CN1176697C - 抗衰老药物组合物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种抗衰老的药物组合物及其制备方法，含节(螺)旋藻、蛹虫草等原料药物，本发明又公开了这种药物组合物还可用于化妆品领域，本发明还公开了一种SOD的提取方法。
Description
技术领域
本发明涉及到一种含有节旋藻、蛹虫草、川芎、枸杞等原料提取液的抗衰老药物组合物及其制备方法。
背景技术
随着经济的发展，生活的改善，科技文化的进步，人类的平均寿命正在不断的延长，老年人在人口总数中占的比例越来越大，据统计，我国60岁以上的人口，目前已达1.4亿左右，占全国总人口的10％以上，进入老龄化国家。
衰老是人体的生理规律不可避免的现象。衰老的进程又受环境、饮食及其自身健康状况和生活习惯等等多种因素左右。应用科技手段和方法，探索衰老的发生和演进过程，对一些老年疾病予以防治。衰老发生的机制极为复杂，由一系列生理、病理过程综合作用的多因素所致，我国医药学在延缓衰老，延年益寿等方面，积累了丰富的理论知识和实践经验。
人们为延缓衰老的进程，一直在探索寻求各种防衰老的方法，在众多的方法中，“补品”抗衰是我国传统的行之有效的方法之一，也是被世界各国关注的课题。
人们随着年龄的增长，生理机能在逐渐改变，对饮食营养的要求也在不断的发生变化，因此结合生理功能改变的特点，制成相应的饮食，以适应年龄的增长需要，从而达到预防疾病和推迟、延缓衰老的目的。
自由基性质活泼，具有极强的氧化反应能力。其数量随年龄的增加而增长，在细胞内自由基超过一定数量时，机体即产生不良影响和损伤，促使人体衰老。因此，寻觅可清除自由基的物质也是抗衰老的方法之一。
大量的中医典籍，都表明了益气活血在衰老过程中的重要作用。清·王清任《医林改错》中有“元气既虚，必不能达瘀血管，血管无气，必停留瘀”的描述。并明确指出补气药与活血药一同应用的良好效果。
临床试验结果表明，混合组成多种物质，比单一物质的抗衰效果好。气虚血瘀是一种以气虚为本，血瘀为标的本虚标实证，人到老年，必然会有元气不足，五脏之气衰惫之变化，这是衰老的根本机制。因此，对气虚血瘀在衰老过程中的重要机制变化的认识，以及应用益气活血的中草药和菌藻类进行抗衰老的防治作用的研究得到了确定。如能改善气虚血瘀则是抗衰老的又一种万法，对延缓衰老具有一定的作用。
《内经》有“邪之所凑，其气必虚”之说，明确表达了气虚时机体抗病能力不足，免疫功能低下的特点。应用同位素标记法测定发现，多种疾病的虚症患者的细胞免疫功能都有所降低，这就为免疫功能与中医正气概念之间的相互关系提供了佐证。老年病多属虚症，这是由于在免疫功能降低的基础上发生的生理性虚症和病理性虚症交织所致。因此，观察免疫功能的改善，尤其是细胞免疫功能提高，是评价、判断抗衰老作用的重要标志之一。血瘀的机理可以从众多的项目来检测，目前一般认为TXB2(血栓素)与PGE2(前列腺素)的平衡变化能客观反应血小板聚集与血管壁的舒缩情况，血浆TXB2水平升高，可能是血瘀症的重要特症之一，两者之间的动态平衡构成了气血相互依存和制约的关系，可见选择细胞免疫功能测定与TXB2、PGE2的平衡关系来说明气虚与血瘀的变化是合理的。
目前市场出售的各种(类)护肤、美容化妆品，种类繁多，不胜枚举，究其作用，一般仅能起到暂时性的润肤作用，有些甚至因其中所含的增白剂等物，还会导致皮炎等副作用发生。本发明人认为，单纯以有机化合物或金属物质(单体)成份作为添加剂制成的化妆品膏、霜或乳剂等，最终不能起到保护皮肤，延缓皮肤衰老的作用，还或多或少的存在着不同程度的弊端与不足。
为解决上列的技术问题与不足，用藻菌及中草药内的多种有效成份(含天然色素)代替化学合成(含染料)物，应用到化妆品生产中，生产藻类和中草药天然提取物系列化妆品(含口红，胭脂，眼影膏，指甲油)，对防皱、消炎(座疮)等有显效。
1988年法国著名的施蓝化妆品公司，首先制成螺旋藻化妆品(五个系列产品，霜，眼影膏，洗发香波等)，为当时市场上最昂贵的高级化妆品之一。以后日本、美国等也先后制成多种螺旋藻化妆品，所有这些产品中都是直接将螺旋藻作为原料之一，参与配伍。
本发明的特点之一，是将藻类和中草药内的有效营养成份卒取出来，用入化妆品中，既提高了纯度和成份，更提高了使用效果，达到营养保健，美化肌肤的双重作用。
