CN1802375A - 用于治疗炎性疾病的β－咔啉 - Google Patents

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CN1802375A CNA2004800160170A CN200480016017A CN1802375A CN 1802375 A CN1802375 A CN 1802375A CN A2004800160170 A CNA2004800160170 A CN A2004800160170A CN 200480016017 A CN200480016017 A CN 200480016017A CN 1802375 A CN1802375 A CN 1802375A
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卢利·菲尔德斯·刘
弗朗科斯·索西
叶迎春
罗伯特·S·默里
拉曼·普凯什
杰里米·D·利特尔
阿尔弗雷多·卡斯特罗
霍莫兹·马兹迪耶斯尼
保罗·E·弗莱明
多米尼克·雷诺兹
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Abstract

本发明提供了式(I)β－咔啉化合物，其中环A为取代吡啶基、嘧啶基、吗啉基、哌啶基、哌嗪基、吡咯烷基、吡喃基、四氢呋喃基、环己基、环戊基或硫代吗啉基环，以及R1、R2和R3如说明书所述。该化合物为IKK－2抑制剂，可用于治疗由IKK－2引起的疾病，如炎性疾病和癌症。

Description

用于治疗炎性疾病的β-咔啉
相关申请
本申请要求2003年4月9日申请的美国临时专利申请60/461468的利益。
发明领域
本发明涉及β-咔啉化合物、其药物组合物，以及利用该组合物治疗疾病的方法。该化合物特别适用于治疗炎性疾病和癌症。
发明背景
转录(细胞核)因子NF-κB是Re1蛋白家族成员，典型地为由p50和p65亚单位组成的杂环二聚物。NF-κB作为细胞溶质的组成存在于其中，其通过与IκB家族抑制剂之一结合灭活。Palombella等人在WO 95/25533中指出，泛蛋白-蛋白酶体途径在调节NF-κB活性中起着本质性作用，负责处理p105和p50，以及抑制剂蛋白IκB-α的降解。Chen et al.，Cell 84：853(1996)指出，在降解之前，IκB-α通过多个亚单位IκB激酶复合物(IKK)，在丝氨酸残基32和36中经历了选择性磷酸化反应。IκB-α被IKK磷酸化，其具有两种催化亚单位，即IKK-1(IκB激酶α或IKK-α)和IKK-2(IκB激酶β或IKK-β)。一旦被磷酸化，IκB就靶向泛蛋白化反应，并通过26S蛋白酶体降解，允许NF-κB迁移至细胞核，在此与靶基因促进剂中的特定DNA序列结合，促进其转录。1抑制剂IKK可阻滞IκB的磷酸化反应及其进一步的下游作用，特别是阻滞与NF-κB转录因子的结合。
NF-κB调节控制下的基因蛋白产物包括细胞因子、趋化因子、细胞粘附分子和调节细胞生长和控制的蛋白质。重要的是，这些原炎性蛋白质也能够在自分泌或或旁分泌形式下发生作用，从而进一步刺激NF-κB活化。另外，NF-κB在正常和噁性细胞胞中起着作用。进一步地，NF-κB为杂环二聚物转录因子，与其它因子一样，其可活化大量能够为原炎性细胞因子编码的基因，所述细胞因子如IL-1、IL-2、TNFα或IL-6。NF-κB存在于细胞的细胞溶质中，形成了含天然存在的抑制剂IκB的复合物。通过细胞因子刺激细胞可导致IκB的磷酸化，并接着导致蛋白水解。蛋白水解会导致NF-κB活化，从而使其迁移至细胞的细胞核，活化大量的原炎性基因。
Rinehart等人的美国专利US 4,631,149(1986)公开了用作抗病毒、抗细菌和抗肿瘤剂的β-咔啉化合物
Ritzeler等人在WO 01/68648公开了具有IκB激酶抑制活性的β-咔啉化合物，可用于治疗炎性疾病(如风湿性关节炎)、哮喘、心肌梗塞、Alzheimer疾病、癌瘤性疾病(细胞毒素作用增强治疗)和动脉硬化症。
人们希望有益地提供具有良好治疗性能的新IKK抑制剂，特别是具有治疗炎性疾病性能。
本发明描述
本发明提供了用于治疗由IKK-2引起的疾病(如炎性疾病和癌症)的化合物。该化合物由式I表示：
其中环A选自：
(a)吡啶基或嘧啶基环，该环被(i)-CH2C(O)-G和0-1个R6a或(ii)1-2个R6a取代，以及
(b)吗啉基、哌啶基、哌嗪基、吡咯烷基、吡喃基、四氢呋喃基、环己基、环戊基或硫代吗啉基环，该环被(i)-C(R9)3、-W-G或-G，(ii)0-4个R6b和(iii)0-1个环碳上的氧基或0-2个环硫上的氧基取代；
每个R6a独立地选自C1-6脂族基团、卤素、C1-6烷氧基或氨基；
每个R6b独立地选自C1-3脂族基团或-N(R7)2，以及相同或相邻碳原子上的两个R6b与插入的碳原子任意地一起形成含1-2个选自N、O或S的环杂原子的5-6元环；
W为-Q-、-Q-C(O)-、-C(R9)2-C(R9)(R12)-或-C(R9)2-[C(R9)(R12)]2-；
Q为-C(R9)2-或-C(R9)2C(R9)2-；
G为-OH、-NR4R5、-N(R9)CONR4R5、-N(R9)SO2(C1-3脂族基团)、-N(R9)COCF3、-N(R9)CO(C1-6脂族基团)、-N(R9)CO(杂环基)、-N(R9)CO(杂芳基)、-N(R9)CO(芳基)、3-7元杂环基环或5-6元杂芳基，其中G中的每个杂芳基、芳基和杂环基部分任意地被1-3个R10取代；
R1为氢、卤素、C1-3脂族基团、氨基、氰基、(C1-3烷基)1-2氨基、C1-3烷氧基、-CONH2、-NHCOCF3或-CH2NH2；
R2为氢、卤素，C1-3脂族基团、-CF3；
R3为氢、卤素、C1-6脂族基团、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、羟基、氨基、氰基或(C1-6烷基)1-2氨基；
R4为氢、3-7元杂环基或C1-6脂族基团；
R5为氢、C1-6脂族基团或含1-2个选自N、O或S的环杂原子的3-7元杂环，其中R5任意地被卤素、-OR7、-CN、-SR8、-S(O)2R8、-S(O)2N(R7)2、-C(O)R7、-CO2R7、-N(R7)2、-C(O)N(R7)2、-N(R7)C(O)R7、-N(R7)CO2R8或-N(R7)C(O)N(R7)2取代；
每个R7独立地选自氢或C1-4脂族基团，或相同氮原子上的两个R7与氮原子一起形成5-6元杂芳基或杂环基；
每个R8独立地选自C1-4脂族基团；
每个R9独立地选自氢或C1-3脂族基团；
每个R10独立地选自氧代、-R11、-T-R11或-V-T-R11；
每个R11独立地选自C1-6脂族基团、卤素、-S(O)2N(R7)2、-OR7、-CN、-SR8、-S(O)2R8、-C(O)R7、-CO2R7、-N(R7)2、-C(O)N(R7)2、-N(R7)C(O)R7、-N(R7)CO2R7或-N(R7)C(O)N(R7)2；
T为直链或支链C1-4亚烷基链；
V为-O-、-N(R7)-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)-或-CO2-；以及
R12为氢或氨基酸侧链。
这里使用的术语“脂族基团”是指直链、支链或环C1-C12烃基团，其可完全饱和或含有一个或多个不饱和单元，但不是芳族基团。例如，适宜的脂族基团包括取代或未取代直链、支链或环烷基、链烯基、炔基基团及其混合物，所述混合物如(环烷基)烷基、(环烯基)烷基或(环烷基)链烯基。单独使用或作为较大基团的部分使用的术语“烷基”、“烷氧基”、“羟烷基”、“烷氧基烷基”和“烷氧羰基”包括含1至12个碳原子的直链或支链基团。单独使用或作为较大基团的部分使用的术语“链烯基”或“炔基”包括含1至12个碳原子的直链或支链基团。单独使用或作为较大基团的部分使用的术语“环烷基”包括完全饱和或含一个或多个不饱和单元的环C3-C12烃基，但不是芳族基团。
术语“卤代烷基”、“卤代链烯基”和“卤代烷氧基”是指被一个或多个卤原子取代的烷基、链烯基或烷氧基。术语“卤素”是指F、Cl、Br或I。
术语“杂原子”是指氮、氧或硫，其包括氮和硫的任何氧化形式及任何碱性氮的季铵化形式。另外，术语“氮”包括杂环中的可取代氮。作为实例，在含0-3个选自氧、硫或氮的杂原子饱和或部分不饱和环中，氮可以是N(如在3，4-二氢-2-吡咯基中)、NH(如在吡咯烷基中)或NR+(如在N-取代吡咯烷基中)。
这里使用的术语“碳环”、“碳环基”、“碳环-”或“碳环的”是指3至14元脂族环系。不论是饱和或是部分不饱和，术语“碳环”、“碳环基”、“碳环-”或“碳环的”也指任意取代的环。术语“碳环”、“碳环基”、“碳环-”或“碳环的”也包括与一个或多个芳族环或非芳族环稠合的脂族环，如在十氢萘基或四氢萘基中，其中基团或连接位置于脂族环中。
单独使用或作为较大基团的部分使用的术语“芳基”，如在“芳烷基”、“芳烷氧基”或“芳氧烷基”中芳基，包括5至14元芳环，如苯基、苄基、苯乙基、1-萘基、2-萘基、1-蒽基和2-蒽基。术语“芳基”也指任意取代的环。术语“芳基”也与术语“芳环”混用。“芳基”也包括其中芳族环与一个或多个环稠合的稠合多环芳族环系。实例包括1-萘基、2-萘基、1-蒽基和2-蒽基。正如这里所使用，术语“芳基”的范围也包括其中芳族环与一个或多个非芳族环稠合的基团，如茚满基、菲啶基或四氢萘基，其中基团或连接位置于芳族环中。
这里使用的术语“杂环”、“杂环基”或“杂环的”包括5至14元非芳族环系，优选5至10元环系，其中一个或多个环碳，优选1至4个环碳各自被杂原子如N、O或S取代。杂环的实例包括3-1H-苯并咪唑-2-酮、(1-取代)-2-氧代-苯并咪唑-3-基、2-四氢呋喃基、3-四氢呋喃基、2-四氢吡喃基、3-四氢吡喃基、4-四氢吡喃基、[1，3]-二氧杂环戊烷基、[1，3]-二硫杂环戊烷基、[1，3]-d二噁烷基、2-四氢噻吩基、3-四氢噻吩基、2-吗啉基、3-吗啉基、4-吗啉基、2-硫代吗啉基、3-硫代吗啉基、4-硫代吗啉基、1-吡咯烷基、2-吡咯烷基、3-吡咯烷基、1-哌嗪基、2-哌嗪基、1-哌啶基、2-哌啶基、3-哌啶基、4-哌啶基、4-噻唑烷基、diazolonyl、N-取代diazolonyl、1-苯并[c]吡咯酮基、苯并噁烷基、苯并吡咯烷基、苯并哌啶基、苯并氧杂环戊烷基、苯并硫杂环戊烷基和benzothianyl。正如这里所使用，术语“杂环基”或“杂环的”的范围还包括其中环杂原子的非芳族环与一个或多个芳族或非芳族的环稠合的基团，如二氢吲哚基、苯并二氢吡喃基、菲啶基或7四氢喹啉基，其中基团或连接位置于含杂原子的非芳族环中。不论是饱和或是部分不饱和，术语“杂环”、“杂环基”或“杂环”也指任意取代的环。
单独使用或作为较大基团的部分使用的术语“杂芳基”，如“杂芳烷基”或“杂芳烷氧基”，是指5至14元杂芳族环基团。杂芳基环的实例包括2-呋喃基、3-呋喃基、3-呋咱基、N-咪唑基、2-咪唑基、4-咪唑基、5-咪唑基、3-异噁唑基、4-异噁唑基、5-异噁唑基、2-噁二唑基、5-噁二唑基、2-噁唑基、4-噁唑基、5-噁唑基、1-吡咯基、2-吡咯基、3-吡咯基、1-吡唑基、2-吡唑基、3-吡唑基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、5-嘧啶基、3-哒嗪基、2-噻唑基、4-噻唑基、5-噻唑基、5-四唑基、2-三唑基、5-三唑基、2-噻吩基、3-噻吩基、咔唑基、苯并咪唑基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、吲哚基、喹啉基、苯并三唑基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、苯并咪唑基、异喹啉基、吲唑基、异吲哚基、吖啶基或苯并异噁唑基。正如这里所使用，术语“杂芳基”的范围还包括其中环杂原子环与一个或多个芳族或非芳族的环稠合的基团，其中基团或连接位置于含杂原子的杂芳族环中。实例包括四氢喹啉基、四氢异喹啉基和吡啶并[3，4-d]嘧啶基。术语“杂芳基”也指任意取代的环。术语“杂芳基”可与术语“杂芳基环”或术语“杂芳族”混用。
芳基(包括芳烷基、芳烷氧基、芳氧基烷基等)或杂芳基(包括杂芳烷基和杂芳基烷氧基等)基团可包含一个或多个取代基。芳基、杂芳基、芳烷基或杂芳烷基基团的不饱和碳原子上的适宜取代基实例包括卤素、-R0、-OR0、-SR0、1，2-亚甲基二氧基、1，2-亚乙基二氧基、被护OH(如酰氧基)、苯基(Ph)、取代Ph、-O(Ph)、取代-O(Ph)、-CH2(Ph)、取代-CH2(Ph)、-CH2CH2(Ph)、取代-CH2CH2(Ph)、-NO2、-CN、-N(R0)2、-NR0C(O)R0、-NR0C(O)N(R0)2、-NR0CO2R0、-NR0NR0C(O)R0、-NR0NR0C(O)N(R0)2、-NR0NR0CO2R0、-C(O)C(O)R0、-C(O)CH2C(O)R0、-CO2R0、-C(O)N(R0)2、-OC(O)N(R0)2、-S(O)2R0、-SO2N(R0)2、-S(O)R0、-NR0SO2N(R0)2、-NR0SO2R0、-C(＝S)N(R0)2、-C(＝NH)-N(R0)2、-(CH2)yNHC(O)R0、-(CH2)yNHC(O)CH(V-R0)(R0)；其中每个R0独立地选自氢、取代或未取代脂族基团、未取代杂芳基或杂环、苯基(Ph)、取代Ph、-O(Ph)、取代-O(Ph)、-CH2(Ph)或取代-CH2(Ph)；y为0-6；以及V为连接基团。脂族基团或R0的苯环上的取代基的实例包括氨基、烷氨基、二烷氨基、氨基羰基、卤素、烷基、烷氨基羰基、二烷氨基羰基、烷氨基羰基氧基、二烷氨基羰基氧基、烷氧基、硝基、氰基、羧基、烷氧基羰基、烷基羰基、羟基、卤代烷氧基或卤代烷基。
脂族基团或非芳族杂环可包含一个或多个取代基。脂族基团或非芳族杂环的饱和碳20上的适宜取代基实例包括上述芳基或杂芳基基团的不饱和碳上的取代基以及下列基团：＝O、＝S、＝NNHR*、＝NN(R*)2、＝N-、＝NNHC(O)R*、＝NNHCO2(烷基)、＝NNHSO2(烷基)或＝NR*，其中每个R*独立地选自氢、不饱和脂族基团或取代脂族基团。脂族基团上的取代基实例包括氨基、烷氨基、二烷氨基、氨基羰基、卤素、烷基、烷氨基羰基、二烷氨基羰基、烷氨基羰基氧基、烷氧基、硝基、氰基、羧基、烷氧羰基、烷基羰基、羟基、卤代烷氧基或卤代烷基。
非芳族杂环的氮原子上的适宜取代基包括：-R+、-N(R+)2、-C(O)R+、-CO2R+、-C(O)C(O)R+、-C(O)CH2C(O)R+、-SO2R+、-SO2N(R+)2、-C(＝S)N(R+)2、-C(＝NH)-N(R+)2和-NR+SO2R+；其中每个R+独立地选自氢、脂族基团、取代脂族基团、苯基(Ph)、取代Ph、-O(Ph)、取代-O(Ph)、CH2(Ph)、取代CH2(Ph)或未取代杂芳基或杂环。脂族基团或苯环上的取代基实例包括：氨基、烷氨基、二烷氨基、氨基羰基、卤素、烷基、烷氨基羰基、二烷氨基羰基、烷氨基羰基氧基、二烷氨基羰基氧基、烷氧基、硝基、氰基、羧基、烷氧羰基、烷基羰基，羟基、卤代烷氧基或卤代烷基。
术语“连接基团”或“连接基”是指连接化合物两部分的有机部分。连接基典型地包含：原子，如氧或硫；基团单元，如-NH-、-CH2-、-C(O)-、-C(O)NH-；或原子链，如亚烷基链。连接基的分子量范围典型地为大约14至200，优选14至96，其链长最多为大约6个原子。连接基的实例包括饱和或不饱和C1-6亚烷基链，其可任意地被取代，且其中该链的一个或两个饱和碳原子任意地被-C(O)-、-C(O)C(O)-、-CONH-、-CONHNH-、-CO2-、-OC(O)-、-NHCO2-、-O-、-NHCONH-、-OC(O)NH-、-NHNH-、-NHCO-、-S-、-SO-、-SO2-、-NH-、-SO2NH-或-NHSO2-取代。
术语“亚烷基链”是指任意取代的直链或支链碳链，其可以是完全饱和，或含有一个或多个不饱和单元。任意的取代基如上文脂族基团所述。
取代基或其他可变基团的组合只有在这种组合能够得到稳定或化学可行的化合物的情况下才是允许的。所谓稳定化合物或化学可行化合物是指其中当温度维持在40℃或更低、不存在潮湿或其他化学活性条件下至少一周时，化学结构基本上不发生变化的化合物。
除非另外指明，这里描述的结构也指包括所有结构的立体化学形式，也就是各种不对称中心的R和S构型。由此，本发明化合物的单个立体化学异构体及其对映体和非对映体混合物都属于本发明的范围。除非另外指明，这里描述的结构也指包括仅在存在富含一个或多个同位素原子不同的化合物。例如，除了由氘或氚代替氢，或由富含13C-或14C-的碳代替碳，具有本发明结构的化合物均属于本发明范围。
在本发明的一个实施方案中，环A选自被1-2 R6a基团取代的吡啶基或嘧啶基环。在该实施方案中，优选的环A包括3-吡啶基或5-嘧啶基环，分别如下述式II-A和II-B化合物所示。
Figure A20048001601700331
优选地，R6a选自卤素或C1-6脂族基团，如氯或甲基。当R6a为脂族基团如甲基时，R6a基团的有利位置位于吡啶基环的2-位或嘧啶基的4-位，如上述结构式II-C所示。特别的环A部分为2-甲基-3-吡啶基和4-甲基-5-嘧啶基。本发明发现，其中R6a为甲基的式II-C化合物在IKK抑制生物学试验中的效果令人惊讶地优于不带未取代环A吡啶的其它化合物，如上文提及的Ritzeler等人的PCT申请WO 01/68648中描述的那些化合物。
优选的R1基团为小基团，如氢、甲基、氨基和氟。
优选的R2基团包括氢和卤素。氯为优选的R2卤素基团。
优选的R3基团包括氢、卤素(特别是氯)和烷氧基。适宜的烷氧基基团包括C1-4烷氧基基团，如甲氧基、乙氧基、丙氧基和氯丙基甲氧基。
在另一实施方案中，环A选自含0-2个选自氮、氧和硫的杂原子的5-6元非芳族环。它们通常是指式III化合物。非芳族环A基团的实例包括：吗啉基、哌啶基、哌嗪基、吡咯烷基、吡喃基、四氢呋喃基、环己基、环戊基和硫代吗啉基环。优选地，这类非芳族环被下述基团取代：(i)-C(R9)3或-W-G，(ii)0-4个R6b，以及(iii)环碳上的0-1个氧基或环硫上的0-2个氧基。更优选地，这类非芳族环被下述基团取代：(i)-W-G，(ii)0-2个R6b，以及(iii)环碳上的0-1个氧基或环硫上的0-2个氧基。
优选的G为-NR4R5或3-7元杂环基。更优选的G为-NR4R5或5-6元杂环基，其中G被1-2个R10取代。
优选的R4为氢、5-6元杂环基或C1-6脂族基团，更优选氢或C1-6脂族基团。R4也可为C1-6烷氧基。
优选的R5为氢、5-6元杂环基或C1-6脂族基团，更优选氢或C1-6脂族基团。
其中环A为非芳族环的不同式III化合物如表2所示。为便于观察，除了在一些情况下的氧基，这些非芳族环A上的取代基没有表示出来。
表2其中A为非芳族环的化合物
Figure A20048001601700351
当环A为非芳族六-元杂环时，环A上的-W-G和-C(R9)3取代基的有利位置位于与β-咔啉相连位置的邻位。例如，在化合物III-A、III-B、III-D、III-H、III-J和III-M中，-W-G和-C(R9)3的优选连接位置位于环A氮上，或在化合物III-F情况下位于N-1上。
优选地，W为-Q-、-Q-C(O)-、-C(R9)2-C(R9)(R12)-或-C(R9)2-[C(R9)(R12)]2，其中R9为氢。更优选地，W为-Q-、-Q-C(O)-或-C(R9)2-C(R9)(R12)-。R12为氢、C1-6脂族基团、取代或未取代苯基、取代或未取代苄基或氨基酸侧链，特别是天然氨基酸的侧链。特别的天然氨基酸的和实例包括丙氨酸、苯基丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、丝氨酸、酪氨酸、天冬氨酸和谷氨酸。
在一实施方案中，W为Q-C(O)-。在该实施方案中，优选的Q为-CH2-或-CH2-CH2-，更优选-CH2-。
在另一实施方案中，环A被0-2个R6b取代。优选的R6b为甲基。当环A为非芳族六元环时，一个实施方案提供了其中环A与β-咔啉连接位置相对的位置上含有两个甲基基团的式III化合物。该实施方案的实例包括其中A为6，6-二甲基-吗啉基环的化合物。优选地，这类化合物进一步地被上述-W-G取代。
当环A为吗啉基环时，人们发现其中在吗啉环的3位含有“S”立体化学的化合物为优选化合物，如下述式(S)-III-A化合物所示。
其中n为0-4，以及R1、R2、R3、W、G和R6b如上文所示。类似地，人们期望“S”立体化学对于其它式III六-元非芳族环A化合物也是优选的。
一个实施方案涉及式III-A或(S)-III-A化合物，其中R1为氢、卤素、甲基或氨基；
R2为氢、甲基或卤素；
R3为氢、卤素、烷氧基或(C1-6脂族基团)2氨基；
环A被0-2个R6b取代；
R6b为C1-3脂族基团；
W为-Q-、-Q-C(O)-、-C(R9)2-C(R9)(R12)-或-C(R9)2-[C(R9)(R12)]2-；
Q为-C(R9)2-或-C(R9)2C(R9)2-；
G为-NR4R5、-N(R9)C(O)NR4R5、-N(R9)SO2(C1-3脂族基团)、-N(R9)C(O)CF3、-N(R9)CO(C1-6脂族基团)、-N(R9)CO(杂环基)、-N(R9)CO(杂芳基)、-N(R9)CO(芳基)、5-6元杂环基环或5-6元杂芳基，其中G中的每个杂芳基、芳基和杂环基部分任意地被1-3个R10取代；
R4为氢或C1-6脂族基团；
R5为氢或C1-6脂族基团，该基团任意地被卤素、-OR7、-CN、-SR8、-S(O)2R8、-S(O)2N(R7)2、-C(O)R7、-CO2R7、-N(R7)2、-C(O)N(R7)2、-N(R7)C(O)R7、-N(R7)CO2R8或-N(R7)C(O)N(R7)2取代；
每个R7独立地选自氢或C1-4脂族基团，或相同氮原子上的两个R7与氮原子一起形成5-6元杂芳基或杂环基；
每个R8独立地选自C1-4脂族基团；
R9为氢；
每个R10独立地选自氧代、-R11、-T-R11或-V-T-R11；
每个R11独立地选自C1-6脂族基团、卤素、-S(O)2N(R7)2、-OR7、-CN、-SR8、-S(O)2R8、-C(O)R7、-CO2R7、-N(R7)2、-C(O)N(R7)2、-N(R7)C(O)R7、-N(R7)CO2R7或-N(R7)C(O)N(R7)2；
T为直链或支链C1-4亚烷基链；
V为-O-、-N(R7)-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)-或-CO2-；以及
R12为氢、C1-6脂族基团、取代或未取代苯基或取代或未取代苄基。
另一实施方案涉及式III-A或(S)-III-A化合物，其中：
R1为氢、甲基、氟或氨基；
R2为氯；
R3为氢或烷氧基；
环A被-W-G和0-2个R6b取代；
R6b为甲基；
W为-Q-、-Q-C(O)-或-C(R9)2-C(R9)(R12)-；
Q为-C(R9)2-或-C(R9)2C(R9)2-；
G为-NR4R5、-N(R9)C(O)NR4R5、-N(R9)C(O)CF3、-N(R9)CO(C1-6脂族基团)、-N(R9)CO(杂环基)、-N(R9)CO(杂芳基)、5-6元杂环基环或5-6元杂芳基，其中G中的每个杂芳基和杂环基部分任意地被1-3个R10取代；
R4为氢或C1-6脂族基团；
R5为氢或C1-6脂族基团；
每个R7独立地选自氢或C1-4脂族基团，或相同氮原子上的两个R7与氮原子一起形成5-6元杂芳基或杂环基；
每个R8独立地选自C1-4脂族基团；
R9为氢；
每个R10独立地选自氧代、-R11、-T-R11或-V-T-R11；
每个R11独立地选自C1-6脂族基团、卤素、-S(O)2N(R7)2、-OR7、-CN、-SR8、-S(O)2R8、-C(O)R7、-CO2R7、-N(R7)2、-C(O)N(R7)2、-N(R7)C(O)R7、-N(R7)CO2R7或-N(R7)C(O)N(R7)2；
T为直链或支链C1-4亚烷基链；
V为-O-、-N(R7)-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)-或-CO2-；以及
R12为氢、C1-6脂族基团、苯基或苄基。
优选的式III-A化合物为式(S)-III-A′化合物：
其中R1、R2、R3、W和G如上文(S)-III-A中的定义。
另一实施方案涉及式III-A-a化合物或其可药用盐，
其中：
Q为-CH2-、-CH(R9)-或-C(R9)2-；
G为-NR4R5或3-7元杂环基或杂芳基环，该基团任意地被1-2个R10取代；
R1为氢、卤素、C1-3脂族基团、氨基、氰基、(C1-3烷基)1-2氨基、C1-3烷氧基、(C1-3脂族基团)-C(O)-、(C1-6脂族基团)-CO2-或(C1-3脂族基团)-C(O)NH-；
R2为氢、卤素、C1-3脂族基团、C1-3烷氧基、C1-3卤代烷氧基或C1-3卤代烷基；
R3为氢、卤素、C1-6脂族基团、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、羟基、氨基、氰基或(C1-6烷基)1-2氨基；
R4为氢或C1-6脂族基团；
R5为C1-6脂族基团，该基团任意地被卤素、-OR7、-CN、-SR8、-S(O)2R8、-C(O)R7、-CO2R7、-N(R7)2、-C(O)N(R7)2、-N(R7)C(O)R7、-N(R7)CO2R8或-N(R7)C(O)N(R7)2取代；
环A被0-4个R6b取代；
每个R6b独立地选自C1-6脂族基团；
每个R7独立地选自氢或C1-4脂族基团，或相同氮原子上的两个R7与氮原子一起形成5-6元杂芳基或杂环基；
每个R8独立地选自C1-4脂族基团；
每个R9独立地选自C1-3脂族基团；
每个R10独立地选自-R11、-T-R11或-V-T-R11；
每个R11独立地选自C1-6脂族基团、卤素、-OR7、-CN、-SR8、-S(O)2R8、-C(O)R7、-CO2R7、-N(R7)2、-C(O)N(R7)2、-N(R7)C(O)R7、-N(R7)CO2R7或-N(R7)C(O)N(R7)2；
T为直链或支链C1-4亚烷基链；以及
V为-O-、-N(R7)-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)-或-CO2-。
一个实施方案涉及式III-A-a化合物，其中：
Q为-CH2-或-CH(R9)-；
G为-NR4R5或5-6元杂环基或杂芳基环，该基团任意地被1-2个R10取代；
R1为氢、卤素、C1-2脂族基团、氨基或(C1-2烷基)1-2氨基；
R2为氢、卤素、C1-2脂族基团、C1-2烷氧基或C1-2卤代烷基；
R3为氢、卤素、C1-2脂族基团、C1-2烷氧基或C1-2卤代烷基；
R4为氢或C1-6脂族基团；
R5为C1-6脂族基团，该基团任意地被卤素、-OR7、-CN、-SR8、-S(O)2R8、-C(O)R7、-CO2R7、-N(R7)2、-C(O)N(R7)2、-N(R7)C(O)R7、-N(R7)CO2R8或-N(R7)C(O)N(R7)2取代；
环A被0-2个R6b取代；
每个R6b独立地选自C1-3脂族基团；
每个R7独立地选自氢或C1-4脂族基团，或相同氮原子上的两个R7与氮原子一起形成5-6元杂芳基或杂环基；
R8为C1-4脂族基团；
R9独立地选自C1-3脂族基团；
每个R10独立地选自-R11、-T-R11或-V-T-R11；
每个R11独立地选自C1-6脂族基团、卤素、-OR7、-CN、-SR8、-S(O)2R8、-C(O)R7、-CO2R7、-N(R7)2、-C(O)N(R7)2、-N(R7)C(O)R7、-N(R7)CO2R7或-N(R7)C(O)N(R7)2；
T为直链或支链C1-4亚烷基链；以及
V为-O-、-N(R7)-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)-或-CO2-。
另一实施方案涉及式III-A-a化合物，其中：
Q为-CH2-或-CH(R9)-；
G为-NR4R5或含1-2个选自氧或氮的杂原子的5-6元杂环基，该基团任意地被1-2个R10取代；
R1为氢、卤素、甲基、氨基或(C1-2烷基)1-2氨基；
R2为氢、卤素、C1-2脂族基团或C1-2卤代烷基；
R3为氢、卤素或C1-2脂族基团；
R4为氢或C1-6脂族基团；
R5为C1-6脂族基团，该基团任意地被卤素、-OR7、-CN、-SR8、-S(O)2R8、-C(O)R7、-CO2R7、-N(R7)2、-C(O)N(R7)2、-N(R7)C(O)R7、-N(R7)CO2R8或-N(R7)C(O)N(R7)2取代；
环A被0或2个R6b取代；
每个R6b独立地选自C1-3脂族基团；
每个R7独立地选自氢或C1-4脂族基团，或相同氮原子上的两个R7与氮原子一起形成5-6元杂芳基或杂环基；
R8为C1-4脂族基团；
R9独立地选自C1-3脂族基团；
每个R10独立地选自-R11、-T-R11或-V-T-R11；
每个R11独立地选自C1-6脂族基团、卤素、-OR7、-CN、-SR8、-S(O)2R8、-C(O)R7、-CO2R7、-N(R7)2、-C(O)N(R7)2、-N(R7)C(O)R7、-N(R7)CO2R7或-N(R7)C(O)N(R7)2；
T为直链或支链C1-4亚烷基链；以及
V为-O-、-N(R7)-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)-或-CO2-。
在优选的式III-A-a化合物中，Q为-CH2-；G选自任意取代的哌啶基、哌嗪基、吗啉基、吡咯烷基或-NR4R5；R4为氢或C1-6脂族基团；以及R5为C1-6脂族基团、5-6元杂环基或C1-6羟烷基。在更优选的该化合物中，G为未取代或被独立选自C1-3烷基、HO-烷基、烷氧羰基、一或二烷氨基羰基和HO2C-烷基的1-2个基团取代。在每个上述实施方案的式III-A-a化合物中，位于吗啉3-位上(S)立体化学为优选。
另一实施方案涉及式III-A-aa化合物及其可药用盐，
Figure A20048001601700461
其中：
Q为-CH2-或-CH(R9)-；
G为-NR4R5或3-7元杂环基，该基团任意地被1-2个R10取代；
R1为氢、卤素、C1-2烷基、、氨基或(C1-2烷基)1-2氨基；
R2为氢、卤素、C1-2脂族基团、C1-2烷氧基或C1-2卤代烷基；
R3为氢、卤素、C1-2脂族基团、C1-2烷氧基或C1-2卤代烷基；
R4为氢或C1-6脂族基团；
R5为C1-6脂族基团，该基团任意地被卤素、-OR7、-CN、-SR8、-S(O)2R8、-C(O)R7、-CO2R7、-N(R7)2、-C(O)N(R7)2、-N(R7)C(O)R7、-N(R7)CO2R8或-N(R7)C(O)N(R7)2取代；
每个R6b独立地选自C1-6脂族基团；
每个R7独立地选自氢或C1-4脂族基团，或相同氮原子上的两个R7与氮原子一起形成5-6元杂芳基或杂环基；
