CN1430964A - 一种含有桑叶总碱浸膏的制剂及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种含有桑叶总碱浸膏的制剂及其制备方法,该浸膏中的桑叶总碱含量不少于70%,脱氧野尻霉素的含量不少于50%,该制剂具有明显的降血糖及改善糖耐量作用。

Description

一种含有桑叶总碱浸膏的制剂及其制备方法
技术领域
本发明涉及一种含有桑叶总碱浸膏,含有它的制剂及其制备方法,该制剂具有明显的降血糖及改善糖耐量作用。
背景技术
桑叶为桑科植物桑Morous alba L.的干燥叶。桑叶为常用中药材,具有疏散风热,清肺润燥,清肝明目的作用。国内外医药科学家对桑叶作了大量的研究工作,发现桑叶中的化学成分主要含有黄酮类、甾醇类、多羟基生物碱类、多糖类成分。桑叶的粗提物、桑叶甾醇(酮)、桑叶多糖以及多羟基生物碱分别表现出降血糖活性,而关于桑叶多羟基生物总碱的研究,国内外有一些报道。N.Asano等研究了总碱的化学成分及单体fagomine胰岛素分泌的影响,而桑叶总碱作为一个有效部位,其降血糖作用的研究以及总碱中主要成分含量未见报道。本发明的目的在于开发桑叶中的多羟基生物碱,研制一种高含量桑叶总碱浸膏。
发明内容
本发明公开了一种高含量桑叶总碱浸膏,桑叶总碱中含有一种称为脱氧野尻霉素的生物碱(英文名称为:1-Deoxynojirimycin Hydrochloride),它是一种主要活性成分,本发明的高含量桑叶总碱浸膏中含有较高含量的桑叶总碱,含量不少于浸膏总重量的70%,该桑叶总碱中的脱氧野尻霉素的含量也较高。其含量不少于浸膏总重量的50%(重量百分比),并且制备方法适合工业化生产。
本发明的高含量桑叶总碱浸膏经药理研究证明具有明显的降血糖及改善糖耐量作用。
本发明的另一目的是提供本发明所述的高含量桑叶总碱浸膏的制备方法。
高含量桑叶总碱的制备方法未见文献报道,本发明的高含量桑叶总碱浸膏的制备方法中一些步骤是在研究总碱化学成分时运用过的,本发明除了运用这些步骤外还采用一些重要的步骤来提高浸膏中总碱的含量,具体的步骤是将桑叶粗粉用水或含水亲水性溶剂提取,经浓缩、絮凝、柱色谱分离精制、干燥后制得高含量桑叶总碱浸膏,其中絮凝步骤具有重要作用。
本发明的高含量桑叶总碱浸膏是通过以下方法制备的:将桑叶(50kg)粉成粗粉,过20目筛,用500L的水或含水亲水性溶剂加热回流提取,或冷浸渗漉法提取,热提2-3次,每次1-3小时,或冷提1次,48-96小时,然后提取液减压浓缩为比重1.12-1.20,加入原生药量的1-5倍量水溶解,静置,调节pH3~5,加入絮凝剂壳聚糖4L,静置12h,上清夜通过强酸型离子交换树脂为载体的柱色谱,用水洗脱至无色,倒出树脂,加入碱溶液闷置4h后,将树脂用亲水性溶剂甲醇回流提取2次,每次2h,收集提取液,于低于60C的条件下减压浓缩、干燥后得高含量桑叶总碱浸膏182g。所述制备方法可用以下步骤描述:a.将干桑叶粉碎成粗粉,用水或含水亲水性溶剂提取,b.提取液浓缩,加水溶解,静置,调节pH到3~5,加入絮凝剂,静置,c.上清液通过离子交换树脂为载体的柱色谱,用水洗脱至无色,倒出树脂,加入碱溶液闷置4h后,将树脂用亲水性溶剂回流提取(2h×2),收集提取液,d.减压浓缩、得浸膏。
本发明的高含量桑叶总碱浸膏的制备方法中所述的亲水性溶剂为脂肪族低级醇或低级酮。
其中所述的絮凝剂为明胶、海藻酸钠、琼脂、壳聚糖及其衍生物,ZTC1+1等,优选壳聚糖。
其中所述的碱水溶液中的碱为挥发性的碱,可以为二乙氨、三乙氨、吡啶等,优选为氨水,水和碱的混合比例为:水∶氨=99-1∶1-99(体积比)的任意比例。
本发明的高含量桑叶总碱浸膏的制备方法操作简便,无苛刻的设备要求,宜于规模型工业化生产。
本发明的高含量桑叶总碱浸膏,在制备成药剂时可加入药物可接受的载体,所述药物可接受的载体可以是:甘露糖醇、硅衍生物、纤维素及其衍生物、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、土温80、琼脂、碳酸钙、碳酸氢钙、表面活性剂、聚乙二醇、环糊精、β-环糊精、磷脂类材料、高岭土、滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁等。
本发明的高含量桑叶总碱浸膏可通过常规方法制成中药制剂,该制剂可以是任何可药用的剂型,这些剂型包括:片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射剂、栓剂、软膏剂、硬膏剂、霜剂、喷雾剂、滴剂、贴剂。本发明的制剂,优选的是口服剂型,如:胶囊剂、片剂、口服液、颗粒剂、丸剂、散剂、丹剂、膏剂等,优选的是胶囊剂。