发明内容
人到老年，必然元气不足，五脏之气衰惫。从“气行则血行”的理论出发，气虚血运行无力可致瘀，因此老年病患者的气虚与血瘀常互相关联，互为因果。气虚血瘀是一种本虚标实证，本虚导致标实，标实使本更虚，往复循环，造成全身性功能减退，以至衰竭。因此，采用藻菌和中草药同时应用，其效果较佳。
1986年本发明人与苏州市中医院、解放军100等七家医院合作藻类治疗＂急再障＂临床试验的同时，美国哈佛医学院的Schwartz和SHKlar研究发现，从颤藻科螺旋藻属Spirulian Turpin的一个未知种名的藻类提取的藻蛋白混合物，对一些癌细胞有抑制作用，并有抗疲劳等功能。亦可用于抗衰老和治疗AIDS病方面。
次年(1987)本发明人即着手藻类抗衰老的应用研究，在完成节(螺)旋藻保健食品组合物及其制法(专利公开号：CN1113716A)和钝顶节(螺)旋藻Artlirospira(Spirulina)、Platensis藻蓝蛋白及其应用(专利号ZL9410925·X国际专利分类号C07K14/405)都获得成功的基础上，又经七年多的临床试验、验证，藻类物质具有明显的抗衰老效果。此项成果，在99年(北京)国际研讨会上引起德、美等国的广泛兴趣。
本发明应用本发明人自行选育的节(螺)旋藻和蛹虫草配合川芎、枸杞分解，提取物经临床应用后，表明这些物质对人体的某些衰老症状，具有较明显的改善效果。
本发明还通过对我国古代养生理伦基础的研究，结合现代应用藻类的抗衰老试验研究成果，运用中医衰老机制学说“益气活血”法抗衰老的临床试验(观察抗衰老作用)。
本发明的提取物由多糖类、糖苷、黄酮类等物质组成，既可内服又可外搽涂，可改善免疫功能，血液流变，能提高前列腺素(PGE2)含量，使血栓素(TXB2)下降，和PGE2/TXB2的比值变化；明显减少血清过氧化脂质(LPO)水平，提高超氧化物歧化酶(SOD)活性，胶原蛋白中游离肤或结合肤的烃脯氨酸(HO-PRO)含量增加。
本发明的提取物用作外搽(涂)皮肤表面，可促进表皮代谢，延缓角质化的发生(进程)。
本发明的原料药物的选择：
1、藻类：节(螺)旋藻
1980年2月，本发明人将美国赠送的“螺旋藻”进行室内养，完成一系列生理、生化试验后，置于苏州东山建池进行自然条件下工业化生产研究成功(1984年10月通过中科院鉴定)后，同年移放张家港市进一步扩大生产成功(获1986年苏州市科技4等奖)，用其制成啤酒(1986年国际雅典藻类会议)被公认为首创。1990年10月在全国家科委主持召开(昆明)首届螺旋藻应用研讨会上，予以介绍，向全国推广。多年来，“螺旋藻”被国际间广泛流传应用误称为螺旋藻Spirulina，此项研究经南京大学曾昭琪教授和德国Tsnang-Pi CHANG研究员合作，应用生化、电镜等检验研究发现应为节旋藻Arthrospira(参见《藻类》1990年60期)。经国家卫生部90年3月批准为我国新食品资源。本发明人选育符合《中国药典》90年版，《中国药用孢子植物》等典藉标准。
2、菌类：北冬虫夏草(蛹虫草)
1987年7月～1990年7月间，本发明人先后在山东泰安、甘肃武威，多次采得形态相似、颜色相同，桔黄色含菌的僵硬虫蛹(子实体)，经分离、培养、驯育，鉴定为蛹虫草(Ordyceps militaris)将其接种蚕蛹上，置一定的温、湿、光照条件下人工培养70天左右，获得与(野生)自然环境中生长的蛹虫草菌(丝)、形态、颜色均一致的子实体。
成分分析结果表明，该子实体含18种氨基酸，其中苏氨酸、丙氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、酪氨酸、SOD、虫草素、虫草多糖、腺嘌呤等含量均高于冬虫夏草。
3、药用植物：川芎、枸杞。
4、本发明的药物组合物中有效成分的功效：
(1)节旋藻(螺旋藻)含有极丰富的营养物质，和多种活性物质，及人体必需的氨基酸，多种维生素(Vitamin)尤以β-胡罗卜素和藻蓝素(leucocyan)的含量是其它植物无法与其相比的，其脂类的主要成份为不饱和脂肪酸，同时还含有胆碱脂酶，多糖(Polysaccharids)和锌(Zn)及微量元素硒(Se)等等。具有增强核酸内切酶活性的作用，有明显的抗幅射，抑制癌细胞，促进新陈代谢和提高免疫功能等多种功效。