R8为C1-4脂族基团；
R9独立地选自C1-3脂族基团；
每个R10独立地选自-R11、-T-R11或-V-T-R11；
每个R11独立地选自C1-6脂族基团、卤素、-OR7、-CN、-SR8、-S(O)2R8、-C(O)R7、-CO2R7、-N(R7)2、-C(O)N(R7)2、-N(R7)C(O)R7、-N(R7)CO2R7或-N(R7)C(O)N(R7)2；
T为直链或支链C1-4亚烷基链；以及
V为-O-、-N(R7)-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)-或-CO2-。
另一实施方案涉及式III-A-aa化合物，其中：
Q为-CH2-；
G为-NR4R5或5-6元杂环基，该基团任意地被1-2个R10取代；
R1为氢、卤素或甲基；
R2为氢、卤素、C1-2脂族基团、C1-2烷氧基或C1-2卤代烷基；
R3为氢；
R4为氢或C1-6脂族基团；
R5为C1-6脂族基团，该基团任意地被卤素、-OR7、-CN、-SR8、-S(O)2R8、-C(O)R7、-CO2R7、-N(R7)2、-C(O)N(R7)2、-N(R7)C(O)R7、-N(R7)CO2R8或-N(R7)C(O)N(R7)2取代；
每个R6b独立地选自氢或C1-6脂族基团；
每个R7独立地选自氢或C1-4脂族基团，或相同氮原子上的两个R7与氮原子一起形成5-6元杂芳基或杂环基；
R8为C1-4脂族基团；
每个R10独立地选自-R11、-T-R11或-V-T-R11；
每个R11独立地选自C1-6脂族基团、卤素、-OR7、-CN、-SR8、-S(O)2R8、-C(O)R7、-CO2R7、-N(R7)2、-C(O)N(R7)2、-N(R7)C(O)R7、-N(R7)CO2R7或-N(R7)C(O)N(R7)2；
T为直链或支链C1-4亚烷基链；以及
V为-O-、-N(R7)-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)-或-CO2-。
在优选的式III-A-aa化合物中，
Q为-CH2-；
G选自任意取代的哌啶基、哌嗪基、吗啉基、吡咯烷基或-NR4R5；
R1为氢、卤素或甲基；
R2为卤素；
R3为氢；
R4为氢或C1-6脂族基团；
R5为C1-6烷氧基、C1-6脂族基团或C1-6羟烷基；
每个R6b独立地选自氢或C1-3脂族基团。优选地，每个R6b为氢或甲基。对于上述每个实施方案中的式III-A-aa化合物，(S)立体化学优选位于环A吗啉的3-位上。
特定式I化合物的实例如下列表3和4所示。
表3式I化合物的特例
Figure A20048001601700501
Figure A20048001601700521
Figure A20048001601700531
Figure A20048001601700551
Figure A20048001601700571
下列表4表示了式III-A-aa化合物的特例。
表4式III-A-a化合物的特例
Figure A20048001601700591
Figure A20048001601700611
Figure A20048001601700621
基于其IκB激酶抑制性能及其它药学性能，优选实例序号为1-30、39-62和64-106的化合物。更优选的化合物实例序号为1、2、7、10、11、13、16、17、19-27、39-62、64-106。
本发明化合物可通过各种路径服药于人和其他哺乳动物，给药路径包括口服剂量形式和注射剂形式(静内、肌内、腹膜内、皮下等)。包含本发明化合物的许多其它剂量形式可容易地由本领域技术人员，利用下述适宜药物赋形剂(或载体)制成。
可药用赋形剂(载体)的实例和制造各种组合物的方法可参见A.gennaro(ed.)，Remington：The Science and Practice ofPharmacy，20th Edition，Lippincott Williams & Wilkins，Baltimore，MD(2000)，该文献及其引用文献一起引作参考。可药用赋形剂(载体)包括调味剂、药物级染料或颜料、溶剂、助溶剂、缓冲液系、表面活性剂、防腐剂、甜味剂、粘性剂、填料、润滑剂、脱模剂(glidants)、崩解剂、粘合剂和树脂。
常规的调味剂可按照如Remington′s Pharmaceutical Sciences，18th Ed.，Mack Publishing Co.，pp.1288-1300(1990)中描述的方法使用，该文献及其引用文献一起引作参考。本发明药物组合物一般含有大约0至2％的调味剂。
常规的染料和/或颜料也可如the American PharmaceuticalAssociation & the Pharmaceutical Society ofgreat Britain编辑的Handbook of Pharmaceutical Excipients，pp.81-90(1986)中描述的方法使用，该文献及其引用文献一起引作参考。本发明药物组合物一般含有大约0至2％的染料和/或颜料。
本发明药物组合物一般含有大约0.1至99.9％的溶剂。优选的溶剂为水。优选的助溶剂包括乙醇、丙三醇、丙二醇、聚乙二醇和乙二醇等。本发明药物组合物含有大约0至50％的助溶剂。
优选的缓冲液系包括乙酸、硼酸、碳酸、磷酸、琥珀酸、马来酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、乳酸、甘油酸、葡糖酸、丙二酸和谷氨酸及其钠盐、钾盐和铵盐。特别优选的缓冲液为磷酸、酒石酸、柠檬酸和乙酸及其盐。本发明药物组合物一般包含大约0至5％的缓冲液。
优选的表面活性剂包括聚氧乙烯山梨聚糖脂肪酸酯、聚氧乙烯单烷基酯、蔗糖单酯和羊毛脂酯和醚，烷基硫酸酯盐及脂肪酸钠、钾和铵盐。本发明药物组合物一般包含大约0至2％的表面活性剂。
优选的防腐剂包括苯酚、对羟基苯甲酸的烷基酯、邻苯基苯酚苯甲酸及其盐、硼酸及其盐、山梨酸及其盐、氯丁醇、苯甲醇、噻汞撒、苯基乙酸和硝酸银、硝基烷基磺酸盐、氯化苄烷铵、氯化鲸蜡基吡啶盐、对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯。特别优选的防腐剂为苯甲酸盐、氯化鲸蜡基吡啶盐、对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯。本发明药物组合物一般包含大约0至2％的防腐剂。
优选的甜味剂包括蔗糖、葡萄糖、糖精、山梨糖醇、甘露醇和天冬氨酰苯丙氨酸甲酯。特别优选的甜味剂为蔗糖和糖精。本发明药物组合物一般包含大约0至5％的甜味剂。
优选的粘性剂包括甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、羟丙基-甲基纤维素、羟丙基纤维素、藻酸钠、丙烯酸聚合物、聚乙烯吡咯烷酮、阿拉伯胶、瓜尔胶、黄原胶和黄蓍胶。特别优选的粘性剂为甲基纤维素、丙烯酸聚合物、黄原胶、瓜尔胶、聚乙烯吡咯烷酮、羧甲基纤维素钠和硅酸铝镁。本发明药物组合物一般包含大约0至5％的粘性剂。
优选的填料包括乳糖、甘露醇、山梨糖醇、三盐基磷酸钙、二盐基磷酸钙、可压缩糖、淀粉、硫酸钙、右旋糖和微晶纤维素。本发明药物组合物一般包含大约0至75％的填料。
优选的润滑剂/脱模剂包括硬脂酸镁、硬脂酸和滑石。本发明药物组合物一般包含大约0至7％的润滑剂/脱模剂，优选大约1至5％。
优选的崩解剂包括淀粉、淀粉乙醇酸钠、聚乙烯聚吡咯烷酮、croscarmelose sodium和微晶纤维素。本发明药物组合物一般包含大约0至20％的的崩解剂，优选大约4至15％。
优选的粘合剂包括阿拉伯胶、黄蓍胶、羟丙基纤维素、预胶化淀粉、凝胶、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素、甲基纤维素、食糖溶液(如蔗糖和山梨糖醇)和乙基纤维素。本发明药物组合物一般包含大约0至12％的的粘合剂，优选大约1至10％。
有经验的制剂制造者公知的其他试剂可与本发明化合物混合，制成单独的制剂形式。此外，其他的药剂可作为多种剂型的部分单独给药于哺乳动物。
对于制造包含本发明化合物的药物组合物，惰性可药用赋形剂或载体可以是固体或液体。固体形式的制剂包括粉剂、片剂、可分散颗粒剂、胶囊剂、药包和栓剂。一般地，粉剂和片剂可包含大约5至95％(重量)的活性成分。本领域公知的适宜固体载体包括如，碳酸镁、硬脂酸镁、滑石、食糖和乳糖。片剂、粉剂、药包和胶囊剂可用作适于口服给药的固体剂型。可药用载体的实例及制造各种组合物的方法可参见Remington′s PharmaceuticalSciences，18th Ed.，Mack Publishing Co.(1990)。
液体形式的制剂包括溶液、悬浮液和乳液。通常的液体形式制剂包括用于非肠道注射的水和水-丙二醇溶液，或用于口服溶液、悬浮液和乳液的所加入的甜味剂和遮光剂。液体形式的制剂也可包括用于鼻内给药的溶液。
适于吸入法给药的气溶胶制剂包括溶液和粉状形式的固体，其可与可药用载体组合，所述载体如惰性压缩气体(例如氮气)。
药物剂型还包括杂能够在使用前迅速转变成适于经口或非肠道给药的液体形式制剂的固体形式制剂。这类液体形式制剂包括溶液、悬浮液和乳液。
本发明化合物也可通过经皮肤给药。经皮组合物可采用霜剂、洗液、气溶胶和乳液形式，可包括本领域为此目的常用的基质或存储类型的经皮补片。
本发明化合物的优选给药方式是口服。优选地，药物制剂为单位剂量形式。在这种形式下，制剂可再分成包含适量活性成分，如获得所需目的的有效剂量的体积适当的单位剂型。
制剂单位剂型中的活性成分(化合物)的量可根据特定的应用，在大约0.01至4,000mg之间变化或调节，优选大约0.01至1,000mg，更优选大约0.01至500mg，甚至更优选大约0.01至250mg。对于口服给药，典型的推荐日剂量一般在大约0.02至2,000mg/天的范围，分一至四个剂量形式。为了方便，总的日剂量可根据需要在一天中分次、分批服用。典型地，本发明药物组合物每天可分1大约1至5次服用，或者是连续输注。这种给药可用于慢性或急性治疗。与赋形剂或载体材料组合生成单个剂量形式的活性成分的量将根据待治疗主体和特定的给药方式改变。典型的制剂一般包含大约5至95％(w/w)的活性化合物。优选地，这类制剂包含大约20至80wt％的活性化合物。
用于与本发明化合物结合的可药用赋形剂或载体以足以提供剂量关系的实际尺寸的浓度形式使用。总而言之，可药用赋形剂或载体的用量大约为本发明药物组合物重量的0.1至99.9％，优选大约为重量的20至80％。
为了改善患者病情，如果应用本发明化合物、组合物或其组合的话，其用量可为维持剂量。由此，给药的剂量或频率或二者可作为症状的函数降低至能够保持改善病情的水平。当症状已经减轻至所需水平时，治疗应当停止。但是，患者可根据任何病灶复发，可进行长期间隙式治疗。
任何特定患者的特殊剂量和治疗方案可根据下列各种因素改变：所使用的特定化合物的活性，患者的年龄、体重、一般身体状况、性别和饮食习惯，给药时间，排泄速率，特殊药物组合，待治疗病症的严重程度和变化过程，待治疗病症的患者分布及临床医生的判断。特定情况下的适当剂量形式的确定是由本领域技术人员进行的。本发明化合物或其可药用盐的给药剂量和频率将由临床医生根据上述因素调节。有经验的技工进行比上述剂量或高或低的调节也是需要的。
本发明化合物被理解为能够提供许多疾病、症状和不适的有效治疗，特别是那些炎性或本质上免疫相关的疾病，包括给药期间合理时间的发作及给药后的合理时间间隔。尽管食物、饮食、已有的情况、酒精及其它系统情况可延长给药后本发明药物的延时，但应当理解为优化的剂量形式可在合理的时间内获得有效的药物治疗效果。
本发明化合物可以未溶剂化和溶剂化形式存在，包括水解形式。一般地，对于本发明的目的，含有可药用溶剂如水、乙醇等的溶剂化形式等同于未溶剂化形式。
本发明化合物可与有机和无机酸形成可药用盐。能够生成盐的适宜酸的实例为盐酸、硫酸、磷酸、乙酸、柠檬酸、丙二酸、水杨酸、苹果酸、富马酸、琥珀酸、抗坏血酸、马来酸、甲磺酸及其它本领域技术任意公知的无机酸和羧酸。根据常规的方式，将游离碱形式与足够量的所需酸接触生成盐，即可制得盐。通过利用适宜的稀溶液，如稀的氢氧化钠、碳酸钾、碳酸氢铵或碳酸氢钠处理，即可再生成游离碱形式。游离碱形式在一些物理性能方面有些不同于其对应的盐形式，如在极性溶剂的溶解性，但对于本发明的目的，盐其它方面等同于其游离碱形式。
考虑到药理学性能，本发明化合物适用于预防和治疗涉及IκB激酶活性增强的疾病、不适和症状。所述疾病包括，如关节发炎(如风湿性关节炎(RA)、风湿性脊椎炎、痛风关节炎、外伤关节炎风疹关节炎、牛皮癣关节炎、骨关节炎和其它关节炎疾病)、急性滑膜炎、肺结核、动脉硬化症、肌力衰退、萎靡不振、Reiter综合征、内血毒症、脓毒病、败血症、内毒休克、革兰氏阴性脓毒病、痛风、毒性休克综合征、肺部炎性疾病(如哮喘、急性呼吸性窘迫综合征、慢性障碍性肺疾病、硅肺病、肺部肉状瘤病等)、骨再吸收疾病、再灌注伤害、瘤病、白血病、肉瘤、淋巴节瘤、皮肤瘤、淋巴瘤、中风、移植物抗宿主反应、移植物抗宿主疾病(GVHD)、同种异体移植物排异和麻疯病。
进一步地，本发明化合物可用于治疗与免疫相关的疾病、症状和不适，如感染，例如病毒感染(如HIV、细胞巨化病毒(CMV)、流行性感冒、腺病毒疱疹病毒等)、寄生感染(如瘴气，例如大脑瘴气)及酵母和真菌感染(如真菌脑膜炎)。另外，本发明化合物可用于治疗由感染引起的发热和肌痛、获得性免疫缺乏综合征(AIDS)、与AIDS相关的综合征(ARC)、对于感染或恶性肿瘤为次要的恶病质、对于AIDS或癌症为次要的恶病质、瘢痕疙瘩和疤痕组织形成、pyresis、糖尿病和炎性肠疾病(IBD)(如Crohn疾病和溃疡性结肠炎)。本发明化合物还也用于治疗其中显示出TNF-α过度表达的与大脑相关的疾病或创伤，如多发性硬化症(MS)、缺血性脑伤害(例如脑梗塞(休克)和头部外伤)。本发明化合物还可用于治疗牛皮癣、Alzheimer综合征、肿瘤疾病(细胞毒素治疗的增强)、心肌梗死、慢性障碍性肺疾病(COPD)和急性呼吸窘迫综合征(ARDS)。
在一个实施方案中，本发明化合物用于治疗癌症，特别是治疗IKK活性异常高的癌症。可被治疗的癌症类型包括：淋巴瘤，如扩散性大B-细胞、初级纵隔B-细胞；多发性骨髓瘤；溶骨骨转移；头部和颈部鳞片状细胞癌；前列腺癌；胰腺癌和非小细胞肺癌。在一个实施方案中，本发明化合物用于治疗ABC淋巴瘤。为了治疗癌症，化合物可以以单药剂或以与其他对治疗癌症有用的公知药剂组合使用。这类其他药剂包括bortezomib；卡培他滨；吉西他滨；伊立替康；氟达拉滨；5-氟尿嘧啶或5-氟尿嘧啶/亚叶酸；紫杉烷类，包括例如紫杉醇和多西他赛；铂试剂，包括例如施铂锭、卡铂和奥沙利铂；安慈拉环素类，包括例如多柔比星和多柔比星脂质体；米托蒽醌；地塞米松；长春新碱；依托泊苷；泼尼松；沙利度胺；曲妥单抗；替莫唑胺和烷基化试剂，如美法仑、苯丁酸氮芥和环磷酰胺。
式(I)化合物特别适用于治疗炎性和免疫相关的疾病、不适和症状，更特别是炎性疾病类，如RA、哮喘、IBD、牛皮癣、COPD和MS。本发明欣赏将本发明化合物用于治疗与NF-κB、TNF-α及其中IKK被公知调节其活性的其他途径酶的活性相关的疾病、不适或症状。
本发明化合物也可用于治疗与骨相关的疾病、症状或不适，其中存在着由于新的骨生成降低或骨的再吸收增强或者这两种情况共存而引起的骨不足或缺乏。特别的实例包括：骨质疏松症、牙周疾病、骨髓炎、风湿性关节炎、无菌关节松动和骨质溶解损伤(典型相关癌症)。人们已经公知，以关节发炎为特征的风湿性关节炎还与软骨和骨的破坏有关。进一步地，已有报道，在胶原质引起的关节炎的鼠科模型中，IKK抑制剂提供了软骨和骨的损失抑制。参见McIntyre et al.，Arthritis Rheumatism(2003)，48(9)，2652-2659。
骨质疏松症是应用于许多独特疾病的宽泛术语，其中骨质下降。这些疾病包括初级骨质疏松症(例如更年期后、老年骨质疏松症及青少年骨质疏松症)和二次骨质疏松症。二次骨质疏松症的实例可以是那些与慢性疾病、内分泌机能不良疾病、药物物质相关症状及血液学疾病相关的症状。所述慢性疾病如慢性肾病、肝脏机能不全、胃肠吸收不良、慢性流动不畅和慢性炎性疾病(包括风湿性关节炎、骨关节炎、牙周疾病和无菌关节松动)；所述内分泌机能不良疾病如糖尿病、甲状腺机能亢进、甲状旁腺功能亢进、性腺机能减退和垂体机能减退；所述药物物质如皮质甾类、肝磷脂、抗惊厥药物、酒精和免疫抑制剂；以及所述血液学疾病如转移疾病、骨髓瘤白血病、高歇病和贫血症。直接抑制IκB或间接抑制NF-κB路径已经被报道可用于治疗骨质疏松症和骨关节炎。参见例如PCT申请WO 2003104219、WO 2003103658、WO 2003029242、WO 2003065972和WO 9965495。因此，本发明也提供了治疗或预防患者骨损失的方法，该方法包括对患者给用本发明化合物。也提供了产生患者骨生成的方法，该方法包括给用本发明化合物。
本发明另一实施方案提供了抑制与抑制IKK接触反应活性和/或IκB磷酸化反应相关的NF-κB依赖基因表达活性的方法，该方法包括对需要的患者给用适量权利要求1化合物或其可药用盐或其溶剂化物或其药物组合物，其用量可有效抑制IKK接触反应活性和/或IκB磷酸化反应，从而可抑制NF-κB依赖基因表达活性。
在本发明一个实施方案中，本发明提供了在需要治疗的患者中治疗或预防炎性或免疫相关生理学不适、症状或疾病的方法，该方法包括对患者给用适量至少一种权利要求1化合物或其可药用盐或其溶剂化物或其药物组合物，其用量可有效治疗或预防炎性或免疫相关生理学不适、症状或疾病。优选地，炎性疾病、不适或症状为风湿性关节炎、哮喘、牛皮癣、鳞皮关节炎、慢性障碍性肺疾病(COPD)、炎性肠疾病或多发性硬化症。
本发明涉及式(I)化合物、制备本发明化合物的方法、制备包含至少一种本发明化合物及至少一种可药用载体或赋形剂的药物组合物的方法，以及利用一种或多种本发明化合物治疗各种不适、症状和疾病，特别是实质上为炎性或免疫相关的疾病的方法。本发明化合物及其可药用盐和中性组合物可与可药用赋形剂或载体一起制成药剂，所得组合物可体内给用哺乳动物，如灵长类哺乳动物，例如黑猩猩和人(如雄性和雌性)，以及动物(如狗、猫、牛、马等)，从而治疗各种不适、症状和疾病。进一步地，本发明化合物可用于制备可用于治疗各种不适、症状和疾病的药物。
尽管一种或多种本发明化合物可用于单一治疗不适、疾病或症状，但其也可以用于组合治疗，其中本发明化合物或组合物(治疗药剂)与一种或多种用于治疗相同和/或不同类型不适、症状和疾病的治疗药剂组合使用。组合治疗包括同时或顺序给用治疗药剂。此外，治疗药剂可组合成供患者服用的一种组合物。
在一个实施方案中，本发明化合物用于与其他治疗药剂组合，例如其他IKK抑制剂、其他用于治疗NF-κB和TNF-α相关疾病的药剂，以及其他用于治疗其他不适、症状和疾病的药剂。特别地，引起细胞凋亡的药剂，如破坏细胞循环或线粒体功能的药剂，可用于与本发明IKK抑制剂组合。与IKK抑制剂组合的实例性药剂包括抗增生药剂(如甲氨蝶呤)和美国专利申请公开No.US2003/0022898，p14，para.[0173-0174]中公开的药剂，该文献整体在此引作参考。在一些实施方案中，本发明化合物与选自细胞毒素剂、放射线疗法和免疫治疗的治疗药剂一起组合服用。适于与本发明IKK抑制剂组合使用的细胞毒素剂的非限定性实例包括：卡培他滨；吉西他滨；伊立替康；氟达拉滨；5-氟尿嘧啶或5-氟尿嘧啶/亚叶酸；紫杉烷类，包括例如紫杉醇和多西他赛；铂试剂，包括例如施铂锭、卡铂和奥沙利铂；安慈拉环素类，包括例如多柔比星和多柔比星脂质体；米托蒽醌；地塞米松；长春新碱；依托泊苷；泼尼松；沙利度胺；曲妥单抗；替莫唑胺和烷基化试剂，如美法仑、苯丁酸氮芥和环磷酰胺。人们应当可以理解，也可采用其他组合，属于本发明的范围。
本发明的再一方面提供了一种药盒，该药盒包含单独包装的分开容器，其中本发明药物化合物、组合物和/或其盐与可药用载体组合使用，从而治疗IκB激酶起作用的不适、症状和疾病。
本发明化合物可通过本领域公知的制备类似化合物的方法制备，如下述一般流程所示，以及参照下文制备性实施例的方法制备。
                      流程I
Figure A20048001601700721
上述流程I表示了获得式I化合物的一般路线。环A羧酸1a可与所需的氨基β-咔啉2a偶合，得到I。可用于制备本发明化合物的许多1a中间体都可由公知的起始原料和化学方法容易地得到，特别是可从这里祥述的合成实施例得到。流程II-IV描述了制备各种β-咔啉中间体2a的路线。
                   流程II
步骤：(a)(i)HCOCO2H(ii)HCl(b)Pd/C(c)NCS(d)NaNO2(e)NaOMe(f)Pt/H2
上述流程II表示了制备其中R1为氢、R2为氯和R3为烷氧基的β-咔啉部分的路线。尽管该流程表示了R3为烷氧基的实例，但对于本领域技术人员来讲，含其它R3烷氧基基团的β-咔啉也可通过利用其他烷醇钠或金属替代步骤(e)的NaOMe获得。
流程III
Figure A20048001601700741
步骤：(a)NaHMDS，MeI(b)H2，阮内镍，PtO(c)i.TFAii.CHOCO2H iii.HCl(d)Pd/C，二甲苯，160℃(e)i.NCS，1NHCl ii.NaNO2，TFA iii.H2，Pt
上述流程III表示了制备其中R1为烷基(如甲基)、R2为卤素(如氯)和R3为氢的β-咔啉中间体路线。本领域技术人员可以理解，上述流程可改进为制备其中R1为甲基以外的其它烷基或R2为氯以外的其它卤素基团的化合物。
                     流程IV
Figure A20048001601700751
步骤：(a)i.LDA，THF，-78℃，ii.SnBu3Cl(b)5％Pd(PPh3)2Cl2，10％CuI，DMF，回流过夜(c)3当量NHMDS，THF，室温过夜(d)i.TFA/NaNO3，ii.饱和NaHCO3，iii.5％Pt(S)，NH4O2CH
上述流程IV表示了制备其中R1为氟、R2为氯和R3为氢的β-咔啉中间体的路线。人们应当理解，对该流程进行简单的改进即可允许制备其它中间体。例如，通过利用在4-位上带有除了氯之外的另一2-碘苯胺替代步骤(b)中的4-氯-2-碘苯胺，即可引入另一R2基团。
对制备式III-A-aa特别有用的中间体是中间体3a，
其中：R13为卤素、OH、OR15或羧酸保护基团；R14为氨基保护基团、氢或上文定义的-W-G；以及R15为有机基团。氨基保护基团是本领域公知的。氨基保护基团的实例包括烷氧羰基基团，如叔丁氧基羰基(t-BOC)和苄基基团。吗啉环3-位上的羧酸基团可作为任何稳定的酯基基团被保护起来，所述酯基基团如简单的烷基或芳基酯，例如甲酯、乙酯、苄酯或五氟苯基酯。在一个实施方案中中，R14为-W-G，R13为-OH、卤素或羧酸保护基团。各种保护基团详细地描述在John Wiley and Sons出版的Protectinggroups in Organic Synthesis，Theodora W.greene andPeterg.M.Wuts，3rd edition，1999中。
中间体3a的优选对映体为(S)-3a，
其中R13和R14如上文定义。
作为羧酸或其活性形式(如酰氯)的中间体3a或(S)-3a可如上文流程I所示，予适当的氨基-β-咔啉偶合，酰胺偶合反映可提供进一步有用的中间体，如下文式IV化合物所示：
Figure A20048001601700771
其中R14为氨基保护基团，以及R1、R2和R3如上文定义。本领域技术人员应当理解，式III-A-aa的有些化合物(其中R6b为甲基)可通过去除R14保护基团，且利用公知的方法连接-W-G位置，由式IV化合物制得。此外，式III-A-aa化合物可通过首先制得其中R14为-W-G和R13为羧酸或其衍生物的中间体3a制备。然后，与适当的氨基-β咔啉进行的酰胺偶合反应直接得到式III-A-aa化合物。
流程V
Figure A20048001601700772
步骤：(a)K2CO3，KI，3-溴-2-甲基-丙烯，MeCN(b)I2，NaHCO3，MeCN(c)Bu3SnH，AIBN，甲苯，110℃(d)H2，2O0％Pd(OH)2/C，10％AcOH/MeOH
上述流程V表示了制备式3a中间体，包括未保护的i-19的路线。能够得到不同3a中间体的i-19中的氨基和羧酸基团的选择性保护和脱保护将是本领域技术人员的知识能够完成的。
制备式III-A-aa化合物的另一有用中间体是式V化合物，优选(S)-V，
其中：R13为卤素或其它离去基团、OH、OR15，或羧酸保护基团；R15为有机基团，如C1-6脂族基团、芳基或苄基，环A带有0-2或0-4个R6b，以及R1、R2、R3和R6b如上文定义。
制备本发明化合物的另一有用中间体为VI，优选(S)-VI，
Figure A20048001601700791
其中R13和R13a之一为OH或离去基团，如卤素，其它为OR15或羧酸保护基团，R15为有机基团，如C1-6脂族基团、芳基或苄基，环A带有0-2个R6b，以及R6b如上文定义。
                     合成实施例
下列缩略语用于制备方法中：RT或rt为室温；h、hr或hrs为小时；min为分钟；TFA为三氟乙酸；DMSO为二甲亚砜；NCS为N-氯琥珀酰亚胺；EDCI为1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐；EtOAc为乙酸乙酯；DIEA为二异丙基乙胺；DCM为二氯甲烷；DDQ二氯二氰基苯并醌；mCPBA为偏氯过苯甲酸；MeOH为甲醇；EtOH为乙醇；MeCN为乙腈；TLC为薄层色谱(法)；AIBN为偶氮双丁腈；NH4OAc为乙酸铵；NaOAc为乙酸钠；Et2O为二乙基醚；AcOH为乙酸；以及DMF为二甲基甲酰胺。TBTU为N，N，N′，N′-四甲基-o-(苯并三唑-1-基)四氟硼酸铀。
中间体1：7-氟-2，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉-1-羧酸
向10g(46.6mmol)市购6-氟色胺盐酸盐中加入50ml1M乙酸盐缓冲液(pH4.4)，得到悬浮液，将其在室温(RT)下搅拌。然后，将于乙酸乙酯中的乙醛酸一水合物(1.1eq，51.28mmol，4.72g)悬浮液一批加入到上述搅拌悬浮液中。悬浮液在室温下搅拌过夜(16h)，通过过滤收集沉淀的固体，利用H2O和乙酸乙酯洗涤。然后真空干燥样品得到定量收率的亮黄色固体。
1H-NMR(300MHz，acetic acid-d4)：δ3.04(m，2H)，3.56(m，1H)，3.83(m，1H)，6.80(m，1H)，7.13(dd，1H)，7.34(dd，1H)。
保留时间(LC法：乙酸铵标准)：1.17min。
MS(M+H+)：235.0
中间体2：7-氟-2，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉
在500ml圆底烧瓶中，将7-氟-2，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉-1-羧酸(5g，21.36mmol)悬浮在130ml 3N HCl中，在搅拌条件下回流过夜(16hr)。在冷却时沉淀出亮棕色固体，过滤收集，利用H2O洗涤。将上述过滤得到的盐溶解在热甲醇(200ml)中，利用3M K2CO3(5-10ml)处理，直至pH大约为9。将100ml H2O加入到该混合物中，然后允许在室温下搅拌。在旋转蒸发器上蒸发甲醇，得到所需游离碱的白色水悬浮液，过滤收集(3.2g，79％收率)。
1H-NMR(300MHz，methanol-d4)：δ2.73(t，2H)，3.11(t，2H)，3.94(s，2H)，6.73(m，1H)，6.94(m，1H)，7.30(dd，1H)。
保留时间(LC法：乙酸铵标准)：1.25min。
MS(M+H+)：191.1
中间体3：7-氟-9H-β-咔啉
在安装有向大气开口的冷凝器的250ml圆底烧瓶中，将7-氟-2，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉(3.5g，18.42mmol)悬浮在二甲苯(60ml)中，并加热。向该热反应混合物中加入Pd/C(10wt％，0.2eq，700mg)，在二甲苯中回流混合物过夜(12-14小时)。然后通过硅藻土垫过滤溶液，接着在旋转蒸发器上蒸发收集的滤液，得到所需的产物，为棕色固体(3.0g，88％收率)。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ7.10(m，1H)，7.37(dd，1H)，8.10(d，1H)，8.28(dd，1H)，8.35(dd，1H)，8.89(s，1H)，11.74(s，1H)。
保留时间(LC法：乙酸铵标准)：1.88min。
MS(M+H+)：187.1
中间体4：6-氯-7-氟-9H-β-咔啉
将7-氟-9H-β-咔啉(2.15g，11.58mmol)悬浮在100ml 1N HCl中。向该混合物中加入NCS(1.85g，13.89mmol，1.2eq)，在室温下搅拌所得混合物过夜。然后过滤反应混合物，得到亮黄色固体(2.1g，83％收率)。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ.7.86(d，1H)，8.64(d，1H)，8.79(d，1H)，8.91(d，1H)，9.33(s，1H)，13.05(s，1H)。
保留时间(LC法：乙酸铵标准)：2.19min。
MS(M+H+)：221.1
中间体5：6-氯-7-氟-8-硝基-9H-β-咔啉
将6-氯-7-氟-9H-β-咔啉(2.1g，9.54mmol)放入圆底烧瓶(250ml)中，加入NaNO3(1.136g，13.36mmol，1.4eq)。向烧瓶中加入TFA(48ml)，所得混合物回流过夜。然后在旋转蒸发器上除去TFA。将所得浆状液悬浮在水(50ml)中，并彻底超声波降解。接着过滤所得悬浮液，得到黄色固体(2.0g，80％收率)。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ8.21(d，1H)，8.46(d，1H)，9.04(m，2H)，12.55(s，1H)。
保留时间(LC法：乙酸铵标准)：2.24min。
MS(M+H+)：266.2
中间体6：6-氯-7-甲氧基-8-硝基-9H-β-咔啉
在氩气气氛下，将甲醇(0.462ml，11.4mmol)加入到NaH(684mg，17.1mmol)的DMF(10ml)搅拌悬浮液中。所得溶液允许在室温下搅拌20min。将6-氯-7-氟-8-硝基-9H-β-咔啉(500mg，1.9mmol)加入到搅拌溶液中，允许所得混合物在室温下搅拌。在加入H2O时，沉淀出棕色固体，过滤得到所需的6-氯-7-甲氧基-8-硝基-9H-β-咔啉(510mg，97％收率)。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ4.02(s，3H)，8.52(d，1H)，8.60(d，1H)，9.05(s，1H)，9.12(s，1H)，12.78(b，1H)。
