减少此类问题，至少在生产过程的最后一步中要进行分子蒸馏，但因设备和管理费用问题及产能受限问题，使该方法仍有不足。在工业化的步骤中，还要采用密闭容器内储存，避免空气和日光接触及惰性气体条件的措施。还常常要添加抗氧剂如生育酚。
因此，极性降解衍生物是原料本身存在的或是在萃取、浓缩、纯化步骤及任何更进一步的化学或常规处理步骤中形成的。这些极性降解衍生物中，大部分具有复杂和尚未完全知道的结构，我们可以说出的有双键上的羟基衍生物、环氧化物和过氧化物，最后一类物质由于其具有导致动脉粥样硬化和诱变的活性而被认为对健康极具危害(例如参见Carroll KK，Cancer Res.1975；35，3374)。其它有代表性的生产过程副产物是一些具有复杂结构的低聚物和高聚物，它们衍生自所述双键经不同机理分子间反应的氧化产物。这些聚合产物代表最富含的副产物且可达到20-30％或更多的量。
源自环境且总是存在的、特别是在鱼油及其所有酯交换衍生物中的完全外来杂质代表性的有若干种毒素如黄曲霉毒素、烃类如苯并芘、杀虫剂如DDT、工业试剂如PCB和二英(McEwen FL，Stephenson GR，环境中杀虫剂的使用和意义，15章，纽约，Wiley出版社，1979，260-348)、金属离子和金属有机化合物如汞和甲基汞(Bolger PM，Schwetz BA，N Engl J Med 2002；347，1735)及许多其它海洋污染物，若作为食物和/或药物摄入的话，显然它们都会对健康有害。其它极性衍生物则是由三酸甘油酯或酯类水解得到的酸所组成。
为避免惯常食用的植物或动物油中存在太多外来物质和副产物，化学界数十年来强制控制一些规定指标如酸指数、过氧化物指数、碘指数、重金属如汞和铅的残留量及杀虫剂残留量、茴香胺指数等。
在新近开发了一些用作药物的极易氧化和降解的多不饱和脂肪酸衍生物后，现在认为适合进行色谱分析，不仅能测定出所谓的“气相色谱纯度”(实际上是一种表观检测值(每一组分的峰面积与色谱总面积之比))，甚至可比照纯标准得到“实际检测值”(绝对检测值)，还能据此对所测衍生物峰的绝对面积进行控制，换句话说，此技术能保证色谱柱中不会保留实质量的杂质，脱离仪器检测控制。
新欧洲药典2000(E.P.2000)在其“ω-3酸乙酯(ω-3多不饱和酸乙酯的混合物，典型代表为EPA和DHA)”专题中规定采用特殊的排出液相色谱法(即本领域周知的凝胶渗透法GPC)对氧化和聚合副产物(统称为“低聚物”，不能被气相色谱法检测到)进行直接控制。下文中将涉及这些按E.P.2000实施的特殊色谱方法。
回到本发明方法的不饱和物目标上来，其中只有少数是以高浓度在天然产物中发现并萃提出来，如来自橄榄油的油酸(单不饱和)；其它许多种为中等浓度，如紫草油中的花生四烯酸(多不饱和，ω-6)，和鱼油中的EPA和DHA(多不饱和，ω-3)，它们的含量最高为10-20％，从文献中可以很容易证明这一点。
通常是通过水解成酸或酯交换反应成酯的方法将萃取出的油(三酸甘油酯)进行加工，酸和酯可直接使用或是按本领域周知的方法进行化学改性来得到各种各样的衍生物。更常用的方法是在加工的第一步中将低浓度的多不饱和物进行部分浓缩，例如采用尿素络合并随之将饱和及单不饱和组分馏出/移出的方法，采用本领域技术人员熟知几十年的方法(参见Swern D，分离技术一尿素混合物，第三部分，“脂肪酸”题下，编辑KS Markley，Interscience出版社，纽约，1963；2309-2358页)，甚或采用蒸馏法。
进一步浓缩和最后纯化步骤通常可采用真空蒸馏法(会导致不稳定的不饱和结构发生严重热解)实施，或者采用分子蒸馏法(热降解现象确实有所减少但仍不能完全消除)实施，但这就意味着设备和设备管理费用昂贵且产能受限。
尿素分离法和分子蒸馏法是上述专题中所提出的针对基于EPA乙酯、DHA乙酯和其它少量ω-3系列组分的组合物的技术。其它偶尔采用的纯化技术包括超临界流体法、Craig反流色谱法和高压液相色谱法(HPLC)的萃取和纯化技术。
