CN1772020A - 毛冬青冻干粉针剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种毛冬青冻干粉针剂及其制备方法，属于中药制剂发明技术领域。毛冬青冻干粉针剂由毛冬青提取物和冻干支持剂组成；其制备方法包括以下步骤：1)制备毛冬青提取物，其中总皂苷的含量超过80％；2)调节药液pH值，添加冻干支持剂；3)加入针剂用活性炭，除热原；4)药液用微孔滤膜除菌，分装；5)冻干，得到毛冬青冻干粉针剂。本发明的优点在于：可避免药品因高热而分解变质；所得产品质地疏松，加水后能迅速溶解而恢复药液的原有特性；产品含水量低，不易氧化和水解，有利于产品长期贮存；所得产品剂量可控。

Description

毛冬青冻干粉针剂及其制备方法

技术领域

本发明属于中药制剂发明技术领域，具体涉及作为中药制剂的毛冬青冻干粉针剂及其制备方法技术领域。

背景技术

心脑血管疾病是世界上第一大疾病，由于近年来生活环境的改变，目前发病率仍呈上升趋势。该类疾病与中医的胸痹心痛、脑卒中风等概念接近，中医药对治疗该类疾病具有丰富的经验和大量的有效方剂。由于庞大的心脑血管疾病人群亟待得到治疗，因此，目前我国市场上治疗药物品种繁多，据不完全统计，中西药物已达几千余种，但能彻底治愈、副作用小的药物为数不多。

毛冬青(Ilex pubescens Hook.et Arn)为常用中药，临床应用广泛，疗效确切。毛冬青微苦、甘，平；具有活血通脉，清热解毒的作用。临床上用于中风瘫痪、治疗冠心病、心绞痛、血栓、脉管炎、烧烫伤及中心性视网膜炎等，有较好的疗效。实验研究证明，毛冬青总皂苷对缺血性脑中风有较好的治疗效果。但在使用过程中诸多不便：

其一，注射液稳定性差，存效半年至一年即产生药液浑浊现象和乳光现象；

其二，临床中毛冬青注射液的常用量为20～40ml不等，用量偏大，另外很多病症要求减少病人输液量，而用水针无法解决；

其三，水针的储存、运输均存在不便之处，易破损、冻裂。并且注射液的固有缺陷仍然无法克服。

临床急需疗效确切，质量稳定的静脉用毛冬青注射剂型药物。

发明内容

本发明的目的在于提供一种质量稳定、剂量可控，便于操作、运输、储藏，适于大规模生产的毛冬青冻干粉针剂。

本发明的另一个目的在于提供毛冬青冻干粉针剂的制备方法。

为达到上述目的，本发明采用以下技术方案：

1、毛冬青提取物的制备：

1)将毛冬青药材粉碎成粗粉，加水煎煮提取，过滤，合并滤液，浓缩；

2)将上述浓缩液中添加药用乙醇使溶液中乙醇浓度达到20％～30％(W/V)，冷藏放置6小时，过滤，滤除沉淀，浓缩至每1ml相当于5g药材；

3)将上述浓缩液按原药材与树脂3∶1的比例加入到预处理完毕的D101大孔吸附树脂上，预吸附12小时，采用水、30％乙醇和70％乙醇溶液分别洗脱3个BV，收集70％的洗脱部位，浓缩，得到毛冬青提取物；毛冬青提取物中总皂苷的含量超过80％；

2、添加冻干支持剂：

调节药液pH值至4～9，优选6.0～7.4后按照毛冬青提取物与冻干支持剂的重量比为1∶1～20∶1的量加入冻干支持剂，改冻干支持剂为选自甘露醇、木糖醇、山梨醇、葡萄糖、氯化钠、右旋糖酐、蔗糖、乳糖和水解明胶中的一种或几种组合的水溶性支持剂；

