CN1895374A - 一种药物组合物及其制剂的制备方法和质量控制方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种治疗尖锐性湿疣、生殖器疱疹的药物组合物，该药物组合物是由如下重量配比的原料药制成：桃儿七52～78重量份、鸦胆子460～690重量份、大黄80～120重量份、苦参80～120重量份。本发明药物组合物中还可加入桉油，冰片；本发明药物组合物还可直接以桃儿七提取物，鸦胆子油，大黄、苦参中药液投料入药。本发明还公开了本发明药物组合物乳剂的质量控制方法，包括鉴别和/或含量测定方法。

Description

一种药物组合物及其制剂的制备方法和质量控制方法

技术领域

本发明涉及一种药物组合物及其制剂的制备方法和质量控制方法，特别涉及一种治疗尖锐性湿疣、生殖器疱疹的药物组合物及其制剂的制备方法和质量控制方法。

背景技术

尖锐湿疣(condyloma acuminata)又称生殖器疣(genital warts)，系人乳头病毒(human papillomavirus，HPV)感染生殖器皮肤粘膜所致，由于本病主要通过性接触传染，故认为属性传播疾病(STD)的一种，近十年来国内外发病例数均迅速增多。目前，尖锐湿疣已成为欧美国家最常见的性传播疾病之一。国内近年来的发病率也呈逐渐上升趋势，在性传播疾病中发病率仅次于淋病。生殖器疱疹又称阴部疱疹，是由单纯性疱疹病毒(herpessimplex virus-HSV)引起的性传播性疾病。HSV是人类疱疹病毒的一种，分有HSV-1和HSV-2两型。约90％的患者属HSV-2型感染而引起，通常由性接触传播。除引起皮肤粘膜损害外，与局部癌变有一定的关系。目前生殖器疱疹的流行情况在STD中非常引人注意，它已成为欧美最常见的性病之一，在我国近几年生殖器疱疹也明显增加。尖锐湿疣的治疗方法主要有物理疗法和药物治疗两大类。物理疗法有液氮冷冻疗法、CO2激光治疗、微波治疗、电烧灼、β-射线治疗和手术治疗，但这些方法或疗效不佳且痛苦大、或复发率高且易产生副作用，另外操作方法复杂性更限制了它们的应用。药物治疗目前还没有特效的药物，临床上应用的药物主要分以下几大类：(1)腐蚀剂或消毒剂；(2)抗癌药；(3)抗病毒药；(4)免疫调节剂；(5)中草药制剂；(6)中西药结合制剂。更为重要的是尖锐湿疣迄今为止尚无有效的抗病毒治疗手段，带来的流行病学问题值得高度重视。对HPV的潜伏感染，目前临床上尚无有效的诊疗方法，而且是复发的主要原因。因此，尖锐湿疣治疗后的原位复发或它处新发往往在所难免，成为尖锐湿疣传播和蔓延难以控制的主要原因。虽然治疗尖锐湿疣的方法很多，但无论哪种方法，都报道其复发率都较高，目前尚无有效的抗复发方法。0.5％的鬼臼毒素酊是世界卫生组织推荐治疗尖锐湿疣的第一线药物，国内临床上最为常用的是0.5％的鬼臼毒素制剂-尤脱欣(0.5％鬼臼毒素酊)，但由于鬼臼毒素具有很强的细胞毒性，缺乏对病毒感染组织的特异性作用，常造成正常组织的损伤，用量太大会产生严重的毒副作用，并且不能防止复发。因此，近年来一直都在探索一种用法简易、高效、安全、复发率低的药物。

生殖器疱疹是一种由单纯疱疹病毒侵犯生殖器皮肤、黏膜引起的红斑、水疱、糜烂、溃疡性损害的性传播性疾病。临床上治疗可分系统治疗和局部治疗，以系统治疗为主。系统治疗是采用系统用药方式并对疗程进行跟踪观察，这方面药物较多。如阿昔洛韦、伐昔洛韦、泛昔洛韦、西多福韦、磷甲酸钠、干扰素、消炎痛、左旋咪唑以及中药等。由于阿昔洛韦、伐昔洛韦、泛昔洛韦是最常用而有效的药物，它们对原发和复发性疱疹都有较好疗效。局部治疗是在系统用药时配合使用一些外用制剂。可用药物有：阿昔洛韦外用膏霜，无环鸟苷眼液，酞丁胺搽剂，3％藤黄酊等。虽然目前治疗生殖器疱疹的药物较多，但临床上常用的几种药物毒性较大，且容易产生耐药性。目前尚无特效药物，此病复发率较高，尚无有效根治办法。

总之，虽然目前治疗尖锐湿疣和生殖器疱疹的方法与药物较多，但它们病情比较顽固复发率高，较难根治，尚无有效根治办法和特效药物，均需采用综合疗法。它们摧残身体，影响家庭，危害社会，给患者造成极大的生理与心理痛苦。因此，应用中医、中药理论开发一种治疗尖锐湿疣和生殖器疱疹的安全有效的纯中药制剂，会给患者带来新的治疗手段，对个人、家庭和社会更有着重要的社会效应。

技术方案

本发明目的在于提供一种新的治疗尖锐性湿疣、生殖器疱疹的药物组合物及其制剂；本发明目的还在于提供一种新的治疗尖锐性湿疣、生殖器疱疹的药物组合物及其制剂的制备方法；本发明目的还在于提供一种治疗尖锐性湿疣、生殖器疱疹的药物组合物制剂的质量控制方法。

本发明目的是通过如下技术方案实现的：

本发明药物组合物主要是由如下重量配比的原料药制成：

桃儿七52～78重量份、鸦胆子460～690重量份、大黄80～120重量份、苦参80～120重量份。

上述本发明药物组合物的原料药优选配比为：

桃儿七65重量份、鸦胆子574重量份、大黄100重量份、苦参100重量份。

上述本发明药物组合物的原料药优选配比为：

桃儿七55重量份、鸦胆子650重量份、大黄90重量份、苦参110重量份。

上述本发明药物组合物的原料药优选配比还可为：

桃儿七75重量份、鸦胆子500重量份、大黄110重量份、苦参90重量份。

上述本发明药物组合物原料药中还可加入桉油8～12重量份、冰片8～12重量份，优选桉油10重量份、冰片10重量份，桉油9重量份、冰片11重量份或桉油11重量份、冰片9重量份。

取上述本发明药物组合物原料药，经对各药的有效成分分别或组合进行加工提取后，加入常规辅料或赋形剂，可制备成各种临床可接受的外用药物剂型，包括真溶液类剂型、胶体溶液类剂型、乳浊液类剂型、混悬液类剂型或气体分散体剂型等。

所说的真溶液类剂型选自于芳香水剂、溶液剂或醑剂等中的一种；所说的胶体溶液类剂型选自于胶浆剂、火棉胶剂或凝胶剂等中的一种；所说的乳浊液类剂型选自于O/W型或W/O型乳剂等中的一种；所说的混悬液类剂型选自于合剂、洗剂或混悬剂等中的一种；所说的气体分散体剂型选自于喷雾剂等中的一种。

