CN1698787A

CN1698787A - 一种治疗脑中风的脑血栓泡腾片及其制备方法

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Publication number: CN1698787A
Application number: CNA2005100722776A
Authority: CN
Inventors: 杨义芳; 金隽迪
Original assignee: Shanghai Institute of Pharmaceutical Industry; Zhejiang Hisun Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Shanghai Institute of Pharmaceutical Industry; Zhejiang Hisun Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2005-05-30
Filing date: 2005-05-30
Publication date: 2005-11-23
Anticipated expiration: 2025-05-30
Also published as: CN100350928C

Abstract

本发明涉及一种治疗脑中风的中药泡腾片，即脑血栓泡腾片及其制备方法。该方法是采用直接压片法压制泡腾片。该制剂处方由脑血栓干浸膏粉、交联聚乙烯吡咯烷酮、甘露醇、无水柠檬酸、碳酸氢钠、微晶纤维素、微粉硅胶、硬脂酸镁、滑石粉与阿斯巴甜组成。素片的压力范围为：5.5N～12.5N，崩解时间可达2′12″，泡腾时间可达3′50″。素片用蓝色薄膜衣材料包衣，包衣后速溶片为异型片，崩解时间达3′56″，泡腾时间达6′16″。上述方法制成的泡腾片不需水送服，在口内遇到唾液迅速溶解，部分药物可通过口腔、舌下和舌粘膜转运，吸收入血液，起效迅速，提高了药物的吸收和生物利用度。同时起到服用方便和减少对食管和胃肠道的刺激作用。

Description

一种治疗脑中风的脑血栓泡腾片及其制备方法

发明领域

本发明涉及一种治疗脑中风的中药制剂，具体而言是指以脑血栓干浸膏为原料的脑血栓泡腾片及其制备方法。

背景技术

中风主要发生于中老年人，90％的中风发生在40岁以上的患者，且年龄越大发病率则越高，通常每增加10岁发病机会都会增加1倍。中国是世界上脑中风发生率最高的国家之一，现有脑中风患者2000多万人。急性脑血管病已跃居城市人口死因首位，每年还增加150万新患者。随着我国人口老龄化的到来及中风发作年龄段的提前，中风病的发病率将会越来越高。其具有难治愈、复发率高、终身服药、并发症多、病死率高的特点，一直是危害人类健康的大敌。因此，加强老年脑血管病的预防和治疗势在必行。

目前用于治疗中风的西药主要为溶栓药和通道阻断剂，但应用溶栓药物治疗最大的缺陷是它只适用于中风发生后3-6小时内，如超过3小时，溶栓后可导致脑内出血和脑水肿，反而加重病情，这些继发效应是由于再灌注损伤引起的。遗憾的是，当患者发生中风后一般在3小时内不能到达医院，另外，中风还需要CAT或MRI来排除出血性中风，由此还需要30分钟以上。因此，能接受溶栓治疗的机率只有1～2％。目前市场上常用的溶栓药替奈替普酶、尿激酶、链激酶、去纤酶、组织型纤溶酶原激活剂(tPA)、r-ProUK等治疗还可增加治疗后出血的可能性，由此进一步限制了急性中风患者的早期治疗。虽然某些抗血栓药，如阿斯匹林，warfarin，氯吡格雷(clopidogrel)等被广泛用于预防治疗，但很明显，一个安全有效的能用于中风早期的治疗方法是非常关键的。

目前市售的脑血栓片由宋·许叔微《普济本事方》中抵当圆丸加减而来，后被制成片剂由天津药品检验所起草载入1998年版《中华人民共和国卫生部药品标准·中药成方制剂》第十九册，因其用于中风先兆及脑血栓形成恢复期的疗效较好，被收入国家《基本药物目录》供临床医师选用，并在片剂的基础上开发有口服液。

因羚羊角被列入《濒危野生动植物种国际贸易公约》，属国家一级保护动物；牛黄属药源紧缺类药材，难以满足临床用药需要，大量依赖进口。因此，本发明人经过潜心研究，用山羊角或水牛角替代羚羊角、用体外培育牛黄、培植牛黄或人工牛黄替代牛黄入药，并且对原处方工艺进行了优化和改进。另外，由于原剂型虽具有抗血栓、扩张血管等作用，但由于赤芍等4味以生药细粉直接压片，故存在生物利用度低，药物吸收不完全且用药量大等缺点。本发明人在传统脑血栓片的基础上进行剂型工艺改进，对脑血栓泡腾片的制备进行了潜心研究，以前阶段精心提取的脑血栓干浸膏作为原料，通过正交试验设计，筛选出优化的制备工艺，开发成泡腾片，使其具有服用方便，口感较好，增加患者顺应性的优点，从而更适合临床应用。由此完成了本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供了一种治疗脑中风的以脑血栓干浸膏为原料的脑血栓泡腾片；

本发明的另一目的是提供了一种治疗脑中风的脑血栓泡腾片的制备方法。

本发明是通过下列技术方案实现的：处方(原料组成为)：

红花 900g 当归 900g 水蛭(制) 900g 赤芍 900g

桃仁 900g 川芎 900g 丹参 900g 土鳖虫 225g

山羊角或水牛角600～1500g 体外培育牛黄、培植牛黄或人工牛黄3～30g

制法：由下列步骤制备：

(1)将上述中药原料粉碎备用；

(2)取当归、赤芍、川芎、丹参、桃仁等5味，加入水，浸泡，水蒸气提取挥发油得油水混合液；滤液及滤渣备用；

(3)在步骤(2)中收集得的油水混合液中加入包合剂包合，包合剂可以使用β-环糊精，分散包合得挥发油包合液，优选采用高剪切法包合；

(4)将步骤(2)得到的水提母液减压低温回收，回收后的浓缩液量等于当归等5味中药原料的投药量，加乙醇搅拌至含醇量为55～85％(V/V)，冷藏放置，过滤，得水提醇沉液；

(5)取红花加入水煎煮1～3次，滤过，滤液回收至红花的投药量；

(6)步骤(5)中得到的红花滤渣与步骤(2)中的滤渣合并，加入相当于该生药量6～10倍量的50～90％乙醇(V/V)，加热回流提取1～3次，滤过，醇提液与步骤(4)中的水提醇沉液合并，回收乙醇至投药量得到醇提取液；

(7)取水蛭加乙醇浸泡，渗漉，收集渗漉液，药渣挥去乙醇备用；

(8)渗漉液回收乙醇至投药量的1～3倍，加入包合剂包合得到水蛭包合液；

(9)取土鳖虫与水蛭药渣合并，加入水煎煮1～3次，滤过，滤液回收至投药量；

(10)取山羊角或水牛角加入水煎煮3次，滤过，滤液备用；

(11)山羊角或水牛角药渣加入0.25％氢氧化钠溶液(W/V)，加热水解，滤过，碱水解液加稀HCl调pH至7.0，与步骤(10)得到的山羊角或水牛角水提液合并，回收至抽药量得到山羊角或水牛角提取液；

(12)取体外培育牛黄、培植牛黄或人工牛黄加入水，高剪切分散粉碎；

(13)合并步骤(3)得到的挥发油包合水溶液、步骤(5)得到的红花水提液、步骤(6)得到的当归、红花等6味药醇提取液、步骤(8)得到的水蛭醇提物β-环糊精包合水溶液、步骤(9)得到的土鳖虫与水蛭水提液、步骤(11)得到的山羊角或水牛角提取液、和步骤

(12)得到的牛黄粉碎液，再加入适量的桔子香精，干燥(可以采用喷雾干燥，也可采用真空干燥、红外干燥、微波干燥等其他适宜的干燥方法进行干燥)，得干浸膏粉末；

(14)使用制备泡腾片的常规的方法和辅料，将步骤(13)得到的干浸膏制成泡腾片。其中，体外培育牛黄由武汉大鹏药业有限公司生产，培植牛黄由中国牛黄技术开发公司生产，人工牛黄由上海贝斯欧药业有限公司生产。(下同)

本发明较优的技术方案是：

处方：

红花 900g 当归 900g 水蛭(制) 900g 赤芍 900g

桃仁 900g 川芎 900g 丹参 900g 土鳖虫 225g

山羊角或水牛角900～1200g 体外培育牛黄或培植牛黄6～18g

制法：由下列步骤制备：

(1)当归、赤芍、川芎、丹参等4味粉碎成过10～50目筛的粉末，桃仁粉碎成过10～30目筛的粉末，红花、水蛭、土鳖虫等3味粉碎过20目，山羊角粗粉碎，体外培育牛黄碾碎，备用；

(2)取当归、赤芍、川芎、丹参、桃仁等5味，加入相当于该生药量6～10倍的水，浸泡0～2小时，水蒸气提取挥发油3～9小时，滤过，得油水混合液；水提母液及滤渣避光保存，备用；

(3)在步骤(2)中收集得的油水混合液中加入70g～120g的β-环糊精包合剂，40～60℃水浴采用高剪切法分散包合2～4小时，剪切速度为1000～13000rpm，得挥发油β-环糊精包合液；

(4)将步骤(2)得到的水提母液减压低温回收至投药量，加乙醇搅拌至含醇量为60-70％(V/V)，冷藏放置，过滤，得水提醇沉液，避光保存；

(5)取红花加入相当于红花生药量的20～30倍水，煎煮1～3次，每次1～3小时，滤过，滤液回收至抭药量，避光保存；

(6)将步骤(5)的红花滤渣与步骤(2)的滤渣合并，加入生药量6～10倍量的60～80％乙醇(V/V)(32.4～54L)，加热回流提取1～3次，每次1～3小时，滤过，该醇提液与步骤(4)得到的水提醇沉液合并，回收乙醇至投药量(5.4L)，得到醇提液；

(7)取水蛭加生药量1倍的70％乙醇(V/V)(0.9L)浸泡24小时，渗漉，收集渗漉液，药渣挥去乙醇，备用；

(8)渗漉液回收乙醇至投药量的2倍，加入300～450gβ-环糊精包合剂，60℃水浴搅拌，搅拌速度为1000rpm得水蛭β-环糊精包合液，避光保存；

(9)取土鳖虫与水蛭药渣合并，加入相当于生药量3～5倍(3.375～5.625L)的水煎煮1～3次，每次1～2小时，滤过，滤液回收至投药量，保存；

(10)取山羊角或水牛角加入相当于生药量10倍(即加入水量相当于山羊角或水牛角投药量的10倍量)的水煎煮3次，每次2小时，滤过，滤液备用；

(11)山羊角或水牛角药渣加入相当于生药量8倍的0.25％氢氧化钠溶液(W/V)，加热水解4小时，滤过，碱水解液加稀HCL调pH至7.0，与山羊角或水牛角水提液合并，回收至投药量，避光保存；

(12)取体外培育牛黄或培植牛黄，加30倍量的水，高剪切分散粉碎2小时，速度为2200～28000rpm；

(13)合并步骤(3)得到的挥发油β-环糊精包合水溶液、步骤(5)得到的红花水提液、步骤(6)得到的当归、赤芍、川芎、丹参、桃仁、红花等6味药醇提液、步骤(8)得到的水蛭醇提物β-环糊精包合水溶液、步骤(9)得到的水提液、步骤(11)得到的山羊角或水牛角提取液、与步骤(12)得到的牛黄粉碎液，再加入适量的桔子香精，喷雾干燥(也可采用真空干燥、红外干燥、微波干燥等其他适宜的干燥方法进行干燥)，进口温度：160℃，出口温度：82℃，得干浸膏粉末。

(14)按干浸膏粉30～42％，交联聚乙烯比咯烷酮10～30％，甘露醇3～15％，无水柠檬酸6～12％，碳酸氢钠10～18％，微晶纤维素5～16％，微粉硅胶2～3.5％，硬脂酸镁0.4％，滑石粉1.8％，阿斯帕坦0.5％的比例混匀，直接压片。

本发明优选的技术方案是：

处方：

红花 900g 当归 900g 水蛭(制) 900g 赤芍 900g

桃仁 900g 川芎 900g 丹参 900g 土鳖虫 225g

山羊角 1125g 体外培育牛黄 125g

制法：由下列步骤制备：

(1)当归、赤芍、川芎、丹参等4味粉碎成过50目筛的细粉，桃仁粉碎成过30目筛的细粉，红花、水蛭、土鳖虫等3味粉碎过20目，山羊角粗粉碎，体外培育牛黄碾碎，备用；

