CN100350929C - 一种治疗脑中风的脑血栓干浸膏及其制备方法和用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种治疗脑中风的脑血栓干浸膏及其制备方法和用途。本发明的干浸膏是将当归、川芎、赤芍、丹参、桃仁五味药合并用水蒸气提取挥发油，其水提液用60%乙醇醇沉。所提得的挥发油用β-环糊精包合。红花单独水提后，药渣与当归等药渣合并醇提。四味动物药中，水蛭用70%醇渗漉后，醇提物用β-环糊精包合，遮盖难闻腥味，改善口感。水蛭的醇提药渣与土鳖虫合并水提。药效实验证明山羊角水提物与其药渣碱水解物的合并物明显比山羊角直接粉碎入药有效，同时也可减低服药量。牛黄用高剪切分散后入药对提高生物利用度与速溶片速崩有利。上述高新技术的应用使所得的提取物能够最大限度地保留有效成分，除去无效成分，从而减少服用量，提高生物利用度。

Description

一种治疗脑中风的脑血栓干浸膏及其制备方法和用途

发明领域

本发明涉及一种治疗脑中风的高效脑血栓干浸膏及其制备方法，具体而言，本发明涉及多项新技术应用的高效脑血栓干浸膏及其制备方法。

背景技术

中风主要发生于中老年人，90％的中风发生在40岁以上的患者，且年龄越大发病率则越高，通常每增加10岁发病机会都会增加1倍。中国是世界上脑中风发生率最高的国家之一，现有脑中风患者2000多万人。急性脑血管病已跃居城市人口死因首位，每年还增加150万新患者。随着我国人口老龄化的到来及中风发作年龄段的提前，中风病的发病率将会越来越高。其具有难治愈、复发率高、终身服药、并发症多、病死率高的特点，一直是危害人类健康的大敌。因此，加强老年脑血管病的预防和治疗势在必行。

目前用于治疗中风的西药主要为溶栓药和通道阻断剂，但应用溶栓药物治疗最大的缺陷是它只适用于中风发生后3-6小时内，如超过3小时，溶栓后可导致脑内出血和脑水肿，反而加重病情，这些继发效应是由于再灌注损伤引起的。遗憾的是，当患者发生中风后一般在3小时内不能到达医院，另外，中风还需要CAT或MRI来排除出血性中风，由此还需要30分钟以上。因此，能接受溶栓治疗的机率只有1～2％。目前市场上常用的溶栓药替奈替普酶、尿激酶、链激酶、去纤酶、组织型纤溶酶原激活剂(tPA)、r-ProUK等治疗还可增加治疗后出血的可能性，由此进一步限制了急性中风患者的早期治疗。虽然某些抗血栓药，如阿斯匹林，warfarin，氯吡格雷(clopidogrel)等被广泛用于预防治疗，但很明显，一个安全有效的能用于中风早期的治疗方法是非常关键的。

目前市售的脑血栓片由宋·许叔微《普济本事方》中抵当圆丸加减而来，后被制成片剂由天津药品检验所起草载入1998年版《中华人民共和国卫生部药品标准·中药成方制剂》第十九册，因其用于中风先兆及脑血栓形成恢复期的疗效较好，被收入国家《基本药物目录》供临床医师选用，并在片剂的基础上开发有口服液。

因羚羊角被列入《濒危野生动植物种国际贸易公约》，属国家一级保护动物；牛黄属药源紧缺类药材，难以满足临床用药需要，大量依赖进口。因此，本发明人经过潜心研究，用山羊角或水牛角替代羚羊角、用体外培育牛黄、培植牛黄或人工牛黄替代牛黄入药，并且对原处方工艺进行了优化和改进。另外，由于原剂型虽具有抗血栓、扩张血管等作用，但由于赤芍等4味以生药细粉直接压片，故存在生物利用度低，药物吸收不完全且用药量大等缺点。本发明人对脑血栓干浸膏的制备进行了潜心研究，在传统脑血栓片的基础上进行提取工艺改进，通过正交试验设计及主要药效学比较，筛选出优化的提取工艺，由此完成了本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种治疗脑中风的高效脑血栓干浸膏；

本发明的另一目的是提高一种治疗脑中风的高效脑血栓干浸膏的制备方法；

本发明的另一目的是提供了一种含有本发明治疗脑中风的高效脑血栓干浸膏的药物组合物；

本发明的另一目的是提供了将本发明制备的干浸膏用于制备治疗脑中风的高效脑血栓药物的用途。

本发明是通过下列技术方案实现的：

处方(原料组成为)：

红花900g    当归900g    水蛭(制)900g    赤芍900g

桃仁900g    川芎900g    丹参900g        土鳖虫225g

山羊角或水牛角600～1500g    体外培育牛黄、培植牛黄或人工牛黄3～30g

制法：由下列步骤制备：

(1)将上述中药原料粉碎备用；

(2)取当归、赤芍、川芎、丹参、桃仁等5味，加入水，浸泡，水蒸气提取挥发油得油水混合液；滤液及滤渣备用；

(3)在步骤(2)中收集得的油水混合液中加入包合剂包合，包合剂可以使用β-环糊精，分散包合得挥发油包合液，优选采用高剪切法包合；

(4)将步骤(2)得到的水提母液减压低温回收，回收后的浓缩液量等于当归等5味中药原料的投药量，加乙醇搅拌至含醇量为55～85％(V/V)，冷藏放置，过滤，得水提醇沉液；

(5)取红花加入水煎煮1～3次，滤过，滤液回收至红花的投药量；

(6)步骤(5)中得到的红花滤渣与步骤(2)中的滤渣合并，加入相当于该生药量6～10倍量的50～90％乙醇(V/V)，加热回流提取1～3次，滤过，醇提液与步骤(4)中的水提醇沉液合并，回收乙醇至投药量得到醇提取液；

(7)取水蛭加乙醇浸泡，渗漉，收集渗漉液，药渣挥去乙醇备用；

(8)渗漉液回收乙醇至投药量的1～3倍，加入包合剂包合得到水蛭包合液；

(9)取土鳖虫与水蛭药渣合并，加入水煎煮1～3次，滤过，滤液回收至投药量；

(10)取山羊角或水牛角加入水煎煮3次，滤过，滤液备用；

(11)山羊角或水牛角药渣加入0.25％氢氧化钠溶液(W/V)，加热水解，滤过，碱水解液加稀HCl调pH至7.0，与步骤(10)得到的山羊角或水牛角水提液合并，回收至投药量得到山羊角或水牛角提取液；

(12)取体外培育牛黄、培植牛黄或人工牛黄加入水，高剪切分散粉碎；

(13)合并步骤(3)得到的挥发油包合水溶液、步骤(5)得到的红花水提液、步骤(6)得到的当归、红花等6味药醇提取液、步骤(8)得到的水蛭醇提物β-环糊精包合水溶液、步骤(9)得到的土鳖虫与水蛭水提液、步骤(11)得到的山羊角或水牛角提取液、和步骤(12)得到的牛黄粉碎液，再加入适量的桔子香精，干燥(可以采用喷雾干燥，也可采用真空干燥、红外干燥、微波干燥等其他适宜的干燥方法进行干燥)，得干浸膏粉末。

其中，体外培育牛黄由武汉大鹏药业有限公司生产，培植牛黄由中国牛黄技术开发公司生产，人工牛黄由上海贝斯欧药业有限公司生产。(下同)

本发明较优的技术方案是：

处方：

红花900g    当归900g    水蛭(制)900g    赤芍900g

桃仁900g    川芎900g    丹参900g        土鳖虫225g

山羊角或水牛角900～1200g    体外培育牛黄或培植牛黄6～18g

制法：由下列步骤制备：

(1)当归、赤芍、川芎、丹参等4味粉碎成过10～50目筛的粉末，桃仁粉碎成过10～30目筛的粉末，红花、水蛭、土鳖虫等3味粉碎过20目，山羊角粗粉碎，体外培育牛黄碾碎，备用；

(2)取当归、赤芍、川芎、丹参、桃仁等5味，加入相当于该生药量6～10倍的水，浸泡0～2小时，水蒸气提取挥发油3～9小时，滤过，得油水混合液；水提母液及滤渣避光保存，备用；

(3)在步骤(2)中收集得的油水混合液中加入70g～120g的β-环糊精包合剂，40～60℃水浴采用高剪切法分散包合2～4小时，剪切速度为1000～13000rpm，得挥发油β-环糊精包合液；

(4)将步骤(2)得到的水提母液减压低温回收至投药量，加乙醇搅拌至含醇量为60-70％(V/V)，冷藏放置，过滤，得水提醇沉液，避光保存；

(5)取红花加入相当于红花生药量的20～30倍水，煎煮1～3次，每次1～3小时，滤过，滤液回收至投药量，避光保存；

(6)将步骤(5)的红花滤渣与步骤(2)的滤渣合并，加入生药量6～10倍量的60～80％乙醇(V/V)(32.4～54L)，加热回流提取1～3次，每次1～3小时，滤过，该醇提液与步骤(4)得到的水提醇沉液合并，回收乙醇至投药量(5.4L)，得到醇提液；

(7)取水蛭加生药量1倍的70％乙醇醇(V/V)(0.9L)浸泡24小时，渗漉，收集渗漉液，药渣挥去乙醇，备用；

(8)渗漉液回收乙醇至投药量的2倍，加入300～450gβ-环糊精包合剂，60℃水浴搅拌，搅拌速度为1000rpm得水蛭β-环糊精包合液，避光保存；

(9)取土鳖虫与水蛭药渣合并，加入相当于生药量3～5倍(3.375～5.625L)的水煎煮1～3次，每次1～2小时，滤过，滤液回收至投药量，保存；

(10)取山羊角或水牛角加入相当于生药量10倍(即加入水量相当于山羊角或水牛角投药量的10倍量)的水煎煮3次，每次2小时，滤过，滤液备用；

(11)山羊角或水牛角药渣加入相当于生药量8倍的0.25％氢氧化钠溶液(W/V)，加热水解4小时，滤过，碱水解液加稀HCL调pH至7.0，与山羊角或水牛角水提液合并，回收至投药量，避光保存；

(12)取体外培育牛黄或培植牛黄，加30倍量的水，高剪切分散粉碎2小时，速度为22000～28000rpm；

(13)合并步骤(3)得到的挥发油β-环糊精包合水溶液、步骤(5)得到的红花水提液、步骤(6)得到的当归、赤芍、川芎、丹参、桃仁、红花等6味药醇提液、步骤(8)得到的水蛭醇提物β-环糊精包合水溶液、步骤(9)得到的水提液、步骤(11)得到的山羊角或水牛角提取液、与步骤(12)得到的牛黄粉碎液，再加入适量的桔子香精，喷雾干燥(也可采用真空干燥、红外干燥、微波干燥等其他适宜的干燥方法进行干燥)，进口温度：160℃，出口温度：82℃，得干浸膏粉末。

本发明优选的技术方案是：

处方：

红花900g    当归900g    水蛭(制)900g    赤芍900g

桃仁900g    川芎900g    丹参900g        土鳖虫225g

山羊角1125g    体外培育牛黄12.5g

制法：由下列步骤制备：

(1)当归、赤芍、川芎、丹参等4味粉碎成过50目筛的细粉，桃仁粉碎成过30目筛的细粉，红花、水蛭、土鳖虫等3味粉碎过20目，山羊角粗粉碎，体外培育牛黄碾碎，备用；