最相关的专利文献描述了上文已提及的各项技术，而在几乎所有情况下蒸馏步骤是浓缩和/或纯化过程的最后和最基本阶段。
例如US 4377526描述了EPA及其酯的纯化方法，包括用尿素处理，然后分馏。得到的EPA百分比高于70％，DHA含量为3-5％。
US 4554107和US 4623488描述了基于分子蒸馏技术的方法：富含EPA和DHA的鱼油，因实验条件剧烈故产率相当低(30％)。
US 5130061涉及粗鱼油经与乙醇和酸催化剂(H2SO4)的酯交换、硅胶色谱和分子蒸馏过程从中获得乙酯形式EPA和DHA的方法。蒸馏过程是该方法的基本步骤，用来除去EPA和DHA乙酯的杂质(浓度35-40％，实施例3)，和将它们的浓度从40-50％提高到80-90％(实施例4-8)以及将DHA乙酯浓度提高到90-96％(实施例9-10)。
另外，EP-B-0409903提出了一种方法，其中将动物和/或植物来源的油进行碱性水解并将所得酸进行一或多步分子蒸馏。该专利提及一些先有技术方法，基于使用尿素进行沉淀和选择性除去少量不饱和酸的方法(WO 87/03899，JP 57-187397)或是基于超临界流体萃取技术的方法(JP 60-214757，JP60-115698)。
下列专利中报告了更多色谱类方法：JP 61-291540使用了非极性多孔聚合物(苯乙烯-二乙烯基苯共聚物)构成的吸附树脂和含适当改性的亲水极性溶剂优选甲醇的洗脱液来将所需的多不饱和酸或其酯分离出来。
JP 61-037752使用了基于含单乙烯基与多乙烯基芳族单体共聚物的色谱方法。
JP 58-109444使用了适用于反相分配色谱的由硅胶或合成聚合物(优选十八烷基取代的)所制载体构成的色谱柱，和包括水、醇和其它溶剂的极性洗脱液。
最后，IT 1235879提出了一种方法，按照该方法，可以任意次序采用已知的酯交换、浓缩-优选用尿素处理法-和分子蒸馏技术，来获得EPA、DHA和少量ω-3系列组分(存在于天然鱼油中)的特定组合物。
就上述先有技术而言，除一些个别的气相色谱数据外，相信所得产物的真正绝对纯度永远也没有考虑在内。
为此，我们相信，有理由认为这些作者所提及的是简单或表观气相色谱纯度，因而-假定是无意的-这些方法会导致质量与预期质量相差甚远，且产物被杂质及污染剂且最主要被上文提及的降解反应(氧化/聚合)的极性产物所高度污染，这些降解反应的极性产物不能通过气相色谱检测，而只能通过排出液相色谱来检测，按照E.P.2000，它们简称为“低聚物”。
现已惊奇地发现制备包括不饱和化合物检测值高于50％(重)(根据上文说明，按绝对检测值考虑)的组合物的方法，其中起始不饱和化合物首先被浓缩成与最终不饱和化合物所要求检测值对应的气相色谱纯度，然后通过与硅和/或铝衍生物接触进行纯化。
本发明方法能够通过简单将不饱和化合物与硅和/或铝衍生物接触的方法来使其纯化，无需任何既不能提高不饱和化合物浓度也不能提高其纯度的更进一步处理步骤，可能是因为过程的极性副产物、聚合产物和其它杂质及污染物与上述硅和/或铝衍生物的结合能力很高的缘故。
不饱和化合物优选是多不饱和化合物，还优选组合物中低聚物杂质的含量低于30％(重)，特别是低于15％(重)。
在本说明书中，术语“低聚物杂质“的意思是还包括其它一些不能通过气相色谱检测的外来杂质。
多不饱和化合物更优选是ω-3和/或ω-6系列长链多不饱和脂肪酸，和/或它们的药物学和/或营养学可接受衍生物(包括含它们的甘油酯)，特别是这些长链多不饱和脂肪酸还含有单不饱和的和/或饱和的化合物。
按照优选方案，在组合物中的检测值高于50％(重)的ω-3系列长链多不饱和脂肪酸选自廿碳五烯酸(EPA，C20:5ω-3全顺式)和/或廿二碳六烯酸(DHA，C22:6ω-3全顺式)和/或它们的药物学和/或营养学可接受衍生物，而在组合物中的检测值低于50％(重)的ω-3系列长链多不饱和脂肪酸选自C18:3ω-3和/或C18:4ω-3和/或C20:4ω-3和/或C21:5ω-3和/或C22:5ω-3酸和/或它们的药物学和/或营养学可接受衍生物。
