CN1593583A - 治疗骨折的复方制剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种治疗骨折的中药复方制剂及其制备方法。该中药由骨碎补、续断、方海、当归、儿茶、血竭、乳香、没药、土鳖虫、自然铜所组成。其制法是：(1)先将儿茶、血竭、乳香、没药混合后粉碎成细粉；(2)把方海与土鳖虫粗粉碎、加水煎煮、煎液浓缩；(3)将骨碎补、续断、当归、加乙醇提取、浓缩；(4)自然铜加醋酸水煎煮、过滤、滤液浓缩；(5)将上述提取液、浓缩液合并后真空干燥成干浸膏；(6)将干浸膏粉碎后与上述四味生药粉末混匀，添加适宜的辅料可制成颗粒剂、胶囊剂或片剂。它具有明显的抑制血小板聚集，改善血液循环，提高骨密度，加快骨矿的沉积速率、促进骨生长，加快骨折愈合，缩短愈合时间等功效，是治疗骨折的理想药物。

Description

治疗骨折的复方制剂及其制备方法

一、技术领域

本发明涉及一种中药制剂，尤其是涉及一种治疗骨折的中药复方制剂及其制备方法。

二、背景技术

骨折是一种常见病，骨折是创伤骨科临床常见病、多发病，可以损害社会劳动力，严重危害人类健康。据调查，我国骨折的患病率为1.37％，年发病率为0.28％，由于我国人口基数巨大，常年存在的骨折患病人口有一千七百八十万之多。中医药在防治骨折方面积累了丰富的临床经验，其总的指导思想是以“跌打损伤，皆瘀血在内而不散也，血不活则瘀不能去，瘀不去则折不能续”和“瘀去、新生、骨合”，充分利用活血化瘀接骨续筋的药物来纠正因创伤骨断而引起的脏腑、经络、气血功能紊乱，达到促进骨折愈合的目的。

现代文献报告骨折愈合的关键在于骨痂的产生和快速增殖，在其增殖过程中一方面要通过机能性刺激使成骨细胞更趋活跃，另一方面是源源不断地补充骨痂生长所必需的蛋白质及微量元素等，研究表明，骨碎补、续断，具有强有力的补肾作用，通过补肾达到调节免疫，刺激细胞活性增强的作用。目前，中医临床常用接骨七厘片等成药，但未见使用方海为主要组成药物的复方制剂。

三、发明内容

1、发明目的

本发明的目的在于提供一种能促进骨折愈合，加速骨痂形成的含有方海的有效新制剂。

2、技术方案

我们在长期的临床实践中认识到，不论骨折发生在何处，其关键病机均在于“瘀血凝滞”，而人体的经络脏腑之气又都将由实趋虚，因此，在治疗用药时，必须贯彻“祛邪必须扶正，不扶正不足以祛邪”的原则。本发明正是根据这一理论及数十年的临床实践，经过筛选有效方药，而研制成治疗骨折的中药复方制剂，其重量配比为：

骨碎补0.5～10g、续断0.2～8g、方海1.0～20g、当归1.0～10g、儿茶0.3～5g、血竭0.5～5g、乳香(制)0.2～8g、没药(制)0.2～8g、土鳖虫1.0～8g、自然铜(煅)0.5～3g

以上各组分的优化重量配比为：

骨碎补1.5g、续断1.2g、方海2.0g、当归1.4g、儿茶0.35g、血竭0.95g、乳香(制)1.0g、没药(制)1.0g、土鳖虫1.4g、自然铜(煅)1.2g

方解：骨碎补、续断、方海、土鳖虫为君，骨碎补性味苦温，入肝肾经，续断性味苦温，亦入肾经，且强壮筋骨，同从肾水以培骨；方海性味咸寒，破瘀通络，软坚散结，土鳖虫性味咸寒，破血逐瘀，接骨通络，同从破瘀通络以接骨，四味一体，功能攻补兼施，强肾接骨。并用乳香、没药、血竭为臣，乳香、没药皆为辛、苦、温之品，行气活血，舒筋止痛，消肿生肌，血竭性味甘、咸、平，亦具行瘀止血止痛之功，共同助君加强活血消肿止痛，极有利于续筋接骨，再以当归、自然铜为佐药，当归甘、辛、温，补血活血，自然铜性味辛平，散瘀止痛，接骨续筋，二者为佐，共辅君臣，更遣儿茶为使药，因儿茶性味苦、涩、凉，尤擅理伤敛损，引导诸药直达病所。全方具有益肾壮骨、祛瘀生新、消肿定痛、续筋接骨之功效，主治外伤性骨折。

本复方添加适宜的辅料可制成固体口服制剂(胶囊剂、片剂、颗粒剂等)，其制备方法步骤为：

(1)以上十味，取儿茶、血竭、乳香(制)、没药(制)混合低温粉碎，过筛得细粉；

(2)方海与土鳖虫粗粉碎，加水煎煮，合并煎液，浓缩；

(3)骨碎补、续断、当归，加乙醇回流提取，合并提取液，减压回收乙醇，浓缩；

(4)煅自然铜单独加醋酸水煎煮，滤过，合并滤液，浓缩；

(5)并将与上述方海、土鳖虫提取浓缩液及骨碎补、续断、当归提取浓缩液混匀，真空干燥成干浸膏；

(6)再将上述干浸膏粉碎，与步骤(1)的四味生药粉末混匀，添加适宜的辅料可制成颗粒，或分装成颗粒剂，或进一步分装成胶囊剂或压成片剂。

对上述制备方法的工艺条件，作进一步的说明如下：

以上十味，取儿茶、血竭、乳香(制)、没药(制)混合低温粉碎，过筛得细粉(80目)。方海与土鳖虫粗粉碎，加水煎煮3次，每次2小时，合并煎液，浓缩。骨碎补、续断、当归，加50％乙醇回流提取3次，每次2小时，合并提取液，减压回收乙醇，浓缩至相对密度1.30(60℃热测)。煅自然铜单独加pH4醋酸水煎煮2次，每次2小时，滤过，合并滤液，浓缩。并与上述方海、土鳖虫提取浓缩液及骨碎补、续断、当归提取浓缩液混匀，80℃，0.08MPa真空干燥成干浸膏。上述干浸膏粉碎，与前四味生药粉末混匀，30％乙醇离心旋转法制粒，干燥，整粒(40目)，灌装成胶囊或加适量辅料制成颗粒剂或压成片剂。

