CN1152692C - 蚕沙提取方法、提取物及其用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及提取蚕沙的方法、蚕沙提取物及其新用途。提取方法包括原药材连续或间歇提取，提取溶剂量为原药重量的4-14倍，滤去药渣，加热浓缩后，冷却；加入醇，过滤除去不溶物，将滤液合并进一步浓缩成膏状进行制剂成型。该提取物有治疗和预防糖尿病的作用。

Description

蚕沙提取方法、提取物及其用途

本发明涉及中药蚕沙的提取方法、提取物及其新用途。

在祖国传统医药学中，蚕沙(Faeces bombycis)，为短圆柱形的小颗粒，长2-5mm，直径1.5-3mm。表面灰黑色至绿黑色，粗糙，有6条纵棱及横向环纹，两端钝，呈六棱形，质坚而脆。具青草气，味淡。具有祛风除湿，活血定痛的作用。用于风湿痹痛，关节不遂、皮肤不仁，腰腿冷痛，风疹瘙痒；头风头痛，烘弦风眼。现有技术文献报道蚕沙原药材含有叶绿素、植物醇、类胡萝卜素、维生素A，B及游离氨基酸等成分。该药材中也含有多糖、单糖、植物蛋白、酚类、黄酮类、有机酸、氨基酸等成分。

本发明的目的在于提供一种蚕沙提取物。

本发明的另一目的是提供一种提取蚕沙的提取方法。

本发明的再一目的是提供一种本发明提取物的新用途。该提取物具有降低哺乳动物和人的血糖的作用。

由于采用本发明之方法提取得到的产物具有同现有技术不同的作用，使得蚕沙提取物具有广泛的医药和工业用途，为治疗和预防糖尿病提供一条新的可供选择的途径。

为了完成本发明之上述目的，本发明具体采用的技术方案是：

本发明蚕沙提取物(以下简称FB，)的提取方法包括以下步骤：

A原药材用水在静态或动态下，室温或加热(或回流)连续或间歇提取，提取溶剂量为原药重量的4-14倍；

B滤去药渣，滤液在常压或减压、动态状态下加热至40-100℃浓缩至药材重量1-5倍的体积后冷却；加热温度优选为60-65℃

C然后加入醇使其成为40-80％的浓度，过滤除去不溶物，将滤液合并进一步浓缩成膏状进行制剂成型。

采用间歇提取步骤时可重复1-4次。所述的醇包括本领域技术人员熟知的甲醇、乙醇、异丙醇、丁醇等醇。

本发明之另一提取方法二包括以下步骤：

A原药材用醇类(甲醇、乙醇、异丙醇、丁醇等)或含水的醇(40-80％)在静态或动态下，室温或加热40-100℃提取或回流提取，提取溶剂量为原药重量的4-14倍；

B滤去药渣，滤液在常压或减压、在动态状态下加热40-100℃浓缩至药材重量1-5倍的体积下冷却；

C离心除去不溶物，并加少量水洗不溶物1-3次，合并滤液进一步浓缩成膏状进行制剂成型；

D浸膏可经浓缩液体直接喷雾干燥、冷冻干燥或真空干燥成干粉，而制剂成型。

提取可连续或间歇进行，间歇提取时可重复1-4次，

方法一和方法二的提取液又可采用本领域技术人员公知的方法直接用交换柱(包括大孔树脂、离子交换树脂、葡聚糖凝胶等交换柱)和膜技术进行精制浓缩后，再成浸膏或干粉。

本发明人经过药理实验证明蚕沙提取物具有降血糖活性成分。继续研究其活性成分的药理作用，可开发出更有效的降糖或其他用途的药物。

以下将结合实施例详细描述本发明。

实施例1

取原药材蚕沙1公斤，加入4倍量60％乙醇，浸泡过夜或4小时，缓慢加热至沸腾，回流1小时，过滤；全过程重复一次，合并滤液，减压浓缩，温度40℃，压力85-98KPa，浓缩至完全无乙醇时加入与药材相同重量的水继续加热至沸腾，冷却后离心除去不溶物，并加少量水洗不溶物三次，将滤液合并，在温度60-70℃下减压浓缩，然后减压干燥(温度80℃，压力98Kpa)得干粉。提出率5-7％。

实施例2

取原药材蚕沙1公斤，加入14倍量甲醇，浸泡过夜，缓慢加热至沸腾，回流3小时，过滤；全过程重复四次，合并滤液，减压浓缩，温度100℃，压力98KPa，浓缩至完全无乙醇时加入与药材相同重量的水继续加热至沸腾，冷却后离心除去不溶物，并加少量水洗不溶物三次，将滤液合并，在温度60℃下减压浓缩，然后减压干燥(温度70℃，压力85Kpa)得干粉。提出率5-7％。