保留时间(LC法：乙酸铵标准)：2.28min。
MS(M+H+)：278
中间体7：6-氯-7-甲氧基-9H-β-咔啉-8-基胺
将6-氯-7-甲氧基-8-硝基-9H-β-咔啉(510mg，1.84mmol)悬浮在50ml甲醇中，加入100mg Pd/C(10％)。将烧瓶安装氢气气球，在室温下搅拌反应混合物过夜。通过硅藻土垫过滤并蒸发甲醇，得到深棕色固体。将该残留物悬浮在甲醇(15ml)中，在剧烈搅拌下，将其加入到饱和NaHCO3(100ml)溶液中。过滤收集沉淀出的亮棕色固体，彻底地真空干燥，得到所需产物(512mg，定量收率)。
1H-NMR(300MHz，methanol-d4)：δ.3.90(s，3H)，7.63(s，1H)，8.11(d，1H)，8.27(d，1H)，8.84(s，1H)。
保留时间(LC法：乙酸铵标准)：1.12min。
MS(M+H+)：248
中间体8：6-氯-9H-β-咔啉-8-基胺
根据中间体1至中间体7描述的方法制备靶向化合物，其中中间体1的起始原料为未取代色胺。6-氯-9H-β-咔啉-8-基胺的另一种合成方法描述在PCT申请WO 01/68648A1第34页实施例15中，该文献的全部在此引作参考。
方法A：6，7，8-取代-β-咔啉的偶合步骤
将6，7，8-取代-9H-β-咔啉(1mmol)、EDCI(1.6mmol)和适当的羧酸(1.2mmol)放入圆底烧瓶中，悬浮在吡啶(5ml)中。所得混合物在60℃下加热过夜。然后通过旋转蒸发除去吡啶，加入5％Na2CO3溶液。通过过滤收集沉淀出的所得固体。色谱纯化得到所需产物。
方法B：6，8-取代-β-咔啉偶合步骤
将待偶合的6，8-取代-9H-β-咔啉(1.0mmol)、EDCI(1.6mmol)和羧酸(1.2mmol)放入圆底烧瓶中，悬浮在吡啶(5ml)中。所得混合物搅拌过夜。旋转蒸发除去吡啶，加入5％Na2CO3溶液。通过过滤收集沉淀出的所得固体。色谱纯化得到所需产物。
实施例1：N-(6-氯-7-甲氧基-9H-β-咔啉-8-基)-2-甲基-烟酰胺
将6-氯-7-甲氧基-9H-β-咔啉-8-基胺(100mg，0.4mmol)、EDCI(125mg，0.64mmol)和2-甲基烟酸(66mg，0.48mmol)放入圆底烧瓶中，悬浮在吡啶(2ml)中。所得混合物在80℃下加热过夜。通过旋转蒸发除去吡啶，加入5％Na2CO3溶液。过滤收集沉淀出的所得固体。色谱纯化得到所需产物，收率为50-70％。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ2.71(s，3H)，3.89(s，3H)，7.45(dd，1H)，8.15(d，1H)，8.21(d，1H)，8.38(d，1H)，8.45(s，1H)，8.61(d，1H)，8.92(s，1H)，10.33(s，1H)，11.57(s，1H)。
保留时间(LC法：乙酸铵标准)：1.77min。
MS(M+H+)：367.1
实施例2：4-甲基-嘧啶-5-羧酸(6-氯-7-甲氧基-9H-β-咔啉-8-基)-酰胺
根据方法A的步骤，由6-氯-7-甲氧基-9H-β-咔啉-8-基胺和4-甲基-5-嘧啶羧酸制备所需化合物，收率为80％。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ2.75(s，3H)，3.92(s，3H)，8.19(d，1H)，8.41(d，1H)，8.50(s，1H)，8.96(s，1H)，9.20(s，1H)，9.25(s，1H)，10.63(s，1H)，11.67(s，1H)。
保留时间(LC法：甲酸标准)：0.95min。
MS(M+H+)：368
中间体9：6-氯-7-乙氧基-8-硝基-9H-β-咔啉
将乙醇钠(232mg，3.4mmol)加入到6-氯-7-氟-8-硝基-9H-β-咔啉(200mg，0.76mmol)的DMSO(4ml)溶液中，允许反应混合物搅拌过夜。利用水稀释反应混合物，通过加入1N HCl调节溶液pH至大约4。利用EtOAc萃取(3×)水溶液。干燥合并的EtOAc层，并蒸发。快速色谱纯化粗产物，得到所需的产物，收率为40-60％。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ1.44(t，3H)，4.24(q，2H)，8.21(d，1H)，8.46(d，1H)，8.91(s，1H)，9.02(s，1H)。
保留时间(LC法：乙酸铵标准)：2.37min。
MS(M+H+)：291.9
中间体10：6-氯-7-乙氧基-9H-β-咔啉-8-基胺
将6-氯-7-乙氧基-8-硝基-9H-β-咔啉(160mg，0.55mmol)悬浮在4ml甲醇中，加入25mg Pd/C(10％)。烧瓶安装有氢气气球，反应混合物在室温下搅拌过夜。通过硅藻土垫过滤并蒸发甲醇，得到深棕色固体，其被确定为所需的6-氯-7-环丙基甲氧基-9H-β-咔啉-8-基胺(80mg，55％)。
1H-NMR(300MHz，Methanol-d4/CDCl3)：δ1.26(t，3H)，3.91(q，2H)，7.34(s，1H)，7.71(d，1H)，8.02(s，1H)，8.56(s，1H)。
保留时间(LC法：甲酸标准)：1.16min。
MS(M+H+)：262.0
实施例3：N-(6-氯-7-乙氧基-9H-β-咔啉-8-基)-2-甲基-烟酰胺
根据方法A的步骤，由6-氯-7-乙氧基-9H-β-咔啉-8-基胺和2-甲基烟酸制得所需化合物，收率为40％。
1H-NMR(300MHz，MeOH-d4)：δ1.39(t，3H)，2.76(s，3H)，4.14(q，2H)，7.43(dd，1H)，8.05(d，1H)，8.26(m，3H)，8.55(d，1H)，8.79(s，1H)。
保留时间(LC法：乙酸铵标准)：1.98min。
MS(M+H+)：381.3
中间体11：6-氯-7-(N，N)-二甲氨基-8-硝基-9H-β-咔啉
在氩气气氛下，将N，N-二甲胺盐酸盐(278mg，3.4mmol)加入到6-氯-7-氟-8-硝基-9H-β-咔啉(300mg，1.13mmol)的DMSO(8ml)搅拌溶液中。接着加入DIEA(0.83ml，4.65mmol)，反应混合物在60℃下加热过夜。在允许冷却反应混合物至室温后，加入水，沉淀出深桔黄色固体。过滤固体，利用水洗涤，干燥得到所需产物(230mg，70％收率)。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ4.06(s，6H)，7.23(d，1H)， 7.53(d，1H)，7.66(s，1H)，8.05(s，1H)。
保留时间(LC法：乙酸铵标准)：2.41min。
MS(M+H+)：290.9
中间体12：6-氯-7-(N，N)-二甲氨基-9H-β-咔啉-8-基胺
将6-氯-7-(N，N)-二甲氨基-8-硝基-9H-β-咔啉(828mg，2.86mmol)悬浮在30ml甲醇中，加入166mg Pd/C(10％)。烧瓶安装有氢气气球，反应混合物在环境温度下搅拌过夜。通过硅藻土垫过滤，并蒸发甲醇，得到深棕色固体，其被确定为所需的6-氯-7-(N，N)-二甲氨基-9H-β-咔啉-8-基胺(500mg，67％收率)。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ2.80(s，6H)，5.42(s，2H)，7.45(s，1H)，7.95(d，1H)，8.23(d，1H)，8.86(d，1H)。Retention Time(LC，method：ammonium acetate standard)：2.32min。
保留时间(LC法：乙酸铵标准)：2.32min。
MS(M+H+)：261.1
实施例4：N-(6-氯-7-7-(N，N)-二甲氨基-9H-β-咔啉-8-基)-2-甲基-烟酰胺
根据方法A的步骤，由6-氯-7-(N，N)-二甲氨基-9H-β-咔啉-8-基胺和2-甲基烟酸制得所需的化合物，收率为40-60％。
1H-NMR(300MHz，Methanol-d4/CDCl3)：δ2.82(s，3H)，2.94(s，6H)，7.33(m，1H)，8.02(m，3H)，8.34(d，1H)，8.61(d，1H)，8.95(s，1H)。
保留时间(LC法：乙酸铵标准)：2.29min。
MS(M+H+)：380.3
中间体13：6-氯-7-(4-甲基-哌嗪-1-基)-8-硝基-9H-β-咔啉
向6-氯-7-氟-8-硝基-9H-β-咔啉(200mg，0.755mmol)的DMSO(4ml)溶液中通过注射器加入1-甲基哌嗪(226mg，2.26mmol)和DIEA(400mg，3.09mmol)。允许反应在室温下搅拌过夜。在加入水时，沉淀出桔黄色固体。过滤固体，洗涤并干燥，得到236mg(91％收率)所需的6-氯-7-(4-甲基-哌嗪-1-基)-8-硝基-9H-β-咔啉。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ2.24(s，3H)，2.48(m，4H)，3.13(m，4H)，8.13(d，1H)，8.40(d，1H)，8.73(s，1H)，8.94(s，1H)，12.05(s，1H)。
保留时间(LC法：乙酸铵标准)：1.72min。
MS(M+H+)：346
中间体14：6-氯-7-(4-甲基-哌嗪-1-基)-8-氨基-9H-β-咔啉
在氩气气氛下，将236mg 6-氯-7-(4-甲基-哌嗪-1-基)-8-硝基-9H-β-咔啉悬浮在100ml甲醇中，加入10％Pd/C(48mg)。利用氢气冲洗(3×)烧瓶，在氢气气氛下，于室温下搅拌反应混合物过夜。过滤反应混合物，利用硅藻土垫除去Pd/C。蒸发反应混合物，除去溶剂，快速色谱纯化得到119mg(55％收率)所需6-氯-7-(4-甲基-哌嗪-1-基)-8-氨基-9H-β-咔啉。
1H-NMR(300MHz，methanol-d4)：δ2.39(s，3H)，2.46(m，2H)，2.87(m，4H)，3.83(m，2H)，7.50(s，1H)，7.97(d，1H)，8.24(d，1H)，8.78(s，1H)。
保留时间(LC法：乙酸铵极)：1.32min。
MS(M+H+)：316
实施例5：2-氯-N-[6-氯-7-(4-甲基-哌嗪-1-基)-9H-β-咔啉-8-基]-烟酰胺
根据方法A的步骤，由6-氯-7-(4-甲基-哌嗪-1-基)-8-氨基-9H-β-咔啉和2-氯-烟酸制得所需化合物，收率为25％。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ2.21(s，3H)，2.33(m，2H)，2.54(m，2H)，3.24(m，4H)，7.73(dd，1H)，8.12(d，1H)，8.35(d，1H)，8.37(s，1H)，8.48(dd，1H)，8.61(dd，1H)，8.91(s，1H)，10.40(s，1H)，11.33(s，1H)。
保留时间(LC法：乙酸铵标准)：1.46min。
MS(M+H+)：455
中间体15：拆分外消旋-芸香酸
将芸香酸溶解在10∶1 EtOAc-MeOH[10g芸香酸(17.7g盐)，于550ml]混合物中，加热至50-55℃，接着加入(S)-(-)-α-甲基-苄胺。搅拌反应混合物2分钟，然后放置在室温下15分钟。利用浓缩盐(利用3次重结晶，小规模制得)接种反应混合物，利用超声波降解标本10-15秒钟，放置在室温下过夜。滤出该固体，利用EtOAc洗涤，并真空干燥。通过再溶解盐(24mg/ml)，在相同溶剂混合物中进行重结晶。然后将该混合物加热至温和回流一小段时间(几乎没有晶体残留在悬浮液中)。将混合物放置在室温下过夜。根据先前的方法处理固体。
利用由TBTU偶合反应得到的对应酰胺的质子NMR，粗略地测定过量的非对映体。
(R)-(+)-芸香酸的再生：将盐溶解在水(320mg/ml)中，加热至65℃，加入1.2当量的6M HCl溶液。然后将反应混合物置于4℃下过夜。滤出固体，利用小部分冷水洗涤，在高真空下干燥(收率25-30％)。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ1.30(s，3H)，1.52(s，3H)，2.74(dd，1H)，2.85(dd，1H)，3.25(t，1H)。
保留时间(LC法：乙酸铵标准)：0.33min。
MS(M+H+)：159.0
实施例6：2，2-二甲基-5-氧代-四氢-呋喃-3-羧酸(6-氯-9H-β-咔啉-8-基)-酰胺
根据方法B的步骤，由6-氯-9H-β-咔啉-8-基胺和(R)-芸香酸(中间体15)制得所需化合物，收率为80-90％。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ1.44(s，3H)，1.59(s，3H)，2.91(dd，1H)，3.08(dd，1H)，3.38(dd，1H)，7.85(m，1H)，8.17(d，1H)，8.25(d，1H)，8.39(d，1H)，9.05(s，1H)，10.26(s，1H)，11.72(s，1H)。
保留时间(LC法：乙酸铵标准)：1.22min。
MS(M+H+)：358.3
实施例7：1，2，2-三甲基-5-氧代-吡咯烷-3-羧酸(6-氯-9H-β-咔啉-8-基)-酰胺
根据方法B的步骤，由6-氯-9H-β-咔啉-8-基胺和1，2，2-三甲基-5-氧代-吡咯烷-3-羧酸制得所需化合物，收率为68％。
1H-NMR(DMSO-d6，300MHz)δ1.23(s，3H)，1.45(s，3H)，2.59(dd，1H)，2.66(s，3H)，2.70(dd，1H)，3.17(t，1H)，7.91(m，1H)，8.18(d，1H)，8.24(d，1H)，8.40(d，1H)，9.07(s，1H)，10.16(s，1H)，11.32(s，1H)。
保留时间(LC法：乙酸铵标准)：1.17min。
MS(M+H+)：371.3
中间体16：N-苄基-丝氨酸苄酯
向L-丝氨酸-苄酯-HCl(2.3g)、苯甲醛(1.05eq.)和乙酸钠(1eq.)的甲醇混合物中加入氰基硼氢化钠(1.0eq.)。所得混合物在环境温度下搅拌15小时，然后分配在乙醚和饱和碳酸氢钠之间。利用1MHCl(3×)萃取分离的有机相。利用乙醚洗涤合并的有机萃取液，利用4.5M K2CO3水溶液碱化，利用乙醚萃取。利用盐水洗涤合并的萃取液，在硫酸钠上干燥，并浓缩至干，得到2.32g所需化合物(蜡状固体，81％收率)。
1H-NMR(300MHz，CDCl3)：δ3.48(dd，1H)，3.64(dd，1H)，3.74(d，1H)，3.80(dd，1H)，3.88(d，1H)，5.18(s，2H)，7.25-7.39(m，10H)。
MS(M+H+)：286
中间体17：4-苄基-6-碘甲基-6-甲基-吗啉-3-羧酸苄酯
在环境温度下，向N-苄基-丝氨酸苄酯(中间体16，6.35g)的90ml MeCN溶液中加入3-溴-2-甲基-丙烯(5.6ml)、KI(740mg)和K2CO3(7.7g)。反应混合物在环境温度下搅拌72小时。加入1ml 3-溴-2-甲基-丙烯，再搅拌反应混合物15小时。基于TLC检测(1∶1；EtOAc-己烷)，只有少量起始原料保留在其中。向所得混合物中加入11.2g碘。搅拌4小时后，TLC(10％EtOAc/己烷)表明转化完全。将反应混合物分配在乙醚(300ml)与0.5M Na2S2O3(100ml)之间。利用水、饱和NaHCO3和盐水顺序地洗涤分离的有机相，在MgSO4上干燥，浓缩至干。硅胶色谱(5％EtOAc/己烷)纯化残留物，得到6.65g化合物4-苄基-6-碘甲基-6-甲基-吗啉-3-羧酸苄酯(黄色油状物，64％收率，大约4∶1混合物)。
主要成分：
1H-NMR(300MHz，CDCl3)：δ1.22(s，3H)，2.50(d，1H)，3.16-3.36(m，3H)，3.75-3.95(m，4H)，4.06(dd，1H)，5.16(d，1H)，5.21(d，1H)，7.28-7.36(m，10H)。
MS(M+H+)：466
中间体18：4-苄基-6，6-二甲基-吗啉-3-羧酸苄酯
在温和回流条件下，在1.5小时内，向4-苄基-6-碘甲基-6-甲基-吗啉-3-羧酸苄酯(中间体17，1.23g)和氢化三丁基锡(1.8ml，2.5eq.)的11ml甲苯溶液中加入AIBN的甲苯溶液(25mg/1ml)。允许冷却混合物，并浓缩至干。将残留物分配在15％1M HCl的乙腈溶液与己烷之间。利用乙腈溶液萃取分离的己烷相两次。利用己烷洗涤合并的乙腈溶液两次，并浓缩。将残留物分配在乙醚与1M K2CO3之间。利用0.4M Na2S2O3和盐水顺序地洗涤分离的醚相，在MgSO4上干燥并浓缩。硅胶(7.5％EtOAc/己烷)纯化残留物，得到760mg(油状物，85％收率)化合物4-苄基-6，6-二甲基-吗啉-3-羧酸苄酯。
1H-NMR(300MHz，CDC13)：δ1.21(s，3H)，1.24(s，3H)，2.12(d，1H)，2.84(d，1H)，3.29(t，1H)，3.58(d，1H)，3.95-4.05(m，2H)，5.15(d，1H)，5.21(d，1H)，7.28-7.36(m，10H)。
MS(M+H+)：340
中间体19：6，6-二甲基-吗啉-3-羧酸
向4-苄基-6，6-二甲基-吗啉-3-羧酸苄酯(中间体18，1.25g)的40ml 10％AcOH/MeOH(在氮气气氛下)溶液中加入250mg 20％Pd(OH)2/木炭。利用氢气(气球)净化反应混合物，在环境温度下搅拌72小时。向所得灰色混合物中加入4ml水，以帮助溶解。过滤除去催化剂，浓缩滤液至干。利用乙醇共蒸发(2×)残留物，然后利用EtOAc研磨。滤出生成的白色固体，高真空干燥，得到559mg 6，6-二甲基-吗啉-3-羧酸(95％收率)。
1H-NMR(300MHz，D2O)：δ1.35(s，3H)，1.38(s，3H)，3.11(d，1H)，3.32(d，1H)，3.81-3.87(m，1H)，4.05(bt，1H)，4.17(bd，1H)。
MS(M+H+)：160
中间体20：4，6，6-三甲基-吗啉-3-羧酸
向6，6-二甲基-吗啉-3-羧酸(中间体19，540mg)的17ml乙醇(在氮气气氛下)溶液中加入100mg 10％Pd/C和830μl(～3eq.)37％甲醛水溶液。利用氢气(气球)净化混合物，在环境温度下搅拌5小时。向所得灰色混合物中加入4ml水和4ml甲醇，以帮助溶解。过滤除去催化剂，浓缩滤液至干。利用EtOAc研磨残留物。滤出生成的白色固体，高真空干燥，得到574mg 4，6，6-三甲基-吗啉-3-羧酸(97％收率)。
1H-NMR(300MHz，D2O)：δ1.35(s，3H)，1.43(s，3H)，2.94(s，3H)，3.08(d，1H)，3.41(d，1H)，3.68(dd，1H)，3.96(t，1H)，4.14(dd，1H)。
MS(M+H+)：174
实施例8：4，6，6-三甲基-吗啉-3-羧酸(6-氯-9H-β-咔啉-8-基)酰胺
根据方法B的步骤，由6-氯-9H-β-咔啉-8-基胺和4，6，6-三甲基-吗啉-3-羧酸制得所需化合物，收率为61％。
1H-NMR(DMSO-d6，300MHz)δ1.15(s，3H)，1.39(s，3H)，1.98(d，1H)，2.26(s，3H)，2.72(d，1H)，2.80(dd，1H)，3.79(m，2H)，7.91(s，1H)，8.03-8.08(m，2H)，8.22(d，1H)，8.97(s，1H)。
保留时间(LC法：乙酸铵标准)：1.33min。
MS(M+H+)：373.2
实施例9：2，2-二甲基-5-氧代-四氢-呋喃-3-羧酸(6-氯-7-甲氧基-9H-β-咔啉-8-基)-酰胺
根据方法A的步骤，由6-氯-7-甲氧基-9H-β-咔啉-8-基胺和(R)-芸香酸制得所需化合物，收率为60-80％。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ1.48(s，3H)，1.61(s，3H)，3.03(m，2H)，3.51(m，1H)，3.86(s，3H)，8.16(m，1H)，8.37(m，1H)，8.43(s，1H)，8.94(s，1H)，10.10(s，1H)，11.33(s，1H)。
保留时间(LC法：乙酸铵标准)：1.94min。
MS(M+H+)：388
中间体21：6-氯-7-环丙基甲氧基-8-硝基-9H-β-咔啉
在氩气气氛下，将环丙基甲基醇(0.921ml，11.4mmol)加入到NaH(455mg，11.4mmol)的DMF(20ml)搅拌悬浮液中。允许所得溶液在室温下搅拌20分钟。向搅拌溶液中加入6-氯-7-氟-8-硝基-9H-β-咔啉(500mg，1.9mmol)，允许在室温下搅拌所得混合物。在加入H2O时，沉淀出棕色固体，过滤得到所需的6-氯-7-环丙基甲氧基-8-硝基-9H-β-咔啉(510mg，85％)。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ0.35(m，2H)，0.59(m，2H)，1.32(m，1H)，4.04(d，2H)，8.21(d，1H)，8.46(d，1H)，8.90(s，1H)，9.02(s，1H)，12.32(b，1H)
保留时间(LC法：乙酸铵标准)：2.63min。
MS(M+H+)：318
中间体22：6-氯-7-环丙基甲氧基-9H-β-咔啉-8-基胺
将6-氯-7-环丙基甲氧基-8-硝基-9H-β-咔啉(510mg，1.61mmol)悬浮在12ml甲醇中，加入100mg Pd/C(10％)。烧瓶安装有氢气气球，反应混合物在室温下搅拌过夜。在通过硅藻土垫过滤并蒸发甲醇时，得到深棕色固体。将残留物悬浮在甲醇(10ml)中，在剧烈搅拌下加入到饱和NaHCO3(100ml)溶液中。过滤收集沉淀出的亮棕色固体，彻底真空干燥，得到所需6-氯-7-环丙基甲氧基-9H-β-咔啉-8-基胺(371mg，80％收率)。
1H-NMR(300MHz，methanol-d4)：δ0.36(m，2H)，0.61(m，2H)，1.37(m，1H)，3.88(d，2H)，7.58(s，1H)，7.96(d，1H)，8.23(d，1H)，8.76(s，1H)。
保留时间(LC法：乙酸铵标准)：2.28min。
MS(M+H+)：288
实施例10：N-(6-氯-7-环丙基甲氧基-9H-β-咔啉8-基)-2-甲基-烟酰胺
根据方法A的步骤，由6-氯-7-环丙基甲氧基-9H-β-咔啉8-基胺和2-甲基烟酸制得所需化合物，收率为40-60％。
1H-NMR(300MHz，MeOH-d4)：δ0.29(m，2H)，0.55(m，2H)，1.29(m，1H)，2.78(s，3H)，3.95(m，2H)，7.46(dd，1H)，8.08(m，1H)，8.30(m，3H)，8.59(m，1H)，8.81(s，1H)。
保留时间(LC法：乙酸铵标准)：2.18min。
MS(M+H+)：405
中间体23：6-氯-7-(N，N)-二甲氨基乙氧基-8-硝基-9H-β-咔啉
在氩气气氛下，将N，N-二甲氨基乙基醇(6.0eq)加入到NaH(6.0eq)的DMF搅拌悬浮液中。允许在室温下搅拌所得溶液20分钟。将6-氯-7-氟-8-硝基-9H-β-咔啉(1.0eq)加入到搅拌溶液中，允许在室温下搅拌所得混合物。在加入H2O时，沉淀出棕色固体，过滤得到所需的6-氯-7-(N，N)-二甲氨基乙氧基-8-硝基-9H-β-咔啉(定量收率)。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ2.23(s，6H)，2.74(t，2H)，4.28(t，2H)，8.21(d，1H)，8.46(d，1H)，8.90(s，1H)，9.02(s，1H)。
保留时间(LC法：乙酸铵标准)：1.26min。
MS(M+H+)：335
中间体24：6-氯-7-(N，N)-二甲氨基乙氧基-9H-β-咔啉-8-基胺
将6-氯-7-(N，N)-二甲氨基乙氧基-8-硝基-9H-β-咔啉(500mg，1.5mmol)悬浮在12ml甲醇中，加入100mg Pd/C(10％)。烧瓶安装有氢气气球，反应混合物在室温下搅拌过夜。在通过硅藻土垫过滤并蒸发甲醇，得到深棕色固体。将残留物悬浮在甲醇(10ml)中，在剧烈搅拌下，将其加入到饱和NaHCO3(100ml)中。过滤收集沉淀的固体，真空彻底干燥，得到所需的6-氯-7-(N，N)-二甲氨基乙氧基-9H-β-咔啉-8-基胺(380mg，83％)。
1H-NMR(300MHz，methanol-d4)：δ2.43(s，6H)，2.84(t，2H)，4.11(t，2H)，7.47(s，1H)，7.88(d，1H)，8.20(d，1H)，8.72(s，1H)。
保留时间(LC法：乙酸铵标准)：1.34min。
MS(M+H+)：305
实施例11：N-[6-氯-7-(2-二甲氨基-乙氧基)-9H-β-咔啉-8-基]-2-甲基-烟酰胺
根据方法A的步骤，由6-氯-7-(N，N)-二甲氨基乙氧基-9H-β-咔啉-8-基胺和2-甲基烟酸制得所需化合物，收率40-60％。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ1.92(s，6H)，2.49(m，2H)，2.68(s，3H)，4.25(m，2H)，7.50(dd，1H)，8.16(m，2H)，8.38(d，1H)，8.42(s，1H)，8.66(m，1H)，9.00(s，1H)，11.27(s，1H)，11.78(s，1H)。
保留时间(LC法：乙酸铵标准)：1.52min。
MS(M+H+)：424
实施例12：2-氨基-环戊烷环戊烷羧酸(6-氯-7-甲氧基-9H-β-咔啉-8-基)-酰胺
利用方法A的步骤，将6-氯-7-甲氧基-9H-β-咔啉-8-基胺与2叔丁氧基羰基氨基-环戊烷羧酸反应。向该产物中加入～5ml 4NHCl/二噁烷，允许将所的混合物在室温下搅拌。利用LC-MS监测反应，直至反应完全。接着蒸发，除去所有的溶剂，得到粗HCl盐。然后通过制备性HPLC纯化所需产物。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ1.68(m，1H)，1.84(m，2H)，2.06(m，2H)，2.20(m，1H)，3.46(m，1H)，3.67(m，1H)，3.89(s，3H)，8.24(d，2H)，8.61(d，1H)，8.72(s，1H)，8.78(d，1H)，9.19(s，1H)，10.58(s，1H)，13.20(s，1H)。
保留时间(LC法：乙酸铵标准)：1.54min。
MS(M+H+)：359
中间体25：1-(2-二甲氨基-乙基)-5-氧代-吡咯烷-3-羧酸
将可市购的衣康酸和N，N-二甲基乙二胺的混合物加热至160℃大约20-25分钟。允许将混合物冷却至100℃，然后利用MeOH稀释，以防固化。从MeOH/EtOAc重结晶后，得到产物，收率为56％。
1H-NMR(300MHz，D2O)：δ2.63(dd，1H)，2.80(dd，1H)，2.95(s，6H)，3.15-3.25(m，1H)，3.32-3.44(m，1H)，3.44-3.76(m，4H)，3.82-3.94(m，1H)。
保留时间(LC法：乙酸铵标准)：0.13min。
MS(M+H+)：201.0
实施例13：1-(2-二甲氨基-乙基)-5-氧代-吡咯烷-3-羧酸(6-氯-9H-β-咔啉-8-基)-酰胺
根据方法B的步骤，由6-氯-9H-β-咔啉-8-基胺和1-(2-二甲氨基-乙基)-5-氧代-吡咯烷-3-羧酸制得产物，为二-HCl盐，收率为70-80％。
1H-NMR(300MHz，D2O)：δ2.97(dd，1H)，3.O3(s，6H)，3.08(dd，1H)，3.51(t，2H)，3.76-3.89(m，3H)，3.95(dd，1H)，4.01(dd，1H)，7.75(d，1H)，8.24(d，1H)，8.45(dd，1H)，8.52(dd，1H)，9.10(bs，1H)。
保留时间(LC法：乙酸铵标准)：0.99min。
MS(M+H+)：400
实施例14：1-(2-二甲氨基-乙基)-5-氧代-吡咯烷-3-羧酸(6-氯-7-甲氧基-9H-β-咔啉-8-基)-酰胺
根据方法A的步骤，由6-氯-7-甲氧基-9H-β-咔啉-8-基胺和1-(2-二甲氨基-乙基)-5-氧代-吡咯烷-3-羧酸制得产物，以己烷/EtOH/MeOH(85/7.5/7.5)为洗脱液，利用半制备性Chiralcel OD柱纯化，收率为60％。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ2.44(s，6H)，2.75(t，2H)，2.88(d，2H)，3.56(t，2H)，3.66(m，1H)，3.85(m，2H)，3.90(s，3H)，8.03(d，1H)，8.21(s，1H)，8.28(d，1H)，8.79(s，1H)。
保留时间(LC法：乙酸铵标准)：1.42min。
MS(M+H+)：430
中间体26：6-氯-7-氟-9H-β-咔啉-8-基胺
利用氩气，使6-氯-7-氟-8-硝基-9H-β-咔啉(500mg，1.88mmol)的MeOH(25ml)浆状物脱气。加入Pd/C(20％w/w，50mg)，利用氢气冲洗反应容器。在氢气气氛下搅拌6小时，然后通过硅藻土过滤，减压浓缩得到6-氯-7-氟-9H-β-咔啉-8-基胺(400mg)，为棕色固体。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ11.48(br s，1)；8.99-8.98(m，1)；8.37-8.35(m，1)；8.11-8.09(m，1)；7.74-7.72(m，1)；5.65(brs，2)。
HCOOH标准条件。
DAD Rf＝1.00min。
MS(M+H+)：236
实施例15：N-(6-氯-7-氟-9H-β-咔啉-8-基)-2-甲基-烟酰胺
在室温下搅拌6-氯-7-氟-9H-β-咔啉-8-基胺(100mg，0.424mmol)的吡啶(2.5ml)溶液。加入2-甲基烟酸(70mg，0.509mmol)，接着加入EDCI(130mg，0.678mmol)。将悬浮液在100℃下搅拌一天。减压除去吡啶，所得深色油状物由饱和NaHCO3水溶液研磨，过滤生成的沉淀，利用MeOH洗涤。利用2M HCl的Et20溶液处理该物质，得到灰色固体，为N-(6-氯-7-氟-9H-β-咔啉-8-基)-2-甲基-烟酰胺二-HCl盐。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ13.15(s，1)；11.03(s，1)；9.33(s，1)；8.99-8.97(m，1)；8.92-8.89(m，1)；8.79-8.73(m，2)；8.50(m，1)；7.70(m，1)；2.80(s，3)。
