CN1863770B

CN1863770B - 具有杂环取代基的环胺base-1抑制剂

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Publication number: CN1863770B
Application number: CN2004800290969A
Authority: CN
Inventors: J·N·卡明; Y·黄; G·李; U·伊泽尔洛; A·史丹佛德; C·史翠克兰德; J·H·佛吉特; 吴尤珅; 潘嘉平; T·郭; D·W·霍布斯; T·X·H·乐; J·F·罗利
Original assignee: Pharmacopeia Inc; Schering Corp
Current assignee: Merck Sharp and Dohme LLC; Pharmacopeia LLC
Priority date: 2003-08-08
Filing date: 2004-08-04
Publication date: 2011-05-25
Anticipated expiration: 2024-08-04
Also published as: ES2308247T3; MXPA06001558A; CA2534672A1; US7598250B2; US20050043290A1; US20090312341A1; CN1863770A; KR20060056376A; JP2007501803A; WO2005014540A1; JP4472700B2; DE602004015476D1; TW200524910A; PE20050354A1; ATE402921T1; EP1660447B1; ZA200601101B; US7910590B2; IL173534A0; AU2004263532A1

Abstract

本发明公开式(I)结构的新化合物或其药学上可接受的的盐或溶剂化物，其中R¹为式(I)，X为-O-、-C(R¹⁴)₂-或-N(R)-；Z为-C(R¹⁴)₂-或-N(R)-；t为0、1、2或3；各R和R²为H、烷基、环烷基、杂环烷基、环烷基烷基、芳基、杂芳基、杂环烷基、芳烷基、杂芳烷基、杂环烷基烷基、烯基或炔基；各R¹⁴为H、烷基、烯基、炔基、卤素、-CN、卤代烷基、环烷基、环烷基烷基、芳基、杂芳基、杂环烷基、芳烷基、杂芳烷基、杂环烷基烷基、-OR³⁵、-N(R²⁴)(R²⁵)及-SR³⁵；R⁴¹为烷基、环烷基、-SO₂(烷基)、-C(O)-烷基、-C(O)-环烷基或-烷基-NH-C(O)CH₃；其余的变量如在说明书中的定义。还公开了含有式(I)化合物的药用组合物及治疗认知或神经退化性疾病的方法。还公开了含有与治疗认知或神经退化性疾病的其它药物联合使用的式(I)化合物的药用组合物及其治疗方法。

Description

具有杂环取代基的环胺BASE-1抑制剂

技术领域

本发明涉及具有杂环取代基的取代的环胺BACE-1抑制剂、含有该化合物的药用组合物及其治疗阿尔茨海默氏病的用途。

背景技术

阿兹海默症(AD)是一种渐进的神经退化性疾病，其最终具有致命性。疾病的发展伴有记忆、推理、适应性(orientation)及判断力等相关认知功能的逐渐丧失。行为的改变包括错乱、忧郁及攻击性，且当疾病加重质更加明显。相信该认知及行为的功能障碍均由海马回及大脑皮层中神经元功能改变及神经元丧失所致。目前现有的AD治疗为治标剂，且在其改善认知及行为障碍的同时，这些治标剂无法防止疾病的恶化。因此需要一种医药治疗AD以阻止疾病恶化。

AD的病理标记为胞外β-淀粉样蛋白(Aβ)斑块沉积及胞内有由不正常磷酸化的tau蛋白所组成的神经纤维缠结。患有AD的个体在已知为重要的记忆及认知的大脑区域中，具有特征性的Aβ沉积。相信Aβ为神经元细胞丧失及与认知和行为丧失有关等功能障碍的基本致病因子。淀粉样蛋白斑块主要由含有40-42个氨基酸残基的Aβ胜肽所组成，其衍生自淀粉样前体蛋白(APP)加工过程。APP通过多种不同蛋白酶活性来加工。Aβ肽通过β-分泌酶在Aβ的N-末端的对应位置上，及通过γ-分泌酶活性在C-末端将APP裂解来产生。APP也可通过α-分泌酶活性来裂解，产生称为可溶性APP的分泌性、非淀粉样蛋白生成性片段。

称为BACE-1的门冬氨酰蛋白酶已鉴定为β-分泌酶，它负责在与Aβ肽的N-末端相相应的位置上裂解APP。

有大量的生化及基因上的证据支持Aβ在AD的病因中起主要作用。例如，Aβ已显示在活外及当注射入齿科动物的脑内时，对神经元细胞具有毒性。而且，已知早发性阿尔茨海默氏病的遗传形式存在于完整定义的APP或早老素(presenilins)的突变中。这些突变促进了Aβ的产生并视为AD的致病因素。

因为β-分泌酶活性而形成Aβ肽，所以要抑制BACE-1酶应抑制Aβ肽的形成。因此抑制BACE-1为一种治疗因Aβ斑块沉积所引起的AD及其它认知及神经退化性疾病的方法。

取代的胺BACE-1抑制剂公开于WO 02/02505、WO 02/02506、WO 02/02512、WP 02/02518及WO 02/02520中。含有(1-氨基-2-羟基-2-杂环基)乙基部分的肾素抑制剂公开于WO 89/03842中。WO02/088101公开了BACE抑制剂，其官能团被描述为含有四个疏水性部分，及一系列的化合物中优选为含有杂环基或杂芳基部分的化合物。

发明概述

本发明涉及具有式I结构的化合物

或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中

R¹为

X为-O-、-C(R¹⁴)₂-或-N(R)-；

Z为-C(R¹⁴)₂-或-N(R)-；

t为0、1、2或3；

各R独立选自H、烷基、环烷基、环烷基烷基、芳基、杂芳基、杂环烷基、芳烷基、杂芳烷基、杂环烷基烷基、烯基和炔基；

R²为H、烷基、环烷基、杂环烷基、环烷基烷基、杂环烷基烷基、芳基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、烯基或炔基；

R³为H或烷基；

R⁴为H或烷基；

R⁵为H、烷基、环烷基烷基、芳基或杂芳基；

各R¹⁴独立选自H、烷基、烯基、炔基、卤素、-CN、卤代烷基、环烷基、环烷基烷基、芳基、杂芳基、杂环烷基、芳烷基、杂芳烷基、杂环烷基烷基、-OR³⁵、-N(R²⁴)(R²⁵)及-SR³⁵；

R⁴¹为烷基、环烷基、-SO₂(烷基)、-C(O)-烷基、-C(O)-环烷基或-烷基-NH-C(O)CH₃；

且其中l、n、m、Y和R⁶、R⁷、R⁸、R⁹、R¹⁰、R¹¹、R¹²和R¹³如下列(A)至(C)组中的定义：

(A)当l为0-3；n为0-3；m为0或m为1且Y为-C(R³⁰)(R³¹)-；且l与n的总和为0-3时：

(i)R⁶、R⁷、R⁸、R⁹、R¹⁰和R¹¹独立选自H、烷基、环烷基、环烷基烷基、芳基、杂芳基、杂环烷基、芳烷基、杂芳烷基、杂环烷基烷基、烯基、炔基、卤素、-NO₂、-CN、-N(R¹⁵)(R¹⁶)、-OR¹⁷、-SR¹⁷、-C(O)R¹⁸、-N(R¹⁵)-C(O)R¹⁷、-C(O)OR¹⁷、-C(O)N(R¹⁵)(R¹⁶)、-O-C(O)R¹⁷及-S(O)_1-2R¹⁸；及

R¹²和R¹³独立选自H、烷基、环烷基、环烷基烷基、芳基、杂芳基、杂环烷基、芳烷基、杂芳烷基、杂环烷基烷基、烯基、炔基、-C(O)R¹⁸及-C(O)OR¹⁷；

或(ii)R⁷和R⁹与它们连接的环碳共同形成稠合环烷基或稠合杂环烷基，且R⁶、R⁸、R¹⁰、R¹¹、R¹²和R¹³如(A)(i)中的定义；或R¹⁰和R¹¹与它们连接的环碳共同形成-C(O)-；或R¹²和R¹³与它们连接的环碳共同形成-C(O)-；

或(iii)R⁶和R⁷与它们连接的环碳共同形成-C(＝O)-，且R⁸、R⁹、R¹⁰、R¹¹、R¹²和R¹³如(A)(i)中的定义；

或(iv)R⁸和R⁹与它们连接的环碳共同形成-C(＝O)-，且R⁶、R⁷、R¹⁰、R¹¹、R¹²和R¹³如(A)(i)中的定义；

(B)当l为1；n为0-2；且m为0时：

R⁶和R⁸与它们连接的环碳共同形成稠合芳基或稠合杂芳基，R⁷和R⁹形成一个键，且R¹⁰、R¹¹、R¹²和R¹³如(A)(i)中的定义；

(C)当l为0-3；n为0-3；m为1且Y为-O-、-NR¹⁹-、-S-、-SO-或-SO₂-；且l和n的总和为0-3时：

R⁶、R⁷、R⁸、R⁹、R¹²和R¹³独立选自H、烷基、环烷基、环烷基烷基、芳基、杂芳基、杂环烷基、芳烷基、杂芳烷基、杂环烷基烷基、烯基、炔基、-C(O)N(R¹⁵)(R¹⁶)、-C(O)R¹⁸、-C(O)OR¹⁷及-O-C(O)R¹⁷；且R¹⁰和R¹¹如(A)(i)中的定义，或R¹⁰和R¹¹与它们连接的环碳共同形成-C(O)-；或R¹²和R¹³与它们连接的环碳共同形成-C(O)-；或当Y为-O-或-NR¹⁹-时，R⁶和R⁷与它们连接的环碳共同形成-C(O)-；或当Y为-O-或-NR¹⁹-时，R⁸和R⁹与它们连接的环碳共同形成-C(O)-；

其中R¹⁵为H或烷基；

R¹⁶为H、烷基、环烷基、环烷基烷基、芳基、杂芳基、杂环烷基、芳烷基、杂芳烷基、杂环烷基烷基、烯基或炔基；

或R¹⁵和R¹⁶与它们连接的氮形成杂环烷基环；

R¹⁷为H、烷基、环烷基、芳基、杂芳基、环烷基烷基、芳烷基、杂芳烷基、杂环烷基、杂环烷基烷基、烯基或炔基；

R¹⁸为H、烷基、环烷基、芳基、杂芳基、环烷基烷基、芳烷基、杂芳烷基、杂环烷基、杂环烷基烷基、烯基、炔基或-N(R²⁴)(R²⁵)；

R¹⁹为H、烷基、环烷基、环烷基烷基、芳基、杂芳基、杂环烷基、芳烷基、杂芳烷基、杂环烷基烷基、-COR¹⁸、-C(O)OR⁴⁰、-SOR¹⁸、-SO₂R¹⁸或-CN；

R²⁴和R²⁵独立选自H、烷基、环烷基、环烷基烷基、芳基、杂芳基、杂环烷基、芳烷基、杂芳烷基、杂环烷基烷基、烯基和炔基；

或R²⁴和R²⁵与它们连接的氮原子共同形成3-7元杂环烷基环；

R³⁰为H、烷基、环烷基、环烷基烷基、芳基、杂芳基、杂环烷基、芳烷基、杂芳烷基、杂环烷基烷基、烯基、炔基、卤素、-NO₂、-CN、-N(R¹⁵)(R¹⁶)、-OR¹⁷、-SR¹⁷、-C(O)R¹⁸、-N(R¹⁵)-C(O)R¹⁷、-C(O)OR¹⁷、-C(O)N(R¹⁵)(R¹⁶)、-O-C(O)R¹⁷或-S(O)_1-2R¹⁸；

R³¹为H或烷基；

且其中在R、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R⁹、R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³、R¹⁴、R¹⁵、R¹⁶、R¹⁷、R¹⁸、R¹⁹、R²⁴、R²⁵和R³⁰中的烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环烷基、杂环烷基烷基、芳基、芳烷基、杂芳基、杂芳烷基、烯基和炔基各自为未取代的或由1至5个独立选自卤素、烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环烷基、杂环烷基烷基、芳基、芳烷基、杂芳基、杂芳烷基、-NO₂、-CN、卤代烷基、卤代烷氧基、-N(R³³)(R³⁴)、-NH(环烷基)、酰氧基、-OR³⁵、-SR³⁵-C(O)R³⁶、-C(O)OR³⁵、-PO(OR³⁵)₂、-NR³⁵C(O)R³⁶、-NR³⁵C(O)OR³⁹、-NR³⁵S(O)_0-2R³⁹及-S(O)_0-2R³⁹的R³²基团取代；或环烷基、环烷基烷基、杂环烷基或杂环烷基烷基中相同环碳原子上的两个R³²基团共同形成＝O；

R³³和R³⁴独立选自H及烷基；

R³⁵为H、烷基、环烷基、芳基、杂芳基、环烷基烷基、芳烷基、杂芳烷基、杂环烷基、杂环烷基烷基、烯基或炔基；

R³⁶为H、烷基、环烷基、芳基、杂芳基、环烷基烷基、芳烷基、杂芳烷基、杂环烷基、杂环烷基烷基、烯基、炔基或-N(R³⁷)(R³⁸)；

R³⁷和R³⁸独立选自H、烷基、环烷基、环烷基烷基、芳基、杂芳基、杂环烷基、芳烷基、杂芳烷基、杂环烷基烷基、烯基和炔基；

或R³⁷和R³⁸与它们连接的氮原子共同形成3-7元杂环烷基环；

R³⁹为烷基、芳基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、杂环烷基、杂环烷基烷基、烯基或炔基；及

R⁴⁰为烷基、环烷基、芳基、杂芳基、环烷基烷基、芳烷基、杂芳烷基、杂环烷基、杂环烷基烷基、烯基或炔基。

在另一方面，本发明涉及含有至少一种式I化合物及药学上可接受的载体的药用组合物。

在另一方面，本发明包括抑制BACE-1的方法，该方法包括给予需要此种治疗的患者至少一种式I化合物。还要求抑制β-淀粉样蛋白斑块在神经组织(例如脑)上或其周围形成，或形成和沉积的方法，该方法包括给予需要此种治疗的患者至少一种式I化合物。

更具体地说，本发明包括治疗认知或神经退化性疾病的方法，该方法包括给予需要此种治疗的患者至少一种式I化合物。特别是，本发明包括治疗阿尔茨海默氏病的方法，该方法包括给予需要此种治疗的患者至少一种式I化合物。

另一方面，本发明包括治疗认知或神经退化性疾病的方法，该方法包括将至少一种式I化合物与至少一种选自非式I化合物的β-分泌酶抑制剂、HMG-CoA还原酶抑制剂、γ-分泌酶抑制剂、非甾体抗炎药、N-甲基-D-门冬氨酸受体拮抗剂、胆碱酯酶抑制剂或抗-淀粉样蛋白抗体的药物联合给予需要此种治疗的患者。

在最后一个方面，本发明涉及一种联合用药的药剂盒，在所述药剂盒中包括在单一包装中的各分开的容器中的药用组合物，其中一个容器包含在药学上可接受的载体中的式I化合物，第二个容器包含在药学上可接受的载体中的非式I化合物的β-分泌酶抑制剂、HMG-CoA还原酶抑制剂、γ-分泌酶抑制剂、非甾体抗炎药、N-甲基-D-门冬氨酸受体拮抗剂、胆碱酯酶抑制剂和抗-淀粉样蛋白抗体，其联合的量为治疗认知性疾病或神经退化性疾病(例如阿尔茨海默氏病)的有效量。

发明详述

对于上述式I化合物，优选的本发明化合物为其中R³、R⁴和R⁵为氢且R²为芳烷基、烷基或环烷基烷基的化合物；更优选的化合物为其中R²为任选取代的苄基，特别是二氟苄基的化合物。

式I化合物中R¹部分优选选自

R¹优选为(1)，其中t为1且X为-C(R¹⁴)₂-或-N(R)-的化合物为特别优选的。

R¹的其它优选实施方案如下：

(1a)：

其中R优选为烷基、任选取代的芳烷基、烯基、环烷基烷基、烷氧烷基、羟烷基、氨基烷基或杂芳烷基，且R¹⁴优选为氢、烷基、烯基、环烷基或苄基。当R在结构(1a)中为芳烷基时，优选为任选取代的苄基或任选取代的苯乙基，其中任选的取代基为独立选自卤素、烷基、烷氧基和卤代烷基1或2 R³²基团。另外，当R在结构(1a)中为杂芳烷基时，杂芳基部分优选选自吡啶基、呋喃基、噻吩基或噻唑基，烷基部分优选为甲基。结构(1a)中的特别优选的R基团为烷基、烷氧烷基和环烷基烷基；结构(1a)中的特别优选的R¹⁴为氢和烷基，特别优选一个R¹⁴为氢，而另一个为氢或烷基。

(1b)

其中各R优选独立选自氢、烷基、烷氧烷基、环烷基烷基和苄基。

(1c)

其中R优选为氢、烷基、烷氧烷基、环烷基烷基或苄基。

(1d)

(1e)

其中R优选为氢、烷基、烷氧烷基、环烷基烷基或苄基。

(1f)

其中R⁴¹为-C(O)-烷基、-C(O)-环烷基或-SO₂-烷基。

其中R优选为氢、烷基、烷氧烷基、环烷基烷基或苄基，且R¹⁴优选为烷氧基。

当R¹为

或时，R优选为烷基、烷氧烷基、环烷基烷基或苄基，且R¹⁴优选为烷氧基。

优选的R³²取代基选自卤素、烷基、OH、烷氧基、烷氧烷基、烷氧基烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、CN、环烷基、环烷氧基、环烷基烷基、环烷基烷氧基、苯基和苄基。其中环烷基、环烷基烷基、杂环烷基或杂环烷基烷基基团中相同环碳上的两个R³²基团共同形成＝O的化合物也是优选的。