长链多不饱和脂肪酸的衍生物优选自C1-C3烷基酯和/或甘油酯和/或它们与无机或有机碱形成的盐(钠、赖氨酸、精氨酸、胆硷盐等盐)，最优选的是乙酯。
按照另一个优选方案，EPA和/或DHA和/或它们的衍生物被浓缩到气相色谱纯度高于75％、尤其是高于80％、更优选高于85％且最优选高于90％(重)。
通过实施本发明方法得到的组合物中，还存在不等量的按上述E.P.2000专题所述的少量ω-3组分的乙酯，以及更有限量的ω-6单不饱和及饱和的乙酯。
特别地，该组合物中低聚物杂质(以及过程的其它副产物)含量低于2％、更优选低于1.5％、最优选低于1％(重)，按每种售卖产品所要求的分析规定值。
外来杂质，例如来自环境污染的杂质如重金属通常是按“每百万份所含份数”(ppm)的浓度来测定的，总是符合分析规定值特别是E.P.2000所规定值。本发明方法所得典型组合物的碘指数高于320，例如酸指数不高于2、过氧化物指数不高于20、茴香胺指数不高于20及重金属不高于10ppm、Hg和Pb不高于1ppm、杀虫剂不高于2ppm。
EPA与DHA和/或其衍生物间的比例优选在2∶1到1∶2之间、更优选在1.5∶1到0.9∶1之间。
EPA和/或其衍生物优选至少为40％(重)且通常的范围在40-60％之间，而DHA和/或其衍生物通常在25-50％之间范围且优选至少为34％(重)。
按照另一优选方案，EPA和DHA乙酯的检测值至少为80％(重)，EPA乙酯的检测值至少40％(重)且DHA的检测值至少34％(重)，总的ω-3酸乙酯的检测值至少90％(重)。EPA和DHA乙酯的检测值优选高于85％(重)。
本发明另一优选方案提供可有少量具有C20、C21、C22(或者还有C18)结构的ω-3组分(意指酸和/或其衍生物二者)以如IT 1235879所述的高于1％、优选高于3％(重)的量存在，或者如上述E.P.2000所报告的以总共(C18:3ω-3、C18:4ω-3、C20:4ω-3、C21:5ω-3、C22:5ω-3)约10％的量存在。
在实施本发明方法时，起始不饱和化合物可通过一或多步分级尿素络合法进行浓缩，并且优选在纯化前将得到的浓缩不饱和化合物溶解于非质子的和/或非极性的和/或弱极性的溶剂中，溶剂特别选自正烷烃、异构烷烃或环烷烃。优选的溶剂中，可提及的是C5-C8烷烃如正己烷或环己烷。
按照一个优选方案，通过在搅拌条件下将浓缩的不饱和化合物与硅和/或铝衍生物分批接触的方法进行纯化，或者通过将浓缩的不饱和化合物滤过硅和/或铝衍生物的方法进行纯化。
纯化步骤优选在10-40℃、特别是20-25℃下进行，历时5分钟到24小时、特别是0.1-4小时，并且纯化过程最好是在黑暗和无氧条件下进行。
优选用于本发明方法的硅和/或铝衍生物一般具有任何粒度、孔隙度、等级、强度和种类，且选自硅胶；碱性、酸性和中性氧化铝；还有那些适合用作偶极相互作用为基础的吸附剂的衍生物例如这些衍生物的硅酸盐、铝酸盐和硅铝酸盐也可以考虑；特别地，硅和铝衍生物是Florisil和/或Chromosorbs和/或Zeolites。
按照另一优选方案，本发明方法包括纯化后将得到的不饱和化合物在低于溶剂沸点的温度和低于200mm Hg压力条件下进行浓缩，然后真空或惰性气流条件下蒸发至干。
还优选的是将通过本发明方法所得组合物包括在药物学和/或营养学可接受的介质和/或赋形剂和/或稀释剂中，组合物优选为软胶囊形式。
通过实施本发明方法得到的组合物可用于制备能避免和/或治疗和/或预防心血管病多种危险因素如高甘油三酯血症、高胆甾醇血和高血压和心血管疾病如心律不齐、心房和/或心室纤颤、代偿失调和心功能不全的药物制剂，用来一级和二级预防心源性猝死和二级预防血管再闭塞，用于治疗各种已知对EPA和/或DHA或其衍生物敏感的其它病症如自体免疫疾病、溃疡性结肠炎、肿瘤病、神经系统疾病、细胞老化、脑梗塞、缺血性疾病、牛皮癣。