氨基酸是构成蛋白质的主要成份，而细胞又由蛋白质等物质组成，所以它对人体生理机能有着极重要的作用不仅是提供营养而且参与细胞内酶的代谢，亦可增加皮肤光泽等作用。
(2)维生素是维持生命的必需物质，人体中如果缺少它们就会出现各种病症，皮肤亦不例外，如“糙皮病”就是因为缺少维生素A所致，β-胡罗卜素为弱碱性脂溶性化合物，进入人体后能转化为维生素A；它还是一种良好的抗氧化剂，能通过清除自由基发挥防衰老作用。
(3)α-亚麻酸(又称维生素F)是人体不能合成而又必需的不饱和脂肪酸，是毛发和皮肤新陈代谢，防止皮肤老化不可缺少的物质。
(4)维生素E有明显的抗衰老作用，同时又具有防治白发的作用(800国际单位/日)。
(5)锌与人体健康休戚相关，它可调节皮肤、粘膜的知觉，分泌排泄等功能，维护皮肤的韧性和弹性，缺锌会便体内激素失调，皮脂外溢形成皮疹发生痤疮。
(6)硒是谷胱甘肽过氧化酶的组成成分，这种酶存在于心、肝、肺、胰脏等重要的脏器中，它可以破坏机体正常代谢过程中形成的有害的过氧化物，保护细胞膜，因而有抗衰老作用。硒还可以某种方式与有毒物质砷、镉、汞等结合以降低它们的危害，并可抑制苯并芘类、黄曲霉毒素、硝胺等致癌物的诱癌作用。
(7)SOD
检测得知，藻类和北冬虫夏草内都含有丰富的SOD，其含量分别为1400单位和58单位。我国药科大学徐敞木教授研究发现：“由于自由基(如O2 -)的作用，便胞膜不饱和脂肪酸形成过氧化脂肪酸，然后经过氧化物分介成丙二醛和磷脂酚乙醇胺，前者是极活泼的交联剂，可立即与后者交联成萤光色素，然后再与蛋白质核酸或脂类结合成难溶性大分子并沉着在细胞内成自发萤光的色素、斑点(即脂褐素，俗称老年斑)。另外，占人体总蛋白量30％的胶原蛋白，是构成结缔组织基质的成份，由于自由基(O2 -)的作用，可使胶原蛋白变性导致结缔组织功能退化，使皮肤失去弹性，出现皱纹。人体在其新陈代谢过程中不断产生(O2 -)，尤其是在疾病状态和进入中老年期，其体内SOD水平不断减少，消除(O2 -)能力不断下降，因此渐进性的产生上述生理性变化。
美国，巴尔的摩老人研究中心，研究发现，人体衰老现象(含皮肤老化)与机体本身自由基产生的浓度及人体自身清除这些自由基的能力(抗氧化能力)密切相关。德、西班牙等国研究发现，在炎症情况下，由于吞噬细胞对外来异物的吞噬而必然产生大量(O2 -)，当(O2 -)水平超过细胞内部SOD含量，则(O2 -)将导致炎症进一步发展。Bcrcl(Arch·Biochcm·Biophtys，179；8，1977)，描述了吞噬细胞产生(O2 -)的过程，也即在吞噬对外来异物吞噬后形成吞噬泡，在吞噬泡中产生大量有毒的(O2 -)。日本广岛大学研究发现(O2 -)在炎症的发生发展中起着重要作用。因此使用外源性SOD(在皮肤上常抹)既可以增进皮肤抗氧化能力，使皮肤变得光泽有弹性，消除细皱纹，延缓皮肤老化，又可切断皮肤炎症发展中的中间环节，使炎症自然消退。
(8)蛹虫草内含草素，经鉴定是3-脱氧腺嘌呤核苷，(3-dexoxyadenosine)，这种活性物质，分子式为C10H13N5O3，它有抑制病毒和细菌及抗辐射的作用。所含多糖(CS-I)对小鼠艾氏腹水癌，有抑制作用，对鳞状上皮增生有抑制其癌变的作用。尚含有环状肽类和SOD(超氧化歧化酶)这些物质，被用于治疗风湿性关节炎、红斑狼疮、活动性肝炎等自身免疫性疾病。中医用它治疗“遗精”、“阳痿”等症。
(9)枸杞内含维生素A、B1、B2、C、β-胡罗卜素、蛋白质、脂肪、碳水化合物，矿物质、钙、磷、铁、钾等和微量元素，锂、锗等，尚含甜菜碱和β-谷甾醇等物质。
《本草纲目》载，枸杞主治：五内邪气，热中消渴，周痹风湿，久服坚筋骨，轻身不老，耐寒暑。下胸气，客热头痛补内伤，大劳虚吸，强阴，利大小肠，补精气诸不足，易颜色变白，明目定神，令人长寿。
现代医学研究发现，枸杞能增强机体免疫功能，提高人体抗病能力，促进造血功能，使白细胞增多，保肝降血糖，降血压，滋阴壮阴，刺激生长的作用。由于所含的甜菜碱等。
(10)川芎对中枢神经系统有镇静作用，对周围血管有直接扩张作用，有某些抗维生素E缺乏症和抑制大肠、痢疾、伤寒、霍乱菌等皮肤真菌的作用。
本发明优选的实施方案