本发明的制剂每剂中可含有桑叶总碱浸膏10-600mg,所述每剂指,每一制剂单位,或每次服用剂量,若为每一制剂单位可指每粒胶囊,或每片、每袋、每丸、每一安瓶等。
在使用时根据病人的情况确定用法用量,如可每日服三次,每次1-20剂,如:1-20粒或片。
对本发明的浸膏进行了以下药效学实验证明其有益效果。一、对正常小鼠血糖的影响
试验材料
1、药物:桑叶总碱,用实施例1方法制备,试验前用蒸馏水配制成所需要的浓度。
2、动物:NIH小鼠,18-22g,♀、♂各半。
3、血糖测定试剂盒,由四川迈克生物技术有限公司生产,批号20020306。
试验方法与结果
1、单次给药对血糖的影响:小鼠,30只,空腹12h后,按动物性别均衡随机分为3组,每组10只,♀、♂各半,分别灌胃给予下列药物:(1)正常对照组(蒸馏水);(2)桑叶总碱低剂量组(40mg/kg);(3)桑叶总碱高剂量组(100mg/kg)。给药体积按20ml/kg,给药1h后动物眼球取血,用葡萄糖氧化酶法测定空腹血糖值。结果见表1。
       表1桑叶总碱(单次给药)对正常小鼠血糖值的影响
                     (n=10,X±SD)
                           剂量                   血糖值
   组别
                          (mg/kg)                (mmol/L)
正常对照组                  -                   1.797±0.566
桑叶总碱                    40                  0.655±0.536**
桑叶总碱                    100                 0.929±0.904*
与正常对照组比较*P<0.05,**P<0.01(t检验)
2、多次给药对血糖的影响:小鼠,20只,♀、♂各半,空腹12h后,测定血糖,根据血糖值及动物性别均衡随机分为2组,分别灌胃给予下列药物:(1)正常对照组(蒸馏水);(2)桑叶总碱(80mg/kg)。连续给药7天,给药体积按20ml/kg,第7天给药前空腹12h,给药后1h动物取血,用怡成血糖测试仪测定动物血糖值。结果见表2。
      表2桑叶总碱(多次给药)对正常小鼠血糖值的影响
                     (n=10,X±SD)
         剂量       药前血糖值      药后血糖值        变化率
组别
        (mg/kg)      (mmol/L)        (mmol/L)          (%)正常对照组    -         4.74±0.89      4.95±0.85       +6.9±22.4桑叶总碱      80        4.67±1.05      3.56±1.17**     -22.9±21.4
与正常对照组比较*P<0.05,**P<0.01(t检验)。
结论
1、单次给药,桑叶总碱(40,100mg/kg),具有明显的降低血糖的作用。
2、多次给药,桑叶总碱(80mg/kg),具有降低血糖的作用。二、对自发性高血糖小鼠血糖的影响
试验材料
1、药物:桑叶总碱,用实施例1方法制备。试验前用蒸馏水配制成所需要的浓度。
2、动物:NOD小鼠,体重20-30g,24只,♀、♂各半,由北京大学医学部实验动物中心提供,许可证编号:SCXK11-00-0004。
3、测定仪器:怡成血糖测试仪及测定试纸,由北京怡成生物电子技术有限公司研制。
试验方法与结果
小鼠,24只,空腹12h后,测定血糖值,根据血糖水平和性别,将动物均衡随机分为3组,每组8只,♀、♂各半,分别灌胃给予下列药物:(1)对照组(蒸馏水),(2)桑叶总碱低剂量组(50mg/kg),(3)桑叶总碱高剂量组(150mg/kg),给药体积按20ml/kg,给药1h后,动物取血,用怡成血糖测试仪测定空腹血糖值。结果见表3。
              表3桑叶总碱对自发性高血糖小鼠血糖的影响
                         (n=8,X±SD)
             剂量          药前血糖       药后血糖       变化率组别
            (mg/kg)        (mmol/L)       (mmol/L)        (%)对照组            -           8.61±1.51     8.99±1.42     +5.0±9.5桑叶总碱          50          8.48±1.38     7.83±1.41     -7.1±12.5桑叶总碱          150         8.79±1.76     8.20±1.20     -5.6±8.3