下列为本发明中其它优选实施方案：

1)式I化合物，其中R¹至R⁵如上述本发明概述中的定义，且R⁶至R¹³、l、m、n及Y如(A)中定义；

2)式I化合物，其中R¹至R⁵为上述定义中的优选定义，且R⁶至R¹³、l、m、n及Y如(A)中定义；

3)式I化合物，其中R¹至R⁵如上述本发明概述中的定义，且R⁶至R¹³、l、m、n及Y如(B)中定义；

4)式I化合物，其中R¹至R⁵为上述定义中的优选定义，且R⁶至R¹³、l、m、n及Y如(B)中定义；

5)式I化合物，其中R¹至R⁵如上述本发明概述中的定义，且R⁶至R¹³、l、m、n及Y如(C)中定义；

6)式I化合物，其中R¹至R⁵为上述定义中的优选定义，且R⁶至R¹³、l、m、n及Y如(C)中定义。

在另一实施方案中，优选为式I化合物，定义(A)，其中m为零；l与n总和为1或2；且R⁶、R⁷、R⁸、R⁹、R¹⁰、R¹¹、R¹²和R¹³各为氢；或其中R⁶、R⁷、R⁸、R⁹、R¹⁰、R¹¹和R¹³各为氢且R¹²为甲基；或其中R⁶、R⁷、R⁸、R⁹、R¹⁰和R¹¹各为氢且R¹²和R¹³的＝O；或其中R⁶、R⁷、R⁸、R⁹、R¹²和R¹³各为氢且R¹⁰和R¹¹为一起为＝O。

在另一实施方案中，优选为式I化合物，定义(A)，其中m为零；n为1且n与l总和为1或2；R⁶、R⁹、R¹⁰、R¹¹、R¹²和R¹³各为氢；且R⁷和R⁸如本发明概述中的定义。更优选为式I化合物，定义(A)，其中m为零；n为1且n与l总和为1或2；R⁶、R⁹、R¹⁰、R¹¹、R¹²和R¹³各为氢；且R⁷和R⁸独立选自H及-OR¹⁷，其中R¹⁷为H、烷基、芳基、杂芳基、芳烷基或杂芳烷基；优选对R¹⁷的定义为芳烷基，特别是苄基，其中芳基部分任选由一或二个独立选自卤素和烷氧基的取代基取代。

在另一实施方案中，优选为式I化合物，定义(A)，其中m为零；l为1；n为1或2；R⁷和R⁹形成一个稠合环烷基基团；且R⁶、R⁸、R¹⁰、R¹¹、R¹²和R¹³各为氢。优选R⁷和R⁹与它们连接的碳形成环丙基环。

在另一实施方案中，优选为式I化合物，定义(A)，其中m为1；Y为-C(R³⁰)(R³¹)-；l为0；n为1；R⁶、R⁷、R⁸、R⁹、R¹²和R¹³各为氢；且R³⁰和R³¹如本发明概述中的定义。

在另一实施方案中，优选为式I化合物、定义(B)，其中m为零；l为1且n为1或2；R⁶和R⁸形成一个稠合芳基基团；R⁷和R⁹形成一个键；且R¹⁰、R¹¹、R¹²和R¹³各为氢。

在另一实施方案中，优选为式I化合物、定义(C)，其中m为1；l为0-3且n为0-3，条件是l与n的总和为1-3；Y为-O-、-NR¹⁹、-S-、-SO-或-SO₂-，其中R¹⁹为烷基、芳烷基或-SO₂R¹⁸，优选的芳烷基基团为苄基和氟苄基，优选的R¹⁸基团为芳基和杂芳基，特别是苯基、吡啶基、噻吩基和咪唑基；且R⁶、R⁷、R⁸、R⁹、R¹⁰、R¹¹、R¹²和R¹³各为氢，或R⁸、R⁹、R¹⁰、R¹¹、R¹²和R¹³各为氢，以及R⁶和R⁷的＝O，或R⁶、R⁷、R⁹、R¹⁰、R¹¹和R¹³各为氢且R⁸和R¹²如本发明概述中的定义。更优选的Y为-NR¹⁹-或-O-，最优选为-NR¹⁹-。在一特别优选的实施方案中，m为1；Y为-NR¹⁹-；l为0；n为1；R⁸、R⁹、R¹²和R¹³为H；且R⁶和R⁷的＝O。在另一特别优选的实施方案中，m为1；Y为-NR¹⁹-；l为0；n为0；R⁸和R⁹为H；且R⁶和R⁷的＝O。

环氨基环部分特别优选的实施方案为：

(所有C)

其中：

R⁸为H、OH、烷氧基、苯氧基或任选取代的苄基氧基；

R¹²为H或烷基，优选为H；

R¹⁹为任选取代的烷基、-S(O)₂R¹⁸、-C(O)R¹⁸或任选取代的杂芳烷基，优选为烷基、任选取代的苄基、苯甲酰基、(任选取代的杂芳基)烷基、-SO₂烷基、-SO₂(任选取代的苯基)、-SO₂萘基、(苯基-烯基)-SO₂-、-SO₂-(任选取代的苄基)、-SO₂-(任选取代的杂芳基)、苯基、-C(O)烷基、-C(O)-苯基、-C(O)-杂芳基、-C(O)N(烷基)₂、-C(O)-O-苄基、-SO₂-(任选取代的杂芳基)、C(O)-杂环烷基取代的烷基、烷基-C(O)-N(烷基)₂及烷基-C(O)-NH₂；及

R³⁰为-OC(O)-烷基、任选取代的苯基、任选取代的苯基烷基、烷基、烷氧基、环烷基烷基、环烷基烷氧基、羟基烷氧基、二烷基氨基烷氧基、烷氧基烷氧基、任选取代的杂环烷基、杂环烷基烷基、杂环烷基烷氧基或-C(O)-O-烷基，更优选为烷氧基或烷氧基烷氧基；

其中在苯基上任选的取代基为R³²取代基，它选自卤素、烷基、-C(O)CH₃、苯基、-COO-烷基、烷氧基、卤代烷基、苯氧基、-CN、-SO₂-烷基和-NHC(O)烷基；其中在苄基上任选的取代基为R³²取代基，它选自卤素、烷基、烷氧基、氰基和苯基；且其中杂芳基选自吡啶基、吡唑基、噁唑基、噻唑基、吡嗪基、噻吩基和咪唑基，及杂芳基上任选的取代基选自烷基、卤素、-COO-烷基、杂芳基和-NHC(O)烷基。

环状氨基部分的更特别优选的实施方案为

和

其中所述取代基如上一段文中所定义，且前者为特别优选的。

式I化合物的优选的立体化学如式IA所示：

应该理解，用于上文及整个说明书中的下列术语，除非另有说明，否则应具有下列意义：

″患者″包括人和动物。

″哺乳动物″指人及其它哺乳类动物。

″烷基″指脂族烃基基团，其可为直链或支链，且链上含有约1至20个碳原子。优选的烷基基团在其链上含有约1至12个碳原子。更优选的烷基基团在其链上含有约1至7个碳原子。支链指在直链的烷基链上附有一或多个低级烷基基团如甲基、乙基或丙基。“低级烷基”指链上含有约1至7个碳原子的可以为直链或支链的基团。适合的烷基基团的非限定性实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、正戊基、庚基、壬基和癸基。R³²-取代的烷基基团包括氟甲基、三氟甲基和环丙基甲基。

″烯基″指含有至少一个碳-碳双键的脂族烃基基团，其可为直链或支链，且在链上含有约2至15个碳原子。优选的烯基基团在其链上含有约2至12个碳原子；且更优选在链上含有约2至6个碳原子。支链指直链的烯基链上附有一或多个低级烷基基团如甲基、乙基或丙基。″低级烯基″指链上含有约2至6个碳原子的可以为直链或支链的基团。适合的烯基基团的非限定性实例包括乙烯基、丙烯基、正丁烯基、3-甲基丁-2-烯基、正戊烯基、辛烯基和癸烯基。

″炔基″指含有至少一个碳-碳三键的脂族烃基基团，其可为直链或支链，且链上含有约2至15个碳原子。优选的炔基基团在其链上含有约2至12个碳原子；且更优选在链上含有约2至4个碳原子。支链指直链的炔基链上附有一或多个低级烷基基团如甲基、乙基或丙基。″低级炔基″指链上含有约2至6个碳原子的可以是直链或支链的基团。适合的炔基基团的非限定性实例包括乙炔基、丙炔基、2-丁炔基、3-甲基丁炔基、正戊炔基和癸炔基。

″芳基″(有时缩写为″芳(ar)″)指含有约6至14个碳原子，优选为含有约6至10个碳原子的芳族单环或多环环系。该芳基基团可任选由一或多个R³²取代基取代，所述R³²取代基可为相同或不同的，且如本文中所定义。适合的芳基基团的非限定性实例包括苯基和萘基。

″杂芳基″指含有约5至14个环原子的芳族单环或多环环系，优选含有约5至10个环原子，其中一至四个环原子为非碳元素，例如氮、氧或硫(单独或组合)。优选的杂芳基含有约5至6个环原子。″杂芳基″可任选由一或多个R³²取代基取代，所述R³²取代基可为相同或不同的，且如本文中所定义。杂芳基词根名称前的前缀氮杂(aza)、氧杂(oxa)或硫杂(thia)分别指至少有一个氮、氧或硫原子存在作为环原子。杂芳基中的氮原子可任选氧化为相应的N-氧化物。适合的杂芳基的非限定性实例包括吡啶基、吡嗪基、呋喃基、噻吩基、嘧啶基、异噁唑基、异噻唑基、噁唑基、噻唑基、吡唑基、呋咱基、吡咯基、吡唑基、三唑基、1，2，4-噻二唑基、吡嗪基、哒嗪基、喹喔啉基、酞嗪基、咪唑并[1，2-a]吡啶基、咪唑并[2，1-b]噻唑基、苯并呋咱基、吲哚基、氮杂吲哚基、苯并咪唑基、苯并噻吩基、苯并噁二唑基、喹啉基、咪唑基、噻吩并吡啶基、喹唑啉基、噻吩并嘧啶基、吡咯并吡啶基、咪唑并吡啶基、异喹啉基、苯并氮杂吲哚基、1，2，4-三嗪基、苯并噻唑基等。

″芳烷基″指芳基-烷基-基团，其中芳基和烷基如前文所述。优选的芳烷基包含低级烷基基团。适合的芳烷基基团的非限定性实例包括苄基、2-苯基乙基和萘基甲基。其通过烷基连接至母体部分。

″环烷基″指含有约3至10个碳原子的非芳族单环或多环环系，优选含有约5至10个碳原子。优选的环烷基环系含有约5至7个环原子。环烷基可任选由一或多个R³²取代基取代，所述R³²取代基可为相同或不同的，且如本文中所定义。适合的单环环烷基的非限定性实例包括环丙基、环戊基、环己基、环庚基等。适合的多环环烷基的非限定性实例包括1-十氢萘、降冰片基(norbornyl)、金刚烷基等。

″卤素″指氟、氯、溴或碘基团。优选为氟、氯或溴，且更优选为氟和氯。

″卤代烷基″指如上述定义的烷基，其中在烷基上有一或多个氢原子被上述定义的卤素基团取代。

在上述定义的环上的取代基也包括3至7个环原子的环，其中1-2可为杂原子，通过同时取代所述芳基、杂芳基或杂环基环上的两个环氢原子连接于芳基、杂芳基或杂环基环上。非限定性实例包括：

等。

″杂环基″(或杂环烷基)指含有约3至10个环原子，优选约5至10个环原子的非芳族饱和单环或多环环系。其中1-3个，优选为1或2个环原子为非碳元素，例如氮、氧或硫(单独或组合)。在环系中不存在相邻的氧和/或硫原子。优选的杂环基含约5至6个环原子。杂环基词根名称前的前缀氮杂(aza)、氧杂(oxa)或硫杂(thia)分别指至少有一个氮、氧或硫原子存在作为环原子。杂环基可任选由一或多个R³²取代基取代，所述R³²取代基可为相同或不同的，且如本文中所定义。杂环基中的氮或硫原子可任选氧化为相应的N-氧化物、S-氧化物或S，S-二氧化物。适合的单环杂环基的非限定性实例包括哌啶基、吡咯烷基、哌嗪基、吗啉基、硫吗啉基、噻唑烷基、1，3-二氧戊环基、1，4-二氧六环基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、四氢噻喃基等。

″杂芳烷基″指杂芳基-烷基-基团，其中杂芳基和烷基如前所述。优选的杂芳烷基包含低级烷基基团。适合的杂芳烷基基团的非限定性实例包括吡啶甲基、2-(呋喃-3-基)乙基和喹啉-3-基甲基。其通过烷基连接至母体部分。

″酰基″指H-C(O)-、烷基-C(O)-、烯基-C(O)-、炔基-C(O)-或环烷基-C(O)-基团，其中各种基团如前所述。其通过羰基连接至母体部分。优选的酰基包含低级烷基。适合的酰基基团的非限定性实例包括甲酰基、乙酰基、丙酰基、2-甲基丙酰基、丁酰基和环己酰基。

″烷氧基″指烷基-O-基团。其中烷基基团系如前所述。适合的烷氧基基团的非限定性实例包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基和庚氧基。其通过醚氧连接至母体部分。

″稠合环烷基″指环烷基的环与式I化合物的环氨基部分稠合，例如具有下列结构化合物

类似地，″稠合杂环烷基″指杂环烷基与式I化合物的环氨基部分稠合，例如具有下列结构化合物

当″Y″为一杂原子时，R⁷、R⁹与它们连接的碳可形成稠合的环，其中″Y″为唯一的杂原子，或R⁷、R⁹与它们连接的碳可形成含有一或二个额外杂原子的环，例如

或

″稠合的芳基″指芳基基团与式I化合物的环氨基部分稠合，例如具有下列结构化合物

″稠合的杂芳基″指类似的结构，其中，例如以吡啶基置换苯基环。式I化合物的环氨基环部分，即具有下列结构的化合物的部分

可具有一或两个氧代取代基，即，当R¹⁰和R¹¹，或R⁶和R⁷，或R⁸和R⁹，或R¹²和R¹³与它们连接的碳形成-C(O)-基团，一或二个这样的基团可存在于环上，只要(C)中的条件得到满足(即-C(O)-基团不与Y＝-S(O)_0-2-相邻)。例如当m为0，且R⁸、R⁹、R¹⁰和R¹¹为氢时，R⁶和R⁷及R¹²和R¹³可各自与它们连接的碳形成-C(O)-基团。

术语″任选取代的″指可任选在可利用的位置上有特定的基团、基或部分取代。

有关化合物中基团的数目(例如取代基、基团或环)，除非另有说明，否则短语″一或多个″及″至少一个″指其可具有与化学上允许的数量一样多的基团，决定这样的基团的最大数目，完全在本领域技术人员的知识范围内。至于包含使用″至少一种式I化合物″的组合物及方法，指可同时给予一至三种式I化合物，优选为一种。

本文所使用术语″组合物″意欲包括含有特定量的特定成分的产品，以及任何直接或间接由特定量的特定成分的组合产生的产品。

波浪线

为一个键，通常指可能的异构体(如含有(R)-及(S)-立体化学异构体)的混合物，或其任一种异构体。例如，

意指含有

和

画至环系内的线，例如，

指该线(键)可与任何可取代的环碳原子连接。

如本领域所熟知的，除非另有说明，否则从一特定原子画出的键，其中在键的末端如果未显示任何基团，则指甲基基团通过该键连接至该原子上。例如：

代表

还应当注意，在本发明的正文、流程、实施例、结构式及任何表格中任何带有未饱和价的杂原子，应视为具有氢原子满足其化合价。

本发明化合物的前药及溶剂化物也包括在本发明中。本文所用术语″前药″指为药物前体的化合物，其在给予患者后，经历化学转化，通过代谢或化学过程产生式I化合物或其盐和/或溶剂化物。在T.Higuchi及V.Stella，Pro-drugs as Novel Delivery Systems(1987)Volume14 of A.C.S.Symposium Series，及在Bioreversible Carriers in DrugDesign，(1987)Edward B.Roche，ed.，American PharmaceuticalAssociation and Pergamon Press中提供了前药的讨论，其通过引用结合到本文中。

″溶剂化物″指本发明化合物与一或多种溶剂分子物理缔结。该物理缔结涉及改变离子及共价键连接的程度，包括氢键。在某些情况下，溶剂化物可被分离，例如当一或多个溶剂分子结合到晶体的晶格中时。″溶剂化物″包含了溶液相及可分离的溶剂化物。适合的溶剂化物的非限定性实例包括乙醇化物、甲醇化物等。″水合物″为一种其中溶剂分子为H₂O的溶剂化物。

″有效量″或″治疗有效量″指本发明化合物或组合物的量可有效地抑制BACE-1，而因此在适合的患者中产生所需的治疗效果。

式I化合物所形成的盐也在本发明的范围内。除非另有说明，否则应该理解本文中所指的式I化合物包括其盐。本文所用的术语″盐″指与无机和/或有机酸所形成的酸性盐，以及与无机和/或有机碱所形成的碱性盐。此外，当式I化合物含有碱性部分(例如但不限于吡啶或咪唑)和酸性部分(例如但不限于羧酸)时，可形成两性离子(″内盐″)，并包含在本文所用的术语″盐″中。虽然其它盐也是有用的，但药学上可接受的(即无毒的、生理学上可接受的)盐为优选。式I化合物的盐，例如可通过使式I化合物与一定量(例如等当量)的酸或碱在所述盐可沉淀于其中的介质中或在水性介质中反应，接着冻干来形成。一般认为适合由碱性(或酸性)药用化合物形成药学上有用的盐的酸(及碱)描述于，例如S.Berge等，Journal of Pharmaceutical Sciences(1977)66(1)1-19；P.Gould，International J.of Pharmaceutics(1986)33 210-217；Anderson等，The Practice of Medicinal Chemistry(1996)，AcademicPress，New York；在The Orange Book(Food & Drug Administration，Washington，D.C.的网站上)；及P.Heinrich Stahl，Camille G.Wermuth(Eds.)，Handbook of Pharmaceutical Salts：Properties，Selection，and Use，(2002)Int′l.Union of Pure and Applied Chemistry，pp.330-331中。这些公开的内容通过引用结合到本文中。

酸加成盐的实例包括乙酸盐、己二酸盐、藻酸盐、抗坏血酸盐、门冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡萄糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、延胡索酸盐、葡糖庚酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙基磺酸盐、乳酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、硫酸甲酯盐(methylsulfates)、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、草酸盐、扑酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、水杨酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、磺酸盐(如本文中所提及的)、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐(亦称为tosylates)、十一酸盐等。

