CN104474026A

CN104474026A - 一种桑资源长效降血糖药物组合物及其颗粒剂与制备方法

Info

Publication number: CN104474026A
Application number: CN201410671797.8A
Authority: CN
Inventors: 王元成; 徐立
Original assignee: Southwest University
Current assignee: Southwest University
Priority date: 2014-11-21
Filing date: 2014-11-21
Publication date: 2015-04-01

Abstract

本发明公开了一种桑资源长效降血糖药物组合物及其颗粒剂与制备方法；所述桑资源长效降血糖药物组合物中含有桑资源降血糖活性提取物、葛根黄酮提取物、明胶和微生物转谷氨酰胺酶；所述桑资源长效降血糖颗粒剂的制备方法包括制备桑资源降血糖活性提取物、制备葛根黄酮提取物、配置降血糖颗粒等步骤。本发明制备的桑资源降血糖药物组合物及颗粒剂能多途径、长效控制餐后血糖水平。

Description

一种桑资源长效降血糖药物组合物及其颗粒剂与制备方法

技术领域

本发明涉及降血糖药物技术领域，具体涉及一种桑资源长效降血糖药物组合物及其颗粒剂与制备方法。

背景技术

糖尿病（Diabetes）是一种常见的慢性非传染性疾病，其危害巨大，被世界卫生组织称之为21世纪的灾难。目前，在临床上主要的治疗方式是利用降糖类西药控制血浆中血糖水平，其治标不治本，会导致糖尿病患者产生耐药性，并引起低血糖等多种毒副作用。因此，寻找高效低毒的降血糖天然产物及利用其开发降糖产品具有重要意义。

桑树（Morus alba L.）的药用价值自古以来均被收录于《神农本草经》、《唐本草》、《本草纲目》等多种医药典籍，并被收录为药食两用植物。现代研究表明，桑树的各组织器官，包括桑枝、桑椹、桑白皮以及桑叶中均富含生物碱、黄酮、多糖类生物活性物质，能够上调胰脏中PDX-1、胰岛素-1和胰岛素-2的表达，升高Bcl1/Bax的比例，避免胰脏细胞的凋亡以及抑制蛋白糖基化，抑制双糖酶、糖苷酶的活性，促进葡萄糖转化为糖元，从而起到降血糖、修复胰岛β细胞与肝脏等功能，对糖尿病的防治具有明显的优势。例如1-deoxynojirimycin、N-methly-1-deoxynojirimycin、fagomine、3-epi-fagomine、calysteginB2、1,4-didexy-1,4-imino-arabinitol、1,4-dideoxy-1,4-imino-(2-O-β-D-glucopyranosyl)-D-arabinitol等均具有降血糖作用。但是，此类天然产物在体内的半衰期较短，1.5-2 h内便会消失殆尽。因此，需要延缓桑资源中降血糖活性成分的释放与吸收，长效地控制血糖水平，才能有效辅助治疗糖尿病。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种桑资源长效降血糖药物组合物及其颗粒剂与制备方法，能多途径、长效控制餐后血糖水平。

为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：

本发明公开了一种桑资源长效降血糖药物组合物，所述桑资源长效降血糖药物组合物中含有桑资源降血糖活性提取物、葛根黄酮提取物、明胶和微生物转谷氨酰胺酶。

进一步，所述桑资源降血糖活性提取物与葛根黄酮提取物的质量比为5~1:1。

进一步，所述桑资源降血糖活性提取物与明胶的质量比为100:6；所述桑资源降血糖活性提取物与微生物转谷氨酰胺酶的质量比为10:1。

进一步，所述桑资源降血糖活性提取物为桑资源的黄酮、多糖和生物碱提取物。

进一步，所述桑资源为桑叶、桑枝、桑白皮和桑椹中的一种或多种的混合。

本发明还公开了一种由所述桑资源长效降血糖药物组合物制备的颗粒剂。

本发明还公开了所述颗粒剂的制备方法，包括以下步骤：

1）分别将桑资源和葛根粉碎；

2）用乙醇提取桑资源粉末，提取后的滤液用D061阳离子交换树脂吸附，收集流出液，流出液浓缩、冷冻干燥后得桑资源黄酮提取物；D061阳离子交换树脂经蒸馏水清洗除杂后，采用3倍0.8 mol/L氨水溶液洗脱，洗脱液浓缩至浸膏、冷冻干燥后得桑资源生物碱提取物；沸水煮桑资源提取后的残渣，过滤，滤液用无水乙醇沉淀，低温干燥沉淀得桑资源多糖提取物；将桑资源黄酮、生物碱和多糖提取物混合，得到桑资源降血糖活性提取物；

3）用水提取葛根粉末，提取液浓缩后离心去除沉淀，上清液经AB-8大孔树脂充分吸附后，采用双蒸水清洗除杂，利用乙醇溶液梯度洗脱AB-8大孔树脂，并收集50%~70%乙醇洗脱液，经浓缩至浸膏、低温真空干燥后得到葛根黄酮提取物；