HCOOH标准条件。
DAD Rf＝0.91min。
MS(M+H+)：355
中间体27：6-氯-7-甲基硫烷基-8-硝基-9H-β-咔啉
将6-氯-7-氟-8-硝基-β-咔啉(中间体5，3.959g，14.9mmol)和100ml无水DMF装入安装有磁性搅拌器的250ml圆底烧瓶中。将所得桔黄色混合物冷却至0℃(冰水浴)，向其中慢慢加入粉末状硫代甲醇钠(1.809g，25.8mmol)。反应混合物在0℃下搅拌1小时，温热至室温，慢慢加入到4∶1H2O/饱和碳酸氢钠水溶液(500ml)的搅拌混合物中。通过吸滤收集沉淀固体，空气干燥得到4.017g 6-氯-7-甲基硫烷基-8-硝基-9H-β-咔啉，为桔黄色粉末。粗产物在下一步骤中直接使用。
1H-NMR(300MHz，Methanol-d4)：δ8.91(1H，d)8.63(1H，s)8.42(1H，d)8.17(1H，dd)2.54(3H，s)。
LCMS(甲酸标准法)保留时间＝1.43min。
MS(M+H+)：294
中间体28：6-氯-7-甲基硫烷基-9H-β-咔啉-8-基胺
将6-氯-7-甲基硫烷基-8-硝基-9H-β-咔啉(4.011g，13.6mmol)和200ml无水乙醇装入安装有磁性搅拌器的500ml圆底烧瓶中。向所得混合物中加入氯化铵水溶液(75ml 0.33M溶液，24.7mmol)、盐酸溶液(10ml 1M溶液，10mmol)和铁粉(7.734g，138mmol)。加热所得混合物至60℃(油浴)，剧烈搅拌3.5小时。将反应冷却至室温，利用EtOAc(75ml)稀释，加入活性碳(约2.5g)。所得混合物再在室温下搅拌1.5小时，通过硅藻土垫过滤，浓缩(旋转蒸发，然后真空泵)所得滤液，得到5.153g微黄色-桔黄色固体。将固体溶解在MeOH(50-100ml)中，在搅拌条件下慢慢加入到碳酸氢钠饱和溶液(500ml)中。混合物在室温下搅拌45分钟，通过吸滤收集所得固体，并空气干燥，得到3.476g 6-氯-7-甲基硫烷基-9H-β-咔啉-8-基胺，为褐色固体，该固体可在无需进一步纯化条件下用于下一步骤。
1H-NMR(300MHz，Methanol-d4)：δ8.87(1H，s)8.35-8.24(1H，m)8.16-8.06(1H，m)7.67(1H，s)2.32(3H，s)。
LCMS(乙酸铵标准法)保留时间＝2.12min。
MS(M+H+)：264
实施例16：N-(6-氯-7-甲基硫烷基-9H-β-咔啉-8-基)-2-甲基-烟酰胺
将于80ml无水吡啶中的6-氯-7-甲基硫烷基-9H-β-咔啉-8-基胺(中间体28，2.336g，8.86mmol)和烟酸2-甲酯(3.219g，23.4mmol)装入安装有磁性搅拌器的250ml圆底烧瓶中。在室温下，向所得反应混合物中加入固体1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐(7.080g，36.9mmol)，将反应混合物加热至100℃(油浴)两天。将所得混合物冷却至室温，浓缩(旋转蒸发)得到棕色残留物。将残留物溶解在MeOH(50ml)中，慢慢加入到5∶1H2O/饱和碳酸氢钠(600mlL)的搅拌混合物中，在室温下搅拌～18小时。通过吸滤收集沉淀的固体，利用Et2O(2×150ml)洗涤，空气干燥得到3.036g粗N-(6-氯-7-甲基硫烷基-9H-β-咔啉-8-基)-2-甲基-烟酰胺，为棕色固体。通过HPLC纯化该粗产物(收率为～40-60％)。
1H-MR(300MHz，DMSO-d6)：δ11.72(1H，s)10.50(1H，s)8.97(1H，s)8.62(1H，dd)8.57(1H，s)8.41(1H，d)8.33-8.27(1H，m)8.21(1H，d)2.73(3H，s)2.41(3H，s)。
LCMS(乙酸铵标准法)保留时间＝1.89min。
MS(M+H+)：383
中间体29：6-氯-7-乙基硫烷基-8-硝基-9H-β-咔啉
将于5ml无水DMF中的6-氯-7-氟-8-硝基-9H-β-咔啉(102mg，0.38mmol)装入安装有磁性搅拌器的25ml圆底烧瓶中。中室温下，向所得桔黄色混合物中慢慢加入粉末状硫代乙醇钠(80％，纯的，69.7mg，0.66mmol)。反应混合物中室温下搅拌45分钟，然后滴加5∶1H2O/饱和碳酸氢钠(～30ml)混合物。吸滤收集所得沉淀固体，利用1∶1己烷/二乙醚(2×20ml)洗涤，空气干燥得到95.0mg 6-氯-7-乙基硫烷基-8-硝基-9H-β-咔啉，为桔黄色固体(79％)。
1H-NMR(300MHz，CD3OD，ppm)δ8.91(1H，s)8.63(1H，s)8.42(1H，d)8.18(1H，d)3.04(2H，q)1.20(3H，t)。
保留时间(LC，甲酸标准法)：1.71min。
MS(M+H+)：308
中间体30：6-氯-7-乙基硫烷基-9H-β-咔啉-8-基胺
将于10ml无水乙醇在的6-氯-7-乙基硫烷基-8-硝基-9H-β-咔啉(85.0mg，0.28mmol)装入安装有磁性搅拌器的50ml圆底烧瓶中。在室温下，将所得桔黄色混合物中加入0.33M氯化铵水溶液(2.0ml，0.66mmol)和铁粉(680mg，12.2mmol)。将反应混合物加热至60℃，剧烈搅拌20小时。接着将混合物冷却至室温，利用乙酸乙酯(15ml)稀释，加入活性碳(～180mg)。通过硅藻土垫过滤所得混合物，浓缩滤液，得到77.8mg 6-氯-7-乙基硫烷基-9H-β-咔啉-8-基胺，为黄色固体(＞99％)。
1H-NMR(300MHz，CD3OD，ppm)δ8.94(1H，s)8.33-8.29(1H，m)8.21-8.18(1H，m)7.73(1H，s)2.85(2H，q)1.21(3H，t)。
LCMS(乙酸铵标准法)保留时间＝2.13min。
(M+＝278；M-＝276)
实施例17：N-(6-氯-7-乙基硫烷基-9H-β-咔啉-8-基)-2-甲基-烟酰胺
将于3ml无水吡啶中的6-氯-7-乙基硫烷基-9H-β-咔啉-8-基胺(37.2mg，0.13mmol)和2-甲基烟酸(36.2mg，0.26mmol)装入安装有磁性搅拌器的25ml圆底烧瓶中。在室温下，向所得亮桔黄色混合物中加入固体1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐(73.2mg，0.38mmol)，将所得反应混合物加热至80℃5天。接着，将反应混合物温热至室温并浓缩得到棕色粘稠状糖浆。将该糖浆溶解在最小量的MeOH(～2ml)中，慢慢加入到5∶1H2O/饱和碳酸氢钠(～20ml)混合物中，在室温下搅拌2.5小时。通过吸滤收集所得沉淀固体，利用1∶1己烷/二乙醚(2×20ml)洗涤，空气干燥得到21.0mg N-(6-氯-7-乙基硫烷基-9H-β-咔啉-8-基)-2-甲基-烟酰胺，为褐色固体(～38％)。LCMS(乙酸铵标准法)保留时间＝2.33min.。(M+＝397；M-＝395)。
1H-NMR(300MHz，CD3OD，ppm)δ8.89(1H，s)8.63-8.58(1H，m)8.44-8.38(2H，m)8.36(1H，d)8.15(1H，d)7.52-7.44(1H，m)2.98(2H，q)2.84(3H，s)1.20(3H，t)。
中间体31：[2-(6-氯-8-硝基-9H-β-咔啉-7-基硫烷基)-乙基]-二甲基-胺
将于2ml无水DMF中的6-氯-7-氟-8-硝基-9H-β-咔啉(98mg，0.37mmol)装入安装有磁性搅拌器的25ml圆底烧瓶中。将于2ml无水DMF中的2-二甲氨基-乙硫醇盐酸盐(100mg，0.70mmol)装入安装有磁性搅拌器的第二10ml圆底烧瓶中。通过注射器向所得悬浮液中加入正丁基锂(0.43ml 1.6M己烷溶液，0.69mmol)，混合物在室温下搅拌5分钟。然后，通过注射器，将硫代阴离子溶液加入到6-氯-7-氟-8-硝基-9H-β-咔啉中，所得红色溶液在室温下搅拌30分钟。将反应混合物慢慢加入到5∶1H2O/饱和碳酸氢钠溶液(30ml)的混合物中，允许在室温下静置数小时。通过吸滤收集所得沉淀固体，空气干燥得到109mg[2-(6-氯-8-硝基-9H-β-咔啉-7-基硫烷基)-乙基]-二甲基-胺，为桔黄色固体(83％)。
LCMS(乙酸铵标准法)保留时间＝1.35min。
(M+＝351；M-＝349)
1H-NMR(300MHz，CD3OD，ppm)δ8.92(1H，d，J＝1.0Hz)8.66(1H，s)8.43(1H，d)8.19(1H，dd)3.18-3.13(2H，m)2.57-2.52(2H，m)2.21(6H，s)。
中间体32：6-氯-7-(2-二甲氨基-乙基硫烷基)-9H-β-咔啉-8-基胺
将于8ml无水乙醇中的[2-(6-氯-8-硝基-9H-β-咔啉-7-基硫烷基)-乙基]-二甲基-胺(106mg，0.30mmol)装入安装有磁性搅拌器的50ml圆底烧瓶中。在室温下，向所得桔黄色混合物中加入0.33M氯化铵溶液(1.95ml，0.64mmol)和铁粉(540mg，9.67mmol)。将反应混合物加热至60℃，剧烈搅拌20小时。然后，将混合物冷却至室温，利用乙酸乙酯(20ml)稀释，加入活性碳(约150mg)。通过硅藻土垫过滤所得混合物，浓缩所得滤液，得到103mg 6-氯-7-(2-二甲氨基-乙基硫烷基)-9H-β-咔啉-8-基胺，为黄色固体。该粗产物可直接用于下列偶合步骤中。
LCMS(乙酸铵标准法)保留时间＝1.34min。
(M+＝321；M-＝319)
1H-NMR(300MHz，CD3OD，ppm)δ8.87(1H，s)8.30(1H，d)8.06(1H，d)7.75(1H，s)3.23-3.13(4H，m)2.84(6H，s)。
实施例18：N-[6-氯-7-(2-二甲氨基-乙基硫烷基)-9H-β-咔啉-8-基]-2-甲基-烟酰胺
将于4.5ml无水吡啶中的6-氯-7-(2-二甲氨基-乙基硫烷基)-9H-β-咔啉-8-基胺(45.2mg，0.14mmol)和2-甲基烟酸(39.0mg，0.28mmol)装入安装有磁性搅拌器的25ml圆底烧瓶中。在室温下，向所的亮桔黄色混合物中加入固体1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐(95.0mg，0.49mmol)。将所的反应混合物加热至80℃3天。接着，将反应冷却至室温，浓缩得到棕色粘稠状糖浆。将该糖浆溶解在最小量的MeOH(～2ml)中，慢慢加入到5∶1H2O/饱和碳酸氢钠混合物(～25ml)，利用乙酸乙酯(3×30ml)萃取。利用盐水(1×30ml)洗涤合并的有机层，在Na2SO4上干燥，过滤并浓缩，得到棕色残留物(79.6mg)。将残留物溶解在MeOH(～5ml)中，通过棉塞过滤。向所得的滤液中加入于1，4-二噁烷中的HCl(1.0ml，4.0mmol)，在室温下搅拌所得的溶液3小时，将其在搅拌条件下滴加到二乙醚(30ml)中。通过吸滤收集所得的沉淀产物，利用乙醚洗涤，空气干燥得到36.3mg N-[6-氯-7-(2-二甲氨基-乙基硫烷基)-9H-β-咔啉-8-基]-2-甲基-烟酰胺三盐酸盐，为黄色粉末。
1H-NMR(300MHz，CD3OD，ppm)δ8.95(1H，s)8.62(1H，dd)8.43(1H，s)8.38-8.34(2H，m)8.16(1H，d)7.50(1H，dd)3.09(2H，t)2.85(3H，s)2.30(2H，t)1.99(6H，s)。
LCMS(乙酸铵标准法)保留时间＝1.56min。
(M+＝440；M-＝438)
中间体33：吗啉-3(S)，4-二羧酸4-叔丁酯
在室温下搅拌吗啉-3(S)-羧酸(2.00g，15.3mmol)的DMF(75ml)悬浮液。加入三乙胺(7.47ml，53.6mmol)和二碳酸二叔丁酯(BOC2O，4.02g，18.4mmo)。在室温下搅拌悬浮液1小时，同时反应生成清亮的黄色溶液。浓缩溶液，使体积减小(～25ml)，利用水(15ml)和1N HCl(15ml)稀释。将混合物注入到分液漏斗中，进一步利用水(100ml)和盐水(100ml)稀释，利用Et2O(3×100ml)萃取。利用盐水洗涤有机层，干燥、过滤并浓缩，得到白色固体。将含有过量BOC2O的固体溶解在Et2O(500ml)中，利用1N NaOH(3×100ml)萃取。利用6N HCl酸化水层，得到大约pH2，然后迅速利用Et2O(3×100ml)萃取。干燥Et2O层，过滤并浓缩得到白色固体(3.07g)。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ12.95(br s，1)；4.34-4.30(m，1)；4.18-4.10(m，1)；3.83-3.74(m，1)；3.59-3.51(m，2)；3.39-3.32(m，1)；3.21-2.95(m，1)；1.41-1.36(m，9)。
NH4Oac标准溶液。
ELSD Rf＝1.08min。
M-H＝230。
实施例19：4-甲基-吗啉-3(S)-羧酸(6-氯-9H-β-咔啉-8-基)-酰胺
在室温下搅拌吗啉-3(S)-羧酸(3.00g，22.9mmol)的EtOH(115ml)浆状液。加入CH2O(3.42ml，45.8mmol，37％w/w，于水中)水溶液，接着加入Pd(OH)2(600mg，20％w/w，于碳上)。烧瓶中充满氢气(1大气压)，在室温下于氢气气球中搅拌灰色浆状液24小时。利用氮气冲洗烧瓶，利用MeOH稀释浆状液，通过滤纸过滤，浓缩减小体积。通过0.45μm注射过滤器过滤浅灰色溶液，除去残留的Pd(OH)2，浓缩得到清亮无色油状物。将该油状物置于高压下24小时，分离白色固体泡沫。将泡沫溶解在吡啶(200ml)中，得到6-氯-9H-β-咔啉-8-基胺(3.74g，17.2mmol)，接着通过EDCI(5.87g，30.6mmol)。将清亮浅桔黄色溶液在室温下搅拌24小时。利用H2O(300ml)稀释溶液，将其注入到含EtOAc(300ml)的分液漏斗中。振荡混合物，分层。利用EtOAc(3×150ml)萃取水层，利用水和盐水洗涤合并的有机层。干燥有机层，过滤并浓缩得到棕色油状物，将其置于高真空中。利用MeOH研磨所得棕色泡沫，过滤生成的沉淀，利用MeOH洗涤。通过手性HPLC纯化所得浅黄色固体，得到白色固体(3.23g)。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ11.36(s，1)；10.02(s，1)；9.04(s，1)；8.38(d，1)；8.22-8.21(m，1)；8.15(d，1)；7.91-7.90(m，1)；4.00(dd，1)；3.85-3.81(m，1)；3.69-3.58(m，2)；2.99-2.95(dd，1)；2.89-2.85(m，1)；2.32(s，3)；2.32-2.24(m，1)。
NH4Oac标准溶液。
DAD Rf＝1.89min。
M+H＝345。
手性制备性HPLC：10％v/v EtOH/己烷。
Chiralcel OD柱。
Rf＝11.5-14min。
产物对映体纯度≥99％ee。
方法C：制备4-吗啉取代的类似物的步骤
如中间体34、中间体35和实施例20所述：
中间体34：3(S)-(6-氯-9H-β-咔啉-8-基氨基甲酰基)-吗啉-4-羧酸叔丁酯
在室温下搅拌吗啉-3(S)，4-二羧酸4-叔丁酯(2.83g，12.7mmol)的吡啶(106ml)溶液。加入6-氯-9H-β-咔啉-8-基胺(2.30g，10.6mmol)。接着加入EDCI(4.06g，21.2mmol)。在室温下搅拌清亮桔黄色至棕色的溶液14小时。利用H2O(120ml)稀释溶液，将其注入到含EtOAc(200ml)、H2O(100ml)和盐水(100ml)的分液漏斗中。振荡混合物，分层。利用EtOAc(2×50ml)萃取水层，利用盐水洗涤合并的有机层。干燥有机层，过滤并浓缩，体积减小，然后滴加到1∶1Et2O/己烷(500ml)搅拌溶液中。过滤生成的沉淀，利用1∶1Et2O/己烷洗涤。浓缩滤液，体积减小，收集第二次生成的沉淀。浆固体产物置于高真空中2小时，得到3(S)-(6-氯-9H-β-咔啉-8-基氨基甲酰基)-吗啉-4-羧酸叔丁酯，为浅黄色至浅棕色的固体(4.36g)。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ11.30(s，1)；10.13(s，1)；9.06(s，1)；8.40-8.38(m，1)；8.19-8.16(m，2)；7.98(s，1)；4.67-4.47(m，2)；3.96-3.60(m，2)；3.64-3.39(m，3)；1.42(s，9)。
NH4Oac标准条件。
DAD Rf＝2.31min。
M+H＝431。
中间体35：2(R)-[3(S)-(6-氯-9H-/3-咔啉-8-基氨基甲酰基)-吗啉-4-基甲基]-吡咯烷-1-羧酸叔丁酯
在室温下搅拌3(S)-(6-氯-9H-β-咔啉-8-基氨基甲酰基)-吗啉-4-羧酸叔丁酯(1.00g，2.32mmol)的CH2Cl2(6ml)溶液。加入三氟乙酸(6ml)，溶液在室温下搅拌45分钟，然后浓缩得到残留物。由CH2Cl2再次浓缩残留物，得到黄色-棕色固体，将其在氩气气氛下溶解在THF(13ml)中，为确保完全溶解，有时需要加热。加入N-(叔丁氧基羰基)-D-脯氨醛(prolinal)(693mg，3.48mmol)的THF(2ml)溶液，接着加入三乙酰氧基硼氢化钠(738mg，3.48mmol)。溶液在室温下搅拌30分钟，然后通过加入1N NaOH(30ml)水溶液骤冷。将混合物注入到包含EtOAc(100ml)、H2O(100ml)和盐水(100ml)的分液漏斗中。振荡混合物，分层。利用EtOAc(2×50ml)萃取水层，利用盐水洗涤合并的有机层。干燥有机层，过滤并浓缩，得到亮棕色固体。柱色谱纯化(2％-4％MeOH/CH2Cl2)，得到2(R)-[3(S)-(6-氯-9H-β-咔啉-8-基氨基甲酰基)-吗啉-4-基甲基]-吡咯烷-1-羧酸叔丁酯，为白色固体(915mg)。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ11.30(s，1)；9.88(s，1)；9.04(s，1)；8.39-8.37(m，1)；8.20-8.15(m，2)；7.95(s，1)；3.99-3.82(m，3)；3.69-3.63(m，2)；3.44-3.32(m，1)；3.27-3.11(m，3)；2.92-2.80(m，1)；2.44-2.32(m，1)；1.99-1.67(m，5)；1.33(s，9)。
HCOOH标准溶液。
DAD Rf＝1.39min。
M+H＝514。
手性HPLC。
检测样品的对映体纯度。样品为≥97％ee。
Chiralpak AD柱。
含0.1％Et2NH的15％v/v EtOH/己烷。
实施例20：4-吡咯烷-2(R)-基甲基-吗啉-3(S)-羧酸(6-氯-9H-β-咔啉-8-基)-酰胺，HCl盐)
向2(R)-[3(S)-(6-氯-9H-β-咔啉-8-基氨基甲酰基)-吗啉-4-基甲基]-吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(850mg，1.65mmol)的MeOH(16ml)溶液中加入浓HCl(13ml)。溶液在室温下搅拌30-45分钟，此时生成黄色沉淀。浓缩反应混合物，得到4-吡咯烷-2(R)-基甲基-吗啉-3(S)-羧酸(6-氯-9H-β-咔啉-8-基)-酰胺，HCl盐，为浅黄色固体(755mg)。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ.13.30(s，1)；11.56(br s，1)；9.63(br s，1)；9.46(s，1)；8.87-8.85(m，1)；8.66-8.57(m，2)；8.25(s，1)；4.38-4.26(m，1)；4.24-4.08(m，1)；4.04-3.86(m，2)；3.86-3.68(m，2)；3.57-3.39(m，1)；3.39-3.02(m，4)；2.99-2.76(m，1)；2.10-1.84(m，3)；1.75-1.56(m，1)。
HCOOH标准溶液。
DAD Rf＝0.81min。
M+H＝414。
中间体36：顺式-2-(叔丁氧基羰基氨基)-环戊烷羧酸(6-氯-9H-咔啉-8-基)酰胺
在室温下搅拌顺式-2-(叔丁氧基羰基氨基)-环戊烷羧酸(550mg，2.4mmol)的吡啶(10ml)溶液。加入6-氯-9H-β-咔啉-8-基胺(436mg，2.0mmol)，接着加入EDCI(615mg，3.2mmol)，在室温下搅拌桔黄色溶液1.5小时。利用H2O(20ml)稀释溶液，将其注入到含H2O(50ml)和EtOAc(100ml)的分液漏斗中。振荡混合物，分层。利用EtOAc(100ml)萃取水层。利用盐水洗涤合并的有机层，在MgSO4上干燥，过滤并浓缩，得到桔黄色油状固体，接着利用于Et2O(20ml)中的5％MeOH研磨，过滤收集得到顺式-2-(叔丁氧基羰基氨基)-环戊烷羧酸(6-氯-9H-咔啉-8-基)酰胺，为亮黄色固体(740mg)。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ11.17(s，1)；9.89(s，1)；9.04(s，1)；8.36(d，1)；8.18-8.08(m，2)；7.95(s，1)；6.92(d，1)；4.32-4.22(m，1)；3.16-3.09(m，1)；2.13-2.01(m，1)；1.96-1.75(m，3)；1.74-1.59(m，1)；1.58-1.42(m，1)；1.07(s，9)。
NH4OAc标准条件。
DAD Rf＝2.52min。
M+H＝429。
实施例21：顺式-2-氨基-环戊烷羧酸(6-氯-9H-β-咔啉-8-基)-酰胺
在室温下搅拌2-(叔丁氧基羰基氨基)-环戊烷羧酸(6-氯-9H-β-咔啉-8-基)酰胺(736mg，1.72mmol)的上那幅乙酸(5ml)溶液20分钟，然后浓缩得到桔黄色油状物。将该油状物溶解在MeOH(5ml)中，利用饱和碳酸氢钠水溶液(25ml)中和。利用H2O(25ml)和EtOAc(100ml)进一步稀释所得混合物。除去水层，利用EtOAc(100ml)萃取。利用盐水洗涤合并的有机层，在MgSO4上干燥，过滤并浓缩，得到黄色固体(507mg)。将这些固体溶解在MeOH(5ml)中，加入HCl的二噁烷(4M，1.5ml)溶液。搅拌亮黄色溶液30分钟，然后浓缩得到顺式-2-氨基-环戊烷羧酸(6-氯-9H-β-咔啉-8-基)-酰胺，为黄色粉末(600mg)。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ9.29(s，1)；8.75(d，1)；8.53(d，1)；8.37(s，1)；8.02(s，1)；4.05-3.95(m，1)；3.42-3.34(m，1)；2.46-1.80(m，6)。
NH4OAc标准条件。
DAD Rf＝1.65min。
M+H＝329。
实施例22：4-(2-氨基-乙基)-吗啉-3-羧酸(6-氯-9H-β-咔啉-8-基)-酰胺，HCl盐
根据方法C步骤，利用被2-氨基乙醛还原烷基化的外消旋吗啉-3-羧酸。
1H-NMR(300MHz，MeOH-d4)：δ9.37(s，1)；8.76(d，1)；8.55(d，1)；8.44(d，1)；8.06(d，1)；4.68-4.55(m，2)；4.17-3.99(m，3)；3.84-3.73(m，2)；3.57-3.39(m，4)。
NH4OAc标准条件。
DAD Rf＝1.69min。
M+H＝374。
实施例23：4-(2(S)-氨基-丙基)-吗啉-3(S)-羧酸(6-氯-9H-β-咔啉-8-基)-酰胺，HCl盐(第一洗脱非对映体)
根据方法C的步骤，利用被适当的丙胺醛还原烷基化的外消旋吗啉-3-羧酸。在脱保护步骤之前，通过柱色谱纯化，分离非对映体。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ9.32(s，1)；8.76(d)；8.55(d，1)；8.41(s，1)；8.08(s，1)；4.38(d，1)；4.32-4.21(m，1)；4.16-4.09(m，1)；4.04-3.95(m，2)；3.79-3.57(m，2)；3.47-3.40(m，1)；3.22-3.05(m，2)；1.44(d，3)。
NH4OAc标准条件。
DAD Rf＝1.38min。
M+H＝388。
实施例24：4-(2(S)-氨基-丙基)-吗啉-3(R)-羧酸(6-氯-9H-β-咔啉-8-基)-酰胺，HCl盐(第二洗脱非对映体)
根据方法从的步骤，利用被适当的丙胺醛还原烷基化的外消旋吗啉-3-羧酸。在脱保护步骤之前，通过柱色谱纯化，分离非对映体。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ9.34(s，1)；8.77(d，1)；8.55(d，1)；8.42(s，1)；8.06(s，1)；4.42(d，1)；4.30-4.12(m，1)；4.07-3.92(m，3)；3.89-3.74(m，1)；3.65-3.49(m，1)；3.25-2.90(m，3)；1.36(d，3)。
NH4OAc标准条件。
DAD Rf＝1.57min。
M+H＝388。
实施例25：2-氨基-环己烷羧酸(6-氯-9H-β-咔啉-8-基)-酰胺
在室温下搅拌顺式-2-(叔丁氧基羰基氨基)-环己烷羧酸(255mg，1.05mmol)的吡啶(10ml)溶液。加入6-氯-9H-β-咔啉-8-基胺(218mg，1.00mmol)，接着加入EDCI(315mg，1.64mmol)，在室温下搅拌略显混浊的浅桔黄色溶液16小时。利用H2O(20ml)稀释溶液，将其注入到含H2O(50ml)和EtOAc(50ml)的分液漏斗中。利用EtOAc(50ml)萃取水层，利用盐水洗涤合并的有机层。干燥有机层，过滤并浓缩，得到黄色油状物，将其置于高真空中4小时。在室温下，将所得黄色-棕色玻璃体在CH2Cl2(10ml)中成浆状物。加入三氟乙酸(5ml)，将浆状物立即溶解，生成亮桔黄色溶液。在室温下搅拌溶液45分钟，然后浓缩得到棕色残留物。利用甲苯(3×10ml)共沸残留物，得到黄色固体。通过向H2O(50ml)加入小量体积的10％Na2CO3水溶液，直至水溶液pH达到10，制备稀Na2CO3水溶液。将黄色固体溶解在少量MeOH中，在搅拌条件下将其滴加到水溶液中。过滤生成的沉淀，利用H2O洗涤，将其置于高真空中，得到2-氨基-环己烷羧酸(6-氯-9H-β-咔啉-8-基)-酰胺，为浅黄色固体(147mg)。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ9.00(s，1)；8.37-8.34(m，1)；8.16-8.13(m，2)；7.83(m，1)；5.66-5.00(br s，2)；3.42-3.40(m，1)；2.70-2.62(m，1)；2.02-1.90(m，1)；1.70-1.54(m，5)；1.42-1.29(m，2)。
NH4OAc标准条件。
DAD Rf＝1.46min。
M+H＝343。
实施例26：4-(2(R)-氨基-丙基)-吗啉-3(S)-羧酸(6-氯-9H-β-咔啉-8-基)-酰胺，HCl盐
根据方法C的步骤，利用被适当的丙胺醛还原烷基化的外消旋吗啉-3-羧酸。在脱保护步骤之前，通过柱色谱纯化，分离非对映体。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ9.35(s，1)；8.77(m，1)；8.55(m，1)；8.43(s，1)；8.01(s，1)；4.45(d，1)；4.26(m，1)；4.09-3.91(m，3)；3.79(m，1)；3.63(m，1)；3.28-2.99(m，3)；1.37(d，3)。
NH4OAc标准条件。
DAD Rf＝1.39min。
M+H＝388。
实施例27：4-(2(R)-氨基-3-苯基-丙基)-吗啉-3(S)-羧酸(6-氯-9H-β-咔啉-8-基)-酰胺，HCl盐
根据方法C的步骤，利用被适当的丙胺醛还原烷基化的外消旋吗啉-3-羧酸。在脱保护步骤之前，通过柱色谱纯化，分离非对映体。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ9.34(s，1)；8.77(d，1)；8.55(d，1)；8.42(s，1)；8.04(s，1)；7.44-7.23(m，5)；4.39(d，1)；4.65-4.07(m，1)；4.40-3.82(m，4)；3.50-3.25(m，1)；3.30-3.14(m，1)；3.11-2.88(m，3)；2.85-2.69(m，1)。
NH4OAc标准条件。
DAD Rf＝1.90min。
M+H＝464。
方法D：色谱法条件
LCMS
柱的类型：Phenomenex Luna C18(2)柱，5um，尺寸50×4.6mm
操作时间：5.00分钟
NH4Oac条件：
溶剂A：10mM NH4OAc，99％H2O，1％MeCN
溶剂B：10mM NH4OAc，5％H2O，95％MeCN
标准梯度：
初始条件-95％A，5％B
3.5分钟梯度，由5％至100％B
3.5-4.3分钟，维持在100％B
4.3-5分钟，初始条件
极性梯度：
初始条件-70％A，30％B
3.5分钟梯度，由70％至100％B
3.5-4.3分钟，维持在100％B
4.3-5分钟，初始条件
非极性梯度：
初始条件-100％A
3.5分钟梯度，由0％至50％B
3.5-4.3分钟，维持在100％B
4.3-5分钟，初始条件
HCOOH条件：
溶剂C：0.1％HCOOH，99％H2O，1％MeCN
溶剂D：0.1％HCOOH，5％H2O，95％MeCN
标准梯度：
初始条件-95％C，5％D
3.5分钟梯度，由5％至100％D
3.5-4.3分钟，维持在100％D
4.3-5分钟，初始条件
极性梯度：
初始条件-70％C，30％D
3.5分钟梯度，由70％至100％D
3.5-4.3分钟，维持在100％D
4.3-5分钟，初始条件
非极性梯度：
初始条件-100％C
3.5分钟梯度，由0％至50％D
3.5-4.3分钟，维持在100％D
4.3-5分钟，初始条件
中间体37：6-氯-2，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉，HCl盐
将5-氯色胺盐酸盐(5g，20mmol，1当量)溶解在40ml 3MNaOAc缓冲液(pH＝4.8)和40ml水中，一次加入乙二酸(1.84g，20mmol，1当量)，溶液在室温下搅拌过夜。过滤所得粘稠浆状物，将亮绿色固体悬浮在100ml 6N HCl中，在回流冷凝器条件下于125℃下加热1小时，间隙加入浓HCl(每隔15分钟加入2ml)。冷却至室温后，过滤分离出4.38g(90％)6-氯-2，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉，HCl盐，为兰-灰色固体。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ11.33(br，2H)，9.62(br，2H)，7.53(d，1)，7.39(d，1)，7.09(dd，1)，4.33(br，2H)，2.92(t，2)