(2)取当归、赤芍、川芎、丹参、桃仁等5味，加入相当于生药量10倍的水，浸泡1小时，水蒸气提取挥发油，滤过，得油水混合液；水提母液及滤渣避光保存，备用；

(3)在步骤(2)中收集得的油水混合液中加入93.3g的β-环糊精，50℃水浴高剪切分散包合4小时，剪切速度为13000rpm，得挥发油β-环糊精包合液；

(4)将步骤(2)得到的水提母液减压低温回收至投药量，加95％乙醇(V/V)搅拌至含醇量为60％(V/V)，冷藏放置24小时，过滤，得水提醇沉液避光保存；

(5)取红花加入相当于生药量的30倍水，煎煮2次，每次1小时，滤过，滤液回收至投药量得到红花水提液，避光保存；

(6)将步骤(5)的红花滤渣与步骤(2)的滤渣合并，加入生药量10倍量的70％乙醇(V/V)，加热回流提取3次，每次3小时，滤过，该醇提液与步骤(4)得到的水提醇沉液合并，回收乙醇至投药量，得到醇提液5.4L；

(7)取水蛭加生药量1倍的70％乙醇(V/V)浸泡24小时，渗漉，渗漉速度为2.5ml/分钟，收集相当于生药量10倍的渗漉液，药渣挥去乙醇，备用；

(8)渗漉液回收乙醇至投药量的2倍，加入302.8gβ-环糊精，60℃水浴搅拌1.5小时，搅拌速度为1000rpm得水蛭β-环糊精包合液，避光保存；

(9)取土鳖虫与水蛭药渣合并，加入相当于生药量4倍的水煎煮3次，每次2小时，滤过，滤液回收至投药量，保存；

(10)取山羊角加入相当于生药量10倍的水煎煮3次，每次2小时，滤过，滤液备用；

(11)将步骤(10)得到的山羊角药渣加入相当于生药量8倍的0.25％氢氧化钠溶液(W/V)，加热水解4小时，补充水分，滤过，碱水解液加稀HCL调pH至7.0，与步骤(10)的山羊角水提液合并，回收至投药量得到山羊角提取液，避光保存；

(12)取体外培育牛黄，加30倍量的水，高剪切分散粉碎2小时，速度为22000rpm；

(13)合并步骤(3)得到的挥发油β-环糊精包合水溶液、步骤(5)得到的红花水提液、步骤(6)得到的当归、红花等6味药醇提液、步骤(8)得到的水蛭醇提物β-环糊精包合水溶液、步骤(9)得到的水提液、步骤(11)得到的山羊角提取液、与步骤(12)得到的牛黄粉碎液，再加入适量的桔子香精，喷雾干燥，进口温度：160℃，出口温度：82℃，转速：21000rpm(350HZ)，得干浸膏粉末。

本发明的另一方面提供了一种用于治疗脑中风的含有本发明干浸膏的药物组合物，该药物组合物由治疗有效量的本发明干浸膏和可药用辅料组成，由制药领域的常规方法制备得到，可以是片剂，泡腾片，口腔速溶片，胶囊剂，颗粒剂，丸剂，滴丸，合剂，口服液，微囊剂，微丸等。

本发明的另一方面是提供了使用本发明的浸膏制备治疗脑中风的脑血栓药物的用途。该用途通过制药领域中使用的常规方法使用本发明的浸膏实现。

本发明的脑血栓干浸膏及其制成的药物组合物具有起效快、生物利用度高、服用方便、产品质量稳定、患者顺应性好等优点。

本发明所制备的脑血栓干浸膏及其药物组合物制剂可用于中风中经络之瘀阻脑络症的治疗，包括中风先兆及西医之脑血栓形成恢复期，能够有效治疗瘀阻脑络证所引起的半身不遂、口眼歪斜、言语不利等症状。

附图说明：

附图1：牛黄粒度分析图

具体实施方式：

下面通过实施例进一步说明本发明。应该理解的是，本发明的实施例是用于说明本发明而不是对本发明的限制。根据本发明的实质对本发明进行的简单改进都属于本发明要求保护的范围。另外，在本发明中，(v/v)表示体积比浓度或者体积比；(w/w)表示重量比浓度或者重量比；(w/v)表示重量/体积比浓度或者重量/体积比，其对应的单位是(克/毫升)；(rpm)表示每分钟的转数(转/分钟)；(h)表示小时。

实施例1.当归、川芎等提取挥发油工艺的研究

当归、川芎、桃仁三味富含挥发油，如与其它几味合煎，可能对其提取有影响，而中药复方制剂强调协同作用，故对当归、川芎、桃仁三味药合煎提油，与五味药合煎提油进行对比。两者以挥发油得率为主要指标，各味药的活性成分为辅助指标进行正交设计，所得的最佳工艺进行比较以确定提油方案。

1.1三味药合煎提油正交设计实验

采用正交实验法来确定当归、川芎、桃仁三味药的挥发油最佳提取条件，选择药材细度、加水量、煎煮间3个因素作为考察因素，每个因素选择3个水平设计L9(3³)进行考察，如下表：

表1三味药合提挥发油的因素水平表

水平

因素

	提取时间A(小时)	加水量B(倍)	细度C(目)
				123	369	6810	401020

按照处方比例称取当归、川芎、桃仁各70g，共210g，称9份，依正交实验方案表进行实验，分析结果如表2：

             表2三味药合煎正交设计试验分析结果

评分标准：取各指标成分中最大含量值X_M为100分，各个实验该成分含量计分为X_i’＝X_i/X_M*100％，再乘以各自系数后各指标相加的总分为该实验得分。以挥发油为主要指标，阿魏酸、川芎嗪为辅助指标，我们采用加权评分法综合评估最佳条件，其中挥发油得率占50％(系数为0.5)，阿魏酸(来源于川芎、当归)占30％(系数为0.3)，川芎嗪占20％(系数为0.2)。

统计学处理如下表：

                               表3方差分析结果

由上可知，各因素对提取影响大小次序为：提取时间(A)＞加水量(B)＞细度(C)，A因素无显著性差异，各因素最佳条件为：A₂B₃C₁，即40目，加水10倍量，提取6小时。

1.2当归、川芎、桃仁、丹参、赤芍五味药合煎提油正交设计实验

采用正交实验法来确定当归、川芎等5味药的最佳提油条件，采用细度、浸泡时间、加水量、提取时间为4个因素，每个因素3个水平进行考察。结果见表4：

                       表4五味药合煎提取挥发油因素水平表

水平	因素
					浸泡时间A(小时)	细度B(目)	加水量C(倍)	提取时间D(小时)
	123	012	102050	6810					369

按处方比例称取当归、川芎、桃仁、丹参、赤芍各100g，共500g，称9份，依正交实验方案表4进行实验，所得油用乙醚萃取2次，一次25ml，一次10ml，挥干乙醚，称重。分析结果如表5：

                      表5五味药合煎正交设计试验分析结果

R

3.21

12.80

13.54

16.30

评分方法同三味药合煎提油。采用加权评分法综合评估最佳条件，其中挥发油得率为主要指标占40％(系数为0.4)，阿魏酸占20％(系数为0.2)，川芎嗪、原儿茶醛、丹参素、芍药苷各占10％(各自系数为0.1)。

统计学处理如下表：

                                 表6方差分析结果

由上可知，各因素对五味药合提油影响大小为：提取时间(D)＞加水量(C)＞细度(B)＞浸泡时间(A)，其中，B、C、D都有极显著性影响，最佳条件为：A₂B₃C₃D₃，即50目，浸泡1小时，加10倍量水，提取9小时。

1.3验证实验

以最佳条件用相同量药材提油两次，所得结果进行三味药与五味药合提对比。

药材来源：1.甘肃岷县当归，四川灌县川芎，河南洛阳桃仁，山东平邑丹参与辽宁抚顺赤芍(同五味药正交)

2.甘肃岷县当归，四川灌县川芎，河南洛阳桃仁，河南洛阳丹参与甘肃文县赤芍

            表7不同提取方法的验证性

三味药		五味药
				药源1	药源2
		挥发油得率(g)阿魏酸含量(mg)川芎嗪含量(mg)丹参素含量(mg)原儿茶醛含量(mg)芍药苷含量(mg)	0.953188.6557.0			1.5575109.139.52501.590.551613.75	1.299997.635.825844.0159.0539.25

两种方案均以挥发油得率(系数为0.5)，阿魏酸含量(0.3)，川芎嗪含量(0.2)计算得分。见下表：

               表8两种方案得分表

三味药		五味药
				药源1	药原2
		挥发油阿魏酸川芎嗪得分	47.1244.2689.6154.76			77.0154.4790.2172.89	64.2648.7381.7763.10

从上可看出，三味药合煎提油综合评分小于五味药综合评分，说明丹参、赤芍与当归等三味药同煮有利于挥发油提取及阿魏酸、川芎嗪的溶出。

实施例2.挥发油包合最佳工艺筛选研究

混合药物提出的挥发油有较强的刺激性气味，若直接入药，不利于直接服用，且容易挥发，不易于保存，从而难以控制制剂的质量。如做为分子经包合后，溶解度增大，稳定性提高，液体挥发油可粉末化，可防止其挥发，同时掩盖不良气味或味道，降低刺激性与毒副作用。采用β-CD(β-环糊精，下同)为包合材料，对中药挥发油有较好包合效果。对其包合方法和条件进行了如下考察。

2.1包合方法筛选

挥发油包合方法有以下几种：①电动恒温搅拌法；②磁力恒温搅拌法；③超声法；④高剪切分散法；⑤研磨法。其中前四种为饱和水溶液法，后一个为固液法。而高剪切分散法所用仪器为高剪切分散剪切仪。现在相同条件下对5种方法作了对比，所用的挥发油系混合药材水蒸气蒸馏法提出，经无水乙醚萃取，无水硫酸钠脱水干燥，为黄色油状物。

2.1.1不同包合方法的包合物的制备

方法①～④：称取β-CD 5g，加蒸馏水75ml，加热溶解，滴加0.5g挥发油，60℃恒温搅拌、超声或高剪切分散2.5小时，冷藏放置24小时，抽滤，用15ml水，5ml石油醚洗涤沉淀，70℃减压干燥，得淡黄色固形物。

方法⑤：称取β-CD 5g，置研钵中，加水20ml，加0.5g油，研磨2.5小时，冷藏放置24小时，抽滤，用15ml水，5ml石油醚洗涤沉淀，70℃减压干燥，得淡黄色固形物。

2.1.2不同包合方法的得率

将上述包合物置圆底烧瓶，加蒸馏水100ml，加热蒸馏5小时，收集挥发油，以乙醚萃取，无水硫酸钠脱水干燥，挥干乙醚，精密称重。得油率见下表：

                  表9β-CD包合挥发油不同方法的比较

	电动搅拌法	磁力搅拌法	超声法	剪切法	研磨法
						得油数(g)	0.1743	0.2268	0.169	0.2651	0.2147

得油率％

33.58

45.27

33.81

52.20

42.68

由上可知，五种方法得油率比较结果为：剪切法＞磁力搅拌法＞研磨法＞超声法＞电动搅拌法。故决定优选采用高剪切法。

2.2挥发油包合条件研究

选择混合油与β-CD比例、剪切温度、剪切速度、剪切时间为4个因素，每个因素选择三个水平，进行四因素三水平的正交实验观察，见下表：

                    表10挥发油、β-CD包合正交因素水平表

水平	因素
					油β-CDA	包合温度B(℃)	剪切速度C(rpm)	包合时间D(小时)
	123	1∶61∶81∶10	405060	100013001600					234

称取β-CD，加12.5倍量蒸馏水，加热搅拌使溶解，在恒温条件滴加挥发油1g，控制温度及剪切速度对挥发油进行包合，并维持一定时间，取出，冷藏24小时，抽滤，用少量石油醚洗涤沉淀，滤渣于40℃减压干燥4小时，得黄白色粉末状包合物，称重。