(2)取当归、赤芍、川芎、丹参、桃仁等5味，加入相当于生药量10倍的水，浸泡1小时，水蒸气提取挥发油，滤过，得油水混合液；水提母液及滤渣避光保存，备用；

(3)在步骤(2)中收集得的油水混合液中加入933g的β-环糊精，50℃水浴高剪切分散包合4小时，剪切速度为13000rpm，得挥发油β-环糊精包合液；

(4)将步骤(2)得到的水提母液减压低温回收至投药量，加95％乙醇(V/V)搅拌至含醇量为60％(V/V)，冷藏放置24小时，过滤，得水提醇沉液避光保存；

(5)取红花加入相当于生药量的30倍水，煎煮2次，每次1小时，滤过，滤液回收至投药量得到红花水提液，避光保存；

(6)将步骤(5)的红花滤渣与步骤(2)的滤渣合并，加入生药量10倍量的70％乙醇(V/V)，加热回流提取3次，每次3小时，滤过，该醇提液与步骤(4)得到的水提醇沉液合并，回收乙醇至投药量，得到醇提液5.4L；

(7)取水蛭加生药量1倍的70％乙醇(V/V)浸泡24小时，渗漉，渗漉速度2.5ml/分钟，收集相当于生药量10倍的渗漉液，药渣挥去乙醇，备用；

(8)渗漉液回收乙醇至投药量的2倍，加入3028gβ-环糊精，60℃水溶搅拌1.5小时，搅拌速度为1000rpm得水蛭β-环糊精包合液，避光保存；

(9)取土鳖虫与水蛭药渣合并，加入相当于药量4倍的水煎煮3次，每次2小时，滤过，滤液回收至投药量，保存；

(10)取山羊角加入相当于生药量10倍的水煎煮3次，每次2小时，滤过，滤液备用；

(11)将步骤(10)得到的山羊角药渣加入相当于生药量8倍的025％氢氧化钠溶液(W/V)，加热水解4小时，补充水分，滤过，碱水解液加烯HCL调pH至7.0，与步骤(10)的山羊角水提液合并，回收至投药量得到山羊角提取液，避光保存；

(12)取体外培育牛黄，加30倍量的水，高剪切分散粉碎2小时，速度为22000rpm；

(13)合并步骤(3)得到的挥发油β-环糊精包合水溶液、步骤(5)得到的红花水提液、步骤(6)得到的当归、红花等6味药醇提液、步骤(8)得到的水蛭醇提物β-环糊精包合水溶液、步骤(9)得到的水提液、步骤(11)得到的山羊角提取液、、与步骤(12)得到的牛黄粉碎液，再加入适量的桔子香精，喷雾干燥，进口温度：160℃，出口温度：82℃，转速：21000rpm(350HZ)，得干浸膏粉末。

(14)按干浸膏粉39％，交联聚乙烯吡咯烷酮15％，甘露醇3.5％，无水柠檬9.94％，碳酸氢钠15.06％，微晶纤维素11.8％，微粉硅胶3％，硬脂酸镁0.4％，滑石粉1.8％，阿斯帕坦0.5％的比例混匀，直接压片，以OPADRY II(85G60989 BLUE)为包衣材料，备制成18％的水包衣液，进风温度：50℃，片床温度：42℃，雾化压力：3bar，包衣锅转速：6～8rpm，包衣增重3％，包蓝色薄膜衣，即得。

本发明制备得到的脑血栓泡腾片具有起效快、生物利用度高、服用方便、产品质量稳定、患者顺应性好等优点。

本发明的泡腾片的素片的压力范围为：5.5N～12.5N，崩解时间可达2’12”，泡腾时间可达3’50”。素片用蓝色薄膜衣材料包衣，包衣后速溶片为异型片，崩解时间达3’56”，泡腾时间达6’16”。上述方法制成的泡腾片不需水送服，在口内遇到唾液迅速溶解，部分药物可通过口腔、舌下和舌粘膜转运，吸收入血液，起效迅速，提高了药物的吸收和生物利用度。同时起到服用方便和减少对食管和胃肠道的刺激作用。

本发明所制备的脑血栓泡腾片可用于中风中经络之瘀阻脑络症的治疗，包括中风先兆及西医之脑血栓形成恢复期，能够有效治疗瘀阻脑络证所引起的半身不遂、口眼歪斜、言语不利等症状。

附图说明：

附图1：牛黄粒度分析图

具体实施方式：

下面通过实施例进一步说明本发明。应该理解的是，本发明的实施例是用于说明本发明而不是对本发明的限制。根据本发明的实质对本发明进行的简单改进都属于本发明要求保护的范围。另外，在本发明中，(v/v)表示体积比浓度或者体积比；(w/w)表示重量比浓度或者重量比；(w/v)表示重量/体积比浓度或者重量/体积比，其对应的单位是(克/毫升)；(rpm)表示每分钟的转数(转/分钟)；(h)表示小时。

实施例1.当归、川芎等提取挥发油工艺的研究

当归、川芎、桃仁三味富含挥发油，如与其它几味合煎，可能对其提取有影响，而中药复方制剂强调协同作用，故对当归、川芎、桃仁三味药合煎提油，与五味药合煎提油进行对比。两者以挥发油得率为主要指标，各味药的活性成分为辅助指标进行正交设计，所得的最佳工艺进行比较以确定提油方案。

1.1三味药合煎提油正交设计实验

采用正交实验法来确定当归、川芎、桃仁三味药的挥发油最佳提取条件，选择药材细度、加水量、煎煮时间3个因素作为考察因素，每个因素选择3个水平设计L9(3³)进行考察，如下表：

表1 三味药合提挥发油因素水平表

水平	因素
	因素			提取时间A(小时)	加水量B(倍)	细度C(目)
	123	369	6810	提取时间A(小时)	加水量B(倍)	细度C(目)	401020

按照处方比例称取当归、川芎、桃仁各70g，共210g，称9份，依正交实验方案表进行实验，分析结果如表2：

表2三味药合煎正交设计试验分析结果

编号 A B C 挥发油含量(％) 阿魏酸含量(mg) 川芎嗪含量(mg) 总得分

1 1 1 1 0.2381 12.453 10.584 51.81257

2 1 2 2 0.1381 25.578 33.18 54.68456

3 1 3 3 0.1333 42.651 41.79 69.65035

4 2 1 3 0.1905 5.901 12.159 40.19693

5 2 2 1 0.3095 20.328 33.012 78.6088

6 2 3 2 0.1524 26.502 46.137 63.26142

7 3 1 2 0.1667 9.597 28.308 45.95218

8 3 2 3 0.1905 14.7 37.968 57.57399

9 3 3 1 0.2571 23.268 40.005 75.24289

K1 176.1475 137.9617 205.6643

K2 182.0672 190.8673 163.8982

K3 178.7691 208.1546 167.4213

R 1.973222 23.39765 13.92203

评分标准：取各指标成分中最大含量值X_M为100分，各个实验该成分含量计分为X_i’＝X_i/X_M*100％，再乘以各自系数后各指标相加的总分为该实验得分。以挥发油为主要指标，阿魏酸、川芎嗪为辅助指标，我们采用加权评分法综合评估最佳条件，其中挥发油得率占50％(系数为0.5)，阿魏酸(来源于川芎、当归)占30％(系数为0.3)，川芎嗪占20％(系数为0.2)。统计学处理如下表：

表3 方差分析结果

A B C

K₁ ² 31027.94 19083.43 42297.79

K₂ ² 33148.45 36430.35 26862.61

K₃ ² 31958.37 43328.36 28029.88

32044.92 32930.71 32396.76

SS 5.865836 891.6569 357.705

F 1 151.9007 60.93782

P P＞0.1 P＜0.01 P＜0.01

显著性无极显著极显著

由上可知，各因素对提取影响大小次序为：提取时间(A)＞加水量(B)＞细度(C)，A因素无显著性差异，各因素最佳条件为：A₂B₃C₁，即40目，加水10倍量，提取6小时。

1.2当归、川芎、桃仁、丹参、赤芍五味药合煎提油正交设计实验

采用正交实验法来确定当归、川芎等5味药的最佳提油条件，采用细度、浸泡时间、加水量、提取时间为4个因素，每个因素3个水平进行考察。结果见表4：

表4五味药合煎提取挥发抽因素水平表

水平	因素
	因素				浸泡时间A(小时)	细度B(目)	加水量C(倍)	提取时间(小时)
	123	012	102050	6810	浸泡时间A(小时)	细度B(目)	加水量C(倍)	提取时间(小时)	369

按处方比例称取当归、川芎、桃仁、丹参、赤芍各100g，共500g，称9份，依正交实验方案表4 进行实验，所得油用乙醚萃取2次，—次25ml，一次10ml，挥干乙醚，称重。分析结果如丧5：

表5 五味药合煎正交设计试验分析结果

A B C D 挥发油阿魏酸川芎嗪丹参素原儿茶芍药苷得分

编号含量含量含量含量醛含量含量

(％) (mg) (mg) (mg) (mg) (mg)

1 1 1 1 1 0.17 99.75 13.20 361.7 37.18 14.10 46.59

2 1 2 2 2 0.29 92.75 16.77 482.9 73.29 12.90 59.76

3 1 3 3 3 0.58 116.6 20.27 513.1 82.60 12.80 84.99

4 2 1 2 3 0.30 64.00 24.37 545.7 120.34 13.41 64.51

5 2 2 3 1 0.22 152.85 29.53 300.2 49.39 19.37 64.62

6 2 3 1 2 0.43 98.70 21.70 445.5 67.63 16.13 71.85

7 3 1 3 2 0.38 102.5 27.49 371.3 86.05 18.81 72.56

8 3 2 1 3 0.45 47.55 19.91 502.4 89.05 13.26 67.87

9 3 3 2 1 0.21 126.5 23.92 281.2 46.86 17.60 57.27

K1 191.34 183.66 186.31 168.48

K2 200.98 192.25 181.54 204.17

K3 197.70 214.11 222.17 217.39

R 3.21 12.80 13.54 16.30

评分方法同三味药合煎提油。采用加权评分法综合评估最佳条件，其中挥发油得率为主要指标占40％(系数为0.4)，阿魏酸占20％(系数为02)，川芎嗪、原儿茶醛、丹参素、芍药苷各占10％(各自系数为0.1)。

统计学处理如下表：

表6方差分析结果

A B C D

K₁ ² 36611.00 30877.52 34711.42 28385.51

K₂ ² 40392.96 36960.06 32956.77 41685.39

K₃ ² 39085.29 45843.09 49359.51 47258.41

38696.42 38844.72 39009.23 39109.77

SS 16.02 164.32 328.83 429.37

F 1 10.26 20.53 26.80

P P＞0.1 P＜0.01 P＜0.01 P＜0.01

显著性无极显著极显著极显著

由上可知，各因素对五味药合提油影响大小为：提取时间(D)＞加水量(C)＞细度(B)＞浸泡时间(A)，其中，B、C、D都有极显著性影响，最佳条件为：A₂B₃C₃D₃，即50目，浸泡1小时，加10倍量水，提取9小时。

1.3验证实验

以最佳条件用相同量药材提油两次，所得结果进行三味药与五味药合提对比。

药材来源：1.甘肃岷县当归，四川灌县川芎，河南洛阳桃仁，山东平邑丹参与辽宁抚顺赤芍(同

五味药正交)

2.甘肃岷县当归，四川灌县川芎，河南洛阳桃仁，河南洛阳丹参与甘肃文县赤芍

表7不同提取方法的验证性

三味药	五味药
	五味药		药源1	药源2
	挥发油得率(g)阿魏酸含量(mg)川芎嗪含量(mg)丹参素含量(mg)原儿茶醛含量(mg)芍药苷含量(mg)	0.953188.6557.0	药源1	药源2	1.5575109.139.52501.590.551613.75	1.299997.635.825844.0159.0539.25

两种方案均以挥发油得率(系数为0.5)，阿魏酸含量(0.3)，川芎嗪含量(0.2)计算得分。见下表

表8两种方案得分表

三味药	五味药
	五味药		药源1	药源2
	挥发油阿魏酸川芎嗪得分	47.1244.2689.6154.76	药源1	药源2	77.0154.4790.2172.89	64.2648.7381.7763.10

从上可看出，三味药合煎提油综合评分小于五味药综合评分，说明丹参、赤芍与当归等三味药同煮有利于挥发油提取及阿魏酸、川芎嗪的溶出。

实施例2.挥发油包合最佳工艺筛选研究

混合药物提出的挥发油有较强的刺激性气味，若直接入药，不利于直接服用，且容易挥发，不易于保存，从而难以控制制剂的质量。如做为分子经包合后，溶解度增大，稳定性提高，液体挥发油可粉末化，可防止其挥发，同时掩盖不良气味或味道，降低刺激性与毒副作用。采用β-CD(β-环糊精，下同)为包合材料，对中药挥发油有较好包合效果。对其包合方法和条件进行了如下考察。

2.1包合方法筛选

挥发油包合方法有以下几种：①电动恒温搅拌法；②磁力恒温搅拌法；③超声法；④高剪切分散法；⑤研磨法。其中前四种为饱和水溶液法，后一个为固液法。而高剪切分散法所用仪器为高剪切分散剪切仪。现在相同条件下对5种方法作了对比，所用的挥发油系混合药材水蒸气蒸馏法提出，经无水乙醚萃取，无水硫酸钠脱水干燥，为黄色油状物。