示例性碱性盐包括铵盐、碱金属盐(例如钠盐、锂盐和钾盐)、碱土金属盐(例如钙盐及镁盐)、锌盐、与有机碱所成的盐(例如有机胺)如苄星青霉素G、二乙胺、二环己胺、海巴明(hydrabamines)(与N，N-双(脱氢枞酸基)乙二胺所形成)、N-甲基-D-葡糖胺、N-甲基-D-葡糖酰胺(glucamides)、叔丁基胺、哌嗪、苯基环己胺、胆碱、氨丁三醇，及与氨基酸，例如精胺酸、赖氨酸等所成的盐。碱性含氮基团也可用试剂将其季铵化，例如用低级烷基卤化物(例如甲基、乙基、丙基和丁基的氯化物、溴化物和碘化物)、硫酸二烷基酯(例如硫酸二甲酯、二乙酯、二丁酯及二戊酯)、长链卤化物(例如癸基、月桂基、肉豆蔻基和硬脂酰基的氯化物、溴化物和碘化物)、芳烷基卤化物(例如苄基和苯乙基的溴化物)及其它。

所有这样的酸性和碱性盐均可作为本发明范围内的药学上可接受的盐，且就本发明的目的而言，所有酸性或碱性盐均可认为是与游离形式的相应化合物等同的。

式I化合物及其盐、溶剂化物及前药，可以其互变异构体的形式(例如酰胺或亚氨基醚)存在。所有这样的互变异构形式均作为本发明的一部分而包括在本文中。

所有本发明化合物(包括化合物的盐、溶剂化物及前药，以及前药的盐和溶剂化物)的立体异构体(例如几何异构体、光学异构体等)，例如因各种取代基上的不对称碳而可存在的化合物，包括对映异构体形式(即使无不对称碳也可存在)、旋转异构体形式、阻转异构体及非对映异构体形式，均包括在本发明范围内。本发明化合物的单一立体异构体，例如可为基本上无其它异构体，或可为，例如外消旋体混合物或与所有或选择的其它立体异构体混合。本发明的不对称中心可具有如IUPAC 1974推荐书中所定义的S或R构型。所用的术语″盐″、″溶剂化物″、″前药″等，可同样用于本发明化合物的对映异构体、立体异构体、旋转异构体、互变异构体、外消旋体或前药的盐、溶剂化物及前药上。

就组合方面，设计了使用任何非式I化合物的β-分泌酶抑制剂；β-分泌酶抑制活性可用下述的方法来测定。典型的β-分泌酶抑制剂包括(但不限于)公开于WO 02/02505、WO 02/02506、WO 02/02512、WO02/02518及WO 02/02520及WO 02/088101中的化合物。

用于本发明组合中的γ-分泌酶抑制剂，可用本领域已知的方法来确定。典型的γ-分泌酶抑制剂包括(但不限于)描述于WO 03/013527、US 6,683,091、WO 03/066592、USSN 10/663,042(2003年9月16日提交)、WO 00/247671、WO 00/050391、WO 00/007995及WO 03/018543中的化合物。

与式I化合物联合使用的HMG-CoA还原酶抑制剂包括″他汀(stains)″，例如阿托伐他汀(atorvastatin)、洛伐他汀(lovastatin)、辛伐他汀(simvistatin)、普伐他汀(pravastatin)、氟伐他汀(fluvastatin)及罗苏伐他汀(rosuvastatin)。

用于组合的胆碱酯酶抑制剂包括乙酰基-和/或丁酰基胆碱酯酶抑制剂。胆碱酯酶抑制剂的实例包括他克林(tacrine)、多奈哌齐(donepezil)、利伐斯的明(rivastigmine)、加兰他敏(galantamine)、吡啶斯的明(pyridostigmine)、新斯狄明(neostigmine)。

与式I化合物联合用药的非类固醇抗炎药包括布洛芬(ibuprofen)、萘普生(naproxen)、双氯芬酸(diclofenac)、二氟尼柳(diflunisal)、依托度酸(etodolac)、氟比洛芬(flurbiprofen)、吲哚美辛(indomethacin)、酮洛芬(ketoprofen)、酮咯酸(ketorolac)、萘丁美酮(nabumetone)、噁丙嗪(oxaprozin)、吡罗昔康(piroxicam)、舒林酸(sulindac)、托美丁(tolmetin)、塞来考昔(celecoxib)及罗非考昔(rofecoxib)。适合的N-甲基-D-门冬氨酸受体拮抗剂为，例如美卢君(memantine)。抗-淀粉样蛋白抗体，例如描述于Hock等，Nature Medicine，8(2002)，p.1270-1275中。

式I化合物可用本领域已知的方法来制备。下列反应流程显示通用方法，但本领域技术人员应该理解，也可能有其它适合的方法。在下列流程及实施例中，使用下列缩写：

甲基：Me；乙基：Et；丙基：Pr；丁基：Bu；苄基：Bn

高压液相层析法：HPLC

液相层析质谱：LCMS

薄膜层析法：TLC

制备型薄膜层析法：PTLC

室温：RT

小时：h

分钟：min

保留时间：t_R

1-羟基苯并三唑：HOBt

1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺甲基碘(methiodide)：EDCI

1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐：EDC

苯并三唑-1-基-氧基-三吡咯烷基六氟磷酸鏻：PyBOP

乙酸乙酯：EtOAc

四氢呋喃：THF

N，N-二甲基甲酰胺：DMF

正丁基锂：n-BuLi

1-羟基-1-氧代-1，2-苯并二氧杂环戊烯-3(1H)-酮：IBX

三乙胺：NEt₃或Et₃N

二丁基硼三氟甲磺酸酯：Bu₂BOTf

甲醇：MeOH

乙醚：Et₂O

乙酸：AcOH

二苯基磷酰基叠氮化物：DPPA

异丙醇：iPrOH

苄醇：BnOH

1-羟基-7-氮杂苯并三唑：HOAt

O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐：

HATU

三氟乙酸：TFA

叔丁氧基羰基：Boc

苄基氧基羰基：Cbz

二甲基亚砜：DMSO

二异丙基乙基胺：DIEA

二异丙基氨化锂：LDA

三-(2-氨基乙基)氨基甲基聚苯乙烯：(PS-trisamine)

异氰酸甲酯聚苯乙烯：(PS-NCO)

一般流程

在流程1中，将环胺2-甲醛衍生物加到带有适当R²基团的Evans酰基噁唑烷酮中。将噁唑烷酮产物II裂解并将产生的羧酸III进行库尔修斯重排(Curtius rearrangement)，得到噁唑烷酮IV。将噁唑烷酮IV用碱水解，得到V并将V的伯胺进行衍生化作用(例如酰化)，得到中间体VIII。除去环胺保护基团，得到所需产物。

或者，将III的羟基基团进行保护形成VI。将VI进行库尔修斯重排，并以苄醇将中间体异氰酸酯截留(trapping)，得到VII，将其去保护后得到中间体V。

在流程中，变量″R^x″用于取代R⁶-R¹³，以简化其结构。″PG″指胺保护基团。适合的胺保护基团的实例为Boc及Cbz；Bn也可用于仲胺，且(Bn)₂也可用于伯胺(于该情况下，下列流程所显示结构的PG-NH-部分应变成(PG)₂-N-，即(Bn)₂-N-)。

流程1

流程2显示另一种合成所需化合物的方法，其中将由3-氧代环胺衍生物所产生的阴离子加到保护的α-氨基醛衍生物，得到加合物IX。将IX去保护，接着使伯胺衍生化，随后除去环胺保护基团，得到所需产物。

流程2

在流程3中，将2-卤代吡啶锂(lithio)衍生物，加到保护的α-氨基醛衍生物上，得到加合物X。将X的受保护的伯胺去保护，并将产生的胺酰化得到所需的衍生物XI。将吡啶环氢化得到哌啶衍生物，在纯化的情况下其氮被保护而得到XII。将环胺XII去保护得到所需产物。

流程3

在流程4中，将4-氯吡啶的2-锂衍生物，加到保护的氨基醛上，得到中间体XIII。XIII的氯取代基可用烷醇(R^17X-OH，其中R^17X如R¹⁷定义，但不为氢)置换，得到醚XIV。将伯胺去保护及进行衍生化作用，接着将吡啶环还原，得到相应的哌啶产物。

流程4

在流程5中，将锂化的XV加到保护的N，N-二苄基氨基醛上，得

到产物XVI。从XVI上通过氢解作用除去N，N-二苄基保护基团，接着以硼烷-甲硫醚将哌嗪酮氧代基团还原得到哌嗪产物XVII。将XVII的伯胺进行衍生化，并将哌嗪苄基基团氢解，得到中间体XVIII。使XVIII的哌嗪氮衍生化，接着去保护，得到哌嗪产物。

流程5

流程6为流程5的变化，其中用硼烷-甲硫醚还原将XVI氧代基团除去，接着除去N-苄基基团，得到二胺XIX。使XIX的仲胺衍生化将R^x引入得到XX，接着引入R¹并去保护，得到产物。或者，XIX的伯胺可通过形成亚胺来保护，而得到XXI。通过XXI的仲胺的衍生化将R^x引入，接着将所述伯胺去保护，得到XXII。通过引入R¹使中间体XXII衍生化，去保护得到所需产物。

流程6

在下列制备及实施例中，LCMS和RP-HPLC分析条件如下：

条件A：5分钟，梯度从10％→95％的CH₃CN/H₂O(含0.1％TFA)，然后2分钟，含0.1％TFA的95％CH₃CN/H₂O的等度洗脱液，流速1.0ml/min，于分析型C18反相层析柱上。

条件B：梯度从10％→95％CH₃CN/H₂O(含0.1％HCO₂H)，流速25ml/min，于制备型C18反相层析柱上。

条件C：梯度从5％→95％CH₃CN/H₂O(含0.1％HCO₂H)，流速20ml/min，于制备型C18反相层析柱上。

制备1

根据文献(Kruse等，J.Med.Chem.(1987)，30，486-494)，将3.5-二氟肉桂酸(9.94g，53.9mmol)的THF(100ml)溶液，于50psi H₂压下，用10％Pd/C(1.50g)氢化5小时。过滤混合物并减压浓缩，得到3-(3，5-二氟-苯基)丙酸(10.9g，100％)。于23℃将草酰氯(13ml，150mmol)缓慢加到该酸(10.9g，53.9mmol)的THF(220ml)溶液中，接着加入催化量的DMF(1滴)。90分钟后，减压除去挥发物，并将所产生的残余物与无水的苯共蒸发二次，得到3-(3，5-二氟苯基)丙酰氯，为黄色油状物(11.91g，100％)。所述酰氯不需要进一步纯化，可用于后续步骤中。以与文献(Pettit等，Synthesis(1996)，719-725)类似的方法进行酰化。将(S)-(-)-4-异丙基-2-噁唑烷酮(6.46g，50mmol)的THF(150ml)溶液，于氩气下搅拌并冷却至-78℃。逐滴加入n-BuLi(2.45M己烷溶液，20.8ml，50.96mmol)，接着加入先前制备的3-(3，5-二氟苯基)-丙酰氯的THF(8ml)溶液。经15小时待反应回温至23℃后，用饱和NH₄Cl(30ml)猝灭反应，接着真空除去挥发物。将该浆液以CH₂Cl₂(x2)萃取，将合并的有机层以NaOH(x2)及盐水冲洗，干燥(Na₂SO₄)并真空浓缩。残余物经硅胶层析法纯化(15→30％EtOAc/己烷)，得到产物(14.27g，48mmol，96％)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ＝6.73(m，2H)，6.59(m，1H)，4.37(m，1H)，4.17-4.25(m，2H)，3.24(m，1H)，3.16(m，1H)，2.93(m，2H)，2.30(m，1H)，0.86(d，3H，J＝6.8Hz)，0.80(d，3H，J＝6.8Hz)；LCMS(条件A)：t_R＝4.47分钟：595(2M+H)，298(M+H)⁺。

制备2A

将衣康酸(13.0g，100mmol)及正丁胺(7.31g，100mmol)溶于甲苯(100ml)中的混合物于密封试管中于120℃加热22小时。将混合物冷却至室温并加入1N NaOH(400ml)。以Et₂O(2×200ml)冲洗水层，以浓HCl(40ml)酸化，并以Et₂O(3×200ml)萃取。将合并的Et₂O层以盐水冲洗，置于Na₂SO₄上干燥，浓缩，并真空干燥得到产物(12.0g，65％)。MS m/e 186(M+H)⁺。

除非另有说明，否则使用类似步骤及适当的胺，制备下列外消旋形式的酸：

制备2JJ

步骤1

将衣康酸(13.0g，100.0mmol)及烯丙胺(5.71g，100mmol)溶于无水甲苯(100ml)中的混合物于密封试管中于125℃加热16小时。将混合物冷却至室温，加入1N NaOH(400ml)水溶液，以乙醚(2×200ml)萃取水层。以浓HCl将水层酸化至pH1，并以乙醚(10×300ml)萃取。将合并的有机部分浓缩并将残余物溶于CH₂Cl₂(200ml)，用盐水冲洗。将有机层置于MgSO₄上干燥，浓缩，并冷冻干燥得到淡黄色固体(9.60g，57％)。MS m/e 170(M+H)⁺。

步骤2

向步骤1产物(8.60g，50.9mmol)及Et₃N(15.4g，153mmol)的无水THF(200ml)溶液中，于-45℃加入新戊酰氯(6.45g，53.5mmol)。于-45℃将混合物搅拌1小时，然后加入LiCl(4.75g，112mmol)及(S)-4-苄基-2-噁唑烷酮(9.02g，50.9mmol)的THF(100ml)悬浮液。于室温下，将产生的混合物搅拌16小时并过滤。将滤液浓缩，溶于EtOAc(700ml)中，用1N HCl(200ml)、饱和NaHCO₃(200ml)及盐水冲洗。将有机层干燥(MgSO₄)，浓缩，并以柱层析法(SiO₂，梯度0-75％EtOAc/己烷)纯化，得到产物(7.20g，43％)。MS m/e 329(M+H)⁺。

步骤3

将步骤2的产物(2.63g，8.01mmol)的THF(30ml)及水(8ml)溶液置于冰水浴中，加入30％H₂O₂(4ml)及LiOH(0.672g，16.0mmol)。于0℃搅拌混合物7小时。加入10％亚硫酸氢钠(40ml)水溶液，并于室温搅拌混合物16小时。将混合物浓缩，使残留物在1N NaOH(8ml)和CH₂Cl₂(2×100ml)之间分配。于0℃将水层酸化至pH 2，并以乙醚(5×100ml)萃取。将合并的有机部分干燥(MgSO₄)并浓缩，得到产物(1.00g，74％)。MS m/e 170(M+H)⁺

使用适当的起始内酰胺及基本相同的步骤，得到下列制备物。

制备3A

步骤1

向冰冷的制备2A(1.148g，6.20mmol)的无水THF(20ml)溶液中，加入1.0M双(三甲基甲硅烷基)氨化锂的己烷(13.0ml)溶液。将混合物于冰冷却的水浴中搅拌30分钟，于室温2小时后，然后置于干冰-丙酮浴中冷却。加入碘乙烷，使混合物缓慢地回温至室温并搅拌16小时。以EtOAc(45ml)稀释混合物并以冰水(60ml)冲洗。以浓HCl将水层酸化至pH＝1-2，并以EtOAc(2×60ml)萃取。将合并的有机层以盐水(30ml)萃取，干燥(MgSO₄)并浓缩。将残余物以CH₂Cl₂(20ml)处理，并加入草酰氯(0.53ml，6.0mmol)及3滴的DMF。将反应混合物于室温搅拌16小时，然后置于冰水浴中冷却。向反应混合物中加入Et₃N(1.7ml，12mmol)及苄醇(0.875g，8.09mmol)。于室温搅拌24小时后，以CH₂Cl₂(50ml)稀释该混合物，并以5％柠檬酸(60ml)及饱和NaHCO₃溶液(50ml)冲洗。将有机层干燥(MgSO₄)，浓缩，并以柱层析法(梯度己烷至1∶4EtOAc/己烷)纯化，得到产物(0.608g，32％)。MS m/e 304(M+H)⁺。

步骤2

将步骤1产物(0.608g)和10％Pd/C(0.06g)的混合物溶于EtOH(20ml)中，于H₂(1atm)下搅拌16小时。将混合物用硅藻土垫过滤并浓缩，得到产物(0.441g，100％)。MS m/e 214(M+H)⁺。

使用适当的烷基卤化物及类似方法，制备下列各酸：

制备3H-3M

羧酸3H-3M以类似的公开方法(Baltaief等，Tetrahedron，1999，55，3949)制备。

制备4

步骤1

将溶于无水丙酮(20ml)中的(S)-2-噁唑烷酮-5-羧酸苯甲酯(750mg，3.39mmol；根据K.Danielmeier等，Tetrahedron：Asymmetry，(1995)，6，1181-1190制备)、巴豆基溴(2.02g，15.0mmol)及无水K₂CO₃(1.88g，13.6mmol)混合物于室温下搅拌24小时。将混合物过滤并浓缩。将残余物溶于CH₂Cl₂(100ml)中，以水及盐水冲洗，干燥(MgSO₄)，浓缩，并以柱层析法(CH₂Cl₂)纯化，得到标题化合物(480mg，51％)。MS m/e 276(M+H)⁺。

步骤2

将步骤1的产物(480mg，1.74mmol)及10％Pd/C(48mg)在MeOH(25ml)中的混合物于H₂(1atm)下搅拌3.5小时。将混合物过滤并浓缩，得到标题化合物(340mg，100％)。MS m/e 188(M+H)⁺。

制备5A

步骤1

向搅拌的冰冷的(4S)-3-(苄基氧基羰基)-2-氧代咪唑烷-4-羧酸叔丁基酯(Hayashi等，J.Med.Chem.1989，32，289)(0.64g，2mmol)的DMF(8ml)溶液中，加入NaH(60％悬浮液，84mg，2.1mmol)。40分钟后加入MeI(0.62ml，10mmol)，然后让反应混合物回温至室温。16小时后将反应混合物浓缩，使残余物在EtOAc(20ml)和水之间分配。用饱和NaCl冲洗有机层，干燥(MgSO₄)，过滤并蒸发。将残余物经柱层析(SiO₂，己烷-2∶3EtOAc/己烷)，得到产物(345mg)。