3.有益效果

我们用伸筋接骨胶囊对家兔及大鼠两种骨折模型的治疗作用，实验观察结果表明具有以下优点：

(1)能够明显的抑制血小板聚集，降低血粘度，改善血液循环。

(2)提高骨密度，加快骨矿的沉积速率，从而促进骨折的愈合。

(3)促进骨小梁增生，使骨折损伤处能够迅速修复，从而加速骨折的愈合，缩短愈合时间。

(4)可缓解由于骨折愈合过程中炎症因子渗出所致的疼痛反应。

四、具体实施方式

(一)治疗骨折的中药复方制剂的实施方式有：

实施例1

治疗骨折的复方制剂，其重量配比为：

骨碎补1.5g、续断1.2g、方海2.0g、当归1.4g、儿茶0.35g、血竭0.95g、乳香(制)1.0g、没药(制)1.0g、土鳖虫1.4g、自然铜(煅)1.2g

实施例2

与实施例1基本相同，但复方重量配比为：骨碎补2.0 g、续断1.2g、方海4.0g、当归2.0g、儿茶0.5g、血竭1.0g、乳香(制)1.5g、没药(制)1.5g、土鳖虫2.0g、自然铜(煅)1.0g

实施例3

与实施例1基本相同，但复方重量配比为：骨碎补5g、续断4g、方海4.0g、当归2g、儿茶0.5g、血竭1.5g、乳香(制)2.0g、没药(制)2.0g、土鳖虫2g、自然铜(煅)1.5g

实施例4

与实施例1基本相同，但复方重量配比为：骨碎补10g、续断8g、方海20g、当归1.4g、儿茶5g、血竭5g、乳香(制)8g、没药(制)8g、土鳖虫8g、自然铜(煅)3g

(二)治疗骨折的复方制剂的制备方法有：

实施例5：伸筋接骨胶囊

【处方】骨碎补121.5g、续断97.2g、方海162.0g、当归113.4g、儿茶28.4g、血竭76.9g、乳香(制)81.0g、没药(制)81.0g、土鳖虫113.4g、自然铜(煅)97.2g，共制成1000粒。

【制法】以上十味，取儿茶、血竭、乳香(制)、没药(制)混合低温粉碎，过筛得细粉(80目)。方海与土鳖虫粗粉碎，加水煎煮3次，每次2小时，合并煎液，浓缩。骨碎补、续断、当归，加50％乙醇回流提取3次，每次2小时，合并提取液，减压回收乙醇，浓缩至相对密度1.30(60℃热测)。煅自然铜单独加pH4醋酸水煎煮2次，每次2小时，滤过，合并滤液，浓缩。并与上述方海、土鳖虫提取浓缩液及骨碎补、续断、当归提取浓缩液混匀，80℃，0.08MPa真空干燥成干浸膏。上述干浸膏粉碎，与前四味生药粉末混匀，30％乙醇离心旋转法制粒，干燥，整粒(40目)，灌装，即得。

实施例6：伸筋接骨片

【处方】骨碎补121.5g  续断97.2g方海162.0g  当归113.4g儿茶28.4g  血竭76.9g乳香(制)81.0g没药(制)81.0g土鳖虫113.4g自然铜(煅)97.2g共制成1000片

【制法】以上十味，取儿茶、血竭、乳香(制)、没药(制)混合低温粉碎，过筛得细粉(80目)。方海与土鳖虫粗粉碎，加水煎煮3次，每次2小时，合并煎液，浓缩。骨碎补、川续断、当归，加50％乙醇回流提取3次，每次2小时，合并提取液，减压回收乙醇，浓缩至相对密度1.30(60℃热测)。煅自然铜单独加pH4醋酸水煎煮2次，每次2小时，滤过，合并滤液，浓缩。并与上述方海、土鳖虫提取浓缩液及骨碎补、川续断、当归提取浓缩液混匀，80℃，0.08MPa真空干燥成干浸膏。上述干浸膏粉碎，与前四味生药粉末混匀，30％乙醇离心旋转法制粒，干燥，整粒(40目)，加适量硬脂酸镁，压片，即得。

实施例7：伸筋接骨颗粒

【处方】骨碎补337.5g续断270.0g方海450.0g  当归315.0g儿茶78.9g血竭213.6g乳香(制)225.0g没药(制)225.0g土鳖虫315.0g自然铜(煅)270.0g共制成1000g

【制法】以上十味，取儿茶、血竭、乳香(制)、没药(制)混合低温粉碎，过筛得细粉(80目)。方海与土鳖虫粗粉碎，加水煎煮3次，每次2小时，合并煎液，浓缩。骨碎补、川续断、当归，加50％乙醇回流提取3次，每次2小时，合并提取液，减压回收乙醇，浓缩至相对密度1.30(60℃热测)。煅自然铜单独加pH4醋酸水煎煮2次，每次2小时，滤过，合并滤液，浓缩。并与上述方海、土鳖虫提取浓缩液及骨碎补、川续断、当归提取浓缩液混匀，80℃，0.08MPa真空干燥成干浸膏。上述干浸膏粉碎，与前四味生药粉末混匀，加适量矫味剂，乙醇离心旋转法制粒，干燥，整粒(40目)，分装，即得。

