CN1392146A - 一种水芹提取物及其制备方法及应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种水芹提取物，其所含活性成分组成及比例(重量)为：槲皮素0.1～5、异鼠李素0.1～20、总绿原酸0.5～50。本发明还公开了上述水芹提取物的制备方法，其包括以下步骤：以植物水芹为原料，加提取溶剂回流提取，合并提取液，滤过，滤液经回收或浓缩、静置、滤过，滤液再经分离去杂过程后，浓缩、干燥即得。本发明水芹提取物应用于治疗乙型肝炎，不但具有抗肝炎病毒作用，而且起到保肝降酶作用，疗效确切，无毒副作用。

Description

一种水芹提取物及其制备方法及应用

所属技术领域

本发明涉及一种水芹提取物，本发明还涉及一种所述水芹提取物的制备方法及其在制备治疗乙型肝炎药物中的应用。

背景技术

乙型肝炎是由乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus，简称HBV)引起的一种世界性传染性疾病。据统计，全球携带乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的人数超过2.8亿。中国是乙型肝炎的高流行区，有40％～60％的人群受过HBV感染，10％的人群为慢性HBsAg携带者。据调查，中国现患慢性乙型肝炎的病人超过3000万，其中25％～40％以上发展为肝硬化或肝癌。在威胁我国人民健康的各种癌症中，肝癌位居首位，每年约9～10万人死于肝癌。慢性乙型肝炎的发病机理是由于患者免疫调节功能紊乱，不能很好地调节机体对HBV的免疫反应，致使HBV得不到清除，肝细胞受到不同程度的损害。所以，慢性乙型肝炎治疗的关键是抗病毒治疗与免疫调控治疗。

目前治疗慢性乙型肝炎的疗法主要有：抗病毒药物疗法、免疫调控药物疗法、改善肝微循环疗法、保护疗法、中医辨证论治等。国内外近年来治疗肝炎的首选药物是干扰素类，但疗效并不十分理想，且治疗费用高昂，显然不适合我国国情。随着公费医疗制度的改革和非处方药的推行，进口、高价药品的市场将萎缩，价格相对低廉、疗效确切且毒副作用小的中药将占领越来越多的市场份额。但迄今为止，市场上尚缺乏抗HBV疗效确切，又无副作用新药。

发明内容

本发明的目的在于提供一种水芹提取物，该水芹提取物活性成分明确，质量可控，用于治疗乙型肝炎疗效可靠，并且几乎无毒副作用。

本发明的另一目在于提供该水芹提取物的制备方法，该方法工艺过程简单，产品收率大。

本发明的目的还在于提供该水芹提取物在制备治疗乙型肝炎药物中的应用。

水芹[Oenanthe Javanica(BL.)DC]，为伞形科植物，又名小叶芹，水芹菜，河芹，野芹菜等。全国各地均有分布，喜生于湿洼地或水地中。全草味甘，性平，民间主要用于清热，治暴热烦渴、黄疸、水肿、高血压等症。

本发明提供的水芹提取物，其所含活性成分的组成和比例为：槲皮素0.1～5、异鼠李素0.1～20、总绿原酸0.5～50。优选范围是：槲皮素0.3-4、异鼠李素0.3-15、总绿原酸0.8-45。

本发明的水芹提取物活性成分中槲皮素和异鼠李素的检测采用了高效液相法，总绿原酸的检测也是采用高效液相法，但总绿原酸含量是以绿原酸为标准计算的。

上述水芹提取物的制备方法，包括以下步骤：

(1)以植物水芹为原料，加提取溶剂回流提取，合并提取液，滤过；

(2)将上述滤液浓缩、静置、滤过；

(3)将步骤(2)获得的滤液再经分离去杂过程后，浓缩、干燥即得。

上述步骤(1)中的提取溶剂为水或含水乙醇，用量为水芹重量的2～25倍；步骤(3)中的分离去杂过程为：滤液用稀盐酸或稀硫酸调PH至酸性后，用水饱和的正丁醇或醋酸乙酯萃取，合并萃取液，回收溶剂；步骤(3)中的分离除杂过程也可以为：滤液加水稀释，用大孔树脂吸附，再用10～95％乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇。