(一)本发明产品的粗提液的制备
本发明节旋藻、蛹虫草、川芎和枸杞各原料药物的总重量比例为1-4∶1-5∶1-3∶1-2。
(1)节旋藻与蛹虫草(1-2∶1-12)磨细成(80-100目)粉，加10倍量去离子水浸泡24小后煮沸45分钟，过滤。滤渣再加8倍量的去离子水煮沸，过滤，合并2次滤液，加等量酒精，加热至40℃半小时，静置过夜，过滤，沉淀物加5倍量水与等量酒精，过滤。合并2次滤液，为提取液(a)。
(2)节旋藻、川芎、枸杞(1-4∶1-3∶1-2)加2倍量的磷酸缓冲液(PH7.3)加入中性蛋白酶1.5(3000单位/g)置35℃水浴中30分钟后，磁力搅拌30分钟后，置-20℃速冻，待结成冰块后，取出置35℃水浴解冻，再磁力搅拌30分钟，再速冻，解冻，如此循环三次，解冻液置4℃，5000r/15分钟离心，收集上清液，得到提取液(b)。
将提取液(a)与提取液(b)混合搅拌匀，即为本发明产品的粗提液。
(二)本发明粗提液的分离纯化
纤维素层析纯化：粗提液用蒸馏水稀释一倍，上DEAE52纤维素柱(3×18cm)，该柱顶预先己用10MM，PH7.3磷酸缓冲液平衡280mm检测，待抽提液全部进入纤维素柱后用同一个缓冲液洗柱至基线，再改用10MM，PH8.0的磷酸液缓冲并加0.3N，和0.6N的Nacl部分洗脱和收集。取0.3N Nacl的洗脱峰，加固体硫酸铵至80％饱和度，4℃静置4小时后，2500r/15分钟离心，收集沉淀加水10ml溶介，并对水透析，更换透析液二次，最后置500ml，10mm，PH7.3的磷酸缓冲液中透析平衡过液。透析后的样品液，250Or/15分钟离心去沉淀，上清液以Seohade XG75凝胶柱过滤(15×85cm)凝胶柱预先用10mm，PH7.3的磷酸液缓冲平衡，一次上样，以同一缓冲洗脱，分部收集并作CFU-E及电泳分析，冷冻干燥得成品。
(二)SOD提取：
节旋藻液和蛹虫液加酶，反复冻溶三次后，溶液(蓝色具萤光)，剧烈搅拌30分钟后，0-4℃静置过液，缓缓加入0.25倍体积预冷(-15℃)95％乙醇后，搅拌5-10分钟，再加入0.15倍体积的预冷氯仿，搅拌15分钟静置之20分钟，抽滤去掉沉淀，得蓝色清彻透明，粗酶液。加入预冷(-15℃)丙酮，生成大量白色沉淀。3000r/15分钟离心，收集沉淀。用约为沉淀量50倍体积的磷酸钾缓冲液稀释水各加热至65℃，15分钟内迅速冷却至室温，离心得上清液，加入预冷丙酮，生成沉淀，沉淀经丙酮脱水，溶于去离子水，得20％溶液真空干燥即成品(淡蓝色冻干品)。
本发明药物组合物的抗衰老实验
1、材料
a、本实验所用昆明种小鼠(体重25-30g)老年小鼠(20-21同龄)均由苏州医学院动物中心提供。
b、粗提液：由本发明人制造。
c、烃脯氨酸标准品，BDH公司产品。
d、硫代巴比妥酸(TBA)，四乙氧基丙烷(TEP)均为AR级，购自上海化学试剂商店。721分光光度计，上海第三分析仪器厂。
2、方法
取老年小鼠30只，随机分成3组，每组10只，分别灌服粗提液60ml/kg，30ml/kg，生理盐水0.5ml/只，同等条件下，喂养连续30天，给予本发明的药物组合物后2小时眼眶采血，用于测定SOD和LPO，处死小鼠后取尾睫测定羟脯酸含量，并分别进行耐力测定。(依小鼠体重的15％负重，于水深60cm，水温22℃的水中游泳，以小鼠沉入水底不再上浮为指标，测定它们的游泳时间。)
粗提液能提高老年小鼠红细胞内SOD活力，同时降低血清中LPO含量，大(60ml)、小(30ml)剂量组与生理盐水组相比较，都有明显的差异结果如下表1：
表1：本发明的药物组合物对老年小鼠SOD、LPO、HO-PRO的影响(X±30)
| 组别 | 鼠数 | 剂量(mg/kg) | SOD(u/ghb) | LPO(mol/ml) | Ho-pro(mg/5mg) |
| 生理盐水 | 10 | 0.5ml/只 | 1340±358 | 7.2±183 | 3.54±0.27 |
| 粗提液 | 10 | 60 | 2246±480** | 4.86±1.34 | 4.58±0.35 |
| 粗提液 | 10 | 30 | 2110±490* | 4.21±1.0 | 4.20±0.33 |
注：与生理盐水组比，**P＜0.001
*P＜0.05