甲酸标准条件。
DAD RT＝1.56min。
M+H＝207。
中间体38：(6-氯-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基)-苯基-甲酮
在N2下，将6-氯-2，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉，HCl盐(10.2g，42mmol，1当量)悬浮在100ml无水吡啶中，在冰水浴中冷却至0℃。将苯甲酰氯(7.3ml，63mmol，1.5当量)滴加到冷溶液中，之后除去反应的冰浴，允许其在室温下搅拌过夜。通过加入水骤冷反应，直至被固体堵塞。过滤收集这些固体，利用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，将其再悬浮在水中，进行超声波降解并再过滤，得到1.27g(94％)(6-氯-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基)-苯基-甲酮，为结晶桔黄色固体。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ10.65-10.59(br，1H)，7.0-7.5(m，9H)，4.60-4.83(br，2H)，3.62-3.99(br，2H)，2.75(br..2H)。
甲酸标准条件。
DAD RT＝2.68min。
M+H＝311。
中间体39：2-苯甲酰基-6-氯-1，2，3，9-四氢-β-咔啉-4-酮
(6-氯-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基)-苯基-甲酮(1.76g，5.66mmol，1当量)和DDQ(2.31g，10.2mmol，1.8当量)作为固体，进行混合，冷却至-78℃。将15ml 9∶1THF/H2O溶液冷却至-78℃，将所得浆状物加入到冷却的固体中，接着加入15ml THF(也冷却至-78℃)。在-78℃下搅拌深兰色溶液2小时，然后渐渐温热至室温，再搅拌2小时。通过加入1N NaOH骤冷反应，利用3×150ml EtOAc萃取。利用2×100ml 1N HCl和1×100ml盐水洗涤合并的有机层，在MgSO4上干燥，过滤并浓缩，得到1.38g(75％)2-苯甲酰基-6-氯-1，2，3，9-四氢-β-咔啉-4-酮，为油状桔黄色固体。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ12.11-12.48(br，1H)，7.29-7.88(m，8H)，4.93-5.18(br，2H)，4.60-4.46(br，2H)。
精确质量(Exact Mass)：324.07。
甲酸标准条件
DAD RT＝2.15min。
M+H＝325。
中间体40：4-氨基-6-氯-β-咔啉
将粗2-苯甲酰基-6-氯-1，2，3，9-四氢-β-咔啉-4-酮(4g)溶解在30ml无水肼中，在N2下回流(130℃油浴)搅拌6小时之后允许将反应冷却至室温，静置过夜。过滤分离出沉淀黄色固体，利用水(2×5ml)洗涤，得到785mg(30％)4-氨基-6-氯β-咔啉，为灰白色固体。将另外的水加入到合并的滤液中，直至进一步产生沉淀。也通过滤分离这些固体，得到1.056g(39％)4-氨基-6-氯-β-咔啉，为黄色固体(69％总收率)。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ11.48(s，1H)，8.44(s，1H)，8.13(s，1H)，7.77(s，1H)，7.42-7.52(m，2H)，5.86(s，2H)。
甲酸标准条件。
DAD RT＝1.68min。
M+H＝218。
中间体41：N-(6-氯-9H-β-咔啉-4-基)-2，2，2-三氟-乙酰胺
将4-氨基-6-氯-β-咔啉(1.05g，4.82mmol，1当量)溶解在4ml无水吡啶和20ml THF中，在N2下冷却至0℃。向冷却溶液中滴加三氟乙酸酸酐(3.4ml，24mmol，5当量)。加料完成后，将反应从冰浴上离去，在室温下搅拌～1.5小时。通过慢慢加入水(10ml)骤冷反应，利用2×150ml EtOAc萃取，利用2×100ml饱和碳酸氢钠溶液和1×100ml盐水洗涤，在MgSO4上干燥，过滤并浓缩，得到桔黄色固体。在10-15ml Et2O中研磨这些固体并过滤收集，得到1.23g(81％)N-(6-氯-9H-β-咔啉-4-基)-2，2，2-三氟-乙酰胺，为黄色固体。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ12.11(s，1H)，11.89(s，1H)，8.92(s，1H)，8.33(s，1H)，7.82(s，1H)，7.60-7.70(m，2H)。
甲酸标准条件。
DAD RT＝2.12min。
M+H＝314。
中间体42：N-(6-氯-8-硝基-9H-β-咔啉-4-基)-2，2，2-三氟-乙酰胺
将N-(6-氯-9H-β-咔啉-4-基)-2，2，2-三氟-乙酰胺(125mg，0.4mmol，1当量)溶解在2ml TFA中，一次加入NaNO2(541mg，7.84mmol，2当量)。溶液在室温下搅拌4小时。通过旋转蒸发除去挥发物，将所得油状桔黄色固体悬浮在水中，利用饱和碳酸氢钠溶液中和，过滤得到132mg(92％)N-(6-氯-8-硝基-9H-β-咔啉-4-基)-2，2，2-三氟-乙酰胺。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ12.87(s，1H)，12.03(s，1H)，9.11(s，1H)，8.56(s，1H)，8.53(s，1H)，8.26(s，1H)。
甲酸标准条件。
DAD RT＝2.27min。
M+H＝359。
中间体43：N-(8-氨基-6-氯-9H-β-咔啉-4-基)-2，2，2-三氟-乙酰胺
将粗N-(6-氯-8-硝基-9H-β-咔啉-4-基)-2，2，2-三氟-乙酰胺(130mg，0.36mmol)溶解在7ml MeOH中，反应容器为3×N2冲洗的真空。迅速加入铂(20mg，20％wt，于活性碳上)，反应容器再利用3×N2冲洗，接着再利用H2冲洗循环3次。再在1大气压H2下搅拌反应过夜。结束后，利用H2冲洗，通过硅藻土过滤。利用甲醇清洗硅藻土数次，直至变得清亮。浓缩合并的滤液，得到N-(8-氨基-6-氯-9H-β-咔啉-4-基)-2，2，2-三氟-乙酰胺，为黄色固体(112mg，95％)。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ11.83(s，1H)，8.98(s，1H)，8.30(s，1H)，7.10(s，1H)，6.82(s，1H)，5.87(br，2H)。
甲酸标准条件。
DAD RT＝1.95min。
M+H＝329。
中间体44：N-[6-氯-4-(2，2，2-三氟-乙酰氨基)-9H-β-咔啉-8-基]-2-甲基-烟酰胺
在N2下，将N-(8-氨基-6-氯-9H-β-咔啉-4-基)-2，2，2-三氟-乙酰胺(90mg，0.274mmol，1当量)和2-甲基烟酸(45mg，0.329mmol，1.2当量)溶解在1.5ml无水吡啶中。一次加入EDCI(84mg，0.438mmol，1.6当量)，在室温下搅拌反应混合物2小时。利用水骤冷反应，过滤收集所得黑色固体。在3∶1甲醇-DMSO溶液中研磨这些固体，得到N-[6-氯-4-(2，2，2-三氟-乙酰氨基)-9H-β-咔啉-8-基]-2-甲基-烟酰胺，为亮黄色固体(41mg，3％)。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ11.94(br，1H)，11.78(s，1H)，10.61(s，1)，9.00(s，1)，8.64(d，1)，8.38(s，1H)，8.13(d，1)，8.01(s，1H)，7.73(s，1H)，7.45(m，1H)，2.68(s，3H)。
甲酸标准条件。
DAD RT＝1.98min。
M+H＝448。
中间体45：N-[6-氯-4-(2，2，2-三氟-乙酰氨基)-9H-β-咔啉-8-基]-烟酰胺
在N2下，将N-(8-氨基-6-氯-9H-β-咔啉-4-基)-2，2，2-三氟-乙酰胺(90mg，0.274mmol，1当量)和2-甲基烟酸(40mg，0.329mmol，1.2当量)溶解在1.5ml无水吡啶中。一次加入EDCI(84mg，0.438mmol，1.6当量)，将反应混合物在室温下搅拌2小时。骤冷反应，利用先前的方法处理，得到38mg(32％)-[6-氯-4-(2，2，2-三氟-乙酰氨基)-9H-β-咔啉-8-基]-烟酰胺。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ11.89(br，1H)，10.73(s，1)，9.28(s，1)，8.97(s，1)，8.84(d，1)，8.43(d，1)，8.37(s，1)，7.85(s，1)，7.76(s，1)，7.67(m，1)。
甲酸标准条件。
DAD RT＝1.94min。
M+H＝434。
实施例28：N-(4-氨基-6-氯-9H-β-咔啉-8-基)-2-甲基-烟酰胺
将N-[6-氯-4-(2，2，2-三氟-乙酰氨基)-9H-β-咔啉-8-基]-烟酰胺(41mg，0.092mmol，1当量)悬浮在5ml MeOH中，向其中加入2mlK2CO3(127mg，0.92mmol，10当量)水溶液。将所得清亮溶液加热自60℃16小时，然后允许冷却至室温。加入另外的水，生成精细的固体，过滤收集，利用10ml于Et2O中的5％MeOH洗涤一次，在高真空下干燥，得到18mg N-(4-氨基-6-氯-9H-β-咔啉-8-基)-2-甲基-烟酰胺，为粉末黄色固体(56％收率)。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ11.18(s，1H)，10.41(s，1H)，8.62(d，J＝3.6，1H)，)，8.32(s，1H)，8.20(s，1H)，8.11(d，J＝7.5，1H)，7.91(s，1H)，7.79(s，1H)，7.43(m，1H)，5.91(br，2H)，2.66(s，3H)。
甲酸标准条件。
DAD RT＝1.63min。
M+H＝352。
实施例29：N-(4-氨基-6-氯-9H-β-咔啉-8-基)-烟酰胺
将N-[6-氯-4-(2，2，2-三氟-乙酰氨基)-9H-β-咔啉-8-基]-烟酰胺(38mg，0.088mmol，1当量)悬浮在5ml MeOH中，向其中加入2mlK2CO3(121mg，0.92mmol，10当量)水溶液。将所得清亮溶液加热至60℃11小时。冷却至室温后，过滤收集沉淀的精细固体，利用10ml水洗涤一次，得到2.78mg(10％)N-(4-氨基-6-氯-9H-β-咔啉-8-基)-烟酰胺。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ11.32(s，1H)，10.56(s，1H)，9.26(s，1H)，8.82(d，1)，8.42(d，1)，8.36(s，1H)，8.18(s，1H)，7.79(s，1H)，7.70(s，1H)，7.64(m，1H)，5.91(br，2H)。
甲酸标准条件。
DAD RT＝1.55min。
M+H＝338。
中间体46：3-氰基甲基-吲哚-1-羧酸叔丁酯
在室温下搅拌3-吲哚乙腈(10g，64mmol)的DMF(160ml)溶液。向其中加入K2CO3(13.3g，96mmol)和二碳酸二叔丁酯(15.35g，70mmol)，在室温下搅拌反应混合物12小时。向反应混合物中加入H2O(100ml)，过滤收集所得沉淀。将固体溶解在热甲醇(20ml)中，允许溶液慢慢冷却，生成亮桔黄色固体，过滤分离得到3-氰基甲基-吲哚-1-羧酸叔丁酯(9.2g)。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ8.08(d，1)；7.70-7.66(m，2)；7.42-7.29(m，2)；4.12(s，2)；1.63(3，9)。
NH4OAc标准条件。
DAD Rf＝3.31min。
M+H＝257。
中间体47：3-(氰基-甲基-甲基)-吲哚-1-羧酸叔丁酯
在氩气气氛下，将3-氰基甲基-吲哚-1-羧酸叔丁酯(2.15g，8.39mmol)的THF(40ml)搅拌溶液冷却至-78℃。向其中加入二(三甲基甲硅烷基)酰胺钠(1M，于THF，10ml，10mmol)，搅拌冷溶液30分钟。向其中加入碘甲烷(627μL，10mmol)，搅拌反应混合物1.5小时，此时渐渐温热至0℃。向其中加入H2O(100ml)，将溶液温热至室温，利用EtOAc(250ml)稀释。除去水层，利用EtOAc(250ml)萃取。利用HCl(1N，3×50ml)洗涤合并的有机层，接着利用盐水洗涤，在MgSO4上干燥，过滤并浓缩，得到桔黄色油状物。色谱纯化(己烷∶乙酸乙酯)，得到3-(氰基-甲基-甲基)-吲哚-1-羧酸叔丁酯(1.8g)。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ8.09(d，1)；7.73(d，1)；7.69(s，1)；7.74-7.29(m，2)；4.56(q，1)；1.66(d，J＝7.2，3)；1.63(s，9)。
中间体48：3-(2-氨基-1-甲基-甲基)-吲哚-2-羧酸叔丁酯
在室温下搅拌3-(氰基-甲基-甲基)-吲哚-1-羧酸叔丁酯(850mg，3.14mol)的甲醇(15ml)溶液。向其中加入阮内镍催化剂(50％g/wt，悬浮于H2O中，1ml)，将反应容器盖上盖，利用氩气真空冲洗3次，接着利用氢气冲洗。在1大气压氢气下搅拌混合物22小时，利用氩气真空冲洗，通过硅藻土过滤。。浓缩滤液，得到油状物(670mg)，通过LCMS确定其主要包含所需的化合物3-(2-氨基-1-甲基-甲基)-吲哚-1-羧酸叔丁酯。
NH4OAc标准条件。
DAD Rf＝1.78min。
M+H＝275。
中间体49：4-甲基-2，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉-1-羧酸
将粗3-(2-氨基-1-甲基-甲基)-吲哚-1-羧酸叔丁酯(670mg，大约2.44mmol)溶解在三氟乙酸(2ml)中，在室温下搅拌30分钟，然后减压浓缩得到油状固体。在室温下，将所得油状物溶解在3MNaOAc：AcOH缓冲液(pH＝4.8，12ml)和H2O(6ml)中。向其中加入乙二酸(225mg，2.44mmol)，反应混合物在室温下搅拌4小时，然后浓缩至干。LCMS确定所得固体主要包含所需化合物4-甲基-2，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉-1-羧酸，盖化合物可在不进行纯化条件下用于下一步骤。
NH4OAc标准条件。
DAD Rf＝1.24min。
M+H＝231。
中间体50：4-甲基-2，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉
将粗4-甲基-2，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉-1-羧酸(大约2.44mmol)悬浮在H2O(5ml)和HCl(12N，5ml)中，将悬浮液在120℃下加热1小时，然后允许冷却至室温。通过除去深桔黄色-棕色固体，然后溶解在甲醇(5ml)中。向其中加入饱和碳酸氢钠溶液(20ml)，生成粘稠状黄色浆状物。过滤盖反应混合物，得到黄色固体，LCMS确定其主要包含4-甲基-2，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉(386mg)。
NH4OAc标准条件。
DAD Rf＝1.23min。
M+H＝187。
中间体51：4-甲基-9H-β-咔啉
将4-甲基-2，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉(214mg，1.17mmol)悬浮在二甲苯(10ml)中。向其中加入Pd(10％wt，于碳上，21mg)催化剂，反应混合物在160℃下搅拌24小时，然后冷却至室温，通过硅藻土过滤。浓缩滤液至干，得到4-甲基-9H-β-咔啉(210mg)。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ11.73(br s，1)；8.78(br s，1)；8.19(d，1)；8.13(s，1)；7.62(br s，1)；7.53(t，1)；7.25(t.1)；2.78(s，3)。
NH4OAc标准条件。
DAD Rf＝2.24min。
M+H＝183。
中间体52：6-氯-4-甲基-9H-β-咔啉
将4-甲基-9H-β-咔啉(97mg，0.532mmol)溶解在HCl(1N，4ml)中，在室温下搅拌。向其中加入NCS(85mg，0.637mmol)，搅拌反应混合物5小时。向其中加入饱和碳酸氢钠溶液(20ml)，利用EtOAc(100ml)萃取反应混合物两次。利用盐水洗涤合并的有机层，在MgSO4上干燥，过滤并浓缩，得到6-氯-4-甲基-9H-β-咔啉(108mg)，为油状物。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ8.67(s，1)；8.19(s，1)；8.11(s，1)；7.57-7.54(m，2)；2.82(s，3)。
NH4OAc标准条件。
DAD Rf＝2.48min。
M+H＝217。
中间体53：6-氯-4-甲基-8-硝基-9H-β-咔啉
在室温下搅拌6-氯-4-甲基-9H-β-咔啉(100mg，0.462mmol)的三氟乙酸(10ml)溶液。向其中加入NaNO3(106mg，1.25mmol)，搅拌反应混合物30分钟，然后浓缩得到桔黄色残留物。将残留物溶解在MeOH(5ml)中，通过加入饱和碳酸氢钠溶液(20ml)中和，生成黄色固体，过滤收集，利用H2O(10ml)和Et2O(2×10ml)洗涤，得到6-氯-4-甲基-8-硝基-9H-β-咔啉(82mg)。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ8.90(s，1)；8.65(s，1)；8.55(s，1)；8.29(s，1)；2.89(s，3)。
NH4OAc标准条件。
DAD Rf＝3.00min。
M+H＝262。
中间体54：6-氯-4-甲基-9H-β-咔啉-8-基胺
在室温下搅拌6-氯-4-甲基-8-硝基-9H-β-咔啉(80mg，0.31mmol)的MeOH(10ml)溶液。向其中加入铂(10％wt，于碳上，24mg)催化剂，将反应容器盖上盖，利用氩气冲洗3次，接着类似地利用氢气冲洗。反应混合物在1大气压氢气下搅拌1.5小时，然后利用氩气冲洗真空，利用DCM(10ml)稀释，通过0.2uM注射过滤器过滤。浓缩滤液得到6-氯-4-甲基-9H-β-咔啉-8-基胺(67mg)，为亮棕色油状物。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ9.04(s，1)；8.29(s，1)；7.74(d，1)；7.10(d，1)；2.98(s，3)。
NH4OAc标准条件。
DAD Rf＝1.89min。
M+H＝231。
实施例30：N-(6-氯-4-甲基-9H-β-咔啉-8-基)-烟酰胺
在氩气气氛下，于室温下搅拌6-氯-4-甲基-9H-β-咔啉-8-基胺(43mg，0.19mmol)的吡啶(4ml)溶液。向其中加入烟酰氯盐酸盐(40mg，0.22mmol)，搅拌反应混合物12小时。利用H2O(5ml)稀释溶液，将其注入到含H2O(5ml)和EtOAc(25ml)的分液漏斗中。振荡反应混合物，分层。利用EtOAc(2×25ml)萃取水层。利用饱和碳酸氢钠溶液(15ml)洗涤合并的有机层，接着利用盐水洗涤，然后在MgSO4上干燥，过滤并浓缩，得到N-(6-氯-4-甲基-9H-β-咔啉-8-基)-烟酰胺(5.2mg)，为桔黄色粘稠油状物。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ11.67(s，1)；10.70(s，1)；9.27(s，1)；8.83(s，2)；8.45(s，1)；8.20-8.12(m，2)；7.83(s，1)；7.66(s，1)；2.80(s，3)。
NH4OAc标准条件。
DAD Rf＝1.92min。
M+H＝337。
中间体55：1，1-二氧代-1λ6-硫代吗啉-3，4-二羧酸4-叔丁酯
将硫代吗啉-3，4-二羧酸4-叔丁酯(120mg，0.485mmol)溶解在Et2O(8ml)中。向盖溶液中加入mCPBA(172mg，0.994mmol)，接着加入第二份mCPBA(84mg，0.485mmol)。过滤生成的沉淀，利用Et2O洗涤，得到白色固体1，1-二氧代-1λ6-硫代吗啉-3，4-二羧酸4-叔丁酯(74mg)。
实施例31：1，1-二氧代-1λ6-硫代吗啉-3-羧酸(6-氯-9H-β-咔啉-8-基)-酰胺
将于吡啶(2ml)中的6-氯-7-氟-9H-β-咔啉-8-基胺(43mg，0.198mmol)、1，1-二氧代-1λ6-硫代吗啉-3，4-二羧酸4-叔丁酯(72mg，0.257mmol)和EDCI(76mg，0.396mmol)浆状物加热至70℃。1小时后，减压除去溶剂，将所得黑色油状物溶解在MeOH(1ml)中。将MeOH溶液滴加到搅拌NaHCO3水溶液中，生成黄色沉淀。过滤固体，干燥，将其溶解在于Et2O的2M HCl中。搅拌过夜后，过滤所得黄色固体，干燥得到黄色固体1，1-二氧代-1λ6-硫代吗啉-3-羧酸(6-氯-9H-β-咔啉-8-基)-酰胺的二-HCl盐(78mg)。
1H-NMR(300MHz，MeOH-d4)：δ9.26(s，1)；8.74(d，1)；8.54(d，1)；8.37(d，1)；7.94(d，1)；5.01(dd，1)；4.15-3.75(m，4)；3.64-3.58(m，2)。
NH4OAc标准条件。
DAD Rf＝1.57min。
M+H＝379。
中间体56：6，6-二甲基-吗啉-3，4-二羧酸4-叔丁酯
向6，6-二甲基-吗啉-3-羧酸(5.56g，34.9mmol)的二噁烷(58ml)溶液中加入碳酸钾水溶液(1M，58ml)。向所得清亮无色溶液中加入二碳酸二叔丁酯(9.14g，41.9mmol)。在室温下搅拌溶液过夜。利用水(200ml)稀释反应混合物，溶液pH确定为大约为7。将反应混合物注入到分液漏斗中，利用Et2O(2×100ml)萃取，除去过量的二碳酸二叔丁酯。在搅拌条件下，通过加入6N HCl水溶液酸化水层，直至pH达到3。利用Et2O(2×200ml)迅速萃取混合物，合并有机层，在硫酸镁上干燥，过滤并浓缩，得到清亮无色油状物。将该油状物溶解在Et2O(50ml)中，利用己烷(150ml)研磨，浓缩得到白色固体。将该固体产物置于高真空泵中数小时，之后得到8.85g 6，6-二甲基-吗啉-3，4-二羧酸4-叔丁酯(97％收率)。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ12.95(s，1)；4.35(″dd″，1)；3.98-3.83(m，2)；3.48(″dd″，1)；2.81(″dd″，1)；1.39(″dd″，9)；1.15(s，3)；1.08(″dd″，3)。
NH4OAc标准条件。
DAD Rf＝0.98min。
M-H＝258。
中间体57：(S)-5-(6-氯-9H-β-咔啉-8-基氨基甲酰基)-2，2-二甲基-吗啉-4-羧酸叔丁酯
根据方法C的步骤，由6-氯-9H-β-咔啉-8-基胺和6，6-二甲基-吗啉-3，4-二羧酸4-叔丁酯制得所需化合物，收率为87％。
1H-NMR(DMSO-d6，300MHz)δ11.33(s，1)；10.14(s，1)；9.05(s，1)；8.38(d，1)；8.21(d，1)；8.16(d，1)；7.94(s，1)；4.70-4.56(m，1)；4.25-4.14(m，1)；4.07(dd，1)；3.64-3.56(m，1)；3.30-3.14(m，1)；1.41(″dd″，9)；1.21(s，3)；1.15(s，3)。
NH4OAc标准条件。
DAD Rf＝1.84min。
M+H＝459。
手性HPLC：295％ee。
Chiralpak AD柱。
15％v/v EtOH/己烷，含0.1％Et2NH。
中间体58：[(S)-4-((S)-2-氨基-丙基)-6，6-二甲基-吗啉-3-羧酸(6-氯-9H-β-咔啉-8-基)-酰胺三氟乙酸盐
根据与中间体35向他的步骤，由(S)-5-(6-氯-9H-β-咔啉-8-基氨基甲酰基)-2，2-二甲基-吗啉-4-羧酸叔丁酯，并在还原环烷基化反应中利用Boc-丙胺醛，制得所需的化合物，收率为60％。
1H-NMR(300MHz，D2O)：δ1.16(d，3H)，1.25(s，3H)，1.28(s，3H)，2.41(d，1H)，2.59(dd，1H)，2.89(dd，1H)，2.95(d，1H)，3.35-3.50(m，2H)，3.95-4.15(m，2H)，7.59(d，1H)，7.97(d，1H)，8.11(d，1H)，8.30(d，1H)，8.40(d，1H)，8.94(s，1H)。
保留时间(LC法：乙酸铵标准)：1.57min。
MS(M+H+)：416.2。
方法E：利用[(S)-4-((S)-2-氨基-丙基)-6，6-二甲基-吗啉-3-羧酸(6-氯-9H-β-咔啉-8-基)-酰胺三氟乙酸盐的偶合步骤
将待偶合的[(S)-4-((S)-2-氨基-丙基)-6，6-二甲基-吗啉-3-羧酸(6-氯-9H-β-咔啉-8-基)-酰胺三氟乙酸盐(1.0mmol)、TBTU(1.2mmol)、酸(1.25mmol)和Et3N(4-6mmol，碱性pH)加入到乙腈(10ml)中。将所得混合物在环境温度下搅拌4-15小时。然后，将反应混合物分配在EtOAc和10％Na2CO3水溶液中。利用EtOAc进一步萃取分离的水相。利用10％Na2CO3水溶液和盐水顺序地洗涤合并的萃取液，在Na2SO4上干燥，并彻底浓缩。硅胶纯化(2-7％MeOH/CH2Cl2)残留物，得到相应的产物。
实施例39：6，6-二甲基-4-[2-(2，2，2-三氟-乙酰氨基)-丙基]-吗啉-3-羧酸(6-氯-9H-β-咔啉-8-基)-酰胺
将4-(2-氨基-丙基)-6，6-二甲基-吗啉-3-羧酸(6-氯-9H-β-咔啉-8-基)-酰胺(3CF3COOH盐)(1.5g)悬浮在二氯甲烷(80ml)及5当量三乙胺中。加入三氟乙酸酸酐(56μL，2当量)，混合物在室温下搅拌1小时。旋转蒸发除去溶剂。通过硅胶快速色谱纯化(5％甲醇/二氯甲烷，产物Rf 0.3)产物，得到1g。
1H-NMR(300MHz，relative to CDCl3 peak at 7.3ppm)δ10(s，1H)，9.7(d，1H)，8.7(s，1H)，8.6(s，1H)，8.2(d，1H)，7.6(s，2H)，6.6(s，1H)，4.3(m，1H)，3.9(m，1H)，3.8(t，1H)，3.2(m，1H)，2.7-2.9(m，2H)，2.5(m，1H)，2.2(d，1H)，1.4(d，3H)，1.3(s，3H)，1.2(s，3H)。
LCMS(乙酸铵标准法)保留时间＝1.84min。
(M+＝512；M-＝510)。
实施例40：4-((S)-2-乙酰氨基-丙基)-6，6-二甲基吗啉-3-(S)-羧酸(6-氯-9H-b-咔啉-8-基)-酰胺
根据先前实施例的方法，由4-(2-氨基-丙基)-6，6-二甲基吗啉-3-羧酸(6-氯-9H-β-咔啉-8-基)-酰胺(3CF3COOH盐)和乙酸酸酐制得所需化合物。
1H-NMR(300MHz，methyl-d3 alcohol-d)：δ1.15(d，3H)，1.23(s，3H)，1.39(s，3H)，1.98(s，3H)，2.24(d，1H)，2.38(m，1H)，2.68(m，1H)，2.92(d，1H)，3.24(m，1H)，3.98(m，2H)，4.22(m，H)，7.78(d，1H)，7.98(m，2H)，8.27(d，1H)，8.84(s，1H)。
保留时间(LC法：乙酸铵标准)：1.54min。
MS(M+H+)：458。
实施例41：4-((S)-2-甲磺酰基氨基-丙基)-6，6-二甲基-吗啉-3-(S)-羧酸(6-氯-9H-b-咔啉-8-基)-酰胺
根据方法E制得所需化合物。
1H-NMR(300MHz，methyl-d3 alcohol-d)：δ1.28(s，3H)，1.29(d，3H)，1.43(s，3H)，2.28(d，1H)，2.57(m，1H)，2.66(m，1H)，2.98(s，3H)，3.03(d，1H)，3.34(m，1H)，3.66(m，1H)，4.05(m，2H)，7.67(d，1H)，8.10(m，2H)，8.32(d，1H)，8.89(s，1H)。
保留时间(LC法：乙酸铵标准)：1.54min。
MS(M+H+)：494。
实施例42：4-{2-[(-4，6-二甲基-嘧啶-5-羰基)-氨基]-丙基}-6，6-二甲基-吗啉-3-羧酸(6-氯-9H-β-咔啉-8-基)-酰胺
根据方法E的步骤，利用[4-(2-氨基-丙基)-6，6-二甲基-吗啉-3-基甲基]-(6-氯-9H-β-咔啉-8-基)-胺和4，6-二甲基嘧啶-5-羧酸制得所需化合物，收率为51％。
1H-NMR(300MHz，DMSO)：δ11.27(1H，s)10.02(1H，s)，9.0(1H，s)，8.86(1H，s)，8.5(1H，d)，8.3(1H，d)，8.22(2H，m)，7.88(1H，s)，4.1(1H，m)，3.9(2H，m)，2.99(2H，m)，2.36(6H，s)，2.1(2H，m)，1.3(3H，s)，1.24(6H，m)。
保留时间(LC法：乙酸铵标准)：1.50min。
MS(M+H+)：551
实施例43：(S)-6，6-二甲基-4-{(S)-2-[(2-甲基-吡啶-3羰基)氨基]丙基}-吗啉-3-羧酸(6-氯-9H-β-咔啉-8-基)-酰胺
根据方法E的步骤，由(S)-4-((S)-2-氨基-丙基)-6，6-二甲基-吗啉-3-羧酸(6-氯-9H-β-咔啉-8-基)-酰胺三氟乙酸盐和2-甲基-烟酸制得所需化合物，收率为75％。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ1.21(s，3H)，1.22(d，3H)，1.36(s，3H)，2.10(d，1H)，2.42(m，1H)，2.60(m，1H)，2.99(d，1H)，3.20(m，1H)，3.92(m，2H)，4.22(m，1H)，7.22(dd，1H)，7.65(d，1H)，7.90(s，1H)，8.16(d，1H)，8.23(s，1H)，8.31(d，1H)，8.38(d，1H)，8.45(d，1H)，9.02(s，1H)，10.04(s，1H)，11.26(s，1H)。
