CN1836684A - 合欢总皂苷及提取方法，以该组合物为基本活性的医药用途及药物制剂 - Google Patents

合欢总皂苷及提取方法，以该组合物为基本活性的医药用途及药物制剂 Download PDF

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Abstract

合欢总皂苷及其提取方法和药用用途，属于中药技术领域。合欢总皂苷是以合欢皮和合欢花原料经水或醇的水溶液提取，经过大孔吸附树脂柱纯化，醇洗脱，浓缩成漫膏状或干粉，醇溶解，回收醇后得到的提取物。用于制备治疗抑郁症、肿瘤、镇静催眠及提高免疫力的药物。本发明的积极效果是得到了合欢的药用活性物质合欢总皂苷及为抗抑郁、抗肿瘤、安眠镇静、提高免疫力等病症的治疗和保健提供了新药。

Description

合欢总皂苷及提取方法，以该组合物 为基本活性的医药用途及药物制剂
技术领域：
本发明属于中药技术领域，具体涉及合欢(Albizzia julibrissin Durazz)花和皮的提取物总皂苷及提取方法，药用用途及药物制剂。
背景技术：
合欢(Albizzia julibrissin Durazz)在植物分类学上属毛莨科植物。合欢含有三萜类化合物，黄酮类化合物，木质素类化合物，生物碱及多糖类成分。我们通过近几年的对合欢的有效成分进行的一些药理研究，发现合欢的提取物具有抗抑郁作用、抗肿瘤作用，安眠作用及镇静等作用。
然而到目前为止尚未见到有将合欢总皂苷制备成药物的信息，发明人经过大量的试验研究证实，合欢总皂苷(包括合欢皮和合欢花中提取)具有明显的抗抑郁作用、抗肿瘤作用，安眠作用及镇静等作用，完成了合欢总皂苷的提取和制备以合欢总皂苷为基本活性成分的药物。
发明内容：
本发明的目的是提供一种合欢总皂苷。
本发明的另一个目的是提供从合欢中提取总皂苷的方法。
本发明的又一个目的是提供合欢总皂苷的药用用途。
本发明的最终目的是提供以合欢总皂苷为基本活性物质的药物。
本发明的合欢总皂苷是以合欢皮和合欢花原料经水或醇的水溶液提取，或者水提碱沉淀提取，水煎液经过大孔吸附树脂柱吸附，再以30-95％浓度的醇洗脱，醇洗脱液所获得的组分。
所获得的组分含合欢皂苷A1、A2、A3、A4、B、C、J1、J2、J3、J4、J5、J6等多种有效成分。提取物中除含有合欢总皂苷外，还可含有在合欢总皂苷分离纯化过程中残留的合欢植物本身的少量黄酮、木质素、肽、氨基酸、多糖，以及微量元素和挥发油。本领域技术人员可以理解到，这些杂质成分基本上不会给本发明药物组合物中合欢总皂苷的药理学活性带来不利影响。
本发明的合欢总皂苷的药用用途有：
合欢总皂苷在制备预防和治疗抑郁症的药物中的应用。
合欢总皂苷在制备预防和治疗肿瘤的药物中的应用。
合欢总皂苷在制备镇静催眠药物中的应用。
合欢总皂苷在制备治疗和预防免疫力低下等症的药物中的应用。
一种治疗抑郁症、肿瘤、镇静催眠的药物组合物，由合欢总皂苷与一种或多种医药上可接受的载体和/或赋形剂相混合组成。
本发明的药物组合物中合欢总皂苷占药物组合物的50％(w/w)以上，并且所说的合欢总皂苷基本上是由三萜皂苷组成的。
本发明药物组合物中合欢总皂苷可占总重量的1％-99％。
本发明药物组合物中合欢总皂苷优选含量为总重量的20％-80％。
可以将合欢总皂苷与一种或多种医药上可接受的载体或赋形剂按适当比例混合，制成适用于临床上使用的不同剂型的药物组合物.例如可将所说的组合物配制成可供静脉内，肌肉内、腹腔内、皮下、脑脊髓腔内等注射给药的注射剂，或者制成适于口服给药的片剂、颗粒剂、滴丸、冲剂、液体制剂、粉末剂。丸剂、胶囊剂和悬浮剂，以及适于局部给药的喷雾剂、气雾剂、霜剂、软膏和栓剂。