步骤2

于H₂气氛下，将步骤1的产物(335mg，1mmol)和10％Pd/C的MeOH(15ml)溶液搅拌18小时。将反应混合物过滤并蒸发滤液，得到产物(183mg)。

步骤3

于冰冷的NaH(60％悬浮液，35mg，0.9mmol)的DMF(3ml)悬浮液中，加入步骤2的产物(173mg，0.87mmol)的DMF(2ml)溶液。0.5小时后，加入1-碘戊烷(0.57ml，4.3mmol)并将产生的混合物于室温下搅拌16小时。将反应混合物浓缩，然后在EtOAc(20ml)和水之间分配。用饱和NaCl冲洗有机层，干燥(MgSO₄)，过滤并蒸发。将残余物经柱层析(SiO₂，己烷-2∶3EtOAc/己烷)，得到产物(205mg)。

步骤4

将溶于1∶4TFA/CH₂Cl₂(5ml)中的步骤3的产物(200mg，0.74mmol)搅拌2天。将反应混合物蒸发并将残余物溶于1N HCl的Et₂O(2ml)溶液中处理，然后蒸发得到产物(209mg)。

使用与制备5A相似方法，制备下列各酸

制备6

向1-丙基胺(1.68ml，20.5mmol)的CH₃CN(10ml)溶液中，加入2-(溴甲基)丙烯酸乙酯(1.32g，6.8mmol)CH₃CN(20ml)溶液。18小时后，加入Et₂O(100ml)并将该悬浮液过滤。蒸发滤液以EtOAc处理残余物，以水及饱和NaCl冲洗，干燥(MgSO₄)，过滤并蒸发，得到黄色油状物(1.27g)。将该产物(634mg，2.75mmol)与羰基二咪唑(535mg，3.30mmol)的混合物于THF(14ml)中搅拌0.75小时。将反应混合物在EtOAc(100ml)和1N HCl之间分配。将有机层用1N HCl及饱和NaCl冲洗，干燥(MgSO₄)，过滤并蒸发，得到黄色油状物(131mg)。将该油状物溶于THF(3ml)中并加入3N NaOH(0.7ml)。18小时后，用6NHCl将反应混合物酸化，浓缩，并将残余物进行反相HPLC(条件B)，得到白色固体产物(46mg)。

制备7

步骤1

于0℃，用NaH(1.5当量)和丙基碘(2当量)处理1-Boc-吡嗪-3-酮的THF溶液。将反应于室温搅拌18小时后，以水猝灭反应，以1M HCl酸化，并用饱和NaHCO₃冲洗。将有机层干燥(MgSO₄)，浓缩，并以柱层析法(SiO₂，梯度4％至11％己烷/i-PrOH)纯化，得到烷化产物。将该产物用20％TFA/CH₂Cl₂处理，接着真空除去挥发物，得到为盐的产物。

步骤2

于室温下，将Et₃N(3当量)加到步骤1的产物的THF溶液中，接着加入羰基二咪唑(1.2当量)。将反应物于50℃加热18小时，然后冷却至室温并以EtOAc稀释。随后以水(4x)及饱和NaCl(1x)冲洗有机层，然后干燥(MgSO₄)，真空浓缩。将产生的残余物溶于CH₃CN中，于室温下用过量的CH₃I处理6小时。将反应真空浓缩后，得到的黄色泡沫状产物可直接使用。

制备8

步骤1

将(R)-3-哌啶甲酸(Nipecotic acid)(1.05g，8.1mmol)溶于THF(20ml)和H₂O(20ml)中。加入(Boc)₂O(2.48g，11.4mmol)及NaHCO₃(0.96g，11.4mmol)。于室温下，将混合搅拌过夜。以H₂O及乙醚稀释混合物。以浓HCl将水层调整至pH＝2并以CH₂Cl₂稀释。合并有机层，干燥(Na₂SO₄)，并浓缩得到N-Boc-(R)-3-哌啶甲酸(1.8g，97％)。LCMS(条件A)t_R＝3.26分钟，230(M+H)。

步骤2

向步骤1的产物(1.8g，7.9mmol)及二丙基胺(10.9ml，78.6mmol)的DMF(8ml)溶液中加入PyBOP(5.32g，10.2mmol)及DIEA(4.12ml，23.6mmol)。于室温下搅拌该混合物过夜。以EtOAc及己烷稀释。以H₂O冲洗混合物后，以Na₂SO₄将有机层干燥并浓缩。将粗残余物以层析法(SiO₂，20％EtOAc/己烷)纯化，得到产物(2.19g，89％)。¹HNMR(400MHz，CDCl₃)δ4.04(m，2H)，3.38-3.00(m，4H)，2.95-2.40(m，3H)，1.80-1.50(m，8H)，1.39(s，9H)，0.875(t，3H，J＝7.2Hz)，0.803(t，3H，J＝7.2Hz)。LCMS(条件A)t_R＝4.50分钟，313(M+H)。

步骤3

将步骤2的产物用1∶4TFA/CH₂Cl₂处理以除去Boc基团，然后基本用制备7步骤2的方法转化为制备8。

制备9

步骤1

于室温下，将CsOH-H₂O(1.2当量)及

分子筛(70mg/mmol底物)顺序加到3-(R)-羟基-1-Boc-吡咯烷的DMF溶液中。10分钟后，加入烯丙基溴(2.0当量)，并持续搅拌18小时。以EtOAc稀释反应，过滤后以1M HCl酸化。用饱和的NaHCO₃(2x)水溶液和NaCl(1x)冲洗有机层，然后干燥(MgSO₄)并浓缩。将残余物经柱层析(SiO₂，2％至4％i-PrOH/己烷)，得到烷化中间体。将Pd(OH)₂加到该中间体的MeOH溶液中，并经该悬浮液于H₂压下搅拌18时。过滤除去催化剂，并将滤液浓缩。将残余物与20％TFA/CH₂Cl₂于室温作用2小时，然后真空蒸发，得到为盐的产物(100％)。

步骤2

以制备7步骤2中所述基本相同的方法，将步骤1的产物转化为制备9。

制备10A

步骤1

向由2(S)-1-(叔丁氧基羰基)-4，4-二烯丙基焦谷氨酸乙酯制备的2(S)-4，4-二烯丙基焦谷氨酸乙酯(Ezquerra等，J.Org.Chem.，(1994)，59，4327；1.2g，3.6mmol)及碘甲烷(0.25ml，4mmol)的无水THF(18ml)的冰冷却溶液中，加入NaH(60％悬浮液，216mg，6mmol)。0.5小时后，让反应混合物回温至室温并搅拌1小时。用饱和NaCl猝灭反应混合物，以Et₂O(x2)萃取。将合并的有机层用饱和NaCl冲洗，干燥(MgSO₄)，过滤并蒸发，得到油状甲基化产物(1.2g)。将该油状物溶于THF(20ml)中并加入3N NaOH(5ml)。22小时后，将反应混合物以6N HCl酸化并以Et₂O(x3)萃取。将合并的有机层干燥(MgSO₄)，过滤并蒸发。进行制备型HPLC(条件B)得到油状产物(215mg)。

制备10B

以类似制备10A的方法，得到制备10B。

制备11

步骤1

将(2S，4S)-N-苄基氧基羰基-4-羟基脯氨酸甲酯用NaH/DMF和烯丙基溴处理。将产生的中间体溶于MeOH中，在20％Pd(OH)₂/碳及催化性AcOH存在下，于50psi H₂下搅拌。过滤及蒸发后得到产物。

步骤2

将步骤1的产物、37％HCHO水溶液、NaOAc及20％Pd(OH)₂/C的混合物溶于MeOH中，于50psi H₂下搅拌。于室温20小时后，将反应混合物过滤，浓缩，然后溶于3M HCl中。以Et₂O(2x)洗涤水层，以NaHCO₃碱化。以CH₂Cl₂(3x)萃取后，将有机层干燥(MgSO₄)并浓缩。将残余物用3M NaOH/THF于室温处理18小时。以4M HCl/二氧六环将反应混合物酸化后，以CH₂Cl₂萃取混合物，将有机层浓缩，得到可直接使用的产物混合物。

制备12

步骤1

向搅拌的正丁基胺(3.29g，45mmol)的MeOH(20ml)的冰冷溶液中，逐滴加入冰冷的阔马酸(coumalate)甲酯(3.08g，20mmol)的MeOH(25ml)溶液。18小时后，将反应混合物浓缩并将残余物经柱层析(SiO₂，0％-1.5％MeOH/CH₂Cl₂)，得到产物(2.3g)。

步骤2

将步骤1的产物(1.34g，6.4mmol)和PtO₂(134mg)在MeOH(100ml)中的混合物于50psi H₂下搅拌24小时。加入额外的PtO₂(400mg)，并将反应混合物于50psi H₂下搅拌6小时。将反应混合物过滤并将滤液浓缩。将残余物经柱层析(SiO₂，0％-2％ MeOH/CH₂Cl₂)，得到1-丁基-6-氧代哌啶-3-羧酸甲酯(820mg)。将溶于MeOH(15ml)中的1-丁基-6-氧代哌啶-3-羧酸甲酯(800mg，3.8mmol)及1N NaOH(7.5ml)的混合物于室温搅拌1小时。用1N HCl将反应混合物酸化并以Et₂O(2×100ml)萃取。用饱和NaCl冲洗合并的有机层，干燥(Na₂SO₄)，过滤并蒸发得到产物(590mg)，其不需要进一步纯化而使用。

制备13

步骤1

向在MeOH(50ml)和甲苯(250ml)中的(S)-Boc-3，5-二氟苯基丙氨酸(20.00g，66.4mmol)的搅拌的、冰冷的混合物中，分次加入(三甲基甲硅烷基)重氮甲烷(53ml，206mmol，2.0M溶于己烷中)。添加完成后，将反应物搅拌约0.5小时，以冰AcOH(1ml)猝灭，并真空浓缩。将残余物直接用于下一步骤中。将残余物溶于无水THF(200ml)，冷却至0℃，并分次加入LiAIH₄(2.52g，66.4mmol)。添加完成后，将反应物于0℃搅拌20分钟，然后以15％NaOH(2.0ml)水溶液和H₂O(8.0ml)猝灭。将产生的浆液过滤，以THF冲洗残余物，将合并的滤液及洗液真空浓缩，得到白色固体产物(17.65g，93％)。¹H NMR(CDCl₃)δ6.73(m，2H)，6.62(m，1H)，4.75(s，br，1H)，3.80(s，br，1H)，3.61(m，1H)，3.52(m，1H)，2.80(m，2H)，1.37(s，9H)。MS m/e 288(M+H)⁺。

步骤2

于烧瓶中装入步骤1的产物(3.00g，10.5mmol)、EtOAc(150ml)及IBX(8.78g，31.4mmol)，加热至95℃并搅拌3.5小时。让反应混合物冷却至室温，过滤并真空浓缩得到白色固体产物(2.98g，100％)。¹HNMR(CDCl₃)δ9.59(s，1H)，6.65(m，3H)，5.03(m，1H)，4.35(m，1H)，3.13(m，1H)，3.01(m，1H)，1.39(s，9H)。

制备14

步骤1

于0℃将三甲基甲硅烷基重氮甲烷(2.0M于己烷中，95ml，190mmol)加到Boc-(L)-3，5-二氟苯基丙氨酸(40g，133mmol)的MeOH(50ml)和甲苯(250ml)溶液中。于室温60分钟后，加入AcOH以猝灭过量三甲基甲硅烷基重氮甲烷，将反应混合物真空浓缩，得到定量得量(42.3g)甲酯。于0℃将4M HCl/二氧六环(150ml，600mmol)加到甲酯(42.3g)的20％MeOH/CH₂Cl₂(130ml)溶液中，并于室温下，将反应物搅拌4小时。将反应真空浓缩得到产物HCl盐(33.4g，定量)。LCMS(条件A)：t_R＝2.62分钟；431(2M+H)⁺，216(M+H)⁺。

步骤2

于室温下，将NaHCO₃(55.9g，665mmol)及BnBr(68.2g，399mmol)加到步骤1的产物(33.4g，133mmol)的THF(600ml)和DMSO(150ml)溶液中。将反应混合物于70℃搅拌24小时，然后冷却至室温并以水(400ml)稀释。于室温搅拌1小时后，分离各层，以EtOAc(3x)萃取水层。冲洗(NaHCO₃)合并的有机层，干燥(MgSO₄)并浓缩，将残余物层析(SiO₂，0％至30％EtOAc/己烷)，得到中间体N，N-二苄基化甲酯(39.4g，75％)。LCMS(条件A)t_R＝5.90分钟；396(M+H)⁺。

于0℃将LiAlH₄(6.49g，171mmol)加到溶于THF(500ml)的甲酯(45.0g，114mmol)溶液中。待添加完成后，于室温搅拌反应混合物5小时，然后以水(5ml)、15％NaOH(10ml)猝灭，并另外添加水(7ml)。剧烈搅拌悬浮液后，将该混合物过滤，并将滤液浓缩。将产生的残余物层析(SiO₂，0％至50％EtOAc/己烷)，得到产物(34.8g，71％)。LCMS(条件A)t_R＝4.53分钟；368(M+H)⁺。

步骤3

于-78℃将DMSO(4.45ml，62.7mmol)的CH₂Cl₂(10ml)溶液加到草酰氯(2.70ml，31.3mmol)的CH₂Cl₂(60ml)溶液中。10分钟后，加入步骤2的产物(10.0g，27.2mmol)的CH₂Cl₂(40ml)溶液。于-78℃将反应混合物搅拌90分钟，接着加入DIEA(18.8ml，108mmol)。于室温下将反应混合物搅拌2小时，然后以水猝灭反应。以CH₂Cl₂萃取水层，并冲洗合并的有机层(2x水，2x NH₄Cl，1x盐水)，干燥(MgSO₄)并浓缩得到产物(10.32g，＞理论产率)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ□＝9.72(s，1H)，7.33-7.24(m，10H)，6.65-6.61(m，3H)，3.82(d，J＝13.6Hz，2H)，3.68(d，J＝14Hz，2H)，3.51(m，1H)，3.10(m，1H)，2.86(m，1H)。

制备15

步骤1

于室温下，将L-亮氨醇(leucinol)(5.27g，45.0mmol)加到碳酸钾(17.76g，128.5mmol)的水(25ml)溶液中，并将混合物加热至65℃。加入苄基溴(15.44g，90.27mmol)的EtOH(12ml)溶液，并于65℃将混合物搅拌1小时。以CH₂Cl₂(50ml)及水(25ml)稀释混合物，以CH₂Cl₂(50ml)萃取水层，并将合并的有机层干燥(MgSO₄)，浓缩，并经柱层析(SiO₂，梯度EtOAc/己烷0-8％)纯化，得到产物(12.63g，94％)。MS m/e 298(M+H)⁺。

步骤2

以制备14步骤3的基本相同的方法，将步骤1的产物转变为醛，并可直接使用。

制备16

步骤1

将(S)-2-叔丁氧基羰基氨基-3-环己基-1-丙醇(4.00g，15.5mmol)的CH₂Cl₂(10ml)溶液与4N HCl的二氧六环(10ml)溶液的混合物，于室温搅拌16小时。以CH₂Cl₂(40ml)稀释混合物并以NH₄OH(30ml)水溶液冲洗。以CH₂Cl₂(40ml)萃取水层并将合并的有机层干燥(MgSO₄)，浓缩得到产物(2.78g，100％)。MS m/e 158(M+H)⁺。

步骤2

以类似制备15步骤1的方法，将步骤1的产物二苄基化。以类似制备14步骤3的方法，将二苄基化产物转变为产物醛。

实施例1

和

步骤1

以类似于文献(Pettit等，Synthesis(1996)，719-725)方法，于0℃将NEt₃(2.0ml，14.44mmol)加到制备1(3.31g，11.16mmol)的CH₂Cl₂(46ml)溶液中，接着逐滴加入Bu₂BOTf(1.0M CH₂Cl₂溶液，12.0ml，12mmol)。于0℃45分钟后，将该黄色溶液冷却至-78℃，并加入溶于CH₂Cl₂(5ml)的N-(叔丁氧基羰基)-D-脯氨醛(prolinal)(2.46g，12.34mmol)溶液。于-78℃搅拌反应物1小时，0℃搅拌2小时及23℃搅拌1小时，以MeOH(75ml)-磷酸盐缓冲液(pH 7.0，25ml)猝灭。待溶液冷却至-10℃时，加入H₂O₂(30％水溶液，25ml)-MeOH(50ml)溶液，使内部温度维持在4℃以下。于23℃搅拌60分钟后，真空除去挥发物，以Et₂O(3x)萃取水性残余物，干燥(Na₂SO₄)并减压浓缩。以层析法将残余物纯化(SiO₂，20→30％EtOAc/己烷)，得到产物(3.03g，61％)及回收的酰亚胺(imide)(1.98g，6.66mmol)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ6.83(m，2H)，6.51(m，1H)，4.57(m，1H)，4.33(m，1H)，3.94-4.15(m，3H)，3.80(m，1H)，3.23-3.39(m，4H)，2.99(t，1H，J＝12.8Hz)，1.98(m，1H)，1.97(m，1H)，1.76(m，3H)，1.48(s，9H)，0.73(d，3H，J＝6.8Hz)，0.29(d，3H，J＝6.8Hz)；LCMS(条件A)：t_R＝4.65分钟；497(M+H)⁺，441(M-Bu+H)⁺，397(M-Boc+H)⁺。