实施例8伸筋接骨胶囊接骨作用的药效学试验

一对家兔骨折模型的影响

(一)实验材料：

动物：大耳白家兔，♂，体重2-2.5kg，由江宁县汤山青龙山动物繁殖场提供，

仪器：日立7020全自动生化分析仪，日本Hitachi公司。

骨密度测定仪(Piximus bone densitometer)，美国General ElectronicLunar公司。

药物：伸筋接骨胶囊，由南京中医药大学海洋中心制剂研究室提供，批号：021017，人每日服用量为12粒，每粒相当于生药量0.883g，每克浸膏粉相当于生药量2.58g。

三七粉由南京中药饮片厂提供，批号：020606

(二)实验方法

(1)动物分组：取家兔70只，随机分为五组，每组14只，分别为模型组(等体积蒸馏水)，三七粉阳性药组(1.26g/kg)，伸筋接骨胶囊大剂量组(1.14g/kg，相当于2.94g生药/kg)，伸筋接骨胶囊中剂量组(0.57g/kg，相当于1.47g生药/kg)，伸筋接骨胶囊小剂量组(0.19g/kg，相当于0.49g生药/kg)。

(2)骨折模型的制作：适应性饲养一周后，家兔用3％戊巴比妥钠溶液按1ml/kg剂量静脉麻醉后，两侧前肢剪毛，75％酒精消毒，在无菌条件下用医用手术牙科钻在两侧桡骨中上段1/3交界处横形钻成宽约为3mm，深入骨髓腔形成骨损伤，缝合皮肤，手术后次日开始灌胃给药，连续给药，给药后第14、28天取各组家兔中的7只，测定各项指标。

(3)骨密度测定：分别于14、28天截取两侧桡骨，其长度包括骨损伤及上、下各正常段骨质，用美国LUNAR公司Piximus bone densito-meter测定仪测定骨密度，观察骨折愈合情况。

(4)血生化测定：用全自动生化分析仪测定血清中的钙、磷，碱性磷酸酶等指标。

病理形态：截取两侧桡骨，其长度包括骨损伤及上、下各正常段骨质，置于10％福尔马林内固定，经脱钙后常规石蜡包埋，切片厚4～5μm，HE染色，根据损伤处结缔组织、软骨、骨增生修复的程度，分为五级，以骨组织占所有增生组织(包括结缔组织、软骨、骨组织)的比例记分，骨组织占1/5者记为1分，骨组织占2/5者记为2分，依此类推，损伤处完全由骨组织取代者(骨组织占5/5)记为5分，并依据修复程度分为：+骨组织修复轻度，++中度，+++重度，++++基本修复，+++++完全修复。分值越高，提示疗效越好。

(三)结果

(1)伸筋接骨胶囊对家兔骨折模型骨密度的影响

表1伸筋接骨胶囊对家兔骨折模型骨密度的影响( X±SD)

  组别      动物数  骨密度(g/cm³，14d) 动物数    骨密度(g/cm³，28d)

 模型组        7       0.185±0.036        7         0.249±0.049

三七粉组       7       0.259±0.053^*      6         0.356±0.059^**

大剂量组       7       0.276±0.053^**     7         0.297±0.016^*

中剂量组       7       0.209±0.027        6         0.301±0.018^*

小剂量组       7       0.247±0.056^*      6         0.252±0.061

注：与模型组比较*P＜0.05**P＜0.01

以上实验结果表明：连续给予伸筋接骨胶囊14天后，三七粉组和伸筋接骨胶囊小剂量组的骨密度增加，与模型组比较有显著性差异(P＜0.05)，伸筋接骨胶囊大剂量组也有显著差异(P＜0.01)。给药28天后可见三七粉组与模型组比较有明显差异(P＜0.01)，伸筋接骨胶囊中剂量组、大剂量组与模型组比较有差异(P＜0.05)。并且28天的骨密度比14天的增大，结果表明伸筋接骨胶囊可以加快骨矿沉积速率，提高骨密度，促进家兔骨损伤部位愈合。

(2)伸筋接骨胶囊对家兔骨折模型血清ALP、磷、钙的影响

表2伸筋接骨胶囊对家兔骨折后血清ALP、磷、钙的影响(14d X±SD)

  组别   动物数    ALP(U/L)     磷(mmol/L)      钙(mmol/L)

 模型组     7   108.00±36.18   12.40±1.65    11.47 ±0.51

三七粉组    7   125.00±52.39   12.47±2.80    12.06±0.80

大剂量组    7   136.29 ±50.31  12.24±1.68    11.19±0.94

中剂量组    7   110.43±60.43   13.11±1.72    11.11±0.77

小剂量组    7   138.71±52.32   12.15±2.16    10.64±0.79

表3伸筋接骨胶囊对家兔骨折后血清ALP、磷、钙的影响(28d X±SD)

  组别    动物数   ALP(U/L)      磷(mmol/L)      钙(mmol/L)

 模型组     7   137.57±40.19  10.32±4.52      9.50±4.16

三七粉组    6   151.17±27.01  11.50±1.84      10.46±0.43

大剂量组    7   151.00±38.45  11.44±1.11      10.31±1.32

中剂量组    6   129.00±45.44  12.20±1.92       9.03±2.22

小剂量组    6   143.17±52.21   9.02±4.34       8.70±4.18

以上实验结果表明：各组药物对家兔骨折模型14及28天的血清中ALP、磷及钙无明显影响，各组与模型组比较未见显著性差异。提示口服伸筋接骨胶囊14、28天差能升高血清中的钙，磷有含量，但与模型组比较无显著差异。