本发明水芹提取物应用在治疗乙型肝炎方面，可与一种或多种药学上可接受的载体(辅料)配制成药剂。

上述药学上可接受的载体是指药学领域常规的药物载体或辅料，例如：稀释剂、赋形剂和水等，填充剂如淀粉、糊精、蔗糖、乳糖，微晶纤维素等；粘合剂如纤维素衍生物、藻酸盐、明胶和聚乙烯吡咯烷酮；润湿剂如甘油；崩解剂如甲基淀粉钠，羟丙纤维素，交联羧甲基纤维素，琼脂、碳酸钙和碳酸氢钠；吸收促进剂如季铵化合物；表面活性剂如十六烷醇，十二烷基硫酸钠；吸附载体如高岭土和皂粘土；润滑剂如滑石粉、硬脂酸钙和镁、微粉硅胶和聚乙二醇等。另外还可以在组合物中加入其它辅剂如香味剂、甜味剂等。

上述药剂可通过口服、直肠或肠胃外给药的方式施用于乙型肝炎患者。用于口服时，可将其制成常规的固体制剂如片剂、胶囊、粉剂、颗粒剂等，制成液体制剂如水或油悬浮剂其它液体制剂如糖浆、合剂、酏剂等；用于肠胃外给药时，可将其制成注射用的溶液、粉针、水或油性悬浮剂等。本发明优选的形式是粉针、注射液和片剂、包衣片剂、胶囊、颗粒剂、合剂。

本发明水芹提取物应用于治疗乙型肝炎，不但具有抗肝炎病毒作用，而且起到保肝降酶作用，疗效确切，无毒副作用。

下面通过实施例及主要药效学试验对本发明作进一步的说明。实施例1水芹提取物的制备

取水芹，用13倍量水回流提取，合并提取液，过滤，滤液浓缩至相对密度为1.20，静置，过滤，用稀盐酸调至酸性，用醋酸乙酯萃取5次，合并萃取液，回收醋酸乙酯，浓缩至相对密度为1.35(60℃)，减压干燥，粉碎，即得。实施例2水芹提取物的制备

水芹用12倍量45％乙醇回流提取，合并提取液，过滤，回收尽乙醇，浓缩至相对密度为1.18，静置，过滤，用稀盐酸调至酸性，用水饱和的正丁醇萃取6次，合并萃取液，回收正丁醇，减压干燥，粉碎，即得。实施例3水芹提取物的制备

水芹用12倍量60％乙醇回流提取，合并提取液，过滤，回收尽乙醇，加水稀释、滤过，滤液通过大孔树脂吸附柱，用35％乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，减压干燥，粉碎，即得。实施例4水芹提取物粉针剂的制备

实施例1水芹提取物    12克

甘露醇               20克

取实施例1水芹提取物，置适宜容器中，加注射用水约900ml，加入甘露醇搅拌均匀，再加注射用水至1000ml，用0.22μm的微孔滤膜过滤，在无菌条件下，灌装于西林瓶中，部分塞上丁橡胶塞，装盘，冷冻干燥。冻干结束后压塞、压盖即得。实施例5水芹提取物注射液的制备

实施例2水芹提取物    12g

吐温-80              1ml

注射用水             加至1000ml

取实施例2水芹提取物，用900ml注射用水溶解，再用1％的氢氧化钠溶液调pH至6～7，加1ml吐温-80，补加注射用水至1000ml，静置，用0.22μm的微孔滤膜过滤，灌封，流通蒸汽灭菌，即得。实施例6水芹提取物胶囊剂的制备

实施例2水芹提取物           650g

糊精                        275g

羧甲基纤维素钠              60g

硬脂酸镁                    15g

取实施例2水芹提取物、糊精、羧甲基纤维素钠、硬脂酸镁混合均匀，过80目筛，用干式制粒机制粒，用60目筛整粒，灌于胶囊中，即得。实施例7水芹提取物片剂的制备

实施例1水芹提取物           650g

糊精                        170g

羧甲基纤维素钠              65g

羟丙纤维素                  100g

硬脂酸镁                    15g

取实施例1水芹提取物、糊精、羧甲基纤维素钠、羟丙纤维素、硬脂酸镁混合均匀，过80目筛，用干式制粒机制粒，用60目筛整粒，压片，包衣，即得。

以上实施例仅为了对本发明作进一步的说明，而本发明的范围不受所举实施例的局限。

本发明提供的是一种新型的治疗肝炎的天然药物---水芹提取物及其药剂，为证明其抗肝炎效果及安全性，发明者使用按上述实施例1中提供的方法制备得到的水芹提取物毒理和药效学实验研究结果如下：一、急性毒性试验