3、除热原：

加入0.01～0.5％(W/V)针剂用活性炭，除热原，加入注射用水调整药液浓度，药液用0.22μm微孔滤膜除菌滤过，滤液分装于10ml管制抗生素瓶，每瓶3ml；

4、冻干：

将上述样品置于冷冻干燥机内预冻，先-40℃预冻保存12小时，再升温至-10℃减压干燥10小时，然后升温至0℃减压干燥6小时，最后升温至35℃减压干燥10小时，得到毛冬青冻干粉针剂。

按照上述方法制备获得的毛冬青冻干粉针剂中毛冬青提取物与冻干支持剂的重量比为1∶1～20∶1，其中产品中毛冬青提取物与冻干支持剂的重量比在1∶1～10∶1范围内的效果更好。

本发明产品毛冬青冻干粉针剂在临床上使用方法为：将毛冬青冻干粉针剂溶于5％的葡萄糖或等渗的氯化钠中，静脉注射，可用于中风瘫痪、冠心病、心绞痛、血栓、脉管炎、烧烫伤及中心性视网膜等疾病的治疗。

上述粗粉按照《中华人民共和国药典》(一部)的定义为粗粉是指全部通过标准二号筛，但混有能通过标准四号筛的粉末不超过40％的粉末。

由于采用了上述技术方案获得了毛冬青冻干粉针剂，其相比以往的毛冬青治疗药物来说具有以下优点：可避免药品因高热而分解变质；所得产品质地疏松，加水后能迅速融解而恢复药液的原有特性；产品含水量低，不易氧化和水解，有利于产品长期贮存；所得产品剂量可控。

具体实施方式

以下通过试验例来说明本发明所具有的有益效果。

试验例1抗急性心肌缺血的实验研究

1、材料

1.1药品和试剂

毛冬青冻干粉针剂，解放军第302医院中医药研究所提供，批号050221；垂体后叶素注射液，南京新百药业有限公司，批号031006；硝酸甘油注射液，北京益民药业有限公司，批号20031204；乌拉坦，北京化学试剂公司，批号021208。

1.2动物

Wistar大鼠，200g左右，雌雄各半，军事医学科学院动物中心提供，动物合格证号：SCXK-(军)2002-001。

1.3仪器

心电图机(ECG-6201，日本光电工业株式会社)

2、方法

对大鼠尾静脉注射垂体后叶素(Pit)注射液，构建急性心肌缺血大鼠模型。

将急性心肌缺血大鼠随机分为5组，即生理盐水组、硝酸甘油阳性对照组(5.0mg/kg)、毛冬青冻干粉针小剂量组(2.7g生药/kg)、中剂量组(5.4g生药/kg)、大剂量组(10.8g生药/kg)，每组10只。硝酸甘油组于造模前一分钟，腹腔给药；毛冬青冻干粉针组每天一次灌胃给药，连续7d。末次给药40min后，用30％的乌拉坦5ml/kg腹腔注射麻醉后，仰位固定于鼠台上，用6号针头置于四肢皮下，并与心电图机肢导联II导联相连，各组分别尾静脉注射Pit0.5U/kg，10s内推完，分别记录注射Pit前和注射后5s、10s、15s、20s、30s、60s、120s心电图T波高度，计算给药前后T波变化率。

实验结果表明，生理盐水组大鼠注射Pit后T波即刻明显抬高，15s时达到高峰，即出现第1期心电图的变化；于注射Pit30s后出现T波低平、双相、倒置等第2期心电图变化，这些与文献报道相符；小剂量组与模型组比较无显著性差异(P＞0.05)；中剂量组、大剂量组及硝酸甘油组均能够对抗Pit引起的大鼠第1期和第2期的心电图变化，中剂量组、大剂量组与模型组比较差异显著(P＜0.05)；硝酸甘油组与模型组比较有非常显著差异(P＜0.01)。

3、结果统计采用t检验。

                            表1造模后T波变化率(％)

组别	5s	10s	15s
				生理盐水组硝酸甘油组大剂量组中剂量组小剂量组	14.83±12.156.35±3.65*6.46±3.85*5.46±4.47*8.02±5.65	20.27±6.4711.1±6.01**10.8±9.54*13.75±7.05*19.91±8.96	67.53±5.7515.61±3.67**56.6±13.2*53.55±18.76*64.14±19.28