(3)伸筋接骨胶囊对家兔骨折模型骨折部位的组织学检查

表4伸筋接骨囊胶对骨损伤14天后家兔病理形态的影响

 组别                    骨组织修复

            +     ++    +++  ++++       均分

模型组     1/7   4/7    1/7   --        1.86

三七组     --    5/7    1/7   --        2.00

大剂量组   2/7   3/7    2/7   --        2.14

中剂量组   3/6   2/6    1/6   --        2.00

小剂量组   1/6   3/6    1/6   1/6       2.50

表5伸筋接骨囊胶对骨损伤28天后家兔病理形态的影响

组别                    骨组织修复

          +      ++    +++  ++++   +++++   均分

模型组    --     --    3/6   2/6    1/6    3.67

三七组    --     --    --    2/5    3/5    4.60

大剂量组  --     --    1/7   --     6/7    4.71

中剂量组  --     --    2/6   2/6    2/6    4.00

小剂量组  --     --    2/6   1/6    3/6    4.16

骨折后修复早期表现为纤维组织增生，以后出现软骨化生，类骨基质形成，最后形成骨组织。损伤后14天显示模型组修复状况较其他各组差，而三七阳性组，伸筋接骨高剂量组、中剂量组、三组间差别不大。伸筋接骨低剂量组损伤后修复较其他各组好。损伤后28天伸筋接骨高剂量组修复最好，多数兔(6/7例)骨创伤处已全为骨小梁修复，药效高于三七处理的骨损伤；其他各组修复的状况由好到差依次为三七阳性组、伸筋接骨低剂量组、伸筋接骨中剂量组。模型组修复状况最差，明显低于其他各实验组。

(四)结论

骨折后修复早期表现为纤维组织增生，以后出现软骨化生，类骨基质形成，最后形成骨组织。本实验利用家兔定点造成其骨损伤，连续给药后研究药物对其骨损伤处的治疗恢复情况，研究结果表明，连续给予伸筋接骨胶囊14、28天后，三七粉组和伸筋接骨胶囊小剂量组的骨密度增加，与模型组比较有显著性差异，28天的骨密度比14天的增大，结果表明伸筋接骨胶囊可以加快骨矿沉积速率，提高骨密度，促进家兔骨损伤增生。但药物能升高家兔血清中ALP、钙，但与模型组比较无明显差。病理组织学结果显示，损伤后骨组织于14、28天给药组的组织学形态都有所增生修复，提示伸筋接骨胶囊提高骨损伤处的骨密度，促进骨组织增生。

二、对大鼠骨折模型的影响

(一)实验材料，与上述一相同。

(二)实验方法

(1)动物分组

取大鼠150只，随机分为五组，每组30只，分别为模型组(等体积蒸馏水)，三七粉阳性药组(2.34g/kg)，伸筋接骨胶囊大剂量组(2.21g/kg，相当于5.70g生药/kg)，伸筋接骨胶囊中剂量组(1.11g/kg，相当于2.86g生药/kg)，伸筋接骨胶囊小剂量组(0.37g/kg，相当于0.95g生药/kg)。

(2)骨折模型的制作：

适应性饲养一周后，将各组大鼠麻醉后，于其股骨下端三分之一处，用夹骨钳造成将其股骨骨折模型。

(3)骨密度测定

分别于损伤后10天、20、30天，取其股骨各鼠股骨测其骨密度，观察各组的骨生长情况。

(4)血生化测定

分别于损伤后10天、20、30天取血，用日立7020全自动生化分析仪测定血清钙、磷含量及碱性磷酸酶活性

(5)病理形态

分别于损伤后10天、20、30天取其股骨，置于10％福尔马林内固定，经脱钙后常规石蜡包埋，切片厚4～5μm，HE染色，根据损伤处结缔组织、软骨、骨增生修复的程度，分为五级，以软骨及骨组织占所有增生组织(包括结缔组织、软骨、骨组织)的比例记分，软骨及骨组织占1/5者记为1分，软骨及骨组织占2/5者记为2分，依此类推，损伤处完全由软骨及骨组织取代者(即软骨及骨组织占5/5)记为5分。分值越高，提示疗效越好。对其病理形态组织学分析，观察各组的骨生长情况。

(三)结果

(1)伸筋接骨胶囊对大鼠骨折模型骨密度的影响

表6伸筋接骨胶囊对大鼠骨折模型骨密度的影响( X±SD)

组别   动物    骨密度    动物     骨密度     动物数      骨密度

        数  (g/cm³，10d) 数   (g/cm³，20d)           (g/cm³，30d)

模型组  10  0.113±0.019   7    0.118±0.023     9      0.154±0.034

三七粉组 9  0.136±0.021^* 9    0.170±0.043^*   8      0.195±0.024^*

大剂量组 7  0.133±0.015^* 10   0.165±0.038^**  9      0.200±0.026^**

中剂量组 9  0.132±0.010^* 9    0.163±0.028^**  8      0.195±0.033^*

小剂量组 9  0.134±0.019^* 9    0.151±0.019^**  8      0.173±0.023

注：与模型组比较*P＜0.05**P＜0.01

以上实验结果表明：连续给药10天后，可见三七粉组和伸筋接骨胶囊各剂量组的骨密度增加，与模型组比较均有显著性差异(P＜0.05)。给药20天后，三七粉组的骨密度增加，与模型组比较有差异(P＜0.05)，伸筋接骨胶囊大、中、小剂量组都有显著性差异(P＜0.01)。给药30天后，三七粉组与模型组比较有差异(P＜0.05)，伸筋接骨胶囊中剂量组和大剂量组与模型组比较有显著性差异(P＜0.01)。表明大鼠骨折以后，伸筋接骨胶囊可以加快骨矿成分的沉积速率，提高了骨的密度，从而促进骨折的愈合。