上述本发明药物组合物的制备方法为：

按上述重量配比称取原料药，桃儿七用6～14倍量二氯甲烷，回流提取1～3次，每次1～3小时，合并提取液，过滤，滤液回收二氯甲烷，得到固体粉末，将固体粉末40℃、-0.1MP真空干燥4小时后，过100目筛，得桃儿七提取物，备用；冰片过80目筛，备用；鸦胆子用6～10倍量石油醚，回流提取1～3次，每次1～3小时，合并提取液，过滤，滤液回收石油醚至无石油醚味，得到鸦胆子油，加1％活性炭于100℃搅拌15分钟，趁热过滤除炭，得鸦胆子油精品；大黄、苦参用8～12倍量的60％～85％乙醇回流提取1～4次，每次1～3小时，合并提取液，过滤，滤液回收乙醇，浓缩到相对密度为1.016，离心除沉淀，上清液备用；取上述桃儿七提取物、鸦胆子油精品、大黄、苦参合并提取的上清液，或再加入桉油、冰片，加入常规辅料或赋形剂，制备成各种临床可接受的药物剂型包括真溶液类剂型、胶体溶液类剂型、乳浊液类剂型、混悬液类剂型或气体分散体剂型等。

所述桃儿七提取物，鸦胆子油精品，大黄、苦参合并提取的上清液(即大黄、苦参中药液)也可按常规方法制备。

所说的真溶液类剂型选自于芳香水剂、溶液剂或醑剂等中的一种；所说的胶体溶液类剂型选自于胶浆剂、火棉胶剂或凝胶剂等中的一种；所说的乳浊液类剂型选自于乳剂等中的一种；所说的混悬液类剂型选自于合剂、洗剂或混悬剂等中的一种；所说的气体分散体剂型选自于喷雾剂等中的一种。其中优选的剂型为醑剂、凝胶剂或乳剂；其中最优选的剂型为水包油型的乳剂。

本发明药物组合物还要可在上述重量配比的原料药基础上添加辅料制成乳剂，该乳剂可由如下下述重量份的原料制成：

桃儿七52～78重量份、鸦胆子460～690重量份、大黄80～120重量份、苦参80～120重量份、桉油8～12重量份、冰片8～12重量份、维生素E 3.2～4.8重量份、山梨酸0.8～1.2重量份、单硬脂酸甘油酯41.6～63.4重量份、十二烷基硫酸钠9.6～14.4重量份。

上述本发明药物组合物乳剂的原料药优选配比为：

桃儿七65重量份、鸦胆子574重量份、大黄100重量份、苦参100重量份、桉油10重量份、冰片10重量份、维生素E 4重量份、山梨酸1重量份、单硬脂酸甘油酯52重量份、十二烷基硫酸钠12重量份。

上述本发明药物组合物乳剂的原料药优选配比为：

桃儿七55重量份、鸦胆子650重量份、大黄90重量份、苦参110重量份、桉油9重量份、冰片11重量份、维生素E 3.5重量份、山梨酸1.1重量份、单硬脂酸甘油酯45重量份、十二烷基硫酸钠14重量份。

上述本发明药物组合物乳剂的原料药优选配比还可为：

桃儿七75重量份、鸦胆子500重量份、大黄110重量份、苦参90重量份、桉油11重量份、冰片9重量份、维生素E4.5重量份、山梨酸0.9重量份、单硬脂酸甘油酯60重量份、十二烷基硫酸钠10重量份。

上述本发明药物组合物乳剂的制备方法为：

按上述重量配比称取原料药，桃儿七用6～14倍量二氯甲烷，回流提取1～3次，每次1～3小时，合并提取液，过滤，滤液回收二氯甲烷，得到固体粉末，将固体粉末40℃真空(-0.1MP)干燥4小时后，过100目筛，得桃儿七提取物，备用；冰片过80目筛，备用；鸦胆子用6～10倍量石油醚，回流提取1～3次，每次1～3小时，合并提取液，过滤，滤液回收石油醚至无石油醚味，得到鸦胆子油，加1％活性炭于100℃搅拌15分钟，趁热过滤除炭，滤液备用，得鸦胆子油精品；大黄、苦参用8～12倍量的60％～85％乙醇回流提取1～4次，每次1～3小时，合并提取液，过滤，滤液回收乙醇，浓缩到相对密度为1.016，离心除沉淀，上清液备用；取上述鸦胆子油精品、单硬脂酸甘油酯、维生素E、冰片置于容器中，水浴加热至60-70℃，搅拌溶解，再将桉油及上述桃儿七提取物置于油相中，搅拌均匀后，作为油相；称取山梨酸、十二烷基硫酸钠置于中药液中，水浴加热至60-70℃，搅拌溶解，作为水相；将水相缓慢加入到油相中，边加边搅拌至乳化均匀，冷至室温，制成乳剂。

所述桃儿七提取物，鸦胆子油精品，大黄、苦参合并提取的上清液(大黄、苦参中药液)也可按常规提取方法制备。

本发明乳剂还可以直接以桃儿七提取物，鸦胆子油，大黄、苦参中药液按如下重量体积比(g/ml)投料入药：桃儿七提取物2.78重量份，鸦胆子油70重量份，大黄、苦参中药液600体积比，桉油10重量份，冰片10重量份，维生素E 4重量份，山梨酸1重量份，十二烷基硫酸钠12重量份，单硬脂酸甘油酯52重量份，水加至1000重量份制成乳剂。

制备方法为：桃儿七提取物过100目筛后备用；将冰片过80目筛后备用；按处方量称取鸦胆子油、单硬脂酸甘油酯、维生素E、冰片置于容器中，于60-70℃水浴中加热溶解，作为油相；称取处方量的山梨酸、十二烷基硫酸钠加入中药液中，60-70℃水浴加热搅拌溶解，作为水相；将处方量的桉油及桃儿七提取物加入到油相中，搅拌均匀后，将水相缓慢加入到油相中，边加边搅拌至乳化均匀，冷至室温，将其分装于适宜的瓶中，即得。

上述本发明药物组合物中桃儿七药材的质量控制方法包括下述鉴别和/或含量测定方法中的一种或几种：

鉴别：取桃儿七粉末约0.5g，加10ml二氯甲烷超声提取约10分钟，过滤，滤液水浴蒸干，加2ml无水乙醇使溶解，作为供试品溶液；另取鬼臼毒素对照品10mg，加无水乙醇2ml使溶解，作为对照品溶液；取对照品与供试品溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以10～8∶1的氯仿-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％的硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点清晰，供试品与对照品应在相同位置出现相同斑点。

含量测定：照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定。

色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以60～65∶40～35的甲醇-水为流动相；检测波长为292nm；理论板数按鬼臼毒素峰计应不低于1500，主峰与相邻杂质峰的分离度应为1.5以上。

取经70℃干燥至恒重的鬼臼毒素对照品适量，用上述流动相溶解制成每1ml中约含0.13mg的溶液，即得对照品溶液；取桃儿七粉末，过4号筛，约0.5g[同时另取本品粉末测定水分(中国药典2005年版一部附录IX H第一法)]，精密称定，置烧瓶中，加二氯甲烷80ml，回流提取4小时，提取液回收二氯甲烷并浓缩至干，残渣用无水乙醇溶解并转移至100ml量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液。吸取上述对照品溶液与供试品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，即得；本品按干燥品计算，含鬼臼毒素(C₂₂H₂₂O₈)不得少于2.0％。