为了制备适于胃肠道外途径药的溶液剂，例如可使用蒸馏水、注射用水、等渗氯化钠溶液或葡萄糖溶液，或者低浓度(例如1-100mM)磷酸盐缓冲盐水(PBS)作为载体或赋形剂。可以在这些胃肠道外给药的制剂中加入一种或多种其他辅助成分或添加剂，例如可使用抗坏血酸作为抗氧化剂，使用苯甲酸钠或尼泊金甲酪作为防腐剂，使用二甲基亚砜作为吸收促进剂。
为了制备适于口服给药的片剂、粉末剂，悬浮剂或胶囊剂，可以使用蔗糖、半乳糖、玉米淀粉、明胶、脂质、微晶纤维素、滑石粉等作为载体或赋形剂。在这些适于口服给药的制剂中，还可含有其他适当的添加剂，例如增溶剂、崩解剂、润滑剂、吸收促进剂、分散剂、表面活性剂、矫味剂或着色剂等。
最好将本发明的药物组合物制成各种适于口服绐药的剂型，例如片剂、粉末剂、胶囊剂，或口服液或乳剂.这些口服制剂的单位剂量一般包含30-800mg合欢总皂苷。
本发明药物组合物的另一个优选给药途径是静脉内或肌肉内注射适于这些给药途径的注射液。例如对于某些癌症病人，可将本发明药物组合物的注射液制剂加在等渗葡萄糖溶液或等渗氯化钠溶液中，持续地滴注给药。
本发明药物的服用量：口服20-1000mg/次人，每日3次；注射10-1000mg/次人，每日1次。可根据服用方式，病人的年龄、体重，病情严重程度及其他因素适当变化用量。
本发明的积极效果是得到了合欢的药用活性物质合欢总皂苷及在制备抗抑郁、抗肿瘤、安眠镇静、提高免疫力等药物中的应用，并完成了相应药物的制备。为上述病症的治疗提供了新药。
药效实验例
药理试验1，总皂苷抗抑郁作用。
药物：合欢总皂苷，黄色粉末，经筛选用剂量80-30mg/kg，。
动物：昆明种小白鼠，体重18-22g，雌雄兼用，购自长春市绿园区科新实验动物养殖场。合格证号：吉动质字10--1015。
方法：1.小鼠自主活动实验  小鼠连续灌胃7天，于末次灌胃h后放入XZC-4A小动物自主活动测定仪(山东省医学科学院制造)适应3min后，观察5min内的活动次数。
2.小鼠悬尾实验  小鼠连续灌胃7天，于末次灌胃1h后将小从尼崩2cm处固定于水平面上，使其呈倒挂状态，头部离台面约3cm，四周以板隔离动物视线，记录小鼠在6min内的不动时间。
3.小鼠强迫游泳实验  剔除预实验不合格者，连续灌胃7天。并于末次灌胃后1h，将小鼠放人直径22cm，水深1Ocm的水桶，水温25℃(同预实验条件一致)，适应2min，累计后4min内小鼠的不动时间。实验结果采用SPSS统计软外进行单因素方差分析和秩和检验。
结果见表1。
表1：合欢皂苷对小鼠自主活动的影响(X±s)
    组别与剂量mg/kg  动物数n     5min主活动(s)
对照组 18 144.42±21.38
    Disipraming  20合欢总皂苷   3合欢总皂苷   6合欢总皂苷   18  18181818     130.5±31.97***134.07±30.05**133.07±29.05**131.1±32.05*
表2：合欢总皂苷对小鼠悬尾实验不动时间的影响(X±s)
    组别与剂量mg/kg     动物数n     6min内不动时间(s)
    对照组     18     114.42±41.33
    Disipraming  20合欢总皂苷   3合欢总皂苷   6合欢总皂苷   18     18181818     80.5±41.97*104.07±43.0584.07±33.05*64.07±41.25**
表3合欢总皂苷对小鼠强迫游泳实验不动时间的影响(X±s)
    组别与剂量mg/kg    动物数n    4min内不动时间(s)
    荷瘤对照组    16    84.42±51.33
    Disipraming  20    16    37.5±42.45*