保留时间(LC法：乙酸铵标准)：2.16min。
MS(M+H+)：535.5。
实施例44：6，6-二甲基-4-{2-[(四氢-吡喃-4-羰基)-氨基]-丙基}-吗啉-3-羧酸(6-氯-9H-b-咔啉-8-基)-酰胺
将4-(2-氨基-丙基)-6，6-二甲基-吗啉-3-羧酸(6-氯-9H-b-咔啉-8-基)-酰胺(3CF3COOH盐酸盐)(300mg)悬浮在二氯甲烷(12ml)及3当量三乙胺中。加入吗啉-4-羰基氯(70mg，1.3当量)，在室温下搅拌过夜。旋转蒸发溶剂。通过在硅胶板上的制备性TLC(10/90甲醇/乙酸乙酯洗脱，产物Rf 0.4)分离出产物，收率83mg。
1H-NMR(300MHz，relative to CD3OD peak at 3.3ppm)δ8.8(s，1H)，8.27(d，1H)，7.9-7.99(m，3H)，3.95-4.15(m，2H)，3.85-3.95(m，2H)，3.5-3.6(m，5H)，3.3-3.45(m，2H)，3.15-3.3(m，2H)，2.85-2.95(d，1H)，2.6-2.72m，1H)，2.3-2.43(m，1H)，2.2-2.28(d，1H)，2.0(s，2H)，1.35-1.45(d，3H)，1.05-1.25(m，6H)。
LCMS(乙酸铵标准法)保留时间＝2.39min。
(M+＝529；M-＝527)。
实施例45：4-{(S)-2-[(1-乙酰基-吡咯烷-2-(S)-羰基)-氨基]-丙基}-6，6-二甲基-吗啉-3-(S)-羧酸(6-氯-9H-b-咔啉-8-基)-酰胺
根据方法E的步骤制得所需化合物。
1H-NMR(300MHz，methyl-d3 alcohol-d)：δ1.21(d，3H)，1.28(s，3H)，1.39(s，3H)，1.95(m，3H)，2.05(s，3H)，2.17(m，1H)，2.28(d，1H)，2.51(m，1H)，2.74(m，1H)，3.05(d，1H)，3.30(m，1H)，3.55(m，1H)，3.61(m，1H)，4.05(m，2H)，4.18(m，1H)，4.34(m 1H)，7.78(d，1H)，8.10(m，2H)，8.33(d，1H)，8.90(s，1H)。
保留时间(LC法：乙酸铵标准)：2.07min。
MS(M+H+)：555。
实施例46：6，6-二甲基-4-{-2-[(5-甲基-异噁唑-3-羰基)-氨基]-丙基}-吗啉-3-羧酸(6-氯-9H-β-咔啉-8-基)-酰胺
根据方法E的步骤，利用[4-(2-氨基-丙基)-6，6-二甲基-吗啉-3-基甲基]-(6-氯-9H-β-咔啉-8-基)-胺和5-甲基异噁唑羰基氯制得所需化合物，收率为61％。
1H-NMR(300MHz，DMSO)：δ11.2(1H，s)，9.98(1H，s)，9.0(1H，s)，8.7(1H，d)，8.6(1H，d)，8.2(2H，m)，7.9(1H，s).6.47(1H，s)，3.87(2H，m)，3.17(2H，m)，2.9(1H，d)，2.7(1H，m)，2.3(4H)，2.1(1H，d)，1.29(3H，s)，1.15(6H，m)。
保留时间(LC法：乙酸铵标准)：1.81min。
MS(M+H+)：526。
实施例47：6，6-二甲基-4-[2-(3-甲基-脲基)-丙基]-吗啉-3-羧酸(6-氯-9H-β-咔啉-8-基)-酰胺
将4-(2-氨基-丙基)-6，6-二甲基-吗啉-3-羧酸(6-氯-9H-β-咔啉-8-基)-酰胺(3HCl盐)(300mg)悬浮在二氯甲烷(10ml)中，同时加入三乙胺(4当量)和异氰酸甲酯(2当量)。在室温下1小时后，旋转蒸发除去溶剂。快速硅胶色谱纯化(5％甲醇/二氯甲烷，产物Rf＝0.3)产物，得到200mg。
1H-NMR(300MHz，relative to CDCl3 peak at 7.3ppm)δ12.3(s，1H)，10.2(s，1H)，8.9(s，1H)，8.6(s，1H)，8.4(d，1H)，7.9(d，1H)，7.8(s，1H)，5.4(s，1H)，5.2(d，1H)，4.2(s，1H)，3.8(m，2H)，3.2(m，1H)，2.6-3(m，7H)，2.3(d，1H)，2.2(t，1H)，1.4(s，3H)，1.2(s，3H)，1.1(d，3H)
LCMS(乙酸铵标准法)保留时间＝1.62min。
(M+＝473；M-＝471)。
实施例49：{(S)-2-[(S)-5-(6-氯-9H-β-咔啉-8-基氨基甲酰基)-2，2-二甲基-吗啉-4-基]-1-甲基-乙基}-氨基甲酸甲酯
在1.5小时内，向(S)-4-((S)-2-氨基-丙基)-6，6-二甲基-吗啉-3-羧酸(6-氯-9H-β-咔啉-8-基)-酰胺盐酸盐(3.45g，6.59mmol)的68ml无水吡啶溶液中加入三份氯甲酸甲酯(9.2ml，27.6mmol，4.2当量)的3M DCM溶液。2小时后，加入10ml水，浓缩混合物至干。将残留物分配在150ml EtOAc和100ml 0.5M K2CO3水溶液。利用50ml EtOAc萃取分离的水相。利用水(2×50ml)和盐水(50ml)顺序地洗涤合并的有机萃取物，在Na2SO4上干燥，并浓缩至干。硅胶纯化(5％MeOH/CH2Cl2)残留物，得到2.48g(粘稠油状物，77％收率)所需产物。
1H-NMR(300MHz，CDCl3)：δ1.15(d，3H)，1.28(s，3H)，1.42(s，3H)，2.33(dd，1H)，2.42(d，1H)，2.78(dd，1H)，2.86(d，1H)，3.32(dd，1H)，3.86(s，3H)，3.92(t，1H)，4.01(dd，1H)，4.18(m，1H)，4.78(d，1H)，7.95(d，1H)，7.97(s，1H)，8.29(s，1H)，8.50(d，1H)，8.98(s，1H)，9.88(s，1H)，10.94(s，1H)。
保留时间(LC法：乙酸铵标准)：1.70min。
MS(M+H+)：474.1
实施例50：4-{2-[(2，4-二甲基-吡啶-3羰基)-氨基]-丙基}-6，6-二甲基-吗啉-3-羧酸(6-氯-9H-β-咔啉-8-基)-酰胺
根据方法E的步骤，由[4-(2-氨基-丙基)-6，6-二甲基-吗啉-3-基甲基]-(6-氯-9H-β-咔啉-8-基)-胺和2，4-二甲基烟酸制得所需化合物，收率为50％。
1H-NMR(300MHz，DMSO)：δ11.27(1H，s)，10(1H，s)，8.9(1H，s)，8.37(2H，d)，8.24(3H，m)，7.8(1H，s)，7.04(1H，d)，3.91(2H，m)，3.1(2H，m)，2.36(4H，m)，2.1(3H，m)，2.05(1H，d)，1.3(3H，s)，1.2(6H，m)。
保留时间(LC法：乙酸铵标准)：1.53min。
MS(M+H+)：550
实施例51：6，6-二甲基-4-{2-[(吡嗪-2-羰基)-氨基]-丙基}-吗啉-3-羧酸(6-氯-9H-β-咔啉-8-基)-酰胺
根据实施例E的步骤，由[4-(2-氨基-丙基)-6，6-二甲基-吗啉-3-基甲基]-(6-氯-9H-β-咔啉-8-基)-胺和2-吡嗪羧酸制得所需化合物，收率为62％。
1H-NMR(300MHz，DMSO)：δ12.9(1H，s)，10.89(1H，s)，9.42(1H，s)，9.0(1H，s)，8.8(1H，d)，8.6(1H，d)，8.4(1H，s)，8.2(1H，m)，4.5(1H，m)，4.1(2H，m)，3.1(1H，m)，2.1(4H，m)，1.23(9H，m)。
保留时间(LC法：乙酸铵标准)：1.69min。
MS(M+)：522.2
实施例52：吡啶-3，4-二羧酸4-({2-[5-(6-氯-9H-β-咔啉-8-基氨基甲酰基)-2，2-二甲基-吗啉-4-基]-1-甲基-乙基}-酰胺)3-甲酰胺
向[4-(2-氨基-丙基)-6，6-二甲基-吗啉-3-基甲基]-(6-氯-9H-β-咔啉-8-基)-胺(100mg，0.132mmol)的0.6ml无水乙腈中加入3，4-吡啶二甲酸酸酐(21mg，0.15mmol)和三乙胺(102ml，0.8mmol)。反应混合物在室温下搅拌1小时。然后减压除去溶剂，将残留物收集在吡啶(0.6ml)中。向所得混合物中加入于THF(0.2ml，0.4mmol)中的2M甲胺溶液和EDCI(40mg，0.21mmol)。搅拌反应混合物4小时，减压除去溶剂，将残留物分配在EtOAc和1M K2CO3水溶液中。利用EtOAc萃取分离的水相两次。利用水和盐水顺序洗涤合并的有机相，在MgSO4上干燥，彻底浓缩。硅胶纯化(10％MeOH-CH2Cl2)残留物，得到标题化合物，为白色固体，收率为36％。
1H-NMR(300MHz，DMSO)：δ9.24(1H，s)，8.17(1H，s)，7.81(2H，m)，7.5(3H，m)，7.3(1H，s)，7.0(1H，s)6.5(1H，d)，3.08(2H，d)，3.35(1H，m)，2.4(3H，m)，1.86(4H，m)，0.5(3H，s)，0.37(6H，m)。
保留时间(LC法：乙酸铵标准)：1.46min。
MS(M+H+)：579
实施例53：6.6-二甲基-4-{(4-甲基-嘧啶-5-羰基)-氨基}-丙基}-吗啉-3-羧酸(6-氯-9H-β-咔啉-8-基)-酰胺
根据方法E的步骤，由[4-(2-氨基-丙基)-6，6-二甲基-吗啉-3-基甲基]-(6-氯-9H-β-咔啉-8-基)-胺和4-甲基-嘧啶-5-羧酸制得所需化合物，收率为55％。
1H-NMR(300MHz，DMSO)：δ11.26(1H，s)，10.04(1H，s)9.04(2H，m)，8.66(1H，d)8.3(2H，m)8.22-8.17(2H，m)，7.9(1H，s)，4.2(1H，m)，3.93(2H，m)，3.2(1H，m)，2.98(2H，m)，2.6(3H，m)，2.1(2H，m)，1.36(3H，s)，1.23(6H，m)。
保留时间(LC法：乙酸铵标准)：1.55min。
MS(M+H+)：537
实施例54：(S)-6，6-二甲基-4-{(S)-2-[(4-甲基-吡啶-3-羰基)-氨基]-丙基}-吗啉-3-羧酸(6-氯-9H-β-咔啉-8-基)-酰胺
根据方法E的步骤，由(S)-4-((S)-2-氨基-丙基)-6，6-二甲基-吗啉-3-羧酸(6-氯-9H-β-咔啉-8-基)-酰胺三氟乙酸盐和4-甲基-烟酸制得所需化合物，收率为79％。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ1.21(s，3H)，1.22(d，3H)，1.36(s，3H)，2.10(d，1H)，2.40(m，1H)，2.62(m，1H)，2.99(d，1H)，3.22(m，1H)，3.94(m，2H)，4.23(m，1H)，7.26(d，1H)，7.90(s，1H)，8.16(d，1H)，8.23(s，1H)，8.34-8.46(m，3H)，9.02(s，1H)，10.04(s，1H)，11.27(s，1H)。
保留时间(LC法：乙酸铵标准)：2.22min。
MS(M+H+)：535.5
实施例47：4-[2-(2-氨基-2-甲基-丙酰基)]-6，6-二甲基-吗啉-3-羧酸(6-氯-9H-β-咔啉-8-基)-酰胺
在室温下，搅拌{2-[5-(6-氯-9H-β-咔啉-8-基氨基甲酰基)-2，2-二甲基-吗啉-4-基]-1-甲基-乙基}-氨基甲酸叔丁酯(70.2mg，0.14mmol)的TFA(2ml)溶液。15分钟后，浓缩反应，利用CH2Cl2(2×5ml)共沸粗产物。在室温下搅拌于MeCN(1ml)中的粗中间体)TBTU(54.0mg，0.17mmol))三乙胺(0.2ml，1.43mmol)和2-叔丁氧基羰基氨基-2-甲基-丙酸(45.0mg，0.22mmol)的混合物18小时。利用H2O(20ml)稀释溶液，将其注入到含EtOAc(50ml)和盐水(50ml)的分液漏斗中。振荡混合物，分层。利用EtOAc(2×50ml)萃取水层。干燥合并的有机层，过滤并浓缩。快速色谱纯化粗产物，得到黄色固体(51.0mg，62％)，NMR和LCMS显示该产物为4-[2-(2-氨基-2-甲基-丙酰基)-6，6-二甲基-吗啉-3-羧酸(6-氯-9H-β-咔啉-8-基)-酰胺。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ12.94(br s，1)；11.36(br s，1)；10.16(s，1)；9.06(s，1)；8.39(d，1)；8.22(d，1)；8.19(d，1)；7.95(s，1)；4.77-4.52(m，1)；4.28-4.13(m，1)；4.13-4.00(m，1)；3.68-3.52(m，1)；3.22-3.12(m，1)；1.44(s，3)；1.41-1.38(m，6)；1.28-1.24(m，2)；1.22(s，3)；1.25(s，3)；1.11-1.07(m，1)。
NH4OAc标准条件。
DAD Rf＝1.31min。
M+H＝501。
实施例55：6，6-二甲基-4-(1，2，3，4-四氢异喹啉-3-基甲基)-吗啉-3-羧酸(6-氯-9H-β-咔啉-8-基)酰胺
根据方法C描述的步骤，利用6，6-二甲基吗啉-3-羧酸和(s)-四氢异喹啉醛制得所需的化合物。
1H-NMR(300MHz，D2O)：δ9.1(1H，s)，8.68(1H，d)，8.52(1H，d)，8.41(1H，d)，7.68(1H，d)，7.27(1H，d)，7.06(1H，m)，6.97(1H，d)，6.84(1H，m)，4.31(2H，m)，4.09(2H，m)，3.68(1H，m)，3.56(1H，t)，3.2(2H，m)，3.06(2H，m)，2.7(2H，m)1，48(3H，s)，1.32(3H，s)
保留时间(LC法：乙酸铵标准)：2.43min。
MS(M+H+)：505
中间体59：6，6-二甲基-吗啉-3-羧酸(6-氯-9H-β-咔啉-8-基)-酰胺，HCl盐
向5-(6-氯-9H-β-咔啉-8-基氨基甲酰基)-2，2-二甲基-吗啉-4-羧酸叔丁酯(10.4g，22.7mmol)的甲醇(41ml)清亮棕色溶液中加入于二噁烷中的HCl(4M，91ml)。反应在室温下搅拌30分钟，此时开始生成浅棕色沉淀。将混合物注入到剧烈搅拌的250mL体积的Et2O中。所得浆状物在室温下搅拌15分钟，然后过滤，得到浅桔黄色固体。将固体置于高真空泵中过夜，之后得到9.71g 6，6-二甲基-吗啉-3-羧酸(6-氯-9H-β-咔啉-8-基)-酰胺(99％收率)。
1H-NMR(DMSO-d6，300MHz)δ13.47(s，1)；11.77(s，1)；9.42(s，1)；8.86(d，1)；8.66(d，1)；8.58(d，1)；8.25(d，1)；4.41-4.37(m，2)；4.05(dd，1)；3.32-3.28(m，1)；3.04-3.00(m，1)；1.34(s，3)；1.30(s，3)。
NH4OAc标准条件。
DAD Rf＝1.48min。
M+H＝359。
实施例56：4-(2-氨基-丁基)-6，6-二甲基-吗啉-3-羧酸(6-氯-9H-β-咔啉-8-基)-酰胺(也是中间体60)
根据方法C的步骤，利用5-(6-氯-9H-β-咔啉-8-基氨基甲酰基)-2，2-二甲基-吗啉-4-羧酸叔丁酯和适当的醛，(1-甲酰基-丙基)-氨基甲酸叔丁酯，得到所需化合物。
1H-NMR(DMSO-d6，300MHz)δ9.06(s，1)；8.37(d，1)；8.19(d，1)；8.15(d，1)；7.85(d，1)；6.75(br s，2)；3.96-3.85(m，2)；3.17-3.13(m，1)；2.89(d，1)；2.78-2.74(m，1)；2.67-2.59(m，1)；2.26-2.20(m，1)；2.14(d，1)；1.58-1.50(m，1)；1.32(s，3)；1.32-1.23(m，1)；1.18(s，3)；0.87(t，3)。
NH4OAc标准条件。
DAD Rf＝1.27min。
M+H＝430。
实施例57：6，6-二甲基-4-{2-[(2-甲基-吡啶-3-羰基)-氨基]-丁基}-吗啉-3-羧酸(6-氯-9H-β-咔啉-8-基)-酰胺，HCl盐
向4-(2-氨基-丁基)-6，6-二甲基-吗啉-3-羧酸(6-氯-9H-β-咔啉-8-基)-酰胺(100mg，0.233mmol)的吡啶(4ml)溶液中加入2-甲基-烟酸(38.4mg，0.280mmol)和EDCI(71.5mg，0.373mmol)。溶液在室温下搅拌过夜，然后利用水(5ml)稀释。将混合物注入到分液漏斗中，进一步利用水(20ml)稀释。利用EtOAc(2×20ml)萃取混合物，利用盐水洗涤合并的有机层。有机层在硫酸镁上干燥，过滤并浓缩，得到黄-棕色油状物，产物通过柱色谱纯化。将所得黄色固体溶解在甲醇(2ml)中，加入于Et2O中的HCl(2M，2ml)。搅拌混合物5分钟，然后浓缩得到103mg 6，6-二甲基-4-{2-[(2-甲基-吡啶-3-羰基)-氨基]-丁基}-吗啉-3-羧酸(6-氯-9H-β-咔啉-8-基)-酰胺(71％收率)。
1H-NMR(DMSO-d6，300MHz)δ13.31(br s，1)；11.41(br s，1)；11.14(br s，1)；9.44(s，1)；8.85(d，1)；8.73-8.64(m，3)；8.52(s，1)；8.32(s，1)；7.72(s，1)；4.64-3.55(m，6)；3.24-3.06(m，1)；2.95-2.81(m，1)；2.71(s，3)；1.89-1.74(m，1)；1.55-1.41(m，1)；1.32(s，3)；1.23(s，3)；0.93(t，3)。
NH4OAc标准条件。
DAD Rf＝1.66min。
M+H＝549。
中间体61：4-(2-氨基-3-甲基-丁基)-6，6-二甲基-吗啉-3-羧酸(6-氯-9H-β-咔啉-8-基)-酰胺
根据方法C的步骤，利用5-(6-氯-9H-β-咔啉-8-基氨基甲酰基)-2，2-二甲基-吗啉-4-羧酸叔丁酯和适当的醛，(1-甲酰基-2-甲基-丙基)-氨基甲酸叔丁酯。
1H-NMR(DMSO-d6，300MHz)δ9.05(s，1)；8.37(d，1)；8.21(d，1)；8.16(dd，1)；7.90(d，1)；6.71(brs，2)；3.93-3.86(m，2)；3.18-3.14(m，1)；2.91(d，1)；2.70-2.65(m，2)；2.21(dd，1)；2.15(d，1)；1.74-1.66(m，1)；1.31(s，3)；1.19(s，3)；0.85(d，3)；0.80(d，3)。
NH4OAc标准条件。
DAD Rf＝1.27min。
M+H＝444。
实施例58：6，6-二甲基-4-{3-甲基-2-[(2-甲基-吡啶-3-羰基)-氨基]-丁基}-吗啉-3-羧酸(6-氯-9H-β-咔啉-8-基)-酰胺
向4-(2-氨基-3-甲基-丁基)-6，6-二甲基-吗啉-3-羧酸(6-氯-9H-β-咔啉-8-基)-酰胺(1.47g，3.31mmol)的吡啶(35ml)溶液中加入2-甲基-烟酸(544mg，3.97mmol)和EDCI(1.02g，5.30mmol)。溶液在室温下搅拌6.5小时，然后利用水(100ml)稀释。将混合物注入到分液漏斗中，进一步利用水(50ml)和EtOAc(150ml)稀释。振荡混合物，分层。利用EtOAc(3×50ml)萃取水层，然后利用盐水洗涤合并的有机层。有机层在硫酸镁上干燥，过滤并浓缩，得到桔黄色半固体残留物，将其进行柱色谱纯化。将所得黄色固体放置在高真空泵中过夜，之后得到1.43g 6，6-二甲基-4-{3-甲基-24(2-甲基-吡啶-3-羰基)-氨基]-丁基}-吗啉-3-羧酸(6-氯-9H-β-咔啉-8-基)-酰胺(77％收率)。
1H-NMR(DMSO-d6，300MHz)δ11.32(s，1)；10.08(s，1)；9.02(s，1)；8.46(dd，1)；8.38(d，1)；8.21-8.14(m，3)；7.97(d，1)；7.64(dd，1)；7.23(dd，1)；4.23-4.14(m，1)；3.99-3.87(m，2)；3.22-3.19(m，1)：3.02(d，1)；2.85(dd，1)；2.52(s，3)；2.30(dd，1)；2.11(d，1)；2.05-1.95(m，1)；1.32(s，3)；1.21(s，3)；0.93(d，3)；0.86(d，3)。
NH4OAc标准条件。
DAD Rf＝1.67min。
M+H＝563。
实施例59：6，6-二甲基-4-{3-甲基-2-(S)-[(四氢-呋喃-3-羰基)-氨基]-丁基}-吗啉-3-(S)-羧酸(6-氯-9H-b-咔啉-8-基)-酰胺
根据方法E的步骤，由中间体61和适当的酸制得所需化合物。
1H-NMR(300MHz，methyl-d3 alcohol-d)：δ0.87(m，6H)，1.25(d，3H)，1.37(d，3H)，1.81(m，1H)，2.10-2.47(m，4H)，2.93(m，2H)，3.10(m，1H)，3.26(m，1H)，3.80(m，1H)，3.86-4.07(m，6H)，7.86(d，1H)，8.10(m，2H)，8.32(d，1H)，8.89(s，1H)。
保留时间(LC法：乙酸铵标准)：1.73min。
MS(M+H+)：542。
中间体62：{(S)-2-[(S)-5-(6-氯-4-甲基-9H-β-咔啉-8-基氨基甲酰基)-2，2-二甲基-吗啉-4-基]-1-甲基-乙基}-氨基甲酸叔丁酯
在室温下，搅拌(S)-4-((S)-2-叔丁氧基羰基氨基-丙基)-6，6-二甲基-吗啉-3-羧酸(3.316g，10.5mmol)(通过利用N-(叔丁氧基羰基)-1-丙胺醛还原烷基化(S)-6，6-二甲基-吗啉-3-羧酸制得)的无水吡啶(75ml)溶液。加入6-氯-4-甲基-9H-β-咔啉-8-基胺(1.869g，8.09mmol)，接着加入EDCI(2.894g，15.1mmol)。在氩气气氛下，于室温下搅拌反应14-18小时。部分浓缩反应，利用H2O(20ml)稀释，将其转移至分液漏斗中。利用盐水(50ml)稀释混合物，利用EtOAc(3×100ml)萃取。利用盐水洗涤合并的有机层，干燥，过滤并浓缩，得到黑色残留物。柱色谱纯化(0-8％MeOH/CH2Cl2)，得到{(S)-2-[(S)-5-(6-氯-4-甲基-9H-β-咔啉-8-基氨基甲酰基)-2，2-二甲基-吗啉-4-基]-1-甲基-乙基}-氨基甲酸叔丁酯，为亮棕褐色固体(2.688g)。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ11.25(s，1)9.94(s，1)8.88(s，1)8.18(s，1)8.02(s，1)7.92(s，1)6.73(d，1)3.95-3.85(m，2)3.66(br s，1)3.16-3.08(m，1)2.88(d，1)2.76(s，3)2.51-2.40(m，1)2.23(dd，1)1.99(d，1)1.34(br s，12)1.17(s，3)1.08(d，3)。
NH4OAc标准条件。
ELSD Rf＝2.07min。
M+H＝530。
实施例60：(S)-6，6-二甲基-4-{(S)-2-[(2-甲基-吡啶-3-羰基)-氨基]-丙基}-吗啉-3-羧酸(6-氯-4-甲基-9H-β-咔啉-8-基)酰胺
在室温下，搅拌{(S)-2-[(S)-5-(6-氯-4-甲基-9H-β-咔啉-8-基氨基甲酰基)-2，2-二甲基-吗啉-4-基]-1-甲基-乙基}-氨基甲酸叔丁酯(2.688g，5.08mmol)的EtOH(60ml)溶液。加入浓HCl(10ml)，反应在氩气下于室温搅拌14小时。浓缩反应得到黄色固体(2.84g)。将固体溶解在无水吡啶(40ml)中，在氩气下于室温搅拌。加入三乙胺(2.20ml，15.7mmol)和EDCI(1.39g，7.28mmol)。反应混合物在室温下搅拌10分钟，加入2-甲基-烟酸(0.868g，6.33mmol)。反应混合物在室温下搅拌14-18小时，利用H2O(40ml)稀释。将反应混合物注入到含H2O(40ml)、盐水(40ml)和EtOAc(40ml)的分液漏斗中。振荡混合物，分层。利用EtOAc(2×40ml)萃取水层，利用盐水洗涤合并的有机层。干燥有机层，过滤并浓缩。将所得残留物溶解在EtOAc(10-20ml)中，滴加到4∶1己烷/Et2O搅拌溶液(300ml)中。过滤收集生成的沉淀，空气干燥得到(S)-6，6-二甲基-4-{(S)-2-[(2-甲基-吡啶-3-羰基)-氨基]-丙基}-吗啉-3-羧酸(6-氯-4-甲基-9H-β-咔啉-8-基)-酰胺，为棕褐色固体(3.151g)。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ11.28(s，1)9.98(s，1)8.81(s，1)8.45-8.39(m，1)8.26(d，1)8.13(s，1)7.97(s，1)7.89(s，1)7.64-7.56(m，1)7.24-7.12(m，1)4.25-4.10(m，1)3.91-3.82(m，2)3.20-3.10(m，1)2.94(d，1)2.71(s，3)2.61-2.49(m，1)2.37(s，3)2.06-2.02(m，2)1.30(s，3)1.16(d，3)1.15(s，3)。
NH4OAc标准条件。
ELSD Rf＝1.57min。
M+H＝549。
中间体63：3，5-二氟-4-三丁基锡烷基-吡啶
在氮气(N2)气氛下，于-78℃，通过滴液漏斗将正丁基锂(1.0当量，76mmol，47.6ml，1.6M，于己烷中)加入到二异丙胺(1.05当量，80mmol，11.2ml)的THF(300ml)溶液中。在-78℃下搅拌溶液30分钟，然后通过注射器滴加3，5-二氟吡啶(1.05当量，80mmol，9.2g)的THF(20ml)溶液。可观察到生成浅褐色沉淀。反应在-78℃下搅拌90分钟，然后通过注射器滴加氯化三丁基锡(1.0当量，76mmol，20.7ml)，将所得溶液在2小时内温热至室温。加入水(5ml)，旋转蒸发大约250ml THF。利用二乙醚(350ml)稀释所得物质，利用水(2×200ml)、饱和氯化纳溶液(1×150ml)顺序洗涤，在硫酸镁上干燥，过滤并真空浓缩，得到3，5-二氟-4-三丁基锡烷基-吡啶，为无色油状物(27.5g，88％)。可在不进行进一步纯化的条件下使用粗产物。
保留时间(LC法：乙酸铵标准)：3.35min。
MS(M+H+)：406。
中间体64：4-氯-2-(3，5-二氟-吡啶-4-基)-苯基胺
Stille偶合：利用N2，将粗中间体63(1.1当量，70mmol，27.5g)的二甲基甲酰胺(256ml)溶液和2-碘-4-氯-苯基胺(1.0当量，64mmol，16.2g)进行脱气15分钟。加入二氯二(三苯基膦)钯(II)(0.05当量，3.2mmol，2.2g)和碘化铜(I)(0.1当量，6.4mmol，1.2g)，悬浮液在N2下回流加热15小时。将混合物冷却至室温，通过一小段celite塞过滤，在旋转蒸发器上除去二甲基甲酰胺。将粗产物溶解在乙腈(300ml)中，利用己烷(2×200ml)洗涤，真空浓缩。将产物溶解在乙酸乙酯(400ml)中，利用水(2×200ml)、饱和碳酸氢钠溶液(1×200ml)、饱和氯化钠溶液(200ml)顺序洗涤，在硫酸镁上干燥，过滤并真空浓缩。利用二乙醚(50ml)研磨所得固体，将黑色消去，然后溶解在最小量体积的甲醇中，过滤除去不溶杂质，真空浓缩得到4-氯-2-(3，5-二氟-吡啶-4-基)-苯基胺，为棕褐色固体(12.3g，～80％)，可在不进行进一步纯化条件下用于下一步骤。
1H-NMR(300MHz，dmso-d6)：δ5.28(s，2H)，6.77(d，1H)，7.08(d，1H)，7.19(dd，1H)and8.58(s，2H)。
保留时间(LC法：乙酸铵标准)：1.70min。
MS(M+H+)：未观察到。
中间体65：6-氯-4-氟-9H-β-咔啉
在N2下，于室温，通过滴液漏斗将二(三甲基甲硅烷基)酰胺钠(3.0当量，130mmol，130ml，1.0M，于THF中)加入到粗中间体64(1.0当量，43mmol，10.4g)的THF溶液中。搅拌15小时后，通过小心滴加饱和氯化铵溶液(100ml)，使过量的碱骤冷，在旋转蒸发器上除去大部分THF。利用乙酸乙酯(400ml，然后2×200ml)萃取所得浆状物，再利用饱和碳酸氢钠溶液(300ml)、饱和氯化钠溶液(300ml)顺序洗涤合并的有机物，在硫酸镁上干燥并过滤。加入硅胶，在旋转蒸发器上浓缩浆状物。利用Biotage Flash 75纯化系统(短柱)纯化该物质，利用96∶4二氯甲烷/甲醇洗脱，得到6-氯-4-氟-9H-β-咔啉，为灰白色固体(7.8g，82％)。
1H-NMR(300MHz，dmso-d6)：δ7.71-7.61(m，3H)，8.11(d，1H)and12.16(s，1H)。
保留时间(LC法：乙酸铵标准)：1.70min。
MS(M+H+)：221。
中间体66：6-氯-4-氟-9H-β-咔啉-8-基胺
将硝酸钠(1.5当量，53mmol，4.5g)滴加到中间体65(1.0当量，35mmol，7.8g)的三氟乙酸(200ml)溶液中，所得混合物在70℃下加热3小时。在冷却至室温后，在旋转蒸发器上除去三氟乙酸，得到粗固体，将其悬浮在小量体积的甲醇中，滴加到剧烈搅拌的碳酸氢钠溶液(500ml)的混合物中。搅拌所得浆状物15分钟，然后吸滤收集沉淀固体，利用水(300ml)洗涤，真空干燥得到6-氯-4-氟-8-硝基-9H-β-咔啉(大约9.5g)，该产物可在不进行进一步纯化的条件下用于下一步骤。
保留时间(LC法：乙酸铵标准)：1.79min。
MS(M+H+)：266
将硫酸钯(～0.1当量，1g)加入到6-氯-4-氟-8-硝基-9H-β-咔啉(1.0当量，35mmol，9.3g)和甲酸铵(3.0当量，105mmol，6.6g)的乙醇(175ml)悬浮液中，所得混合物在75℃下加热4小时。在冷却至室温后，通过一小段Celite塞过滤混合物，利用大量的甲醇洗涤，然后真空浓缩滤液，得到浅褐色固体。将固体悬浮在最小量体积的甲醇中，滴加到剧烈搅拌的饱和碳酸氢钠溶液和饱和氯化钠溶液的混合物中。搅拌15分钟后，吸滤收集沉淀固体，利用水(200ml)洗涤，真空干燥，得到6-氯-4-氟-9H-β-咔啉-8-基胺(5.8g，70％，2步)，为浅褐色粉末。
1H-NMR(300MHz，dmso-d6)：δ5.76(s，2H)，6.81(d，1H)，7.29(d，1H)，8.24(d，1H)，8.82(d，1H)，and11.71(s，1H)。
保留时间(LC法：乙酸铵标准)：1.59min。
MS(M+H+)：236。