上述本发明药物组合物制成乳剂的质量控制方法包括下述含量测定和/或鉴别方法中的一种或几种：

含量测定：照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI D)测定；

色谱条件与系统适用性试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以60～65∶40～35的甲醇-水为流动相；检测波长为292nm；理论板数按鬼臼毒素峰计算应不低于2000，主峰与相邻杂质峰的分离度应符合要求。

测定法：取乳剂约10g，精密称重，置于100ml的锥形瓶中，加0.1ml盐酸轻摇，加入约50ml流动相，超声20分钟(超声时上下摇动2次)，溶解后冰浴30分钟，立即减压过滤，用流动相少量多次洗涤沉淀及滤瓶，将洗涤液及滤液合并置烧杯中，放至室温，用1mol/L的氢氧化钠调pH值3.0～5.0，将此滤液转移至100ml量瓶中，流动相加至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另取鬼臼毒素对照品适量，用流动相配制成每1ml中约含0.15mg的溶液，作为对照品溶液；精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算含量，即得。

鉴别：A.桃儿七的鉴别：称取鬼臼毒素对照品适量，加上述含量测定项下的流动相制成每1ml中含0.15mg的溶液，作为对照品溶液；取装量差异项下的样品适量(约相当于鬼臼毒素15mg)，照含量测定项下的色谱条件及方法进行实验，记录色谱图，对照品溶液及供试品溶液主峰保留时间应-致。

B.大黄的鉴别：色谱条件与系统适用性试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，75～85∶25～15的甲醇-0.1％磷酸溶液为流动相；检测波长为440nm；理论板数按大黄素峰计算应不低于1500。称取乳剂10g，置小烧杯中，加入适量无水乙醇，超声破乳后，置冰箱中冷却20分钟，过滤，滤液水浴蒸干，残渣加2ml无水乙醇溶解后，过滤，滤液加到3ml的流动相中，置冰箱中冷却20分钟后用0.45μm的滤膜过滤至澄清，作为供试品溶液；另取大黄素对照品，用流动相制备成每1ml中约含2μg的溶液，作为对照品溶液；取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，对照品溶液及供试品溶液主峰保留时间应一致。

C.苦参的鉴别：称取乳剂样品约5g，加无水乙醇约10ml超声破乳后，于4℃冷却20分钟，过滤，滤液水浴蒸干，残渣加5ml水溶解后，加入1滴氨水，轻轻振摇，转移至分液漏斗中，用氯仿萃取3次，每次10ml，合并萃取液，转移至蒸发皿中，水浴挥干，用约5ml无水乙醇溶解，过滤，作为供试品溶液；另取氧化苦参碱对照品，用无水乙醇制备成每1ml中约含5μg的溶液，作为对照品溶液；同法按处方比例制备不含苦参的空白溶液一份；照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)测定，分别吸取对照品和供试品溶液及空白溶液各5ul，点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以4～6∶0.6∶0.2的氯仿-甲醇-氨水为展开剂，展开，取出，凉干，喷以碘化铋钾试液显色，样品与对照品应在相同位置出现橘红色斑点，而不含苦参的空白样品应在相同位置未出现斑点。

D.鸦胆子的鉴别：称取乳剂样品约5g，加无水乙醇约10ml，超声破乳，趁热过滤，滤液水浴蒸干，残渣加5ml石油醚溶解后，过滤至澄清，取滤液作为供试品溶液；另取亚油酸对照品，用石油醚制备成每1ml中含约2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)测定，分别吸取对照品和供试品溶液各5ul，点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以80～90∶20～10∶0.1的石油醚-乙酸乙酯-乙酸为展开剂，饱和1小时，上行展开，取出，凉干，置于碘缸中用碘蒸气熏约15分钟，直至出现清晰斑点；样品与对照品在相同位置出现棕色斑点。

E、冰片、桉油的鉴别：称取乳剂样品约5g，加无水乙醇约10ml，超声破乳，于4℃冷却约6-8分钟，过滤至澄清，取滤液作为供试品溶液；另取冰片、桉油精对照品适量，分别加无水乙醇制备成每1ml中约含5μg的溶液，作为对照品溶液；同法按处方比例制备不含冰片、不含桉油的空白溶液各一份；照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)测定，分别吸取对照品和供试品溶液及空白溶液各5ul，点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以9-9.5∶1-0.5的环己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，凉干，喷以新配制的1％香草醛硫酸溶液显色，即可；结果应与冰片对照品相同位置出现紫红色斑点，与桉油精相同位置出现紫褐色斑点。

中医认为尖锐湿疣的发生主要由于房事不洁或间接接触污秽之品，湿热淫毒从外侵入外阴皮肤粘膜，导致肝经郁热，气血不和，湿热毒邪博结而成；而湿毒为阴邪，其性粘滞，缠绵难去，容易耗伤正气，正虚邪恋，以致尖锐湿疣容易复发。生殖器疱疹主要由于素体湿热内蕴，外感淫毒，热毒相结，肝胆湿热下注二阴而成。

本发明药物组合物按照祖国医学对尖锐湿疣和疱疹的发病机理论证，吸取了中医多年来的临床经验，对病症进行辨证施治，以祛湿清热解毒和化瘀散结为主，适当辅以益气扶正，既能抗病毒，又能提高病人的免疫力，祛邪与扶正并举，力求标本兼治，提高治疗质量，避免病情反复发作。

方中桃儿七具有祛风除湿、活血化淤、解毒的功效；其性辛温，有利于湿邪消散；味苦，苦能燥能泄，亦利于湿热毒邪驱除，其为君。现代药理研究表明桃儿七主要成分鬼臼毒素能抑制人乳头状瘤病毒(HPV)感染细胞的有丝分裂，因此引起生殖器疣体坏死、脱落。鸦胆子性寒味苦，入肝经，长于清热燥湿，杀虫解毒，善治各种疔毒，赘疣；《医学衷中参西录》谓其“善利下焦”，故可直达病所，腐蚀赘疣；具辅助和补充君药之清热解毒和腐蚀赘疣之功，是为臣。方以大黄和苦参佐助君臣药清热解毒，燥湿止痒；大黄性寒味苦，入胃、大肠、肝经，功能泻热毒、破积滞、逐瘀血。《日华子本草》谓其宣通一切气，调血脉，利关节，泄壅滞……并敷一切疮疖肿毒；《本草纲目》言其能主诸火疮。苦参苦寒，入肝、肾、大肠和小肠经，能清热燥湿，祛风止痒和杀虫。《滇南本草》谓其凉血、解热毒、疥癞、疮毒，疗皮肤瘙痒，血风癣疮。冰片辛寒而味苦，入肺、肝经，通诸窍，散郁火；《本草纲目》谓：其气先入肺，传于心脾，能走能散，使壅塞通利，则经络调达而疮毒能出；桉油从桉叶而来，芳香而辛凉，治疥癣、湿疹、痈疮肿毒；方以冰片和桉油调和诸药并能泄热毒，散疮肿。诸药合用，共奏清热解毒，利湿抗疣之功效，与主治病证病因病机切合。

本发明组方治疗尖锐湿疣和生殖器疱疹有明显的优势：

1、组方中各味药物的协同作用，可较好的保证其综合疗效，桃儿七及鸦胆子油起主要治疗作用，桉油等可软化皮肤角质，促进药物作用，其他成份有抗感染减轻局部炎症反应。

2、防止复发：尖锐湿疣治疗失败的关键是易复发，本发明组方可以软化疣体及周围皮肤表层，本发明乳剂药物可在皮肤表面存留较长时间，使主药易于进入皮肤较深部位，杀死感染病毒的细胞，可有效防止复发。