取1g挥发油混合物，置圆底烧瓶，加蒸馏水200ml，加热蒸馏5小时，收集挥发油，以乙醚萃取，无水硫酸钠脱水干燥，挥干乙醚，精密称重。结果，空白得油：0.4053g；则回收率为：40.53％。

依正交表10所得的包合物按空白回收率测定方法测定挥发油。所得结果如下表：

                 表11剪切法β-CD包合挥发油正交实验分析结果

注：固形物得率＝[包合物重量/(β-CD+挥发油加入量)]×100％

油利用率＝[所得挥发油量/(挥发油加入量*空白回收率率)]×100％

统计学处理如下表：

                              表12方差分析结果

由上可知，剪切法包合挥发油的各因素影响大小次序为：B(包合温度)＞D(包合时间)＞C(剪切速度)＞A(β-CD、油比例)，B、D因素有极显著性差异，各因素最佳条件为：A₂B₂C₂D₃，即β-CD、油比例为1∶8，50℃1300rpm剪切4小时。

2.3挥发油包合工艺验证性实验

按最佳包合工艺进行验证性实验，n＝2，结果如下：

         表13挥发油包合物最佳制备工艺验证性实验结果

实验号	挥发油加入量(g)	滤液固形物得率(％)	所得挥发油量(g)	油利用率(％)
					12	2.00592.334	78.2777.92	0.67410.7712	82.9281.53

由上表看，油利用率不高为滤液固形物得率低所致，故将包合液不经过滤蒸干所得的固形物直接提油，计算得油率。

实施例3.当归等水提液除杂工艺研究

选用醇沉处理或用天然澄清剂处理，两种除杂方式和混合药材水提液原液进行多指标对比，从而选取较好的除杂方式。

3.1醇沉除杂工艺

用乙醇醇沉除杂时，川芎、当归水提液以浓度为60％的乙醇(V/V)醇沉为佳，赤芍、丹参则以60～70％(V/V)乙醇醇沉较好，则优选用60％(V/V)为乙醇醇沉浓度。

取川芎、当归、赤芍、丹参、桃仁五味提油后的水提液，60℃避光真空浓缩至密度为1.02，加95％乙醇(V/V)醇沉，使之浓度达到60％(V/V)，冷藏放置24小时，抽滤，滤液备用。

3.2澄清剂除杂工艺

考察了两种澄清剂：汉威斯特澄清剂(天津汉威斯特科技开发有限公司)和正天成澄清剂(天津正天成澄清技术有限公司)。取混合药材水提液，浓缩至生药∶水＝1∶5，测得其pH＝5，分成两分，分别于恒温65℃搅拌加入3份两种澄清剂的B组分(每100ml浓缩液加入30ml 1％B)，每30分钟搅拌1次，2小时后加入1.5份A，加法同B，2小时后离心，取上清液备用。

3.3醇沉样品、澄清剂样品及水提液原液有效成分三种样品液固形物得率

取相当于10g生药的样品液于水浴80℃蒸发至干，取出至60℃抽真空12小时，取出称重，计算固形物得率。结果见下表：

                                     表14不同除杂方法比较

		阿魏酸	原儿茶醛	丹参素	芍药苷	川芎嗪	固形物得率(％)
								水提醇沉样品汉威斯特澄清剂样品正天成澄清剂样品水提液原液	一个处方中含量(mg)占原液的百分数(％)一个处方中含量(mg)占原液的百分数(％)一个处方中含量(mg)占原液的百分数(％)	109.4585.78121.3595.10125.8598.63127.60	126.0589.81136.597.26128.888.01140.35	860.584.28921.090.21917.589.86102.1	5.3974.19536.573.85521.071.71726.5		18.85046.0040.49498.8139.67396.8140.981

由此可见，水提醇沉工艺能保留80％以上的水提液原液中的有效成分，而固形物却只有原液的46％，大大提高了有效成分的浓度，且较大程度上减少了浸膏量。加入澄清剂工艺虽能保留90％以上，但固形物却是原液的97％，并未起到有效的除杂效果。因此，我们优选用水提醇沉工艺作为该立的除杂工艺。

实施例4.红花水提工艺研究

红花有效成分红花黄色素对血液有较好抗凝作用以及对治疗缺血性中风有重要意义，同时红花中其他水溶性成分对脑卒中引起的相应症状也有一定作用。因此，本方中红花水提工艺用以黄色素为主的总吸收度来评价，采用正交设计对影响水溶性有效成分提取的因素进行考察。

4.1红花水提正交实验设计

选择药材细度、溶媒量、提取时间、提取次数为4个因素，每个因素选择三个水平，进行四因素三水平的正交实验考察，见下表：

                       表15红花水提正交因素水平表

水平	因素
					药材细度A(目)	溶媒量B(倍)	提取时间C(小时)	提取次数D(次)
	1	0	20	1					1

2	20	25	2	2
					3	50	30	3	3

取红花药材5g(细度按上表)于一定量沸水按上表回流提取，抽滤，滤液稀释一定倍数照分光光度法，在401nm波长处测定吸收度。正交实验结果如下表：

                          表16红花水提正交实验分析结果

	药材细度A(目)	溶媒量B(倍)	提取时间C(小时)	提取次数D(次)	吸收值	稀释倍数
							123456789K1K2K3R	1112223331.0821.2161.2280.048	1231231231.0821.1891.2550.057	1232313121.2381.1711.1170.041	1233122311.1291.1971.2000.024	0.3350.3710.3760.3810.3750.4600.3660.4430.419	25010055.683.320083.312566.7166.7

统计学处理如下：

                      表17方差分析结果

结果显示，因素B即提取溶媒量对红花黄色素等水溶性有效成分的提取率有显著影响，其余因素都无显著影响，实验得出的最佳条件是A₃B₃C₁D₃。即药材细度为50目，30倍水，提取3次，每次1小时。综合对节能简便等工艺条件的考虑，可将A₂B₃C₁D₂视为最佳工艺，即药材细度为20目，30倍水，提取2次，每次1小时。

4.2验证实验

用正交实验量的十倍为验证实验用药量，可将实验得出的最佳条件1与自定的最佳工艺2作对比，实验步骤按4.1。结果如下：

表18红花水提验证实验

编号	条件	吸收值
			12	(A3B3C1D3)(A2B3C1D2)	0.4620.470

由上表可见，条件1与条件2差别不大，故选用工艺条件2(A₃B₃C₁D₃)为红花水提工艺，即药材细度为20目，30倍水，提取2次，每次1小时。

实施例5混合药材醇提工艺研究

桃仁等五味药材经水提油后，药渣与红花水提药渣合并进行醇提取，旨在提取脂溶性有效成分，这对于全方位治疗脑血栓病的有重要意义。中药复方强调协同作用，因此考虑该六味药材合并醇提。考虑到桃仁等六味药材的脂溶性成分极性有差异，拟定将醇浓度作为最大可变因素，先对醇提浓度进行单因素筛选，以确定醇提浓度范围，随后再对其他因素作正交筛选。

5.1醇提浓度单因素筛选实验：

取六味原药材24g(每味4g)，分别按实施例1、2、3、4项下步骤进行提油及水提，药渣加10倍不同浓度的乙醇95℃水浴回流提取一小时，离心，上清液备用。

设计醇提浓度有：30％，50％，70％，90％(V/V)。

5.1.1加权系数的确定：

由于当归等五味药在水提油时已提出部分有效成分(阿魏酸、川芎嗪、芍药苷)，将水提油(五味药)的相应有效成分含量与醇提后比较，以确定各指标的加权系数。

结果见下表：

                          表19不同浓度乙醇提取结果

芍药苷含量(mg)		丹参酮IIA含量(mg)	阿魏酸含量(mg)	川芎嗪含量(mg)
					30％醇样品50％醇样品70％醇样品90％醇样品	4.9203.9603.8163.768	0.22102.44565.54404.7616	1.22400.77280.88800.6960	0.18640.11960.10880.0988

水提油相应成分与醇提有效成分含量比较：

            表20水提与醇提的有效成分的对比

	水提液提取率(％)	醇提液提取率(％)
			阿魏酸	0.1091	0.02418

川芎嗪	0.0358	0.00466
			芍药苷	0.5392	0.123

由此可见，醇提液中上述三种有效成分含量只有水提油液的20％，故醇提以丹参酮IIA为主。所以将各指标成分系数定为：丹参酮IIA为0.55，芍药苷、阿魏酸、川芎嗪各为0.15。

5.12筛选实验结果

取各指标成分中最大含量X_m计为100分，该成分其余样品含量记分为X_i’＝(X_i/X_m)*100％，再乘以各对应成分系数后，各指标相加的总分为该成分的得分。结果如下表：

                   表21不同浓度乙醇提取得分结果

芍药苷(0.15)		丹参酮IIA(0.55)	阿魏酸0.15	川芎嗪0.15	总分
						30％醇样品50％醇样品70％醇样品90％醇样品	10080.4977.5676.59	3.9944.1110085.89	10078.9290.6971.08	10064.2258.4352.90	47.19057.80589.00277.325

由此可见，70％醇样品分数最高，故为醇提中心浓度。

5.2六味药醇提正交实验设计

拟考察川芎中阿魏酸、川芎嗪，当归中阿魏酸，赤芍中芍药苷，丹参中丹参酮IIA等活性成分含量，以HPLC测定。选择醇浓度、溶媒量、提取时间和提取次数4个因素作为考察因素，每个因素选择3个水平进行正交实验考察，如下表：

                              表22醇提正交实验因素水平表

水平	因素
					醇浓度A(％)	溶媒量B(倍)	提取时间C(小时)	提取次数D(次)
	123	60％70％80％	6810	123					123

取单因素筛选实验所用药渣按上表进行回流提取，药液离心，上清液备用。正交实验结果如下：

                          表23正交实验分析结果

	A	B	C	D	芍药苷含量(mg)(0.15)	丹参酮含量(mg)(0.55)	阿魏酸含量(mg)(0.15)	川芎嗪含量(mg)(0.15)	总分
										12345	11122	12312	12323	12331	5.2447.13046.1323.84245.6592	4.10165.94487.01286.6965.268	1.404961.5481.669441.499041.62	0.421680.27960.41880.372240.55104	67.2383.0394.2184.1482.71

记分方法：同单因素筛选实验记分方法。

统计学处理：

                                表24方差分析结果

由此可见，最佳条件为：A₂B₃C₃D₃，即浓度为70％的乙醇(V/V)10倍量提取3次，每次3小时。因为B、C、D三个因素对指标成分提取率都有显著影响，故不能只考虑节能因素，决定选则该条件进行验证实验。

5.4最佳条件验证实验：

取正交实验所用药渣，按A₂B₃C₃D₃条件进行提取，药液离心，上清液备用。结果如下：

                                 表25醇提验证实验结果

芍药苷	丹参酮	阿魏酸	川芎嗪	总分
					含量(mg) xi’7.0992   98.90	含量(mg)  xi’7.4232    100	含量(mg)  xi’1.620     97.04	含量(mg)  xi’0.396     71.86	95.17

验证实验显示，该条件为醇提最佳条件，即浓度为70％的乙醇(V/V)10倍量提取3次，每次3小时。

实施例6.水蛭、土鳖虫提取工艺研究

水蛭用乙醇渗漉；药渣挥去乙醇后与土鳖虫合并水提。水提实验用含氮量为指标作正交实验。

6.1水蛭醇提实验：

水蛭醇提采用70％乙醇(V/V)对水蛭进行渗漉效果最好，并收集10倍量渗漉液，既能达到较好提取率，按上述条件对水蛭进行醇提。

取水蛭600g，粉碎成粗粉，用70％乙醇(V/V)为提取溶剂进行渗漉，室温为25±3℃；浸渍时间为24小时；速度为2ml/分钟，收集渗漉液6000ml，备用。药渣挥去乙醇备用。