灌服本发明的药物组合物小鼠的游泳时间比较，如：
表2：粗提液对小鼠游泳时间的影响
| 鼠数 | 组别 | 剂1量(mg/kg) | 游泳时间(s) |
| 10 | 生理盐水 | 0.5ml/只 | 38.8+7.5 |
| 10 | 粗提液 | 30mg/kf | 72.5+36.0 |
注：与生理盐水组比，P＜0.05。
SOD是体内重要的抗氧化酶，可以清除自由基对机体的毒害作用。粗提液可明显的减少老年小鼠血清中LPO水平，提高老年小鼠红细胞内SOD活性，因此，提高粗提液可能通过增强SOD活性来减少体内LPO的生成，清除体内自由基所造成的损害，从而减少疾病的发生和延缓衰老。
胶原蛋白是构成结缔组织细胞间质胶原纤维的主要成分，老年人和老年动物胶原蛋白溶解度随年龄增长而逐渐降低，胶原蛋白申游离肽或结合肽的HO-PRO含量降低。HO-PRO和动物衰老存在着相关性，通过测定HO-PRO可以检测动物的衰老状况(田清涞等1991.11)实验表明：本发明的药物粗提液(60ml/kg)可以增加小鼠尾睫HO-PRO含量。
试验再次表明，粗提液有明显的抑制丙二醛的生成作用，可降低小鼠心肌脂褐素的形成；有抑制单胺氧化酶A的作用。
在动物试验取得明显效果的前题下，经76位自愿受试者(年龄在55-74岁之间)，其中以60-70岁居多，占全部受试者58％，以随机法将他们分为试验组和对照组。每组38名。试验组，每人每次口服20ml粗提液，每天早晚各一次；对照组每人每次口服黄芪液20ml(江苏扬子江药业集团公司)，每组均口服90天。
临床观察项目：
本发明人认为气虚血瘀是衰老的病理原因之一，气虚时机体抗病能力，免疫功能均低，尤其是细胞免疫功能的变化是重要指标；同时观察血瘀机制的客观反映，以血小板聚集与血管壁舒缩变化的情况为依据，再将一些衰老的体(症)状面部皱纹，皮肤松弛，老年斑，记忆力，触痛，温感反应以及舌苔，舌质，脉象等综合起来，以累积记分法，观察二组服液前后的积分值的变化，(积分标准：明显4分，不明显1分，轻度2分，中度3分)，相互参考、印证。
通过临床症状累记积分法比较两组的情况
NK细胞活性的变化
服用粗提液后，NK细胞活性明显提高(P＜0.05)
而对照组服用黄芪液后的NK细胞活性无显著差异(P＞0.05)结果如表3：
表3：服用粗提液后外周血NK细胞活性的变化
| 组别 | n | 试验前(X±SE)％ | 试验后(X±SE)％ | I | P |
| 试验组 | 38 | 22.37±10.11 | 27.79±12.67 | 2.399 | ＜0.05 |
| 试验组 | 38 | 26.13±12.29 | 28.05±9.47 | 1.172 | ＞0.05 |
T淋巴细胞亚群百分比的变化：
服粗提液后，T淋巴细胞亚群OKT3、OKT4细胞的百分比都有明显增高(P＜0.001＝，OKT4/OKT8比值，虽有所提高，但无统计学意义，而服黄芪液前后的OKT3，细胞百分比无显著提高(P＞0.05)，结果如下表4：
表4：试验后T细胞亚群的变化(X±SE)
| 组别 | N | CD3 +(％) | CD4 +(％) | CD8 +(％) | CD4 +/CD3 +(％) | |
| 试验组 | 38 | 服液前 | 52.02±14.31 | 34.56±7.46 | 28.85±848 | 1.28±0.37 |
| 服液后 | 61.19±8.86 | 42.44±7.14 | 33.35±7.60 | 1.35±0.41 | ||
| I | 4.518 | 5.744 | 3.172 | 1.037 | ||
| P | ＜0.001 | ＜0.001 | ＜0.002 | ＞0.05 | ||
| 对照组 | 38 | 服用前 | 50.171±5.13 | 33.2±29.28 | 27.89±7.12 | 1.25±0.46 |
| 服用后 | 55.78±11.95 | 39.72±7.84 | 30.50±7.22 | 1.36±0.36 | ||
| I | 1.192 | 2.573 | 1.189 | 0.873 | ||
| P | ＞0.05 | ＞0.05 | ＞0.058 | ＞0.05 |
血浆PGE2、TXB2、TXB2/PGE的变化：