步骤2

于0℃，向步骤1的产物(3.91g，7.89mmol)的THF(45ml)及水(11ml)溶液中加入H₂O₂(30％水溶液，3.9ml)，接着加入LiOH(378mg，15.78mmol，溶于24ml的水中，声波处理至LiOH完全溶解)。于0℃18小时后，加入饱和Na₂SO₃水溶液猝灭反应，并于23℃搅拌2小时。将所有的挥发物除去，以NaHCO₃稀释残余物，以CH₂Cl₂(3x)萃取，酸化至pH 2(1N HCl)，以NaCl(s)盐析，并以Et₂O(3x)萃取。将合并的有机层以水(1x)及盐水(1x)冲洗，干燥(Na₂SO₄)并真空浓缩，得到产物(2.24g，5.80mmol，74％)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ6.71(m，2H)，6.57(m，1H)，4.09(m，1H)，3.90(m，1H)，3.49(m，1H)，3.10-3.23(m，2H)，2.86(m，1H)，2.64(m，1H)，1.47-2.00(m，4H)，1.48(s，9H)；LCMS(条件A)：t_R＝3.93分钟；386(M+H)⁺，330(M-Bu+H)⁺，286(M-Boc+H)⁺。

步骤3

于-78℃，向步骤2的产物(2.23g，5.80mmol)的DMF(20ml)溶液中，加入NaH(60％，510mg，12.75mmol)，接着加入苄基溴(810μl，6.81mmol)。于18小时期间将反应回温至23℃。真空除去挥发物，并使残余物溶于水-Et₂O中。以Et₂O(2x)萃取水层，调整至pH 3(1M HCl)，以EtOAc(3x)萃取，将合并的有机层干燥(MgSO₄)并减压浓缩。以层析法将残余物纯化(SiO₂，10→50％EtOAc/己烷，含有1％AcOH)，得到回收的起始物质(372mg，0.97mmol)及产物(616mg，22％)；¹HNMR(400MHz，CDCl₃，混有旋转异构体)δ8.0-9.0(bs，1H)，7.21(m，5H)，6.68(m，2H)，6.60(m，1H)，4.50-4.64(m，2H)，3.60-3.83(m，1H)，3.37-3.60(m，2H)，3.07-3.24(m，2H)，2.82(m，1H)，2.60(m，1H)，1.96-2.08(m，1H)，1.79-1.96(m，2H)，1.66(m，1H)，1.40(m，9H)；MS498(M+Na)⁺，420(M-Bu+H)⁺，376(M-Boc+H)⁺。

步骤4

于23℃，将NEt₃(155μL，1.12mmol)及DPPA(145μL，0.67mmol)加到溶于甲苯(3ml)的步骤3的产物(265mg，0.56mmol)中。于95℃3小时后，加入BnOH(240μL，2.24mmol)，接着于80℃搅拌18小时。真空除去挥发物后，将残余物以层析法(SiO₂，5→10％EtOAc/己烷)及正相HPLC(1→10％iPrOH/己烷)纯化，得到产物(103mg，32％)。¹HNMR(400MHz，CDCl₃)δ7.17-7.30(m，10H)，6.57-6.70(m，3H)，5.30(m，1NH)，4.85-5.05(m，2H)，4.40-4.56(m，2H)，4.05(m，1H)，3.65-3.95(m，2H)，3.00-3.60(m，3H)，2.40-2.60(m，1H)，2.05(m，1H)，1.55-1.95(m，3H)，1.41(s，9H)；LCMS(条件A)：t_R＝5.18分钟；581(M+H)⁺，525(M-Bu+H)⁺，481(M-Boc+H)⁺。

步骤5

将步骤4的产物(100mg，172μmol)的MeOH(4ml)溶液以20％Pd(OH)₂/C(40mg)于1atm H₂压下氢化18小时。将混合物过滤并减压浓缩，得到产物(61mg，100％)，其不需要进一步纯化用而用于下个步骤。

步骤6

于EDC-树脂(60mg，84μmol以1.45mmol/g载荷)中，加入步骤5的产物(10mg，28μmol，溶于500μl THF/CH₃CN/DMF，2∶2∶1体积/体积/体积)中，接着加入HOBt(5.7mg，42μmol，溶于200μl THF)及制备2A(6.6mg，34μmol，溶于700μl THF/CH₃CN，1∶1体积/体积)。于23℃将反应温和地震摇18小时后，加入PS-三甲醇氨基甲烷树脂(39mg，170μmol，以4.36mmol/g载荷)及PS-NCO树脂(58mg，85μmol，以1.47mmol/g载荷)。进一步震摇6小时后，将该反应物过滤以THF(2×1ml)冲洗树脂，并真空除去挥发物。使用20％TFA/CH₂Cl₂(3ml)于23℃6小时将产物去保护，接着真空除去挥发物。将产生的残余物暴露于1M HCl/MeOH(300μl)中于23℃30分钟，然后真空浓缩，得到产物(7.7mg，17μmol，60％)。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ6.70-6.84(m，3H)，3.99(m，1H)，3.81-3.88(m，1H)，3.60-3.68(m，2H)，3.48(m，1H)，3.43(m，1H)，3.03-3.15(m，2H)，2.79(m，1H)，2.38-2.66(m，2H)，1.90-2.08(m，5H)，1.15-1.44(m，7H)，0.87(m，3H，J＝7.6Hz)；LCMS(条件A)t_R＝3.42分钟(异构体1)及t_R＝3.63分钟(异构体2)，424(M+H)，406(M-H₂O+H)。

以实施例1所述基本相同的方法，但以制备2Q及4代替，制备实施例1B及1C。

实施例1B

和

¹H NMRδ7.12-7.30(m，5H)，6.79(m，3H)，6.55(m，1H)，4.37(m，1H)，4.30(m，1H)，3.90-4.00(m，1H)，3.80-3.85(m，1H)，3.63(m，1H)，3.54-3.60(m，1H)，3.44(m，1H)，3.03(m，1H)，2.44-2.70(m，5H)，1.80-2.11(m，6H)。异构体1：LCMS(条件A)：t_R＝3.58分钟；458(M+H)。异构体2：LCMS(条件A)：t_R＝3.74分钟；458(M+H)⁺。

实施例1C

¹H NMRδ＝6.70-6.80(m，3H)，4.78(m，1H)，4.07(m，1H)，3.91(m，1H)，3.66-3.72(m，2H)，3.15-3.24(m，3H)，3.00-3.05(m，2H)，2.64(m，1H)，1.80-2.09(m，5H)，1.49(m，1H)，1.39(m，2H)，1.20-1.33(m，4H)，0.90(t，3H，J＝7.2Hz)。LCMS(条件A)：t_R＝3.81分钟；426(M+H)。

实施例1D

和

步骤1

将制备3A(30mg，0.14mmol)、实施例1步骤5(46mg，0.13mmol)、HOBt(18mg，0.13mmol)、EDCI(25mg，0.13mmol)及Et₃N(19μl，0.14mmol)在CH₂Cl₂(5ml)中的混合物于室温下搅拌16小时。以CH₂Cl₂(50ml)稀释混合物并以0.5N NaOH(30ml)冲洗。将有机层干燥(MgSO₄)，浓缩并以PTLC(1∶20 MeOH/CH₂Cl₂)纯化得到所需产物(33mg，46％)。MS m/e 574(M+Na)⁺。

步骤2

将步骤1的产物(33mg，0.060mmol)及TFA(1ml)的CH₂Cl₂(5ml)溶液，于冰水浴中搅拌30分钟，然后于室温搅拌4小时。以CH₂Cl₂(40ml)稀释混合物，并以5N NH₄OH(10ml)冲洗。将有机层干燥(MgSO₄)，浓缩并以PTLC(15％ 2M NH₃/MeOH-85％CH₂Cl₂)纯化，得到异构体1(5.5mg，20％)和异构体2(13mg，48％)。异构体1：¹HNMR(400MHz，CDCl₃)δ6.97(m，1H)，6.71(m，2H)，6.61(m，1H)，4.11(m，1H)，3.88(m，1H)，3.51(m，1H)，3.38(m，1H)，3.05-3.30(m，6H)，2.87(m，1H)，2.60(m，1H)，2.50(m，1H)，1.80-2.10(m，4H)，1.55(m，1H)，1.15-1.50(m，6H)，0.85(m，3H)，0.74(m，3H)。MS m/e 452(M+H)⁺。异构体2：¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ6.55-6.80(m，4H)，3.80-4.30(m，3H)，3.61(m，1H)，2.45-3.35(m，11H)，1.60-1.90(m，5H)，1.15-1.45(m，5H)，0.85(m，6H)。MS m/e 452(M+H)⁺。

实施例2A

和

步骤1

向N-Boc-D-1，2，3，4-四氢异喹啉-3-羧酸(2.60g，9.38mmol)的甲苯/MeOH(5/1，50ml)溶液中，加入(三甲基甲硅烷基)重氮甲烷(2M溶于己烷中)，直到反应中持续的有亮黄色出现。将反应物搅拌5分钟，然后逐滴加入AcOH，直到黄色完全消失为止。将该溶液浓缩，不需要纯化直接使用该粗产物。

于0℃，向一份上述物质(2.30g，7.90mmol)溶液中，分两次加入固体LiAlH₄(600mg，15.8mmol)。让反应回复到室温过夜。18小时后，缓慢加入水(1ml)猝灭反应，接着加入NaOH(1.5ml，25％重量/体积)水溶液，最后加入更多的水(2ml)。将产生的混合物剧烈搅拌1小时，然后过滤及浓缩。将粗残余物以柱层析法纯化(硅胶，0→65％EtOAc/己烷)而得到所需产物(500mg，1.89mmol，24％)。LCMS(条件A)：t_R＝4.2分钟；(M+H)⁺＝264。

向草酰氯(215μl，318mg，2.51mmol)的CH₂Cl₂(5.5ml)的-78℃的溶液中加入DMSO(222μl，245mg，3.13mmol)。5分钟后，通过导管加入前一步骤产物(550mg，2.09mmol)的CH₂Cl₂(5ml)的-78℃的溶液。于-78℃40分钟后，一次性加入DIEA(1.1ml，810mg，6.3mmol)，并从冷浴中将反应物移开。10分钟后，以水及额外的CH₂Cl₂稀释混合物。分离各相，并以CH₂Cl₂萃取水相一次。将有机部分合并，以盐水冲洗，以MgSO₄干燥，过滤并浓缩。粗产物不需要进一步纯化可使用于后续的步骤中。

步骤2

向-20℃的制备1产物(745mg，2.51mmol)的CH₂Cl₂(10.5ml)溶液中加入Et₃N(0.43ml，320mg，3.1mmol)。5分钟后，通过注射器于2分钟内加入二正丁基三氟甲磺酸硼(1M的CH₂Cl₂溶液，2.72ml，2.72mmol)。将反应转移置于冰/盐水浴上，搅拌2小时，然后冷却至-78℃。同时，于5分钟内经导管逐滴加入0℃的步骤1的产物(约2.09mmol)的CH₂Cl₂(3ml)溶液，接着以CH₂Cl₂(1ml)冲洗。将混合物如下逐步回温至室温：于-78℃1.5小时，0℃1.0小时，室温1.0小时。然后加入pH7的磷酸缓冲液(约10ml)及MeOH(约10ml)猝灭反应混合物。以冰/盐水浴将反应混合物冷却，缓慢加入35％H₂O₂/MeOH(1/2，15ml)使反应内部温度维持在＜5℃。待添加完成后，让混合物回温至室温并搅拌45分钟。将混合物进一步以MeOH及水稀释，然后部分浓缩。以EtOAc及盐水稀释混合物。分离各相，然后以EtOAc(4x)萃取水相部分。将合并的有机部分用饱和NaHCO₃及盐水冲洗，然后以MgSO₄干燥，过滤并浓缩。将粗物质以柱层析法(硅胶，0→75％EtOAc/己烷)纯化，得到所需产物(668mg，1.20mmol，57％)。LCMS(条件A)：t_R＝5.3分钟；(M+H)⁺＝559。

步骤3

向0℃的步骤2的产物(610mg，1.09mmol)的THF/水(5/1，6ml)溶液中，加入35％H₂O₂水溶液(0.44ml)，接着加入以声波处理10分钟的LiOH(77mg，1.8mmol)的水(2ml)悬浮液。于0℃将反应物搅拌8小时，然后以Na₂SO₃水溶液(1g溶于5ml水中)稀释，并使其回温至室温过夜。用1N HCl及CH₂Cl₂稀释混合物。分离各相，并以CH₂Cl₂(3x)萃取水层。将合并的有机部分以盐水冲洗，以MgSO₄干燥，过滤并浓缩。以柱层析法将粗残余物纯化(硅胶，0→100％EtOAc/己烷)得到所需产物(305mg，0.682mmol，63％)。LCMS(条件A)：t_R＝4.5分钟；(M+H)⁺＝448。

步骤4

向步骤3的产物(305mg，0.682mmol)的甲苯(3.5ml)悬浮液中，加入Et₃N(0.19ml，140mg，1.4mmol)，接着加入DPPA(0.18ml，225mg，0.82mmol)。使混合物为均质的。5分钟后，将混合物置于已预热油浴中加热至80℃。4小时后，将反应冷却至室温，不需处理直接浓缩。以柱层析法将粗物质纯化(硅胶，0→100％EtOAc/己烷)得到所需产物(300mg，0.68mmol，99％)。LCMS(条件A)：t_R＝4.9分钟；(M+H)⁺＝445。

步骤5

向步骤4的产物(180mg，0.405mmol)的乙醇(2ml)溶液中，加入1N LiOH(2.0ml，2.0mmol)水溶液。将产生的混合物加热至85℃。4小时后，待反应冷却至室温，以水及EtOAc稀释。分离各相，并以EtOAc(4x)萃取水层。将有机部分混合，以盐水冲洗，干燥(MgSO₄)，过滤并浓缩。以IIPLC(条件B)将粗残余物纯化，得到产物(138mg，0.297mmol，73％)。LCMS(条件A)：t_R＝4.6分钟；(M+H)⁺＝419。

步骤6

以基本如实施例1D步骤1的所述方法，使步骤5的产物(26mg，0.056mmol)与制备3A(13mg，0.059mmol)反应，但用DMF代替CH₂Cl₂，得到粗的偶合产物。以HPLC(条件B)纯化粗产物，得到所需的偶合产物(17mg，0.028mmol，49％)，为1∶1非对映异构体的混合物。向上述物质(14mg，0.023mmol)的CH₂Cl₂(1ml)溶液中，加入4N HCl/二氧六环(1ml)。2小时后，将反应混合物浓缩。将该粗残余物以HPLC(条件C)纯化得到所需化合物，为1∶1非对映异构体的混合物。LCMS(条件A)：t_R＝4.0分钟；(M+H)⁺＝514；¹H NMR(CD₃OD，300MHz)δ7.23(m，8H)，6.90(m，4H)，6.81(m，2H)，4.52-4.24(m，6H)，4.02(br t，J＝9.0Hz，2H)，3.54(m，2H)，3.38(m，3H)，3.32-3.05(m，9H)，2.67(m，5H)，2.54(m，1H)，2.28(dt，Jd＝4.8Hz，Jt＝7.2Hz，1H)，1.61(m，1H)，1.48-1.33(m，6H)，1.30-1.14(m，6H)，0.92(t，J＝7.2Hz，3H)，0.85(t，J＝7.2Hz，3H)，0.68(t，J＝7.5Hz，3H)，0.55(t，J＝7.5Hz，3H)。

实施例2B

使用制备4及实施例2A步骤5的产物，制备上列化合物。¹H NMR(CD₃OD，300MHz)δ7.22(m，4H)，6.88-6.76(m，3H)，4.80(dd，J＝9.9，5.7Hz，1H)，4.48(d，J＝15.6Hz，1H)，4.31(m，2H)，4.07(br d，J＝10.5Hz，1H)，3.68(m，2H)，3.39(dd，J＝13.8，3.0Hz，1H)，3.26-3.02(m，4H)，2.72(dd，J＝13.8，11.1Hz，1H)，1.42(m 2H)，1.26(m，2H)，0.92(t，J＝7.2Hz)。MS m/e 488(M+H)⁺。

使用实施例2A步骤1-6中所述方法，以N-Boc-D-哌可酸(pipecolicacid)代替N-Boc-D-1，2，3，4-四氢异喹啉-3-羧酸，得到下列实施例。

实施例3A

和

异构体1；¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ8.20(m，1H)，6.80(m，3H)，4.10(m，1H)，3.69(m，1H)，3.48(m，1H)，3.40-2.95(m，6H)，2.62(m，2H)，2.32(m，1H)，2.15-1.20(m，13H)，0.87(m，3H)，0.70(m，3H)。MSm/e 466(M+H)⁺。异构体2；¹H NMR(CDCl₃)δ8.22(m，1H)，6.81(m，3H)，4.10(m，1H)，3.70(m，1H)，3.40-2.90(m，7H)，2.80-2.50(m，4H)，2.10-1.15(m，12H)，0.88(m，6H)。MS m/e 466(M+H)⁺。

实施例3B

¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ8.15(m，1H)，6.79(m，3H)，4.83(m，2H)，4.12(m，1H)，3.72(m，2H)，3.38-2.95(m，6H)，2.63(m，1H)，2.10-1.20(m，10H)，0.92(m，3H)。MS m/e 440(M+H)⁺。

实施例4A

步骤1

将N，N-二甲基氨基乙醇(2.60ml，26.2mmol)的无水己烷(50ml)溶液搅拌冷却至-5℃，并缓慢加入nBuLi(2.5M/己烷，21.0ml，52.3mmol)。添加完成后，将反应混合物回温至0℃并搅拌0.5小时。然后将反应混合物冷却至-78℃，并缓慢加入4-氯吡啶(3.00g，26.2mmol)的无水己烷(10ml)溶液。于-78℃将反应混合物搅拌1.5小时，然后逐滴加入制备14(7.97g，21.8mmol)的无水THF(20ml)溶液。添加完成后，将反应混合物回温至0℃，并于0℃再搅拌0.5小时。然后将反应混合物倒入冷H₂O中并以CH₂Cl₂(3x)萃取。将合并的有机层以Na₂SO₄干燥。以硅胶层析将浓缩的残余物纯化(EtOAc/己烷，0→25％)，得到淡棕色油状产物(4.45g，43％)。¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ8.31(d，J＝2.8Hz，1H)，7.40-7.05(m，11H)，6.87(d，J＝1.6Hz，1H)，6.55(m，1H)，6.35(m，2H)，5.15(s，br，1H)，4.51(s，br，1H)，3.95(d，J＝14.0Hz，2H)，3.68(d，J＝14Hz，1H)，3.14(m，1H)，2.93(m，1H)，2.45(m，1H)。MS(M+H)⁺＝479(M+H)⁺。