采用昆明种小鼠进行水芹提取物的iv与ig的急性毒性试验，结果表明水芹提取物的口服最大给药量为343.5g生药/kg；注射最大给药量171.7g生药/kg，连续观察七日，未见动物死亡。七日后解剖观察各主要脏器未见异常变化。二、主要药效学1、抗肝炎病毒作用

(1)体外抗肝炎病毒作用  应用乙型肝炎病毒(HBV)基因转染的2215细胞分泌HBsAg、HBeAg模型，观察水芹提取物抗HBV作用。结果表明，水芹提取物能明显抑制HBsAg、HBeAg，最高抑制率达87.5％与83.7％，其ED₅₀为935μg/ml与1023μg/ml(最大无毒浓度为8000μg/ml)。

(2)体内抗乙肝病毒作用采用一日龄北京鸭iv鸭乙肝病毒(DHBV)，7日后ip水芹提取物50，100，200mg/kg与ig250，750mg/kg，连续给药10日，观察本品对DHBV-DNA水平与对肝组织的影响。结果表明：ip给药与ig第10天给药对DHBV-DNA水平均有明显抑制作用，用药第5天ip100，200mg/kg与ig750mg/kg的抑制率均高于30％，停药三天后仍表现出较明显的抑制作用。停药第三天取肝组织进行病理组织学检查，结果表明口服组与注射给药对肝组织均显示明显的保护作用，模型组肝细胞可见变性，点状、桥状坏死，汇管区有大量的淋巴细胞浸润；用药组，特别高剂量组织变性坏死不明显，炎症细胞较为少见。总体上看注射给药效果强于口服给药。2、保肝降酶作用

采用四氯化碳与D-半乳糖胺致小鼠肝急性毒性损伤模型，观察本品的保肝降酶作用。结果显示：水芹提取物给注射给药与口服给药可使ALT、AST、ALP明显降低，注射高剂量组的降低率超过100％，且具较好的量效关系(r＝0.996)。

Claims (10)

1、一种水芹提取物，其特征在于所含活性成分组成及其比例(重量)为：槲皮素0.1～5、异鼠李素0.1～20、总绿原酸0.5～50。

2、根据权利要求1所述的水芹提取物，其所含活性成分组成及比例(重量)为：槲皮素0.3-4、异鼠李素0.3-15、总绿原酸0.8-45。

3、权利要求1所述的水芹提取物的制备方法，包括以下步骤：

(1)以植物水芹为原料，加提取溶剂回流提取，合并提取液，滤过；

(2)将上述滤液浓缩、静置、滤过；

(3)将步骤(2)获得的滤液再经分离去杂过程后，浓缩、干燥即得。

4、根据权利要求3所述的水芹提取物的制备方法，其特征在于：所述的提取溶剂为水，提取溶剂用量为水芹重量的2～25倍。

5、根据权利要求3所述的水芹提取物的制备方法，其特征在于：所述的提取溶剂为含水乙醇，提取溶剂用量为水芹重量的2～25倍。

6、根据权利要求3所述的水芹提取物的制备方法，其特征在于：所述的分离去杂过程为：滤液用稀酸调pH至酸性后，进行萃取，合并萃取液，回收溶剂。

7、根据权利要求6所述的水芹提取物的制备方法，其特征在于：所述的稀酸为稀盐酸或稀硫酸。

8、根据权利要求6所述的水芹提取物的制备方法，其特征在于：用水饱和的正丁醇或醋酸乙酯进行萃取。

9、根据权利要求3所述的水芹提取物的制备方法，其特征在于：所述的分离除杂过程为：滤液加水稀释，用大孔树脂吸附，再用10～95％乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇。

10、权利要求1所述的水芹提取物在制备治疗乙型肝炎药物中的应用。