实施例3

取原药材1公斤，加入4-倍量的水浸泡过夜，缓慢加热至沸腾，继续回流提取1小时，然后过滤，全过程重复四次，合并滤液，减压浓缩，温度60℃，压力为80KPa，浓缩至药材重量1倍的体积后冷却，然后加入乙醇、使其成为60％的浓度，放置4小时，过滤除去不溶物，合并滤液，在60℃下进一步减压浓缩，然后干燥(温度60-70℃)得干粉。提取率为8.8％。

实施例4

取原药材1公斤，加入14-倍量的水浸泡过夜，缓慢加热至沸腾，继续回流提取1小时，然后过滤，全过程重复一次，合并滤液，减压浓缩，温度  70℃，压力为85-98KPa，浓缩至药材重量1倍的体积后冷却，然后加入95％的乙醇、使其成为60％的浓度，放置4小时，过滤除去不溶物，合并滤液，在50℃下进一步减压浓缩，然后干燥(温度60-70℃)得干粉。提取率为7.2％。

蚕沙提取物治疗糖尿病的主要药效学通过以下实验可以得出结果：

昆明种雄性小鼠，体重22-25g(动物质量合格证号为京动管质字(1994)第029号)，wistar大鼠，雄性，体重180-250g(动物质量合格证号为京动管质字(1994)第030号)均购自中国医学科学院动物研究所繁育厂。四氧嘧啶高血糖小鼠、大鼠模型：给正常动物静脉注射四氧嘧啶(小鼠90-100mg/kg，大鼠45-50mg/kg)，给药72小时后预测血糖(葡萄糖氧化酶法)，选用血糖值在11.1mmol/L以上者进行实验。

试验例1

蚕沙提取物对α-葡萄糖苷酶活性的影响

用犬或大鼠十二指肠的α-葡萄糖苷酶，测定不同浓度的FB对蔗糖酶和麦芽糖酶活性的抑制作用，IC₅₀分别为6.8ug/ml和10.3ug/ml。说明FB具有α葡萄糖苷酶抑制作用。

试验例2

蚕沙提取物对四氧嘧啶高血糖小鼠蔗糖负荷和淀粉负荷后血糖升高的影响

两批四氧嘧啶高血糖小鼠，每批4组，每组10只，试验当天禁食过夜，一组以蔗糖(4.0g/kg)或淀粉(3.0g/kg)灌胃作为对照组，其余组分别灌胃蔗糖或淀粉与不同剂量的FB(0.6g/kg，1.2g/kg，1.8g/kg)，测定0min及给药后30min、60min、120min时的血糖值(表1、2)。

表1.蚕沙提取物对四氧嘧啶高血糖小鼠蔗糖负荷后血糖峰值、峰值时

                 间和曲线下面积的影响(mean±SD，n＝10)

组  别    血糖峰值       峰值时间    AUC

          (mmol/L)       (min.)      (mmol/L.hr)

对照组    22.6±1.7      30          39.0±4.2

FB 0.6    19.3±2.7**    60          34.2±4.8*

FB 1.2    17.1±1.3***   60          30.8±2.8***

FB 1.8    14.8±1.8***   60          28.2±4.8***

AUC为血糖曲线下面积；与对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01，***p＜0.001；FB剂量为g/kg

表2.蚕沙提取物对四氧嘧啶高血糖小鼠淀粉负荷后血糖峰值、峰值

            时间和曲线下面积的影响(mean±SD，n＝10)

组别      血糖峰值       峰值时间   AUC

          (mmol/L)       (min.)     (mmol/L.hr)

对照组    24.4±1.3      30         40.6±4.4

FB 0.6    23.0±2.9      60         36.6±5.9

FB 1.2    21.3±3.1**    60         35.9±4.6*

FB 1.8    19.3±2.2***   60         32.9±3.9***

AUC为血糖曲线下面积；与对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01，***p＜0.001；FB剂量为g/kg