(2)伸筋接骨胶囊对大鼠骨折模型血清ALP、磷、钙的影响

表7伸筋接骨胶囊对大鼠骨折后血清ALP、磷、钙影响(10d  X±SD)

 组别    动物数    ALP(U/L)       磷(mmol/L)      钙(mmol/L)

模型组     9     264.22±86.12   15.24±1.84      9.38±0.54

三七粉组   9     290.22±28.27   17.02±3.01      9.90±0.53

大剂量组  10     273.30±79.00   14.43±1.45      9.81±0.57

中剂量组  10     276.90±94.72   15.84±1.41      9.92±0.30

小剂量组  10     271.70±64.41   16.15±2.14      9.72±0.76

表8伸筋接骨胶囊对大鼠骨折后血清ALP、磷、钙影响(20d  X±SD)

 组别    动物数    ALP(U/L)       磷(mmol/L)      钙(mmol/L)

模型组     8     264.75±86.54   14.76±1.97      8.83±0.29

三七粉组   8     210.00±57.79   17.05±2.50      8.84±0.54

大剂量组  10     234.80±50.94   14.50±1.15      9.02±0.48

中剂量组   9     250.44±83.35   15.19±1.36      9.30±0.50

小剂量组   9     294.78±157.80  15.84±2.28      9.06±0.52

表9伸筋接骨胶囊对大鼠骨折后血清ALP、磷、钙影响(30d  X±SD)

 组别    动物数    ALP(U/L)       磷(mmol/L)      钙(mmol/L)

模型组     8     230.88±45.84   9.03±0.70       16.65±4.20

三七粉组   8     201.25±49.70   8.90±0.50       14.73±2.02

大剂量组   7     198.86±54.30   8.60±0.39       14.61±1.55

中剂量组   9     227.44±39.59   8.78±0.33       14.95±0.99

小剂量组   8     202.75±36.04   8.78±0.29       14.30±1.88

以上实验结果表明：各组药物对大鼠骨折模型10、20及30天的血清中ALP、磷及钙无明显影响，各组与模型组比较未见差异，提示药物经口服吸收后对血液中的磷、钙及碱性磷酸酶的含量无影响。

病理形态：

表10伸筋接骨胶囊对大鼠骨损伤模型10天后的病理形态学的影响

组别                     骨组织修复

              +         ++           均分

模型组       2/8        --           1.86

三七组       4/8        --           2.00

大剂量组     7/8        --           2.29

中剂量组     3/9        --           1.67

小剂量组     4/9       1/9           1.33

表11伸筋接骨胶囊对大鼠骨损伤模型20天后的病理形态学的影响

 组别                        骨组织修复

                +              ++               均分

模型组         8/9             --               2.10

三七组         5/7            1/7               2.43

大剂量组       3/7            3/7               2.80

中剂量组       4/6            1/6               2.33

小剂量组       2/4            1/4               2.50

表12伸筋接骨胶囊对大鼠骨损伤模型30天后的病理形态学的影响

 组别                        骨组织修复

                +              ++               均分

模型组         3/7            4/7               3.00

三七组         4/9            5/9               3.22

大剂量组       2/6            4/6               3.50

中剂量组       6/8            2/8               2.50

小剂量组       3/6            3/6               3.80

骨折损伤后不同时间段用半定量方法分析骨折修复状况显示：骨折后10天，伸筋接骨胶囊大剂量组对骨折的疗效优于三七阳性组、伸筋接骨胶囊中剂量组、伸筋接骨胶囊小剂量组，骨折后20、30天后显示伸筋接骨胶囊小剂量组疗效最好，其次为伸筋接骨胶囊大剂量组。伸筋接骨胶囊于骨折后20天，30天时大剂量组及小剂量组比模型组修复状况好。模型组在骨折损伤后不同时间段修复状况较差，每例动物均分明显低于多数其他实验组。

(四)结论

骨折在临床上比较常见，主要是指骨或骨小梁在外力的作用或在某些病理情况下遭到完整性破坏。本实验通过大鼠骨折实验动物模型研究药物的治疗作用，伸筋接骨胶囊能提高大鼠骨折端的骨密度，加快骨矿成分的沉积速率，促进骨折的愈合，但对血清中ALP、磷及钙无明显影响。病理形态学表明伸筋接骨胶囊能促进骨小梁增生，使骨折损伤处能迅速修复。

实施例9伸筋接骨胶囊对血液流变学的影响

一、伸筋接骨胶囊对家兔骨折模型血液流变学的影响

(一)实验材料

动物：大耳白家兔，♂，体重2-2.5kg，

仪器：LG-R-80血液粘度测试仪，PAPER-1型血小板集聚及血凝测定仪，

药物：同实施例8

(二)实验方法

(1)动物分组：同实施例8

(2)骨折模型制备：适应性饲养一周后，各组家兔用3％戊巴比妥钠溶液按1ml/kg剂量静脉麻醉后，前肢剪毛，75％酒精消毒，在无菌条件下用医用手术牙科钻在桡骨中上段1/3交界处横形钻成宽约为3mm，深入骨髓腔的骨损伤，于伤口滴入青霉素溶液消炎，缝合皮肤，手术后次日开始灌胃给药，连续给药。

(3)血液流变学测定：于给药后第14、28天，颈动脉采血，测血小板聚集率，全血、血浆粘度。

(三)结果

(1)伸筋接骨胶囊对家兔骨折模型血液流变学的影响

表13伸筋接骨胶囊对家兔骨折模型血液流变学的影响(14d  X±SD)

