CN1813910A - 一种具有降糖作用的药物组合物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种具有降糖作用的药物组合物,该药物组合物是由如下原料药制成的:桑叶1~6重量份、葛根1重量份。该药物组合物用于治疗糖尿病,具有抑制α-葡萄糖苷酶的作用。
Description
技术领域
本发明涉及一种药物组合物及其制备方法,具体来说,本发明涉及一种具有降糖作用的药物组合物及其制备方法
背景技术
糖尿病是一组由于遗传和环境因素相互作用,胰岛素相对或绝对缺乏以及靶组织对胰岛素敏感性降低(胰岛素抵抗)引起的碳水化合物、脂肪及蛋白质紊乱综合症,是一种持续高血糖为特征的、慢性、全身性代谢性疾病。发病后若未得到有效治疗,随着病程的延长,可出现广泛的微血管及大血管病变,出现神经、泌尿、循环等多系统的病理改变。
上世纪80年代以来,全球和我国的糖尿病患者人数显著增加,2003年全球糖尿病病人超过1.94亿。有研究者预测到2010年全世界的糖尿病患者将达2亿1千万。其潜在的最大增长人群在亚洲,约占总增长的65%以上。中国糖尿病患病率近年上升3倍以上,20岁以上人群中糖尿病患者由1980年的1.0%上升到1996年的3.2%,患病人数占全球糖尿病病人的约1/5。研制用于糖尿病防治的药物一直是新药开发中的热点和难点之一。
目前,II型糖尿病的口服治疗药物包括胰岛素或胰岛素类似物、磺脲类药物以及最近发展起来的通过改变ATP依赖的钾通道促进胰岛素分泌的非磺脲类药物、双胍类或噻唑烷二酮类药物。这些药物,其有效性是非常确实的,而且也非常经济,但这种治疗方法存在一些潜在的缺点。首先,它们可能增加发生低血糖的危险性,高胰岛素血症被认为可能导致动脉粥样硬化状态,此类药物的另外一个缺点是常导致体重增加。
目前II型糖尿病的口服治疗药物中有一种α-葡萄糖苷酶抑制剂,其作用机理是干扰饮食中碳水化合物的迅速消化和吸收从而达到减少胰岛素的需要量目的。这种方式的治疗方法存在一些潜在的优势,包括不会增加体重,在某些情况下甚至会减少体重,同时不会有高胰岛素血症,而且当单独治疗的时候,不会有低血糖的危险。
阿卡波糖(Acarbose)是第一个被用于临床应用α-葡萄糖苷酶抑制剂,最近发现的小肠刷状缘α-葡萄糖苷酶抑制剂包括米格列醇(miglitol)、伏格列波糖(voglibose)、emiglitate等。对于我国传统的中药,在α-葡萄糖苷酶抑制剂的研究开发方面尚不多见。
本发明的目的是提供一种药物组合物及其制备方法。本发明的目的还提供一种药物组合物的制药用途。
本发明药物组合物的原料药配比为:
桑 叶1~6重量份 葛 根1重量份;
优选桑叶4重量份 葛 根1重量份;
桑 叶3重量份 葛 根1重量份;
桑 叶5重量份 葛 根1重量份;
上述本发明药物组合物可以制成临床可接受的任何剂型,如丸剂、散剂、胶囊剂、颗粒剂、滴丸、口服液体制剂。
本发明药物组合物的制备方法为:
原药材经过粉碎后,两药分别或合并用水、酸水(0.01~1.0mol/L的盐酸)、甲醇或乙醇,或含水醇类等常规提取溶剂提取;提取溶剂为原药重量的8~30倍,可重复提取1~5次,然后滤去药渣;滤液(分别或合并)在常压或减压下进行浓缩至一定浓度,加1~4倍体积的醇,使杂质沉淀,或用1~5mol/L的氢氧化钠、氨水调PH值至碱性,再通过离心或过柱除去杂质。过柱可利用大孔树脂和阴阳离子交换树脂进一步纯化,大孔树脂的型号可选用D101,D3520、D201、D301等非极性的大孔树脂;经过上述工艺所得的提取液可以通过减压干燥或喷雾干燥制得干粉,可加入常规敷料制成片剂、胶囊剂和颗粒剂、丸剂、散剂。
实验例1:用反转肠囊技术评价桑叶葛根组合物对α-葡萄糖苷酶抑制剂抑制作用