    合欢总皂苷  3合欢总皂苷  6合欢总皂苷  18     161616     44.09±41.55*36.25±41.15*34.21±43.05**
药理试验2，合欢总皂苷抗肿瘤作用。
合欢总皂苷以80、30mg/kg剂量灌胃给药，P388腹水型及S180实体肉瘤显示较明显的抗癌活性，对肝癌腹水型也有一定的抗癌作用。
药物：合欢总皂苷，黄色粉末，经筛选用剂量80 30mg/kg，，用时以生理盐水溶解，吐温-80助溶。
动物：昆明种小白鼠，体重18-22g，雌雄兼用，购自长春市绿园区科新实验动物养殖场。合格证号：吉动质字10-1015。
瘤株：P388腹水型、S180实体肉瘤、肝癌腹水型，均购自吉林省肿瘤研究所。
方法：取接种7-10天的荷瘤动物，脱颈椎处死，在无菌条件下，消毒腹部皮肤，抽取乳白色瘤液，以生理盐水按1∶2比例稀释，然后给正常动物接种，每只0.2ml，腹水型接种于雌性动物腹腔，实体型接种于雄性动物腋窝皮下，接种后次日开始分组给药，观察对腹水型的生命延长率及对实体型的抑瘤率，结果用统计学t检验处理。见下表1。
表1：合欢总皂苷对动物移植性肿瘤P388的影响
  组别与剂量mg/kg     动物数n   存活天数(天； X±SD)
  荷瘤对照组     10   8.12±1.28
  Cyclophosphamide 20合欢总皂苷       80合欢总皂苷       30     101010   18.5±1.67***13.07±2.05**12.1±3.05*
注：*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001以下同略
表2：合欢总皂苷对动物移植性肿瘤S180的影响
  组别与剂量 mg/kg 动物数n   瘤重(g； X±SD)
  荷瘤对照组   10   2.06±0.36
  Cyclophosphamide 20合欢总皂苷  80合欢总皂苷  30   101010   1.66±0.35**1.24±0.41**1.30±0.50**
     表3：合欢总皂苷对动物移植性肿瘤Hep-A-22的影响
  组别与剂量mg/kg    动物数n     存活天数(天； X±SD)
  荷瘤对照组    10     16.52±0.89
  Cyclophosphamide 30合欢总皂苷  80合欢总皂苷  30    101010     25.77+2.6521.60±2.3517.60+2.30
由表中结果可知，合欢总皂苷对P388腹水型及S180肉瘤均显示出较强的抗癌作用，与对照组比较差异显著，其中80mg/kg剂量疗效较稳定，对Hep-A-22腹水型也显示有一定作用。
药理试验3，合欢总皂苷对免疫功能的影响
1.材料和方法：环磷酰胺，上海第十二制药厂生产，临用时用生理盐水配成0.5％和5％浓度。
2.动物：昆明种小白鼠。雌雄兼用，体重19.0±031g。
3.方法：将小鼠50只随机分为5组.分别用生理盐水，环磷酰胺、合欢总皂苷灌胃，每天1次，每次0.2ml/10g，连用6天。于末次给药后24小时，每鼠腹腔注射2％鸡红细胞(CRBC)混悬液1.0ml，间隔30分钟后腹腔注射生理盐水2.0ml。然后颈椎脱臼处死，切开腹部皮肤，经腹膜吸取腹腔液1.0ml，分别滴十两片载玻片上，每片0.5ml，置37℃培养箱中孵育30分钟，孵毕，于生理盐水中漂洗，以除去未贴片细胞，凉干，用1∶1丙酮——甲醇溶液固定.用4％Giemsa-PBS液染色3分钟，蒸馏水漂洗，凉干，油镜下计数，每个样本两份，计数后驭平均值，按下列公式计算吞噬串和吞噬指数：
吞噬率＝(吞噬CRBC的巨噬细胞数/200个巨噬细胞)×100％
吞噬指数＝被吞噬的CRBC总数/吞噬CRBC的巨噬细胞数