实施例61：4-(2-乙酰基氨基-丙基)-6，6-二甲基-吗啉-3-羧酸(6-氯-4-氟-9H-b-咔啉-8-基)-酰胺
由中间体66和乙酸酸酐制备所需化合物。
1H-NMR(300MHz，dmso-d6)：δ11.70(s，1H)，10.17(s，1H)，.8.92(s，1H)，.8.34(d，1H)，7.95(s，2H)，7.81(d，1H)，4.05-3.95(m，1H)，3.92-3.83(m，2H)，3.18-3.12(m，1H)，2.87(d，1H)，2.55-2.47(m，1H)，2.40-2.31(m，1H)，2.03(d，1H)，1.78(s，3H)，1.32(s，3H)，1.63(s，3H)and 1.08(d，3H)。
保留时间(LC法：乙酸铵标准)：1.73min。
MS(M+H+)：474。
实施例62：6，6-二甲基-4-{2-[(2-甲基-吡啶-3-羰基)-氨基]-丙基}-吗啉-3-羧酸(6-氯-4-氟-9H-β-咔啉-8-基)-酰胺
根据方法E的步骤，由中间体66和甲基烟酸制得所需化合物。
1H-NMR(300MHz，dmso-d6)：δ11.63(s，1H)，δ.10.10(s，1H)，δ.8.90(s，1H)，δ.8.44(d，1H)，δ.8.34(s，1H)，δ.8.29(d，1H)，7.94(s，2H)，7.65(d，1H)，7.21(dd，1H)，4.25-4.15(m，1H)，3.97-3.88(m，2H)，3.24-3.15(m，1H)，2.99(d，1H)，2.59(t，1H)，2.49(s，3H)，2.40(dd，1H)，2.09(d，1H)，1.35(s，3H)，1.21(d，3H)and1.20(s，3H)Retention Time(LC，method：ammonium acetate standard)：1.67min.MS(M+H+)：553。
保留时间(LC法：乙酸铵标准)：1.67min。
MS(M+H+)：553。
实施例63：[(S)-5-(6-氯-9H-β-咔啉-8-基氨基甲酰基)-2，2-二甲基-吗啉-4-基]-乙酸
向(S)-6，6-二甲基-吗啉-3-羧酸(6-氯-9H-β-咔啉-8-基)-酰胺(2.6g，6.0mmol)的60ml甲醇悬浮液中加入1.7ml三乙胺(2.0当量)、氰基硼氢化钠(575mg，9.1mmol)和乙醛酸(780mg，8.5mmol)。反应混合物在环境温度下搅拌1.5小时。加入水(5ml)，浓缩混合物，得到粘稠黄色浆状物。然后再加入水(30ml)，所得浆状物在环境温度下搅拌10分钟，过滤。利用水洗涤收集的黄色固体，高真空干燥，得到1.80g(71％)所需产物。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ1.17(s，3H)，1.30(s，3H)，2.81(d，1H)，3.34(d，1H)，3.46(d，1H)，3.56(dd，1H)，3.84-3.90(m，2H)，7.92(s，1H)，8.15(d，1H)，8.21(s，1H)，8.36(d，1H)，9.01(s，1H)，10.28(s，1H)，11.40(s，1H)。
保留时间(LC法：乙酸铵标准)：1.26min。
MS(M+H+)：417.1。
方法F：由[(S)-5-(6-氯-9H-β-咔啉-8-基氨基甲酰基)-2，2-二甲基-吗啉-4-基]-乙酸偶合反式酰胺的步骤
将待偶合的[(S)-5-(6-氯-9H-β-咔啉-8-基氨基甲酰基)-2，2-二甲基-吗啉-4-基]-乙酸(1.0mmol)、EDCI(1.6mmol)和胺(1.2mmol)装入圆底烧瓶，悬浮在吡啶(5ml)中。搅拌所得混合物过夜。然后减压除去吡啶，将残留物分配在EtOAc和5％Na2CO3水溶液中。利用EtOAc进一步萃取分离的水相。利用水和盐水顺序洗涤合并的萃取物，在Na2SO4上干燥，彻底浓缩。硅胶纯化残留物，得到所需产物。
实施例64：(S)-6，6-二甲基-4-(2-氧代-2-吡咯烷-1-基-乙基)-吗啉-3-羧酸(6-氯-9H-β-咔啉-8-基)-酰胺
根据方法F的步骤，由[(S)-5-(6-氯-9H-β-咔啉-8-基氨基甲酰基)-2，2-二甲基-吗啉-4-基]-乙酸和吡咯烷制得所需化合物，收率为82％。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ1.21(s，3H)，1.29(s，3H)，1.75-1.92(m，4H)，2.46(d，1H)，2.77(d，1H)，3.35-3.68(m，7H)，3.94(m，2H)，8.08(s，1H)，8.19(d，1H)，8.23(s，1H)，8.41(d，1H)，9.05(s，1H)，10.71(s，1H)，11.51(s，1H)。
保留时间(LC法：乙酸铵标准)：1.75min。
MS(M+H+)：470.3。
实施例65：(S)-6，6-二甲基-4-(2-氧代-2-哌啶-1-基-乙基)-吗啉-3-羧酸(6-氯-9H-β-咔啉-8-基)-酰胺
根据方法F的步骤，由[(S)-5-(6-氯-9H-β-咔啉-8-基氨基甲酰基)-2，2-二甲基-吗啉-4-基]-乙酸和哌啶制得所需化合物，收率为90％。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ1.17(s，3H)，1.29(s，3H)，1.35-1.60(m，6H)，2.25(d，1H)，2.71(d，1H)，3.15(d，1H)，3.26(dd，1H)，3.37(dd，1H)，3.45-3.65(m，2H)，3.65(d，1H)，3.70(m，1H)，3.89(m，2H)7.95(d，1H)，8.15(d，1H)，8.20(d，1H)，8.37(d，1H)，9.01(s，1H)，10.43(s，1H)，11.32(s，1H)。
保留时间(LC法：乙酸铵标准)：1.86min。
MS(M+H+)：484.3。
实施例66：(S)-6，6-二甲基-4-(2-吗啉-4-基-2-氧代-乙基)-吗啉-3-羧酸(6-氯-9H-β-咔啉-8-基)-酰胺
根据方法F的步骤，由[(S)-5-(6-氯-9H-β-咔啉-8-基氨基甲酰基)-2，2-二甲基-吗啉-4-基]-乙酸和吗啉制得所需化合物，收率为86％。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ1.17(s，3H)，1.30(s，3H)，2.19(d，1H)，2.71(d，1H)，3.03(d，1H)，3.16(d，1H)，3.22(dd，1H)，3.45-3.72(m，7H)，3.80-3.98(m，3H)，7.94(d，1H)，8.15(d，1H)，8.21(d，1H)，8.37(d，1H)，9.03(s，1H)，10.35(s，1H)，11.28(s，1H)。
保留时间(LC法：乙酸铵标准)：1.56min。
MS(M+H+)：486.3。
实施例67：(S)-4-{[(2-羟基-乙基)-甲基-氨基甲酰基]-甲基}-6，6-二甲基-吗啉-3-羧酸(6-氯-9H-β-咔啉-8-基)-酰胺
根据方法F的步骤，由[(S)-5-(6-氯-9H-β-咔啉-8-基氨基甲酰基)-2，2-二甲基-吗啉-4-基]-乙酸和2-甲基氨基-乙醇制得所需化合物，收率为55％。
1HNMR(300MHz，DMSO-d6)：δ.1.21(s，3H)，1.30(s，3H)，2.39(m，1H)，2.75(bd，1H)，2.96(s，1.5H)，3.17(s，1.5H)，3.50-3.65(m，2.5H)，3.70-3.85(m，1.5H)，3.93(m，2H)，4.69(m，0.5H)，4.94(m，0.5H)，8.05(d，1H)，8.18-8.25(m，2H)，8.42(d，1H)，9.06(s，1H)，10.68(s，1H)，11.38(s，1H)。
保留时间(LC法：乙酸铵标准)：1.47min。
MS(M+H+)：474。
实施例68：(S)-6，6-二甲基-4-(吡啶-3-基氨基甲酰基甲基)-吗啉-3-羧酸(6-氯-9H-β-咔啉-8-基)-酰胺
根据方法F的步骤，由[(S)-5-(6-氯-9H-β-咔啉-8-基氨基甲酰基)-2，2-二甲基-吗啉-4-基]-乙酸和3-氨基吡啶制得所需化合物。分离该产物，为盐酸盐，收率为55％。
1HNMR(300MHz，D2O)：δ1.34(s，3H)，1.54(s，3H)，2.60(d，1H)，3.4(d，1H)，3.50(d，1H)，3.70(t，1H)，3.81(d，1H)4.23(d，2H)，7.69(d，1H)，7.98(d，1H)，8.01(d，1H)，8.17(d，1H)，8.42(d，1H)，8.48-8.55(m，3H)，9.09(s，1H)，9.30(d，1H)。
保留时间(LC法：乙酸铵标准)：1.56min。
MS(M+H+)：493.2。
实施例69：(S)-6，6-二甲基-4-{[(吡啶-4-基甲基)-氨基甲酰基]-甲基}-吗啉-3-羧酸(6-氯-9H-β-咔啉-8-基)-酰胺
根据方法F的步骤，由[(S)-5-(6-氯-9H-β-咔啉-8-基氨基甲酰基)-2，2-二甲基-吗啉-4-基]-乙酸和4-(氨基甲基)吡啶制得所需化合物。分离该产物，为盐酸盐，收率为53％。
1HNMR(300MHz，D2O)：δ1.34(s，3H)，1.49(s，3H)，2.64(d，1H)，3.03(d，1H)，3.48(d，1H)，3.72(t，1H)，3.74(d，1H)，4.15-4.25(m，2H)，7.66(d，1H)，7.88(s，1H)，7.91(s，1H)，8.21(d，1H)，8.44(d，1H)，8.53(d，1H)，8.56(s，1H)，8.58(s，1H)，9.08(s，1H)。
保留时间(LC法：乙酸铵标准)：1.47min。
MS(M+H+)：507.3。
实施例70：4-[2-(4-羟甲基-哌啶-1-基)-2-氧代-乙基-6，6-二甲基-吗啉-3-羧酸(6-氯-9H-β-咔啉-8-基)-酰胺
将[5-(6-氯-9H-β-咔啉-8-基氨基甲酰基)-2，2-二甲基-吗啉-4-基]-乙酸(200mg，0.48mmol)和哌啶-4-基-甲醇(111mg，0.96mmol)溶解在吡啶(4ml)中。在室温下，搅拌所得黄色溶液10分钟，然后一次加入EDC(184mg，0.96mmol)。允许搅拌反应混合物过夜(16h)。加入水(4ml)，减压浓缩混合物。将所得残留物分配在乙酸乙酯(50ml)和1M碳酸钾水溶液中。利用乙酸乙酯(3×50ml)反萃取水层，利用水和盐水洗涤合并的萃取物，在硫酸钠上干燥，过滤并浓缩。硅胶色谱纯化(二氯甲烷和甲醇梯度洗脱)粗残留物，得到纯4-[2-(4-羟甲基-哌啶-1-基)-2-氧代-乙基]-6，6-二甲基-吗啉-3-羧酸(6-氯-9H-β-咔啉-8-基)-酰胺，为黄色泡沫(152mg，62％)。通过将2当量浓HCl加入到游离碱的乙醇溶液中，可制得二-HCl盐。浓缩，接着乙醚研磨，得到盐，为可自由流动的黄色粉末。
1H-NMR(freebase，300MHz，CDCl3)δ：11.03(d，1H)，10.51(d，1H)，8.97-8.80(m，1H)，8.47-8.27(m，2H)，7.94-7.76(m，2H)，4.84(d，1H)，4.16-3.77(m，3H)，3.68-3.26(m，5H)，3.08(ddd，1H)，2.89-2.64(m，2H)，2.50-2.37(m，2H)，1.98-1.70(m，3H)，1.38(s，3H)，1.25(s，3H)，1.19-0.97(m，1)。
MS(NH4OAc标准条件，ES+)e/z＝514(M+H)+
DAD Rf＝1.51min
实施例71：4-[2-(4-羟基-哌啶-1-基)-2-氧代-乙基]-6，6-二甲基-吗啉-3-羧酸(6-氯-9H-β-咔啉-8-基)-酰胺
根据方法F的步骤，由[5-(6-氯-9H-β-咔啉-8-基氨基甲酰基)-2，2-二甲基-吗啉-4-基]-乙酸和4-羟基哌啶制得所需化合物，收率为31％。
1H-NMR(300MHz，D2O)：δ8.85(1H，s)，8.19(2H，s)，7.82(1H，s)，7.44(1H，s)，4.15(2H，m)，3.9-3.75(4H，m)，3.6(2H，m)，3.56(2H，m)，3.12(1H，m)，2.9(3H，m)，2.8(1H，m)，1.7(2H，m)1.34(3H，s)，1.19(3H，s)
保留时间(LC法：乙酸铵标准)：1.5min
MS(M+H+)：501
实施例72：4-二乙基氨基甲酰基甲基-6，6-二甲基-吗啉-3-羧酸(6-氯-9H-β-咔啉-8-基)-酰胺
根据方法F的步骤，由[5-(6-氯-9H-β-咔啉-8-基氨基甲酰基)-2，2-二甲基-吗啉-4-基]-乙酸和二乙胺制得所需化合物，收率为60％。
1H-NMR(300MHz，D2O)：δ8.87(1H，s)，8.26(2H，m)，7.8(1H，s)，7.52(1H，s)，4.1(3H，m)，3.8(2H，m)，3.22(2H，m)，3.0(1H，d)，2.7(1H，d)，1.3(3H，s)，1.19(3H，s)，0.09(6H，m)。
保留时间(LC法：乙酸铵标准)：1.96min
MS(M+H+)：472
实施例73：6，6-二甲基-4-[-2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-氧代-乙基]-吗啉-3-羧酸(6-氯-9H-β-咔啉-8-基)-酰胺
根据方法F的步骤，由[5-(6-氯-9H-β-咔啉-8-基氨基甲酰基)-2，2-二甲基-吗啉-4-基]-乙酸和1-甲基哌嗪制得所需化合物，收率为12％。
1H-NMR(DMSO)δ11.28(1H，s)，10.35(1H，s)，9.01(1H，s)，8.37(1H，s)，8.21-8.15(2H，m)，7.9(1H，s)，3.89(2H，m)，3.7(5H，m)，3.1(2H，m)，2.85(2H，m)，2.49(3H，s)，2.4(3H，m)，1.2(3H，s)，1.16(3H，s)
保留时间(LC法：乙酸铵标准)：1.34min。
MS(M+H+)：500
实施例74：4-[2-(2，6-二甲基-吗啉-4-基)-2-氧代-乙基]-6，6-二甲基-吗啉-3-羧酸(6-氯-9H-b-咔啉-8-基)-酰胺
根据方法F的步骤，由[5-(6-氯-9H-β-咔啉-8-基氨基甲酰基)-2，2-二甲基-吗啉-4-基]-乙酸和2，6-二甲基吗啉制得所需化合物。色谱纯化得到所需产物，收率为70-80％。
1H-NMR(300MHz，CDCl3)：δ9.31(s，1H)，8.75(d，1H)，8.55(d，1H)，8.37(d，1H)，8.14(m，1H)，4.73(m，2H)，4.96(m，1H)，4.37(m，2H)，3.69(m，2H)，3.57(m，4H)，2.82(t，1H)，2.47(t，1H)，1.50(d，3H)，1.42(d，3H)，1.18(m，6H)
保留时间(LC法：甲酸标准)：1.14min(二级管排列)。
MS(M+H+)：514，(M-H+)：512
实施例75：1-{2-[5-(6-氯-9H-β-咔啉-8-基氨基甲酰基)-2，2-二甲基-吗啉-4-基]-乙酰基}-哌啶-4-羧酸甲酯
将[5-(6-氯-9H-β-咔啉-8-基氨基甲酰基)-2，2-二甲基-吗啉-4-基]-乙酸(200mg，0.48mmol)和异哌啶甲酸甲酯(137mg，130uL，0.96mmol)溶解在吡啶(4ml)中，在室温下搅拌10分钟。加入EDC，允许反应混合物在室温下搅拌过夜(16h)。加入另外的异哌啶甲酸甲酯(137uL，0.96mmol)，再搅拌混合物24小时。加入水(4ml)，浓缩混合物。将粗残留物分配在乙酸乙酯(75ml)和1M碳酸钾水溶液(50ml)中。利用另外的乙酸乙酯(75+50ml)反萃取水相。利用水和盐水洗涤合并的萃取物，在硫酸钠上干燥，过滤，浓缩并进行硅胶色谱纯化(二氯甲烷/甲醇梯度洗脱)，得到游离碱，为黄色泡沫(150mg，57％)。通过将2当量浓HCl加入到游离碱的乙醇溶液中，可制得二-HCl盐。浓缩，接着乙醚研磨，得到盐，为可自由流动的黄色粉末。
1H-NMR(freebase，300MHz，CDCl3)δ11.04(d，1H)，10.48(d，1H)，8.95(s，1H)，8.48-8.31(m，2H)，7.96-7.79(m，2H)，4.48(dd，1H)，4.13-3.92(m，2H)，3.88-2.97(m，9H)，2.84-2.35(m，3H)，2.09-1.90(m，2H)，1.85-1.52(m，2H)，1.38(s，3H)，1.23(s，3H)。
MS(NH4OAc标准条件，ES+)e/z＝542(M+H)+
DAD Rf＝1.72min
实施例76：(S)-4-[2-(3，3-二甲基-吗啉-4-基)-2-氧代-乙基-6，6-二甲基-吗啉-3-羧酸(6-氯-9H-β-咔啉-8-基)-酰胺-二-盐酸盐
将2，2-二甲基吗啉(3.0g，26.1mmol)(根据Cottle，D.L.，et al.J.Org.Chem.1946，11，286-291描述的步骤制得)溶解在二氯甲烷(60ml)中。加入三乙胺(3.6ml，2.66g，26.1mmol)，反应冷却至-10℃。滴加溴乙酰氯(2.2ml，4.08g，26.1mmol)，将溶液慢慢温热至室温。反应真空浓缩至干，再溶解在乙酸乙酯中，使其通过硅胶垫。哦洗脱液，得到黄色油状物(3.45g，56％)，直接送入下一步骤。
保留时间(LC法：乙酸铵标准)：1.20min。
MS(M+H+)：237。
将中间体59(60mg，0.14mmol)悬浮在二氯甲烷(3ml)中。加入1M碳酸钾溶液(0.5ml)。分离有机层，在MgSO4上干燥并浓缩至干。将游离碱溶解在DMF(1ml)中，在室温下搅拌。将2-溴-1-(3，3-二甲基-吗啉-4-基)-乙酮(30mg，0.13mmol)溶解在DMF(1ml)中，并滴加。反应在室温下搅拌3小时，真空浓缩至干。快速阻色谱纯化(93∶7二氯甲烷∶甲醇)，得到黄色油状物，将其溶解在4N HCl/二噁烷(2ml)中。真空浓缩得到标题化合物，为黄色固体(22mg，29％)。
1HNMR(300MHz，MeOH-d4)：δ1.35(s，3H)，1.41(s，3H)，1.43(s，6H)，2.98(m，1H)，3.45(m，4H)，3.56(m，1H)，3.76(m，3H)，4.30(m，4H)，8.04(s，1H)，8.39(s，1H)，8.52(d，1H)，8.73(d，1H)，9.24(s，1H)
保留时间(LC法：乙酸铵标准)：1.16min。
MS(M+H+)：514
实施例77：4-[(反式-4-羟基-环己基氨基甲酰基)-甲基-6，6-二甲基-吗啉-3-羧酸(6-氯-9H-β-咔啉-8-基)-酰胺
将[5-(6-氯-9H-β-咔啉-8-基氨基甲酰基)-2，2-二甲基-吗啉-4-基]-乙酸(200mg，0.48mmol)、反式-4-氨基环己醇盐酸盐(145mg，0.96mmol)和二异丙基乙胺(124mg，167uL，0.96mmol)溶解在吡啶(4ml)中，在室温下搅拌10分钟。加入EDC(184mg)，反应在室温下搅拌过夜(16h)。加入水(2ml)，减压浓缩所得混合物。利用50ml 1M碳酸钾溶液稀释所得残留物，利用乙酸乙酯(75+2×50ml)萃取。利用水和盐水洗涤合并的萃取物，过滤并浓缩。硅胶色谱纯化(甲醇/二氯甲烷梯度洗脱)粗残留物，得到纯4-[(反式-4-羟基-环己基氨基甲酰基)-甲基]-6，6-二甲基-吗啉-3-羧酸(6-氯-9H-β-咔啉-8-基)-酰胺(148mg，59％)，为黄色泡沫。通过将2当量浓HCl加入到游离碱的乙醇溶液中，可制得二-HCl盐。浓缩，接着乙醚研磨，得到盐，为可自由流动的黄色粉末。
1H-NMR(freebase，300MHz，CDCl3)δ11.71(br s，1H)，10.21(s，1H)，9.06(s，1H)，8.45-8.27(m，2H)，8.08-7.84(m，2H)，6.36(br s，1H)，4.13-3.81(m，3H)，3.72-3.56(m，1H)，3.51-3.37(m，2H)，3.03(d，1H)，2.79-2.26(m，5H)，2.16-1.94(m，4H)，1.54-1.30(m，5H)，1.22(s，3H)。
MS(NH4OAc标准条件，ES+)e/z＝514(M+H)+
DAD Rf＝1.39min
实施例78：(S)-4-[2-((2R，5R)-2，5-二甲基-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙基]-6，6-二甲基-吗啉-3-羧酸(6-氯-9H-β-咔啉-8-基)-酰胺-二-盐酸盐
将(2R，5R)-2，5-二甲基-吡咯烷盐酸盐(270mg，2.0mmol)(利用Masamune，S.，et al.J.Org.Chem.1989，54，1756描述的步骤制得)溶解在二氯甲烷(3ml)中，冷却至0℃。加入三乙胺(405mg，0.56ml，4.0mmol)。将氯乙酰氯(226mg，0.16ml，2.0mmol)溶解在二氯甲烷(1ml)中，并滴加。将混合物温热至室温，再搅拌30分钟。利用二氯甲烷(5ml)稀释反应，利用1N HCl和盐水萃取，然后在MgSO4上干燥。浓缩有机层，得到棕色油状物(242mg，82％)。
保留时间(LC法：乙酸铵标准)：1.24min。
MS(M+H+)：176.5。该产物可在不进行进一步纯化下用于下一步。
将中间体59(495mg，1.15mmol)溶解在乙腈(8ml)和水(2ml)的混合物中。加入碳酸钾(477mg，3.45mmol)，将反应温热至40℃。将2-氯-1-((2R，5R)-2，5-二甲基-吡咯烷-1-基)-乙酮(242mg，1.38mmol)(如上制备)溶解在乙腈(1ml)中，并滴加。反应温热至80℃，搅拌过夜。反应冷却至40℃。将碘化钠(207mg，1.38mmol)溶解在丙酮(1ml)中，一次加入。反应在40℃下搅拌过夜。真空浓缩反应，利用乙酸乙酯(40ml)稀释。利用水、盐水萃取有机层两次，在MgSO4上干燥。过滤有机层，真空浓缩得到桔黄色泡沫。快速柱色谱纯化(95∶5二氯甲烷∶甲醇)，得到黄色固体，将其溶解在4N HCl/二噁烷(1ml)中，浓缩至干。利用乙醚研磨，得到标题化合物，为黄色固体(18mg，3％)。
1H-NMR(300MHz，MeOH-d4)：δ1.23(dd，6H)，1.38(s，3H)，1.48(s，3H)，1.65(m，2H)，2.23(m，2H)，3.18(m，1H)，3.50(m，1H)，3.66(m，1H)，4.18(m，2H)，4.35(m，4H)，8.15(s，1H)，8.42(s，1H)，8.55(d，1H)，8.78(d，1H)，9.29(s，1H)。
保留时间(LC法：乙酸铵标准)：2.02min。
MS(M+H+)：498。
实施例79：4-{2-[4-(1-羟基-1-甲基-乙基)-哌啶-1-基]-2-氧代-乙基}-6，6-二甲基-吗啉-3-羧酸(6-氯-9H-b-咔啉-8-基)-酰胺
在N2下，于0℃下搅拌1-{2-[5-(6-氯-9H-b-咔啉-8-基氨基甲酰基)-2，2-二甲基-吗啉-4-基]-乙酰基}-哌啶-4-羧酸甲酯(62mg，0.11mmol)的无水乙醚和甲苯(1ml∶1ml)混合物的溶液。向该溶液中慢慢加入溴化甲基镁(3.0M，于乙醚中，306μl，0.917mmol)。反应混合物在室温下搅拌过夜，然后通过加入碳酸氢钠水溶液骤冷。所得混合物进一步利用水(10ml)和乙酸乙酯(30ml)稀释。除去水层，利用乙酸乙酯(30×2ml)萃取。合并有机层，利用盐水洗涤，在硫酸镁上干燥，过滤并浓缩得到黄色固体(85mg)。通过HPLC纯化残留物，得到纯产物(13mg，20％)。
1H-NMR(300MHz，HCDCl3)：δ10.94(d，1H)，10.47(d，1H)，8.94(s，1H)，8.41(d，1H)，8.32(d，1H)，7.89-7.81(m，2H)，4.91(d，1H)，4.04-3.91(m，2H)；3.64-3.57(m，1H)，3.43(s，1H)，3.37-3.31(m，1H)，3.15-2.90(m，1H)，2.77-2.58(m，2H)，2.47-2.41(m，1H)，2.00-1.86(m，2H)，1.53-1.03(m，17H)。
NH4OAc标准条件。
DAD Rf＝1.85min
M+H＝542
实施例80：4-[2-(3，3-二甲基-4-氧代-哌啶-1-基)-2-氧代-乙基-6，6-二甲基-吗啉-3-羧酸(6-氯-9H-β-咔啉-8-基)-酰胺
将4-氧代-哌啶-1-羧酸叔丁酯(5g，25mmol)溶解在四氢呋喃(100ml)中，将所得溶液冷却至0℃。将氢化钠(60％，于矿物油中，2.10g，53mmol)一次加入到冷却溶液中，允许将所得混浊混合物搅拌10分钟。接着加入甲基碘，允许在数小时内将混合物温热至室温。继续搅拌过夜(12h)。减压浓缩亮桔黄色混合物。将残留物分配在乙醚和水中。利用另外的乙醚反萃取水相。利用水和盐水洗涤合并的萃取物，在硫酸钠上干燥，过滤并浓缩得到浅黄色固体。利用4％乙酸乙酯的己烷溶液(50ml)研磨该固体，得到3，3-二甲基-4-氧代-哌啶-1-羧酸叔丁酯，为膏状有色固体(1.8g，32％)。
1H-NMR(CDCl3，300MHz)δ3.73(t，2H)，3.43(br s，2H)，2.49(t，2H)，1.49(s，9H)，1.13(s，6H)。
将制得的3，3-二甲基-4-氧代-哌啶-1-羧酸叔丁酯(450mg，1.97mmol)溶解在二氯甲烷(10ml)中。加入三氟乙酸(305uL)，所得溶液在室温下搅拌2小时。加入另外的三氟乙酸(300uL)，反应在室温下搅拌3天。浓缩浅黄色溶液，得到油状残留物，利用乙醚研磨。吸滤收集固体，真空干燥，分离出3，3-二甲基-哌啶-4-酮，为三氟乙酸盐(381mg，80％)。
1H-NMR(d6-DMSO，300MHz)δ3.44-3.33(m，4H)，2.63-2.57(m，2H)，1.11(s，6H)。
将[5-(6-氯-9H-β-咔啉-8-基氨基甲酰基)-2，2-二甲基-吗啉-4-基]-乙酸(100mg，0.24mmol)、3，3-二甲基-哌啶-4-酮三氟乙酸盐(116mg，0.48mmol)和二异丙基乙胺(62mg，85μL)溶解在吡啶(3ml)中，搅拌10分钟。加入EDC(92mg，0.48mmol)，混合物在室温下搅拌4天。加入水(3ml)，浓缩骤冷的反应。将残留物分配在乙酸乙酯(50ml)与1M碳酸钠水溶液(50ml)之间。利用另外的乙酸乙酯(50ml)萃取有机相，合并萃取物。利用水和盐水洗涤萃取物，在硫酸钠上干燥，过滤并减压浓缩。硅胶色谱纯化(氯仿、乙酸乙酯、甲醇梯度洗脱)所得残留物，得到4-[2-(3，3-二甲基-4-氧代-哌啶-1-基)-2-氧代-乙基]-6，6-二甲基-吗啉-3-羧酸(6-氯-9H-β-咔啉-8-基)-酰胺，为黄色泡沫(91mg，73％)。通过将2当量浓HCl加入到游离碱的乙醇溶液中，可制得-HCl盐。浓缩，接着乙醚研磨，得到盐，为可自由流动的黄色粉末。
1H-NMR(CDCl3，300MHz)δ10.67(s，1H)，10.37(d，1H)，8.93(s，1H)，8.41(d，1H)，8.15(dd，1H)，7.82(d，1H)，7.71(d，1H)，4.07-3.92(m，3H)，3.83-3.89(m，6H)，2.79-2.68(m，1H)，2.62-2.40(m，3H)，1.41-1.36(m，3H)，1.27-1.22(m，3H)，1.18-1.13(m，3H)，1.07-0.99(m，3H)。
MS(NH4OAc标准条件，ES+)e/z＝526(M+H)+
DAD Rf＝1.79min
实施例81：6，6-二甲基-4-(2-氧代-2-吡咯烷-1-基-乙基)-吗啉-3-羧酸(6-氯-4-甲基-9H-b-咔啉-8-基)-酰胺
根据方法C、E和F的步骤，有6-氯-4-甲基-9H-β-咔啉-8-基胺(中间体54)和吡咯烷制得所需化合物。
1H-NMR(300MHz，MeOD-d4)δ9.17(s，1)8.39(s，1)8.26(d，1)8.17(d，1)4.74-4.52(m，3)4.47-4.30(m，1)3.80-3.52(m，3)3.48-3.34(m，4)3.01(s，3)1.76-1.55(m，4)1.50(s，3)1.43(s，3)。
NH4OAc标准条件ELSD Rf＝2.01min。
M+H＝498
生物学试验
本发明化合物是有效的IκB激酶(IKK)抑制剂，因此可用于治疗由该激酶活性引起或加重的疾病。本发明式I化合物的体外和体内IκB激酶抑制剂活性可通过各种本领域公知的方法测定。本发明化合物展示的IκB激酶有效亲合力可以以IC50值(单位：nM)测定，IC50是提供IκB激酶50％抑制所需要的化合物浓度(单位：nM)。
下列是用于评价和选择调节IKK的化合物的测定实施例。
测定IκB激酶酶抑制
用于检测和测量侯选药物制剂对IκB激酶的抑制活性可使用横跨IκB Ser32和Ser36的多肽(SwissProt Accession No.P25963，Swiss Institute of Bioinformatics，geneva，Switzerland)和检测磷酸化产物的试剂，如仅与磷酸化形式多肽结合的特定抗体，可以是单克隆或多克隆(例如可市购的抗-二氧磷基-丝氨酸32IκB抗体)。在通过抗-二氧磷基-丝氨酸32IκB抗体检测磷酸化产物的实施例中，一旦形成抗体-二氧磷基-多肽复合物，该复合物可通过多种分析方法检测(如放射能、发光、荧光、lor光学吸收率)。为了使用DELFIA(分裂增强镧系元素荧光免疫测定)方法(时间分辨荧光计，Perkin Elmer Life and Analytical Sciences Inc.，Boston，MA)，复合物可固定在生物素结合板(如Neutravidin涂层板)上，利用与铕共轭的二级抗体检测，或者固定在抗体结合板(如Protein-A涂层板)上，利用与铕共轭的生物素结合蛋白质检测。通过利用对应于基质多肽的合成磷酸肽，活性水平可与标准曲线相关。如何制备适用于进行该测定的物质，详细描述在下文中。
分离IκB激酶复合物
IκB-α激酶复合物根据下述方法制备：利用40ml 50mMHEPES pH 7.5稀释10ml HeLa S3细胞萃取物S100片段(Lee et al.(1997)Cell 88：213-222)。然后，加入40％硫酸铵，在冰上孵育30分钟。将所得沉淀小球再溶解在5ml SEC缓冲液(50mMHEPES pH7.5，1mM DTT，0.5mM EDTA，10mM 2-甘油磷酸)，通过在20,000×g离心过滤15分钟，使其澄清，通过0.22μm滤纸单元过滤。将样品安装在320ml SUPEROSE-6硅胶过滤FPLC柱(Amersham Biosciences AB，Uppsala，Sweden)中，利用SEC缓冲液平衡，在4℃下，以2ml/min速率操作。收集横跨670-kDa分子量标记的片段，用于活化。然后通过在37℃下，利用100nMMEKKlΔ(Lee et al.(1997)Cell 88：213-222)、250μM MgATP、10mM MgCl2、5mM DTT、10mM 2-甘油磷酸、2.5μMMicrocystin-LR孵育45分钟，活化含收集物质的激酶。活化的酶存放在-80℃下，直至再次使用。