服用粗提液后，PGE2显著增高(P＜0.01，TXB2则显著下降，(P＜0.01，而服黄芪液的对照组服用前后的PGE2、TXB2都无显著差异(P＞0.05)，结果如表5：
表5：试验后外周血PGE2、TXB2、TXB2/PGE2的变化(X±SE)
| 组别 | N | PGE3(fg/ml) | TXB2(fg/ml) | TXB2(％) | |
| 试验组 | 38 | 服液前 | 262.88±126.25 | 67.23±39.45 | 0.31±0.22 |
| 服液后 | 344.10±177.18 | 53.66±30.10 | 0.20±0.15 | ||
| I | 3.710 | 3.526 | 3.732 | ||
| P | ＜0.001 | ＜0.001 | ＜0.001 | ||
| 对照组 | 38 | 服用前 | 229.16±147.12 | 39.44±64.46 | 0.66±0.81 |
| 服用后 | 210.50±135.67 | 92.28±56.99 | 0.58±0.51 | ||
| I | 0.1423 | 0.275 | |||
| P | 0.05 | ＞0.05 | ＞0.058 |
由于老年人的衰老可以从多种途径来检测，目前一般认为TXB、PGE的平衡变化能比较客观的反映出血小板的聚集情况与血管的舒缩功能，本研究结果再次表明，粗提液能显著提高PGE2的含量，使TXB2下降，且TXB2/PGE2的变化有显著意义。
典型病例1：吴XX，男，55岁，高血脂症20年，曾服月见草，多烯康，脂必妥等。服粗提液前检查血脂水平，TC286mg/dl，S-TGl16.4mg/dl，HDL-C49.7mg/dl。服用粗提液60天后，血脂水平TC240mg/dl，S-TG90.8mg/dl，HDL-C46.6mg/dl。
病例2：黄XX，女，63岁，劳累性心胶痛，每逢劳累时，即发作2～3次，心电图示III、aVFS-T段压低0.5mmT波倒置，Tv4-6曳倒，服用粗提液60天后，心电图S-T段上升至等电位线，TIII、aVF、V4-6波直立，心电图恢复正常。
病例3：张XX，女69岁，TCD提示“脑动脉硬化”，血流不对称，服粗提液90天后，自觉症状头晕、头痛等消失或缓解。TCD示血流对称，脑动脉硬化症状减轻。
病例4：沈XX，男，70岁，末服粗提液时，血液中含SOD26.4单位/ml，服粗提液90天，血液中SOD上升至38.5单位。
粗提液的外搽--防皱试验
1989年初，对螺旋藻化妆品的剂型膏、霜或乳剂的配比和其最佳用量，形成条件进行了反复的研究，成功制成各种剂型的样品。
在动物试验后证实其无毒无害，无任何刺激，对皮肤具有优良的护肤、美肤作用的基础上，开始在人体上进行涂抹试验。方法是：受试者每天搽用一次，用前冷水或温水(以冷水为佳)洗净，然后用消毒棉球将Spirulina霜或乳搽在受试者一只手背皮肤上，另一只手背皮肤不搽任何物品及处理。经10天搽抹后，2只手背皮肤发生明显不同，搽抹Spirulina的手背皮肤白嫩、细腻、有光泽，在用螺旋藻化妆品初步见成效的基础上，本发明人改用粗提液搽的方法进一步扩大试验范围，先从内部进行试验，受试人数为230人次，经连续6个月试用，其结果令人满意后，再扩大到450人次的临床观察，通过连续三年的观察试用，进一步证实粗提液具有较强的渗透作用，可促进皮肤细胞的生长，对皮肤细胞的营养，对延缓皱纹，延缓衰老都有积极的作用。对皮脂溢出座疮、消退雀斑、色素沉着、黄褐斑，表皮细胞脱落(头皮屑)，鱼鳞癣等都有各种程度的治疗效果，其有效率分别在85％～95％之间。
其机理：国际卫生组织等都一致公认Vc、VE，B族及微量元素等物质，可将氧化型黑色素转化为还原型，使多巴醌还原成多巴，抑制黑色素形成。同时，可减弱紫外线对皮肤的损害。黄褐斑，大都由于内分泌障碍引起，色素沉着于皮肤所致。由此表明，粗提液对皮肤的衰老同样具有抗衰老、延缓作用。
病例1：谢XX，女，37岁，脸上患有黄褐斑，曾试用多种化妆品，均末有效，甚至有些化妆品引起皮肤灼痛或红斑，使用粗提液90天后，脸部黄褐斑明显减少。
病例2：王XX，女，45岁，小学教师，脸部黄褐斑，使用粗提液三个月后，黄褐斑基本消退。