(续上表)

组别	20s	30s	60s	120s
					生理盐水组硝酸甘油组大剂量组中剂量组小剂量组	64.07±7.7712.94±3.55**51.18±13.46*49.45±18.71*56.77±15.14	8.38±9.666.22±4.5513.71±6.355.09±9.1616.27±20.87	0.41±9.162.01±1.762.76±2.781.53±4.020.28±5.38	-1.18±7.080.99±2.211.49±2.63-0.49±3.15-0.23±4.71

注^**P＜0.01，^*P＜0.05

试验例2对大鼠体内血栓形成时间的影响

1、材料

1.1药品和试剂

毛冬青冻干粉针剂，由解放军第302医院中医药研究所提供，批号050221；阿司匹林肠溶片，北京太洋药业有限公司，批号030402。

1.2动物

Wistar大鼠，200g左右，雌雄各半，军事医学科学院动物中心提供，动物合格证号：SCXK-(军)2002-001。

1.3仪器

BT87-3型实验性体内血栓形成测定仪，包头医学院心血管研究室。

2、方法

将大鼠随机分为5组，即生理盐水组、阿司匹林300mg/kg阳性对照组、毛冬青冻干粉针大剂量组(生药10.8g/kg)、中剂量组(生药5.4g/kg)、小剂量组(生药2.7g/kg)，每组10只。每天1次灌胃给药，连续7d。末次给药40min后，将大鼠用30％的乌拉坦5ml/kg ip麻醉后，切开颈部皮肤，分离出颈总动脉约1.5cm，以2.0mA电流刺激，记录自通电刺激至颈总动脉温度突降时间，作为血栓形成时间，血栓形成时间的长短代表了临床上抗血栓的治疗效果。

3、结果统计采用t检验。

表2对大鼠体内血栓形成时间的影响

组别	血栓形成时间(s)
		生理盐水组阿司匹林组大剂量组中剂量组小剂量组	536±86.44800±84.77**612±73.81*600±83.55542±70.59

注：^**P＜0.01，^*P＜0.05

试验例3对中风症状改善的药理活性研究：

1、材料

1.1药品和试剂

毛冬青冻干粉针剂，自制，批号(050218)；阿司匹林肠溶片，北京太洋药业有限公司，批号030402。

1.2动物

Wistar雄性大鼠20只，体重250～300g。军事医学科学院动物中心提供，动物合格证号SCXK-(军)2002-002。

2、方法

将大鼠随机分为模型组、假手术组、毛冬青冻干粉针大剂量组(10.8g生药/kg)、小剂量组(2.7g生药/kg)，每组5只，分别按上述剂量大腿肌肉注射毛冬青冻干粉针，其余3组给予生理盐水，每日1次，连续10天。参考Koizumi栓线法，结扎模型组、毛冬青冻干粉针大鼠右侧颈总动脉、颈外动脉，将线栓从右侧颈内动脉移行至大脑前动脉近端，阻断大脑中动脉血供，此时可见右侧Horner征(右眼睑下垂，眼球凹陷)，表明模型制备成功，逐层缝合创口。30min后，轻拉线栓退回颈内动脉，再灌注1h后快速断头取脑。假手术组除不插线外，余处理同前，空白组无手术操作。各组取脑后，分别称左右脑半球湿重，置160℃烤箱中烘干，24小时后称干重，按以下公式计算脑组织含水量：脑组织含水量(％)＝(湿重-干重)/湿重×100％。

3、结果

        表3对大鼠缺血再灌注脑组织含水量的影响

组别	大脑左半球含水量	大脑右半球含水量
			假手术组模型组对照组大剂量组小剂量组	80.08±0.7980.51±0.3780.62±0.5580.71±0.3481.68±0.32	80.27±0.7384.69±0.95ΔΔ82.34±0.41**80.07±0.48**81.70±0.98**