   组别    动物数      全血粘度      血浆粘度

  模型组     7        3.37±1.57    1.97±1.03

三七粉组     7        3.84±1.95    2.40±1.07

大剂量组     7        2.63±0.27    1.97±0.80

中剂量组     7        2.97±0.54    2.51±1.52

小剂量组     7        2.96±1.41    1.94±0.77

表14伸筋接骨胶囊对家兔骨折模型血液流变学的影响(28d  X±SD)

   组别    动物数      全血粘度      血浆粘度

  模型组     7        5.37±0.84    1.87±0.13

三七粉组     6        4.77±0.48    2.00±0.21

大剂量组     7        4.61±0.38^*  1.94±0.10

中剂量组     6        4.86±0.42    2.02±0.06

小剂量组     6        4.19±0.62^*  1.86±0.10

注：与模型组比较*P＜0.05**P＜0.01

以上实验结果表明，连续给予伸筋接骨胶囊14天后，药物对家兔骨折模型的全血粘度，血浆粘度没有明显影响，各组和模型组比较无明显性差异。给药28天后可见伸筋接骨胶囊大剂量组和小剂量组的全血粘度，红细胞比容都比模型组有明显的降低，与模型组比较也有差异(P＜0.05)。

表15伸筋接骨胶囊对家兔骨折模型血小板聚集率的影响( X±SD)

  组别      动物数    血小板聚集率(14d)    动物数    血小板聚集率(28d)

 模型组       7         77.67±13.56          7        92.87±10.30

三七粉组      7         52.54±18.68^*        6        78.25±8.69^*

大剂量组      7         60.52±11.86^*        7        68.74±23.16^*

中剂量组      7         58.67±16.33^*        6        80.90±18.49

小剂量组      7         71.58±21.13          6        74.85±15.63^*

注：与模型组比较*P＜0.05**P＜0.01

以上实验结果表明：当连续给药14天时，阳性药三七粉组与模型组比较有显著性差异(P＜0.05)，伸筋接骨胶囊中剂量组及大剂量组与模型组比较有显著性差异(P＜0.05)，给药28天后，各组再与模型组比较，三七粉组、伸筋接骨胶囊小剂量组和大剂量组有差异(P＜0.05)。表明伸筋接骨胶囊对实验性骨损伤家兔血小板聚集有抑制作用，但量效关系不明显，提示伸筋接骨胶囊能降低血小板的聚集率，促进血液循环。

(四)结论

本实验利用家兔定点造成其骨损伤，连续给药后研究药物对其骨损伤处的治疗恢复情况，研究结果表明，给药14天时，对其全血粘度，血浆粘度，没有明显影响，但给药28天后可见伸筋接骨胶囊大剂量组和小剂量组的全血粘度都比模型组有明显的降低，给药14及28天后，可以改善局部血液供应，伸筋接骨胶囊高、中两个剂量组均能降低血小板的聚集率，高剂量组可以降低全血粘度。

二、伸筋接骨胶囊对大鼠骨折模型血液流变学的影响

(一)实验材料

动物：SD大白鼠，♂，120-150g，由南京医科大学实验动物中心提供，

仪器：LG-R-80血液粘度测试仪，北京世帝科学仪器公司

PAPER-1型血小板集聚及血凝测定仪，北京世帝科学仪器公司

药物：伸筋接骨胶囊由南京中医药大学海洋中心制剂研究室提供，批号：021017，人每日服用量为12粒，每粒相当于生药量0.883g，每克浸膏粉相当于生药量2.58g。

三七粉  由南京中药饮片厂提供批号020606

(二)实验方法

(1)实验分组：同实施例8(二)

(2)(2)动物模型的制备：

适应性饲养一周后，各组用夹骨钳将其股骨夹断造成骨折模型。次日各组灌胃给药(正常组给等体积的蒸馏水)，每日一次，连续给药。

(3)血液流变学的测定：

分别于给药后的第10、20及30天颈总动脉采血，测血小板聚集率，全血及血浆粘度。

(三)实验结果

(1)、伸筋接骨胶囊对大鼠骨折模型血液流变学的影响

表16伸筋接骨胶囊对大鼠骨折模型血液流变学的影响(10d  X±SD)

  组别     动物数     全血粘度       血浆粘度

 模型组      9       4.54±0.91     1.99±1.26

三七粉组     9       4.81±0.97     1.45±0.34

大剂量组    10       5.16±0.86     2.00±0.77

中剂量组    10       5.17±0.69     1.76±0.37

小剂量组    10       5.03±0.74     1.57±0.27

表17伸筋接骨胶囊对大鼠骨折模型血液流变学的影响(20d  X±SD)

  组别      动物数      全血粘度        血浆粘度

 模型组       8        4.71±1.57      1.64±0.42

三七粉组      8        4.58±1.03      1.74±0.56

大剂量组     10        4.74±1.66      1.99±0.48

中剂量组      9        4.54±1.63      1.95±0.48

小剂量组      9        5.30±1.38      2.37±1.11

表18伸筋接骨胶囊对大鼠骨折模型血液流变学的影响(30d X±SD)

 组别          动物数     全血粘度        血浆粘度

模型组           8       6.16±0.46      1.75±0.09

三七粉组         8       6.09±0.99      1.81±0.08

大剂量组         7       6.21±1.57      1.90±0.15^*

中剂量组         9       5.89±0.87      1.78±0.06

小剂量组         8       6.87±2.17      2.00±0.52

注：与模型组比较*P＜0.05**P＜0.01

以上实验结果表明：各组药物对大鼠骨折模型10、20及30天的全血粘度无明显影响，与模型组比较没有差异。血浆粘度除了30天伸筋接骨胶囊大剂量组比模型组有显著升高，与模型组比较有差异(P＜0.05)外，其他各组药物对大鼠骨折模型10、20及30天的血浆粘度无明显影响，与模型组比较没有差异。连续给药后第10天时的阳性药三七粉组和连续给药后第20天时的伸筋接骨胶囊大剂量组红细胞比容比模型组有显著升高，与模型组比较有差异(P＜0.05)。其它各组药物对大鼠骨折模型10、20及30天的红细胞比容无明显影响，与模型组比较没有差异。