测定IκB激酶磷酸转移酶活性
在96孔板的各个孔中，将5μL含有不同浓度化合物的20％DMSO溶液与40μL用分析缓冲溶液(50mM pH＝7.5的HEPES，5mM DTT，10mM MgCl2，10mM 2-甘油磷酸，2μM微胱氨酸-LR，0.1％牛血清蛋白)1∶25稀释的活性酶混合，25℃下预培养30分钟。随后每孔中加入5μL含200μM酶底物(biotin-(CH2)6-DRHDSGLD(phosphoS)MKD-CONH2)和500μMATP的溶液，培养1小时后用50μL含50mM pH＝7.5的HEPES、0.1％牛血清蛋白、100mM EDTA的溶液使反应淬灭。将5μL淬灭后的反应激酶转至装有90μL 2μg/mL逆磷酸IκB S32/S36抗体(Cell Signaling Technologies Beverly，MA，USA)的蛋白质A板(Pierce Biotechnology，Inc.，Rockford，IL，USA)。将样品振荡下培养2小时。用PBS+0.05％Tween20洗三次后，在每孔中加入90μL0.1μg/mL的链球菌卵白素-铕螯合物(Perkin Elmer Life andAnalytical Sciences，Boston，MA，USA)并振荡下培养1小时。用PBS+0.05％Tween20洗三次后，在每孔中加入100μL DELFIA增强剂(Perkin Elmer Life and Analytical Sciences，Boston，MA，USA)。之前的分析显示，铕信号强弱与酶稀释的浓度和时间呈线性，因此，可以用其来测定备选药剂的抑制活性。
本发明的化合物是IKK复合物的活性抑制剂。可以确定它们具有不同程度对IκB激酶的抑制活性。下面的分析步骤中，如体外和基于细胞的分析中，该发明的化合物对IκB激酶抑制的平均IC50值大都在大约10毫摩尔以下，优选在大约1.0毫摩尔以下，更优选大约100纳摩尔以下。同时，相对于IKK-1，这些化合物对IKK-2有选择性。
细胞分析
多发性骨髓瘤(MM)细胞系和得自患者的MM细胞分离
RPMI8226和U266人MM细胞得自American Type CultureCollection(Manassas，VA)。所有得细胞系培养在含有10％胎儿牛血清(FBS，Sigma-Aldrich Co.，St.Louis，MO)、2mM L-谷氨酸、100U/mL青霉素和100μg/mL链霉素(GIBCO牌细胞培养产品得自于Invitrogen Life Technologies，Calsbad，CA)的RPMI-1640中。得自患者的MM细胞则由患者的骨髓(BM)吸出物用ROSETTESEP(B细胞浓缩工具)提纯。MM细胞的纯度用PE-共扼anti-CD138抗体由血细胞计数器(BD Biosciences，Bedford，MA)确定。
骨髓基质细胞培养
骨髓(BM)样本从多发性骨髓瘤(MM)病人获得。由聚蔗糖密度梯度离心分离的单核细胞(MNCs)按文献(Uchiyama et al.，Blood 1993，82：3712-3720)的方法用来建立长期的骨髓培养。细胞收入含有0.25％的胰岛素和0.02％EDTA的Hank缓冲盐溶液(HBSS)，然后清洗，离心收集。
通过DNA-合成速度检测细胞增生
增生按以前文献(Hideshima et al.，Blood 96：2943(2000))中描述的方法测量。MM细胞(3×104个/孔)在介质或该发明中的IKK抑制剂存在条件下，于37℃在96孔板(Corning Life Sciences，Corning，NY)上培养48小时。DNA合成由掺入每个细胞的[3H]-胸腺嘧啶(New England Nuclear division of Perkin Elmer Life andAnalytical Sciences，Boston，MA)测定。在48小时培养过程中的最后8小时给细胞加入[3H]-胸腺嘧啶。所有实验都平行三组。
MTT细胞生存能力分析
MM细胞生长中出现化合物的抑制作用通过检测由代谢活动细胞引起的黄色四唑(3-(4，5-二甲基噻唑基-2)，5-二苯基四唑溴)的减少得到评估(J.Immunol.Methods 174：311-320，1994)。48小时培养的细胞在最后4小时每孔加入10μL 5mg/mL的MTT，随后加入100μL含有0.04N HCl的异丙醇。用分光光度计(Molecular Devices Corp.，Sunnyvale，CA)测定570nm处的吸收峰。
用电泳迁移率变动测定分析NF-κB活化作用
电泳迁移率变动分析(EMSA)在以前文献(Hideshima et al.，Oncogene 2001，20：4519)中已经被使用过。首先MM细胞与本发明的IKK抑制剂(10μM)一起培养90分钟，然后用5ng/mL的TNF-α激活10到20分钟。然后离心使细胞团聚，悬浮于400μL的低渗裂解缓冲液(20mM HEPES，pH＝7.9，10mM KCl，1mMEDTA，0.2％Triton X-200，1mM Na3VO4，5mM NaF，1mM PMSF，5μg/mL亮肽素，5μg/mL抑肽酶)，在冰中放置20分钟。4℃下14000转离心5分钟。然后用100μL高渗裂解缓冲溶液(20mMHEPES，pH＝7.9，400mM NaCl，1mM EDTA，5mM NaF，1mMPMSF，5μg/mL亮肽素，5μg/mL抑肽酶)提取团聚的细胞核，在冰中放置20分钟。4℃下14000转离心5分钟后收集上层清液作为细胞核提取物。双链NF-κB交感低聚核苷酸探针(5’-GGGGACTTTCCC-3’，Santa Cruz Biotechnology Inc.，SantaCruz CA)用[32P]ATP(50μCi at 222TBq/mM；New England Nucleardivision of Perkin Elmer Life and Analytical Sciences，Boston，MA)尾端标记。在总量为10μL的结合缓冲液(10mM Tris-HCl，pH＝7.5，50mM NaCl，1mM MgCl2，0.5mM EDTA，0.5mM DTT，4％甘油溶液(体积比)和0.5μg聚(dI-dC)(Amersham Biosciences AB，Uppsala，Sweden))中，使1ng低聚核苷酸和5μg核蛋白在室温下进行结合反应，持续20分钟。为测定迁移率，在反应物混合前5分钟，也即加入放射性探针之后，加入1μg anti-p65NF-κBAb。样品装于4％的聚丙烯酰胺凝胶上，转至Whatman纸(Whatman International，Maidstone，U.K.)上，用自动放射性成像仪成像。
弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)细胞增生分析
将类ABC(Ly3和Ly10)和类GCB(Ly7和Ly19)DLBCL细胞系(Alizadeh et al(2000)Nature 403：503-511；Davis et al.(2001)J.Exp.Med.194：1861-1874)培养于生长培养基(GM，Iscove’s DMEM+10％FBS)上，每周传代培养两次。在进行增生分析前，细胞置于Iscove’s DMEM基质和0.5％FBS上，不加任何其他营养质放置过夜。在分析当天，对细胞进行计数并用台盼蓝染色法测定存活性。对于Ly3和Ly10细胞，96孔板的每孔中加入5000个，而对于Ly7和Ly19细胞，每孔加入10000个。IKK抑制剂首先溶于DMSO中，然后稀释至GM中，使最终浓度为80μM-0.0μM。每个浓度都平行三组实验。用标准WST-1细胞存活性分析(Roche Applied Science，Indianapolis，IN)确定细胞的存活性。
人体外周血细胞(PBMC)因子释放分析
人体PBMC细胞从普通捐赠人的整个血液中用聚蔗糖密度梯度离心分离法提纯。用PBS清洗之后，PBMC重新悬浮于AIM-V基质中。在96孔板每孔的，加入1μL一系列比例稀释于100％DMSO的该发明的IKK抑制剂，与180μL含4.5×105个在AIM-V基质中的PBMC混合。将上述反应物在37℃下预培养40分钟后，用20μL LPS(20ng/mL)或anti-CD3(0.25μg/mL)和anti-CD28(0.25μg/mL)在37℃下激活细胞5小时。收集上层清液，然后用标准的商业化的ELISA工具测定IL-1β或者TNF-α的释放。
人体软骨细胞基质金属蛋白酶(MMPs)释放分析
人体软骨细胞系SW1353(ATCC，Manassas，VA)培养于含有10％胎儿牛血清(Hyclone，Logan，UT)、2mM L-谷氨酸(GIBCO牌细胞培养产品得自于Invitrogen Life Technologies，Calsbad，CA)和1％Pen/Strep(GIBCO)基质。将细胞植入96孔聚-D-赖氨酸板(BD BIOCOAT，Black/Clear bottom，BDBiosciences，Bedford，MA)。在96孔板的各孔中分别加入1μL一系列比例稀释的IKK抑制剂并混入180μL 4.5×105个软骨细胞。在37℃下预培养1小时后，用20μL IL-1β(10ng/mL，R&D SystemsInc.)在37℃下激活细胞24小时。然后收集上层清液并用商业化的ELISA工具测试基质金属蛋白酶的产量。
人体成纤维样滑膜细胞(HFLS)分析
提取自关节置换手术所得RA滑液组织的HFLS细胞由CellApplications Inc.(San Diego，CA)提供。用商业化的ELISA工具测试该发明的IKK抑制剂阻止上述细胞中IL-6或IL-8通过TNF-或IL-1β-诱导释放方式的能力。细胞培养条件和方法参照Aupperle  等人的论文(Journal of Immunology，163：427-433(1999))。
得自人脐带血的柱状细胞分析
人脐带血得自Cambrex(Walkersville，MD)。柱状细胞的分化和培养方法参照Hsieh等人的论文(J.Exp.Med.，193：123-133(2001))。用商业化的ELISA工具测试该发明的IKK抑制剂阻止IgE-或LPS-诱导TNFα释放的能力。
破骨细胞的分化和功能分析
低温贮藏的人破骨细胞前体得自Cambrex(Walkersville，MD)。细胞分化培养依照厂商提供的说明。参照之前一些文献(参看Khapli，S.M.，Journal of Immunol，171：142-151(2003)；Karsdal，M.A.，J Biol Chem，278：44975-44987(2003)；Takami，M.Journalof Immunol，169：1516-1523(2002))的方法测试该发明的IKK抑制剂阻止分化、骨吸收和胶原质降解的能力。
风湿性关节炎的大鼠模型
该发明中的一些特定化合物被发现在某些风湿性关节炎的大鼠模型实验中具有活性。已经有文献记载了这些测试，包括由Conway等人在《Inhibition of Tumor Necrosis Factor-α(TNF-α)Production and Arthritis in the Rat by GW3333，a Dual Inhibitor ofTNF-Converting  Enzyme and Matrix Metalloproteinases》(J.Pharmacol.Exp.Ther.298(3)，900-908(2001))中发表的标准LPS模型；Barry M.Weichman的《Rat Adjuvant Arthritis：A Modelof Chronic Inflammation》(1989，Alan R.Liss Inc Publisher)中363-380页的用药理学方法描述的参照炎症的大鼠辅助人工关节炎模型；以及DE Trentham和RA Dynesuis-Trentham的《Type IIcollagen Induced Arthritis in the Rat》(1989，Alan R.Liss IncPublisher)中395-413页的用药理学方法描述的参照炎症的大鼠胶原质人工关节炎模型。此外还有A.Bendele，J.McComb，T.Gould，T.McAbee，G.Sennello，E.Chlipala和M.Guy等人在Toxicologic Pathology卷27(1)134-142页发表的《Animal Modelsof Arthritis：Relevance to Human Disease》(1999)。
基于上述提到的大鼠模型的结果，具有分子式II-C的化合物对比于A环为嘧啶环的化合物具有令人惊奇的优越性。同时，在大鼠模型中，具有分子式III-A-a的，特别是具有分子式III-A-aa的，对比于A环为吗啉环的化合物具有令人惊奇的优越性。
虽然我们陈述了一些这个发明的实体应用，很明显，运用这个发明中的化合物和方法，我们的基本例子可以稍做转化来提供其他实体应用。因此，明显这个发明的范围应该由附加的权利要求来定义，而不是已经用例子的形式呈现的实体应用。

Claims (29)

1.式I化合物或其可药用盐，
其中环A选自：
(a)吡啶基或嘧啶基环，该环被(i)-CH2C(O)-G和0-1个R6a或(ii)1-2个R6a取代，以及
(b)吗啉基、哌啶基、哌嗪基、吡咯烷基、吡喃基、四氢呋喃基、环己基、环戊基或硫代吗啉基环，该环被(i)-C(R9)3、-W-G或-G，(ii)0-4个R6b和(iii)0-1个环碳上的氧基或0-2个环硫上的氧基取代；
每个R6a独立地选自C1-6脂族基团、卤素、烷氧基或氨基；
每个R6b独立地选自C1-3脂族基团或-N(R7)2，以及相同或相邻碳原子上的两个R6b与插入的碳原子任意地一起形成含1-2个选自N、O或S的环杂原子的5-6元环；
W为-Q-、-Q-C(O)-、-C(R9)2-C(R9)(R12)-或-C(R9)2-[C(R9)(R12)]2-；
Q为-C(R9)2-或-C(R9)2C(R9)2-；
G为-OH、-NR4R5、-N(R9)CONR4R5、-N(R9)SO2(C1-3脂族基团)、-N(R9)COCF3、-N(R9)CO(C1-6脂族基团)、-N(R9)CO(杂环基)、-N(R9)CO(杂芳基)、-N(R9)CO(芳基)、3-7元杂环基环或5-6元杂芳基，其中G中的每个杂芳基、芳基和杂环基部分任意地被1-3个R10取代；
R1为氢、卤素、C1-3脂族基团、氨基、氰基、(C1-3烷基)1-2氨基、C1-3烷氧基、-CONH2、-NHCOCF3或-CH2NH2；
R2为氢、卤素，C1-3脂族基团、-CF3；
R3为氢、卤素、C1-6脂族基团、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、羟基、氨基、氰基或(C1-6烷基)1-2氨基；
R4为氢、3-7元杂环基或C1-6脂族基团；
R5为氢、C1-6脂族基团或含1-2个选自N、O或S的环杂原子的3-7元杂环，其中R5任意地被卤素、-OR7、-CN、-SR8、-S(O)2R8、-S(O)2N(R7)2、-C(O)R7、-CO2R7、-N(R7)2、-C(O)N(R7)2、-N(R7)C(O)R7、-N(R7)CO2R8或-N(R7)C(O)N(R7)2取代；
每个R7独立地选自氢或C1-4脂族基团，或相同氮原子上的两个R7与氮原子一起形成5-6元杂芳基或杂环基；
每个R8独立地选自C1-4脂族基团；
每个R9独立地选自氢或C1-3脂族基团；
每个R10独立地选自氧代、-R11、-T-R11或-V-T-R11；
每个R11独立地选自C1-6脂族基团、卤素、-S(O)2N(R7)2、-OR7、-CN、-SR8、-S(O)2R8、-C(O)R7、-CO2R7、-N(R7)2、-C(O)N(R7)2、-N(R7)C(O)R7、-N(R7)CO2R7或-N(R7)C(O)N(R7)2；
T为直链或支链C1-4亚烷基链；
V为-O-、-N(R7)-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)-或-CO2-；
以及
R12为氢或氨基酸侧链。
2.根据权利要求1的化合物，其中A为被1-2R6a基团取代的3-吡啶基或5-嘧啶基环。
3.根据权利要求2的化合物，其中该化合物具有结构式II-C，
其中：
Y为N或CH；
R1为氢、卤素、C1-3脂族基团、氨基、氰基、(C1-3烷基)1-2氨基、C1-3烷氧基、-CONH2、-NHCOCF3或-CH2NH2；
R2为氢、卤素、C1-3脂族基团、-CF3；
R3为氢、卤素、C1-6脂族基团、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、羟基、氨基、氰基或(C1-6烷基)1-2氨基；以及
R6a选自C1-6脂族基团或卤素。
4.根据权利要求3的化合物，其中R6a为甲基。
5.根据权利要求4的化合物，其中R1为氢、甲基、氨基或氟；
R2为氢或卤素；以及R3为氢、卤素或C1-4烷氧基。
6.根据权利要求5的化合物，其中Y为CH。
7.根据权利要求5的化合物，其中Y为N。
8.根据权利要求1的化合物，其中环A选自：吗啉基、哌啶基、哌嗪基、吡咯烷基、吡喃基、四氢呋喃基、环己基、环戊基或硫代吗啉基，以及其中环A被下述基团取代：(i)-C(R9)3或-W-G，(ii)0-4个R6b，以及(iii)环碳上的0-1个氧基或环硫上的0-2个氧基。
9.根据权利要求8的化合物，其中环A上的-W-G和-C(R9)3取代基位于与β-咔啉相连位置的邻位。
10.式III-A化合物或其可药用盐，
其中：
环A被0-4个R6b取代；
每个R6b独立地选自C1-3脂族基团或-N(R7)2，以及相同或相邻碳原子上的两个R6b与插入的碳原子任意地一起形成含1-2个选自N、O或S的环杂原子的5-6元环；
W为-Q-、-Q-C(O)-、-C(R9)2-C(R9)(R12)-或-C(R9)2-[C(R9)(R12)]2-；
Q为-C(R9)2-或-C(R9)2C(R9)2-；
G为-OH、-NR4R5、-N(R9)CONR4R5、-N(R9)SO2(C1-3脂族基团)、-N(R9)COCF3、-N(R9)CO(C1-6脂族基团)、-N(R9)CO(杂环基)、-N(R9)CO(杂芳基)、-N(R9)CO(芳基)、3-7元杂环基环或5-6元杂芳基，其中G中的每个杂芳基、芳基和杂环基部分任意地被1-3个R10取代；
R1为氢、卤素、C1-3脂族基团、氨基、氰基、(C1-3烷基)1-2氨基、C1-3烷氧基、-CONH2、-NHCOCF3或-CH2NH2；
R2为氢、卤素，C1-3脂族基团、-CF3；
R3为氢、卤素、C1-6脂族基团、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、羟基、氨基、氰基或(C1-6烷基)1-2氨基；
R4为氢、5-6元杂环基或C1-6脂族基团；
R5为氢、C1-6脂族基团或含1-2个选自N、O或S的环杂原子的5-6元杂环，其中R5任意地被卤素、-OR7、-CN、-SR8、-S(O)2R8、-S(O)2N(R7)2、-C(O)R7、-CO2R7、-N(R7)2、-C(O)N(R7)2、-N(R7)C(O)R7、-N(R7)CO2R8或-N(R7)C(O)N(R7)2取代；
每个R7独立地选自氢或C1-4脂族基团，或相同氮原子上的两个R7与氮原子一起形成5-6元杂芳基或杂环基；
每个R8独立地选自C1-4脂族基团；
每个R9独立地选自氢或C1-3脂族基团；
每个R10独立地选自氧代、-R11、-T-R11或-V-T-R11；
每个R11独立地选自C1-6脂族基团、卤素、-S(O)2N(R7)2、-OR7、-CN、-SR8、-S(O)2R8、-C(O)R7、-CO2R7、-N(R7)2、-C(O)N(R7)2、-N(R7)C(O)R7、-N(R7)CO2R7或-N(R7)C(O)N(R7)2；
T为直链或支链C1-4亚烷基链；
V为-O-、-N(R7)-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)-或-CO2-；
以及
R12为氢或氨基酸侧链。
11.根据权利要求10的化合物，该化合物具有结构式(S)-III-A：
其中n为0-4，以及R1、R2、R3、W、G和R6b如权利要求10定义。
12.根据权利要求11的化合物，其中：
R1为氢、卤素、甲基或氨基；
R2为氢、甲基或卤素；
R3为氢、卤素、烷氧基或(C1-6脂族基团)2氨基；
n为0-2；
R6b为C1-3脂族基团；
W为-Q-、-Q-C(O)-、-C(R9)2-C(R9)(R12)-或-C(R9)2-[C(R9)(R12)]2-；
Q为-C(R9)2-或-C(R9)2C(R9)2-；
G为-NR4R5、-N(R9)C(O)NR4R5、-N(R9)SO2(C1-3脂族基团)、-N(R9)C(O)CF3、-N(R9)CO(C1-6脂族基团)、-N(R9)CO(杂环基)、-N(R9)CO(杂芳基)、-N(R9)CO(芳基)、5-6元杂环基环或5-6元杂芳基，其中G中的每个杂芳基、芳基和杂环基部分任意地被1-3个R10取代；
R4为氢或C1-6脂族基团；
R5为氢或C1-6脂族基团，该基团任意地被卤素、-OR7、-CN、-SR8、-S(O)2R8、-S(O)2N(R7)2、-C(O)R7、-CO2R7、-N(R7)2、-C(O)N(R7)2、-N(R7)C(O)R7、-N(R7)CO2R8或-N(R7)C(O)N(R7)2取代；
每个R7独立地选自氢或C1-4脂族基团，或相同氮原子上的两个R7与氮原子一起形成5-6元杂芳基或杂环基；
每个R8独立地选自C1-4脂族基团；
R9为氢；
每个R10独立地选自氧代、-R11、-T-R11或-V-T-R11；
每个R11独立地选自C1-6脂族基团、卤素、-S(O)2N(R7)2、-OR7、-CN、-SR8、-S(O)2R8、-C(O)R7、-CO2R7、-N(R7)2、-C(O)N(R7)2、-N(R7)C(O)R7、-N(R7)CO2R7或-N(R7)C(O)N(R7)2；
T为直链或支链C1-4亚烷基链；
V为-O-、-N(R7)-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)-或-CO2-；
以及
R12为氢、C1-6脂族基团、取代或未取代苯基或取代或未取代苄基。
13.根据权利要求12的化合物，其中：
R1为氢、甲基、氟或氨基；
R2为氯；
R3为氢或烷氧基；
n为0或2；
R6b为甲基；
W为-Q-、-Q-C(O)-或-C(R9)2-C(R9)(R12)-；
Q为-C(R9)2-或-C(R9)2C(R9)2-；
G为-NR4R5、-N(R9)C(O)NR4R5、-N(R9)C(O)CF3、-N(R9)CO(C1-6脂族基团)、-N(R9)CO(杂环基)、-N(R9)CO(杂芳基)、5-6元杂环基环或5-6元杂芳基，其中G中的每个杂芳基和杂环基部分任意地被1-3个R10取代；
R4为氢或C1-6脂族基团；
R5为氢或C1-6脂族基团；
每个R7独立地选自氢或C1-4脂族基团，或相同氮原子上的两个R7与氮原子一起形成5-6元杂芳基或杂环基；
每个R8独立地选自C1-4脂族基团；
R9为氢；
每个R10独立地选自氧代、-R11、-T-R11或-V-T-R11；
每个R11独立地选自C1-6脂族基团、卤素、-S(O)2N(R7)2、-OR7、-CN、-SR8、-S(O)2R8、-C(O)R7、-CO2R7、-N(R7)2、-C(O)N(R7)2、-N(R7)C(O)R7、-N(R7)CO2R7或-N(R7)C(O)N(R7)2；
T为直链或支链C1-4亚烷基链；
V为-O-、-N(R7)-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)-或-CO2-；
以及
R12为氢、C1-6脂族基团、苯基或苄基。
14.式(S)-III-A′化合物或其可药用盐，
其中：
R1为氢、甲基、氟或氨基；
R2为氯；
R3为氢或烷氧基；
W为-Q-、-Q-C(O)-或-C(R9)2-C(R9)(R12)-；
Q为-C(R9)2-或-C(R9)2C(R9)2-；
G为-NR4R5、-N(R9)C(O)NR4R5、-N(R9)C(O)CF3、-N(R9)CO(C1-6脂族基团)、-N(R9)CO(杂环基)、-N(R9)CO(杂芳基)、5-6元杂环基环或5-6元杂芳基，其中G中的每个杂芳基和杂环基部分任意地被1-3个R10取代；
R4为氢或C1-6脂族基团；
R5为氢或C1-6脂族基团；
每个R7独立地选自氢或C1-4脂族基团，或相同氮原子上的两个R7与氮原子一起形成5-6元杂芳基或杂环基；
每个R8独立地选自C1-4脂族基团；
R9为氢；
每个R10独立地选自氧代、-R11、-T-R11或-V-T-R11；
每个R11独立地选自C1-6脂族基团、卤素、-S(O)2N(R7)2、-OR7、-CN、-SR8、-S(O)2R8、-C(O)R7、-CO2R7、-N(R7)2、-C(O)N(R7)2、-N(R7)C(O)R7、-N(R7)CO2R7或-N(R7)C(O)N(R7)2；
T为直链或支链C1-4亚烷基链；
V为-O-、-N(R7)-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)-或-CO2-；
以及
R12为氢、C1-6脂族基团、苯基或苄基。
15.根据权利要求14的化合物，该化合物具有结构式(S)-III-A-a，
Figure A2004800160170011C1
其中：
R1为氢、卤素、甲基或氨基；
R2为氢、甲基或卤素；
R3为氢、卤素、烷氧基或(C1-6脂族基团)2氨基；
环A被0-2个R6b取代；
R6b为C1-3脂族基团；
Q为-C(R9)2-或-C(R9)2C(R9)2-；
G为-NR4R5或取代或未取代5-6元杂环基；
R4为氢或C1-6脂族基团；
R5为氢或C1-6脂族基团，该基团任意地被卤素、-OR7、-CN、-SR8、-S(O)2R8、-C(O)R7、-CO2R7、-N(R7)2、-C(O)N(R7)2、-N(R7)C(O)R7、-N(R7)CO2R8或-N(R7)C(O)N(R7)2取代；
每个R7独立地选自氢或C1-4脂族基团，或相同氮原子上的两个R7与氮原子一起形成5-6元杂芳基或杂环基；
每个R8独立地选自C1-4脂族基团；以及
每个R9独立地选自C1-3脂族基团。
16.选自下列结构式的化合物，
Figure A2004800160170014C1
Figure A2004800160170018C1
和
Figure A2004800160170020C2
17.一种药物组合物，该药物组合物包含权利要求1化合物和可药用载体。
18.一种药物组合物，该药物组合物包含权利要求16化合物和可药用载体。
19.一种治疗由IKK引起的疾病的方法，该方法包括对需要这类治疗的患者给用治疗有效量的权利要求1化合物。
20.根据权利要求19的方法，其中所述疾病为炎性疾病或免疫相关疾病。
21.根据权利要求19的方法，其中所述疾病选自：风湿性关节炎、哮喘、牛皮癣、鳞皮关节炎、慢性障碍性肺疾病、炎性肠疾病或多发性硬化症。
22.根据权利要求19的方法，其中疾病为癌症。
23.根据权利要求22的方法，其中所述癌症选自：淋巴瘤、多发性骨髓瘤、溶骨骨转移、头部和颈部鳞片状细胞癌、肺癌、前列腺癌或胰腺癌。
24.根据权利要求23的方法，其中所述癌症为淋巴瘤。
25.一种抑制患者IKK的方法，该方法包括对需要这类抑制的患者给用权利要求1的化合物。
26.式3a化合物，
其中：
R13为卤素、OH、OR15或羧酸保护基团；
R15为脂族基团、芳基、杂芳基、芳烷基或杂芳烷基；
R14为氨基保护基团、氢或-W-G；
W为-Q-、-Q-C(O)-、-C(R9)2-C(R9)(R12)-或-C(R9)2-[C(R9)(R12)]2-；
Q为-C(R9)2-或-C(R9)2C(R9)2-；
G为-OH、-NR4R5、-N(R9)CONR4R5、-N(R9)SO2(C1-3脂族基团)、-N(R9)COCF3、-N(R9)CO(C1-6脂族基团)、-N(R9)CO(杂环基)、-N(R9)CO(杂芳基)、-N(R9)CO(芳基)、3-7元杂环基环或5-6元杂芳基，其中G中的每个杂芳基、芳基和杂环基部分任意地被1-3个R10取代；
R4为氢、3-7元杂环基或C1-6脂族基团；
R5为氢、C1-6脂族基团或含1-2个选自N、O或S的环杂原子的3-7元杂环，其中R5任意地被卤素、-OR7、-CN、-SR8、-S(O)2R8、-S(O)2N(R7)2、-C(O)R7、-CO2R7、-N(R7)2、-C(O)N(R7)2、-N(R7)C(O)R7、-N(R7)CO2R8或-N(R7)C(O)N(R7)2取代；
每个R7独立地选自氢或C1-4脂族基团，或相同氮原子上的两个R7与氮原子一起形成5-6元杂芳基或杂环基；
每个R8独立地选自C1-4脂族基团；
每个R9独立地选自氢或C1-3脂族基团；
每个R10独立地选自氧代、-R11、-T-R11或-V-T-R11；
每个R11独立地选自C1-6脂族基团、卤素、-S(O)2N(R7)2、-OR7、-CN、-SR8、-S(O)2R8、-C(O)R7、-CO2R7、-N(R7)2、-C(O)N(R7)2、-N(R7)C(O)R7、-N(R7)CO2R7或-N(R7)C(O)N(R7)2；
T为直链或支链C1-4亚烷基链；
V为-O-、-N(R7)-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)-或-CO2-；
以及
R12为氢或氨基酸侧链。
27.根据权利要求26的化合物，该化合物为(S)-3a。
28.式IV化合物，
其中：
R14为氨基保护基团或氢；
R1为氢、卤素、C1-3脂族基团、氨基、氰基、(C1-3烷基)1-2氨基、C1-3烷氧基、-CONH2、-NHCOCF3或-CH2NH2；
R2为氢、卤素，C1-3脂族基团、-CF3；以及
R3为氢、卤素、C1-6脂族基团、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、羟基、氨基、氰基或(C1-6烷基)1-2氨基。
29.根据权利要求28的化合物，该化合物为(S)-IV。
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WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

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