众所周知，本组合物可用来制备适合局部用药、胃肠外用药和优选制成软胶囊口服的药物和/或营养制剂，且含有250-1500mg、优选300-1000mg的实施本发明方法所得组合物。
在上文所规定的限制范围内，通过本发明方法，可得到任何其它已知的包括检测值高于50％不饱和化合物的组合物，使这些化合物可用于所有如先有技术所述的药物和辅助药物用途(营养品等)。
按照本发明，原料必须示出最低含量高于50％(按气相色谱纯度测定)且一般要等于对最终化合物所要求的检测值。本领域普通技术人员通过文献已知的方法制备这类原料是很容易办到的事。例如，按照已知方法(Lehman LW，Gauglitz EJ jr.，Journal Am.Oil Chem.Soc.，41，533，1964)，通过将某些鱼油(沙丁鱼、鲭鱼、鳕鱼、鲑鱼油等，例如EPA含量约12-18％(重)且DHA含量约8-12％(重))的三酸甘油酯与乙醇和催化剂、优选碱性催化剂直接进行酯交换反应的方法能很容易地得到EPA和DHA乙酯的组合物。
从这些EPA和DHA乙酯总含量为20-30％(重)的组合物开始，本领域普通技术人员按照本领域已知的方法(例如Abu-Nasr AM等人，Journal Am.Oil Chem.Soc.，31，16，1954)，例如通过尿素络合，然后分离并弃去饱和及单饱和组分，或是通过其它方法，可以很容易地得到高含量如含量高于50％(重)的组合物。
在上述情形中，通过变动尿素量和其它实验参数，可以得到EPA和DHA乙酯高于50％甚或75、80、85、90％的组合物，所有这些组合物都可用作本发明方法用途的原料，如上所述，甚至可只以一步法进行操作。无论如何，EPA和DHA乙酯总浓度为50％(重)的组合物已可从市场购得，可通过尿素络合、弃去饱和及单饱和酯并在制备过程更进一步的步骤中富集多不饱和酯的方法，再将它们按需要浓缩到75、80、85、90％(重)或更高(特别是当包括少量ω-3组分时)。
值得注意的是，上面所报告的浓度代表组合物的“表观检测值”，实际上，这些组合物若是按文献方法、特别是通过尿素络合法浓缩且未经历另外小心纯化阶段而得到的，则毫无疑问地会被大量上文定义的“低聚物”和其它杂质所污染。如上所述，低聚物的含量有时会在1-30％范围，取决于所经历的工艺过程和工作精确性：仅就存在低聚物以及表观检测值高于50％这一点上，就可以将它们作为起始不饱和化合物应用于本发明方法的纯化和浓缩两个步骤中。因此，1-2％间较低范围的低聚物是起始和最终不饱和化合物的特征，取决于所希望的规定值。
在上述例如基于EPA和DHA乙酯的组合物的情形中，上述起始材料可直接以油状物使用，或者优选溶解于3-50倍体积、通常5-20倍体积的如上所述的非质子和/或非极性和/或弱极性溶剂中。
按照本发明方法，随后优选将不饱和化合物与一种无机底物如硅和铝衍生物接触和/或经其滤过，使得所含极性副产物与无机底物发生化学物理键合，并将它们分离和移出。
换句话说，不饱和化合物的极性衍生物、特别是氧化极性衍生物和且主要是齐聚和聚合类衍生物能够与无机底物-一般以硅和铝衍生物为代表-相互作用并键合(结合)得以出乎意料地获得不含有害副产物的组合物。
因此，可以认为本发明方法代表了一种能替代常用蒸馏法的好方法，可联用或不联用色谱法。
采用所谓的“间歇法”也是可行的，在此情况下，优选在缓慢搅拌条件下，或更优选滤过硅或铝衍生物，流速则取决于要处理的体积，但对本方法而言通常不做严格规定。
本发明方法不能定义为“色谱法”，因为既不需要级分(fractioniug)也不需要弃去外来物质，极性和/或低聚物和/或外来副产物的键合具有很强的选择性和专一性。在本发明方法中，与硅和铝衍生物接触的溶液收集后为一种独特溶液，其气相色谱组成仍基本不变，这与蒸馏过程有所不同。然后，按照本领域普通技术人员已知的方法，优选在低于溶剂沸点的温度和低于200mmHg的压力下将此溶液蒸发至干，并确保除去任何残留溶剂，真空或惰性气体条件下，混入油状物，直到含量低于所用说明书中提供的量或者商用或药典所规定的量为止。
