CN1243772C

CN1243772C - 蝙蝠葛碱提多糖及其提取方法和以该化合物为活性成分的药物用途

Info

Publication number: CN1243772C
Application number: CN 03111336
Authority: CN
Inventors: 张桂荣; 王志宏; 梁忠岩
Original assignee: JILIN HONGDA SCIENCE AND TECHNOLOGY DEV Co Ltd
Current assignee: JILIN HONGDA SCIENCE AND TECHNOLOGY DEV Co Ltd
Priority date: 2003-03-28
Filing date: 2003-03-28
Publication date: 2006-03-01
Anticipated expiration: 2023-03-28
Also published as: CN1440984A

Abstract

本发明公开蝙蝠葛碱提多糖及其提取方法和以该化合物为活性成分的药物用途，将蝙蝠葛粉碎加水煎煮至无水，水提后的残渣用碱液浸泡24小时，进行碱液提取3～6次，将滤液用酸液调pH＝7后，80℃水浴中浓缩，至粘稠挂壁，取沉淀物加蒸馏水3～4次溶解后离心得沉淀物，干燥后得蝙蝠葛碱提多糖。本发明可用于制备对早、中期原发性癌症进行辅助治疗及清咽润喉的药物。

Description

蝙蝠葛碱提多糖及其提取方法和以该化合物为活性成分的药物用途

技术领域：

本发明涉及一种多糖物质，该化合物是从中药蝙蝠葛中提取得到的新物质，明确地讲是蝙蝠葛碱提多糖，同时公开了其制备方法和以该化合物为活性成分的药物用途，属于中药有效成分提取技术领域。

背景技术：

蝙蝠葛属防己科植物，具药典记载，该植物根主治扁桃体炎、喉炎、腮腺炎、黄疸、支气管炎、肺炎、肠炎、痢疾、肾盂肾炎。由于蝙蝠葛制剂有明显的消炎作用及抑制肿瘤作用，多糖又具有这方面的功能，因此对碱提水溶性多糖进行分离纯化、结构研究、活性测定具有重大意义。其具免疫活性成分即可入药又可用于生产饮料等食品的添加剂，使人们在摄取食物的同时提高自身的免疫功能。其具有抗炎活性的成分可用于抗炎药物的生产。其抑瘤作用则可以辅助肿瘤的治疗。因此，有极其广阔的应用前景，效益可观。经联机检索查新国内外没有关于此项的报道。

发明内容：

本发明提供一种具有药用价值的蝙蝠葛碱提多糖，简称：SJIIIB。

本发明还提供了从蝙蝠葛中提取上述物质的制备方法，适用于工业化生产。

本发明进一步提供了以该化合物为活性成分的用途，对原发性癌症进行辅助治疗作用的药物中应用。

本发明所说的化合物具有下述组成序列：

本发明的提取方法包括以下步骤：

将蝙蝠葛粉碎加水煎煮至无水；水提后的残渣用碱液浸泡24小时，进行碱液提取3～6次，碱液包括氢氧化钠、碳酸氢钠、碳酸钠、氢氧化铝，过滤后将滤液用酸液调PH＝7后，80℃水浴中浓缩，至粘稠挂壁，取沉淀物加蒸馏水3～4次溶解后离心得沉淀物，干燥后得蝙蝠葛碱提多糖。

所得产物用醇如甲醇或乙醇重结晶可得本发明纯品。

上述化合物是从蝙蝠葛中分离的多糖化合物，经过光谱分析，分别具有如下理化特性：

1、物理性状：为白色粉末，易溶于水。(a)D^20℃＝37.08。

2、组成分析：经甲醇解，硅烷化处理后，进行G.C分析，其单糖组成为Ara∶Fuc∶XYL∶Gal＝1.98∶3.26∶0.301∶1

3、红外光谱分析(I.R.)：

I.R.图谱在849cm-1具特征吸收率，表示本提取物具有α-糖苷键。在880cm-1也具特征吸收率，其峰要比849cm-1：处略大，证明此样品具有的β-糖苷键略多一些，另外还在1030cm-1，1074-1，2941cm-1；3360cm-1，3461cm-1处具有多糖的特征吸收峰。

本发明从蝙蝠葛中分离得到蝙蝠葛碱提多糖，属于多元醇糖苷，经过药理活性筛选，该化合物具有多种药物活性。

经过药理学实验筛选，上述化合物具有对早、中期原发性癌症进行辅助治疗的药理活性。

本发明的药物及组合物含有治疗有效量的上述化合物为活性成分，以及含有一种或多种药学上可以接受的载体。

本发明的化合物和组合物可用于制备对早、中期原发性癌症进行辅助治疗的药物。

本发明的化合物和组合物可用于清咽润喉治疗的药物。

用于制备具有清咽润喉作用的药物组合物，其中含有治疗有效活性成分的权利要求1化合物和药学上可接受的载体。

上文的载体是指药学领域常规的药物载体，包括稀释剂、赋形剂，填充剂，粘合剂，湿润剂，崩解剂，吸收促进剂，表面活性剂，吸附载体。

本发明可以组合物的形式通过口服、直肠、静脉、肌肉注射或胃肠外给药方式施用于这种治疗的患者。按照药学领域的常规生产方法制备各种剂型如片剂、颗粒剂、冲剂、胶囊、栓剂、喷雾剂、缓释剂和注射剂。也可使其活性成分与一种或多种载体或药物混合，制成所需剂型。

