CN1839855A - 人参皂苷f1的医药用途 - Google Patents

Abstract

人参皂苷F₁在制备治疗血管性痴呆和阿尔茨海默病的药物中的应用。

Description

人参皂苷F1的医药用途

技术领域

本发明涉及医药技术领域，确切地说是人参皂苷F₁(ginsenoside F₁)的医药用途。

人参皂苷F₁

分子式：C₃₆H₆₂O₉  分子量：638.87

背景技术

人参(Panax ginseng C.A.Mey.)为五加科植物人参的根，分布于黑龙江、吉林、辽宁和河北北部的深山中。作为常用中草药首载于汉代《神农本草经》，并被列为上品。人参性温、味甘微苦，具有大补元气、固脱生津、益智安神等功效。用治劳伤虚脱，食少，倦怠，反胃吐食，大便滑泄，虚咳喘促，自汗暴脱，惊悸，健忘，眩晕头痛，阳萎，尿频，消渴，妇女崩漏，小儿慢惊，及久虚不复，一切气血津液不足之证。

目前公认人参皂苷是人参的有效部位，其中的Rg₁作为有效成分之一，含量较高，活性强，作用广。但是，天然人参皂苷被肠道吸收的能力极差，难以入血发挥药效作用，从而影响了人参皂苷的新药开发及产业化。

近年研究表明，人和大鼠口服人参皂苷后，在人肠道内代谢途径为Rg₁→Rh₁→原人参三醇(Ppt)，在大鼠肠道内的代谢途径为：Rg₁→Rh₁/F₁(ginsenoside F₁)→原人参三醇(Ppt)。其中F₁为Rh₁的同分异构体【Kanaoks M，Akao T，Kobashi K.Metabolism of ginseng saponins，ginsenoside，by human intestinal flora.Wakan Iyakugaku Zasshi，1994，11：241；HideoH，Jong HS，Satoshi M，et al.Main ginsengsaponin metabolites formed by intestinalbacteria.Planta Med，1996，62：453】。说明Rg₁经肠内菌代谢后，两个中间产物(Rh₁及F₁)被吸收入血产生药理作用。

对于人参单体皂苷的药理作用的研究发现，尽管人参中主要有效成分是人参皂苷，然而各单体的药理作用并不完全一致，有些甚至截然相反，因此单体皂苷的生物活性研究非常重要。

近年国内外多侧重于天然人参皂苷的研究，而对于人参皂苷F₁的药理活性研究则较少，已有文献报道的人参皂苷F₁药理活性有以下几方面：抗癌【张有为，窦德强，陈英杰，等.人参皂苷对人体骨肉瘤细胞U₂OS增殖的影响.中草药，2001，32(3)：232-236；HasegawaHideo，Sung Jong-Hwan，Matsumiya Satoshi，et al.Reversal of daunomycin andvinblastine resistance in multidrug-resistant P388 Leukemia in vitro throughenhanced cytotoxicity by triterpenoids.Planta Med，61(5)，409-1】、抗紫外线引起的细胞凋亡【Lee Enn Hee，Cho Si Young，Kim Su Jong，et al.Ginsenoside F₁protects humanHaCaT keratinocytes from ultraviolet-B-induced apoptosis by maintaining constantlevels of Bcl-2.Journal of Investigative Dermatology，121(3)：607-613】、抗HIV【Hasegawa Hideo，Matsumiya Satoshi，Satoshi Uchiyama Masamori，et al.Inhibitoryeffect of some triterpenoid saponins on glucose transport in tumor cells and itsapplication to in vitro cytotoxic and antiviral activities.Planta Med，60(3)，240-3】、调节绵羊红细胞葡萄糖的转运【Hasegawa Hideo，Matsumiya Satoshi，Murakami Chikgar，et al.Interactions of ginseng extract，ginseng separated fractions，and sometriterpenoid saponins with glucose transporters in sheep erythrocytes.PlantaMed，60(2)，153-7】、诱导细胞与细胞之间通讯的降低【Zhang YW，Dou DQ，Zhang L，etal.Effects of ginsenosides from Panax ginseng on cell-to-cell communication functionmediated by gap junctions.Planta Med.2001 Jul；67(5)：417】。关于人参皂苷F₁在治疗痴呆方面的活性则未见报道。