21.1不同包合方法的包合物的制备

方法①～④：称取β-CD 5g，加蒸馏水75ml，加热溶解，滴加0.5g挥发油，60℃恒温搅拌、超声或高剪切分散2.5小时，冷藏放置24小时，抽滤，用15ml水，5ml石油醚洗涤沉淀，70℃减压干燥，得淡黄色固形物。

方法⑤：称取β-CD 5g，置研钵中，加水20ml，加0.5g油，研磨2.5小时，冷藏放置24小时，抽滤，用15ml水，5ml石油醚洗涤沉淀，70℃减压干燥，得淡黄色固形物。

2.1.2不同包合方法的得率

将上述包合物置圆底烧瓶，加蒸馏水100ml，加热蒸馏5小时，收集挥发油，以乙醚萃取，无水硫酸钠脱水干燥，挥干乙醚，精密称重。得油率见下表：

表9β-CD包合挥发油不同方法的比较

电动搅拌法磁力搅拌法超声法剪切法研磨法

得油数(g) 0.1743 0.2268 0.169 0.2651 0.2147

得油率％ 33.58 45.27 33.81 52.20 42.68

由上可知，五种方法得油率比较结果为：剪切法＞磁力搅拌法＞研磨法＞超声法＞电动搅拌法。故决定优选采用高剪切法。

2.2挥发油包合条件研究

选择混合油与β-CD比例、剪切温度、剪切速度、剪切时间为4个因素，每个因素选择三个水平，进行四因素三水平的正交实验观察，见下表：

表10挥发油、β-CD包合正交因素水平表

水平	因素
	因素				油β-CDA	包合温度B(℃)	剪切速度C(rpm)	包合时间D(小时)
	123	1∶61∶81∶10	405060	100013001600	油β-CDA	包合温度B(℃)	剪切速度C(rpm)	包合时间D(小时)	234

称取β-CD，加12.5倍量蒸馏水，加热搅拌使溶解，在恒温条件滴加挥发油1g，控制温度及剪切速度对挥发油进行包合，并维持一定时间，取出，冷藏24小时，抽滤，用少量石油醚洗涤沉淀，滤渣于40℃减压干燥4小时，得黄白色粉末状包合物，称重。

取1g挥发油混合物，置圆底烧瓶，加蒸馏水200ml，加热蒸馏5小时，收集挥发油，以乙醚萃取，无水硫酸钠脱水干燥，挥干乙醚，精密称重。结果，空白得油：0.4053g；则回收率为：40.53％。

依正交表10所得的包合物按空白回收率测定方法测定挥发油。所得结果如下表：

表11剪切法β-CD包合挥发油正交实验分析结果

实验号 A B C D 所加挥发油量(g) 所得挥发油量(g) 滤液固形物得率油利用率(％)

1 1 1 1 1 1.0896 0.1375 86.69 31.13

2 1 2 2 2 1.0022 0.281 72.96 69.18

3 1 3 3 3 1.0436 0.2224 59.57 52.57

4 2 1 2 3 1.0518 0.3363 61.18 78.88

5 2 2 3 1 1.0145 0.2598 57.85 63.18

6 2 3 1 2 0.9907 0.1398 52.24 34.81

7 3 1 3 2 1.0025 0.2763 73.12 67.99

8 3 2 1 3 1.0121 0.2946 44.58 71.81

9 3 3 2 1 1.099 0.1651 48.03 37.06

K1 152.88 178.01 137.76 131.37

K2 176.87 204.16 185.11 171.98

K3 176.87 124.45 183.75 203.27

R 8.00 26.57 15.79 23.96

注：固形物得率＝[包合物重量/(β-CD+挥发油加入量)]×100％

油利用率＝[所得挥发油量/(挥发油加入量*空白回收率)]×100％

统计学处理如下表：

表12方差分析结果

A B C D

K₁ ² 23372.06 31686.79 18976.69 17258.64

K₂ ² 31283.62 41681.33 34267.40 29576.96

K₃ ² 31281.85 15487.76 33763.07 41317.09

28645.84 29618.63 29002.38 29384.23

SS 127.89 1100.68 484.44 866.28

F 1 8.606211 3.76 6.77

p P＜0.05 P＜0.05 P＜0.05

显著性无无极显著极显著

由上可知，剪切法包合挥发油的各因素影响大小次序为：B(包合温度)＞D(包合时间)＞C(剪切速度)＞A(β-CD、油比例)，B、D因素有极显著性差异，各因素最佳条件为：A₂B₂C₂D₃，即β-CD、油比例为1∶8，50℃1300rpm剪切4小时。

2.3挥发油包合工艺验证性实验

按最佳包合工艺进行验证性实验，n＝2，结果如下：

表13挥发油包合物最佳制备工艺验证性实验结果

实验号挥发油加入量(g) 滤液固形物得率(％) 所得挥发油量(g) 油利用率(％)

1 2.0059 78.27 0.6741 82.92

2 2.334 77.92 0.7712 81.53

由上表看，油利用率不高为滤液固形物得率低所致，故将包合液不经过滤蒸干所得的固形物直接提油，计算得油率。

实施例3.当归等水提液除杂工艺研究

选用醇沉处理或用天然澄清剂处理，两种除杂方式和混合药材水提液原液进行多指标对比，从而选取较好的除杂方式。

3.1醇沉除杂工艺

用乙醇醇沉除杂时，川芎、当归水提液以浓度为60％的乙醇(V/V)醇沉为佳，赤芍、丹参则以60～70％(V/V)乙醇醇沉较好，则优选用60％(V/V)为乙醇醇沉浓度。

取川芎、当归、赤芍、丹参、桃仁五味提油后的水提液，60℃避光真空浓缩至密度为1.02，加95％乙醇(V/V)醇沉，使之浓度达到60％(V/V)，冷藏放置24小时，抽滤，滤液备用。

3.2澄清剂除杂工艺

考察了两种澄清剂：汉威斯特澄清剂(天津汉威斯特科技开发有限公司)和正天成澄清剂(天津正天成澄清技术有限公司)。取混合药材水提液，浓缩至生药∶水＝1∶5，测得其pH＝5，分成两分，分别于恒温65℃搅拌加入3份两种澄清剂的B组分(每100ml浓缩液加入30ml 1％B)，每30分钟搅拌1次，2小时后加入1.5份A，加法同B，2小时后离心，取上清液备用。

3.3醇沉样品、澄清剂样品及水提液原液有效成分三种样品液固形物得率

取相当于10g生药的样品液于水浴80℃蒸发至干，取出至60℃抽真空12小时，取出称重，计算固形物得率。结果见下表：

表14不同除杂方法比较

阿魏酸原儿茶醛丹参素芍药苷川芎嗪固形物得率(％)

水提醇沉样品一个处方中含量(mg) 109.45 126.05 860.5 539 18.850

占原液的百分数(％) 85.75 89.81 84.28 74.19 46.00

汉威斯特澄清一个处方中含量(mg) 121.35 136.5 921.0 53.65 40.494

剂样品占原液的百分数(％) 95.10 97.26 90.21 73.85 98.81

正天成澄清剂一个处方中含量(mg) 125.85 128.8 91.75 521.0 39.673

样品占原液的百分数(％) 98.63 88.01 89.86 71.71 96.81

水提液原液 127.60 140.35 10.21 726.5 40.981

由此可见，水提醇沉工艺能保留80％以上的水提液原液中的有效成分，而固形物却只有原液的46％，大大提高了有效成分的浓度，且较大程度上减少了浸膏量。加入澄清剂工艺虽能保留90％以上，但固形物却是原液的97％，并末起到有效的除杂效果。因此，我们优选用水提醇沉工艺作为该方的除杂工艺。

实施例4.红花水提工艺研究

红花有效成分红花黄色素对血液有较好抗凝作用以及对治疗缺血性中风有重要意义，同时红花中其他水溶性成分对脑卒中引起的相应症状也有一定作用。因此，本方中红花水提工艺用以黄色素为主的总吸收度来评价，采用正交设计对影响水溶性有效成分提取的因素进行考察。

4.1红花水提正交实验设计

选择药材细度、溶媒量、提取时间、提取次数为4个因素，每个因素选择三个水平，进行四因素三水平的正交实验考察，见下表：

表15红花水提正交因素水平表

水平	因素
	因素				药材细度A(目)	溶媒量B(倍)	提取时间C(小时)	提取次数D(次)
	123	02050	202530	123	药材细度A(目)	溶媒量B(倍)	提取时间C(小时)	提取次数D(次)	123

取红花药材5g(细度按上表)于一定量沸水按上表回流提取，抽滤，滤液稀释一定倍数照分光光度法，在401nm波长处测定吸收度。正交实验结果如下表：

表16红花水提正交实验分析结果

药材细度A(目) 溶媒量B(倍) 提取时间C(小时) 提取次数D(次) 吸收值稀释倍数

1 1 1 1 1 0.335 250

2 1 2 2 2 0.371 100

3 1 3 3 3 0.376 55.6

4 2 1 2 3 0.381 83.3

5 2 2 3 1 0.375 200

6 2 3 1 2 0.460 83.3

7 3 1 3 2 0.366 125

8 3 2 1 3 0.443 66.7

9 3 3 2 1 0.419 166.7

K₁ 1.082 1.082 1.238 1.129

K₂ 1.216 1.189 1.171 1.197

K₃ 1.228 1.255 1.117 1.200

R 0.048 0.067 0.041 0.024

统计学处理如下：

表17 方差分析结果

A B C D

K₁ ² 1.1707 1.1707 1.5326 1.2746

K₂ ² 1.4787 1.4137 1.3712 1.4328

K₃ ² 1.5080 1.5750 1.2477 1.44

1.3858 1.3865 1.3838 1.3825

SS 4.4*10^-3 5.1*10³ 2.4*10³ 1.07*10³

F 4.11 4.77 2.24 1

P 0.05＜P＜0.1 0.01＜P＜0.05 P＞0.1 P＞0.1

显著性无显著无无

结果显示，因素B即提取溶媒量对红花黄色素等水溶性有效成分的提取率有显著影响，其余因素都无显蓍影响，实验得出的最佳条件是A₃B₃C₁C₃。即药材细度为50目，30倍水，提取3次，每次1小时。综合对节能简便等工艺条件的考虑，可将A₂B₃C₁D₂视为最佳工艺，即药材细度为20目，30倍水，提取2次，每次1小时。

4.2验证实验

用正交实验量的十倍为验证实验用药量，可将实验得出的最佳条件1与自定的最佳工艺2作对比，实验步骤按4.1。结果如下：

表18红花水提验证实验

编号条件吸收值

1 (A₃B₃C₁D₃) 0.462

2 (A₂B₃C₁D₂) 0.470

由上表可见，条件1与条件2差别不大，故选用工艺条件2(A₃B₃C₁D₃)为红花水提工艺，即药材细度为20目，30倍水，提取2次，每次1小时。

实施例5混合药材醇提工艺研究

桃仁等五味药材经水提油后，药渣与红花水提药渣合并进行醇提取，旨在提取脂溶性有效成分，这对于全方位治疗脑血栓病的有重要意义。中药复方强调协同作用，因此考虑该六味药材合并醇提。考虑到桃仁等六味药材的脂溶性成分极性有差异，拟定将醇浓度作为最大可变因素，先对醇提浓度进行单因素筛选，以确定醇提浓度范围，随后再对其他因素作正交筛选。

5.1醇提浓度单因素筛选实验：

取放味药材24g(每味4g)，分别按实施例1、2、3、4项下步聚进行提油及水提，药渣加10倍不同浓度的乙醇95℃水浴回流提取一小时，离心，上清液备用。

设计醇提浓度有：30％，50％，70％，90％(V/V)。

5.1.1加权系数的确定：

由于当归等五味药在水提油时已提出部分有效成分(阿魏酸、川芎嗪、芍药苷)，将水提油(五味药)的相应有效成分含量与醇提后比较，以确定各指标的加权系数。

结果见下表：

表19不同浓度乙醇提取结果

芍药苷含量(mg) 丹参酮ILA含量(mg) 阿魏酸含量(mg) 川芎嗪含量(mg)

30％醇样品 4.920 0.2210 1.2240 0.1864

50％醇样品 3.960 2.4456 0.7728 0.1196

70％醇样品 3.816 5.5440 0.8880 0.1088

90％醇样品 3.768 4.7616 0.6960 0.0988

水提油相应成分与醇提有效成分含量比较：

表20水提与醇提的有效成分的对比

水提液提取率(％) 醇提液提取率(％)

阿魏酸 0.1091 0.02418

川芎嗪 0.0358 0.00466

芍药苷 0.5392 0.123

由此可见，醇提液中上述三种有效成分含量只有水提油液的20％，故醇提以丹参酮IIA为主。所以将各指标成分系数定为：丹参酮IIA为0.55，芍药苷、阿魏酸、川芎嗪各为0.15。