4）将桑资源降血糖活性提取物和葛根黄酮提取物混合溶于乙醇溶液，然后与微生物转谷氨酰胺酶水溶液和明胶混合，孵育形成明胶固体混合物，经灭活微生物转谷氨酰胺酶后，制成粉末，加入塑形剂，灭菌后干压制成颗粒。

进一步，所述步骤2）中，乙醇提取桑资源粉末为70%乙醇溶液常温提取，提取三次，每次料液比为1 g:5 mL。

进一步，所述步骤2）中，水提取葛根粉末为水60℃下提取，提取三次，每次料液比为1 g:5 mL。

本发明的有益效果在于：

本发明利用桑资源（包括桑椹、桑叶、桑枝、桑白皮）降血糖活性提取物（多糖、黄酮、生物碱）作为降血糖活性成分制备桑资源降血糖药物组合物，其尽可能地将桑资源所有的具有降血糖活性、保肝、修复β细胞的作用加以利用，具有安全、无毒、绿色等特点。同时，桑资源降血糖药物组合物还通过微生物转谷酰胺酶将明胶、葛根黄酮提取物高效地生物交联在一起，从而延缓降血糖活性成分的释放与吸收，有效地延长了控制餐后血糖水平的时间。因此，本发明制备的桑资源降血糖药物组合物及颗粒剂能多途径、长效控制餐后血糖水平。

附图说明

为了使本发明的目的、技术方案和有益效果更加清楚，本发明提供如下附图进行说明：

图1为餐后小鼠血清中1-DNJ含量变化。

具体实施方式

下面将对本发明的优选实施例进行详细的描述。

实施例1

1. 利用粉碎机分别将精选的、烘干的桑叶、桑枝、桑白皮、桑椹以及葛根粉碎，并过60目筛。

2. 称取粉碎过筛的桑叶、桑枝、桑白皮与桑椹混合粉末1.5 kg，加入7.5 L 70%乙醇溶液，常温提取2 h，过滤除渣；第二、三次加入7.5 L 70 %乙醇溶液，常温提取1 h，过滤，合并3次过滤液；该滤液采用D061阳离子交换树脂吸附，收集流出液，浓缩、冷冻干燥后得桑资源黄酮提取物；D061阳离子交换树脂经足量蒸馏水清洗除杂后，采用3倍0.8 mol/L氨水溶液洗脱，浓缩洗脱液至浸膏、冷冻干燥，得桑资源生物碱提取物；沸水煮桑资源残渣2 h，纱布过滤，滤液用无水乙醇沉淀，低温干燥沉淀得桑资源多糖提取物。将桑资源多糖、黄酮与生物碱提取物干粉充分混合，即得桑资源降血糖活性提取物约25 g。

3. 称取粉碎过筛的1 kg葛根粉末经5 L水、60 ℃条件下提取2 h，3次；合并3次提取液，低温浓缩至5 L溶液，离心去除沉淀；上清液经AB-8大孔树脂充分吸附后，采用足量的双蒸水洗脱除杂，利用乙醇溶液梯度洗脱AB-8大孔树脂，并收集50%~70%乙醇洗脱液，经浓缩至浸膏、低温真空干燥后即得葛根黄酮提取物约12 g。

4. 将上述获得的桑资源降血糖活性提取物1 g与葛根黄酮提取物0.2 g的比例混合，溶于50℃预热的50%乙醇溶液，超声处理10 min后，3000 rpm离心15 min，上清液浓缩至2 mL，得待用液1；10 g微生物转谷氨酰胺酶溶于100 mL水，50 ℃孵育10 min，3000 rpm离心15 min，上清液为微生物转谷氨酰胺酶原液，得待用液2；10 mL食用猪皮明胶与2 mL待用液1、1 mL待用液2充分混合，50℃孵育12 h形成明胶固体混合物，经85℃灭活微生物转谷氨酰胺酶10 min后，制成粉末，加入适量塑形剂，灭菌后干压制成降血糖颗粒。

实施例2

实施例2中除桑资源降血糖活性提取物1 g与葛根黄酮提取物0.33 g的比例混合外，其余与实施例1相同。

实施例3

实施例3中除桑资源降血糖活性提取物1 g与葛根黄酮提取物1 g的比例混合外，其余与实施例1相同。

降血糖颗粒降血糖活性实验

α-葡萄糖苷酶抑制活性实验

以拜糖平（Acarbose）为阳性对照，检测实施例1、实施例2与实施例3中所制的颗粒水溶解物在不同浓度下对麦芽糖酶与蔗糖酶的抑制百分率，并求出IC₅₀（见表1）。结果表明，实施例1、实施例2与实施例3的降血糖颗粒可显著地抑制蔗糖酶的活性，抑制效率均优于拜糖平的效率，且与加入的桑资源降血糖活性提取物的量呈正相关；同时，实施例1、实施例2与实施例3的降血糖颗粒亦能抑制麦芽糖酶的活性，与拜糖平的抑制效果相比，实施例1的降血糖颗粒对麦芽糖酶的抑制活性与之持平，实施例2与实施例3的降血糖颗粒对麦芽糖酶的抑制效率略低。