步骤2

向步骤1的产物(1.11g，2.32mmol)的无水乙醇(50ml)溶液中加入乙醇钠(473mg，6.95mmol)。将反应混合物加热至回流3小时，然后加入EtONa(315mg，4.63mmol)。将混合物回流19小时，然后转移至一玻璃压力管中，另加入EtONa(473mg，6.95mmol)。将该混合物加热至120℃ 22小时，然后加热至150℃ 8小时。待混合物冷却至室温后，将其倒入饱和的NH₄Cl中，并以CH₂Cl₂(3x)萃取。将合并的有机层以Na₂SO₄干燥。以PTLC(EtOAc/己烷，1∶4)将浓缩的残余物分离，得到产物(0.75g，66％)。¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ8.21(d，J＝6.0Hz，1H)，7.40-7.05(m，10H)，6.62(m，1H)，6.58(m，1H)，6.31(m，2H)，6.20(d，J＝2.0Hz，1H)，5.19(s，1H)，4.06(d，J＝14.4Hz，2H)，3.90(m，1H)，3.78(m，1H)，3.69(d，J＝14.4Hz，2H)，3.10(m，1H)，2.92(m，1H)，2.35(m，1H)，1.35(t，J＝6.8，3H)。MS m/e 489(M+H)⁺。

步骤3

将步骤2的产物(161mg，0.330mmol)、20％Pd(OH)₂/C(161mg)及AcOH(0.1ml)溶于MeOH(10ml)中，于室温1atm H₂压下搅拌3小时，然后以硅藻土过滤。将浓缩的残余物以PTLC(7MNH₃/MeOH∶CH₂Cl₂＝1∶10)分离，得到产物(73.2mg，72％)。¹HNMR(CDCl₃，400MHz)δ8.30(d，J＝5.6Hz，1H)，6.84(d，J＝2.8Hz，1H)，6.69(m，1H)，6.63(m，2H)，6.58(m，1H)，4.66(d，1H)，4.05(q，J＝6.8Hz，2H)，3.38(m，1H)，2.63(m，1H)，2.38(m，1H)，1.40(t，J＝7.2Hz，3H)。MS m/e 309(M+H)⁺。

步骤4

以实施例1D步骤1所述方法，使步骤3的产物与制备3A反应，得到不同的非对映异构体产物。

异构体1(高Rf)：¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ8.28(d，J＝5.6Hz，1H)，6.74(s，1H)，6.70(m，1H)，7.51(m，3H)，6.35(m，1H)，4.81(d，J＝2.8Hz，1H)，4.54(m，1H)，4.02(m，2H)，3.37(m，2H)，3.21(m，2H)，2.70-2.45(m，3H)，2.39(m，1H)，1.59(m，1H)，1.50-1.20(m，8H)，0.87(t，J＝8.6Hz，3H)，0.73(t，J＝8.6Hz)。MS m/e 504(M+H)⁺。

异构体2(低Rf)：¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ8.29(d，J＝5.6Hz，1H)，6.73(m，2H)，6.52(m，3H)，6.31(m，1H)，4.79(m，1H)，4.55(m，1H)，4.02(m，2H)，3.30-3.05(m，4H)，2.75-2.50(m，3H)，2.41(m，1H)，1.81(m，1H)，1.70-1.20(m，8H)，0.89(m，6H)。MS m/e 504(M+H)⁺。

步骤5

将步骤4的产物(异构体1，17.0mg，0.034mmol)、PtO₂(17.0mg)及乙酸(5ml)于氢气氛下搅拌24小时，然后以硅藻土过滤。将浓缩的残余物以HPLC(C-18，25ml/min，10-95％MeCN/H₂O，含有0.1％HCO₂H)分离，得到甲酸盐产物。LCMS(条件A)t_R＝2.71分钟；m/e510(M+H)⁺。

使用适当的起始原料及基本相同的方法，制备下列化合物：

实施例5A

步骤1

将哌嗪-2-酮(1g，10mmol)溶于CH₂Cl₂(40ml)中，并加入Boc₂O(2.4g，11mmol，1.1eq)、Et₃N(2.02g，20mmol，2eq)及DMAP(0.024g，0.2mmol，2mol％)。将该混合物于室温搅拌16小时后，用1N HCl酸化。将有机层分离出，用饱和NaHCO₃及盐水冲洗，干燥(Na₂SO₄)并真空浓缩，得到白色固体产物(1.8g，90％)。¹H NMR(CDCl₃，300MHz)δ6.70(1H，bs)，4.08(2H，s)，3.62(2H，t，J＝6.0Hz)，3.37(2H，m)，1.46(9H，s)。

步骤2

向步骤1的产物(1.17g，5.87mmol)的DMF(25ml)溶液中，于室温下加入NaH(60％矿物油分散液，352mg，8.8mmol，1.5eq)，并将产生的混合物于室温下搅拌2小时。加入苄基溴(0.84ml，7.04mmol，1.2eq)，并于70℃加热反应物16小时。待反应混合物冷却至室温，小心的逐滴加入MeOH猝灭过量的NaH。真空蒸发溶剂，将残余物以层析(SiO₂，70％ EtOAc/己烷)，得到白色固体产物(1.6g，95％)。¹H NMR(CDCl₃，300MHz)δ7.28(5H，m)，4.62(2H，s)，4.16(2H，s)，3.58(2H，m，J＝5.1Hz)，3.25(2H，m，J＝5.4Hz)，1.46(9H，s)。

步骤3

向二异丙胺(3.712g，36.68mmol)的无水THF(20ml)溶液中，于-78℃加入2.5M BnLi的己烷溶液(14.2ml，35.5mmol)。5分钟后，将该溶液置于冰水浴中搅拌30分钟。将混合物再次冷却到-78℃，加入步骤2的产物(8.875g，30.57mmol)的THF(30ml)溶液，并于-78℃将混合物搅拌1.5小时。加入制备14(12.1g，33.11mmol)的THF(20ml)溶液，将产生的混合物回温至室温过夜。使混合物在乙醚(150ml)及水(200ml)之间分配。将水层以乙醚萃取(3×150ml)。将合并的有机层干燥(MgSO₄)，浓缩并以柱层析法纯化(SiO₂，梯度0-20％EtOAc/己烷)，得到淡黄色固体(9.00g，41％)。MS m/e 656(M+H)⁺。

步骤4

将步骤3的产物(495mg，0.755mmol)、20％Pd(OH)₂/C(493mg)及催化量乙酸的混合物溶于EtOH(15ml)中，于室温H₂(1atm)下搅拌5小时。用硅藻土垫过滤混合物并浓缩。将残余物溶于CH₂Cl₂(50ml)中，以NH₄OH(15ml)水溶液冲洗。将有机层干燥(MgSO₄)并浓缩，得到产物(326mg，91％)。MS m/e 476(M+H)⁺。

步骤5

于室温下，将步骤4的产物(56mg，0.12mmol)、制备2JJ(24mg，0.14mmol)、HOBt(19mg，0.14mmol)、EDCI(54mg，0.28mmol)及三乙胺(57mg，0.57mmol)于CH₂Cl₂(5ml)中的混合物搅拌17小时。以CH₂Cl₂(50ml)稀释混合物，以5％柠檬酸及饱和碳酸氢钠冲洗，干燥(MgSO₄)，浓缩并以PTLC(5％MeOH/CH₂Cl₂)纯化，得到产物(65mg，86％)。MS m/e 627(M+H)⁺。

步骤6

将步骤5的产物(15mg，0.024mmol)及TFA(0.4ml)的CH₂Cl₂(3ml)溶液搅拌1.5小时。将混合物浓缩并以PTLC(5％2MNH₃/MeOH-95％CH₂Cl₂)纯化，得到产物(11mg，89％)。¹H NMR(CDCl₃)δ7.15-7.35(m，5H)，6.72(m，2H)，6.61(m，1H)，6.42(b，1H)，5.64(m，1H)，5.31(b，1H)，5.14(m，2H)，4.62(d，1H，J＝14.8Hz)，4.51(m，2H)，4.03(m，1H)，3.80(m，2H)，3.50(m，1H)，3.37(m，3H)，3.15(m，2H)，3.02(m，1H)，2.92(m，3H)，2.39(m，2H)。LCMS(条件A)：t_R＝2.74分钟，m/e 527(M+H)⁺。

实施例5LL

步骤1

以类似实施例5A步骤5的方法将实施例5A步骤4的产物(56mg，0.12mmol)、制备2JJ(24mg，0.14mmol)混合物偶合。将粗产物以PTLC(5％MeOH/CH₂Cl₂)纯化得到产物(65mg，86％)。MS m/e 627(M+H)⁺。

步骤2

将步骤1的产物(50mg，0.080mmol)及10％Pd/C(20mg)于EtOH(5ml)中的混合物于H₂(1atm)下搅拌4小时。将混合物过滤并浓缩得到产物(46mg，91％)。

步骤3

将步骤2的产物(46mg，0.073mmol)及TFA(1ml)的CH₂Cl₂(4ml)溶液于室温搅拌1小时。将混合物浓缩，并以PTLC(8％2MNH₃/MeOH-CH₂Cl₂)纯化得到产物(24mg，62％)。¹H NMR(CDCl₃)δ7.15-7.35(m，5H)，6.72(m，2H)，6.60(m，1H)，6.37(m，1H)，4.62(m，1H)，4.49(m，2H)，3.94(m，1H)，2.7-3.5(m，12H)，2.34(m，2H)，1.44(m，3H)，0.83(t，3H，J＝7.2Hz)。LCMS(条件A)：t_R＝2.64分钟，m/e 529(M+H)⁺。

实施例5MM

将实施例5HH(26mg，0.045mmol)与Pd(OH)₂/C(40mg)在MeOH(8ml)中的悬浮液于H₂下搅拌1.5小时。将混合物过滤并蒸发滤液。将残余物以PTLC纯化得到产物(22mg，88％)。LCMS(条件A)t_R＝3.54分钟，m/e 585(M+H)⁺。

实施例5NN

以类似实施例5MM的方法，从实施例5II制备实施例5NN。LCMS(条件A)t_R＝3.26分钟，m/e 577(M+H)⁺。

实施例6

以类似实施例5A的方法，但以制备2JJ代替步骤5中所用的制备2LL，将制备15转变为产物。LCMS(条件A)t_R＝2.83分钟，m/e 473(M+H)⁺

实施例7

以类似实施例5A方法，但以制备2JJ代替步骤5中所用的制备2LL，将制备16转变为产物。LCMS(条件A)：t_R＝2.82分钟，m/e 513(M+H)⁺。

实施例8A

步骤1

向实施例5A步骤3的产物(1.32g，2.01mmol)的THF(27ml)溶液中，加入2M BH₃-SMe₂THF(4.0ml)溶液，并将混合物加热至60℃2.5小时。将混合物用饱和的柠檬酸(25ml)处理，并以EtOAc(3×40ml)萃取。将合并的有机层蒸发至干，使残余物在CH₂Cl₂(100ml)及NH₄OH水溶液(30ml)之间分配。将有机层干燥(MgSO₄)、浓缩，并经柱层析(SiO₂，EtOAc/己烷0-20％梯度)纯化，得到产物(1.16g，90％)。MS m/e 642(M+H)⁺。

步骤2

将步骤1的产物(1.16g，1.81mmol)、20％Pd(OH)₂/C(1.17g)及催化量的AcOH混合物溶于EtOH(12ml)中，于室温H₂(1atm)下搅拌16小时。用硅藻土垫过滤混合物并浓缩。将残余物以CH₂Cl₂(40ml)处理，以NH₄OH(20ml)水溶液冲洗。将有机层干燥(MgSO₄)并浓缩，得到产物(611mg，91％)。MS m/e 372(M+H)⁺。

步骤3

向置于冰水浴中的步骤2的产物(92mg，0.25mmol)与Et₃N(35μl，0.25mmol)的CH₂Cl₂溶液(5ml)中逐滴加入苯磺酰氯(43mg，0.25mmol)的CH₂Cl₂溶液(3ml)。将混合物于冰水浴中搅拌1.5小时，以CH₂Cl₂(40ml)稀释，并以1N NaOH(30ml)冲洗。将有机层干燥(MgSO₄)浓缩，并以PTLC(5％，MeOH/CH2Cl2)纯化，得到产物(106mg，84％)。MS m/e 512(M+H)⁺。

步骤4

以类似于实施例5A步骤5的方法，将步骤3的产物(106mg，0.207mmol)与制备2LL(43mg，0.23mmol)偶合。将粗产物以PTLC(3％，MeOH/CH₂Cl₂)纯化，得到产物(52mg，37％)。MS m/e 701(M+Na)⁺。

步骤5

将步骤4的产物(52mg，0.077mmol)及TFA(0.9ml)溶于CH₂Cl₂(4ml)中，于冰水浴上搅拌30分钟，然后于室温下搅拌2小时。将混合物以CH₂Cl₂(40ml)稀释，以NH₄OH(20ml)水溶液冲洗。将有机层干燥(MgSO₄)，浓缩并以PTLC(5％MeOH/CH₂Cl₂)纯化得到产物(37mg，83％)。¹H NMR(CDCl₃)δ7.72(m，2H)，7.62(m，1H)，7.54(m，2H)，6.76(m，2H)，6.69(d，1H，J＝8.8Hz)，6.61(m，1H)，4.37(m，1H)，3.72(m，1H)，3.52(m，2H)，3.41(m，1H)，3.22(m，3H)，3.01(m，3H)，2.80(m，3H)，2.51(m，3H)，2.31(m，1H)，1.43(m，2H)，1.24(m，2H)，0.89(m，3H)。LCMS(条件A)：t_R＝3.09分钟；m/e 579(M+H)⁺。

采用实施例8A中所述基本相同的方法，制备下列实施例。

实施例8C-8III

下表中实施例根据下列方法来制备：

步骤1

于室温下，将实施例10A步骤1的产物(969mg，2.10mmol)、制备2A(395mg，2.14mmol)、EDCI(403mg，2.10mmol)、HOBt(299mg，2.21mmol)及三乙胺(297mg，2.93mmol)于CH₂Cl₂(25ml)中的混合物搅拌16小时。将混合物以CH₂Cl₂(50ml)稀释，以1N NaOH(30ml)冲洗。将有机层干燥(MgSO₄)并浓缩，以柱层析法(SiO₂，梯度MeOH/CH₂Cl₂ 0-3％)纯化得到产物(1.25g，95％)。MS m/e 629(M+H)⁺

步骤2

将步骤1的产物(1.19g，1.89mmol)与20％Pd(OH)₂/C(1.20g)混合物溶于EtOH(20ml)中，于室温H₂下搅拌4小时。用硅藻土垫过滤混合物并浓缩。将残余物在CH₂Cl₂(100ml)及1N NaOH(20ml)之间分配。将有机层干燥(MgSO₄)并浓缩，得到产物(965mg，95％)。MSm/e 539(M+H)⁺。

步骤3

将步骤2的产物(10mg，19μmol)与PS-DIEA(33mg，124μmol)混合物溶于CH₃CN/THF(7∶3，1ml)中，加入磺酰氯(0.5M溶于1，2-二氯乙烷，56μl，28μmol)。将混合物于室温震摇16小时，并过滤至一装有PS-NOC(37mg，57μmol)及PS-三甲醇氨基甲烷(32mg，135μmol)的槽(well)中。将产生的混合物于室温震摇24小时，并过滤。将滤液浓缩并将残余物溶于20％TFA/CH₂Cl₂(1ml)中。将溶液于室温震摇2.5小时并蒸发。加入1N NHCl/MeOH(400μl)，并将混合物震摇30分钟。将混合物蒸发然后真空干燥，得到产物。

实施例9

步骤1

将实施例8A步骤2的产物(419mg，1.13mmol)及苯酮亚胺(240mg，1.28mmol)于CH₂Cl₂(20ml)中的混合物回流16小时。将混合物浓缩并以柱层析法(梯度MeOH/CH₂Cl₂0-6％)纯化得到产物(376mg，62％)。MS m/e 536(M+H)⁺。

步骤2

将步骤1的产物(133mg，0.248mmol)、Et₃N(35μl，0.25mmol)及醋酸酐(25mg，0.25mmol)在CH₂Cl₂(10ml)中的混合物于冰水浴上搅拌30分钟，然后于室温搅拌16小时。将混合物以CH₂Cl₂(40ml)稀释，以1N NaOH(20ml)冲洗。将有机层干燥(MgSO₄)、浓缩，并以PTLC(3％MeOH/CH₂Cl₂)纯化得到产物(116mg，81％)。MS m/e 578(M+H)⁺。

步骤3

将步骤2的产物(116mg，0.200mmol)及羟基胺盐酸盐(186mg，2.67mmol)的EtOH(8ml)及水(2ml)溶液，加热至50℃ 2小时。将混合物浓缩，使残余物在CH₂Cl₂(50ml)及1N NaOH(20ml)之间分配。将有机层干燥(MgSO₄)、浓缩，并以PTLC(8％MeOH/CH₂Cl₂)纯化得到产物(89mg，100％)。MS m/e 414(M+H)⁺。

步骤4

以类似实施例5A步骤5的方法，将步骤3的产物(89mg，0.22mmol)与制备2LL(39mg，0.21mmol)混合物偶合。将粗产物以PTLC(5％，MeOH/C H₂Cl₂)纯化，得到产物(49mg，39％)。MS m/e 581(M+H)⁺。

步骤5

将步骤4的产物(49mg，0.084mmol)及TFA(0.9ml)在CH₂Cl₂(4ml)中的混合物于冰水浴中搅拌30分钟，然后于室温搅拌3小时。以CH₂Cl₂(40ml)稀释混合物，并以NH₄OH(15ml)冲洗。将有机层干燥(MgSO₄)，浓缩并以PTLC(8％ MeOH/CH₂Cl₂)纯化，得到产物(30mg，73％)。¹H NMR(CDCl₃)δ7.21(d，1H，J＝8.8Hz)，6.75(m，2H)，6.62(m，1H)，4.0-4.4(m，3H)，2.9-3.7(m，11H)，2.71(m，3H)，2.45(m，1H)，2.28(m，1H)，2.09(s，3H)，1.44(m，2H)，1.26(m，2H)，0.88(m，3H)。LCMS(条件A)：t_R＝2.17分钟；m/e 481(M+H)⁺。