注：ΔΔ是与假手术组比较，P＜0.01；**是与模型组比较，P＜0.01。

实验结果表明，模型组缺血侧的脑组织含水量显著高于假手术组，毛冬青冻干粉针小剂量组的脑组织含水量显著高于假手术组，但低于模型组，两者间有显著性差异；毛冬青冻干粉针大剂量组和阿司匹林组的脑组织含水量显著低于模型组，与假手术组无显著性差异。实验结果表明，毛冬青冻干粉针大、小剂量组均可显著降低缺血再灌注损伤脑组织的含水量，减轻缺血侧脑半球水肿程度。

试验例4加速稳定性实验

对市售的毛冬青注射液样品和毛冬青冻干粉针剂按加速稳定性实验法(国家药品监督局《中药新药研究的技术要求》)进行了稳定性比较研究。稳定性试验考察的项目分别为性状、鉴别、pH值、澄明度、水分、含量测定等项，供加速稳定性试验的毛冬青冻干粉针样品由解放军第302医院中医药研究所提供，样品批号分别为毛冬青注射液：050218；毛冬青冻干粉针剂050221。

1、材料与方法

1.1样品批号：050218(市售)、050221(解放军第302医院中医药研究所提供)

1.2方法

1)试验条件：37～40℃，相对湿度75％

2)考察时间：0月、2个月、3个月、6个月

3)试验开始时间：050223与050221的开始时间均为2005年2月23日

4)考察项目：

毛冬青注射液：性状、鉴别、pH值、澄明度、新毛冬青素含量测定；

毛冬青冻干粉针剂：性状、鉴别、pH值、澄明度、水分、新毛冬青素含量测定；

                              表4样品加速稳定性试验报告

样品：毛冬青注射液(批号：050218)

放置时间	0月	2月	3月	6月
					取样日期性状鉴别检查1)pH值2)澄明度3)含量测定(mg/支)	2005.2.23橙黄色澄明液体合格7.5合格45.07	2005.4.19棕黄色，个别出现略微浑浊合格7.3不合格44.91	2005.5.20棕黄色，溶液出现淡黄色絮状沉淀合格7.3不合格44.81	2005.8.20棕色，均出现棕色，絮状沉淀合格7.4不合格44.65

                                 表4样品加速稳定性试验报告

样品：毛冬青冻干粉针(批号：050221)

放置时间	0月	2月	3月	6月
					取样日期性状鉴别检查1)pH值2)澄明度3)水分	2005.2.23浅黄色粉末，易溶于水合格7.2合格3.3％	2005.4.19浅黄色粉末，易溶于水合格7.2合格3.0％	2005.5.20浅黄色粉末，易溶于水合格7.2合格3.1％	2005.8.20浅黄色粉末，易溶于水合格7.2合格3.1％

4)含量测定(mg/支)

45.10

45.14

45.09

45.11

试验结果表明市售的毛冬青注射液在本试验条件下从第2个月取样已开始出现溶液浑浊、颜色加深等不稳定现象，而冻干粉针剂在本试验条件下很稳定。

本发明可避免药品高热而分解变质；所得产品质地疏松，加水后迅速溶解恢复药液的原有特性；含水量低，同时干燥在真空中进行，故不易氧化，有利于产品长期贮存；所得产品剂量可控，外观优良。该毛冬青冻干粉针剂可用于临床治疗治疗中风瘫痪、冠心病、心绞痛、血栓、脉管炎、烧烫伤及中心性视网膜炎等疾病。

以下通过实施例来具体说明毛冬青冻干粉针剂的制备过程，但本实施例并不表示对本发明的任何限制。

实施例1毛冬青冻干粉针剂的制备

1、毛冬青提取物的制备：

1)选取毛冬青药材1000克，粉碎成粗粉，加水煎煮提取2次，每次2小时，过滤，合并滤液，浓缩至每1ml相当于药材1g；

2)将步骤1)中所得浓缩液中加药用乙醇使药液中乙醇浓度达20％(W/V)，冷藏放置6小时，过滤，滤除沉淀，药液浓缩至每1ml相当于5g药材；

将上述浓缩药液按原药材与树脂3∶1的比例加入到预处理完毕的D101大孔吸附树脂上，预吸附12小时，采用水、30％，70％的乙醇溶液分别洗脱3个BV，收集70％的洗脱部位，浓缩，得到毛冬青提取物；毛冬青提取物中总皂苷的含量超过80％；