渗漉液回收乙醇后，于水浴80℃蒸干，60℃真空干燥24小时，称重，得膏率为8.41％(W/W)。

6.2水蛭、土鳖虫水提工艺研究

以提取物总含氮量为指标，选择溶剂浸泡时间、提取溶剂量、提取时间、提取次数4个因素作为考察因素，每个因素选择3个水平考察其对提取率的影响，从而确定最佳水提工艺。

取相当于生药60g的水蛭药渣与土鳖虫粗粉15g，按下表进行水提实验：

                            表26水蛭、土鳖虫水提因素水平表

水平	因素
					浸泡时间A(小时)	溶媒量B(倍)	提取时间C(小时)	提取次数D(次)
	123	012	345	1.01.52.0					123

提取物总含氮量测定按药材含氮量测定方法测定，所得实验数据及结果见下表：

               表27水蛭、土鳖虫水提正交实验分析结果

统计学处理：

                           表28方差分析结果

结果显示，水提工艺以不浸泡，加4倍水，提取3次，每次1.5小时为好。

用最佳条件作验证实验，n＝4，结果如下，含氮量均值：2859.95mg；提取率均值：3.813％。由此可见，可用上述条件作为水蛭与土鳖虫水提工艺条件。即水提工艺以不浸泡，加4倍水，提取3次，每次1.5小时为好。

实施例7.水蛭醇提物包合工艺

水蛭提取物有浓烈的腥臭味，口味不佳，难以直接服用。如直接蒸干入药令人无法接受，不利于泡腾片的服用。拟用β-CD或尤特奇水分散体(丙烯酸树脂，RHM公司)对醇提物进行包合，旨在掩盖不良气味，增加其水溶性。用一定量的β-CD或尤特奇水分散体包合醇提物，使起到矫味作用，又要尽量避免因使用大量辅料而增加片重。

通过比较不同种类及其用量的包合辅料包合水蛭醇提物后的味感，确定包合的工艺。具体步骤如下：

7.1β-CD包合

量取相当于生药30g的醇提液300ml，分别加β-CD饱和液(醇提物2倍、3倍、4倍)用电动搅拌机以1000rpm于水浴60℃搅拌1.5小时，取出于水浴70℃加热蒸干。

7.2尤特奇包合

取醇提液300ml，分别量取一定体积的尤特奇(投药量10％、15％、20％)，以及尤特奇的10％柠檬酸三乙酯，用电动搅拌机以1000pm(转/分钟)于水浴60℃搅拌1.5小时，取出于水浴70℃加热蒸干。

7.3两种包合比较

通过尝味比较，结果如下表：

                           表29水蛭醇提物不同包合方法对比

	β-CD包合			尤特奇包合
							所加辅料量(g)味感	2倍5.046不佳	3倍7.569稍有异味	4倍10.092无异味感	10％3不佳	15％4.5不佳	20％6有异味

综合考虑，由于水蛭醇提物得膏率不大，其所加的辅料量也不大，制剂成型后的服药量增加不多，因此优选取味感尚能接受的4倍β-CD包合方案。

实施例8.山羊角的入药方式的工艺研究

原处方中有羚羊角一味。羚羊角属于濒危保护物种，被列入《濒危野生动植物种国际贸易公约》的物种范围内。因此，寻找合适的代用品对濒危物种可持续发展有积极意义，同时也大大降低处方成本。山羊角经研究证明其化学成分及药理作用与羚羊角基本相同，用量为8～10倍。因此现用10倍量山羊角代羚羊角使用。经研究表明，羚羊角水解后入药比粉混悬剂解热作用明显。故拟用药效学实验考察山羊角水解工艺与粉末直接入药工艺对脑血栓治疗作用的优劣。

8.1山羊角水解工艺

碱水解处理：取山羊角562.5g，粗粉碎，加10倍量水煎煮3次，每次2小时，过滤，滤液放置备用。滤渣加8倍量0.25％氢氧化钠溶液(W/V)，加热水解4小时，不断补充水分，冷却后过滤，滤液用稀盐酸调pH值至7.0，将水煎液与水解液合并，加热浓缩至含生药量10％，备用。

8.2山羊角粉碎工艺

取山羊角562.5g，粗粉碎，于超微粉碎处超微粉碎，粉碎度为如下：

                            表30粉碎度比较

体积平均粒径(μm)	表面积平均粒径(μm)	d(0.5)(μm)	d(0.9)(μm)
				37.96	22.07	30.14	78.13

8.3两种工艺样品的制备

8.3.1山羊角水解工艺样品

除山羊角外其余药味以一个处方量(即当归900g计)按前确定工艺分别提取、除杂及包合。取一半量与山羊角水解样品提取物合并，喷雾干燥，得干燥浸膏粉共984.5g，加研磨至细的体外培育牛黄粉末6.25g，混匀，作为山羊角水解工艺样品，备用。

8.3.2山羊角粉末工艺样品

取另一半其余药味提取物，喷雾干燥，得干燥浸膏粉共834g，加562.5g经超微粉碎的山羊角粉末与研磨至细的牛黄粉末体外培育6.25g，混匀，作为山羊角粉末工艺样品，备用。

8.4两种工艺样品对急性脑缺血动物模型药效作用比较

8.4.1对大鼠大脑中动脉阻断模型神经症状及梗塞面积的影响

对本实验采用线栓法形成局造型脑缺血的大鼠模型，用尼龙线从颈总动脉插入颅内至大脑前动脉，阻断大脑中动脉的血流，从而形成大脑中动脉阻断(MCAO)模型。大鼠清醒后，出现一侧肢体瘫痪与旋转不对称现象，用Longa评分法，对1、3、6、12、24小时神经缺陷症状进行评分；用TTC染色显示脑缺血24h后梗死范围。实验动物SD大鼠，体重250-300g，结果如下表：

表31对脑缺血(大鼠大脑中动脉栓塞MCAO)脑梗死体积的影响( X±s)

分组	剂量	动物数	脑梗死体积(％)
				假手术组模型组水解工艺组粉末工艺组	330mg/kg460mg/kg	10101010	024.96±8.2413.87±6.14**15.73±6.46*

^*与模型组比较p＜0.05  ^**与模型组比较p＜0.01

表32对脑缺血(大鼠大脑中动脉栓塞MCAO)神经症状的影响( X±s)

分组	剂量	动物	神经症状平分(Longa55分制)
								假手术组模型组水解工艺组粉末工艺组	(mg/kg)330460	(n)10101010	1h02.22±0.971.33±0.71*1.45±0.69*	3h02.63±0.922.22±0.972.73±0.47	6h03.17±0.981.63±0.92*1.90±0.32*	12h02.63±0.921.17±0.98*1.80±0.41*	24h03.17±0.980.62±0.17**0.81±0.21**

^*与模型组比较p＜0.05  ^**与模型组比较p＜0.01

8.4.2对大鼠双侧颈总动脉结扎模型脑含水量和脑指数的影响

SD雄性大鼠(250～300g)，用20％乌拉坦i.p麻醉，切开颈部皮肤，分离双侧颈总动脉并结扎，三小时后，断头取脑，称全脑湿、干重，计算大鼠脑含水量和脑指数，如下表：

表33对脑缺血(大鼠双侧颈总动脉结扎)脑水肿及脑指数的影响( X±s)

分组	剂量	动物数	脑含水量(％)	脑指数
					正常组模型组水解工艺组粉末工艺组	330mg/kg460mg/kg	101099	76.25±1.3878.67±0.99*78.09±1.26*#78.19±2.21	0.59±0.0020.62±0.03*0.54±0.03##0.55±0.03#

注：脑指数＝脑湿重×100/体重    脑含水量(％)＝(湿重-干重)/湿重×100％

^*与正常组比较P＜0.05；#与模型组比较p＜0.05  ##与模型组比较p＜0.01

8.4.3对血栓形成试验

本实验采用大鼠动—静脉旁路血栓形成模型，用20％乌拉坦麻醉大鼠，切开颈部皮肤，分离一侧颈总动脉。在动、静脉间插入一内充50U/ml肝素钠溶液和一根预先称重的5cm长4#手术丝线的聚乙烯管，形成A-V短路。50U/kg.i.v肝素钠溶液后，除去浮血后称重，减去丝线原重，即为血栓的湿重，将血栓放入60℃烤箱中干燥4小时，冷却后称重，即为血栓干重。然后计算血栓形成抑制率，见下表：

         表34对大鼠颈总动—静脉旁路血栓形成的影响( X±s)

分组	剂量	动物数	血栓湿重	血栓干重
					正常对照组阿司匹林组水解工艺组粉末工艺组	100330mg/kg460mg/kg	7755	14.83±4.129.14±1.25**12.32±4.80*13.18±3.52	3.09±1.152.07±0.34*2.65±0.31*2.88±0.35*

^*与正常组比较p＜0.05  ^**与正常组比较p＜0.01

综合药效实验结果，水解工艺组要比粉末工艺组的药效好，两者有显著性差别，同时水解工艺的得膏率比粉末直接入药工艺小，降低了服药量。因此优选山羊角水解工艺作为山羊角提取工艺。

实施例9.体外培育牛黄的粉碎工艺研究

体外培育牛黄用量较小，且较贵重，可直接入药。将牛黄粉碎成微粒入药，可增加其溶解度，有利于制剂的快速溶出并提高生物利用度。考虑用高剪切分散粉碎技术对牛黄进行粉碎，通过测其粉碎后在水中的粒径，来筛选粉碎的工艺条件。

粉碎方法：取体外培育牛黄用研钵研磨至细粉，称取2g，加水60ml，按不同条件置高剪切分散剪切仪进行粉碎，混合液用粒度测定仪测定粒径。结果如下表：

                       表35体外培育牛黄粒度分析报告

转速(rpm)	时间(h)	体积平均粒径(μm)	表面积平均粒径(μm)	d(0.5)(μm)	d(0.9)(μm)
						2200028000	0.51.02.03.01.0	11.0498.9966.8086.7748.186	2.5142.2511.7981.2511.585	5.1064.4303.1192.0812.929	30.30823.88117.62918.68823.157

对转速22000rpm作图，分析时间对粉碎度的影响，结果如附图1所示：

由上可知：转速加大对粒径影响不大。时间能显著影响粒径大小，但至2.0小时后再延长时间对粉碎粒径影响不大。故从节能角度看，可优选条件：转速22000rpm，粉碎时间为2.0小时。

医学研究表明人体肠胃对颗粒的最佳吸收细度为15μm左右，因为微米中药的颗粒达到最佳吸收细度水平，药物有效成分在胃肠道的溶解度明显增加，从而增加药物的生物利用度，加快药物的起效时间(陈力，吴懿平，微米中药及其制备技术中草药，2002，33(10)：865～868)。故高剪切法上述的优选条件达到此一目的。

实施例10.喷雾干燥

合并当归等水提醇沉液(为当归等5味药材提取挥发油的水提液，浓缩后加醇至含醇量为60％，冷藏放置，滤过，得到滤液即是)、红花水提液、当归等醇提液、水蛭等水提液、山羊角提取液、挥发油β-环糊精包合水溶液、水蛭醇提物β-环糊精包水溶液、体外培育牛黄粉碎液，加入适量的桔子香精，混合均匀，取少量样品溶液测得混合液含固量0.0766g/g，密度为1.023g/ml，进喷雾干燥塔干燥。进口温度：160℃，出口温度：82℃，得到干浸膏粉，混合均匀。粒度分析结果见下表：