以实施例9A所述基本相同的方法，制备下列实施例。

实施例10A

步骤1

向实施例5A步骤4的产物(326mg，0.687mmol)的THF(3ml)溶液中，加入2M BH₃-SMe₂的THF(2.0ml)溶液，并将混合物加热至60℃ 16小时。将混合物用饱和的柠檬酸(40ml)处理，并以EtOAc(3×30ml)萃取。将合并的有机层蒸发至干，使残余物在CH₂Cl₂(60ml)和NH₄OH水溶液(20ml)之间分配。将有机层干燥(MgSO₄)、浓缩，得到产物(190mg，60％)。MS m/e 462(M+H)⁺。

步骤2

以类似于实施例5A步骤5的方法，将步骤1的产物(527mg，2.80mmol)与制备2LL的混合物偶合，得到黄色油状产物(832mg，70％)。

步骤3

将步骤2的产物(832mg，1.32mmol)与Pd(OH)₂/C(670mg)的MeOH(15ml)悬浮液，于H₂气氛下搅拌6小时。将反应混合物过滤并蒸发滤液得到产物(617mg，87％)。MS m/e 539(M+H)⁺。

步骤4

于室温下，将步骤3的产物(18mg，0.034mmol)、K₂CO₃(25mg，0.18mmol)与3-甲基吡啶氯盐酸盐(3-picolyl chloride)(13mg，0.08mmol)在DMF(1ml)中的混合物搅拌18小时。将反应混合物过滤、浓缩并将残余物以制备型HPLC(条件B)处理，得到烷化产物。将产物于1∶4 TFA/H₂Cl₂(2ml)中搅拌2小时，然后浓缩。将残余物溶于1NHCl/MeOH中并蒸发得到产物盐酸盐，为淡黄色固体(9mg)。LCMS(条件A)t_R＝2.13分钟；m/e 530(M+H)⁺。

使用适当的烷化剂及与实施例10A所述基本相同的方法，制备下列实施例。

实施例11A

和

根据实施例2A方法，但以N-Boc-顺-4-苄基氧基-D-脯氨酸替代N-Boc-D-1，2，3，4-四氢异喹啉-3-羧酸，并使用制备2A取代制备3A，制备产物。得到的产物为两种非对映异构体混合物，其可通过反相HPLC(条件C)来分离。非对映异构体1：¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ8.40(bs，1H)，7.20-7.35(m，5H)，6.73-6.85(m，3H)，4.51(m，2H)，4.29(m，1H)，3.99(m，1H)，3.81(m，1H)，3.68(m，1H)，3.35-3.46(m，3H)，3.17(m，3H)，2.94-3.15(m，1H)，2.34-2.64(m，4H)，2.13(m，1H)，1.97(m，1H)，1.43(m，2H)，1.25(m，2H)，0.88(m，3H)；LCMS(条件A)t_R＝4.28分钟，530(M+H)⁺。非对映异构体2：¹H NMR(400MHz，CD₃OD)□□δ8.45(bs，1H)，7.20-7.40(m，5H)，6.74-6.95(m，3H)，4.55(m，2H)，4.28(m，1H)，4.22(m，1H)，4.01(m，1H)，3.76(m，1H)，3.62(m，1H)，3.37(m，2H)，3.17-3.30(m，2H)，3.09(m，1H)，2.98(m，1H)，2.78(m，1H)，2.30-2.60(m，4H)，2.11(m，1H)，1.36(m，2H)，1.18(m，2H)，0.88(m，3H)；LCMS(条件A)t_R＝4.38分钟，530(M+H)⁺。

使用适当的羧酸，制备下列实施例。

实施例12A

步骤1

以顺-4-羟基-L-脯氨酸合成(4R)-(1-叔丁氧基羰基)-4-羟基-L-脯氨酸方法(Webb等，J.Org.Chem.(1991)，56，3009-3016)为基础，将顺-4-羟基-D-脯氨酸转化为(4R)-(1-叔丁氧基羰基)-4-羟基-D-脯氨酸苄基酯。以由(4R)-(1-叔丁氧基羰基)-4-羟基-D-脯氨酸甲酯合成(4S)-(1-叔丁氧基羰基)-4-羟基-D-脯氨酸甲酯报道的方法(Lowe等，J.Chem.Soc.Perkin Trans.1(1997)，539-546)，进行Mitsunobu倒置法(inversion)，得到(4S)-(1-叔丁氧基羰基)-4-羟基-D-脯氨酸苄基酯。

步骤2

将(4S)-(1-叔丁氧基羰基)-4-羟基-D-脯氨酸苄基酯，以基于其用于对应的甲酯所报道的方法(Bellier等，Med.Chem.(1997)，40，3947-3956)，转变为(4R)-(1-叔丁氧基羰基)-4-苯氧基-D-脯氨酸苄基酯。

步骤3

以类似于实施例2A的方法，但使用制备2A替代制备3A，将步骤2的产物转化为实施例12A。LCMS(条件A)：t_R(异构体1)＝3.23分钟，m/e 516(M+H)⁺；t_R(异构体2)＝3.36分钟，m/e 516(M+H)⁺。

使用适当的羧酸，制备下列实施例。

实施例13A

步骤1

以实施例2A步骤1至5的方法，但以(4R)-1-叔丁氧基羰基-4-苄基氧基-D-脯氨酸苄基酯替代N-Boc-D-1，2，3，4-四氢喹啉-3-羧酸甲酯，将(4R)-1-叔丁氧基羰基-4-苄基氧基-D-脯氨酸苄基酯(Bellier等，Med.Chem.(1997)，40，3947-3956)转变为产物。LCMS(条件A)t_R＝4.84分钟；m/e 925(2M+H)⁺，463(M+H)⁺，407(M-tBu+H)⁺，363(M-Boc+H)⁺。

步骤2

将制备7(40ml)及Et₃N(0.05ml)加到产物1(10ml)的CH₂Cl₂(1ml)的搅拌的溶液中。24小时后，将反应混合物浓缩并经历HPLC(条件B)得到偶合产物。将该偶合产物以类似实施例5A步骤6的方法去保护，得到产物。LCMS(条件A)t_R＝3.21分钟；531(M+H)⁺。

以类似实施例13A的方法，使用适当的制备及中间体，制备下列实施例：

实施例14A

步骤1

于室温下，将(N-苄基氧基羰基)氮杂环丁烷-3-羧酸(根据Macdonald等，J.Med.Chem.，(2002)；45，3878来制备)(325mg，1.38mmol)及实施例13A步骤1的产物(320mg，0.69mmol)、HOAt(330mg，2.42mmol)、HATU(790mg，2.08mmol)和Et₃N(580μl，4.15mmol)的于MDF(8ml)中的混合物搅拌16小时。将该混合物在EtOAc及水之间分配，以水及饱和NaCl冲洗有机层，干燥(MgSO₄)、浓缩，以层析法纯化(SiO₂，0-2％MeOH/CH₂Cl₂)得到偶合产物(402mg，86％)：LCMS(条件A)：t_R＝4.99分钟；m/e 680(M+H)。将偶合产物(220mg，0.323mmol)及20％Pd(OH)₂/C(20mg)溶于EtOH(11ml)中，于室温50psi H₂压下搅拌，以TLC监测反应完成后将混合物过滤。将产生的残余物以PTLC(8％(2M NH₃/Me OH)/CH₂Cl₂)纯化，得到产物。LCMS(条件A)：t_R＝4.49分钟；m/e 546(M+H)，490(M-^tBu+H)，446(M-Boc+H)。

步骤2

以基本如实施例5A步骤5的方法，将步骤1的产物与戊酸偶合。以类似实施例5A步骤6的方法将偶合产物经历TFA，得到产物。LCMS(条件A)：t_R＝4.90分钟；MS m/e 580(M+H)，560(M-H₂O+H)。

使用适当的羧酸，由实施例14步骤1的产物制备下列实施例。

于室温下，将实施例14步骤1的产物与适当的磺酰氯(1.2当量)及Et_3 N(2.0当量)于CH₂Cl₂中反应来制备以下实施例。待反应完成后以CH₂Cl₂/水稀释反应混合物，以盐水(1x)冲洗，将有机层(MgSO₄)干燥，并浓缩。以类似实施例5A步骤6的方法，用TFA处理残余物，得到产物。

实施例15A

步骤1

于室温下，向3-苄基-4-咪唑啉酮(1.07g，6.07mmol)(根据Pinza等，Liebigs Ann.Chem.(1988)，993所制备)的CH₂Cl₂(80ml)溶液中，加入Et₃N(7滴)及Boc₂O(1.39g，6.38mmol)。20小时后，以水稀释反应混合物，并剧烈搅拌10分钟。分离各相，以CH₂Cl₂(2x)萃取水相。将有机部分合并，以盐水冲洗，以MgSO₄干燥，过滤并浓缩。将粗残余物以层析法(硅胶，0→50％EtOAc/己烷)纯化，得到所需产物(1.37g，82％)。

步骤2

于-78℃，向二异丙胺(0.17ml，1.20mmol)的THF(1mL)溶液中，加入正-BuLi(1.55M溶于己烷中，0.74ml，1.15mmol)。5分钟后，将混合物回温至0℃，又20分钟后，再冷却至-78℃。向该混合物中加入-78℃的步骤1的产物(304mg，1.10mmol)的THF(3.5ml)溶液。将产生的混合物于-78℃搅拌1小时。然后加入制备14的产物(366mg，1.00mmol)的THF(2ml)溶液。将产生的溶液于-78℃搅拌1.5小时，然后以水及Et₂O稀释。待回温至室温后，分离各相，以Et₂O(3x)萃取水相。将有机部分合并，以盐水冲洗，以MgSO₄干燥，过滤并浓缩。将粗残余物以层析法(硅胶，0→65％EtOAc/己烷)纯化，得到所需产物(288mg，45％)。

步骤3

向烧瓶中装入步骤2的产物(325mg，0.506mmol)、EtOAc(10ml)、AcOH(0.050ml)及Pd(OH)₂/C(200mg)。将烧瓶气体排空并从气球充入H₂(7x)，然后保持在H₂气球压力下。20小时后，另外加入Pd(OH)₂/C(100mg)接着加入AcOH(0.050ml)。另外6小时后，以硅藻土过滤混合物以足量的EtOAc冲洗，并将产生的滤液浓缩。将粗残余物以层析法(硅胶，0→15％7N NH₃/MeOH溶于CH₂Cl₂)纯化，接着以PTLC(5％7N NH₃/MeOH于CH₂Cl₂中)纯化，得到所需产物(87mg，37％)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ7.28(m，5H)，6.76-6.63(m，3H)，4.72-4.38(m，5H)，3.95(d，J＝8.8Hz，1H)，3.32(br d，J＝13.2Hz，1H)，3.09(m，0.2H)，2.77(m，1H)，2.67(m，0.2H)，2.44(dd，J＝15.2，10.0Hz)，1.45(s，9H)。

步骤4

于制备2A(13mg，0.072mmol)及步骤3的产物(30mg，0.065mmol)的DMF(1ml)溶液中加入PyBOP(44mg，0.085mmol)及DIEA(0.045ml，0.26mmol)。将混合物于室温下搅拌一天。以EtOAc(1ml)及己烷(1ml)稀释。将混合物以水(3×1ml)冲洗，将有机层干燥(Na₂SO₄)并真空浓缩。将残余物以层析法(SiO₂，70％EtOAc/己烷)纯化，得到偶合产物(24mg，60％)。将该偶合产物用4N HCl的二氧六环溶液(2ml)处理30分钟。将混合物真空浓缩得到产物(26.3mg，100％)。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ8.20(m，1H)，7.31(m，5H)，6.84(m，2H)，6.78(m，1H)，4.72-4.40(m，5H)，4.34(m，1H)，4.22(m，1H)，3.40(m，2H)，3.30-2.90(m，5H)，2.78(m，1H)，2.42(m，1H)，2.22(m，1H)，1.42(m，2H)，1.23(m，2H)，0.88(t，J＝7.6Hz，3H)；LCMS t_R＝3.18分钟；529(M+H)⁺。

以实施例15A所述基本相同的方法，及使用适当的制备，制备下列化合物：

BACE-1克隆、蛋白质表达及纯化

一种预知的可溶性的人类BACE1(sBACE1，对应于氨基酸1-454)是由PCR使用优化的-GC cDNA PCR药剂盒，由全长BACE1 cDNA(全长的人类BACE1 cDNA，于pCDNA4/mycHisA构建；多伦多大学)所产生。将使用Klenow由pCDNA4-sBACE1myc/His做钝端切割Hindlll/Pmel片段，亚克隆到pFASTBACI(A)(Invitrogen)的Stu I位置。sBACE1myc/His重组体bacimid由DH10Bac细胞(GIBCO/BRL)转座(transposition)所产生。随后，将sBACE1myc/His bacmid构建物使用细胞转染剂(CellFectin)(Invitrogen，加州圣地亚哥)转染于sf9细胞，以产生重组的杆状病毒。将sf9细胞培养于含有3％热灭活的FBS及0.5X青霉素/链霉素溶液的SF 900-II培养基(Invitrogen)中。使用五毫升的高效价纯化的sBACE1myc/His病毒感染1L对数成长sf9细胞72小时。以3000xg将完整的细胞离心15分钟成团。收集含有分泌性sBACE1的上清液，并以100mM HEPES，pH 8.0稀释50％v/v。将稀释的培养基装入Q-琼脂糖凝胶(Q-sepharose)柱中。以缓冲液A(20mM HEPES pH8.0，50mM NaCl)冲洗Q-琼脂糖凝胶柱中。

蛋白质用缓冲液B(20mM HEPES pH 8.0，500mM NaCl)从Q-琼脂糖柱中洗脱出来。汇集得自Q-琼脂糖凝胶柱的蛋白质峰，装入Ni-NTA琼脂糖柱中。以缓冲液C(20mM HEPES，pH 8.0，500mM NaCl)冲洗Ni-NTA柱。然后以缓冲液D(缓冲液C+250mM咪唑)洗脱结合的蛋白。将利用Bradford分析(Biorad，CA)测定峰蛋白部分，以Centricon30浓缩器(Millipore)浓缩。以SDS-PAGE及Commassie蓝染色(Commassie Blue staining)测得sBACE1纯度约为90％。N-端排序显示高于90％纯度的sBACE1含有前结构域(prodomain)，因此该蛋白称为sproBACE1。

肽水解试验

抑制剂、以APPsw底物标记25nM EuK-生物素(Euk-KTEEISEVNLDAEFRHDKC-生物素；CIS-Bio International，法国)、5μM未标记APPsw肽(KTEEISEVNLD AEFRHDKC，American PeptideCompany(美国肽公司)，Sunnyvale，CA)、7nM sproBACE1、20mMPIPES pH 5.0、0.1％Brij-35(蛋白等级，Calbiochem，加州圣地亚哥)及10％甘油，于30℃预先温育30分钟。以每等分试样5μl加入底物引发反应，使总体积为25μl。于30℃3小时后，加入含有50mM Tris-HClpH 8.0，0.5M KF、0.001％Brij-35、20μg/ml SA-XL665(与链霉亲和素偶合的交联别蓝藻蛋白；CIS-Bio International，法国)(0.5μg/每孔)等量的2x终止缓冲液以终止反应。在培养前，将测定板短暂震摇，以1200xg离心10秒，使所有的液体进入测定板的底部。使用337nm激光激发样本，于PackardHTRF平板读出器进行HTRF测量，接着以50μs延迟时间测定，并以400μs延迟时间同时测量620nm及665nm发射波长读数。

抑制剂(I)IC₅₀测定值通过在不同浓度/固定浓度的酶及底物存在下，测定665nm相对荧光除以620nm相对荧光(665/620比例)百分比变化而确定。此数据非线性回归分析采用GraphPad Prism 3.0软件，选择容许变化斜率的四参数逻辑方程式进行。Y＝基底值(Bottom)+(最大值(top)-基础值)/(1+10^(LogEC50-X)^*Hill斜率))；X为I浓度的对数值，Y为比例百分数变化，且Y以S形自基底至最大值。

本发明化合物的IC₅₀范围为从约0.1至约26,000nM，优选为约0.1至约1000nM，更优选从约0.1至约100nM。优选的立体化学化合物的IC₅₀值范围为约0.1至约500nM，优选为约0.1至约100nM。实施例5FF的IC₅₀为1nM。

本发明关于式I化合物与胆碱酯酶抑制剂的联合方面，可使用乙酰基-和/或丁酰基胆碱酯酶抑制剂。胆碱酯酶抑制剂的实例有他克林、多奈哌齐、利伐斯的明、加兰他敏、吡啶斯的明和新斯狄明，优选他克林、多奈哌齐、利伐斯的明及加兰他敏。

由本发明所述化合物制备药用组合物，其惰性的、药学上可接受的载体可为固体或液体。固体形式制剂包括散剂、片剂、可分散颗粒剂、胶囊、扁囊剂及栓剂。散剂及片剂可包含约5至95％活性成分。适合的固体载体为本领域所知，例如碳酸镁、硬脂酸镁、滑石、糖或乳糖。片剂、散剂、扁囊剂及胶囊可用作适合口服给药的固体剂型。药学上可接受的载体及制备各种组合物的方法的实例可在A.Gennaro(编辑)，Remington′s Pharmaceutical Sciences，第18版，(1990)，Mack出版公司，Easton，Pennsylvania中发现。

液体形式制剂包括溶液、悬浮液及乳液。可提及的实例有水-丙二醇溶液，其用于非经肠注射或向其中加入甜味剂和遮光剂用于口服溶液、悬浮液及乳液。液体形式制剂也可包括用于鼻内给药的溶液。