3、本组方是纯中药制剂，各味中药协同发挥治疗作用，而不完全依赖鬼臼毒素，因而制剂中鬼臼毒素的浓度较低，对局部的刺激损伤较小，给患者带来的痛苦小，有可能提高治疗的依从性，提高疗效。

本组方中中药材来源广泛，易于获取，制造工艺不复杂，质量易于控制，产品质量稳定，生产成本较低，易于生产、运输，使用方便。

桃儿七为方中君药，药材中的主要药效成分鬼臼毒素为治疗人尖锐湿疣的首选药物。由于77版药典收载的桃儿七药材标准较为简单，难以控制药材质量，因此，对桃儿七药材中的鬼臼毒素含量重新进行测定，制定出药材的内控标准，从控制原料的质量开始来确保成品质量。

实验例1：稀露液(本发明乳剂)治疗尖锐湿疣的临床观察

1.临床资料：尖锐湿疣患者共48例，男性31例，女性17例。年龄最大65岁，最小16岁。男性多发于龟头及冠状沟，女性多发于阴唇。所有病例都经病理活检证实为尖锐湿疣。疣体(单发或多发)大于5MM，均先行激光灼烧或电切治疗。然后随机分成2组，分别用稀露液(本发明乳剂，下同)及氟脲嘧啶外用治疗。

                   表1  病例分组

组别	疣体大于5MM(例)	疣体小于5MM(例)	总计
				12	1714	89	252348

2.材料与方法：第1组选用稀露液涂于疣体或灼烧后创面，5次/日，10天。第2组用15％氟脲嘧啶液涂于疣体或灼烧后创面，4次/日，10天。每一组病人疣体大于5MM，均先行激光或电切治疗。疗效评价分以下4级：

1)痊愈：疣体完全消失，创面愈合好，表面皮肤或粘膜恢复正常。

2)显效：疣体基本消失，创面愈合欠佳。

3)进步：疣体缩小。

4)无效：用药后疣体无变化。

痊愈+显效作临床有效计算，进步+无效作无效计算。

3.结果：见表2

                   表2  稀露液组(1)与氟脲嘧啶组(2)临床疗效比较

组别		痊愈	显效	进步	无效	治愈率	总有效率
								第1组	疣＞5mm(8)	7	1	0	0	84％	96％
疣＜5mm(17)	15	1	0	1
					第2组	疣＞5mm(14)	5		1	2	6	35.7％	38.6％
疣＜5mm(9)	2	1	1	5

P＜0.05

对观察结果进行统计学处理，Ridit检验，P＜0.05。稀露液治疗组疗效显著高于氟脲嘧啶治疗组。对氟脲嘧啶治疗组无效患者，再用稀露液治疗，效果良好，全部治愈。稀露液治疗组用药后无全身不适等反应，局部无溃烂、大量渗出等局部反应。稀露液治疗组随访3-6个月，仅1例复发。

4.结论：稀露液治疗尖锐湿疣具有显著的疗效。治疗过程中患者的局部腐蚀、创面溃烂、渗出未曾出现。再加上其特有的抗菌、杀菌、杀病毒作用，更未出现细菌感染。在治疗过程中发现，对于较大的尖锐湿疣，如果先用激光灼烧，再外用稀露液，效果更佳，而且可缩短治疗时间。由此可见，稀露液治疗尖锐湿疣可成为首选。

实验例2：桃儿七的含量测定

按本发明技术方案所述桃儿七药材的含量测定方法，对不同进货时间的三批桃儿七药材进行测定，结果如下：

                表3  桃儿七的含量测定

批号	020111	020112	020113
				含量(％)	2.94	2.53	3.12

根据以上结果，确定桃儿七药材中按干燥品计算，含鬼臼毒素(C22H22O8)不得少于2.0％。

实验例3：桃儿七提取工艺研究

1.桃儿七提取条件考察

桃儿七主要有效成分是鬼臼毒素，不溶于水，溶于乙醇，二氯甲烷，三氯甲烷。采用二氯甲烷回流提取时，鬼臼毒素提取率最高，又因为其用量少，作用强，与全方共同提取时有效成分损失较多，提取率低，故采用二氯甲烷单独提取。

桃儿七用回流法进行提取，溶媒用量经过初步的4、6、8、10、12、14倍量进行提取研究可知，4倍量提取率低，而10、12、14倍量提取率几乎无差别，所以我们选择6、8、10倍量进行考察，即以二氯甲烷的用量、提取时间、提取次数为考察因素进行L9(3⁴)正交试验，并以出膏量及鬼臼毒素含量为评价指标(出膏量及鬼臼毒素含量权重系数分别为0.5，0.5)筛选最佳工艺条件。

(1)实验方法：称取桃儿七粗粉50g，采用回流法提取，合并提取液，过滤，滤液浓缩至干，即得固体粉末。固体粉末用无水乙醇溶解，将其转移至50ml量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀(每1ml含1g的桃儿七药材)，得到供试品溶液。

(2)出膏量：精密吸取供试品溶液10ml，置于干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，于105℃干燥至恒重，置于干燥器中放至室温，称定重量，计算，即得。

(3)鬼臼毒素的测定：参照鬼臼毒素(国家药品标准《WS1-(X-043)-2002Z》)含量测定项下方法进行。试验结果见表4、5、6。

             表4  桃儿七正交试验因素水平表

水平	因素
				二氯甲烷用量(A)	提取时间(B)	提取次数(C)
	123	6倍量8倍量10倍量	1h2h3h				1次2次3次

                         表5  桃儿七回流提取正交试验

	列号				评价指标		综合评分
									A	B	C	D(空白)	出膏量(％)	鬼臼毒素(％)
1	1	1	1	1	4.063	2.24	79.41
								2	2	2	2	1	4.420	2.40	85.72
3	3	3	3	1	5.252	2.75	100.00
								4	1	2	3	2	4.322	2.32	83.32
5	2	3	1	2	4.775	2.21	85.64
								6	3	1	2	2	4.500	2.49	88.11
7	1	3	2	3	4.588	2.43	87.86
								8	2	1	3	3	4.435	2.42	86.22
9	3	2	1	3	4.665	2.36	87.32
								I	250.59	253.74	252.37	265.13
II	257.58	256.36	261.69	257.07
								III	275.43	273.50	269.54	261.40
R	8.1	6.6	5.7	2.69

注：桃儿七正交试验评价指标，采用综合评分进行数据分析，出膏量，鬼臼毒素权重系数分别为0.5、0.5。

出膏量评分＝出膏量/最大出膏量×0.5×100

鬼臼毒素评分＝鬼臼毒素/最大鬼臼毒素×0.5×100

综合评分＝出膏量评分+鬼臼毒素评分

正交试验结果显示，A3B3C3为最佳方案，据此条件验证三批，结果见表6。

              表6  桃儿七正交试验验证结果

序号	出膏量(％)	鬼臼毒素含量(％)
			123平均	4.935.034.904.95	2.512.702.582.60

可见，验证试验结果与正交试验结果一致。根据以上实验结果，确定桃儿七的回流提取工艺条件为10倍量二氯甲烷，提取3次，每次3小时。

2.桃儿七提取物中残留溶剂的去除及检查

桃儿七采用二氯甲烷提取，得到的固体粉末中经检测有二氯甲烷的残留，所以将得到的固体粉末，采用40℃真空(-0.1MP)干燥4小时的方法处理，并对二氯甲烷的残留量进行检查。结果表明三批样品中二氯甲烷的残留量均在标准规定范围内，符合规定，因此采用此法可以将固体粉末中二氯甲烷的残留量控制到标准要求的范围内。