5.12筛选实验结果

取各指标成分中最大含量X_m计为100分，该成分其余样品含量记分为X_i’＝(X_i/X_m)*100％，再乘以各对应成分系数后，各指标相加的总分为该成分的得分。结果如下表：

表21不同浓度乙醇提取得分结果

芍药苷(0.15) 丹参酮IIA(0.55) 阿魏酸0.15 川芎嗪0.15 总分

30％醇样品 100 3.99 100 100 47.190

50％醇样品 80.49 44.11 78.92 64.22 57.805

70％醇样品 77.56 100 90.69 58.43 89.002

90％醇样品 76.59 85.89 71.08 52.90 77.325

由此可见，70％醇样品分数最高，故为醇提中心浓度。

5.2六味药醇提正交实验设计

拟考察川芎中阿魏酸、川芎嗪，当归中阿魏酸，赤芍中芍药苷，丹参中丹参酮IIA等活性成分含量，以HPLC测定。选择醇浓度、溶媒量、提取时间和提取次数4个因素作为考察因素，每个因素选择3个水平进行正交实验考察，如下表：

表22 醇提正交实验因素水平表

水平	因素
	因素				醇浓度A(％)	溶媒量B(倍)	提取时间C(小时)	提取次数D(次)
	123	60％70％80％	6810	123	醇浓度A(％)	溶媒量B(倍)	提取时间C(小时)	提取次数D(次)	123

取单因素筛选实验所用药渣按上表进行回流提取，药液离心，上清液备用。正交实验结果如下：

表23 正交实验分析结果

芍药苷含量丹参酮含量阿魏酸含量川芎嗪含量

A B C D 总分

(mg) (0.15) (mg) (0.55) (mg)(0.15) (mg)(0.15)

1 1 1 1 1 5.244 4.1016 1.404％ 0.42168 67.23

2 1 2 2 2 7.1304 5.9448 1.548 0.2796 83.03

3 1 3 3 3 6.132 7.0128 1.66944 0.4188 94.21

4 2 1 2 3 3.8424 6.696 1.49904 0.37224 84.14

5 2 2 3 1 5.6592 5.268 1.62 0.55104 82.71

6 2 3 1 2 7.1784 6.6144 1.29984 0.30024 86.73

7 3 1 3 2 5.2488 6.54 1.30152 0.29304 81.93

8 3 2 1 3 651.36 6.5016 1.54608 0.37368 88.66

9 3 3 2 1 4.836 5.7744 1.4232 0.33912 77.41

K₁ 244.47 233.30 242.62 227.35

K₂ 253.58 254.40 244.58 251.69

K₃ 248.00 258.35 258.85 267.01

R 3.04 8.35 5.41 13.22

记分方法：同单因素筛选实验记分方法。

统计学处理：

表24 方差分析结果

A B C D

K₁ ² 59765.58 54428.89 58864.46 51688.02

K₂ ² 64302.82 64719.36 59819.38 63347.86

K₃ ² 61504.00 66744.72 67008.32 71294.34

61857.47 61964.32 61895.72 62110.07

SS 14.07 120.92 52.32 266.67

F 1 8.59 3.72 18.95

P P＞0.1 P＜0.01 0.01＜P＜0.05 P＜0.01

显著性无极显著显著极显著

由此可见，最佳条件为：A₂B₃C₃D₃，即浓度为70％的乙醇(V/V)10倍量提取3次，每次3小时。因为B、C、D三个因素对指标成分提取率都有显著影响，故不能只考虑节能因素，决定选则该条件进行验证实验。

5.4最佳条件验证实验：

取正交实验所用药渣，按A₂B₃C₃D₃条件进行提取，药液离心，上清液备用。结果如下：

表25醇提验证实验结果

芍药苷丹参酮阿魏酸川芎嗪总分

含量(mg) X_i’ 含量(mg) X_i’ 含量(mg) X_i’ 含量(mg) X_i’

7.0992 98.92 7.4232 100 1.620 97.04 0.396 71.86 95.17

验证验显示，该条件为醇提最佳条件，即浓度为70％的乙醇(V/V)10倍量提取3次，每次3小时。

实施例6.水蛭、土鳖虫提取工艺研究

水蛭用乙醇渗漉；药渣挥去乙醇后与土鳖虫合并水提。水提实验用含氮量为指标作正交实验。

6.1水蛭醇提实验：

水蛭醇提采用70％乙醇(V/V)对水蛭进行渗漉效果最好，并收集10倍量渗漉液，既能达到较好提取率，按上述条件对水蛭进行醇提。

取水蛭600g，粉碎成粗粉，用70％乙醇(V/V)为提取溶剂进行渗漉，室温为25±3℃；浸渍时间为24小时；速度为2ml/分钟，收集渗漉液6000ml，备用。药渣挥去乙醇备用。

渗漉液回收乙醇后，于水浴80℃蒸干，60℃真空干燥24小时，称重，得膏率为8.41％(W/W)。

6.2水蛭、土鳖虫水提工艺研究

以提取物总含氮量为指标，选择溶剂浸泡时间、提取溶剂量、提取时间、提取次数4个因素作为考察因素，每个因素选择3个水平考察其对提取率的影响，从而确定最佳水提工艺。

取相当于生药60g的水蛭药渣与土鳖虫粗粉15g，按下表进行水提实验：

表26 水蛭、土鳖虫水提因素水平表

水平	因素
	因素				浸泡时间A(小时)	溶媒量B(倍)	提取时间C(小时)	提取次数D(次)
	123	012	345	1.01.52.0	浸泡时间A(小时)	溶媒量B(倍)	提取时间C(小时)	提取次数D(次)	123

提取物总含氮量测定按药材含氮量测定方法测定，所得实验数据及结果见下表：

表27 水蛭、土鳖虫提正交实验分析结果

浸泡时间A(h) 溶媒量B 提取时间C (h) 提取次数D(次) 含氮量(mg) 提取率(％)

(倍)

1 0 3 1.0 1 1600.83 2.134

2 0 4 1.5 2 2782.61 3.710

3 0 5 2.0 3 2806.26 3.7412

4 1 3 1.5 3 2721.67 3.629

5 1 4 2.0 1 1876.32 2.502

6 1 5 1.0 2 2387.74 3.184

7 2 3 2.0 2 2550.93 3.401

8 2 4 1.0 3 2547.79 3.397

9 2 5 1.5 1 1848.60 2.465

K₁ 9.586 9.164 8.715 7.101

K₂ 9.315 9.609 9.804 10.295

K₃ 9.263 9.391 9.645 10.768

R 0.107 0.148 0.363 1.222

统计学处理：

表28方蜥结果

A B C D

K₁ ² 91.8914 83.9789 75.9512 50.4242

K₂ ² 86.7692 92.3329 96.1184 105.9870

K₃ ² 85.8082 88.1909 93.0260 115.9498

88.1546 88.1676 88.3652 90.787

SS 0.0201 0.0331 0.2307 2.6525

F 1 1.65 11.48 131.97

P P＞0.1 P＞0.1 P＜0.01 P＜0.01

显著性无无极显著极显著

结果显示，水提工艺以不浸泡，加4倍水，提取3次，每次1.5小时为好。

用最佳条件作验证实验，n＝4，结果如下，含氮量均值：2859.95mg；提取率均值：3.813％。由此可见，可用上述条件作为水蛭与土鳖虫提工艺条件。即水提工艺以不浸泡，加4倍水，提取3次，每次1.5小时为好。

实施例7.水蛭醇提物包合工艺

水蛭提取物有浓烈的腥臭味，口味为佳，难以直接服用。如直接蒸干入药令人无法接受，不利于泡腾片的服用。拟用β-CD或尤特奇水分散体(丙烯酸杩脂，RHM公司)对醇提物进行包合，旨在掩盖不良气味，增加其水溶性。用一定量的β-CD或尤特奇水分散体包合醇提物，使起到矫味作用，又要尽量避免因使用大量辅料而增加片重。

通过比较不同种类及其用量的包合辅料包合水蛭醇提物后的味感，确定包合的工艺。具体步骤如下：

7.1 β-CD包合

量取相当于生药30g的醇提液300ml，分别加β-CD饱和液(醇提物2倍、3倍、4倍)用电动搅拌机以1000rpm于水浴60℃搅拌1.5小时，取出于水浴70℃加热蒸干。

7.2尤特奇包合

取醇提液300ml，分别量取一定体积的尤特奇(投药量10％、15％、20％)，以及尤特奇的10％柠檬酸三乙酯，用电动搅拌机以1000rpm(转/分钟)于水浴60℃搅拌1.5小时，取出于水浴70℃加热蒸干。

7.3两种包合比较

通过尝味比较，结果如下表：

表29水蛭醇提物不同包合方法对比

β-CD包合尤特奇包合

2倍 3倍 4倍 10％ 15％ 20％

所加辅料量(g)

5.046 7.569 10.092 3 4.5 6

味感不佳稍有异味无异味感不佳不佳有异味

综合考虑，由于水蛭醇提物得膏率不大，其所加的辅料量也不大，制剂成型后的服药量增加不多，因此优选取味感尚能接受的4倍β-CD包合方案。

实施例8.山羊角的入药方式的工艺研究

原处方中有羚羊角一味。羚羊角属于濒危保护物种，被列入《濒危野生动植物种国际贸易公约》的物种范围内。因此，寻找合适的代用品对濒危物种可持续发展有积极意义，同时也大大降低处方成本。山羊角经研究证明其化学成分及药理作用与羚羊角基本相同，用量为8～10倍。因此现用10倍量山羊角代羚羊角使用。经研究表明，羚羊角水解后入药比粉混悬剂解热作用明显。故拟用药效学实验考察山羊角水解工艺与粉末直接入药工艺对脑血栓治疗作用的优劣。

8.1山羊角水解工艺

碱水解处理：取山羊角562.5g，粗粉碎，加10倍量水煎煮3次，每次2小时，过滤，滤液放置备用。滤渣加8倍量0.25％氢氧化钠溶液(W/V)，加热水解4小时，不断补充水分，冷却后过滤，滤液用稀盐酸调pH值至7.0，将水煎液与水解液合并，加热浓缩至含生药量10％，备用。

8.2山羊角粉碎工艺

取山羊角562.5g，粗粉碎，于超微粉碎处超微粉碎，粉碎度为如下：

表30 粉碎度比较

体积平均粒径(μm) 表面积平均粒径(μm) d(0.5)(μm) d(0.9)(μm)

37.96 22.07 30.14 78.13

8.3两种工艺样品的制备

8.3.1山羊角水解工艺样品

除山羊角外其余药味以一个处方量(即当归900g计)按前确定工艺分别提取、除杂及包合。取一半量与山羊角水解样品提取物合并，喷雾干燥，得干燥浸膏粉共984.5g，加研磨至细的体外培育牛黄粉末6.25g，混匀，作为山羊角水解工艺档品，备用。

8.3.2山羊角粉末工艺样品

取另一半其余药味提取物，喷雾干燥，得干燥浸膏粉共83.4g，加562.5g经超微粉碎的山羊角粉末与研磨至细的牛黄粉末体外培育6.25g，混匀，作为山羊角粉末工艺样品，备用。

8.4两种工艺样品对急性脑缺血动物模型药效作用比较

8.4.1对大鼠大脑中动脉阻断模型神经症状及梗塞面积的影响

对本实验采用线栓法形成局造型脑缺血的大鼠模型，用尼龙线从颈总动脉插入颅内至大脑前动脉，阻断大脑中动脉的血流，从而形成大脑中动脉阻断(MCAO)模型。大鼠清醒后，出现一侧肢体瘫痪与旋转不对称现象，用Longa评分法，对1、3、6、12、24小时神经缺陷症状进行评分；用TTC染色显示脑缺血24h后梗死范围。实验动物SD大鼠，体重250-300g，结果如下表：

表31对脑缺血(大鼠大脑中动脉栓塞MCAO)脑梗死体积的影响( X±s)

分组剂量动物数脑梗死体积(％)

假手术组 10 0

模型组 10 24.96±8.24

水解工艺组 330mg/kg 10 13.87±6.14^**

粉末工艺组 460mg/kg 10 15.73±6.46^*

^*与模型组比较p＜0.05 ^**与模型组比较p＜0.01

表32对脑缺血(大鼠大脑中动脉栓塞MCAO)神经症状的影响( X±s)

分组剂量动物神经症状评分(Longa55分制)