取用药6天后各组小白鼠的脾脏和胸腺别称重，计算每10g体重脾脏和胸腺的mg数脾指数和胸腺指数。
            合欢总皂苷对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬CRBC的影响(x±s)
    组别     n    剂量(mg/kg.d)  吞噬率(％)  吞噬指数
    生理盐水环磷酰胺合欢总皂苷合欢总皂苷     10101010    -25880  44.13±2 2637.91±2.6150.05±6.28*55.14±5.98*  2.93±0.310.85±0.221.12±0.191.28±0.24
                     合欢总皂苷对小鼠免疫器官重量的影响(x±s)
    组别  n     剂量(mg/kg.d)  吞噬率(％)   吞噬指数
    生理盐水环磷酰胺合欢总皂苷合欢总皂苷  10101010     -25880  22.54±2.1824.43±2.2634.37±6.44*38.12±5.18**   9.80±3.113.51±0.728.13±1.18***8.41±1.24***
***P＜0.001，**P＜0.01，*P＜0.05
综上所述，合欢总皂苷无论是在整体或离体条件下，均具有抗肿瘤作用和增强免疫功能。
试验4镇静安眠作用
1、对小白鼠自发活动的影响：小白鼠的筛选标准：取小白鼠11只，空腹过夜后放人自发活动光电自动打印仪的测定盒中，记录15rain的活动量，结果为108
一672次。以上下相差100为范围，取涵盖动物数最多为筛选标准。确定小白鼠用药前15min的活动次数在340-440范围内为合格动物。小白鼠禁食过夜后按上述方法进行筛选，合格者随机分组，ig给药立即故人测定盒中测定给药后0-15，16-30，31-45，46-60rain的自发活动量分组，结果见表1，实验证明合欢总皂苷对小白鼠的自发活动有明显的抑制作用，且存在较明显的量效关系，小剂量组起效较慢在给药后10min才出现镇静作用，以后逐渐加强。
对小鼠自发活动的影响(x±s)
  组别          给药量 动物数  用药前  用药后活动数
 0-15’ 16-30’ 31-45’ 46-60’
  生理盐水       15ml安定           5mg合欢皂苷大剂量 20mg合欢皂苷中剂量 10mg合欢皂苷小剂量 5mg 2020202020  395.6±29.1.0399.2±29.0397.6±31.6392.6±30.4399.0±27.8  280.9±135.980.7±91.0**110.9±51.0**130.9±91.0**160.9±131.0 393.5±131.053.5±142.0**95.5±31.0**154.6±121.0**231.5±231.0* 420.9±31.080.9±91.0**99.9±69.0**202.9±136.0**209.0±211.0** 423.5±121.063.8±93.0143.5±135.0156.6±118.0227.0±183.0
2、对戊巴比妥钠睡眠作用的影响：经测试确定小白鼠戊巴比妥钠的催眠阈上和阈下剂量分别为35和25rug/kg(中)。取小白鼠50只，随机分为5组，做延长作用实验，各组用药剂量见表2。巾给药5min后。各小白鼠戊巴比妥钠溶液均按0.35ml/20g，以翻正反射消失时间为睡眠时间。若睡眠时间大于180min，则按180min计算。结果表明，合欢总皂苷大剂量组也能明显延长戊巴比妥钠的睡眠时间；另取50只小白鼠做加强作用实验，分组及ig给药情况同前。ip戊巴比妥钠溶液按0.25ml/20g给药，以翻正反射消失为睡眠指标，记录各组入睡动物数。经X2检验，合欢总皂苷大，中剂量组均能非常显著地加强戊巴比妥钠的睡眠作用，提高动物的睡眠率。