结论：根据上述试验结果，确定出桃儿七的最佳提取工艺为采用10倍量二氯甲烷，提取3次，每次3小时，合并提取液，过滤，回收，得到固体粉末，将固体粉末40℃真空(-0.1MP)干燥4小时，即得。

实验例4：鸦胆子提取工艺研究

1.鸦胆子提取条件考察

因鸦胆子主要成分为鸦胆子油，为一种脂肪油。故不能与方中其他用水提或醇提药物共同提取，本发明采用石油醚回流提取。

(1)提取方法：称取鸦胆子50g，去种皮，取种仁，以出油率为指标，用石油醚为溶剂回流提取，按正交L9(3⁴)表进行试验，合并提取液，过滤，滤液减压回收石油醚，即得鸦胆子油。

(2)出油率测定：将上述得到的鸦胆子油，用石油醚溶解，转移至50ml量瓶中，用石油醚稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液(每1ml含1g鸦胆子药材)。精密吸取30ml供试品溶液，置于干燥到恒重的蒸发皿中，水浴挥发2小时后，置于干燥器中，放置30min，称定重量，计算。结果见表7、8、9。

                   表7  鸦胆子正交试验因素水平表

水平	因素
				石油醚用量(A)	提取时间(B)	提取次数(C)
	123	6倍8倍10倍	1小时2小时3小时				1次2次3次

                            表8  鸦胆子回流正交试验表

试验号	列号				评价指标
						A	B	C	D(空白)	出油率(％)
	1	1	1	1	1						9.24
2						2	2	2	1	9.64
	3	3	3	3	1						10.40
4						1	2	3	2	9.32
	5	2	3	1	2						10.02
6						3	1	2	2	11.10
	7	1	3	2	3						12.35
8						2	1	3	3	11.00
	9	3	2	1	3						9.21
I						30.91	31.34	28.47	29.28
	II	30.66	28.17	33.09	30.44
III						30.71	32.77	30.72	32.56
	R	0.08	1.53	1.54	1.09

正交试验结果显示，A1B3C2为最佳方案，据此条件，验证三批，结果见下表。

                       表9  鸦胆子正交试验结果

序号	1	2	3	平均
					出油率(％)	12.11	11.99	12.20	12.10

可见，验证试验结果与正交试验结果相接近，因此根据以上实验结果确定鸦胆子的提取条件为：6倍量石油醚，回流提取2次，每次3小时。

2.鸦胆子油中残留溶剂的检查

鸦胆子采用石油醚提取，经减压回收石油醚后得到鸦胆子油，并对鸦胆子油中石油醚的残留量进行检查，结果表明三批样品中石油醚的残留量均在标准规定范围内，符合规定。

3.鸦胆子油的精制

按上述方法提取出的鸦胆子油，色深，浑浊，需要进一步精制，采用加1％活性炭100℃搅拌15分钟，趁热过滤除炭，滤液即为鸦胆子油精品。

结论：根据上述试验结果，确定出鸦胆子的最佳提取工艺为采用6倍量石油醚，提取2次，每次3小时，合并提取液，过滤，减压回收溶剂至无石油醚味，得到鸦胆子油，将鸦胆子油用1％活性炭100℃搅拌15分钟，趁热过滤除炭，滤液即为鸦胆子油精品。

实验例5：大黄、苦参提取条件考察

大黄所含抗菌抗病毒成分为蒽醌类，用一定浓度的乙醇(或呈酸性的乙醇)提取，效果较好，可得到总蒽醌类，而苦参中所含有的有效成分群为总生物碱类，可用酸水渗漉提取或用一定浓度的乙醇回流提取，为比较两味药用不同的溶剂、不同的提取方法及合并提取与分别提取有效成分的差异，我们进行以下实验研究。

1.单独提取

(1)实验方法：分别称取大黄粗粉、苦参粗粉各40g，分别用(1)10倍量70％乙醇回流提取2次，每次2小时；(2)10倍量70％乙醇(加酸)回流提取2次，每次2小时；(3)0.1％HCL渗漉至渗漉液无色；(4)65％乙醇渗漉至无色。将各法的提取液分别合并，过滤，浓缩至一定体积，分别以大黄素、苦参碱为指标来考察各提取方法。结果见表10。

(2)大黄素含量测定：参照中国药典2000年版一部P18大黄含量测定项下的高效液相色谱法进行测定。

(3)苦参碱含量测定：照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部)测定。

流动相的选择：通过对几个流动相的摸索，确定采用以下的色谱条件对本品的分离度较好，重现性强，具体如下：

色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-0.2％磷酸溶液(90∶10)为流动相；检测波长为205nm。理论板数按苦参碱峰计算应不低于1500。

测定法精密吸取样品液5ml，置小烧杯中，加入1滴氨水，超声2分钟，转移至分液漏斗中，用三氯甲烷萃取3次，每次10ml，合并萃取液，转移至蒸发皿中，水浴挥干，残渣用无水乙醇溶解，转移至10ml量瓶中，作为供试品溶液；另取苦参碱对照品，用无水乙醇制备成每1ml中约含0.1mg的溶液，作为对照品溶液。取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，即得。

                           表10  大黄、苦参单独提取结果

方法		70％乙醇回流	70％乙醇(加酸)回流	0.1％Hcl渗漉	65％n乙醇渗漉
						含量	大黄素	0.174％	0.164％	0.084％	0.132％
苦参碱	0.054％	0.023％	0.022％	0.011％

结果：单独提取时，以70％乙醇回流提取方法提取的苦参碱、大黄素的含量最高。

2.合并提取

(1)实验方法：分别称取大黄粗粉，苦参粗粉各40g，合并后，分别用①10倍量70％乙醇回流提取2次，每次2小时；②10倍量70％乙醇加酸回流提取2次，每次2小时；③0.1％HCL渗漉至渗漉液接近无色；④65％乙醇渗漉至渗漉液无色。将各法的提取液分别合并，过滤，浓缩至一定体积，分别以大黄素、苦参碱为指标来考察各提取方法。结果见表11。

(2)含量测定：大黄素、苦参碱的测定与单独提取时测定方法相同。

                             表11  大黄、苦参合并提取结果

方法		70％乙醇回流	70％乙醇(加酸)回流	0.1％Hcl渗漉	65％n乙醇渗漉
						含量	大黄素	0.187	0.143	0.087	0.130
苦参碱	0.057	0.013	0.053	0.010

结果：合并提取时，用70％乙醇回流，大黄素、苦参碱的含量最高，同单独提取相比较，大黄素、苦参碱的含量没有明显差别，所以从节约成本及简化工艺考虑，我们选择用乙醇回流法将大黄、苦参合并提取，并采用正交试验来对合并提取工艺进行考察。