(mg/kg) (n) 1h 3h 6h 12h 24h

假手术组 10 0 0 0 0 0

模型组 10 2.22±0.97 2.63±0.92 3.17±0.98 2.63±0.92 3.17±0.98

水解工艺组 330 10 1.33±0.71^* 2.22±0.97 1.63±0.92^* 1.17±0.98^* 0.62±0.17^**

粉末工艺组 460 10 1.45±0.69^* 2.73±0.47 1.90±0.32^* 1.80±0.41^* 0.81±0.21^**

^*与模型组比较p＜0.05 ^**与模型组比较p＜0.01

8.4.2对大鼠双侧颈总动脉结扎模型脑含水量和脑指数的影响

SD雄性大鼠(250～300g)，用20％乌拉坦i.p麻醉，切开颈部皮肤，分离双侧颈总动脉并结扎，三小时后，断头取脑，称全脑湿、干重，计算大鼠脑含水量和脑指数，如下表：

表33对脑缺血(大鼠双侧颈总动脉结扎)脑水肿及脑指数的影响( X±s)

分组剂量动物数脑含水量(％) 脑指数

正常组 10 76.25±1.38 0.59±0.002

模型组 10 78.67±0.99^* 0.62±0.03^*

水解工艺组 330mg/kg 9 78.09±1.26^*# 0.54±0.03##

粉末工艺组 460mg/kg 9 78.19±2.21 0.55±0.03#

注：脑指数＝脑湿重×100/体重脑含水量(％)＝(湿重-干重)/湿重×100％

^*与正常组比较P＜0.05；#与模型组比较p＜0.05 ##与模型组比较p＜0.01

8.4.3对血栓形成试验

本实验采用大鼠动—静脉旁路血栓形成模型，用20％乌拉坦麻醉大鼠，切开颈部皮肤，分离一侧颈总动脉。在动、静脉间插入一内充50U/m1肝素钠溶液和一根预先称重的5cm长4#手术丝线的聚乙烯管，形成A-V短路。50U/kg.i.v肝素钠溶液后，除去浮血后称重，减去丝线原重，即为血栓的湿重，将血栓放入60℃烤箱中干燥4小时，冷却后称重，即为血栓干重。然后计算血栓形成抑制率，见下表：

表34 对大鼠颈总动—静脉旁路血栓形成的影响( X±s)

分组剂量动物数血栓湿重血栓干重

正常对照组 7 14.83±4.12 3.09±1.15

阿司匹林组 100 7 9.14±1.5^** 2.07±0.34^*

水解工艺组 330mg/kg 5 12.32±4.80^* 2.65±0.31^*

粉末工组 460mg/kg 5 13.18±3.52 2 88±0.35^*

^*与正常组比较p＜0.05 ^**与正常组比较p＜0.01

综合药效实验结果，水解工艺组要比粉末工艺组的药效好，两者有显著性差别，同时水解工艺的得膏率比粉末直接入药工艺小，降低了服药量。因此优选山羊角水解工艺作为山羊角提取工艺。

实施例9.体外培育牛黄的粉粉工艺研究

体外培育牛黄用量较小，且较贵重，可直接入药。将牛黄粉碎成微粒入药，可增加其溶解度，有利于制剂的快速溶出并提高生物利用度。考虑用高剪切分散粉碎技术对牛黄进行粉碎，通过测其粉碎后在水中的粒径，来筛选粉碎的工艺条件。

粉碎方法：取体外培育牛黄用研钵研磨至细粉，称取2g，加水60ml，按不同条件置高剪切分散剪切仪进行粉碎，混合液用粒度测定仪测定粒径。结果如下表：

表35体外培育牛黄粒度分析报告

转速(rpm) 时间(h) 体积平均粒径(μm) 表面积平均粒径(μm) d(0.5)(μm) d(0.9)(μm)

0.5 11.049 2.514 5.106 30.308

1.0 8.996 2.251 4.430 23.881

22000

2.0 6.808 1.798 3.119 17.629

3.0 6.774 1.251 2.081 18.688

28000 1.0 8.186 1.585 2.929 23.157

对转速22000rpm作图，分析时间对粉碎度的影响，结果如附图1所示：

由上可知：转速加大对粒径影响不大。时间能显著影响粒径大小，但至2.0小时后再延长时间对粉碎粒径影响不大。故从节能角度看，可优选条件：转速22000rpm，粉碎时间为2.0小时。

医学研究表明人体肠胃对颗粒的最佳吸收细度为15μm左右，因为微米中药的颗粒达到最佳吸收细度水平，药物有效成分在胃肠道的溶解度明显增加，从而增加药物的生物利用度，加快药物的起效时间(陈力，吴懿平.微米中药及其制备技术中草药，2002，33(10)：865～868)。故高剪切法上述的优选条件达到此一目的。

实施例10.喷雾干燥

合并当归等水提醇沉液(为当归等5味药材提取挥发油的水提液，浓缩后加醇至含醇量为60％，冷藏放置，滤过，得到滤液即是)、红花水提液、当归等醇提液、水蛭等水提液、山羊角提取液、挥发油β-环糊精包合水溶液、水蛭醇提物β-环糊精包合水溶液、体外培育牛黄粉碎液，加入适量的桔子香精，混合均匀，取少量样品溶液测得混合液含固量0.0766g/g，密度为1.023g/ml，进喷雾干燥塔干燥。进口温度：160℃，出口温度：82℃，得到干浸膏粉，混合均匀。粒度分析结果见下表：

表36 高效脑血栓干浸膏粒度分析报告

体积平均粒(μm) 表面积平均粒径(μm) d(0.5)(μm) d(0.9)(μm)

25.996 6.814 8.830 72.760

由表中结果可知，干浸膏粒度为超微粒度，有利于制剂成型工艺、泡腾片的制备及药物在人体的吸收。

实施例11.脑血栓泡腾片的制备

按处方比例取药材161.86kg，其中当归、川芎、红花、赤芍、丹参、桃仁、水蛭各19kg，土鳖虫4.8kg，山羊角23.8kg，体外培育牛黄262.6g，同时取8.32kg β-环糊精。按所确定的提取工艺对各药材进行提取，具体方法同实验室放大实验。将当归、川芎切成小块，赤芍、丹参、桃仁粉碎成细粉，红花、水蛭、土鳖虫等3味粉碎成粗粉，山羊角粗压碎，体外培育牛黄碾碎，备用；取当归、赤芍、川芎、丹参、桃仁等5味，混合均匀，分成5份，装入一层纱布制成的沙包中，加入相当于生药量10倍的水(190L)，浸泡1小时，水蒸气提取挥发油，滤过，收集挥发油，得到33L油水混合物；滤液及滤渣避光保存，备用；将收集和的挥发油油水混合物加入含1.96kg的β-环糊精包合，50℃水浴高剪切分散剪切包合4小时，剪切速度为13000rm^-1，得挥发油β-环糊精包合液；当归等水提液减压低温回收至投药量，加95％乙醇(V/V)搅拌至含醇量为60％(V/V)，冷藏放置24小时，过滤，得水提醇沉液避光保存；取红花加入相当于生药量的30倍水(570L)，煎煮2次，每次1小时，滤过，滤液回收到投药量，避光保存；红花滤渣与当归等滤渣合并加入生药量10倍量的70％乙醇(V/V)(190L)，加热回流提取3次，每次3小时，滤过，醇提液与当归等水提液合并回收乙醇至投药量；取水蛭加生药量1倍的70％乙醇(V/V)(19L)浸泡24小时，渗漉，渗漉速度为2.5ml/分钟，收集相当于生药量10倍的渗漉液，药渣挥去乙醇，备用；渗漉液回收乙醇至投药量的2倍，加入含6.36kg的β-环糊精饱和水溶液，60℃水浴搅拌1.5小时，搅拌速度为1000rpm得水蛭β-环糊精包合液，避光保存；取土鳖虫与水蛭药渣合并加入相当于生药量4倍的水(95.2L)煎煮3次，每次2小时，滤过，；取山羊角加入相当于生药量10倍的水(238L)煎煮3次，每次2小时，滤过，滤液备用；山羊角药渣加入相当于生药量8倍的0.25％NaOH(W/V)(190.4L)，加热水解4小时，补充水分，滤过，碱水解液加稀HCL调pH至7.0，避光保存；取体外培育牛黄，研磨至细粉，置30倍水(7.9L)中高剪切粉碎2小时，速度为22000rpm。合并当归等水提醇沉液、红花水提液、当归等醇提液、水蛭等水提液、山羊角提取液、挥发油β-环糊精包合水溶液、水蛭醇提物β-环糊精包合水溶液、体外培育牛黄粉碎液，混合均匀，取少量样品溶液测得混合液含固量0.0766g/g，密度为1.023g/ml，进喷雾干燥塔干燥。进口温度：160℃，出口温度：82℃，得到干浸膏粉，混合均匀。喷雾干燥后出料干浸膏粉43.11kg。得膏率为25.33％(W/W)，含水率1.66％(W/V)。按干浸膏粉39％，交联聚乙烯吡咯烷酮(XL)15％，甘露醇3.5％，无水柠檬酸9.94％，碳酸氢钠15.06％，微晶纤维素(PH102)11.8％，微粉硅胶3％，硬脂酸镁0.4％，滑石粉1.8％，阿斯帕坦0.5％的比例混匀，直接压片，以欧巴代OPADRY II(85G60989 BLUE)(上海卡乐康包衣技术有限公司生产，下同)为包衣材料，备制成18％的水包衣液，进风温度：50℃，片床湿度：42℃，雾化压力：3bar，包衣锅转速：6～8rpm，包衣增重3％，包蓝色薄膜衣，即得。

实施例12.实施例11制得的脑血栓泡腾片主要药效学实验

实验药品和试剂：

脑血栓泡腾片：上海医药工业研究院提供，批号：040727；为蓝色薄膜糖衣

片剂(0.725g/片，含0.2828g干浸膏/片，相当含生药1.06g，即每克含生药1.46g)

脑血栓干浸膏粉：上海医药工业研究院提供，批号：040702，每克含生药3.74g。

消栓通络片0.375g/片：江西南昌济生制药厂(批号：040401)(阳性对照药物)

脑血栓片0.3g/基片：吉林省柳合辉发制药股份有限公司(批号：20040601)(原剂型对照药)

水合氯醛分析纯：上海山浦华工有限公司(批号：20040212)

红四氮唑(2，3，5triphenylte trazolium，TTC)粉剂：中国医药上海化学试剂公司(批号：F20021123).

肝素钠注射液2ml/支、12500u/ml：天津市生物化学制药厂(批号：20040507)

氯化钠分析纯：天津市北方化玻购销中心(批号：20020605)

乌来糖化学纯：上海山浦化工有限公司(批号：20040517)

5ml肝素钠真空采血管，(批号：041020)：湖北金杏科技发展有限公司生产

3ml规格枸椽酸钠真空采血管(批号：040915)：湖北金杏拉技发展有限公司生产。

具体实验如下：

12.1对大鼠局灶性脑缺血的保护作用

取80只雄性SD大鼠，250g-350g，随机分为八组，即：假手术组、生理盐水对照组、阳性药对照组(消栓通络片组0.6g·d-1·kg-1)、原剂型组(脑血栓片组0.5g·d-1·kg-1)、干浸膏粉组(脑血栓泡腾片的原料药，不含淀粉等添加剂成分)0.3g·d-1·kg-1)、脑血栓泡腾片小剂量组(0.4g·d-1·kg-1)、脑血栓泡腾片中剂量组(0.8g·d-1·kg-1)、脑血栓泡腾片大剂量组(1.6g·d-1·kg-1)，每组10只各组灌胃容量均为5ml·kg-1，每日2次，连续给药14天。采用Longa方法并予改良的大脑中动脉线栓法(middle cerebral artery occlusion，MCAO)制备大鼠持续性局灶性脑缺血模型。参考Zea的6级评分法在术后3h，6h，12h和24h进行评分：0分：无神经损伤症状；1分：不能完全伸展对侧前爪；2分：向外侧转圈；3分：向对侧倾倒；4分：不能自发行走，意识丧失；5分：死亡。

术后24h，大鼠用10％水合氯醛深麻醉后处死，迅速取脑，冰冻10min，从视交叉处取冠状面均匀切成5片，每片厚约2mm的的脑片，放入2％TTC溶液(37℃)中染色30min，然后取出观察，可见粉红色区为正常脑组织，白色区为梗死区。测定脑梗死面积后，分离梗死区和正常脑组织，对梗死区和正常脑组织进行称量。根据梗死脑组织重量与全脑重量比求出脑梗死体积百分比。见下表：

表37对大鼠局灶性脑缺血所致脑梗死体积的影响( X±s)

组别动物数剂量梗死体积/大脑总体积(％)