反转肠囊技术可用于研究小肠酶在温育瓶中对底物的作用。本研究的实验目的是通过此方法对DNJ及受试药物桑葛组合物的α-葡萄糖苷酶抑制作用进行评价。底物的准备与给药:将1%的淀粉溶液加热溶解后,按一定比例加入α-淀粉酶,混均,37℃水浴锅中反应10min,反应结束后与碘液无显色反应,说明淀粉已经完全被分解为寡糖。每个25ml的三角瓶中加入此溶液6ml,再加入各浓度的受试药物备用。
肠囊的制备:断头处死雄性大鼠,在十二指肠上端切开并取出小肠。借助不锈钢针将小肠反转,剪成7-8cm的小段,每段小肠的一端用手术线结扎,在另一端将1ml Krebs-Henseleit缓冲液灌入小肠后结扎,完成了此段肠囊的制备。将各肠囊置于冰冷的Krebs-Henseleit缓冲液中备用。
酶促反应的进行及样品的收集:提前将摇床预热到37℃备用。待所有的肠囊制备完毕,将它们随机加到各三角瓶中,在摇床上以37℃的温度,30转/分的转速进行反应。2h后取出各三角瓶,每瓶加入10μl 1mol/L HCl终止反应。然后从三角瓶中取出肠囊,切开肠囊并使肠囊内的液体与三角瓶内的液体混合,混均后收集样品0.5ml,4℃冰箱保存。
样品中葡萄糖的测定及结果评价:在不同浓度的α-葡萄糖苷酶抑制剂存在的条件下,葡萄糖的释放以无抑制剂时葡萄糖的百分比表示。以抑制百分率对不同抑制剂浓度作图,得剂量反应曲线。
用反转肠囊技术评价α-葡萄糖苷酶抑制剂同猪小肠粘膜葡萄糖苷酶抑制模型一样也是一种体外实验,从实验结果分析,桑叶葛根提取物对葡萄糖苷酶有较强的抑制作用,随着SG浓度的增加,其对葡萄糖苷酶的抑制也随之增加,其抑制曲线的R值较高,说明其相关性较好。
用反转肠囊技术评价桑叶葛根提取物对葡萄糖苷酶的抑制作用
实验药物 | 受试药物终浓度(μg/ml) | 抑制率(%) | 拟合曲线 | IC50(μg/ml) |
SG | 12.49 | 2.73 | ||
62.51 | 24.09 | |||
312.49 | 59.22 | y=17.561Ln(x)-43.925 | 210.6 | |
1562.45 | 85.25 |
实验例2:桑叶葛根组合物对猪小肠粘膜葡萄糖苷酶抑制作用
称取实施例1中的桑叶葛根组合物,配成所需浓度,利用离体猪小肠粘膜葡萄糖苷酶抑制模型在体外测定对猪小肠粘膜葡萄糖苷酶的抑制。
桑叶葛根组合物猪小肠粘膜葡萄糖苷酶
桑叶葛根物浓度(mg/ml) | 粗酶抑制率(%) |
0.0064 | 14.5 |
0.032 | 25.54 |
0.16 | 43.68 |
0.8 | 68.51 |
4.0 | 79.17 |
20.0 | 83.75 |
IC50≈0.16 |
从上表的结果可以分析,本发明组合物对离体猪小肠粘膜葡萄糖苷酶显示了较强的抑制活性
实验例3:桑叶和葛根中药组合物(SG)中两味药材配比的确定
桑叶和葛根降糖复方作为一种α-葡萄糖苷酶抑制剂,通过降低碳水化合物的消化和葡萄糖的吸收来抑制餐后高血糖。应用常规的离体猪小肠粘膜葡萄糖苷酶抑制模型对两味药材不同配比的提取物进行体外活性实验,筛选出活性较高的配比。反应体系由猪小肠粗酶、抑制剂SG提取液和底物麦芽糖组成,反应结束后用葡萄糖试剂盒测定葡萄糖的相对量,计算抑制率。结果见以下图表。最终确定桑叶与葛根药材比例为4∶1。
桑葛样品按不同比例配制
桑葛比例 | 桑叶提取液体积 | 葛根提取液体积 | 总生药浓度 |
1∶1 | 1ml | 1ml | 0.10g/ml |
2∶1 | 2ml | 1ml | 0.15g/ml |
3∶1 | 3ml | 1ml | 0.20g/ml |
4∶1 | 4ml | 1ml | 0.25g/ml |
5∶1 | 5ml | 1ml | 0.30g/ml |
6∶1 | 6ml | 1ml | 0.35g/ml |
桑葛不同比例对粗酶的抑制活性
桑葛比例 | 样品抑制率 |
1∶1 | 80.16% |
2∶1 | 81.14% |
3∶1 | 85.07% |