药物组与对照组比较,差异无显著性意义P>0.05(t检验)。
结论
桑叶总碱,对自发性高血糖小鼠血糖无明显影响。三、对链脲霉素诱发小鼠高血糖的影响
试验材料
1、药物:桑叶总碱,用实施例1方法制备,试验前用蒸馏水配制成所需要的浓度。
2、动物:NIH小鼠,体重18-22g,♀、♂各半。
3、主要试剂:链脲霉素,美国Sigma公司产品。造模前用柠檬酸缓冲液(PH=4.0),于低温下配制。
4、仪器:怡成血糖测试仪及测定试纸,由北京怡成生物电子技术有限公司研制。
试验方法与结果
小鼠,40只,随机分42组,每组10只,♀、♂各半,(1)对照组(蒸馏水);(2)高血糖模型组(蒸馏水);(3)桑叶总碱低剂量组(50mg/kg);(4)桑叶总碱高剂量组(150mg/kg)。除正常对照组外,其余各组腹腔注射链脲霉素(200mg/kg),72h后测血糖(空腹12h),然后将(2)-(4)组,根据血糖值均衡调整组别。同时按以上剂量灌胃给予试验药物,连续7天,第7天给药前空腹12h,于末次给药后1h测定血糖。结果见表4。
         表4桑叶总碱对链脲霉素诱发小鼠高血糖的影响
                      (n=10,X±SD)
             剂量      药前血糖       药后血糖        变化率
组别
           (mg/kg)     (mmol/L)       (mmol/L)         (%)正常对照组        -        4.73±1.01     4.86±1.02     +3.1±7.8高血糖模型组      -        9.34±2.23##  9.49±2.04##  +2.1±5.8桑叶总碱          50       9.60±2.68     7.59±2.41     -21.3±5.5桑叶总碱          150      9.76±2.60     7.39±1.80*    -23.8±7.8
与正常对照组比较##P<0.01;与模型组比较*P<0.05,**P<0.01(t检验)。
结论
小鼠腹腔注射链脲霉素,可使血糖升高,而给予桑叶总碱后,具有降血糖的作用。其中剂量为(150mg/kg)与模型组比较,差异具有显著性意义。四、对小鼠口服蔗糖的糖耐量试验
试验材料
1、药物:桑叶总碱,用实施例1方法制备,试验前用蒸馏水配制成所需要的浓度。
2、动物:NIH小鼠,18-22g,♀、♂各半。
3、主要试剂:蔗糖,分析纯,广州化学试剂厂生产,批号960202。
4、仪器:怡成血糖测试仪及测定试纸,由北京怡成生物电子技术有限公司研制。
试验方法与结果
小鼠,20只,随机分为2组,每组10只,♀、♂各半,分别灌胃给予下列药物:(1)对照组(蒸馏水);(2)桑叶总碱组(80mg/kg),给药体积为20ml/kg,动物空腹12h后,测定血糖,然后按以上剂量给药,且药物中含蔗糖0.25g/ml。用怡成血糖测试仪测定给蔗糖后0.5h,1h,2h血糖值。试验结果见表5。
                  表5桑叶总碱对糖耐量试验结果
                        (n=10,X±SD)
        剂量                 血糖值(mmol/L)                变化率(%)组别
       (mg/kg)   0h       0.5h    1h        2h       0.5h     1h       2h正常对照             4.66±       7.72±       8.10±         5.08±        69.0±        78.0±       11.3±
         -组                   1.01     1.05     0.97     0.79     18.4     23.0     16.7
              4.50±        6.73±       7.18±        4.68±        56.2±        69.2±桑叶总碱    80                                                           5.6±9.3
              1.18     1.01*    0.75*    1.08     31.7     43.1