                        表36高效脑血栓干浸膏粒度分析报告

体积平均粒径(μm)	表面积平均粒径(μm)	d(0.5)(μm)	d(0.9)(μm)
				25.996	6.814	8.830	72.760

由表中结果可知，干浸膏粒度为超微粒度，有利于制剂成型工艺、泡腾片的制备及药物在人体的吸收。

实施例11.脑血栓干浸膏的制备

按处方比例取药材161.86kg，其中当归、川芎、红花、赤芍、丹参、桃仁、水蛭各19kg，土鳖虫4.8kg，山羊角23.8kg，体外培育牛黄262.6g，同时取8.32kgβ-环糊精。按所确定的提取工艺对各药材进行提取，具体方法同实验室放大实验。将当归、川芎切成小块，赤芍、丹参、桃仁粉碎成细粉，红花、水蛭、土鳖虫等3味粉碎成粗粉，山羊角粗压碎，体外培育牛黄碾碎，备用；取当归、赤芍、川芎、丹参、桃仁等5味，混合均匀，分成5份，装入一层纱布制成的沙包中，加入相当于生药量10倍的水(190L)，浸泡1小时，水蒸气提取挥发油，滤过，收集挥发油，得到33L油水混合物；滤液及滤渣避光保存，备用；将收集得的挥发油油水混合物加入含1.96kg的β-环糊精包合，50℃水浴高剪切分散剪切包合4小时，剪切速度为13000r·m^-1，得挥发油β-环糊精包合液；当归等水提液减压低温回收至投药量，加95％乙醇(V/V)搅拌至含醇量为60％(V/V)，冷藏放置24小时，过滤，得水提醇沉液避光保存；取红花加入相当于生药量的30倍水(570L)，煎煮2次，每次1小时，滤过，滤液回收至投药量，避光保存；红花滤渣与当归等滤渣合并加入生药量10倍量的70％乙醇(V/V)(190L)，加热回流提取3次，每次3小时，滤过，醇提液与当归等水提液合并回收乙醇至投药量；取水蛭加生药量1倍的70％乙醇(V/V)(19L)浸泡24小时，渗漉，渗漉速度为2.5ml/分钟，收集相当于生药量10倍的渗漉液，药渣挥去乙醇，备用；渗漉液回收乙醇至投药量的2倍，加入含6.36kg的β-环糊精饱和水溶液，60℃水浴搅拌1.5小时，搅拌速度为1000rpm得水蛭β-环糊精包合液，避光保存；取土鳖虫与水蛭药渣合并加入相当于生药量4倍的水(95.2L)煎煮3次，每次2小时，滤过；取山羊角加入相当于生药量10倍的水(238L)煎煮3次，每次2小时，滤过，滤液备用；山羊角药渣加入相当于生药量8倍的0.25％NaOH(W/V)(190.4L)，加热水解4小时，补充水分，滤过，碱水解液加稀HCL调pH至7.0，避光保存；取体外培育牛黄，研磨至细粉，置30倍水(7.9L)中高剪切粉碎2小时，速度为22000rpm。合并当归等水提醇沉液、红花水提液、当归等醇提液、水蛭等水提液、山羊角提取液、挥发油β-环糊精包合水溶液、水蛭醇提物β-环糊精包合水溶液、体外培育牛黄粉碎液，混合均匀，取少量样品溶液测得混合液含固量0.0766g/g，密度为1.023g/ml，进喷雾干燥塔干燥。进口温度：160℃，出口温度：82℃，得到干浸膏粉，混合均匀。喷雾干燥后出料干浸膏粉43.11kg。得膏率为25.33％(W/W)，含水率1.66％(W/V)。

实施例12.实施例11制得的干浸膏粉主要药效学实验

实验药品和试剂：

实施例11脑血栓干浸膏粉：上海医药工业研究院提供，批号：040702，每克含生药3.74g。

消栓通络片0.375g/片：江西南昌济生制药厂(批号：040401)(阳性对照药物)

脑血栓片0.3g/基片：吉林省柳合辉发制药股份有限公司(批号：20040601)(原剂型对照药)

水合氯醛分析纯：上海山浦华工有限公司(批号：20040212)

红四氮唑(2，3，5 triphenylte trazolium，TTC)粉剂：中国医药上海化学试剂公司(批号：F20021123)。

肝素钠注射液2ml/支、12500u/ml：天津市生物化学制药厂(批号：20040507)

氯化钠分析纯：天津市北方化玻购销中心(批号：20020605)

乌来糖化学纯：上海山浦化工有限公司(批号：20040517)

5ml肝素钠真空采血管，(批号：041020)：湖北金杏科技发展有限公司生产

3ml规格枸橼酸钠真空采血管(批号：040915)：湖北金杏科技发展有限公司生产。

具体实验如下：

12.1对大鼠局灶性脑缺血的保护作用

采用Longa方法并予改良的大脑中动脉线栓法(middle cerebral artery occlusion，MCAO)制备大鼠持续性局灶性脑缺血模型。取50只雄性SD大鼠，随机分为五组，每组10只，各组灌胃量均为5ml·kg^-1，每日2次，连续给药14天。参考Zea的6级评分法在术后3h，6h，12h和24h进行评分：0分：无神经损伤症状；1分：不能完全伸展对侧前爪；2分：向外侧转圈；3分：向对侧倾倒；4分：不能自发行走，意识丧失；5分：死亡。术后24小时，大鼠用10％水合氯醛深麻醉后处死，迅速取脑，冰冻10分钟，从视交叉处取冠状面均匀切成5片2mm厚脑片，放入2％TTC溶液(37℃)中染色30分钟，然后取出观察，可见粉红色区为正常脑组织，白色区为梗死区。记录脑梗死面积后，分离梗死区和正常脑组织，对梗死区和正常脑组织进行称量。根据梗死脑组织重量与全脑重量比求出脑梗死体积百分比。见下表：

         表37对大鼠局灶性脑缺血所致脑梗死体积的影响( X±s)

组别	动物数	剂量	梗死体积/大脑总体积(％)
				假手术组模型组脑血栓片组消栓通络组	101088	0.5g/d/kg0.6g/d/kg	027.51±4.7117.35±4.67**18.80±6.94**

干浸膏组

9

0.3g/d/kg

12.72±5.51***

^*p＜0.05，^**P＜0.01，^***P＜0.001与模型组比较

注：①剂量栏表示大鼠每Kg体重，每天给药剂量。

②实验所用剂量计算依据：阳性对照组与原制剂组的动物给药量均以临床给药量为基础，按《新药评价基础与实践》的等效剂量折算表，将成人每日用量折算成大鼠每日用量。干浸膏组以临床拟给药量为基础，按《新药评价基础与实践》的等效剂量折算表，将成人每日用量折算成大鼠每日用量。以下各表同。

      表38对大鼠局灶性脑缺血所致神经症状的影响( X±s)

组别	动物数	剂量	神经症状(按5分制评分)
						假手术组模型组脑血栓片组消栓通络组干浸膏组	101010910	0.5g/d/kg0.6g/d/kg0.3g/d/kg	3小时02.80±1.31.60±0.70*1.67±1.12*1.20±0.60***	6小时03.00±1.331.70±0.67*1.67±0.50**1.20±0.63***	24小时03.56±1.592.11±1.27*1.89±1.27*1.60±1.35**

^*p＜0.05，^**P＜0.01，^***P＜0.001与模型组比较

从上可以看出，脑血栓干浸膏对大鼠局灶性脑缺血有明显的保护作用，其保护作用优于原制剂和阳性对照药。可减轻大鼠局灶性脑缺血所致的脑梗死体积以及改善由脑缺血引起的神经症状。

12.2对大鼠颈动-静脉旁路血栓形成的影响

采用颈动-静脉旁路方法形成血栓，以两段较短的聚乙烯管连接一段较长、中间放置了一段3～4cm长4号缝线的小号输液管，并以50u·ml^-1的肝素生理盐水对其进行充盈，备用插管。20％乌拉坦腹腔麻醉大鼠(6ml·kg^-1)，分离出右侧颈总动脉和左侧颈外静脉。当以两端的聚乙烯管完成对颈总动脉和颈外静脉的插管后，即形成大鼠颈动静脉旁路，血液流经输液管内的4号缝线时，即可附于缝线的粗糙面形成血栓。在插管过程中，给予大鼠静注0.1ml·100g^-1的肝素生理盐水抗凝。形成动静脉旁路15分钟后，取出缝线，在滤纸上除去浮血后称量，即得到血栓湿重。将称重后血栓置干燥箱中，在50℃下干燥4小时后取出称重，即为血栓干重。取40只雄性SD大鼠，随机分为四组。各组灌胃量均为5ml·kg^-1，每日2次，连续给药14天。结果见下表：

          表39对大鼠颈动-静脉旁路血栓形成的影响( X±s)

组别	动物数	剂量	血栓重量(mg)
					生理盐水组脑血栓片组消栓通络组干浸膏组	12888	0.5g/d/kg0.6g/d/kg0.3g/d/kg	湿重24.23±8.2117.10±3.89*14.93±4.50**11.49±2.29**	干重4.93±2.173.83±1.093.45±0.871.89±0.67**

^*p＜0.05，^**P＜0.01与生理盐水组比较

结果显示，脑血栓干浸膏对大鼠颈动-静脉旁路血栓形成有一定的抑制作用。

12.3对血小板聚集功能的影响

雄性SD大鼠40只，体重250-300克，按体重随机分为4组，每组10只。各组灌胃量均为5ml·kg-1，每日2次，连续给药14天后，20％乌拉坦腹腔麻醉大鼠(6ml·kg-1)，从颈总动脉取血。以枸橼酸钠管采血3ml，立即振摇，以防止血液凝固。按比浊法测定血小板聚集性，用LBY-NJ2血小板聚集仪，室温下将已抗凝的全血以1000r·min-1离心8min，制备富血小板血浆(PRP)，放置0.5ml Eppendorf管中闭盖保存，置恒温孔中备用；余下血经3000r·min-1离心10min所得上清为贫血小板血浆(PPP)。用PPP调整PRP使之血小板计数为40～50万·mm-3，取200μl PPP放入方形杯中用以调零，取200μl PRP加入盛有铁心搅拌子的方形杯中，PPP调零后，拔出PPP方形杯，放入PRP方形杯，待显示血小板数，加入终浓度为3.5μmol·L-1 ADP 11μl可获得1、3和5min血小板聚集率(PAG)及最大血小板聚集率(MPAG)数值。结果见下表：

         表40对大鼠血小板聚集的影响( X±s)

组别	动物数	剂量	血小板聚集率(t/min)			最大聚集率
							1	3	5
			生理盐水组脑血栓片组消栓通络组干浸膏组	9888	00.5g/d/kg0.6g/d/kg0.3g/d/kg					38.66±7.9130.59±8.9323.26+12.35**22.13±9.02**	48.79±12.5137.26±11.6827.44±13.78**26.06±10.36**	41.36±19.0722.49±13.73*18.34±11.54**12.79±8.89**	50.46±12.1740.48±10.1731.33±12.5**29.2±19.58**

^*p＜0.05，^**P＜0.01与生理盐水组比较

由上可以看出，脑血栓干浸膏对大鼠血小板聚集有抑制作用。

12.4对大鼠血液粘度的影响

取40只雄性SD大鼠，250g-350g，按体重随机分为4组，每组10只。各组灌胃量均为5ml·kg-1，每日2次，连续给药14天。第15天大鼠用20％乌拉坦腹腔麻醉大鼠(6ml·kg-1)，从颈总动脉取血。以肝素钠管采血3ml，立即振摇，防止血液凝固。室温下经Sysmex kx-21型血细胞分析仪进样后，测定红细胞压积(HCG)和血小板计数(PLD)值。另外从全血中取出0.5ml含肝素全血加入Brookfield DV-III+RHEOMETER型旋转粘度计，在37℃下，分别测定高切变率(HS，37.5/s)、中切变率(MS，150/s)和低切变率(LS，300/s)下的全血粘度值(WBV)；另取2ml含肝素全血3000r·min-1离心10分钟，吸取上层血浆0.5ml加入粘度计，测定高切下血浆粘度值(PV，225/s)。