结果说明，不同剂量的FB，能抑制四氧嘧啶高血糖小鼠蔗糖负荷和淀粉负荷后血糖的升高，减少血糖曲线下面积，使血糖峰值后移。

试验例3

蚕沙提取物对正常小鼠葡萄糖负荷后血糖升高的影响

正常小鼠3组，一组以葡萄糖(4.0g/kg)溶液灌胃作为对照组，其余组分别灌胃葡萄糖与不同剂量的FB(0.45g/kg，1.8g/kg)，测定0min及给药后30min、60min、120min时的血糖值。给药组与对照组比较，血糖峰值、峰值时间以及血糖曲线下面积均无统计学差异，说明FB是通过抑制α-葡萄糖苷酶发挥药效作用，而不直接影响葡萄糖的吸收。

试验例4

蚕沙提取物对四氧嘧啶高血糖大鼠血糖和尿糖的影响

三组四氧嘧啶高血糖大鼠，每组10只，第一组进食高蔗糖饲料作为高血糖对照，第二、三组分别进食含不同剂量FB的高蔗糖饲料(折合剂量为0.6g/kg，1.2g/kg)，第四组为正常大鼠(10只)进食正常饲料作为正常对照组。两周后测定血糖并用代谢笼收集尿液测6小时尿糖含量，同时也收集第四组正常大鼠尿液进行测定，作为比较，结果见表3。

表3.蚕沙提取物对四氧嘧啶高血糖大鼠血糖、尿糖的影响

                      (mean±SD，n＝10)

组别           血糖(mmol/L)               尿糖

            未禁食         禁食           (g/6hrs)

正常大鼠    5.4±0.2       3.4±0.5       0

高血糖大鼠  25.9±3.6      16.5±2.1      2.59±0.76

FB 0.6      19.1±3.4***   10.4±3.5***   0.70±0.15***

FB 1.2      10.9±4.4***   8.3±3.7***    0.38±0.22***

与高血糖大鼠组比较，***P＜0.001

结果说明，FB能明显降低四氧嘧啶高血糖大鼠的血糖水平及尿糖含量。

试验例5

蚕沙提取物对健康志愿原受试者馒头试验后血煻升高的影响

健康志愿受试者7名(本研究所工作人员)，男性2名，女性5名，年龄为25-62岁。第一次试验，清晨空腹，每人吃100g馒头(本所食堂提供)作为自身对照；第二次试验随机服用FB 1.5g/人(4人)，3.0g/人(3人)与100g馒头同服，并测定空腹(0min)及食馒头后30min、60min、120min时的血糖值。两次实验间隔1周，结果见表4。

表4.蚕沙提取物对健康志愿受试者馒头试验后血糖峰值、峰值时间

             和曲线下面积的影响(mean±SD)

                  大剂量               小剂量

                  (3.0g/人)            (1.5g/人)

             给药前     给药后        给药前      给药后

N            3           3            4           4

血糖峰值     6.8±1.4    4.6±0.5*    6.5±1.5    5.4±0.9*

(mmol/L)

峰值时间     30          60           30          60

(min.)

AUC          12.2±1.9   8.8±0.5

 11.5±3.1   10.0±1.2(mmol/L.hr)

AUC为血糖曲线下面积；自身前后比较*P＜O.05，

P≈0.05

初步结果说明，FB能使正常人馒头试验后血糖峰值降低，并减少血糖曲线下面积，使峰值后移。

试验例6

蚕沙提取物颗粒剂对2型糖然尿病志愿受试者血糖的影响

已确诊的2型糖尿病志愿受试者10人，年龄在43-83岁之间，其中男性7人，女性3人，患糖尿病时间为1-7年。服药前测空腹血糖和馒头(100g)负荷后1h及2h血糖，隔三日后测定一次服FB的馒头负荷后1h及2h血糖为首次测定，之后连续服用FB，根据患者病情，每日服药2-3次(2.0g/次)，嘱在进食时冲服。服药后2周、4周分别测定空腹血糖和加服FB的馒头负荷后1h及2h血糖。部分受试者8周时也进行了上述测定。在试用过程中，嘱患者继续服用原用药物，但个别患者自行停用了其他抗糖尿病药物。有3位患者由于其他原因未能按照试用设计取得全部实验数据，现将试用结果小结如下(表5)：

             表5.2型糖尿病志愿受试者服用蚕沙提取物

                          前后血糖变化比较

指标	服药前(n＝10)	服用FB
						首次(n＝8)	2周(n＝8)	4周(n＝7)	8周(n＝6)
		空腹血糖值(mg/dl)	183±65	180±66	141±52*					146±54*	131±61*
馒头餐后1h血糖值(mg/dl)	273±64					219±67**	207±67*	200±88*	192±89#
		馒头餐后2h血糖值(mg/dl)	310±88	287±76	247±87*					223±88*	204±92*
血糖曲线下面积(mg/dl·h)	514±130					452±138**	402±136**	386±167*	361±167*