本发明的药物组合物优选重量比为0.1％～99.5％活性成分，优选含有10-90％，更优选20-80％，最好为70％的本发明提取物。

本发明的施药量可根据用药途径、患者年龄、体重、疾病类型和严重程度等变化，日剂量为0.01～10mg/kg。

下述的药理实验证实了本发明化合物对早、中期原发性癌症进行治疗及清咽润喉的药理活性。

实验例1

1、早、中期原发性癌的辅助治疗

实验室用Eca-109细胞株，常规培养于含10％新生牛血清的RPMI-1640培养基中，4-5天传代一次，细胞消化用0.1％胰酶和0.1％EDTA的混合液。

在指形培养管内盖片接种人食管癌(Eca-109)细胞1×10⁵个/ml；培养24h后加入不同浓度的药物，药物作用48h后取出盖片，生理盐水冲洗，放入临时配制的各种酶作用液中，37℃温箱孵育30分钟，酶作用液配制使用一般组化方法(陈啸梅，组织化学手册，第1版，北京：人民卫生出版社，1982，10)，实验重复三次。

不同浓度的蝙蝠葛多糖提取物作用于Eca-109细胞48小时后几种脱氢酶变化

组别	谷氨酸脱氢酶	苹果酸脱氢酶	乳酸脱氢酶	不加底物
组别	谷氨酸脱氢酶	苹果酸脱氢酶	乳酸脱氢酶	不加底物	对照组	+++	+++	+++	-
0.01g/ml	++	+++	+++	-	对照组	+++	+++	+++	-
0.01g/ml	++	+++	+++	-	0.1g/ml	+	++	++	-
0.2g/ml	-	+	-	-	0.1g/ml	+	++	++	-

实验中发现蝙蝠葛多糖对Eca-109细胞内谷氨酸脱氢酶，苹果酸脱氢酶，乳酸脱氢酶在不加药的对照组为“+++”，随加药浓度的升高，酶显色逐步降低“-”/“+”。苹果酸脱氢酶和谷氨酸脱氢酶是糖有氧氧化及三羧酸循环过程中的主要脱氢酶，乳酸脱氢酶是无氧酵解过程中的重要酶，结果提示该药物可能破坏酶蛋白构型，使其失去活性，阻断了无氧酵解及糖的有氧氧化产能过程，这可能是癌细胞变性到死亡的原因。

2、抗炎作用

21对小鼠肉芽肿生成的影响：

取18～20g小鼠，雄雌各半，每只小鼠背部注射高压灭菌的2％琼脂0.2ml，按体重随机分组，自注射当日起灌胃给药0.1mg/10g体重，对照组给予等量生理盐水，连续给药10d，末次给药24h后处死动物，剥离琼脂肉芽肿，万分之一电子天平称量，结果见表1。

表1 清热利咽茶对小鼠肉芽形成的影响

组别		动物数(只)	肉芽肿(mg)	P值
组别		动物数(只)	肉芽肿(mg)	P值	生理盐水		12	230.0±20.3	/
蝙蝠葛多糖	0.05mg/只	12	205.4±11.1	＜0.05	生理盐水		12	230.0±20.3	/
	0.05mg/只	12	205.4±11.1	＜0.05	0.1mg/只	12	190.3±24.0	＜0 01
	草珊瑚含片		12	194.8±13.4	0.1mg/只	12	190.3±24.0	＜0 01	＜0.01

注：P值为与生理盐水对照组比较。

22 对小鼠毛细血管通透性的影响：

取18～20g小鼠，雄雌各半，按体重随机分组灌胃给药0.1mg/10g体重，1小时后尾静脉注射05％伊文思蓝0.1ml/10g体重，随即腹腔注射0 6％H A C 0.2ml/只，20min后脱颈椎处死，以6mlNS分4次洗涤腹腔，洗涤液加NS调至10ml，3000rpm，离心15分种，取上清液于590n n处比色测定OD值，结果见表2。

表2 对小鼠毛细血管通透性的影响

组别		动物数(只)	OD值	P值
组别		动物数(只)	OD值	P值	生理盐水		13	0.486±0.62	/
蝙蝠葛多糖	0.05mg/只	13	0.440±0.59	＜0.05	生理盐水		13	0.486±0.62	/
	0.05mg/只	13	0.440±0.59	＜0.05	0.1mg/只	13	0.420±0.62	＜0.01
	草珊瑚含片		13	0.442±0.60	0.1mg/只	13	0.420±0.62	＜0.01	＜0.01