假手术组 10 0

模型组 10 27.51±4.71

脑血栓片组 8 0.5g/d/kg 17.35±4.67^**

消栓通络组 8 0.6g/d/kg 18.80±6.94^**

干浸膏组 9 0.3g/d/kg 12.72±5.51^***

高剂量组 8 1.6g/d/kg 11.18±3.35^***◆

中剂量组 8 0.8g/d/kg 14.60±7.00^**

小剂量组 9 0.4g/d/kg 15.37±7.21^**

^*p＜0.05，^**P＜0.01，^***P＜0.001与模型组比较

◆p＜0.05与原制剂组；P＜0.01与阳性对照组

注：①剂量栏表示大鼠每Kg体重，每天给药剂量。

②实验所用剂量计算依据：阳性对照组与原制剂组的动物给药量均以临床给药量为基础，按《新药评价基础与实践》的等效剂量折算表，将成人每日用量折算成大鼠每日用量。干浸膏组以临床拟给药量为基础，按《新药评价基础与实践》的等效剂量折算表，将成人每日用量折算成大鼠每日用量。以下各表同。

表38 对大鼠局灶性脑缺血所致神经症状的影响( X±s)

组别动物数剂量神经症状(按5分制评分)

3小时 6小时 24小时

假手术组 10 0 0 0

模型组 10 2.80±1.3 3.00±1.33 3.56±1.59

脑血栓片组 10 0.5g/d/kg 1.60±0.70^* 1.70±0.67^* 2.11±1.27^*

消栓通络组 9 0.6g/d/kg 1.67±1.12^* 1.37±0.50^** 1.89±1.27^*

干浸膏组 10 0.3g/d/kg 1.20±0.60^*** 1.20±0.63^*** 1.60±1.35^**

高剂量组 10 1.6g/d/kg 0.90±0.44^*** 1.00±0.71^*** 1.30±0.53^***

中剂量组 10 0.8g/d/kg 1.10±0.57^*** 1.30±0.48^** 1.40±0.69^**

小剂量组 9 0.4g/d/kg 1.44±0.53^** 1.56±0.53^** 1.67±0.87^**

*p＜0.05，**P＜0.001，***P＜0.001与模型组比较

从上可以看出，脑血栓泡腾片可依剂量性减轻大鼠局灶性脑缺血所致的脑梗死体积以及改善由脑缺血引起的神经症状。模型组大鼠梗死体积为27.51％±4.71，高剂量组为11.18％±3.35；中剂量组为14.60％±7.00；小剂量组为15.37％±7.21)；与模型组比较，各组下降百分率分别为59.36％、46.93％和44.13％；与模型组和原制剂组比较，p＜0.01；差异均有极显著意义。

12.2对大鼠颈动-静脉旁路血栓形成的影响

取72只雄性SD大鼠，250g-350g，随机分为七组，除生理盐水对照组为12只外，其余每组10只。各组灌胃量均为5ml·kg-1，每日2次，连续给药14天。采用颈动-静脉旁路方法形成血栓。以两段较短的聚乙烯管连接一段较长、中间放置了一段3～4cm长4号丝线的输液管，并以50u·ml-1的肝素生理盐水对其进行充盈，备用插管。20％乌拉坦腹腔注射麻醉大鼠(6ml·kg-1)，待动物麻醉后，仰卧位固定，颈正中部位常规手术切口，分离出右侧颈总动脉和左侧颈外静脉。两端分别插入已制备好的聚乙烯管，即形成大鼠颈动-静脉旁路，血液流经输液管内的4号丝线量，血小板等即可附于丝线的粗糙面形成血栓。在插管过程中，需给予大鼠静注0.1ml·100g-1的肝素生理盐水抗凝。形成动-静脉旁路15分钟后，取出丝线，在滤纸上除去浮血后称量，即得到血栓湿重。将称重后血栓置干燥箱中，在60℃下干燥4小时后取出称重，即为血栓干重。结果见下表：

表39对大鼠颈动-静脉旁路血栓形成的影响( X±s)

组别动物数剂量血栓重量(mg)

湿重干重

生理盐水组 12 24.23±8.21 4.93±2.17

脑血栓片组 8 0.5g/d/kg 17.10±3.89^* 3.83±1.09

消栓通络组 8 0.6g/d/kg 14.93±4.50^** 3.45±0.87

干浸膏组 8 0.3g/d/kg 11.49±2.29^** 1.89±0.67^**

高剂量组 10 1.6g/d/kg 11.08±3.10^** 2.88±1.02^*

中剂量组 10 0.8g/d/kg 12.26±3.55^** 3.13±1.38^*

小剂量组 8 0.4g/d/kg 15.56±5.13^* 3.35±1.44

^*p＜0.05，^**P＜0.01与生理盐水组比较

结果显示，脑血栓泡腾片对大鼠颈动-静脉旁路血栓形成有一定的抑制作用，0.8g/d/kg和1.6g/d/kg对血栓湿重的抑制百分率与生理盐水组比较分别为55％和50％，对血栓干重的抑制百分率分别为54％和37％；其作用比原制剂和阳性对照组更为明显。

12.3 对血小板聚集功能的影响

雄性SD大鼠63只，体重250-300克，按体重随机分为7组。正常对照组口服(灌喂)生理盐水，给药组分别给予脑血栓泡腾片0.4，0.8和1.6g/kg，阳性对照药灌胃给予消栓通络片0.6g/kg。给药体积均为0.5ml/100g体重。连续给药14天后，20％乌拉坦腹腔麻醉大鼠(6ml·kg-1)，从颈总动脉取血。

以枸橼酸钠管采血3ml，立即振揺，以防止血液凝固。按比浊法测定血小板聚集性，用LBY-NJ2血小板聚集仪，室温下将已抗凝的全血以1000r·min-1离心8min，制备富血小板血浆(PRP)，放置0.5mlEppendorf管中闭盖保存，置恒温孔中备用；余下血经3000rpm离心10分钟所得上清为贫血小板血浆(PPP)。用PPP调整PRP使之血小板计数为40～50万·mm-3，取200μl PPP放入方形杯中用以调零，取200μl PRP加入盛有铁心搅拌子的方形杯中，PPP调零后，拔出PPP方形杯，放入PRP方形杯，待显示血小板数，加入终浓度为3.5μmol·L-1 ADP 11μl可获得1、3和5min血小板聚集率(PAG)及最大血小板聚集率(MPAG)数值。实验数据表示为标准差( x±s)，以t检验给药组与正常对照组均数差异的显著性。结果见下表：

表40对大鼠血板聚集的影响( X±s)

组别动物数剂量血小板聚集率(t/min) 最大聚集率

1 3 5

生理盐水组 9 0 38.66±7.91 48.79±1251 41.36±19.07 50.46±12.17

脑血栓片组 8 0.5g/d/kg 30.59±8.93 37.26±11.68 22.49±13.73^* 40.48±10.17

消栓通络组 8 0.6g/d/kg 23.26±12.35^** 27.44±13.78^** 18.34±11.54^**31.33±12.5^**

干浸膏组 8 0.3g/d/kg 22.13±9.02^** 26.06±10.36^** 17.79±8.89^** 29.2±19.58^**

大剂量组 9 1.6g/d/kg 23.10±10.08^** 27.77±9.08^** 18.02±6.02^** 30.84±9.84^**

中剂量组 9 0.8g/d/kg 27.33±12.37^* 37.80±16.86 29.66±14.54 39.81±17.1

小剂量组 9 0.4g/d/kg 2791±13.18 39.00±14.3 33.73±14.34 40.63±13.03

^*p＜0.05，^**P＜0.01与生理盐水组比较

由上可以看出，脑血栓泡腾片1.6g/d/kg连续灌胃给予14天后，对ADP诱导的血小板聚集有抑制作用，对1，3，5分钟和最大聚集等各时间点的抑制率分别为40.24％，43.08％，56.43％和42.13％；(P＜0.01)。其作用明显强于原制剂脑血栓片组。

12.4对大鼠血液粘度的影响

取70只雄性SD大鼠，250g-350g，按体重随机分为7组，每组10只。分别给于生理盐水(正常对照和模型对照组)、阳性药对照组(脑血栓片组0.5g·d-1·kg-1)、原制剂组(消栓通络片组0.6g·d-1·kg-1)、原料药组(脑血栓泡腾片干浸膏粉组0.3g·d-1·kg-1)、脑血栓泡腾片上剂量组(0.4g·d-1·kg-1)、脑血栓泡腾片中剂量组(0.8g·d-1·kg-1)、脑血栓泡腾片大剂量组(1.6g·d-1·kg-1)。各组灌胃量均为5ml·kg-1，每日2次，连续给药14天第15天大鼠用20％乌拉坦腹腔麻醉大鼠(6ml·kg-1)，从颈总动脉取血。以肝素纳管采血3ml，立即振揺，防止血液凝固。室温下经Sysmex kx-21型血细胞分析仪进样后，测定红细胞压积(HCG)和血小板计数(PLD)值。

另外从全血中取出0.5ml含肝素全血加入Brookfield DV-III+RHEOMETER型旋转粘度计，在37℃下，分别测定高切变率(HS，37.5/s)、中切变率(MS，150/s)和低切变率(LS，300/s)下的全血粘度值(WBV)；另取2ml含肝素全血3000r·min-1离心10分钟，吸取上层血浆0.5ml加入粘度计，测定高切下血浆粘度值(PV，225/s)。结果如下：

表41对大鼠血小板计数和红细胞压积的影响( X±s)

组别动物数剂量血小板计数(*10⁹/1) 红细胞压积(％)

生理盐水组 9 980±298 40.2±72.5

脑血栓片组 8 0.5g/d/kg 876±230 43.9±4.74

消栓通络组 8 0.6g/d/kg 767±63 45.9±4.82

干浸膏组 8 0.3g/d/kg 744±306^* 47.92±4.81

大剂量组 9 1.6g/d/kg 752±167^* 45.9±15.39

中剂量组 9 0.8g/d/kg 857±98 43.61±4.23

小剂量组 9 0.4g/d/kg 937±214 43.13±4.21

^*p＜0.05，^**P＜0.01与生理盐水组比较

表42对大鼠血液黏度(切变率1/s)的影响( X±s)

组别动物数剂量 WBV(全血) PV(血浆)

(225/s)

LS(37.5/s) MS(90/s) HS(300/s)

生理盐水组 10 13.99±4.13 11.18±5.20 6.40±1.52 1.55±0.48

脑血栓片组 10 0.5g/d/kg 11.49±2.23 8.47±1.79 5.17±0.46^* 1.63±0.99

消栓通络组 8 0.6g/d/kg 11.10±1.22 9.42±1.49 5.04±0.79^* 1.30±0.11

干浸膏组 8 0.3g/d/kg 10.70±1.17^* 7.12±1.00^* 5.01±0.57^* 1.21±0.09

大剂量组 9 1.6g/d/kg 9.75±1.60^* 7.21±0.94^* 5.13±0.53^* 1.28±0.15

中剂量组 9 0.8g/d/kg 8.95±2.48^** 6.55±1.80^** 4.29±0.40^** 1.31±0.07

小剂量组 9 0.4g/d/kg 9.83±2.27^* 7.42±1.72 5.32±1.71 1.33±0.18

^*p＜0.05，^**P＜0.01与生理盐水组比较

由上两表可以得出，脑血栓泡腾片1.6g/d/kg和干浸膏粉组(即本片剂的原料药)0.3g/d/kg连续灌胃14天，对血小板计数的影响，与生理盐水组比较，分别下降了23.26％和24.08％(p＜0.05)，对红细胞压积均无明显影响。结果见表5。大鼠连续14天口服脑血栓泡腾片对全血的黏度与生理盐水对照组比较，在切变率37.5/s，90/s，300/s，可明显降低全血黏度，且0.8g/d/kg组作用更为明显，各剂量组对大鼠血浆黏度均为明显影响。

实施例13.实施例11的脑血栓泡腾片长期毒性试验

用实施例11的脑血栓泡腾片对大鼠进行9周的长期毒性试验。即以21.2g、10.6g、5.3g生药/kg/日三个剂量连续大鼠灌胃给药9周，结果表明该药对大鼠外观体征、行为活动、饮食、粪便、体重、血液学指标、血液生化指标、系统尸解、主要脏器系数和病理组织学检查均未发现任何毒性反应。停药两周后对部分大鼠进行恢复期观察，重复上述各项检查，亦未见异常。上述剂量分别相当于成人临床拟用量的100、50和25倍，表明临床拟采用12.72g生药/60kg/日的剂量是安全的。

综上所述，应用多项新技术提取而得的脑血栓泡腾片对大鼠局灶性脑缺血有明显的保护作用；可依剂量性减轻大鼠局灶性脑缺血所致的脑梗死体积以及改善由脑缺血引起的神经症状；对大鼠颈动脉血栓形成有一定的抑制作用；能够较好地改善血液流变学方面的各个指标。以21.5g、10.6g、

5.3g生药/kg/日三个剂量连续大鼠灌胃给药9周，未见毒性反应或死亡。

实施例14.实施例11的脑血栓泡腾片急性毒性试验

用实施例11的脑血栓泡腾片63.6g生药/kg/日给小鼠灌胃，7天内小鼠无一死亡，此剂量相当于成人拟用量(12.72g生药/60kg/日)的300倍。提示该药用于临床较安全。