                         表41对大鼠血小板计数和红细胞压积的影响( X±s)

组别	动物数	剂量	血小板计数(*109/l)	红细胞压积(％)
					生理盐水组脑血栓片组消栓通络组干浸膏组	9888	0.5g/d/kg0.6g/d/kg0.3g/d/kg	980±298876±230767±63744±306*	40.2±72.543.9±4.7445.9±4.8247.92±4.81

^*p＜0.05，^**P＜0.01与生理盐水组比较

脑血栓干浸膏组0.3g/d/kg连续灌胃14天，对血小板计数的影响，与生理盐水组比较，下降了24.08％(p＜0.05)，对红细胞压积无明显影响。

          表42对大鼠血液黏度(切变率1/s)的影响( X±s)

组别	动物数	剂量	WBV(全血)			PV(血浆)(225/s)
							LS(37.5/s)	MS(90/s)	HS(300/s)
			生理盐水组脑血栓片组消栓通络组干浸膏组	101088	0.5g/d/kg0.6g/d/kg0.3g/d/kg					13.99±4.1311.49±2.2311.10±1.2210.70±1.17*	11.18±5.208.47±1.799.42±1.497.12±1.00*	6.40±1.525.17±0.46*5.04±0.79*5.01±0.57*	1.55±0.581.63±0.991.30±0.111.21±0.09

^*p＜0.05，^**P＜0.01与生理盐水组比较

大鼠连续14天口服脑血栓干浸膏对全血的黏度与生理盐水对照组比较，可明显降低全血黏度。

实施例13.实施例11的脑血栓干浸膏长期毒性试验

用实施例11的干浸膏对大鼠进行9周的长期毒性试验。即以21.2g、10.6g、5.3g生药/kg/日三个剂量连续大鼠灌胃给药9周，结果表明该药对大鼠外观体征、行为活动、饮食、粪便、体重、血液学指标、血液生化指标、系统尸解、主要脏器系数和病理组织学检查均未发现任何毒性反应。停药两周后对部分大鼠进行恢复期观察，重复上述各项检查，亦未见异常。上述剂量分别相当于成人临床拟用量的100、50和25倍，表明临床拟采用12.72g生药/60kg/日的剂量是安全的。

综上所述，应用多项新技术提取而得的脑血栓干浸膏粉对大鼠局灶性脑缺血有明显的保护作用；可依剂量性减轻大鼠局灶性脑缺血所致的脑梗死体积以及改善由脑缺血引起的神经症状；对大鼠颈动脉血栓形成有一定的抑制作用；能够较好地改善血液流变学方面的各个指标。以21.2g、10.6g、5.3g生药/kg/日三个剂量连续大鼠罐胃给药9周，未见毒性反应或死亡。

实施例14.脑血栓干浸膏的制备

按处方比例取药材451.59kg，其中当归、川芎、红花、赤芍、丹参、桃仁、水蛭各57kg，土鳖虫14.4kg，山羊角38kg，体外培育牛黄190g，同时取6.25kgβ-环糊精。按所确定的提取工艺对各药材进行提取，具体方法同实验室放大实验。将当归、川芎切成小块，赤芍、丹参、桃仁粉碎成细粉，红花、水蛭、土鳖虫等3味粉碎成粗粉，山羊角粗压碎，体外培育牛黄碾碎，备用；取当归、赤芍、川芎、丹参、桃仁等5味，混合均匀，分成5份，装入一层纱布制成的沙包中，加入相当于生药量10倍的水(190L)，浸泡1小时，水蒸气提取挥发油，滤过，收集挥发油，得到70L油水混合物；滤液及滤渣避光保存，备用；将收集得的挥发油油水混合物加入含4.2kg的β-环糊精包合，50℃水浴高剪切分散剪切包合4小时，剪切速度为13000r·m^-1，得挥发油β-环糊精包合液；当归等水提液减压低温回收至投药量，加95％乙醇(V/V)搅拌至含醇量为60％(V/V)，冷藏放置24小时，过滤，得水提醇沉液避光保存；取红花加入相当于生药量的30倍水(570L)，煎煮2次，每次2小时，滤过，滤液回收至投药量，避光保存；红花滤渣与当归等滤渣合并加入生药量10倍量的70％乙醇(V/V)，加热回流提取3次，每次3小时，滤过，醇提液与当归等水提液合并回收乙醇至投药量；取水蛭加生药量1倍的70％乙醇(V/V)浸泡24小时，渗漉，渗漉速度为2.5ml/分钟，收集相当于生药量10倍的渗漉液，药渣挥去乙醇，备用；渗漉液回收乙醇至投药量的2倍，加入含13.32kg的β-环糊精饱和水溶液，60℃水浴搅拌1.5小时，搅拌速度为1000rpm得水蛭β-环糊精包合液，避光保存；取土鳖虫与水蛭药渣合并加入相当于生药量4倍的水(95.2L)煎煮3次，每次3小时，滤过；取山羊角加入相当于生药量10倍的水(238L)煎煮3次，每次2小时，滤过，滤液备用；山羊角药渣加入相当于生药量8倍的0.25％NaOH(W/V)(190.4L)，加热水解4小时，补充水分，滤过，碱水解液加稀HCL调pH至7.0，避光保存；取体外培育牛黄，研磨至细粉，置30倍水中高剪切粉碎3小时，速度为22000rpm。合并当归等水提醇沉液、红花水提液、当归等醇提液、水蛭等水提液、山羊角提取液、挥发油β-环糊精包合水溶液、水蛭醇提物β-环糊精包合水溶液、体外培育牛黄粉碎液，混合均匀，取少量样品溶液测得混合液含固量0.0783g/g，密度为1.031g/ml，进喷雾干燥塔干燥。进口温度：160℃，出口温度：82℃，得到干浸膏粉，混合均匀。喷雾干燥后出料干浸膏粉109.38kg。得膏率为23.89％(W/W)，含水率1.87％(W/V)。

实施例15.脑血栓干浸膏的制备

按处方比例取药材61.05kg，其中当归、川芎、红花、赤芍、丹参、桃仁、水蛭各7.2kg，土鳖虫1.8kg，山羊角7.2kg，体外培育牛黄48g，同时取3.2kgβ-环糊精。按所确定的提取工艺对各药材进行提取。将当归、川芎切成小块，赤芍、丹参、桃仁粉碎成细粉，红花、水蛭、土鳖虫等3味粉碎成粗粉，山羊角粗压碎，体外培育牛黄碾碎，备用；取当归、赤芍、川芎、丹参、桃仁等5味，混合均匀，分成5份，装入一层纱布制成的沙包中，加入相当于生药量10倍的水，浸泡1小时，水蒸气提取挥发油，滤过，收集挥发油，得到10L油水混合物；滤液及滤渣避光保存，备用；将收集得的挥发油油水混合物加入含0.6kg的β-环糊精包合，50℃水浴高剪切分散剪切包合4小时，剪切速度为13000r·m^-1，得挥发油β-环糊精包合液；当归等水提液减压低温回收至投药量，加95％乙醇(V/V)搅拌至含醇量为60％(V/V)，冷藏放置24小时，过滤，得水提醇沉液避光保存；取红花加入相当于生药量的30倍水，煎煮1次，每次1小时，滤过，滤液回收至投药量，避光保存；红花滤渣与当归等滤渣合并加入生药量10倍量的70％乙醇(V/V)，加热回流提取3次，每次3小时，滤过，醇提液与当归等水提液合并回收乙醇至投药量；取水蛭加生药量1倍的70％乙醇(V/V)1浸泡24小时，渗漉，渗漉速度为2.5ml/分钟，收集相当于生药量10倍的渗漉液，药渣挥去乙醇，备用；渗漉液回收乙醇至投药量的2倍，加入含1.86kg的β-环糊精饱和水溶液，60℃水浴搅拌1.5小时，搅拌速度为1000rpm得水蛭β-环糊精包合液，避光保存；取土鳖虫与水蛭药渣合并加入相当于生药量4倍的水(95.2L)煎煮2次，每次2小时，滤过；取山羊角加入相当于生药量10倍的水(238L)煎煮2次，每次2小时，滤过，滤液备用；山羊角药渣加入相当于生药量8倍的0.25％NaOH(W/V)2，加热水解4小时，补充水分，滤过，碱水解液加稀HCL调pH至7.0，避光保存；取体外培育牛黄，研磨至细粉，置30倍水2中高剪切粉碎1小时，速度为22000rpm。合并当归等水提醇沉液、红花水提液、当归等醇提液、水蛭等水提液、山羊角提取液、挥发油β-环糊精包合水溶液、水蛭醇提物β-环糊精包合水溶液、体外培育牛黄粉碎液，混合均匀，取少量样品溶液测得混合液含固量0.0712g/g，密度为1.016g/ml，进喷雾干燥塔干燥。进口温度：160℃，出口温度：82℃，得到干浸膏粉，混合均匀。喷雾干燥后出料干浸膏粉15.57kg。得膏率为24.23％(W/W)，含水率1.72％(W/V)。

实施例16.脑血栓干浸膏的制备

按处方比例取药材323.72kg，其中当归、川芎、红花、赤芍、丹参、桃仁、水蛭各38kg，土鳖虫9.6kg，山羊角57.6kg，体外培育牛黄525.2g，同时取16.64kgβ-环糊精。按所确定的提取工艺对各药材进行提取，具体方法同实验室放大实验。将当归、川芎切成小块，赤芍、丹参、桃仁粉碎成细粉，红花、水蛭、土鳖虫等3味粉碎成粗粉，山羊角粗压碎，体外培育牛黄碾碎，备用；取当归、赤芍、川芎、丹参、桃仁等5味，混合均匀，分成5份，装入一层纱布制成的沙包中，加入相当于生药量10倍的水，浸泡2小时，水蒸气提取挥发油，滤过，收集挥发油，得到68L油水混合物；滤液及滤渣避光保存，备用；将收集得的挥发油油水混合物加入含4kg的β-环糊精包合，50℃水浴高剪切分散剪切包合2小时，剪切速度为13000r·m^-1，得挥发油β-环糊精包合液；当归等水提液减压低温回收至投药量，加95％乙醇(V/V)搅拌至含醇量为60％(V/V)，冷藏放置24小时，过滤，得水提醇沉液避光保存；取红花加入相当于生药量的30倍水，煎煮2次，每次1小时，滤过，滤液回收至投药量，避光保存；红花滤渣与当归等滤渣合并加入生药量10倍量的70％乙醇(V/V)(190L)，加热回流提取3次，每次3小时，滤过，醇提液与当归等水提液合并回收乙醇至投药量；取水蛭加生药量1倍的70％乙醇(V/V)浸泡24小时，渗漉，渗漉速度为2.5ml/分钟，收集相当于生药量10倍的渗漉液，药渣挥去乙醇，备用；渗漉液回收乙醇至投药量的2倍，加入含12.82kg的β-环糊精饱和水溶液，60℃水浴搅拌2小时，搅拌速度为1000rpm得水蛭β-环糊精包合液，避光保存；取土鳖虫与水蛭药渣合并加入相当于生药量4倍的水煎煮3次，每次1小时，滤过；取山羊角加入相当于生药量10倍的水煎煮3次，每次3小时，滤过，滤液备用；山羊角药渣加入相当于生药量8倍的0.25％NaOH(W/V)(190.4L)，加热水解4小时，补充水分，滤过，碱水解液加稀HCL调pH至7.0，避光保存；取体外培育牛黄，研磨至细粉，置30倍水中高剪切粉碎2小时，速度为22000rpm。合并当归等水提醇沉液、红花水提液、当归等醇提液、水蛭等水提液、山羊角提取液、挥发油β-环糊精包合水溶液、水蛭醇提物β-环糊精包合水溶液、体外培育牛黄粉碎液，混合均匀，取少量样品溶液测得混合液含固量0.0738g/g，密度为1.012g/ml，进喷雾干燥塔干燥。进口温度：160℃，出口温度：82℃，得到干浸膏粉，混合均匀。喷雾干燥后出料干浸膏粉87.23kg。得膏率为25.63％(W/W)，含水率1.46％(W/V)。