病例3：周XX，女，48岁，营业员，眼部(鱼尾纹)及口角处皱纹明显，口服，外搽粗提液90天后，眼及口部的皱纹明显缓减。
病例4：陈XX，女，30岁，农村妇女，常年手、脚部干燥开裂，痛疼，影响劳动、行走，外搽粗提液后，2天即不大疼痛，4～5天后裂口即愈合，连续使用30天后，手部的粗糙状明显的减轻。
本发明系列化妆品之制作的用料
1、口红、唇膏、防唇裂膏等：
石腊，蜂腊，凡士林，蓖麻油，藻红蛋白(SOD)，Ve，香精，粗提液等。
2、胭脂(膏、饼、液)
滑石粉，高岭土，蜂腊，液体石腊，白凡士林，甘油，粘合剂，粗提液，藻红蛋，SOD，Ve，香精等。
3、眼影膏(液)
蜂腊，羊毛脂，滑石粉，粗提液，高岭土，凡士林；丙二醇，藻蓝蛋白，SOD，VE，香精等。
4、指甲油
乙酸乙脂，乙酸丁脂，磷酸三甲酚酷，邻苯二甲酸丁二脂，硝化纤维素，藻红蛋白，VE，渗透剂等。
5、防晒膏
硅酮(D-C-225)营养液，羊毛脂，硬脂酸水核酸二丙二醇脂，对烃基苯甲酸甲脂，甘油，藻蓝蛋白和藻红蛋白，SOD，VE，香精，粗提液等。
6、去(防)皱膏
核桃仁，杏仁，甘油，羊毛脂营养液，藻蓝藻红蛋SOD，VE，香精，粗提液等。
7、防皱液
丝瓜汁(滤)，乙醇营养液，蜂蜜，藻红和藻蓝蛋白，SOD，VE，香精，粗提液等。
8、除雀斑液
黄瓜汁，柠檬汁，乙醇营养液，蜂蜜，藻红蓝蛋，SOD，VE，香精，粗提液等。
9、去斑霜
桃花，冬瓜籽，蜂蜜营养液，藻蓝蛋白 SOD，VE，香精，粗提液等。
10、洗发香波
AEs、6501、B5-12营养液，珠光剂，双酯，K12，E.D.T.A，藻蓝红蛋白--SOD，柠檬酸，香精，粗提液等。
人体由于免疫力下降，特别对老年人而论，就更容易受到外界的干扰，导致全身生理调节能力的失衡，本实验，应用症状变化累积记分法，对服用粗提液前后及对照结果予以比较，表明粗提液能够改善老年人的临床症状，对平衡失调有较好的修复效果。同时，通过细胞免疫功能的变化，NK细胞活性变化及T淋巴细胞亚群的百分率变化，均表明了口服粗提液能提高老年人的NK细胞活性及增高OKT3、OKT4细胞的百分率，OKT4/OKT8的比值也有所提高，因此，表明粗提液确实能改善老年人的细胞免疫功能，显示了提高老年人的抗病能力，即维护机体的防御系统能力。
十多年的试验、研究，动物实验，临床试用先后都表明粗提液有较明确的抗衰老作用，能改善老年人健康水平，对延缓衰老有一定的效果。
本发明的组合物和使用的方法已经一般地被公开了，并且通过特定的病例参考，病例并非限制本领域普通技术人员发生的无需花费创造性能力和变动，除非指明。
实施例1
1、制备粗提液
菌类：北冬虫夏草(又称蛹虫草)3.78 节旋藻0.64。实例：北冬虫夏草(蛹虫草)37.8g，节旋藻6.4g混合后磨细，加2倍量磷酸缓冲液(PH7.3)加中性蛋白酶(3000单位/克)1.5％，置35℃水浴中30分钟后，磁力搅拌30分钟，置-20℃速冻，待结成冰块后，取出置35℃水浴解冻，再磁力搅拌30分钟，再速冻，如此循环三次后，解冻液置40℃，5000r/分钟离心，收集上清液，即成“b”液。
藻类与中草药混合物，其比例为节旋藻2.46 川芎1.84 枸杞1.28
实例：节旋藻24.6g，川芎18.4g，枸杞12.89g，共55.89g。磨细(过80目筛后)加560ml去离子水，浸泡24小时后煮沸45分钟，过滤取上清液。
滤渣加8倍量的去离子水，煮沸，过滤取上清液。
合并2次滤液加等量酒精，加热至40℃半小时后，静置过夜，过滤取上清液。
沉淀物加5倍量水和等量的酒精，过滤，合并2次滤液，即成“粗提液”a。
将粗提液“a”和“b”液混合拌匀，即成粗提液。该粗提液以药学上常规的制药技术，加入各种药学上可接受的常规助剂即可制备成口服液、颗粒剂、胶囊剂、片剂等各种剂型。
实施例2
本发明粗提液的分离纯化
纤维素层析纯化：粗提液用蒸馏水稀释一倍，上DEAE52纤维素柱(3×18cm)，该柱顶预先己用10MM，PH7.3磷酸缓冲液平衡280mm检测，待抽提液全部进入纤维素柱后用同一个缓冲液洗柱至基线，再改用10MM，PH8.0的磷酸液缓冲并加0.3N，和0.6N的Nacl部分洗脱和收集。取0.3N Nacl的洗脱峰，加固体硫酸铵至80％饱和度，4℃静置4小时后，2500r/15分钟离心，收集沉淀加水10ml溶介，并对水透析，更换透析液二次，最后置500ml，10mm，PH7.3的磷酸缓冲液中透析平衡过液。透析后的样品液，250Or/15分钟离心去沉淀，上清液以Seohade XG75凝胶柱过滤(15×85cm)凝胶柱预先用10mm，PH7.3的磷酸液缓冲平衡，一次上样，以同一缓冲洗脱，分部收集并作CFU-E及电泳分析，冷冻干燥得成品。