阿尔茨海默病(Alzheimer’s Disease，简称AD，又称为老年性痴呆)是一种在老年期前后起病的中枢神经系统原发性退行性疾病，主要临床表现为痴呆综合征。本病病程呈进行性，病因迄今未明。血管性痴呆(VD)是由一系列脑血管因素导致脑组织损害所引起的痴呆综合征总称。据世界卫生组织(WHO)统计，在老年人痴呆中，老年性痴呆(SDAT)占50％～60％，多发梗塞性痴呆(MID)占15％，两者兼有占10％。欧美等国家统计资料中，VD占痴呆总数的10％～39％；日本统计老年期痴呆资料中，MID占60％～70％，SDAT占30％，混合型占10％。据近年我国11个城乡的普查，，60岁以上老年人中，VD患病率为324/10万人口、SDAT患病率为238/10万人口、其中VD略高于SDAT。痴呆已被称为世界上当前的“流行病”之一，在发达国家被估计列为第四位最常见的死亡原因。该病不仅给病人带来长期痛苦，严重影响其生活质量，而且给家庭、社会和国家造成沉重负担。因此，对痴呆的防治及提高其水平具有重要的实际意义。

目前血管性痴呆治疗为药物治疗及加强护理。治疗药物临床报道以中药汤剂为主。化药目前尚无具确切作用的药物。且目前尚无批准用于治疗血管性痴呆认知症状的化学药物。可见血管性痴呆临床一线药物缺乏。而老年性痴呆虽有部分化药上市，但其疗效却仍有争议，故治疗痴呆综合征药物的开发将具有重要的临床意义。

发明内容

本发明的目的在于提供了人参皂苷F₁在制备治疗或预防痴呆综合征的药物中的应用。具体为人参皂苷F₁在制备治疗或预防阿尔茨海默病与血管性痴呆的药物中的应用。

人参的促智及抗衰老作用经几千年的临床实践已得到充分证实，从而提示我们对来源于人参的成分人参皂苷F₁是否具有治疗痴呆的作用进行探索，结果表明：人参皂苷F₁能改善痴呆大鼠空间学习记忆障碍，从而为人参皂苷F₁治疗痴呆提供药效学支持。

人参皂苷F₁是一种已知的具有药物活性的物质，因此，可以按常规制剂方法，将其制备成临床适用的任何一种药剂，例如片剂、胶囊剂、颗粒剂等口服固体制剂、口服液体制剂、注射剂等。

在制备上述制剂的过程当中，可以将人参皂苷F₁与任何一种适用于制备成临床药剂的赋型剂混合使用，制备成药物制剂。

通过本发明，人参皂苷F₁可有效用于预防或治疗痴呆综合征，并且副作用小。

由于人参皂苷F₁在制备治疗或预防痴呆综合征的药物中的应用是发明人的首次发现，因此，无论是人参皂苷F₁单独使用为活性成分制成的药剂，还是利用人参皂苷F₁的抗痴呆活性与其他活性成分配合使用制成的药剂，均在本专利的保护范围之内。

本发明通过下列实施方式证明了人参皂苷F₁在治疗或预防痴呆综合征方面的用途，但不仅限于这些实施例。

具体实施方式：

试验例1：人参皂苷F₁对AD模型大鼠学习记忆力的影响

1试验材料

1.1动物：

Sprague Dawley(简称SD)雄性大鼠共80只，清洁2级，体重250～300g。购自海南省人民医院试验动物中心，自由饮水进食，实验前在实验环境中适应2-3d，实验室温度控制在(24±1)℃，相对湿度为40％-80％。