实施例15.脑血栓泡腾片的制备

按处方比例取药材8.0586Kg，其中红花、当归、水蛭、赤芍、桃仁、川芎、丹参各900g，土鳖虫225g，山羊角1125g，体外培育牛黄12.5g，β-还糊精396.1g。当归、赤芍、川芎、丹参等4味粉碎成过50目筛的细粉，桃仁粉碎成过30目筛的细粉，红花、水蛭、土鳖虫等3味粉碎过20目，山羊角粗粉碎，体外培育牛黄碾碎，备用；取当归、赤芍、川芎、丹参、桃仁等5味，加入相当于生药量10倍的水，浸泡1小时，水蒸气提取挥发油，滤过，得油水混合液；滤液及滤渣避光保存，备用；在收集得的油水混合液中加入93.3g的β-还糊精，50℃水浴高剪切乳化包合4小时，乳化速度为13000rpm，得挥发油β-还糊精包合液；当归等水提液减压低温回收至投药量，加95％乙醇搅拌至含醇量为60％，冷藏放置24小时，过滤，得水提醇沉液避光保存；取红花加入相当于生药量的30倍水，煎煮2次，每次1小时，滤过，滤液回收至投药量，避光保存；红花滤渣与当归等滤渣合并加入生药量10倍量的70％乙醇，加热回流提取3次，每次3小时，滤过，醇提液与当归等水提醇沉液合并回收乙醇至投药量；取水蛭加生药量1倍的70％乙醇浸泡24小时，渗漉，渗漉速度为2.5ml/min，收集相当于生药量10倍的渗漉液，药渣挥去乙醇，备用；渗漉液回收乙醇至投药量的2倍，加入302.8gβ-还糊精，60℃水浴搅拌1.5小时，搅拌速度为1000rpm得水蛭β-还糊精包合液，避光保存；取土鳖虫与水蛭药渣合并加入相当于生药量4倍的水煎煮3次，每次2小时，滤过，滤液回收至投药量，保存；取山羊角加入相当于生药量10倍的水煎煮3次，每次2小时，滤过，滤液备用；山羊角药渣加入相当于生药量8倍的0.25％氢氧化钠溶液，加热水解4小时，补充水分，滤过，碱水解液加稀HCL调pH至7.0，与山羊角水提液合并回收至投药量，避光保存；取牛黄高剪切分散粉碎2小时，速度为22000rm-1；合并当归等水提醇沉液、红花水提液、当归等醇提液、水蛭等水提液、山羊角提取液、挥发油β-还糊精包合水溶液、水蛭醇提物β-还糊精包合水溶液与牛黄粉碎液与适量的桔子香精，喷雾干燥，进口温度：160℃，出口温度：82℃，转速：21000rpm(350HZ)，得干浸膏粉末。喷雾干燥后出料干浸膏粉1.9815kg。得膏率为24.59％(W/W)。按干浸膏粉39％，交联聚乙烯吡咯烷酮(XL)17％，甘露醇3.5％，无水柠檬酸9％，碳酸氢钠16％，微晶纤维素(PH102)11％，微粉硅胶2％，硬脂酸镁0.4％，滑石粉1.8％，阿斯帕坦0.5％的比例混匀，直接压片，以OPADRY II(85G60989 BLUE)为包衣材料，备制成18％的水包衣液，进风温度：50℃，片床温度：42℃，雾化压力：3bar，包衣锅转速：6～8rpm，包衣增重3％，包蓝色薄膜衣，即得。

实施例16.脑血栓泡腾片的制备

按处方比例取药材451.59kg，其中当归、川芎、红花、赤芍、丹参、桃仁、水蛭各57kg，土鳖虫14.4kg，山羊角38kg，体外培育牛黄190g，同时取6.25kg β-环糊精。按所确定的提取工艺对各药材进行提取，具体方法同实验室放大实验。将当归、川芎切成小块，赤芍、丹参、桃仁粉碎成细粉，红花、水蛭、土鳖虫等3味粉碎成粗粉，山羊角粗压碎，体外培育牛黄碾碎，备用；取当归、赤芍、川芎、丹参、桃仁等5味，混合均匀，分成5份，装入一层纱布制成的沙包中，加入相当于生药量10倍的水(190L)，浸泡1小时，水蒸气提取挥发油，滤过，收集挥发油，得到70L油水混合物；滤液及滤渣避光保存，备用；将收集得的挥发油油水混合物加入含4.2kg的β-环糊精包合，50℃水浴高剪切分散剪切包合4小时，剪切速度为1300rm^-1，得挥发油β-环糊精包合液；当归等水提液减压低温回收至投药量，加95％乙醇(V/V)搅拌至含醇量为60％(V/V)，冷藏放置24小时，过滤，得水提醇沉液避光保存；取红花加入相当于生药量的30倍水(570L)，煎煮2次，每次2小时，滤过，滤液回收至投药量，避光保存，红花滤渣与当归等滤渣合并加入生药量10倍量的70％乙醇(V/V)，加热回流提取3次，每次3小时，滤过，醇提液与当归等水提液合并回收乙醇至投药量；取水蛭加生药量1倍的70％乙醇(V/V)浸泡24小时，渗漉，渗漉速度为2.5ml/分钟，收集相当于生药量10倍的渗漉液，药渣挥去乙醇，备用；渗漉液回收乙醇至投药量的2倍，加入含13.32kg的β-环糊精饱和水溶液，60℃水浴搅拌1.5小时，搅拌速度为1000rpm得水蛭β-环糊精包合液，避光保存；取土鳖虫与水蛭药渣合并加入相当于生药量4倍的水(95.2L)煎煮3次，每次3小时，滤过，；取山羊角加入相当于生药量10倍的水(238L)煎煮3次，每次2小时，滤过，滤液备用；山羊角药渣加入相当于生药量8倍的0.25％NaOH(W/V)(190.4L)，加热水解4小时，补充水分，滤过，碱水解液加稀HCL调pH至7.0，避光保存；取体外培育牛黄，研磨至细粉，置30倍水中高剪切粉碎3小时，速度为22000rpm。合并当归等水提醇沉液、红花水提液、当归等醇提液、水蛭等水提液、山羊角提取液、挥发油β-环糊精包合水溶液、水蛭醇提物β-环糊精包合水溶液、体外培育牛黄粉碎液，混合均匀，取少量样品溶液测得混合液含固量0.0783g/g，密度为1.031g/ml，进喷雾干燥塔干燥。进口温度：160℃，出口温度：82℃，得到干浸膏粉，混合均匀。喷雾干燥后出料干浸膏粉109.38kg。得膏率为23.89％(W/W)，含水率1.87％(W/V)。按干浸膏粉30％，交联聚乙烯吡咯烷酮(XL)30％，甘露醇4％，无水柠檬酸10％，碳酸氢钠16％，微晶纤维素(PH102)5％，微粉硅胶2％，硬脂酸镁0.4％，滑石粉1.8％，阿斯帕坦0.5％的比例混匀，直接压片，以OPADRY II(85G60989 BLUE)为包衣料，备制成18％的水包衣液，进风温度：50℃，片床温度：42℃，雾化压力：3bar，包衣锅转速：6～8rpm，包衣增重3％，包蓝色薄膜衣，即得。

实施例17.脑血栓泡腾片的制备

按处方比例取药材323.72kg，其中当归、川芎、红花、赤芍、丹参、桃仁、水蛭各38kg，土鳖虫9.6kg，山羊角57.6kg，体外培育牛黄525.2g，同时取16.64kgβ-环糊精。按所确定的提取工艺对各药材进行提取，具体方法同实验室放大实验。将当归、川芎切成小块，赤芍、丹参、桃仁粉碎成细粉，红花、水蛭、土鳖虫等3味粉碎成粗粉，山羊角粗压碎，体外培育牛黄碾碎，备用；取当归、赤芍、川芎、丹参、桃仁等5味，混合均合，分成5份，装入一层纱布制成的沙包中，加入相当于生药量10倍的水，浸泡2小时，水蒸气提取挥发油，滤过，收集挥发油，得到68L油水混合物；滤液及滤渣避光保存，备用；将收集得的挥发油油水混合物加入含4kg的β-环糊精包合，50℃水浴高剪切分散剪切包合2小时，剪切速度为1300rm^-1，得挥发油β-环糊精包合液；当归等水提液减压低温回收至投药量，加95％乙醇(V/V)搅拌至含醇量为60％(V/V)，冷藏放置24小时，过滤，得水提醇沉液避光保存；取红花加入相当于生药量的30倍水，煎煮2次，每次1小时，滤过，滤液回收至投药量，避光保存；红花滤渣与当归等滤渣合并加入生药量10倍量的70％乙醇(V/V)(190L)，加热回流提取3次，每次3小时，滤过，醇提液与当归等水提液合并回收乙醇至投药量；取水蛭加生药量1倍的70％乙(V/V)浸泡24小时，渗漉，渗漉速度为2.5ml/分钟，收集相当于生药量10倍的渗漉液，药渣挥去乙醇，备用；渗漉漉回收乙醇至投药量的2倍，加入含12.82kg的β-环糊精饱和水溶液，60℃水浴搅拌2小时，搅拌速度为1000rpm得水蛭β-环糊精包合液，避光保存；取土鳖虫与水蛭药渣合并加入相当于生药量4倍的水煎煮3次，每次1小时，滤过，；取山羊角加入相当于生药量10倍的水煎煮3次，每次3小时，滤过，滤液备用；山羊角药渣加入相当于生药量8倍的025％NaOH(W/V)(190.4L)，加热水解4小时，补充水分，滤过，碱水解液加稀HCL调pH至7.0，避光存；取体外培育牛黄，研磨至细粉，置30倍水中高剪切粉碎2小时，速度为22000rpm。合并当归等水提醇沉液、红花水提液、当归等醇提液、水蛭等水提液、山羊角提取液、挥发油β-环糊精包合水溶液、水蛭醇提物β-环糊精包合水溶液、体外培育牛黄粉碎液，混合均匀，取少量样品溶液测得混合液含固量0.0738g/g，密度为为1.012g/ml，进喷雾干燥塔干燥。进口温度：160℃，出口温度：82℃，得到干浸膏粉，混合均匀。喷雾干燥后出料干浸膏粉87.23kg。得膏率为25.63％(W/W)，含水率1.46％(W/V)。按干浸膏粉39％，交联聚乙烯吡咯烷酮(XL)10％，甘露醇15％，无水柠檬酸6％，碳酸氢钠15％，微晶纤维素(PH102)8％，微粉硅胶3％，硬脂酸镁0.4％，滑石粉1.8％，阿斯帕坦0.5％的比例混匀，直接压片，以OPADRY II(85G60989 BLUE)为包衣材料，备制成18％的水包衣液，进风温度：50℃，片床温度：42℃，雾化压力：3bar，包衣锅转速：6～8rpm，包衣增重3％，包蓝色薄膜衣，即得。

实施例18.脑血栓干浸膏的制备

按处方比例取药材24.62kg，其中当归、川芎、红花、赤芍、丹参、桃仁、水蛭各2.88kg，土鳖虫0.72kg，山羊角3.68kg，体外培育牛黄60g，同时取6.42kgβ-环糊精。按所确定的提取工艺对各药材进行提取，具体方法同实验室放大实验。将当归、川芎切成小块，赤芍、丹参、桃仁粉碎成细粉，红花、水蛭、土鳖虫等3味粉碎成粗粉，山羊角粗压碎，体外培育牛黄碾碎，备用；取当归、赤芍、川芎、丹参、桃仁等5味，混合均匀，分成5份，装入一层纱布制成的沙包中，加入相当于生药量10倍的水，浸泡1小时，水蒸气提取挥发油，滤过，收集挥发油，得到28L油水混合物；滤液及滤渣避光保存，备用；将收集得的挥发油油水混合物加入含17kg的β-环糊精包合，50℃水浴高剪切分散包合4小时，剪切速度为13000rm^-1，得挥发油β-环糊精包合液；当归等水提液减压低温回收至投药量，加95％乙醇(V/V)搅拌至含醇量为60％(V/V)，冷藏放置24小时，过滤，得水提醇沉液避光保存；取红花加入相当于生药量的30倍水，煎煮3次，每次2小时，滤过，滤液回收至投药量，避光保存；红花滤渣与当归等滤渣合并加入生药量10倍量的70％乙醇(V/V)，加热回流提取3次，每次3小时，滤过，醇提液与当归等水提液合并回收乙醇至投药量；取水蛭加生药量1倍的70％乙醇(V/V)浸泡24小时，渗漉，渗漉速度为2.5ml/分钟，收集相当于生药量10倍的渗漉液，药渣挥去乙醇，备用；渗漉液回收乙醇至投药量的2倍，加入含1.14kg的β-环糊精饱和水溶液，60℃水浴搅拌1.5小时，搅拌速度为1000rpm得水蛭β-环糊精包合液，避光保存；取土鳖虫与水蛭药渣合并加入相当于生药量4倍的水煎煮3次，每次2小时，滤过，；取山羊角加入相当于生药量10倍的水煎煮3次，每次2小时，滤过，滤液备用；山羊角药渣加入相当于生药量8倍的0.25％NaOH(W/V)，加热水解4小时，补充水分，滤过，碱水解液加稀HCL调pH至7.0，避光保存；取体外培育牛黄，研磨至细粉，置30倍水中高剪切粉碎3小时，速度为22000rpm。合并当归等水提醇沉液、红花水提液、当归等醇提液、水蛭等水提液、山羊角提取液、挥发油β-环糊精包合水溶液、水蛭醇提物β-环糊精包合水溶液、体外培育牛黄粉碎液，混合均匀，取少量样品溶液测得混合液含固量0.0682g/g，密度为1.004g/ml，进喷雾干燥塔干燥。进口温度：160℃，出口温度：82℃，得到干浸膏粉，混合均匀。喷雾干燥后出料干浸膏粉8.11kg。得膏率为26.13％(W/W)，含水率1.34％(W/V)。按干浸膏粉42％，交联聚乙烯吡咯烷酮(XL)18％，甘露醇3.5％，无水柠檬酸7％，碳酸氢钠12％，微晶纤维素(PH102)10％，微粉硅胶3.5％，硬脂酸镁0.4％，滑石粉1.8％，阿斯帕坦0.5％的比例混匀，直接压片，以OPADRY II(85G60989 BLUE)为包衣材料，备制成18％的水包衣液，进风温度：50℃，片床温度：42℃，雾化压力：3bar，包衣锅转速：6～8rpm，包衣增重3％％，包蓝色薄膜衣，即得。