本发明的药物组合物，其中的节旋藻、蛹虫草、川芎和枸杞的重量比例为31∶37.8∶18.4∶12.89。本发明的药物组合物，其特征在于：它可以采用药学上常规的技术和可接受的助剂制备成任一临床上可接受的剂型。
实施例3
SOD提取：提取液a加酶，反复冻溶三次后，藻液(蓝色具萤光)，剧烈搅拌30分钟后，0-4℃静置过液，缓缓加入0.25倍体积预冷(-15℃)95％乙醇后，搅拌5-10分钟，再加入0.15倍体积的预冷氯仿，搅拌15分钟静置之20分钟，抽滤去掉沉淀，得蓝色清彻透明，粗酶液。加入预冷(-15℃)丙酮，生成大量白色沉淀。3000r/15分钟离心，收集沉淀。用约为沉淀量50倍体积的磷酸钾缓冲液稀释水各加热至65℃，15分钟内迅速冷却至室温，离心得上清液，加入预冷丙酮，生成沉淀，沉淀经丙酮脱水，溶于去离子水，得20％溶液真空干燥即成品(淡蓝色冻干品)。
Claims (5)
1、一种抗衰老的药物组合物，它是由以下步骤制备而成的：
(1)节旋藻与蛹虫草1-2∶1-12磨细成80-100目的粉，加10倍量去离子水浸泡24小后煮沸45分钟，过滤。滤渣再加8倍量的去离子水煮沸，过滤，合并2次滤液，加等量酒精，加热至40℃半小时，静置过夜，过滤，沉淀物加5倍量水与等量酒精，过滤。合并2次滤液，为提取液a；
(2)节旋藻、川芎、枸杞1-4∶1-3∶1-2加2倍量的磷酸缓冲液PH7.3加入中性蛋白酶1.5置35℃水浴中30分钟后，磁力搅拌30分钟后，置-20℃速冻，待结成冰块后，取出置35℃水浴解冻，再磁力搅拌30分钟，再速冻，解冻，如此循环三次，解冻液置4℃，5000r/15分钟离心，收集上清液，得到提取液b；
将提取液a与提取液b混合搅拌匀，即为本发明产品的粗提液。
2、权利要求1的药物组合物，其中的节旋藻、蛹虫草、川芎和枸杞的重量比例为31∶37.8∶18.4∶12.89。
3、权利要求1的药物组合物，其特征在于：它可以采用药学上常规的技术和可接受的助剂制备成任一临床上可接受的剂型。
4、权利要求1的药物组合物的制备方法，其特征在于它包括以下步骤：
(1)节旋藻与蛹虫草1-2∶1-12磨细成80-100目的粉，加10倍量去离子水浸泡24小后煮沸45分钟，过滤。滤渣再加8倍量的去离子水煮沸，过滤，合并2次滤液，加等量酒精，加热至40℃半小时，静置过夜，过滤，沉淀物加5倍量水与等量酒精，过滤。合并2次滤液，为提取液a；
节旋藻、川芎、枸杞1-4∶1-3∶1-2加2倍量的磷酸缓冲液PH7.3加入中性蛋白酶1.5置35℃水浴中30分钟后，磁力搅拌30分钟后，置-20℃速冻，待结成冰块后，取出置35℃水浴解冻，再磁力搅拌30分钟，再速冻，解冻，如此循环三次，解冻液置4℃，5000r/15分钟离心，收集上清液，得到提取液b；
将提取液a与提取液b混合搅拌匀，即为本发明产品的粗提液
(2)粗提液用蒸馏水稀释一倍，上3×18cm DEAE52纤维素柱，该柱顶预先已用10MM，PH7.3磷酸缓冲液平衡280mm检测，待抽提液全部进入纤维素柱后用同一个缓冲液洗柱至基线，再改用10MM，PH8.0的磷酸液缓冲并加0.3N，和0.6N的Nacl部分洗脱和收集。取0.3N Nacl的洗脱峰，加固体硫酸铵至80％饱和度，4℃静置4小时后，2500r/15分钟离心，收集沉淀加水10ml溶介，并对水透析，更换透析液二次，最后置500ml，10mm，PH7.3的磷酸缓冲液中透析平衡过液。透析后的样品液，250Or/15分钟离心去沉淀，上清液以15×85cmSeohade XG75凝胶柱过滤，凝胶柱预先用10mm，PH7.3的磷酸液缓冲平衡，一次上样，以同一缓冲洗脱，分部收集，冷冻干燥得成品。
5、权利要求1的药物组合物在化妆品中的应用。
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