适用于吸入的喷雾剂可包括溶液及粉体形式的固体，其可与药学上可接受的载体例如惰性压缩气体(如氮气)组合。

也可包括用于口服或非经肠给药的在临用前转变成液体形式制剂的固体形式制剂，所述液体形式包括溶液、悬浮液及乳液。

本发明化合物也可经皮渗透来递送。经皮组合物可为霜剂、洗剂、喷雾剂和/或乳液形式，并可包含于本领域用于此目的常规的基质型(matrix type)或储库型(reservoir type)贴剂。

优选所述化合物系经口服给药。

优选所述药物制剂为单位剂型。对于这样的剂型，所述制剂可细分为含有适量活性成分(例如可达到所需目的有效量)大小适合的单位剂量。

根据特定的应用，制剂单位剂量中活性化合物的量可从约1mg至100mg，优选从约1mg至50mg，更优选从约1mg至25mg范围内变化或调整。

实际所用剂量可依患者需求及所治疗疾病的严重程度而不同。对特定状况判定适合的剂量疗法是在本领域技术人员的范围内。为方便起见，需要时，可在一天内将每日总剂量分开并分次给药。

给予本发明化合物和/或其药学上可接受的盐的量及频率将根据主治医师的判断，考虑诸如患者的年龄、疾病和体重以及所治疗疾病的严重性等因素来调整。一般建议口服每日剂量的范围从约1mg/日至约300mg/日，优选为1mg/日至50mg/日，以二至四个分剂量给药。

当式I化合物与非式I化合物的β-分泌酶抑制剂、HMG-CoA还原酶抑制剂、γ-分泌酶抑制剂、非甾体抗炎药、N-甲基-D-门冬氨酸受体拮抗剂、胆碱酯酶抑制剂或抗-淀粉样蛋白抗体联合用于治疗认知疾病或神经退化性疾病时，所述活性组分可同时或连续给予，或也可给予在药学上可接受的载体中的含有式I化合物及其它任一药物的单一药用组合物。所述组合的组分可用任何常规的口服或非经肠剂型(例如胶囊、片剂、散剂、扁囊剂、混悬剂、溶液、栓剂、鼻腔喷剂等)分开或一起给予。非式I化合物的β-分泌酶抑制剂、HMG-CoA还原酶抑制剂、γ-分泌酶抑制剂、非甾体抗炎药、N-甲基-D-门冬氨酸受体拮抗剂、胆碱酯酶抑制剂或抗-淀粉样蛋白抗体的剂量，可由已公开的数据来决定，其范围可从0.001至100mg/公斤体重。

当分开给予式I化合物及非式I化合物的β-分泌酶抑制剂、HMG-CoA还原酶抑制剂、γ-分泌酶抑制剂、非甾体抗炎药、N-甲基-D-门冬氨酸受体拮抗剂、胆碱酯酶抑制剂或抗-淀粉样蛋白抗体的药用组合物时，可将它们置于包括有单一包装的药剂盒中，一个容器含有混合于药学上可接受的载体中的式I化合物，而另一个分开的容器含有混合于药学上可接受的载体中的其它药物，式I化合物及其它药物的存在量能使所述组合具有治疗效果。当，例如所述组分必须要在不同的时间间隔给予时或这些组分在不同的剂型中时，该药剂盒可有利地用于联合给药。

本发明还包括多药物组合物、药剂盒及治疗方法，例如式I化合物可与HMG-CoA还原酶抑制剂及非甾体抗炎药联合给药。

结合上述具体的实施方案来描述本发明的同时，其许多的选择、修正及变化对本领域技术人员而言，将是显而易见的。所有这样的选择、修正及变化均在本发明的精神及范围内。

Claims

1.一种具有以下结构式的化合物

或其药学上可接受的盐，其中

R¹为

X为-C(R¹⁴)₂-或-N(R)-；

t为1；

各R独立选自H、烷基、烷氧烷基、苯基烷基、烯基、吡啶基甲基、呋喃基甲基、噻吩基甲基、噻唑基甲基、环烷基和环烷基烷基，其中所述烷基、烷氧烷基、苯基烷基、烯基、吡啶基甲基、呋喃基甲基、噻吩基甲基、噻唑基甲基、环烷基和环烷基烷基是未取代的或被1至5个独立选自R³²的基团取代；

R²为H、烷基、苯基或苯基烷基，其中所述苯基和苯基烷基是未取代的或被1至5个独立选自R³²的基团取代；

R³为H或烷基；

R⁴为H或烷基；

R⁵为H或烷基；

各R¹⁴独立选自H、烷基、烯基、卤素、-CN、卤代烷基、苯基、苯基烷基、环烷基；

R⁶和R⁷独立选自H和烷基；

或R⁶和R⁷与其连接的环碳原子一起形成-C(O)-；

R⁸和R⁹独立选自H和烷基；

或R⁸和R⁹与其连接的环碳原子一起形成-C(O)-；

R¹²和R¹³独立选自H和烷基，其中所述烷基是未取代的或被1至5个独立选自R³²的基团取代；

或R¹²和R¹³与其连接的环碳原子一起形成-C(O)-；

R¹⁹为H、烷基、苯基、苯基烷基、吡啶基、唑基、吡嗪基、噻吩基、咪唑基、吡啶基烷基、

唑基烷基、吡嗪基烷基、噻吩基烷基、咪唑基烷基，-SOR¹⁸、-SO₂R¹⁸或-CN，其中所述烷基、苯基、苯基烷基、吡啶基、

唑基、吡嗪基、噻吩基、咪唑基、吡啶基烷基、

唑基烷基、吡嗪基烷基、噻吩基烷基和咪唑基烷基是未取代的或被1至5个独立选自R³²的基团取代；

R¹⁸为H、烷基、苯基、苯基烷基、吡啶基、

唑基、吡嗪基、噻吩基、咪唑基、吡啶基烷基、

唑基烷基、吡嗪基烷基、噻吩基烷基或咪唑基烷基，其中所述烷基、苯基、苯基烷基、吡啶基、

唑基、吡嗪基、噻吩基、咪唑基、吡啶基烷基、唑基烷基、吡嗪基烷基、噻吩基烷基和咪唑基烷基是未取代的或被1至5个独立选自R³²的基团取代；

各R³²独立选自卤素、烷基、烷氧基、-OH、苯基、苯氧基、苯基烷基、-NO₂、-CN、卤代烷基和卤代烷氧基；或相同环碳原子上的两个R³²基团共同形成＝O；

其中烷基指脂族烃基基团，其可为直链或支链，且链上含有1至20个碳原子；

烯基指含有至少一个碳-碳双键的脂族烃基基团，其可为直链或支链，且在链上含有2至15个碳原子；

环烷基指含有3至10个碳原子的非芳族单环或多环环系。

2.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，其中R³、R⁴和R⁵为氢，及R²为苯基烷基，所述苯基烷基是未取代的或被1至5个独立选自R³²的基团取代。

3.权利要求2的化合物或其药学上可接受的盐，其中R²为苄基，其中苄基是未取代的或被1至5个独立选自R³²的基团取代。

4.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，其中X为-C(R¹⁴)₂-，R¹⁴为氢、烷基、烯基、环烷基或苄基，并且R为烷基、烷氧烷基、未取代的苯基烷基、被1至5个独立选自R³²的基团取代的苯基烷基、烯基、环烷基烷基、烷氧烷基、吡啶甲基、呋喃甲基、噻吩基甲基或噻唑基甲基。

5.权利要求4的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述任选被取代的苯基烷基为任选被取代的苄基或任选被取代的苯乙基，其中所述任选的取代基为独立选自卤素、烷基、烷氧基和卤烷基的1或2个R³²基团。

6.权利要求4的化合物或其药学上可接受的盐，其中R为烷基、烷氧基烷基或环烷基烷基，并且一个R¹⁴为氢且其他的是氢或烷基。

7.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，其中X为-N(R)-且各R独立选自氢、烷基、烷氧烷基、环烷基烷基和苄基。

8.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，其中R⁶、R⁷、R⁸、R⁹、R¹²和R¹³各为氢，或R⁸、R⁹、R¹²和R¹³各为氢且R⁶和R⁷一起为＝O。

9.权利要求8的化合物或其药学上可接受的盐，其中R¹⁹为未取代或被1至5个独立选自R³²的基团取代的烷基、-SO₂R¹⁸、吡啶基、唑基、吡嗪基、噻吩基或咪唑基，其中所述吡啶基、

唑基、吡嗪基、噻吩基和咪唑基是未取代的或被1至5个独立选自R³²的基团取代。

10.权利要求9的化合物或其药学上可接受的盐，其中R¹⁹为烷基、苄基、苯基、吡啶基、唑基、吡嗪基、噻吩基或咪唑基，其中所述苄基、苯基、吡啶基、

唑基、吡嗪基、噻吩基和咪唑基是未取代的或被1至5个独立选自R³²的基团取代，或R¹⁹为-SO₂烷基、-SO₂苯基、-SO₂-苄基，

其中所述任选的1至5个R³²基团当存在于苯基上时独立选自卤素、烷基、苯基、烷氧基.卤烷基、苯氧基和-CN；

其中所述任选的1至5个R³²基团当存在于苄基上是独立选自卤素、烷基、烷氧基、氰基和苯基；

其中所述任选的1至5个R³²基团当存在于吡啶基、

唑基、吡嗪基、噻吩基和咪唑基时，独立选自烷基和卤素。

11.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述环氨基环部分

选自：

其中：

R¹²为H或烷基；和

R¹⁹为-S(O)₂R¹⁸、烷基、吡啶基、唑基、吡嗪基、噻吩基或咪唑基，其中所述吡啶基、唑基、吡嗪基、噻吩基和咪唑基是未取代的或被1至5个独立选自R³²的基团取代。

12.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，它具有以下的立体化学结构：

13.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，它选自：

其中各结构式中的Bn代表苄基。

14.一种具有以下结构式的化合物

或其药学上可接受的盐，其中

R¹为

R选自氢、烷基、烷氧烷基、环烷基烷基或苄基，其中所述烷基、烷氧基、烷氧烷基、环烷基烷基和苄基未取代或被1至5个独立选自R³²的基团取代；

R³为H或烷基；

R⁴为H或烷基；

R⁵为H或烷基；

R⁶和R⁷独立选自H和烷基；

或R⁶和R⁷与其连接的环碳原子一起形成-C(O)-；

R⁸和R⁹独立选自H和烷基；

或R⁸和R⁹与其连接的环碳原子一起形成-C(O)-；

或R¹²和R¹³与其连接的环碳原子一起形成-C(O)-；

唑基、吡嗪基、噻吩基、咪唑基、吡啶基烷基、

R¹⁸为H、烷基、苯基、苯基烷基、吡啶基、唑基、吡嗪基、噻吩基、咪唑基、吡啶基烷基、唑基烷基、吡嗪基烷基、噻吩基烷基或咪唑基烷基，其中所述烷基、苯基、苯基烷基、吡啶基、

唑基、吡嗪基、噻吩基、咪唑基、吡啶基烷基、

环烷基指含有3至10个碳原子的非芳族单环或多环环系。

15.一种具有以下结构式的化合物

或其药学上可接受的盐，其中

R¹为

各R独立选自氢、烷基、烷氧烷基、环烷基烷基及苄基，所述烷基、烷氧烷基、环烷基烷基或苄基未取代或被1至5个独立选自R³²的基团取代；

或R¹为

R为氢、烷基、烷氧烷基、环烷基烷基或苄基；所述烷基、烷氧烷基、环烷基烷基或苄基未取代或被1至5个独立选自R³²的基团取代；

或R¹为其中

R⁴¹为-C(O)-烷基、-C(O)-环烷基或-SO₂-烷基；

或R¹为

R为氢、烷基、烷氧烷基、环烷基烷基或苄基，所述烷基、烷氧烷基、环烷基烷基或苄基未取代或被1至5个独立选自R³²的基团取代，

且R¹⁴为烷氧基；

R³为H或烷基；

R⁴为H或烷基；

R⁵为H或烷基；

R⁶和R⁷独立选自H和烷基；

或R⁶和R⁷与其连接的环碳原子一起形成-C(O)-；

R⁸和R⁹独立选自H和烷基；

或R⁸和R⁹与其连接的环碳原子一起形成-C(O)-；

或R¹²和R¹³与其连接的环碳原子一起形成-C(O)-；

R¹⁹为H、烷基、苯基、苯基烷基、吡啶基、

唑基、吡嗪基、噻吩基、咪唑基、吡啶基烷基、唑基烷基、吡嗪基烷基、噻吩基烷基、咪唑基烷基，-SOR¹⁸、-SO₂R¹⁸或-CN，其中所述烷基、苯基、苯基烷基、吡啶基、

唑基、吡嗪基、噻吩基、咪唑基、吡啶基烷基、

R¹⁸为H、烷基、苯基、苯基烷基、吡啶基、

唑基、吡嗪基、噻吩基、咪唑基、吡啶基烷基、

唑基、吡嗪基、噻吩基、咪唑基、吡啶基烷基、

环烷基指含有3至10个碳原子的非芳族单环或多环环系。

16.权利要求1、14或15的化合物或其药学上可接受的盐，其中R¹⁹为烷基、苯基烷基或-SO₂R¹⁸。

17.权利要求1、14或15的化合物或其药学上可接受的盐，其中R¹⁹为苯基烷基。

18.权利要求1、14或15的化合物或其药学上可接受的盐，其中R¹⁹为苯基或氟代苄基。

19.权利要求1、14或15的化合物或其药学上可接受的盐，其中R¹⁹为-SO₂R¹⁸，并且R¹⁸为苯基、吡啶基、噻吩基或咪唑基。

20.权利要求16的化合物或其药学上可接受的盐，其中R⁶、R⁷、R⁸、R⁹、R¹²和R¹³各自为氢。

21.权利要求16的化合物或其药学上可接受的盐，其中R⁸、R⁹、R¹²和R¹³各自为氢，并且R⁶和R⁷一起为＝O。

22.权利要求16的化合物或其药学上可接受的盐，其中R⁶、R⁷、R⁹和R¹³各自为氢，并且R⁸和R¹²各自独立选自H和烷基。

23.一种药用组合物，它包含有效量的权利要求1、14或15的化合物或其药学上可接受的盐，及药学上有用的载体。

24.权利要求1、14或15的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于抑制β-淀粉样蛋白斑块在神经组织内、神经组织上或神经组织周围形成，或形成和沉积的药物中的用途。

25.权利要求1、14或15的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗认知或神经退化性疾病的药物中的用途。

26.权利要求25的用途，其中所述认知或神经退化性疾病为阿尔茨海默氏病。

27.一种药用组合物，它含有在药学上有用的载体中的有效量的权利要求1、14或15的化合物或其药学上可接受的盐及有效量的至少一种额外的治疗活性成分，该治疗活性成分选自非如权利要求1中定义的式I化合物的β-分泌酶抑制剂、HMG-CoA还原酶抑制剂、γ-分泌酶抑制剂、非类固醇抗炎药、N-甲基-D-门冬氨酸受体拮抗剂、胆碱酯酶抑制剂和抗-淀粉样蛋白抗体。

28.权利要求27的药用组合物，其中所述HMG-CoA还原酶抑制剂选自阿托伐他汀、洛伐他汀、辛伐他汀、普伐他汀、氟伐他汀及罗苏伐他汀；

所述胆碱酯酶抑制剂选自他克林、多奈哌齐、利伐斯的明、加兰他敏、吡啶斯的明和新斯狄明；

所述非类固醇抗炎药选自布洛芬、萘普生、双氯芬酸、二氟尼柳、依托度酸、氟比洛芬、吲哚美辛、酮洛芬、酮咯酸、萘丁美酮、

丙嗪、吡罗昔康、舒林酸、托美丁、塞来考昔及罗非考昔；以及

所述N-甲基-D-门冬氨酸受体拮抗剂为美卢君。

29.权利要求27的组合物，其中所述至少一种额外的治疗活性成分是选自以下的HMG-CoA还原酶抑制剂：阿托伐他汀、洛伐他汀、辛伐他汀、普伐他汀、氟伐他汀及罗苏伐他汀。

30.权利要求27的组合物，其中所述至少一种额外的治疗活性成分是选自以下的胆碱酯酶抑制剂：他克林、多奈哌齐、利伐斯的明、加兰他敏、吡啶斯的明和新斯狄明。

31.权利要求27的组合物，其中所述至少一种额外的治疗活性成分是选自以下的非类固醇抗炎药：布洛芬、萘普生、双氯芬酸、二氟尼柳、依托度酸、氟比洛芬、吲哚美辛、酮洛芬、酮咯酸、萘丁美酮、

丙嗪、吡罗昔康、舒林酸、托美丁、塞来考昔及罗非考昔。

32.权利要求27的组合物，其中所述至少一种额外的治疗活性成分是N-甲基-D-门冬氨酸受体拮抗剂。

33.权利要求32的组合物，其中所述N-甲基-D-门冬氨酸受体拮抗剂是美卢君。

34.权利要求1、14或15的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于与含有有效量的至少一种选自以下的额外治疗活性成分的药物联合治疗认知或神经退化性疾病的药物中的用途：非如权利要求1中定义的式I化合物的β-分泌酶抑制剂、HMG-CoA还原酶抑制剂、γ-分泌酶抑制剂、非类固醇抗炎药、N-甲基-D-门冬氨酸受体拮抗剂、胆碱酯酶抑制剂和抗-淀粉样蛋白抗体。

35.权利要求34的用途，其中：

所述HMG-CoA还原酶抑制剂选自阿托伐他汀、洛伐他汀、辛伐他汀、普伐他汀、氟伐他汀及罗苏伐他汀；

所述N-甲基-D-门冬氨酸受体拮抗剂为美卢君。

36.一种药剂盒，它包括在单一包装中的用于联合给药的各分开的容器中的药用组合物，其中一个容器包含在药学上可接受的载体中的如权利要求1、14或15中定义的式I化合物或其药学上可接受的盐，而第二个容器包含在药学上可接受的载体中的至少一种选自以下的额外治疗活性成分：非如权利要求1中定义的式I化合物的β-分泌酶抑制剂、HMG-CoA还原酶抑制剂、γ-分泌酶抑制剂、非甾体抗炎药、N-甲基-D-门冬氨酸受体拮抗剂、胆碱酯酶抑制剂和抗-淀粉样蛋白抗体，其联合的量为治疗认知性疾病或神经退化性疾病的有效量。