实施例17.脑血栓干浸膏的制备

按处方比例取药材24.62kg，其中当归、川芎、红花、赤芍、丹参、桃仁、水蛭各2.88kg，土鳖虫0.72kg，山羊角3.68kg，体外培育牛黄60g，同时取6.42kgβ-环糊精。按所确定的提取工艺对各药材进行提取，具体方法同实验室放大实验。将当归、川芎切成小块，赤芍、丹参、桃仁粉碎成细粉，红花、水蛭、土鳖虫等3味粉碎成粗粉，山羊角粗压碎，体外培育牛黄碾碎，备用；取当归、赤芍、川芎、丹参、桃仁等5味，混合均匀，分成5份，装入一层纱布制成的沙包中，加入相当于生药量10倍的水，浸泡1小时，水蒸气提取挥发油，滤过，收集挥发油，得到28L油水混合物；滤液及滤渣避光保存，备用；将收集得的挥发油油水混合物加入含17kg的β-环糊精包合，50℃水浴高剪切分散包合4小时，剪切速度为13000r·m^-1，得挥发油β-环糊精包合液；当归等水提液减压低温回收至投药量，加95％乙醇(V/V)搅拌至含醇量为60％(V/V)，冷藏放置24小时，过滤，得水提醇沉液避光保存；取红花加入相当于生药量的30倍水，煎煮3次，每次2小时，滤过，滤液回收至投药量，避光保存；红花滤渣与当归等滤渣合并加入生药量10倍量的70％乙醇(V/V)，加热回流提取3次，每次3小时，滤过，醇提液与当归等水提液合并回收乙醇至投药量；取水蛭加生药量1倍的70％乙醇(V/V)浸泡24小时，渗漉，渗漉速度为2.5ml/分钟，收集相当于生药量10倍的渗漉液，药渣挥去乙醇，备用；渗漉液回收乙醇至投药量的2倍，加入含1.14kg的β-环糊精饱和水溶液，60℃水浴搅拌1.5小时，搅拌速度为1000rpm得水蛭β-环糊精包合液，避光保存；取土鳖虫与水蛭药渣合并加入相当于生药量4倍的水煎煮3次，每次2小时，滤过；取山羊角加入相当于生药量10倍的水煎煮3次，每次2小时，滤过，滤液备用；山羊角药渣加入相当于生药量8倍的0.25％NaOH(W/V)，加热水解4小时，补充水分，滤过，碱水解液加稀HCL调pH至7.0，避光保存；取体外培育牛黄，研磨至细粉，置30倍水中高剪切粉碎3小时，速度为22000rpm。合并当归等水提醇沉液、红花水提液、当归等醇提液、水蛭等水提液、山羊角提取液、挥发油β-环糊精包合水溶液、水蛭醇提物β-环糊精包合水溶液、体外培育牛黄粉碎液，混合均匀，取少量样品溶液测得混合液含固量0.0682g/g，密度为1.004g/ml，进喷雾干燥塔干燥。进口温度：160℃，出口温度：82℃，得到干浸膏粉，混合均匀。喷雾干燥后出料干浸膏粉8.11kg。得膏率为26.13％(W/W)，含水率1.34％(W/V)。

实施例18.脑血栓泡腾片的制备

实施例11制得的干浸膏粉39％，交联聚乙烯吡咯烷酮10～20％，甘露醇1～5％，无水柠檬酸8～12％，碳酸氢钠13～17％，微晶纤维素10～13％，微粉硅胶1～5％，硬脂酸镁0.4％，滑石粉1.8％，阿斯帕坦0.3～1.0％的比例混匀，直接压片。以欧巴代(OPADRY II(85G60989 BLUE)，上海卡乐康包衣技术有限公司生产)包衣材料包衣，即得。

实施例19.脑血栓口腔速溶片的制备

实施例11制得的干浸膏粉35～45％，交联羧甲基纤维素钠15～25％，低取代羟丙纤维素7～15％，微粉硅胶1～5％，硬脂酸镁0.4％，滑石粉1.8％，阿斯帕坦0.3～1.0％的比例混匀，直接粉末压片，即得。

实施例20.脑血栓普通片的制备

实施例11制得的干浸膏粉60～85％，微晶纤维素10～30％，低取代羟丙纤维素5～15％，5～10％聚乙烯吡咯烷酮乙醇溶液制粒，压片，以欧巴代包衣材料包衣，即得。

实施例21.脑血栓微囊剂的制备

实施例11制得的干浸膏粉末，加入到5～10％聚乙烯吡咯烷酮的水溶液，使其含总固物在20～30％，置高速匀质机，匀质2小时，喷雾干燥法制得微囊。

Claims (9)

1.一种治疗脑中风的脑血栓干浸膏，其特征在于：

其中原料组成为：

红花900g      当归900g      水蛭900g    赤芍900g

桃仁900g      川芎900g      丹参900g    土鳖虫225g

山羊角或水牛角600～1500g    体外培育牛黄、培植牛黄或人工牛黄3～30g制法：由下列步骤制备：

(1)将上述中药原料粉碎备用；

(2)取当归、赤芍、川芎、丹参、桃仁5味，加入水浸泡，水蒸气提取挥发油得油水混合液，水提母液及滤渣备用；

(3)在步骤(2)中收集得的油水混合液中加入包合剂，分散包合得挥发油包合液；

(4)将步骤(2)得到的水提母液减压低温回收，回收后的浓缩液量等于该5味中药原料的投药量，加乙醇搅拌至含醇量为55～85％V/V，冷藏放置，过滤，得水提醇沉液；

(5)取红花加入水煎煮1～3次，滤过，滤液回收至投药量；

(6)步骤(5)中得到的红花滤渣与步骤(2)中的滤渣合并，加入相当于该生药量6～10倍量的为50～90％V/V乙醇，加热回流提取1～3次，滤过，醇提液与步骤(4)中的水提醇沉液合并，回收乙醇至投药量得到醇提取液；

(7)取水蛭加乙醇浸泡，渗漉，收集渗漉液，药渣挥去乙醇备用；

(8)渗漉液回收乙醇至投药量的1～3倍，加入包合剂包合得到水蛭包合液；

(9)取土鳖虫与水蛭药渣合并，加入水煎煮1～3次，滤过，滤液回收至投药量；

(10)取山羊角或水牛角加入水煎煮3次，滤过，滤液备用；

(11)山羊角或水牛角的药渣加入0.25％W/V氢氧化钠溶液，加热水解，滤过，碱水解液加稀HCl调pH至7.0，与步骤(10)得到的山羊角或水牛角的水提液合并，回收至投药量得到山羊角或水牛角的提取液；

(12)取体外培育牛黄、培植牛黄或人工牛黄加入水，高剪切分散粉碎；

(13)合并步骤(3)得到的挥发油包合水溶液、步骤(5)得到的红花水提液、步骤(6)得到的当归、赤芍、川芎、丹参、桃仁、红花6味药的醇提取液、步骤(8)得到的水蛭醇提物β-环糊精包合水溶液、步骤(9)得到的土鳖虫与水蛭水提液、步骤(11)得到的山羊角或水牛角的提取液、和步骤(12)得到的牛黄粉碎液，再加入适量的桔子香精，干燥，得干浸膏粉末。

2.根据权利要求1的干浸膏，其特征在于：

原料组成为：

红花900g      当归900g      水蛭900g        赤芍900g

桃仁900g      川芎900g      丹参900g        土鳖虫225g

山羊角或水牛角900～1200g    体外培育牛黄或培植牛黄6～18g

制法：由下列步骤制备：

(1)将当归、赤芍、川芎、丹参4味粉碎成过10～50目筛的粉末，桃仁粉碎成过10～30目筛的粉末，红花、水蛭、土鳖虫3味粉碎过20目，山羊角粗粉碎，体外培育牛黄碾碎，备用；

(2)取当归、赤芍、川芎、丹参、桃仁5味，加入相当于该生药量6～10倍的水，浸泡≤2小时，水蒸气提取挥发油3～9小时，滤过，得油水混合液，水提母液及滤渣避光保存，备用；

(3)在步骤(2)中收集得的油水混合液中加入70g～120g的β-环糊精包合剂，40～60℃水浴采用高剪切法分散包合2～4小时，剪切速度为1000～13000rpm，得挥发油β-环糊精包合液；

(4)将步骤(2)得到的水提母液减压低温回收至投药量，加乙醇搅拌至含醇量为60-70％V/V，冷藏放置，过滤，得水提醇沉液避光保存；

(5)取红花加入相当于红花生药量的20～30倍水，煎煮1～3次，每次1～3小时，滤过，滤液回收至投药量，避光保存；

(6)将步骤(5)的红花滤渣与步骤(2)的滤渣合并，加入生药量6～10倍量的60～80％V/V乙醇，加热回流提取1～3次，每次1～3小时，滤过，该醇提液与步骤(4)得到的水提醇沉液合并，回收乙醇至投药量，得到醇提取液；

(7)取水蛭加生药量1倍的70％V/V乙醇浸泡24小时，渗漉，收集渗漉液，药渣挥去乙醇，备用；

(8)渗漉液回收乙醇至投药量的2倍，加入300～450gβ-环糊精包合剂，60℃水浴搅拌，搅拌速度为1000rpm得水蛭β-环糊精包合液，避光保存；

(9)取土鳖虫与水蛭药渣合并，加入相当于生药量3～5倍的水煎煮1～3次，每次1～2小时，滤过，滤液回收至投药量，保存；

(10)取山羊角或水牛角加入相当于生药量10倍的水煎煮3次，每次2小时，滤过，滤液备用；

(11)山羊角或水牛角的药渣加入相当于生药量8倍的0.25％W/V氢氧化钠溶液，加热水解4小时，滤过，碱水解液加稀HCL调pH至7.0，与山羊角或水牛角的水提液合并，回收至投药量，避光保存；

(12)取体外培育牛黄或培植牛黄，加30倍量的水，高剪切分散粉碎2小时，速度为22000～28000rpm；

(13)合并步骤(3)得到的挥发油β-环糊精包合水溶液、步骤(5)得到的红花水提液、步骤(6)得到的当归、赤芍、川芎、丹参、桃仁、红花6味药的醇提液、步骤(8)得到的水蛭醇提物β-环糊精包合水溶液、步骤(9)得到的水提液、步骤(11)得到的山羊角或水牛角的提取液、与步骤(12)得到的牛黄粉碎液，再加入适量的桔子香精，喷雾干燥，进口温度：160℃，出口温度：82℃，得干浸膏粉末。