3.大黄、苦参正交试验

(1)采用L9(3⁴)正交表，以大黄素、苦参碱含量为考察指标，对乙醇浓度、用量、回流时间进行考察，进一步筛选最佳提取工艺。

实验方法：称取大黄粗粉、苦参粗粉各30g，按L9(3⁴)正交表进行实验，提取2次，合并提取液，过滤，滤液浓缩定容至50ml(每1ml含0.6g大黄、0.6g苦参)

大黄素的测定：与单独提取时测定方法相同

苦参碱的测定：与单独提取时测定方法相同

结果见表12、13。

       表12  大黄苦参正交试验因素水平表

水平	因素
				乙醇浓度(A)	乙醇用量(B)	回流时间(C)
	123	60％70％85％	81012				123

                              表13  大黄、苦参正交试验表

试验号	列号				评价指标(％)		综合评分
								A	B	C	D(空白)	大黄素	苦参碱
	1	1	1	1	1	0.096	0.035								50.60
2								2	2	2	1	0.180	0.073	100.00
	3	3	3	3	1	0.129	0.047								68.05
4								1	2	3	2	0.145	0.061	82.10
	5	2	3	1	2	0.109	0.039								56.75
6								3	1	2	2	0.112	0.040	58.50
	7	1	3	2	3	0.170	0.068								93.80
8								2	1	3	3	0.154	0.062	85.25
	9	3	2	1	3	0.127	0.046								66.75
I								226.5	194.35	174.1	218.65
	II	242.0	248.85	252.3	197.35
III								193.0	218.6	235.4	245.8
	R	16.23	18.17	26.07	16.15

注：大黄、苦参醇提的2个评价指标，采用综合评分进行数据分析，大黄素、苦参碱权重系数分别为0.5、0.5。

大黄素评分＝大黄素量/最大大黄素量×0.5×100

苦参碱评分＝苦参碱量/最大苦参碱量×0.5×100

综合评分＝苦参碱评分+大黄素评分

正交试验结果显示，提取2次时，A2B2C2为最佳方案，即：采用10倍量的70％乙醇，每次提取2小时，所以还需对提取次数作考察。

(2)大黄、苦参提取次数的考察

实验方法：称取大黄粗粉、苦参粗粉各100g，按上述最佳方案进行实验，提取4次，将每次的提取液过滤后，分别浓缩至相同体积，取每次提取液的浓缩液50ml，经处理后，按上述方法测定大黄素、苦参碱的含量，计算每次的提取率。结果见表14。

                         表14  提取次数考察结果

指标	第1次提取率(％)	第2次提取率(％)	第3次提取率(％)	第4次提取率(％)
					按大黄素计	64.9	20.8	9.6	6.7
按苦参碱计	52.8	30.2	11.5	5.6

结论：提取3次的提取率平均已经达到93.9％，而第4次的提取率仅为5.6～6.7％，所以从节约成本考虑，选择提取3次。

所以大黄、苦参的最佳提取工艺为合并回流提取，用10倍量的70％乙醇，提取3次，每次提取2小时，据此条件验证三批，结果见表15。

        表15  大黄、苦参正交试验验证结果

序号	大黄素(％)	苦参碱(％)
			1	0.161	0.069
2	0.166	0.063
			3	0.168	0.066
平均	0.165	0.066

结论：验证结果与正交试验结果一致，根据以上实验结果，确定大黄、苦参提取的工艺条件为10倍量70％乙醇回流提取3次，每次2小时。

4.除杂质的研究

大黄、苦参用醇提取时，提取出了方中药物的有效成分，同时也将一些糖类、蛋白质、鞣质、果胶等无效大分子物质提取出来，这些成分若不除去，放置过程中会沉淀出来，就会影响制剂的稳定性，致使乳剂分层，所以必须除去这些杂质。醇提液的精制方法有水沉法、超滤法、离心法等。因为水沉法会造成有效成分损失较多，而超滤法速度慢，难于适合大生产，因此我们采用高速离心法对浓缩至不同浓度的提取液进行精制。并对提取液精制前后的外观情况、有效成分进行考察。

实验方法：取大黄粗粉、苦参粗粉各100g，用10倍量70％乙醇回流提取3次，每次2小时，合并提取液、过滤，滤液均分为3份，分别浓缩到不同浓度(1∶6，1∶5，1∶3)，置于冰箱内，冷藏24小时后，用高速离心机离心30分钟，转数5000转，倾出上清液，于室温下放置2日，观察外观，并测定精制液中大黄素、苦参碱的含量。结果见表16。

              表16  精制液中大黄素、苦参碱的含量

样品		1∶6	1∶5	1∶3
					外观		澄清透明	澄清透明	略有浑浊
含量(％)	大黄素	0.157	0.155	0.156
					苦参碱	0.060	0.058	0.057

结论：由上述试验可知，将提取液浓缩至生药/体积＝1∶6的浓度，常温离心30分钟，转数为5000r/min，即可得到澄清的药液。并且大黄素、苦参碱的含量没有变化。

实验例6：乳剂处方筛选

若使制备出的乳剂具有良好的稳定性，应根据油相所含主要成分的化学结构式及性质，选择HLB值合适的乳化剂，鸦胆子油为方中臣药，主要成分为亚油酸，分子式为C₁₈H₃₂O₂。桉油的分子式为C₁₀H₈O，做成水包油型乳剂，所需的HLB值约为13-16，所以应选择HLB值在此范围内的乳化剂。通过以上的分析，以及初步的处方摸索，我们设计处方如下，并以乳剂的外观，分层现象，油水分离、含量为指标进行评价。

1.以吐温-80与司盘-80作乳化剂进行的处方筛选：

(1)处方及工艺

                                表17  处方设计1

处方标号	处方1	处方2	处方3	处方4	处方5
						桃儿七提取物	0.278g	0.277g	0.278g	0.277g	0.276
鸦胆子油	7.01g	7.02g	7.01g	7.01g	7.00g
						中药液	60ml	60ml	60ml	60ml	60ml
桉油	4.01g	4.02g	4.00g	4.02g	4.00g
						冰片	1.00g	1.02g	1.01g	1.02g	1.00g
吐温-80	0.14g	0.36g	0.62g	1.00g	1.26g
						司盘-80	2.00g	1.04g	0.78g	0.40g	0.14g
蒸馏水加至	100ml	100ml	100ml	100ml	100ml

工艺：

①桃儿七提取物过100目筛后备用，将冰片过80目筛后备用。

②取处方量的吐温-80与司盘-80搅拌混合使成透明溶液。

③称取处方量的鸦胆子油、桉油、冰片、乳化剂置于研钵中，缓慢加入提取的大黄和苦参中药液，边加边研磨约2分钟。

④称取处方量的桃儿七提取物分散至其中，研磨2分钟后加入蒸馏水稀释至100ml。

(2)处方评价

以物理外观、分层现象、油水分离为指标对处方进行评价。各指标的评价方法如下：

①物理外观：目测手感，要求色泽均匀一致，质地细腻无粗糙感觉，易涂布。结果见表18。

②分层现象：在室温状态下，以离心法进行测定。方法为将乳剂置于带刻度的离心管中，在转速4000r/min下离心15分钟，不应有分层现象。结果见表18。

③油水分离：分别于恒温55℃放置6小时与-15℃放置24小时，应无油水分离。结果见表18。

                            表18  处方筛选结果如下：

样品	处方1	处方2	处方3	处方4	处方5
						物理外观	均匀细腻易于涂布	均匀细腻易于涂布	均匀细腻	均匀细腻	均匀细腻，粘稠不易涂布
分层现象	分层	分层	分层	不分	不分
						油水分离	分离	分离	分离	分离	分离