表19伸筋接骨胶囊对大鼠骨折模型血小板聚集率的影响

 组别    动物数  血小板聚集率  动物数  血小板聚集率  动物数  血小板聚集率

                     (10d)                 (20d)                 (30d)

模型组     9     53.50±10.83     8     80.89±8.15     8     83.80±7.05

三七粉组   9     31.34±12.62^**  8     63.35±17.79^*  8     67.73±12.26^**

大剂量组  10     43.16±19.34    10     65.66±16.97^*  7     71.83±8.95^*

中剂量组  10     38.66±12.26^*   9     78.03±14.05    9     66.63±19.45^*

小剂量组  10     30.80±15.98^*   9     73.66±13.63    8     70.39±26.92

注：与模型组比较^*P＜0.05**P＜0.01

以上的实验结果表明：在大鼠连续给药10天时，给药组与模型组比较，阳性药三七粉组有明显的差异(P＜0.01)，伸筋接骨胶囊小剂量组和中剂量组有差异(P＜0.05)。在20天时，给药组再与模型组比较，三七粉组和伸筋接骨胶囊大剂量组有差异(P＜0.05)。在30天时与模型组比较，伸筋接骨胶囊从中剂量组有差异(P＜0.05)，三七粉组有明显差异(P＜0.01)。伸筋接骨胶囊各剂量组血小板聚集率与模型组比，都有一定的下降。说明伸筋接骨胶囊通过对骨折以后大鼠血小板聚集抑制作用。

实施例10伸筋接骨胶囊抗炎镇痛作用

一、对大鼠棉球肉芽肿的影响

动物：ICR大白鼠，♂，120-150g，由南京中医药大学实验动物中心提供，

仪器：SARTORIUS。BP-310S电子天平

药物：伸筋接骨胶囊，

      阿司匹林，

实验方法：

取体重为120-150g健康雄性大鼠50只，随机分成5组，每组10只。(1)模型组(等体积蒸馏水)；(2)阿司匹林组(200mg/kg)；伸筋接骨胶囊大剂量组.(2.21g/kg，相当于5.70g生药/kg)；伸筋接骨胶囊中剂量组(1.11g/kg，相当于2.86g生药/kg)；伸筋接骨胶囊小剂量组(0.37g/kg，相当于0.95g生药/kg)。适应性饲养后，用戊巴比妥钠(30mg/kg)进行麻醉，在大鼠左右两侧腋下75％酒精消毒后，植入灭菌20mg的棉球(用前青霉素和链霉素混合液0.2ml处理)。于次日灌胃给药，每日一次，连续五日，第六日将大鼠处死，将棉球连同周围结蒂组织一起取出，除去脂肪组织，于60℃的烘相中烘至恒重后称其重量重，并计算抑制率，结果按下面公式计算：

抑制率＝(1-给药组肉芽组织的干重/空白组肉芽组织干重)×100％

实验结果见表20：

          表20伸筋接骨胶囊对大鼠棉球肉芽肿的影响( X±SD)

组别            动物数         肉芽肿净重(mg)     抑制率(％)

模型组            10            60.25±13.71         ----

阿司匹林          10            52.85±5.91^*        11.92

大剂量组          9             59.45±15.20         1.33

中剂量组          10            59.55±8.88          1.16

小剂量组          10            60.00±11.46         0.41

注：与模型组比较^*P＜0.05

以上实验结果表明：阿斯司林组与模型组比较有差异(P＜0.05)，但是伸筋接骨胶囊大，中，小剂量组与模型组比较没有显著性差异，对棉球肉芽肿的抑制率比较低，提示伸筋接骨胶囊的对棉球肉芽肿的抗炎作用不明显。

二、对醋酸致小鼠扭体实验的影响

目的：观察伸筋接骨胶囊对醋酸所致小鼠扭体反应有无镇痛作用。

动物：ICR小鼠，♀♂各半，由南京医科大学实验动物中心提供，动物生产许可证：苏动准字号SCXK(苏)2002-0031。

药物：伸筋接骨胶囊，

      阿司匹林，

      醋酸

实验方法：

取体重为18～22g的健康小鼠61只，雌雄各半，随机分成5组，(1)模型组；(2)阿司匹林组(200mg/kg)；(3)伸筋接骨胶囊大剂量组(3.12g/kg，相当于8.05g生药/kg)；(4)伸筋接骨胶囊中剂量组(1.56g/kg，相当于4.02g生药/kg)；(5)伸筋接骨胶囊小剂量组(0.52g/kg，相当于1.37g生药/kg)。适应性饲养后，各组小鼠灌胃给药，每天一次，连续三天。于末次给药后一小时(阿斯匹林半小时)。经腹腔注射0.6％醋酸溶液0.2ml/只，立即计时，观察并记录小鼠在15min内的扭体反应数，并计算药物的抑制率。结果按下面公式计算：

抑制率＝(生理盐水组平均扭体数-给药组平均扭体数)/生理盐水组平均扭体数×100％

实验结果：

伸筋接骨胶囊对醋酸所致小鼠扭体反应次数的影响

     表21伸筋接骨胶囊对醋酸所致小鼠扭体反应次数的影响( X±SD)

组别          动物数          扭体次数          抑制率(％)