4∶1 | 89.10% |
5∶1 | 88.79% |
6∶1 | 86.54% |
注:桑叶葛根的提取方法采用水提醇沉的方法
数字1-6表示复方中桑葛的配比。
实验例4:桑叶葛根组合物(SG)对正常大鼠口服淀粉耐量实验的影响
实验动物选用180g左右的Wistar大鼠,♂,分为对照组和给药组,每组5只。对照组每天给予1.44g/kg剂量的桑叶葛根组合物,对照组给予同样体积的蒸馏水,连续给药10天,禁食一夜后,第11天进行口服淀粉耐量实验。剪尾取血,立即测定血糖,作为空腹血糖,然后实验大鼠同时给予受试药(对照组给予蒸馏水)及2g/kg的淀粉溶液,以后依次在30min、60min、120min时剪尾测定血糖。实验结果如下:
桑叶葛根组合物对正常大鼠淀粉耐量试验的影响
组别 | 剂量(g/kg) | 血糖(mmol/l) | |||
0min | 30min | 60min | 120min | ||
对照组SG复方组 | -1.44 | 3.62±0.163.86±0.36 | 6.86±0.635.24±0.57** | 7.22±0.315.36±0.39** | 4.96±0.294.60±0.50 |
**p<0.01,与对照组比较,n=5
从以上结果分析对照组大鼠在给予淀粉溶液30-60min出现血糖峰值,而给药组在给予淀粉后血糖峰值变得平缓,表明本发明所提取桑叶葛根组合物对正常大鼠的肠道α-葡萄糖苷酶有抑制作用。
实验例5:桑叶葛根组合物对链脲佐菌素致血糖升高小鼠糖耐量的影响
桑叶葛根组合物,配制成80mg/ml的水溶液。小鼠受试剂量:3200mg、1600mg、800mg/kg;阿卡波糖:拜耳医药保健有限公司产品,批号:102967,小鼠受试剂量:50mg/kg。链脲佐菌素:SIGMA公司产品,造模剂量150mg/kg,腹腔注射。分组与给药:小鼠随机分为六组:对照组、模型组、阿卡波糖50mg/kg组、受试药3200mg、1600mg、800mg/kg组。各组灌胃给药,给药一次,造模后2周开始给药,共给药17次。对照组灌胃给予等量饮用水。造模方法:除对照组外,各组小鼠禁食12小时后,腹腔注射链脲佐菌素150mg/kg,回笼饲养,2周后造模成功。
取禁食12小时小鼠,尾尖放血一滴,置于稳捷血糖试纸上,用稳捷基础血糖仪测餐前血糖。灌胃给药同时给与淀粉溶液10g/kg,给药容积0.3ml/10g,于灌胃给药后30,80,120min后尾尖放血,测餐后血糖。计算各给药组曲线下面积、各时间点血糖均值、标准差,与对照组相比较,行t检验,比较药效。曲线下面积=(餐后30min血糖+餐前血糖)/2×30min+(餐后30min血糖+餐后80min血糖)/2×50min+(餐后120min血糖+餐后80min血糖)/2×40min
实验结果表明:造模后小鼠基础血糖明显高于对照组,受试药灌胃给药17天后,小鼠基础血糖值较模型组小鼠为低,其中受试药3200mg/kg组小鼠血糖与模型组相比有统计学差异(P<0.01),灌胃给予淀粉后30、80、120min,各组小鼠血糖明显升高,但对照组、各给药组血糖升高幅度均低于模型组,其中受试药3200mg、1600mg/kg组小鼠各时间点血糖于模型组相比有统计学差异(P<0.01,P<0.05)。受试药3200mg、1600mg/kg组小鼠血糖变化曲线下面积与模型组相比亦有统计学差异(P<0.01)。
受试药对STZ所致糖尿病小鼠糖耐量的影响
分组 | 例数 | 剂量(mg/kg) | 空腹血糖 | 餐后血糖 | 曲线下面积 | ||
30min | 80min | 120min | |||||