结果表明：吐温-80，司盘-80以不同比例混合制成的乳化剂，不能将本品乳化成均一稳定的体系，放置过程中均出现油水分离现象，在实验过程中，曾尝试加入少量十六醇、十八醇，卡波普等辅助乳化剂来改善油水分离现象，但效果不好，所以需进一步筛选合适的乳化系统。

2.以单硬脂酸甘油酯、十二烷基硫酸钠为乳化剂进行的处方筛选：

根据吐温-80，司盘-80作乳化剂制备的乳剂出现的结果可知，HLB值较大时，油相易分离出来，HLB值较小时，水易从乳剂中分离出。所以我们考虑选用HLB值较低的单硬脂酸甘油酯及HLB值较高的十二烷基硫酸钠以不同比例配比作乳化剂进行处方筛选，同时加入维生素E作为抗氧剂及山梨酸作为防腐剂以增加乳剂的稳定性，根据不同处方对家兔、豚鼠皮肤刺激性，及小鼠阴道刺激的实验结果，来调整处方中不同成份的用量，以筛选出最终的处方。

(1)处方工艺

                                       表19  处方设计2

处方标号	处方6-1	处方6-2	处方6-3	处方7	处方8	处方9	处方10
								桃儿七提取物	0.556g	0.557g	0.557g	0.555g	0.556g	0.557g	0.556g
鸦胆子油	14.01g	14.02g	14.01g	14.00g	14.01g	14.00g	14.01g
								中药液	120ml	120ml	120ml	120ml	120ml	120ml	120ml
桉油	4.01g	4.02g	4.01g	3.01g	2.00g	2.50g	2.00g
								冰片	2.00g	2.01g	2.00g	2.01g	2.01g	2.01g	2.00g
维生素E	-	-	1.20g	1.21g	1.20g	1.20g	1.21g
								山梨酸	0.20g	0.21g	0.20g	0.20g	0.21g	0.20g	0.20g
十二烷基硫酸钠	1.60g	2.00g	2.01g	2.40g	2.41g	2.40g	2.40g
								单硬脂酸甘油酯	4.80g	6.01g	8.01g	9.01g	10.40g	12.00g	14.00g
蒸馏水加至	200ml	200ml	200ml	200ml	200ml	200ml	200ml

工艺：

①桃儿七提取物过100目筛后备用，将冰片过80目筛后备用。

②按处方量称取鸦胆子油、单硬脂酸甘油酯、维生素E、冰片置于250ml烧杯中，60-70℃水浴加热溶解，作为油相。

③称取处方量的山梨酸、十二烷基硫酸钠置于中药液中，60-70℃水浴加热，作为水相。

④将处方量的桉油及桃儿七提取物置于油相中，搅拌均匀后，将水相缓慢加入到油相中，边加边搅拌至乳化均匀，冷至室温，将其分装于8ml的塑料瓶中，即得。

(2)处方评价：物理外观、分层现象、油水分离评价方法同前，结果见表20。

④含量：用HPLC法测定乳剂中鬼臼毒素的含量。结果见表20。

⑤刺激性试验：家兔、豚鼠皮肤刺激性试验，及小鼠阴道刺激性试验，结果见表20。

                                     表20  处方评价结果

项目	处方6-1	处方6-2	处方6-3	处方7	处方8	处方9	处方10
								物理外观	不均匀	不均匀	均匀	均匀	均匀细腻	均匀细腻	均匀细腻
分层现象	分层	分层	不分层	不分层	不分层	不分层	不分层
								油水分离	分离	下层出水	出油出水	不分离	不分离	不分离	不分离
含量	-	-	-	1.41mg/g	1.43mg/g	1.42mg/g	-
								刺激性试验	-	-	-	刺激	没有刺激	刺激	-

结果表明：处方6-1，6-2，6-3不均匀，乳滴较大，出现分层及油水分离现象，处方6-1，6-3较稀。处方7外观均匀，但不如处方8、9、10均匀细腻，且处方7、8、9流动性好，易于涂布均匀，但处方7、处方9的刺激性大。处方10过于粘稠，流动性不好，不易涂布。综合分析各方面质量的情况，最终选定处方8。

实验例7：小试样品研究

(一)小试样品的制备：按实验例6的研究结果，确定出如下的本品处方，制备出500ml的小试样品。

1.处方、工艺：

            表21  处方

原辅料	投料量
		桃儿七	33.1g
鸦胆子	287.0g
		大黄	50.0g
苦参	50.0g
		桉油	5.0g
冰片	5.0g
		维生素E	2.0g
山梨酸	0.5g
		十二烷基硫酸钠	6.0g
单硬脂酸甘油酯	26.0g
		蒸馏水	加至500ml

工艺：同实验例6.2.(1)项下。

2.处方、工艺评价：对小试样品的外观、分层、油水分离等进行检查，结果见表22。

                        表22  小试样品的处方、工艺评价结果

项目	外观	均匀性	分层现象	含量(mg/g)
					结果	黄色乳液	均匀、易于涂布	不分	1.50mg/g

(二)小试样品稳定性影响因素实验

取小试样品，分别进行高温、光照试验，考察各种因素对样品的影响，为选择适宜的包装材料及方式提供依据。

1.高温试验

将小试样品置于具塞大试管中，密封，于60℃及40℃恒温干燥箱中放置，分别于5、10天取样，按照乳剂稳定性实验重点考察项目检测。

2.光照试验

将小试样品置于具塞大试管中，密封，于4500Lx照度的光照柜中放置，分别在5、10天取样，按照乳剂稳定性实验重点考察项目检测。

3.影响因素实验考察项目

分别在第5天、第10天取样对乳剂的性状、均匀性、分层现象、含量等方面进行考察。

4.影响因素实验考察结果，考察结果见表23～25。

               表23  小试样品影响因素(高温60℃)考察结果

时间(天)	外观	均匀性	分层现象	含量(mg/g)
					0	黄色乳剂	均匀	不分层	1.50
5	黄色乳剂	均匀	分层	1.48
					10	黄色乳剂	均匀	分层	1.43

结果表明：高温60℃条件下10天后，样品出现分层现象，含量略有下降，说明本品对热较不稳定。

           表24  小试样品影响因素(高温40℃)考察结果

时间(天)	外观	均匀性	分层现象	含量(mg/g)
					0	黄色乳剂	均匀	不分层	1.50
5	黄色乳剂	均匀	不分层	1.49
					10	黄色乳剂	均匀	不分层	1.48

结果表明：高温40℃条件下10天后，样品性状、均匀性、分层现象、含量无明显变化，说明本品在此条件下比较稳定。

                表25  小试样品影响因素(光照)考察结果

时间(天)	外观	均匀性	分层现象	含量(mg/g)
					0	黄色乳剂	均匀	不分层	1.50
5	黄色乳剂	均匀	不分层	1.48
					10	黄色(稍深)乳剂	均匀	不分层	1.46