这样得到的组合物具有所需的绝对纯度，不需要任何更进一步纯化步骤且本身可用于所有适应症和先有技术已知的药物及辅助药物制剂。
因此，按照本发明方法得到的组合物、特别是EPA和DHA乙酯的组合物与分子蒸馏法得到的商品和已知用于药物、辅助药物、营养品、食物等的产品如部分已提及的EP-B-0292846、EP-B-0409903、IT1235879、EP-B-1152755中所述的和E.P.2000的专题中提到的产物一致。因此，可如IT 1235879所披露的例如用于治疗和预防心血管病多种危险因素，如EP-B-1152755所述的用于二级预防已梗塞患者的心血管事件、死亡率和猝死，用于预防和治疗其它心脏病，以及用于一级心脏预防，用于心律不齐及心房和/或心室纤颤治疗，和用于其它所有已知的治疗和非治疗适应症(营养品，食物等)。
下列实施例用来说明而非限定本发明。
实施例1
于70℃和氮气条件下，将15g尿素溶解于150ml乙醇中。搅拌并避光条件下，加入10g EPA和DHA乙酯的组合物(按EP-B-0255824公开的内容，纯度54.2％，和检测值51.0％(GC)，通过与乙醇和NaOH进行酯交换反应，然后在EtOH/EtOH 95°中用尿素络合的方法得到)。将混合物维持搅拌15分钟，使其冷却。一夜后，滤去沉淀物，在50mmHg压力下经蒸馏将溶液浓缩到较少体积。残留物用氯化钠溶液处理并用正己烷萃取。有机相用硫酸钠干燥后，蒸发至干，得到EPA和DHA乙酯的组合物，纯度85.6％，检测值77.3％(GC)。
实施例2
将5g按实施例1得到的EPA和DHA乙酯的组合物溶解于65ml己烷中，并在6.5g硅胶上滤过。于60℃和50mmHg压力下将得到的溶液蒸发至干，在惰性气氛和避光条件下进行操作。得到EPA和DHA乙酯的组合物，检测值85.4％(46.6％EPA，38.8％DHA，GC)，酸指数＜1，过氧化物指数＜2，重金属，Hg，Pb＜1ppm。
实施例3
5g检测值为76.5％(GC)的EPA和DHA乙酯的组合物按实施例2进行处理，采用间歇工艺并轻微搅拌。
最后得到EPA和DHA乙酯的组合物，检测值82.3％(GC)，按E.P.2000的规定，ω-3乙酯的总检测值91.6％。
实施例4
将5g实施例1所用的组合物按实施例3的步骤进行处理，最后得到检测值53.8％(GC)的组合物。

Claims (38)

1.制备包括检测值高于50％(重)的不饱和化合物的组合物的方法，其中起始不饱和化合物首先被浓缩成与最终不饱和化合物所要求检测值对应的气相色谱纯度，然后通过与硅和/或铝衍生物接触进行纯化。
2.按权利要求1的方法，其中不饱和化合物是多不饱和化合物。
3.按权利要求1或2的方法，其中组合物中低聚物杂质的含量低于30％(重)。
4.按前述权利要求任一项的方法，其中所述不饱和化合物的低聚物杂质的含量低于15％(重)。
5.按权利要求2-4任一项的方法，其中多不饱和化合物是ω-3和/或ω-6系列长链多不饱和脂肪酸和/或它们的药物学和/或营养学可接受衍生物。
6.按前述权利要求的方法，其中ω-3和/或ω-6系列长链多不饱和脂肪酸和/或它们的药物学和/或营养学可接受衍生物含有单不饱和的和/或饱和的化合物。
7.按权利要求5或6的方法，其中在组合物中的检测值高于50％(重)的ω-3系列长链多不饱和脂肪酸选自廿碳五烯酸(EPA，C20:5ω-3全顺式)和/或廿二碳六烯酸(DHA，C22:6ω-3全顺式)和/或它们的药物学和/或营养学可接受衍生物，而在组合物中的检测值低于50％(重)的ω-3系列长链多不饱和脂肪酸选自C18:3ω-3和/或C18:4ω-3和/或C20:4ω-3和/或C21:5ω-3和/或C22:5ω-3酸和/或它们的药物学和/或营养学可接受衍生物。