3.根据权利要求2的干浸膏，其特征在于：

原料组成为：

红花900g      当归900g      水蛭900g      赤芍900g

桃仁900g      川芎900g      丹参900g      土鳖虫225g

山羊角1125g            体外培育牛黄12.5g

制法：由下列步骤制备：

(1)将当归、赤芍、川芎、丹参4味粉碎成过50目筛的细粉，桃仁粉碎成过30目筛的细粉，红花、水蛭、土鳖虫3味粉碎过20目，山羊角粗粉碎，体外培育牛黄碾碎，备用；

(2)取当归、赤芍、川芎、丹参、桃仁5味，加入相当于生药量10倍的水，浸泡1小时，水蒸气提取挥发油，滤过，得油水混合液；水提母液及滤渣避光保存，备用；

(3)在步骤(2)中收集得的油水混合液中加入93.3g的β-环糊精，50℃水浴高剪切分散包合4小时，剪切速度为13000rpm，得挥发油β-环糊精包合液；

(4)将步骤(2)得到的水提母液减压低温回收至投药量，加95％V/V乙醇搅拌至含醇量60％V/V，冷藏放置24小时，过滤，得水提醇沉液，避光保存；

(5)取红花加入相当于生药量的30倍水，煎煮2次，每次1小时，滤过，滤液回收至投药量得到红花水提液，避光保存；

(6)将步骤(5)的红花滤渣与步骤(2)的滤渣合并，加入生药量10倍量的70％V/V乙醇，加热回流提取3次，每次3小时，滤过，该醇提液与步骤(4)得到的水提醇沉液合并，回收乙醇至投药量，得到醇提取液；

(7)取水蛭加生药量1倍的体积比浓度为70％乙醇浸泡24小时，渗漉，渗漉速度为2.5ml/分钟，收集相当于生药量10倍的渗漉液，药渣挥去乙醇，备用；

(8)渗漉液回收乙醇至投药量的2倍，加入302.8gβ-环糊精，60℃水浴搅拌1.5小时，搅拌速度为1000rpm得水蛭β-环糊精包合液，避光保存；

(9)取土鳖虫与水蛭药渣合并，加入相当于生药量4倍的水煎煮3次，每次2小时，滤过，滤液回收至投药量，保存；

(10)取山羊角加入相当于生药量10倍的水煎煮3次，每次2小时，滤过，滤液备用；

(11)将步骤(10)得到的山羊角药渣加入相当于生药量8倍的0.25％W/V氢氧化钠溶液，加热水解4小时，补充水分，滤过，碱水解液加稀HCL调pH至7.0，与步骤(10)的山羊角水提液合并，回收至投药量得到山羊角提取液，避光保存；

(12)取体外培育牛黄，加30倍量的水，高剪切分散粉碎2小时，速度为22000rmp；

(13)合并步骤(3)得到的挥发油β-环糊精包合水溶液、步骤(5)得到的红花水提液、步骤(6)得到的醇提取液、步骤(8)得到的水蛭醇提物β-环糊精包合水溶液、步骤(9)得到的水提液、步骤(11)得到的山羊角提取液、和步骤(12)得到的牛黄粉碎液，再加入适量的桔子香精，喷雾干燥，进口温度：160℃，出口温度：82℃，转速：21000rpm，功率350HZ，得干浸膏粉末。

4.根据权利要求1的干浸膏的制备方法，包括下列步骤：

(1)将中药原料粉碎备用；

(2)取当归、赤芍、川芎、丹参、桃仁5味，加入水浸泡，水蒸气提取挥发油得油水混合液，水提母液及滤渣备用；

(3)在步骤(2)中收集得的油水混合液中加入包合剂，分散包合得挥发油包合液；

(4)将步骤(2)得到的水提母液减压低温回收，回收后的浓缩液量等于该5味中药原料的投药量，加乙醇搅拌至含醇量为55～85％V/V，冷藏放置，过滤，得水提醇沉液；

(5)取红花加入水煎煮1～3次，滤过，滤液回收至投药量；

(6)步骤(5)中得到的红花滤渣与步骤(2)中的滤渣合并，加入相当于该生药量6～10倍量的为50～90％V/V乙醇，加热回流提取1～3次，滤过，醇提液与步骤(4)中的水提醇沉液合并，回收乙醇至投药量得到醇提取液；

(7)取水蛭加乙醇浸泡，渗漉，收集渗漉液，药渣挥去乙醇备用；

(8)渗漉液回收乙醇至投药量的1～3倍，加入包合剂包合得到水蛭包合液；

(9)取土鳖虫与水蛭药渣合并，加入水煎煮1～3次，滤过，滤液回收至投药量；

(10)取山羊角或水牛角加入水煎煮3次，滤过，滤液备用；

(11)山羊角或水牛角的药渣加入0.25％W/V氢氧化钠溶液，加热水解，滤过，碱水解液加稀HCl调pH至7.0，与步骤(10)得到的山羊角或水牛角的水提液合并，回收至投药量得到山羊角或水牛角的提取液；

(12)取体外培育牛黄、培植牛黄或人工牛黄加入水，高剪切分散粉碎；

(13)合并步骤(3)得到的挥发油包合水溶液、步骤(5)得到的红花水提液、步骤(6)得到的当归、赤芍、川芎、丹参、桃仁、红花6味药醇提取液、步骤(8)得到的水蛭醇提物β-环糊精包合水溶液、步骤(9)得到的土鳖虫与水蛭的水提液、步骤(11)得到的山羊角或水牛角的提取液、和步骤(12)得到的牛黄粉碎液，再加入适量的桔子香精，干燥，得干浸膏粉末。

5.根据权利要求4的干浸膏的制备方法，包括下列步骤：

(1)将当归、赤芍、川芎、丹参4味粉碎成过10～50目筛的粉末，桃仁粉碎成过10～30目筛的粉末，红花、水蛭、土鳖虫3味粉碎过20目，山羊角粗粉碎，体外培肓牛黄碾碎，备用；

(2)取当归、赤芍、川芎、丹参、桃仁5味，加入相当于生药量6～10倍的水，浸泡≤2小时，水蒸气提取挥发油3～9小时，滤过，得油水混合液，水提母液及滤渣避光保存，备用；

(3)在步骤(2)中收集得的油水混合液中加入70g～120g的β-环糊精包合剂，40～60℃水浴采用高剪切法分散包合2～4小时，剪切速度为1000～13000rpm，得挥发油β-环糊精包合液；

(4)将步骤(2)得到的水提母液减压低温回收至投药量，加乙醇搅拌至含醇量为60-70％V/V，冷藏放置，过滤，得水提醇沉液，避光保存；

(5)取红花加入相当于红花生药量的20～30倍水，煎煮1～3次，每次1～3小时，滤过，滤液回收至投药量，避光保存

(6)将步骤(5)的红花滤渣与步骤(2)的滤渣合并，加入生药量6～10倍量的60～80％V/V乙醇，加热回流提取1～3次，每次1～3小时，滤过，该醇提液与步骤(4)得到的水提醇沉液合并，回收乙醇至投药量，得到醇提取液；

(7)取水蛭加生药量1倍的70％V/V乙醇浸泡24小时，渗漉，收集渗漉液，药渣挥去乙醇，备用；

(8)渗漉液回收乙醇至投药量的2倍，加入300～450gβ-环糊精包合剂，60℃水浴搅拌，搅拌速度为1000rpm得水蛭β-环糊精包合液，避光保存；

(9)取土鳖虫与水蛭药渣合并，加入相当于生药量3～5倍的水煎煮1～3次，每次1～2小时，滤过，滤液回收至投药量，保存；

(10)取山羊角或水牛角加入相当于生药量10倍的水煎煮3次，每次2小时，滤过，滤液备用；

(11)山羊角或水牛角的药渣加入相当于生药量8倍的0.25％W/V氢氧化钠溶液，加热水解4小时，滤过，碱水解液加稀HCL调pH至7.0，与山羊角或水牛角的水提液合并，回收至投药量，避光保存；

(12)取体外培育牛黄或培植牛黄，加30倍量的水，高剪切分散粉碎2小时，速度为22000～28000rpm；

(13)合并步骤(3)得到的挥发油β-环糊精包合水溶液、步骤(5)得到的红花水提液、步骤(6)得到的当归、赤芍、川芎、丹参、桃仁、红花6味药醇提液、步骤(8)得到的水蛭醇提物β-环糊精包合水溶液、步骤(9)得到的水提液、步骤(11)得到的山羊角或水牛角的提取液、与步骤(12)得到的牛黄粉碎液，再加入适量的桔子香精，喷雾干燥，进口温度：160℃，出口温度：82℃，得干浸膏粉末。

6.根据权利要求5的干浸膏的制备方法，包括下列步骤：

(1)将当归、赤芍、川芎、丹参4味粉碎成过50目筛的细粉，桃仁粉碎成过30目筛的细粉，红花、水蛭、土鳖虫3味粉碎过20目，山羊角粗粉碎，体外培育牛黄碾碎，备用；

(2)取当归、赤芍、川芎、丹参、桃仁5味，加入相当于生药量10倍的水，浸泡1小时，水蒸气提取挥发油，滤过，得油水混合液；水提母液及滤渣避光保存，备用；

(3)在步骤(2)中收集得的油水混合液中加入93.3g的β-环糊精，50℃水浴高剪切分散包合4小时，剪切速度为13000rpm，得挥发油β-环糊精包合液；

(4)将步骤(2)得到的水提母液减压低温回收至投药量，加95％V/V乙醇搅拌至含醇量为60％V/V，冷藏放置24小时，过滤，得水提醇沉液，避光保存；

(5)取红花加入相当于生药量的30倍水，煎煮2次，每次1小时，滤过，滤液回收至投药量得到红花水提液，避光保存；

(6)将步骤(5)的红花滤渣与步骤(2)的滤渣合并，加入生药量10倍量的70％V/V乙醇，加热回流提取3次，每次3小时，滤过，该醇提液与步骤(4)得到的水提醇沉液合并，回收乙醇至投药量，得到醇提取液；

(7)取水蛭加生药量1倍的70％V/V乙醇浸泡24小时，渗漉，渗漉速度为2.5ml/分钟，收集相当于生药量10倍的渗漉液，药渣挥去乙醇，备用；

(8)渗漉液回收乙醇至投药量的2倍，加入302.8gβ-环糊精，60℃水浴搅拌1.5小时，搅拌速度为1000rpm得水蛭β-环糊精包合液，避光保存；

(9)取土鳖虫与水蛭药渣合并，加入相当于生药量4倍的水煎煮3次，每次2小时，滤过，滤液回收至投药量，保存；

(10)取山羊角加入相当于生药量10倍的水煎煮3次，每次2小时，滤过，滤液备用；

(11)将步骤(10)得到的山羊角药渣加入相当于生药量8倍的0.25％W/V氢氧化钠溶液，加热水解4小时，补充水分，滤过，碱水解液加稀HCL调pH至7.0，与步骤(10)的山羊角水提液合并，回收至投药量得到山羊角提取液，避光保存；

(12)取体外培育牛黄，加30倍量的水，高剪切分散粉碎2小时，速度为22000rmp；

(13)合并步骤(3)得到的挥发油β-环糊精包合水溶液、步骤(5)得到的红花水提液、步骤(6)得到的醇提取液、步骤(8)得到的水蛭醇提物β-环糊精包合水溶液、步骤(9)得到的水提液、步骤(11)得到的山羊角提取液、和步骤(12)得到的牛黄粉碎液，再加入适量的桔子香精，喷雾干燥，进口温度：160℃，出口温度82℃，转速：21000rpm，功率：350HZ，得干浸膏粉末。

7.一种治疗脑中风的脑血栓药物组合物，其特征在于由治疗有效量的根据权利要求1-3之一的干浸膏和可药用辅料组成。

8.根据权利要求7的药物组合物，其中药物组合物是片剂、泡腾片、口腔速溶片、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、滴丸、合剂、口服液、微囊剂或微丸。

9.权利要求1-3任意所述的干浸膏用于制备治疗脑中风的脑血栓药物中的用途。

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