1.2药品、试剂及设备：

人参皂苷F₁：按制备例方法制备。

凝聚态β淀粉样肽1～40片段(A_β1-40)：购自美国Sigma公司。

实验动物脑立体定位仪(SN2型)：为日本成茂公司产品。

水迷宫：中国医学科学院药物研究所研制。

2分组与给药

将SD鼠随机分为8组，每组10只，具体如下：(1)假手术对照组：即海马内注射等量生理盐水；(2)A_β1-40处理模型组；(3)人参皂苷F₁低剂量组(12.5mg/kg，ig)；(4)人参皂苷F₁中剂量组(25mg/kg，ig)；(5)人参皂苷F₁高剂量组(50mg/kg，ig)；(6)人参皂苷F₁低剂量组(5mg/kg，ip)；(7)人参皂苷F₁中剂量组(10mg/kg，ip)；(8)人参皂苷F₁高剂量组(20mg/kg，ip)。

给药方法：各组动物于造模前一周开始腹腔注射或灌胃给药，每天1次，连续3周。迷宫训练期间，于训练前0.5h给药。

3试验方法

3.1A_β1-40诱导大鼠AD样病变模型的制备：

应用凝聚态β淀粉样肽1～40片段(A_β1-40)注入大鼠海马内建立AD样病变的动物模型。具体如下：

SD大鼠经麻醉后于立体定位仪下以A_β1-40行双侧海马内注射，每侧各1μl(预先将A_β1-40溶于无菌生理盐水10μg/μl，用前37℃下孵育1周)。注射部位为：前囟后3.5mm，脑正中线旁开2.0mm，其深度为2.7mm。

3.2观察指标与方法

空间学习记忆力测试：采用Morris水迷宫法。平台设于迷宫东北象限正中，水平面高出平台1.5cm，水温保持在19℃～20℃，大鼠连续训练5d，每天2次，设定最长游动时间为70s，以秒表记时，记录大鼠找到平台所需时间(潜伏期，EL)。

4.结果：

对AD大鼠空间学习记忆力的影响：随训练天数增加，各组大鼠平均EL逐渐缩短。与假手术组比较，模型组大鼠EL明显延长，第4天开始差异显著(P＜0.05)，说明造模成功。与模型组比，灌胃给药各组：人参皂苷F₁₁2.5mg/kg组大鼠于第5天开始EL明显缩短，25mg/kg组则于第4天开始EL明显缩短，50mg/kg组则于第3天即开始EL明显缩短，皆差异显著。

注射给药各组：人参皂苷F₁5mg/kg组大鼠于第4天开始EL明显缩短，10mg/kg组则于第3天开始EL明显缩短，20mg/kg组则于第2天即开始EL明显缩短，皆差异显著；20mg/kg组第5天则有极显著性差异。表明人参皂苷F₁各剂量组无论灌胃还是注射给药均能显著改善A_β1-40诱导的大鼠空间学习记忆障碍，且呈剂量依赖性。详见表1。

              表1人参皂苷F₁对实验性AD模型大鼠空间辨别学习记忆能力的影响

组别	n	潜伏期/s
							1d	2d	3d	4d	5d
		假手术对照组	10	58.68±6.86	47.13±8.79	43.18±11.30						32.56±8.42*	23.50±4.96*
模型组	10						60.18±6.69	57.43±4.83	54.87±9.29	52.18±7.15	51.37±10.67
		人参皂苷F112.5mg/kg，ig组	10	59.98±7.13	56.75±5.34	51.89±6.23						40.23±7.21	30.30±3.67*
人参皂苷F125mg/kg，ig组	10						59.84±8.32	54.86±6.45	50.83±6.65	41.68±6.10*	33.93±7.09*
		人参皂苷F150mg/kg，ig组	10	59.29±8.37	46.22±6.23	38.86±6.01*						32.31±7.56*	26.22±3.76*
人参皂苷F15mg/kg，ip组	10						59.90±7.30	55.76±5.45	50.98±6.12	38.23±7.13*	30.30±3.67*
		人参皂苷F110mg/kg，ip组	10	59.44±8.30	53.68±6.64	39.87±6.06*						33.93±7.09*	24.31±3.89*
人参皂苷F120mg/kg，ip组	10						59.09±8.38	43.54±6.04*	35.96±6.03*	30.14±7.67*	21.34±3.98**