桑资源降血糖颗粒对小鼠餐后血糖水平的影响

阳性对照组：拜糖平（Acarbose）片剂，北京拜耳公司生产，每片含有50 mg阿卡波糖；实验组：实施例1、实施例2、实施例3的降血糖颗粒；实验动物为7周龄20±2 g雄性清洁级昆明种小鼠，饲养温度为23±2 ℃，照明时间为12 h/d。

实验方法：取50只雄性小鼠，正常喂养2天，禁食一夜后，断尾取血，测定血糖，作为空腹血糖。随机将其分为正常组、阳性组与3个实验组，阳性组添食拜糖平（10 mg/kg），正常组添食等量的双蒸水，实验组分别添食实施例1、实施例2与实施例3的降血糖颗粒（10 mg/kg）。10 min后，灌喂淀粉（10 g/kg）溶液1 ml，分别在灌喂淀粉后0.5 h、1 h、1.5 h、2 h、2.5 h、3 h、4 h、5 h、6 h取血，并采用血糖仪测定血糖值（见表2）。结果表明，实施例1、实施例2与实施例3的降血糖颗粒均能降低餐后的血糖水平，与拜糖平相比，实施例1与实施例2的降血糖颗粒的降血糖能力与其持平，2.5 h内降低血糖值到正常水平。实施例3的降血糖颗粒的降血糖能力稍弱，3h内能降低血糖值到正常水平。

血清中降血糖物质含量的多少一定程度上反应了药物降血糖能力的高低。据研究表明，1-DNJ是桑资源中一种具有良好的降血糖活性的生物碱类物质。因此，我们采用HPLC方法测定了实验小鼠餐后血清中1-DNJ的含量。

实验方法：取40只雄性小鼠，正常喂养2天，禁食一夜后，断尾取血，测定血糖，作为空腹血糖。随机将其分为4组，分别灌喂实施例1（0.5 mg 1-DNJ）、实施例2（0.5 mg 1-DNJ）、实施例3（0.5 mg 1-DNJ）的降血糖颗粒与桑资源降血糖活性提取物（0.5 mg 1-DNJ）。10 min后，灌喂淀粉（10 g/kg）溶液1 ml，分别在灌喂淀粉后0.5 h、1 h、2 h、3 h、4 h、5 h、6 h取血，并检测血清中的1-DNJ含量变化情况（见图1）。结果显示，桑资源降血糖活性提取物组小鼠血清中的1-DNJ含量在0.5 h内上升到约4.2 ug/ml，此后2.5 h内迅速下降直至完全消失。实施例1、实施例2与实施例3组小鼠血清中的1-DNJ含量在0.5 h内上升到约3.7 ug/ml，此后略有下降，但是，在2~6h内均维持在约1.8 ug/ml左右。这就说明实施例1、实施例2与实施例3的降血糖颗粒延长了1-DNJ的释放或阻碍了1-DNJ被吸收的速率，从而在6 h内维持血清中1-DNJ的高含量，使得该颗粒能够长时间控制小鼠餐后血糖水平。

最后说明的是，以上优选实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管通过上述优选实施例已经对本发明进行了详细的描述，但本领域技术人员应当理解，可以在形式上和细节上对其作出各种各样的改变，而不偏离本发明权利要求书所限定的范围。

Claims

1.一种桑资源长效降血糖药物组合物，其特征在于：所述桑资源长效降血糖药物组合物中含有桑资源降血糖活性提取物、葛根黄酮提取物、明胶和微生物转谷氨酰胺酶。

2.根据权利要求1所述的桑资源长效降血糖药物组合物，其特征在于：所述桑资源降血糖活性提取物与葛根黄酮提取物的质量比为5~1:1。

3.根据权利要求2所述的桑资源长效降血糖药物组合物，其特征在于：所述桑资源降血糖活性提取物与明胶的质量比为100:6；所述桑资源降血糖活性提取物与微生物转谷氨酰胺酶的质量比为10:1。

4.根据权利要求1、2或3所述的桑资源长效降血糖药物组合物，其特征在于：所述桑资源降血糖活性提取物为桑资源的黄酮、多糖和生物碱提取物。

5.根据权利要求4所述的桑资源长效降血糖药物组合物，其特征在于：所述桑资源为桑叶、桑枝、桑白皮和桑椹中的一种或多种的混合。

6.由权利要求1至5任意一项所述的桑资源长效降血糖药物组合物制备的颗粒剂。

7.权利要求6所述的颗粒剂的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

1）分别将桑资源和葛根粉碎；

8.根据权利要求7所述的颗粒剂的制备方法，其特征在于：所述步骤2）中，乙醇提取桑资源粉末为70%乙醇溶液常温提取，提取三次，每次料液比为1 g:5 mL。

9.根据权利要求7所述的颗粒剂的制备方法，其特征在于：所述步骤2）中，水提取葛根粉末为水60℃下提取，提取三次，每次料液比为1 g:5 mL。