注：P值为与生理盐水对照组比较。

由上述实验结果表明，对小鼠慢性增生性炎症和毛细血管的通透性等都有明显的抑制作用，证实本制剂有明显的抗炎作用。

具体实施方式：

实施例1：

(1)浸泡液配制：0.1N NaOH

(2)浸泡：将用无离子水15kg，水提6次以上的残渣加入步骤(1)的浸泡液中浸泡，24小时。浸泡6次；

(3)过滤：将浸泡过残渣的浸泡液用8层沙布滤出：

(4)浓缩：将滤液用浓HCL调PH＝7，80℃水浴中浓缩，至粘稠挂壁；

(5)醇沉：将浓缩好的滤液加入到四倍体积的90％乙醇溶液中，不断搅动，然后静止12小时；

(6)干燥：离心(3000pm)后，沉淀常规干燥.即得碱提粗多糖。

(7)碱提水溶粗多糖的提取：将没有完全干燥好的碱提粗多糖加入无离子水，使其充分溶解之后离心(3000rpm)取上清，然后再浓缩(不需再调PH＝7)醇沉，干燥，即得碱提水溶粗多糖。其离心后沉淀即为本发明提取物。

实施例2

1、水提：蝙蝠葛粗粉5kg在索式提取器中用乙醇回流脱脂16h，残渣加无离子水20L100℃提取8h，重复提取4次。

2、浸泡：水提后的残渣用PH＝13的碱液浸泡24小时，浸泡6次。

3、过滤：将浸泡过残渣的浸泡液用8层沙布滤出。

4、浓缩：将滤液用浓HCL调PH＝7后，80℃水浴中浓缩，至粘稠挂壁。

5、醇沉：将浓缩好的滤液加入到四倍体积的90％乙醇溶液中，不断搅动，然后静止过夜。

6、干燥：离心(3000pm)后，沉淀常规干燥，即得碱提粗多糖。

7、蝙蝠葛碱提多糖的提取：将没有完全干燥好的碱提粗多糖加入无离子水，使其充分溶解之后离心(30000pm)取上清，然后再浓缩(不需再调PH＝7)醇沉，干燥，即得碱提水溶粗多糖。其离心后沉淀即为蝙蝠葛碱提多糖。

8、分级：将蝙蝠葛碱提多糖配成2％加入乙醇，使醇终浓度达到80％。离心所得沉淀即为本发明提取物。

实用例1：

蝙蝠葛碱提多糖1kg，药用淀粉1kg，50％乙醇适量，制粒，整粒，烘干，装1#胶囊，每粒0.2g。

其它项目应符合中华人民共和国药典2000版胶囊项目有关要求。

实用例2：

蝙蝠葛碱提多糖1kg，淀粉0.6kg，糊精0.1kg，50％乙醇适量，制粒，整粒，烘干，压片，每片0.3g。

其它项目应符合中华人民共和国药典2000版片剂项目有关要求。

实用例3

称取蝙蝠葛碱提多糖100g(95％纯度)、氯化钠常用量，1.1-丙二醇50g，加蒸馏水适量，用1～5％的氢氧化钠溶液调PH8.0，加蒸馏水10000ml，经过滤，在无菌条件下灌装和灭菌，制成蝙蝠葛碱提多糖注射剂5000支，每支含蝙蝠葛碱提多糖20mg。

实用例4

根据中华人民共和国药典2000版口服液项目规定，制成蝙蝠葛碱提多糖，10ml/支，每支口服液含蝙蝠葛碱提多糖1mg。

Claims

1、一种蝙蝠葛碱提多糖，具有下述组成序列：

具有如下理化特性：为白色粉末，易溶于水；(a)D^20℃＝37.08。

2、一种蝙蝠葛碱提多糖提取方法，包括以下步骤：

将蝙蝠葛粉碎加水煎煮至无水；水提后的残渣用碱液浸泡24小时，进行碱液提取3-6次，将滤液用盐酸调PH＝7后，80℃水浴中浓缩，至粘稠挂壁，自然沉淀，离心后取上清，乙醇醇析离心，取沉淀为碱提水溶粗多糖，将该粗多糖利用蒸馏水配制成适当浓度，分别加入乙醇，使醇终浓度达到80％以上，离心所得沉淀为本发明产物；

所述的碱液选自氢氧化钠、碳酸氢钠、碳酸钠、氢氧化铝。

3、根据权利要求1所述蝙蝠葛碱提多糖在对原发性癌症进行辅助治疗作用的药物中的应用。

4、根据权利要求1所述蝙蝠葛碱提多糖在制备清咽润喉的药物的应用。