注：与AD模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。

试验例2：人参皂苷F₁对血管性痴呆模型大鼠学习记忆力的影响

1试验材料

1.1动物：

SD雄性大鼠共50只，清洁2级，体重250～300g。购自海南省人民医院试验动物中心，自由饮水进食，实验前在实验环境中适应2-3d，实验室温度控制在(24±1)℃，相对湿度为40％-80％。

1.2药品与试剂：

人参皂苷F₁：按制备例4、5方法制备。

10％水合氯醛溶液：规格：100ml。购自海南省人民医院。

注射用青霉素钠：规格：160万单位。天津药业焦作有限公司生产。

水迷宫：中国医学科学院药物研究所研制。

2分组与给药

将SD大鼠随机分为8组，每组10只，具体如下：(1)假手术对照组：即海马内注射等量生理盐水；(2)A_β1-40处理模型组；(3)人参皂苷F₁低剂量组(5mg/kg，ig)；(4)人参皂苷F₁中剂量组(10mg/kg，ig)；(5)人参皂苷F₁高剂量组(20mg/kg，ig)；(6)人参皂苷F₁低剂量组(2.5mg/kg，ip)；(7)人参皂苷F₁中剂量组(5mg/kg，ip)；(8)人参皂苷F₁高剂量组(10mg/kg，ip)。

给药方法：各组动物于造模前一周开始腹腔注射或灌胃给药，每天1次，连续3周。迷宫训练期间，于训练前0.5h给药。

3试验方法

3.1造模方法

本研究采用永久性结扎双侧颈总动脉(2-VO)法制作慢性脑灌注不足VaD动物模型，大鼠术前12h禁食、4h禁水。用10％水合氯醛(0.35ml/100g)腹腔注射麻醉，必要时补充注射，保证手术期间有自主呼吸。待翻正反射消失后，仰卧固定木制手术台上。颈前部去毛，酒精、碘酒消毒后，沿腹侧颈正中切开，依次钝性分离皮下脂肪、胸骨舌骨肌和胸锁乳头肌，再分别分离暴露左、右侧颈总动脉及气管(注意勿伤及迷走神经)，套以“0”号丝线双重结扎，然后逐层缝合肌肉、皮肤。其中控制麻醉深度、保持体温恒定是造模成功的关键。术后动物送至有通风设备动物房饲养。假手术组动物同法行颈前皮肤切开，分离皮下脂肪、肌肉等组织，分离、暴露但不结扎颈总动脉，逐层缝合切口。术毕给予注射用青霉素钠水溶液适量局部涂敷，放入笼中饲养，每日肌注青霉素钠20万U/只，连用3d(如出现感染者可延长至1周)，防治感染。

3.2观察指标与方法：同试验例1。

4.结果：

对AD大鼠空间学习记忆力的影响：随训练天数增加，各组大鼠平均EL逐渐缩短。与假手术组比较，模型组大鼠EL明显延长，第4天开始差异显著(P＜0.05)，说明造模成功。与模型组比，灌胃给药各组：人参皂苷F₁5mg/kg组大鼠于第5天开始EL明显缩短，10mg/kg组则于第4天开始EL明显缩短，20mg/kg组则于第3天即开始EL明显缩短，皆差异显著。注射给药各组：人参皂苷F₁2.5mg/kg组大鼠于第4天开始EL明显缩短，5mg/kg组则于第3天开始EL明显缩短，10mg/kg组则于第2天即开始EL明显缩短，皆差异显著(P＜0.05)；10mg/kg组第4天开始即有极显著性差异(P＜0.001)。表明人参皂苷F₁各剂量组均能显著改善实验性VD大鼠空间学习记忆障碍，且呈剂量依赖性。详见表2。