实施例19.实施例11制得的脑血栓泡腾片崩解时间

泡腾片崩解时间如下：

表43包衣后泡腾时间表：

批号崩解时间

050203-1 6′05″

050203-2 7′34″

050203-3 6′31″

050203-4 6′04″

Claims

1.一种治疗脑中风的脑血栓泡腾片，其特征在于：

其中原料组成为：

红花900g 当归900g 水蛭900g 赤芍900g

桃仁900g 川芎900g 丹参900g 土鳖虫225g

山羊角或水牛角 600～1500g 体外培育牛黄、培植牛黄或人工牛黄 3～30g

制法：由下列步骤制备：

(1)将上述中药原料粉碎备用；

(10)取山羊角或水牛角加入水煎煮3次，滤过，滤液备用；

(11)山羊角或水牛角药渣加入0.25％氢氧化钠溶液(W/V)，加热水解，滤过，碱水解液加稀HCl调pH至7.0，与步骤(10)得到的山羊角或水牛角水提液合并，回收至投药量得到山羊角或水牛角提取液；

(13)合并步骤(3)得到的挥发油包合水溶液、步骤(5)得到的红花水提液、步骤(6)得到的当归、红花等6味药醇提取液、步骤(8)得到的水蛭醇提物β-环糊精包合水溶液、步骤(9)得到的土鳖虫与水蛭水提液、步骤(11)得到的山羊角或水牛角提取液、和步骤(12)得到的牛黄粉碎液，再加入适量的桔子香精，干燥，得干浸膏粉末；

(14)使用制备泡腾片的常规的方法和辅料，将步骤(13)得到的干浸膏制成泡腾片。

2.根据权利要求1的泡腾片，其特征在于：

原料组成为：

红花900g 当归900g 水蛭900g 赤芍900g

桃仁900g 川芎900g 丹参900g 土鳖虫225g

山羊角或水牛角 900～1200g 体外培育牛黄或培植牛黄 6～18g

制法：由下列步骤制备：

(1)将当归、赤芍、川芎、丹参4味粉碎成过10～50目筛的粉末，桃仁粉碎成过10～30目筛的粉末，红花、水蛭、土鳖虫3味粉碎过20目，山羊角粗粉碎，体外培育牛黄碾碎，备用；

(2)取当归、赤芍、川芎、丹参、桃仁5味，加入相当于该生药量6～10倍的水，浸泡0～2小时，水蒸气提取挥发油3～9小时，滤过，得油水混合液，水提母液及滤渣避光保存，备用；

(4)将步骤(2)得到的水提母液减压低温回收至投药量，加乙醇搅拌至含醇量为60-70％(V/V)，冷藏放置，过滤，得水提醇沉液避光保存；

(5)取红花加入相当于红花生药量的20～30倍水，煎煮1～3次，每次1～3小时，滤过，滤液回收至投药量，避光保存；

(6)将步骤(5)的红花滤渣与步骤(2)的滤渣合并，加入生药量6～10倍量的60～80％乙醇(V/V)，加热回流提取1～3次，每次1～3小时，滤过，该醇提液与步骤(4)得到的水提醇沉液合并，回收乙醇至投药量，得到醇提取液；

(7)取水蛭加生药量1倍的70％乙醇(V/V)浸泡24小时，渗漉，收集渗漉液，药渣挥去乙醇，备用；

(9)取土鳖虫与水蛭药渣合并，加入相当于生药量3～5倍的水煎煮1～3次，每次1～2小时，滤过，滤液回收至投药量，保存；

(12)取体外培育牛黄或培植牛黄，加30倍量的水，高剪切分散粉碎2小时，速度为22000～28000rpm；

(13)合并步骤(3)得到的挥发油β-环糊精包合水溶液、步骤(5)得到的红花水提液、步骤(6)得到的当归、赤芍、川芎、丹参、桃仁、红花等6味药醇提液、步骤(8)得到的水蛭醇提物β-环糊精包合水溶液、步骤(9)得到的水提液、步骤(11)得到的山羊角或水牛角提取液、与步骤(12)得到的牛黄粉碎液，再加入适量的桔子香精，喷雾干燥，进口温度：160℃，出口温度：82℃，得干浸膏粉末；

(14)按干浸膏粉30～42％，交联聚乙烯吡咯烷酮10～30％，甘露醇3～15％，无水柠檬酸6～12％，碳酸氢钠10～18％，微晶纤维素5～16％，微粉硅胶2～3.5％，硬脂酸镁0.4％，滑石粉1.8％，阿斯帕坦0.5％的比例混合，直接压片。

3.根据权利要求2的泡腾片，其特征在于：

原料组成为：

红花900g 当归900g 水蛭900g 赤芍900g

桃仁900g 川芎900g 丹参900g 土鳖虫225g

山羊角1125g 体外培育牛黄12.5g

制法：由下列步骤制备：

(1)将当归、赤芍、川芎、丹参4味粉碎成过50目筛的细粉，桃仁粉碎成过30目筛的细粉，红花、水蛭、土鳖虫3味粉碎过20目，山羊角粗粉碎，体外培育牛黄碾碎，备用；

(2)取当归、赤芍、川芎、丹参、桃仁5味，加入相当于生药量10倍的水，浸泡1小时，水蒸气提取挥发油，滤过，得油水混合液；水提母液及滤渣避光保存，备用；

(3)在步骤(2)中收集得的油水混合液中加入93.3g的β-环糊精，50℃水浴高剪切分散包合4小时，剪切速度为13000rpm，得挥发油β-环糊精包合液；

(4)将步骤(2)得到的水提母液减压低温回收至投药量，加95％乙醇(V/V)搅拌至含醇量为60％(V/V)，冷藏放置24小时，过滤，得水提醇沉液，避光保存；

(5)取红花加入相当于生药量的30倍水，煎煮2次，每次1小时，滤过，滤液回收至投药量得到红花提液，避光保存；

(6)将步骤(5)的红花滤渣与步骤(2)的滤渣合并，加入生药量10倍量的70％乙醇(V/V)，加热回流提取3次，每次3小时，滤过，该醇提液与步骤(4)得到的水提醇沉液合并，回收乙醇至投药量，得到醇提取液；

(7)取水蛭加生药量1倍的70％乙醇(V/V)浸泡24小时，渗漉，渗漉速度为2.5ml/分钟，收集相当于生药量10倍的渗漉液，药渣挥去乙醇，备用；

(8)渗漉液回收乙醇至投药量的2倍，加入302.8gβ-环糊精，60℃水浴搅拌1.5小时，搅拌速度为1000rpm得水蛭β-环糊精包合液，避光保存；

(9)取土鳖虫与水蛭药渣合并，加入相当于生药量4倍的水煎煮3次，每次2小时，滤过，滤液回收至投药量，保存；

(11)将步骤(10)得到的山羊角药渣加入相当于生药量8倍的0.25％氢氧化钠溶液(W/V)，加热水解4小时，补充水分，滤过，碱水解液加稀HCL调pH至7.0，与步骤(10)的山羊角水提液合并，回收至投药量得到山羊角提取液，避光保存；

(12)取体外培育牛黄，加30倍量的水，高剪切分散粉碎2小时，速度为22000rmp；

(13)合并步骤(3)得到的挥发油β-环糊精包合水溶液、步骤(5)得到的红花水提液、步骤(6)得到的醇提取液、步骤(8)得到的水蛭醇提物β-环糊精包合水溶液、步骤(9)得到的水提液、步骤(11)得到的山羊角提取液、和步骤(12)得到的牛黄粉碎液，再加入适量的桔子香精，喷雾干燥，进口温度：160℃，出口温度：82℃，转速：21000rpm(350HZ)，得干浸膏粉末；

(14)按干浸膏粉39％，交联聚乙烯吡咯烷酮15％，甘露醇3.5％，无水柠檬酸9.94％，碳酸氢钠15.06％，微晶纤维素11.8％，微粉硅胶3％，硬脂酸镁0.4％，滑石粉1.8％，阿斯帕坦0.5％的比例混匀，直接压片，以OPADRY II为包衣材料，备制成18％的水包衣液，进风温室：50℃，片床温度：42℃，雾化压力：3bar，包衣锅转速：6～8rpm，包衣增重3％，包蓝色薄膜衣，即得。

4.根据权利要求1的泡腾片的制备方法，包括下列步骤：

(1)将中药原料粉碎备用；

(2)取当归、赤芍、川芎、丹参、桃仁5味，加入水浸泡，水蒸气提取挥发油得油水混合液，水提母液及滤渣备用；

(3)在步骤(2)中收集得的油水混合液中加入包合剂，分散包合得挥发油包合液；

(4)将步骤(2)得到的水提母液减压低温回收，回收后的浓缩液量等于该5味中药原料的投药量，加乙醇搅拌至含醇量为55～85％(V/V)，冷藏放置，过滤，得水提醇沉液；

(5)取红花加入水煎煮1～3次，滤过，滤液回收至投药量；

(10)取山羊角或水牛角加入水煎煮3次，滤过，滤液备用；

5.根据权利要求2的泡腾片的制备方法，包括下列步骤：

(2)取当归、赤芍、川芎、丹参、桃仁5味，加入相当于生药量6～10倍的水，浸泡0～2小时，水蒸气提取挥发油3～9小时，滤过，得油水混合液，水提母液及滤渣避光保存，备用；

(5)取红花加入相当于红花生药量的20～30倍水，煎煮1～3次，每次1～3小时，滤过，滤液回收至投药量，避光保存

(14)按干浸膏粉30～42％，交联聚乙烯吡咯烷酮10～30％，甘露醇3～15％，无水柠檬酸6～12％，碳酸氢钠10～18％，微晶纤维素5～16％，微粉硅胶2～3.5％，硬脂酸镁0.4％，滑石粉1.8％，阿斯帕坦0.5％的比例混匀，直接压片。

6.根据权利要求3的泡腾片的制备方法，包括下列步骤：

(2)取当归、赤芍、川芎、丹参、桃仁5味，加入相当于生药量10倍的水，浸泡1小时，水蒸气提取挥发油，滤过，得油水混合液，水提母液及滤渣避光保存，备用；

(13)合并步骤(3)得到的挥发油β-环糊精包合水溶液、步骤(5)得到的红花水提液、步骤(6)得到的醇提取液、步骤(8)得到的水蛭醇提物β-环糊精包合水溶液、步骤(9)得到的水提液、步骤(11)得到的山羊角提取液、和步骤(12)得到的牛黄粉碎液，再加入适量的桔子香精，喷雾干燥，进口温度：160℃，出口温度：82℃，转速：21000rpm(350HZ)，得干浸膏粉末。

(14)按干浸膏粉39％，交联聚乙烯吡咯烷酮15％，甘露醇3.5％，无水柠檬酸9.94％，碳酸氢钠15.06％，微晶纤维素11.8％，微粉硅胶3％，硬脂酸镁0.4％，滑石粉1.8％，阿斯帕坦0.5％的比例混匀，直接压片，以OPADRY II为包衣材料，备制成18％的水包衣液，进风温度：50℃，片床温度：42℃，雾化压力：3bar，包衣锅转速：6～8rpm，包衣增重3％，包蓝色薄膜衣，即得。