3)将步骤2)中得到的毛冬青提取物浓缩液加注射用水稀释至每1ml相当于原药材2g，冷藏放置24小时，过滤，滤液浓缩至每1ml相当于原药材5g，得到毛冬青提取物。

2、添加冻干支持剂：从步骤1最终所得浓缩液用20％氢氧化钠溶液调节pH值至pH＝4，添加重量比为5∶1的氯化钠和右旋糖苷混合的冻干支持剂，添加比例重量份数为每1份毛冬青提取物加1份冻干支持剂。

3、将步骤2中添加了冻干支持剂的药液，煮沸加入0.01％(W/V)的针剂用活性炭，继续煮沸5分钟，趁热过滤，加注射用水使每1ml药液相当于原药材2g，用20％氢氧化钠溶液调节pH值至4，药液用0.22μm微孔滤膜除菌滤过后、分装于10ml管制抗生素瓶，每瓶3ml。

4、将步骤3中已分装的样品置于冷冻干燥机内预冻，先-40℃预冻保持12小时，再升温至-10℃减压干燥10小时，然后升温至0℃减压干燥6小时，最后升温至35℃减压干燥10小时，压盖，得到毛冬青冻干粉针剂。

规格：每支500mg。

用量：1～2支/次，供静脉或肌注。

实施例2毛冬青冻干粉针剂的制备

在本实施例中申请人对实施的数据进行了改变，操作步骤与实施例1的步骤完全相同；

将毛冬青提取物制备过程中的步骤2)中的药液中的乙醇浓度调节到25％；在添加冻干支持剂的步骤中，将浓缩液用20％氢氧化钠溶液调节pH值至pH＝6，添加冻干支持剂甘露醇，添加比例重量份数为每5份毛冬青提取物加1份冻干支持剂；在步骤3中将步骤2中添加了冻干支持剂的药液，煮沸加入0.2％(W/V)的针剂用活性炭，继续煮沸5分钟，趁热过滤，加注射用水使每1ml药液相当于原药材2g，用20％氢氧化钠溶液调节pH值至6，药液用0.22μm微孔滤膜除菌滤过后、分装于10ml管制抗生素瓶，每瓶3ml。

实施例3毛冬青冻干粉针剂的制备

在本实施例中申请人对实施的数据进行了改变，操作步骤与实施例1的步骤完全相同；

将毛冬青提取物制备过程中的步骤2)中的药液中的乙醇浓度调节到25％；在添加冻干支持剂的步骤中，将浓缩液用20％氢氧化钠溶液调节pH值至pH＝7，添加冻干支持剂木糖醇，添加比例重量份数为每10份毛冬青提取物加1份冻干支持剂；在步骤3中将步骤2中添加了冻干支持剂的药液，煮沸加入0.3％(W/V)的针剂用活性炭，继续煮沸5分钟，趁热过滤，加注射用水使每1ml药液相当于原药材2g，用20％氢氧化钠溶液调节pH值至7，药液用0.22μm微孔滤膜除菌滤过后、分装于10ml管制抗生素瓶，每瓶3ml。

实施例4毛冬青冻干粉针剂的制备

在本实施例中申请人对实施的数据进行了改变，操作步骤与实施例1的步骤完全相同；

将毛冬青提取物制备过程中的步骤2)中的药液中的乙醇浓度调节到20％；在添加冻干支持剂的步骤中，将浓缩液用20％氢氧化钠溶液调节pH值至pH＝7.4，添加冻干支持剂山梨醇，添加比例重量份数为每15份毛冬青提取物加1份冻干支持剂；在步骤3中将步骤2中添加了冻干支持剂的药液，煮沸加入0.3％(W/V)的针剂用活性炭，继续煮沸5分钟，趁热过滤，加注射用水使每1ml药液相当于原药材2g，用20％氢氧化钠溶液调节pH值至7.4，药液用0.22μm微孔滤膜除菌滤过后、分装于10ml管制抗生素瓶，每瓶3ml。