对照组模型组拜唐平组受试药组 | 121211101211 | -50812.516253250 | 77.75±32.52*200.25±49.71159.09±43.31*192.70±89.85151.33±65.27109.91±30.01** | 146.92±32.65**273.67±85.63201.36±58.40*207.80±86.25152.25±64.96**175.09±64.90** | 156.50±43.85**292.67±86.58206.18±47.80**219.00±87.63133.42±78.45**167.64±63.78** | 137.33±39.41*236.75±112.42191.64±58.81197.20±92.42116.17±84.70**145.36±73.83* | 16832.08±4281.78**31855.42±7511.6623551.82±5122.74**25001.50±9635.3816687.08±8311.45**19103.18±7082.77** |
*p<0.05,**p<0.01,与模型组相比。
实验例6:桑叶和葛根组合物对α-葡萄糖苷酶抑制的增效作用
桑叶提取物和葛根提取物(浓度为0.1g生药/ml)应用猪小肠粘膜葡萄糖苷酶模型测定体外抑制葡萄糖苷酶活性实验,结果发现,桑叶提取物和葛根提取物在体外均有葡萄糖苷酶抑制作用,二者按一定比例复配后这种抑制作用有明显的增强。
桑叶和葛根降糖组合物作为一种α-葡萄糖苷酶抑制剂,通过降低碳水化合物的消化和葡萄糖的吸收来抑制餐后高血糖。应用猪小肠粘膜葡萄糖苷酶模型对两味药材不同配比的提取物进行体外活性实验,筛选出活性较高的配比。反应体系由猪小肠粗酶、抑制剂SG提取液和底物麦芽糖组成,反应结束后用葡萄糖试剂盒测定葡萄糖的相对量,计算抑制率。结果见以下图表。实验结果表明桑叶提取物和葛根提取物以1-6∶1比例混合时猪小肠粘膜葡萄糖苷酶均有抑制作用,以4∶1比例混合时对猪小肠粘膜葡萄糖苷酶的抑制活性最高。
桑葛不同比例三组样品对粗酶的抑制活性
样品 | 桑葛配比 | 样品抑制率 |
桑叶提取液 | 68.55% | |
葛根提取液 | 30.49% | |
桑葛比例 | 1∶1 | 80.16% |
2∶1 | 81.14% | |
3∶1 | 85.07% | |
4∶1 | 89.10% | |
5∶1 | 88.79% | |
6∶1 | 86.54% |
注:桑叶葛根的提取方法采用水提醇沉的方法
数字1-6表示复方中桑葛的配比。
附图说明:
图1桑叶葛根组合物对α-葡萄糖苷酶抑制剂抑制作用曲线图
图2桑叶葛根组合物对正常大鼠淀粉耐量试验的影响曲线图
图3小鼠血糖变化曲线图
实施例1:
桑叶12公斤,葛根3公斤,一提加水225L,微沸状态保持2小时,过滤,二提滤渣再加200L水,微沸状态保持1小时,过滤,合并两次滤液,减压浓缩,至浓缩液的体积为50L,以上浓缩液加入95%乙醇100L,边加入边搅拌,置冷库(5-10℃)醇沉48小时,离心取上清液,减压浓缩挥去乙醇得到体积为5.5L的浓缩液。喷雾干燥得到提取物1.1公斤,出膏率为7%。制成片剂。
实施例2:
桑叶15公斤,一提加水300L,微沸状态保持2小时,过滤,二提滤渣再加200L水,微沸状态保持1小时,过滤,合并两次滤液,减压浓缩,至浓缩液的体积为50L,过001×7阳离子交换树脂,用0.5N的氨水洗脱,收集洗脱液,浓缩;过大孔树脂和离子交换树脂进一步纯化;减压浓缩挥去乙醇得到浓缩液;葛根3公斤,一提30%乙醇30L,回流提取2小时,过滤,二提滤渣再加30%乙醇30L,回流提取1小时,过滤,合并两次滤液,减压浓缩,浓缩液上D101大孔树脂,用50%乙醇洗脱,收集洗脱液,减压浓缩挥去乙醇得到浓缩液;合并两次浓缩液,喷雾干燥得到本发明组合物,将喷雾干燥得到的桑叶葛根提取物加入木糖醇或麦芽糖醇、甜叶菊素,干法制粒,经过整粒后,制成各种规格的颗粒剂。
实施例3:
桑叶12公斤,一提加0.05mol/l的盐酸225L冷浸2小时,过滤,二提加0.05mol/l的盐酸180L冷浸1.5小时,合并两次滤液,用0.2mol/l的氢氧化钠调PH值至9,放置过夜,离心收集沉淀,烘干,粉碎得桑叶提取物;葛根3公斤,一提30%乙醇30L,回流提取2小时,过滤,二提滤渣再加30%乙醇30L,回流提取1小时,过滤,合并两次滤液,减压浓缩,浓缩液上D101大孔树脂,用50%乙醇洗脱,收集洗脱液,减压浓缩挥去乙醇得到浓缩液,喷雾干燥,得葛根提取物;合并两种提取物,将桑叶葛根提取物干压后制粒成形,直接填装胶囊,分将在密闭铝塑包装中,制成各种规格的胶囊剂。
实施例4:桑叶葛根中药复方中指标成分的高效液相色谱法(HPLC)
精密称取实施例1的桑叶葛根提取物50mg,置10ml具塞离心管中,精密加入重蒸水10ml,称定重量,超声使其溶解,放冷,再称定重量,用重蒸水补足减少的重量,摇匀,精密量取0.1ml置15ml具塞离心管中,以下的步骤按对照品溶液制备进行操作;分别精密吸取对照品与供试品溶液各10ul,注入高效液相色谱仪进行含量测定。测定结果表明中试放大的桑叶葛根提取物样品中DNJ的含量为3.52mg/g,另一指标成分葛根素的HPLC测定按2002版药典的方法进行,其含量为48.4mg/g。
实施例5:
桑叶12公斤,葛根4公斤,一提加水225L,微沸状态保持2小时,过滤,二提滤渣再加200L水,微沸状态保持1小时,过滤,合并两次滤液,减压浓缩,至浓缩液的体积为50L,以上浓缩液加入95%乙醇100L,边加入边搅拌,置室温20-25℃醇沉48小时,离心取上清液,减压浓缩挥去乙醇得到体积为5.5L的浓缩液。喷雾干燥得到提取物1.1公斤,出膏率为7%。将桑叶葛根提取物干压后制粒成形,直接填装胶囊,分将在密闭铝塑包装中,制成各种规格的胶囊剂。
Claims (8)
1、一种具有降糖作用的药物组合物,其特征在于该药物组合物是由如下原料药制成的:
桑 叶1~6重量份 葛 根1重量份。
2、如权利要求1所述的药物组合物,其特征在于该药物组合物是由如下原料药制成的:
桑 叶4重量份 葛 根1重量份。
3、如权利要求1所述的药物组合物,其特征在于该药物组合物是由如下原料药制成的:
桑 叶3重量份 葛 根1重量份。
4、如权利要求1所述的药物组合物,其特征在于该药物组合物是由如下原料药制成的:
桑 叶5重量份 葛 根1重量份。
5、如权利要求1、2、3或4所述的药物组合物的制备方法,其特征在于该方法为:
原药材经过粉碎后,两药分别或合并用水、0.01~1.0mol/L的盐酸、甲醇或乙醇,或含水醇类等常规提取溶剂提取;提取溶剂为原药重量的8~30倍,可重复提取1~5次,然后滤去药渣;滤液(分别或合并)在常压或减压下进行浓缩至一定浓度,可加1~4倍体积的醇,使杂质沉淀或用1~5mol/L的氢氧化钠、氨水调PH值至碱性,再通过离心或过柱除去杂质;过柱可利用大孔树脂和阴阳离子交换树脂进一步纯化,大孔树脂的型号可选用D101,D3520、D201、D301等非极性的大孔树脂;经过上述工艺所得的提取液可以通过减压干燥或喷雾干燥制得干粉,可加入常规敷料制成片剂、胶囊剂和颗粒剂。
6、如权利要求5所述的药物组合物的制备方法,其特征在于该方法为:
桑叶和葛根,一提加水225L,微沸状态保持2小时,过滤,二提滤渣再加200L水,微沸状态保持1小时,过滤,合并两次滤液,减压浓缩,至浓缩液的体积为50L,以上浓缩液加入95%乙醇100L,边加入边搅拌,醇沉48小时,离心取上清液,减压浓缩挥去乙醇得到体积为5.5L的浓缩液;喷雾干燥得到提取物,制成片剂、胶囊剂和颗粒剂。
7、如权利要求1、2、3或4所述的药物组合物在制备治疗糖尿病的药物中的应用。
8、如权利要求7所述的应用,其特征在于治疗糖尿病是指抑制α-葡萄糖苷酶。
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