正常组          12           46.6±14.7

阿司匹林组      13           17.3±16.9^**         62.8

大剂量组        12           26.9±21.3^*          42.2

中剂量组        12           22.4±15.1^**         51.9

小剂量组        12           31.7±17.3^*          32.0

注：与正常组比较^*P＜0.05^**P＜0.01

以上实验结果表明：阿司匹林组和伸筋接骨胶囊中剂量组与正常组比较有显著性差异(P＜0.01)，对化学性疼痛引起的小鼠扭体反应次数有明显的抑制作用，伸筋接骨胶囊大剂量和小剂量组与正常组比较有差异(P＜0.05)，对引起的小鼠扭体反应有一定的抑制作用。说明伸筋接骨胶囊对化学性疼痛模型有明显的镇痛作用。

三、对醋酸致小鼠炎症毛细血管通透性的影响

目的：伸筋接骨胶囊对醋酸致小鼠炎症使毛细血管通透性增加有无抑制作用

动物：ICR小鼠，♀♂各半，由南京医科大学实验动物中心提供，

仪器：离心机，BECKMEN公司。

DU-640核酸蛋白分析仪，BECKMEN公司。

药物：伸筋接骨胶囊，

      阿司匹林，

      醋酸，

实验方法：

取ICR健康小鼠60只，雌雄各半，随机分成5组，(1)模型组(等体积蒸馏水)；(2)阿司匹林组(200mg/kg)；(3)伸筋接骨胶囊大剂量组(3.12g/kg，相当于8.05g生药/kg)；(4)伸筋接骨胶囊中剂量组(1.56g/kg，相当于4.02g生药/kg)；(5)伸筋接骨胶囊小剂量组(0.52g/kg，相当于1.37g生药/kg)。适应性饲养后，各组小鼠灌胃给药，每天一次，连续三天。于末次给药后一小时(阿斯匹林半小时)。经尾静脉注入0.5％的伊文思兰液0.01ml/g，随机腹腔注射0.5％的醋酸水溶液0.02ml/g。0.5小时后处死动物，用10ml生理盐水冲洗腹腔，剪开腹腔，收集腹腔液，将其液在1000rpm离心5min，取上清夜用DU-640核酸蛋白分析仪在590nm处测其吸收度。记录数据看药物对醋酸引起的小鼠腹腔毛细血管通透性增加有无抑制作用。实验结果见表15：

表22伸筋接骨胶囊对醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性的影响( x±SD)

组别              动物数                 吸光度

正常组              10                0.208±0.072

阿司匹林组          11                0.157±0.044^*

大剂量组            11                0.217±0.092

中剂量组            10                0.190±0.052

小剂量组            10                0.199±0.061

注：与正常组比较^*P＜0.05

以上实验结果表明：阿斯司林组与模型组比较有差异(P＜0.05)，但是伸筋接骨胶囊大，中，小剂量组与模型组比较没有显著性差异，伸筋接骨胶囊各剂量组的吸光度与正常组比较也没有明显的降低。提示伸筋接骨胶囊对醋酸所致的炎症抑制作用不显著。

结论

通过以上抗炎镇痛实验结果表明：伸筋接骨胶囊不能抑制毛细血管通透性，提示伸筋接骨胶囊对骨损伤所致的炎症没有抑制作用；炎症后期纤维母细胞的增殖无抑制作用，但伸筋接骨胶囊对化学性疼痛引起的小鼠扭体反应次数有明显的抑制作用，提示伸筋接骨胶囊可以改善骨折炎症因子释放所致的疼痛反应。

Claims (9)

1、一种治疗骨折的复方制剂，其特征在于它是由下列重量配比的原料所组成：

骨碎补0.5～10g、续断0.2～8g、方海1.0～20g、当归1.0～10g、儿茶0.3～5g、血竭0.5～5g、乳香(制)0.2～8g、没药(制)0.2～8g、土鳖虫1.0～8g、自然铜(煅)0.5～3g。

2、按照权利要求1所述的治疗骨折的复方制剂，其特征在于，复方中各原料组分的优化配比为：

骨碎补1.5g、续断1.2g、方海2.0g、当归1.4g、儿茶0.35g、血竭0.95g、乳香(制)1.0g、没药(制)1.0g、土鳖虫1.4g、自然铜(煅)1.2g

3、按照权利要求1或2所述的治疗骨折的复方制剂，其特征在于添加适宜的辅料后，可制成固体口服制剂。

4、一种制备权利要求1所述的治疗骨折的复方制剂的方法，其制备方法步骤为：

(1)将上述处方中儿茶、血竭、乳香(制)、没药(制)混合低温粉碎，过筛得细粉；

(2)把方海与土鳖虫粗粉碎，加水煎煮，合并煎液，浓缩；

(3)将骨碎补、续断、当归，加乙醇回流提取，合并提取液，减压回收乙醇，浓缩；

(4)煅自然铜加pH4醋酸水煎煮，滤过，合并滤液，浓缩；

(5)将上述提取步骤(2)、(3)和(4)的浓缩液混匀，真空干燥成干浸膏；

(6)再将上述干浸膏粉碎，与步骤(1)的四味生药粉末混匀，添加适宜的辅料可制成颗粒，或分装成颗粒剂；或进一步分装成胶囊剂；或压成片剂。

5、根据权利要求4所述的复方制剂的制备方法，其特征在于在步骤(1)中的细粉为80目。

6、根据权利要求4所述的复方制剂的制备方法，其特征在于在步骤(2)中加水煎煮3次，每次2小时。

7、根据权利要求4所述的复方制剂的制备方法，其特征在于在步骤(3)中加50％的乙醇回流提取3次，每次2小时，浓缩至相对密度1.30。

8、根据权利要求4所述的复方制剂的制备方法，其特征在于在步骤(4)中加醋酸水煎煮2次，每次2小时。

9、根据权利要求4所述的复方制剂的制备方法，其特征在于在步骤(5)中，真空干燥温度80℃，0.08MP_a。