实施例5毛冬青冻干粉针剂的制备

在本实施例中申请人对实施的数据进行了改变，操作步骤与实施例1的步骤完全相同；

将毛冬青提取物制备过程中的步骤2)中的药液中的乙醇浓度调节到30％；在添加冻干支持剂的步骤中，将浓缩液用20％氢氧化钠溶液调节pH值至pH＝9，添加冻干支持剂葡萄糖，添加比例重量份数为每20份毛冬青提取物加1份冻干支持剂；在步骤3中将步骤2中添加了冻干支持剂的药液，煮沸加入0.5％(W/V)的针剂用活性炭，继续煮沸5分钟，趁热过滤，加注射用水使每1ml药液相当于原药材2g，用20％氢氧化钠溶液调节pH值至9，药液用0.22μm微孔滤膜除菌滤过后、分装于10ml管制抗生素瓶，每瓶3ml。

Claims (9)

1、一种毛冬青冻干粉针剂，它由毛冬青提取物和冻干支持剂组成，其特征在于：

所述毛冬青提取物通过以下方法获得：

1)将毛冬青药材粉碎成粗粉，加水煎煮提取，过滤，合并滤液，浓缩；

2)将上述浓缩液中添加药用乙醇使溶液中乙醇浓度达到20％～30％(W/V)，冷藏放置6小时，过滤，滤除沉淀，浓缩至每1ml相当于5g药材；

3)将上述浓缩液按原药材与树脂3∶1的比例加入到预处理完毕的D101大孔吸附树脂上，预吸附12小时，采用水、30％乙醇和70％乙醇溶液分别洗脱3个BV，收集70％的洗脱部位，浓缩，得到毛冬青提取物；毛冬青提取物中总皂苷的含量超过80％；

所述毛冬青提取物和冻干支持剂的重量比为1∶1～20∶1。

2、根据权利要求1所述的毛冬青冻干粉针剂，其特征在于：所述毛冬青提取物和冻干支持剂的重量比为1∶1～10∶1。

3、根据权利要求1、2中任一权利要求所述的毛冬青冻干粉针剂，其特征在于：所述冻干支持剂为水溶性冻干支持剂。

4、根据权利要求3所述的毛冬青冻干粉针剂，其特征在于：所述水溶性冻干支持剂为甘露醇、木糖醇、山梨醇、葡萄糖、氯化钠、右旋糖酐、蔗糖、乳糖和水解明胶中的一种或几种的组合。

5、权利要求1所述的毛冬青冻干粉针剂的制备方法，它包括以下步骤：

1)制备毛冬青提取物；

2)调节步骤1中的药液pH值至4～9，按照毛冬青提取物与冻干支持剂重量比为1∶1～20∶1的量添加冻干支持剂；

3)加入0.01～0.5％(W/V)针剂用活性炭，除去热原，加入注射用水调整药液浓度，药液用0.22μm微孔滤膜除菌滤过，滤液分装于10ml管制抗生素瓶，每瓶3ml；

4)将上述样品于冷冻干燥机内预冻，-40℃预冻保持12小时，升温至-10℃减压干燥10小时，升温至0℃减压干燥6小时，再升温至35℃减压干燥10小时，即得到毛冬青冻干粉针剂。

6、根据权利要求5所述的毛冬青冻干粉针剂的制备方法，其特征在于：调节药液pH值至6.0～7.4。

7、根据权利要求5所述的毛冬青冻干粉针剂的制备方法，其特征在于：所述的冻干支持剂是按照毛冬青提取物与冻干支持剂重量比为1∶1～10∶1的量进行添加。

8、根据权利要求5所述的毛冬青冻干粉针剂的制备方法，其特征在于：所述的冻干支持剂是水溶性支持剂。

9、根据权利要求5、7、8中任一权利要求所述的毛冬青冻干粉针剂的制备方法，其特征在于：所述的冻干支持剂为甘露醇、木糖醇、山梨醇、葡萄糖、氯化钠、右旋糖酐、蔗糖、乳糖和水解明胶中的一种或几种的组合。