与正常对照组比较*P<0.05(t检验)。
结论
桑叶总碱,剂量为80mg/kg能抑制小鼠口服蔗糖后血糖值的升高。
具体实施方式:以下通过实施例进一步说明本发明
实施例1、桑叶干燥粗粉1kg,过20目筛,加20%丙酮水溶液10kg,加热回流提取2h,滤过,重复热提共三次,提取液减压浓缩为比重1.20,加水3kg溶解,静置,用盐酸调节pH3~5,加入适量1%壳聚糖,静置12h,上清夜通过阳离子交换树脂1kg为载体的柱色谱,用水3kg洗脱,弃取,倒出树脂,加入碱溶液闷置4h后,将树脂用80%乙醇回流提取两次,每次两小时,收集提取液,于低于60℃的条件下减压浓缩、干燥后得高含量桑叶总碱浸膏4g(脱氧野尻霉素含量为57%)。
实施例2、
桑叶干燥粗粉10kg,加20%乙醇80kg,加热回流提取1.5h,滤过,重复热提共三次,提取液减压浓缩为比重1.15,加水40kg溶解,用10%盐酸调节pH3~5,加入适量1%壳聚糖,静置12h,上清夜通过阳离子交换树脂10kg为载体的柱色谱,用水30kg洗脱,弃取,上清液通过离子交换树脂为载体的柱色谱,用水洗脱至无色,倒出树脂,加入碱溶液闷置4h后,将树脂用亲水性溶剂甲醇回流提取2次,每次2h,收集提取液。于低于60℃的条件下减压浓缩、干燥后得高含量桑叶总碱浸膏37g(脱氧野尻霉素含量为55%)。
实施例3、
桑叶干燥粗粉100kg,加水1000kg,加热回流提取2h,滤过,重复热提共三次,提取液减压浓缩为比重1.2,加水2500kg溶解,用10%盐酸调节pH3~5,加入适量1%壳聚糖,静置12h,上清夜通过D001型阳离子交换树脂1000kg为载体的柱色谱,用水3000kg洗脱,倒出树脂,加入碱溶液闷置4h后,将树脂用亲水性溶剂甲醇回流提取2次,每次2h,收集提取液。于低于60℃的条件下减压浓缩、干燥后得高含量桑叶总碱浸膏320g(脱氧野尻霉素含量为52%)。实施例4
胶囊剂[处方]桑叶总碱浸膏60g制成胶囊1000粒[制法]将桑叶总碱浸膏60g,加入药用辅料微晶纤维素等混匀,制粒,干燥,装入胶囊即可。
实施例5
片剂[处方]桑叶总碱浸膏60g制成片剂1000片[制法]将桑叶总碱浸膏60g,加入药用辅料微晶纤维素等混匀,制粒,干燥,加入适量润滑剂,压片即可。
实施例6
颗粒剂[处方]桑叶总碱浸膏100g制成颗粒剂1000袋[制法]将桑叶总碱浸膏100g,加入药用辅料糊精、甜味剂等混匀,制粒,干燥,装袋即可。
实施例7
丸剂[处方]桑叶总碱浸膏100g制成丸剂1000袋[制法]将桑叶总碱浸膏100g,加入药用辅料糊精、微晶纤维素等泛丸,干燥,分装即可。
实施例8
口服液[处方]桑叶总碱浸膏100g制成口服液1000支[制法]将桑叶总碱浸膏100g,溶解于水,加入适量矫味剂,灭菌,灌装即可。

Claims (10)

1、一种桑叶总碱浸膏,其特征在于,含有药物有效成分脱氧野尻霉素,
2、权利要求1的浸膏,其特征在于,在该浸膏中桑叶总碱的含量不少于70%,脱氧野尻霉素的含量不少于50%。
3、权利要求2的浸膏的制备方法,其特征在于,经过以下步骤,
a.将干桑叶粉碎成粗粉,用水或含水亲水性溶剂提取,
b.提取液浓缩,加水溶解,静置,调节pH到3~5,加入絮凝剂,静置,
c.上清液通过离子交换树脂为载体的柱色谱,用水洗脱至无色,倒出树脂,加入碱溶液闷置4h后,将树脂用亲水性溶剂回流提取(2h×2),收集提取液,
d.减压浓缩、得浸膏。
4、根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于,所述的亲水性溶剂为脂肪族低级醇或低级酮。
5、根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于,所述的絮凝剂选自明胶、海藻酸钠、琼脂、甲壳素及其衍生物,ZTCl+1、壳聚糖。
6、根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于,所述的碱溶液中的碱为挥发性的碱,选自二乙氨、三乙氨、吡啶,氨水,水和碱的混合比例为:水∶氨=99-1∶1-99(体积比)的任意比例。
7、用权利要求2的浸膏制备的药物制剂。
8、权利要求7的药物制剂是任何可药用的剂型。
9、权利要求8的药物制剂是片剂、胶囊剂、口服液、口含片、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、滴剂、滴丸剂。
10、用权利要求3的浸膏制备一种治疗糖尿病的药物。
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