统计方法采用服药前后配对t-test

#P≈0.05  *P＜0.05    **P＜0.01

由上表可见：蚕沙提取物能使2型糖尿病志愿受试者馒头负荷后1h血糖值明显降低，首次服用及服用2周与试用前比较即有显著差异，并随服用时间延长而降低；馒头负荷后2h血糖值在首次服用蚕沙提取物时与试用前无明显差异，服用2周后明显降低，之后有逐渐降低趋势，4周和8周后与试用前比较亦有显著性差异。服用蚕沙提取物后空腹血糖逐渐降低，2周、4周和8周后与试用前比较均有显著差异。血糖曲线下面积在首次服药时即与服药前比较有非常显著的差异，并随着服药时间延长而逐渐降低。服药期间，有三多症状的患者饥饿感、口渴症状明显减轻，饮水量及尿量显著减少，所有患者自觉体力明显增强，自测餐后2-3小时尿糖明显减少或阴性。

上述试验结果表明，蚕沙提取物(FB)具有α-葡萄糖苷酶抑制作用，能明显抑制糖尿病小鼠蔗糖、淀粉负荷后的血糖升高，使血糖峰值、血糖曲线下面积明显降低，并使峰值时间后移；多次给药能使四氧嘧啶糖尿病大鼠空腹血糖、餐后血糖、尿糖明显低于对照组；使正常人馒头试验后血糖峰值降低，并减少血糖曲线下面积，使峰值后移；蚕沙提取物颗粒剂能使2型糖尿病志愿受试者馒头试验后1小时、2小时及血糖曲线下面积明显降低，也能使空腹血糖逐渐下降。因此，蚕沙提取物可用于糖尿病的治疗。

试验例7 急性毒性

将蚕沙提取物配成0.45g/ml，分2次灌胃给药，每次0.2ml/10g体重，两次间隔5小时。总给药量为18.0g/kg(折合生药300g/kg)。连续观察7天，未见动物死亡及其它中毒症状。7天后剖检，亦未见异常。

试验例8 慢性毒性

对wistar大鼠进行了24周的慢性毒性试验，观察生长及死亡。分别于给药第12周、第24周和停药后6周处死部分动物，作血常规及血液生化和肝肾功能检查，取主要脏器行病理检查，检查结果表明：蚕沙提取物组动物各项检查均在正常范围内，与对照组比较无明显差异。说明蚕沙提取物使用安全。人估算剂量蚕沙提取物1-3g/次，一日三次。

Claims (11)

1、蚕沙提取物的制备方法，包括以下步骤：

A蚕沙原药材用水在静态或动态、室温或加热或回流下连续或间歇提取，提取溶剂量为原药重量的4-14倍；

B滤去药渣，滤液在常压或减压、动态状态下加热至40-100℃浓缩至药材重量1-5倍的体积后冷却；然后

C加入醇使其成为40-80％的浓度，过滤除去不溶物，将滤液合并进一步浓缩成膏状进行制剂成型。

2、如权利要求1所述的方法，其特征在于加热温度为60-65℃。

3、如权利要求1或2所述的方法，其特征在于采用间歇提取步骤时可重复1-4次。

4、蚕沙提取物的制备方法，包括以下步骤：

A蚕沙原药材用水或含水的40-80％低级醇在静态或动态、室温或加热40-100℃下提取或回流提取，提取溶剂量为原药重量的4-14倍；

B滤去药渣，滤液在常压或减压、在动态状态下加热40-100℃浓缩至药材重量1-5倍的体积下冷却；

C离心除去不溶物，并加少量水洗不溶物1-3次，合并滤液进一步浓缩成浸膏进行制剂成型。

5、如权利要求4所述的方法，其特征在于采用间歇提取步骤时可重复1-4次。

6、如权利要求4所述的方法，其特征在于浸膏可经浓缩液体直接喷雾干燥、冷冻干燥或真空干燥成干粉。

7、如权利要求4所述的方法，其特征在于可直接用交换柱和膜技术进行精制浓缩后，再成浸膏或干粉。

8、如权利要求7所述的方法，其特征在于所述交换柱包括大孔树脂、离子交换树脂、葡聚糖凝胶交换柱。

9、如权利要求1所述的方法提取得到的蚕沙提取物。

10、如权利要求4所述的方法提取得到的蚕沙提取物。

11、用权利要求1或4所述的方法提取得到的蚕沙提取物在制备治疗和预防哺乳动物和人糖尿病药物的应用。