8.按权利要求5-7任一项的方法，其中长链多不饱和脂肪酸的衍生物选自C1-C3烷基酯和/或甘油酯和/或它们与无机或有机碱形成的盐。
9.按前述权利要求的方法，其中C1-C3烷基酯是乙酯。
10.按权利要求7-9任一项的方法，其中EPA和/或DHA和/或它们的衍生物被浓缩到气相色谱纯度高于75％(重)。
11.按权利要求7-10任一项的方法，其中EPA和/或DHA和/或它们的衍生物被浓缩到气相色谱纯度高于80％(重)。
12.按权利要求7-11任一项的方法，其中EPA和/或DHA和/或它们的衍生物被浓缩到气相色谱纯度高于85％(重)。
13.按权利要求7-12任一项的方法，其中EPA和/或DHA和/或它们的衍生物被浓缩到气相色谱纯度高于90％(重)。
14.按权利要求7-13任一项的方法，其中组合物的低聚物杂质含量低于2％(重)。
15.按权利要求7-14任一项的方法，其中组合物的低聚物杂质含量低于1.5％(重)。
16.按权利要求7-15任一项的方法，其中组合物的低聚物杂质含量低于1％(重)。
17.按权利要求7-16任一项的方法，其中EPA与DHA和/或其衍生物间的比例在2∶1到1∶2之间。
18.按权利要求7-17任一项的方法，其中EPA与DHA和/或其衍生物间的比例在1.5∶1到0.9∶1之间。
19.按权利要求7-18的方法，其中EPA和DHA的乙酯的检测值至少为80％(重)，EPA乙酯的检测值至少40％(重)且DHA的检测值至少34％(重)，总的ω-3酸乙酯的检测值至少90％(重)。
20.按权利要求7-19任一项的方法，其中EPA和DHA的乙酯的检测值高于85％(重)。
21.按权利要求7-20任一项的方法，其中C20、C21、C22ω-3酸和/或其衍生物的含量高于1％(重)。
22.按权利要求7-21任一项的方法，其中C20、C21、C22ω-3酸和/或其衍生物的含量高于3％(重)。
23.按前述权利要求任一项的方法，其中起始不饱和化合物可通过一步分级尿素络合法进行浓缩。
24.按权利要求1-22任一项的方法，其中起始不饱和化合物可通过两步分级尿素络合法进行浓缩。
25.按前述权利要求任一项的方法，其中在纯化前将浓缩的不饱和化合物溶解于非质子的和/或非极性的和/或弱极性的溶剂中。
26.按前述权利要求的方法，其中溶剂选自正烷烃、异构烷烃或环烷烃。
27.按权利要求25或26的方法，其中溶剂是C5-C8烷烃。
28.按权利要求25-27任一项的方法，其中溶剂是正己烷或环己烷。
29.按前述权利要求任一项的方法，其中通过在搅拌条件下将浓缩的不饱和化合物与硅和/或铝衍生物间歇接触的方法进行纯化。
30.按权利要求1-28任一项的方法，其中通过将浓缩的不饱和化合物滤过硅和/或铝衍生物的方法进行纯化。
31.按前述权利要求任一项的方法，其中纯化在10-40℃下进行5分钟到24小时之间的时间。
32.按前述权利要求任一项的方法，其中纯化在20-25℃下进行0.1-4小时。
33.按前述权利要求任一项的方法，其中纯化在黑暗和无氧条件下进行。
34.按前述权利要求任一项的方法，其中硅和/或铝衍生物选自硅胶；碱性、酸性和中性氧化铝；及其硅酸盐、铝酸盐及硅铝酸盐。
35.按前述权利要求任一项的方法，其中硅和铝衍生物是Florisil和/或Chromosorbs和/或Zeolites。
36.按前述权利要求任一项的方法，其包括纯化后将得到的不饱和化合物在低于溶剂沸点的温度和低于200mm Hg压力条件下进行浓缩，然后真空或惰性气流条件下蒸发至干。
37.按前述权利要求任一项的方法，其包括将组合物包括在药物学和/或营养学可接受的介质和/或赋形剂和/或稀释剂中。
38.按前述权利要求任一项的方法，其中组合物为软胶囊形式。
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