表2：合欢总皂苷延长戌巴比妥钠的睡眠时间(x±s)
  组别与剂量mg/kg  动物数n   睡眠时间     入睡率
  对照组  18   24.7±11.33     0
  安定 15合欢总皂菅  6合欢总皂苷  18  181818   150.5±46.97*54.7±18.05*46.9±31.25**     10010070
具体实施方式：
实施例1(合欢总皂苷的制备1)
取合欢皮1kg加适量的水，加热煮沸三次，(每次40分钟)。收集并合并所得的水提液，过滤，将滤液加于预先用酸和碱处理的大孔吸附树脂柱(型号可选用D101、D21、AB-8)，用去离子水洗柱直到洗出液无颜色，后用70％乙醇洗脱。收集70％乙醇洗脱液，并减压回收，蒸干，将所得浓缩物用70％乙醇溶解，放置，并滤过，滤液减压浓缩干燥，得到黄色粉末状合欢总皂苷50g。
实施例2(合欢总皂苷的制备2)
取合欢皮或花1kg加适量的水，加热煮沸三次，(每次40分钟)。收集并合并所得的水提液，浓缩之相对密度为1.20，加乙醇至醇浓度为70％，或用85％乙醇提取，滤过，回收乙醇至无醇味，将药液加于预先用酸和碱处理的大孔吸附树脂柱，用去离子水洗柱直到洗出液无颜色，后用80％乙醇洗脱。收集80％乙醇洗脱液，并减压回收，蒸干，得到黄色粉末状合欢总皂苷80g。
实施例3(合欢总皂苷注射剂的制备1)
取合欢总皂苷100g，用75％乙醇溶解制成5％的合欢总皂苷溶液，用活性炭脱色，滤过，减压浓缩干燥，加注射用水制成每ml含20mg合欢总皂苷的水溶液，用微孔滤膜(φ0.20μm)滤过至澄明，灭菌，无菌分装于西林瓶中，每瓶5ml，置冷冻干燥机中冷冻干燥，即得。
实施例4(合欢总皂苷注射剂的制备2)
取合欢总皂苷100g，用75％乙醇溶解制成5％的合欢总皂苷溶液，用活性炭脱色，滤过，减压浓缩干燥，加注射用水制成5％的水溶液，用微孔滤膜(φ0.20μm)滤过至澄明，灭菌，无菌分装，每瓶10ml，封口，即得。
实施例5(合欢总皂苷胶囊剂的制备)
取合欢总皂苷1kg，药用淀粉0.5kg，用80％乙醇湿法制粒，整粒，装2#胶囊，每粒0.2g。其它项目应符合中华人民共和国药典2000年版胶囊项下。
实施例6(合欢总皂苷片剂的制备)
取合欢总皂苷1kg，药用淀粉0.5kg，糊精1kg，50乙醇适量制粒，整粒，干燥，压片，每片0.3g。其它项目应符合中华人民共和国药典2000年版片剂项下。

Claims (9)

1、合欢总皂苷，其特征是：以合欢皮和合欢花原料经水或醇的水溶液提取，或者水提碱沉淀提取，水煎液经过大孔吸附树脂柱吸附，再以30-95％浓度的醇洗脱，醇洗脱液所获得的组分。
2、合欢总皂苷在制备预防和治疗抑郁症的药物中的应用。
3、合欢总皂苷在制备预防和治疗肿瘤的药物中的应用。
4、合欢总皂苷在制备镇静催眠药物中的应用。
5、合欢总皂苷在制备治疗和预防免疫力低下等症的药物中的应用。
6、一种治疗抑郁症、肿瘤、镇静催眠的药物组合物，其特征是：由合欢总皂苷与一种或多种医药上可接受的载体和/或赋形剂相混合组成。
7、根据权利要求7的治疗抑郁症、肿瘤、镇静催眠的药物组合物，其特征是：合欢总皂苷占药物组合物的50％(w/w)以上，并且所说的合欢总皂苷基本上是由三萜皂苷组成的。
8、根据权利要求7的治疗抑郁症、肿瘤、镇静催眠的药物组合物，其特征是：合欢总皂苷可占总重量的1％-99％。
9、根据权利要求7的治疗抑郁症、肿瘤、镇静催眠的药物组合物，其特征是合欢总皂苷优选含量为总重量的20％-80％。
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