                    表2人参皂苷F₁对实验性VD模型大鼠空间辨别学习记忆能力的影响

组别	n	潜伏期/s
							1d	2d	3d	4d	5d
		假手术对照组	10	58.59±6.67	47.24±8.45	43.34±11.30						32.78±8.02*	23.34±4.89*
模型组	10						60.21±6.69	58.46±4.93	53.89±9.28	52.08±7.10	51.38±10.89
		人参皂苷F15mg/kg，ig组	10	59.78±6.45	58.78±7.74	55.55±5.54						50.38±6.08	38.32±7.03*
人参皂苷F110mg/kg，ig组	10						58.89±6.48	59.34±8.01	52.78±6.42	39.67±6.10*	33.58±7.05*
		人参皂苷F120mg/kg，ig组	10	58.18±6.20	57.03±8.13	42.39±6.12*						34.23±6.11*	20.24±3.66*
人参皂苷F12.5mg/kg，ip组	10						58.90±7.56	55.67±5.54	50.89±6.10	38.45±7.03*	30.80±3.45*
		人参皂苷F15mg/kg，ip组	10	59.43±8.12	52.98±6.54	39.87±6.09*						33.93±7.09*	23.39±3.98*
人参皂苷F110mg/kg，ip组	10						57.07±8.38	42.58±6.23*	34.45±6.23*	20.34±3.98**	19.99±3.79**

注：与AD模型组比较，*P＜0.05；P＜0.001。

制备例中所述的人参皂苷Re、人参皂苷Rg₁采用云南植物药业有限公司生产的市售品；柚皮苷酶采用上海宝丰生化有限公司生产的市售品；二甲亚砜采用盘锦兴海制药有限公司生产的市售品；甲酰胺采用淄博市博山华耀试剂厂生产的市售品；羧甲基纤维素钠采用上海邦成化工有限公司生产的市售品。

制备例1人参皂苷F₁的制备

500mg人参皂苷Re、150mg柚皮苷酶溶于50ml磷酸-柠檬酸缓冲液(pH 4.5，离子强度为0.01M，含10％的乙醇)中，于40℃水浴中水解7天；反应液经离心收集沉淀；用10ml水洗涤沉淀，洗涤3次(10ml×3)，洗液与母液合并，浓缩至50ml供再次使用；用10ml乙醇洗涤沉淀，洗涤5次(10ml×5)，合并乙醇液、蒸干、收集残余物得人参皂苷F₁301mg。HPLC法测定人参皂苷F₁含量为63％。

制备例2人参皂苷F₁的制备

500mg人参皂苷Rg₁，150mg柚皮苷酶溶于50ml甘氨酸-HCl缓冲液(pH 4.5，离子强度为0.01M，含10％的二甲亚砜)中，于40℃水浴中水解7天；反应液经离心收集沉淀；用10ml水洗涤沉淀，洗涤3次(10ml×3)，洗液与母液合并，浓缩至50ml供再次使用；用10ml乙醇洗涤沉淀，洗涤5次(10ml×5)，合并乙醇液、蒸干、收集残余物得人参皂苷F₁325mg。HPLC法测定人参皂苷F₁含量为84％。

制备例3人参皂苷F₁的制备

500mg人参皂苷Re和Rg₁混合物，150mg柚皮苷酶溶于50ml为醋酸-醋酸钠缓冲液(pH 4.5，离子强度为0.01M，含10％的甲酰胺)中，于40℃水浴中水解7天；反应液经离心收集沉淀；用10ml水洗涤沉淀，洗涤3次(10ml×3)，洗液与母液合并，浓缩至50ml供再次使用；用10ml乙醇洗涤沉淀，洗涤5次(10ml×5)，合并乙醇液、蒸干、收集残余物得人参皂苷F₁310mg。HPLC法测定人参皂苷F₁含量为69％。

制备例4人参皂苷F₁注射药物的制备

取制备例2的人参皂苷F₁0.1g，加水10ml，加入0.1g吐温80，充分溶解，0.22μm微孔滤膜滤过，分装，121℃灭菌15min，即得。

制备例5动物试验灌胃药物的制备

取制备例1的人参皂苷F₁0.1g，加水10ml，加入1g助悬剂羧甲基纤维素钠，充分混悬，即得。

Claims (2)

1、人参皂苷F₁在制备治疗痴呆综合征的药物中的应用。

2、权利要求1所述的痴呆综合征，具体包括阿尔茨海默病和血管性痴呆。