结果表明：光照(4500±500LX)10天后，小试样品的均匀性、分层现象无明显变化，但外观稍有变黄，含量有所降低，这与本品所含成分的复杂有关，说明本品需避光保存。

5.影响因素实验考察结论

根据影响因素实验考察结果，可知本品在各种条件下，均匀性均无明显变化；光照条件下乳剂表层变黄、变稠，含量略有下降，说明本品对光不稳定；在60℃高温条件下出现分层现象，含量降低，而在40℃条件下各项指标无明显变化。说明本品对高热不稳定。

因此，本品须贮存于室温、避光的环境中。

6.处方确定

根据处方筛选和影响因素的实验结果，表明此处方、工艺可以达到2000年版中国药典二部附录制剂通则IO项下乳剂的有关规定。证明处方、工艺可行。

实验例8：中试样品的制备

按上述实验例7确定的处方、工艺进行中试放大，每批制备10000ml。

1.处方

                       表26  乳剂放大处方(单位g)

主、辅料	处方	20031201	20031205	20031212
					桃儿七	65g	651.8g	652.1g	652.4g
鸦胆子	574g	5.75kg	5.74kg	5.76kg
					大黄	100g	1000.0g	1000.2g	1000.4g
苦参	100g	1002.4g	1002.6g	1000.8g
					桉油	10g	100.2g	100.3g	100.4g
冰片	10g	100.1g	100.0g	100.2g
					维生素E	4g	40.0g	40.1g	40.1g
山梨酸	1g	10.0g	10.1g	10.0g
					十二烷基硫酸钠	12g	120.1g	120.0g	120.1g
单硬脂酸甘油酯	52g	520.2g	520.3g	520.0g
					加蒸馏水制成	1000ml	10000ml	10000ml	10000ml

工艺：(1).桃儿七用10倍量二氯甲烷，回流提取3次，每次3小时，合并提取液，过滤，滤液回收二氯甲烷，得到固体粉末，将固体粉末40℃真空(-0.1MP)干燥4小时后，过100目筛备用。将冰片过80目筛后备用。

(2).鸦胆子用6倍量石油醚，回流提取2次，每次3小时，合并提取液，过滤，滤液回收石油醚，得到的鸦胆子油，用1％的活性炭精制，即得鸦胆子油精品。

(3).大黄、苦参用10倍量的70％的乙醇回流提取3次，每次2小时，合并提取液，过滤，滤液回收乙醇，浓缩到相对密度为1.016(药材∶体积＝1∶6)，离心除沉淀，得到精制液。

(4).按处方量取上述鸦胆子油、单硬脂酸甘油酯、维生素E、冰片置于容器中，水浴加热至60-70℃，搅拌溶解，再将处方量的桉油及上述桃儿七提取物置于油相中，搅拌均匀后，作为油相；称取处方量的山梨酸、十二烷基硫酸钠置于中药液中，水浴加热至60-70℃，搅拌溶解，作为水相；将水相缓慢加入到油相中，边加边搅拌至乳化均匀，冷至室温，将其分装于8ml的聚乙烯塑料瓶中，即得。

2.三批样品的评价

三批样品的评价结果见表27。

                      表27  三批中试样品的检验结果

批号	收率(％)	外观性状	分层检查	含量(mg/g)
					200312012003120520031212	94.7％95.4％96.2％	黄色乳剂、气香黄色乳剂、气香黄色乳剂、气香	不分层不分层不分层	1.50mg/g1.49mg/g1.48mg/g

实验例9：本发明乳剂桃儿七的鉴别

原理：桃儿七的主要成分为鬼臼毒素，鬼臼毒素有紫外吸收，故可采用含量测定项下的高效液相色谱法，将样品主峰与对照品主峰的保留时间进行对比的方式进行鉴别。

方法：称取鬼臼毒素对照品适量，加流动相制成每1ml中含0.15mg的溶液，作为对照品溶液。取装量差异项下的样品适量(约相当于鬼臼毒素15mg)，照含量测定项下的色谱条件及方法进行实验，记录色谱图。以不加桃儿七制成的乳剂为空白对照样品同法进行试验。结果见表28。

                            表28  桃儿七的HPLC法鉴别结果

样品批号	对照品	20031201	20031206	20031212	空白对照
						保留时间	9.22min	9.14min	9.13min	9.17min	-

测定结果：对照品溶液及供试品溶液主峰保留时间基本一致，而空白对照无干扰。证明HPLC法可以作为本品的鉴别方法。

实验例10：本发明乳剂大黄的鉴别

液相色谱法具有专属性强，可靠性高的特点。因此本品中的大黄采用液相色谱法鉴别。参照中国药典2000年版一部P18大黄含量测定项下的高效液相色谱法进行测定。经过几个液相色谱条件的摸索，确定出采用以下色谱条件来鉴别本品中的大黄。

色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-0.1％磷酸溶液(80∶20)为流动相；检测波长为440nm。理论板数按大黄素峰计算应不低于1500。

测定法称取乳剂10g，置小烧杯中，加入适量无水乙醇，超声破乳后，置冰箱中冷却20分钟，过滤，滤液水浴蒸干，残渣加2ml无水乙醇溶解后，过滤，滤液加到3ml的流动相中，置冰箱中冷却20分钟后用0.45μm的滤膜过滤至澄清，作为供试品溶液；另取大黄素对照品，用流动相制备成每1ml中约含2μg的溶液，作为对照品溶液。取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。以不加大黄制成的乳剂为空白对照样品同法进行试验。结果见表29。

                              表29  大黄的HPLC法鉴别结果

样品批号	对照品	20031201	20031206	20031212	空白对照
						保留时间	11.32min	11.17min	11.18min	11.14min	-

测定结果：对照品溶液及供试品溶液主峰保留时间基本一致，而空白对照无干扰。证明HPLC法可以作为本品的鉴别方法。

实验例11：本发明乳剂苦参的鉴别

采用薄层色谱法对乳剂中的苦参进行鉴别。

方法1：参照中国药典2000年版一部P161苦参含量测定项下的薄层展开条件对本品中的苦参的鉴别进行研究。

试验方法：称取乳剂样品约5g，加无水乙醇约10ml超声破乳后，于4℃冷却20分钟，过滤，滤液水浴蒸干，残渣加5ml水溶解后，加入1滴氨水，轻轻振摇，转移至分液漏斗中，用氯仿萃取3次，每次10ml，合并萃取液，转移至蒸发皿中，水浴挥干，用约5ml无水乙醇溶解，过滤，作为供试品溶液；另取苦参碱对照品，用无水乙醇制备成每1ml中约含5μg的溶液，作为对照品溶液。同法按处方比例制备不含苦参的空白溶液一份。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)测定，分别吸取对照品和供试品溶液及空白溶液各5ul，点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以苯-丙酮-乙酸乙酯-浓氨试液(2∶3∶4∶0.2)为展开剂，展开，取出，凉干，喷以碘化铋钾试液，直到出现斑点。结果样品在与对照品的相同位置出现的斑点模糊，与下面的斑点分不开，重复试验结果仍然不好，所以该方法不能作为本品中苦参的鉴别方法。

方法2：供试品溶液的制备同方法1。另取氧化苦参碱对照品，用无水乙醇制备成每1ml中约含5μg的溶液，作为对照品溶液。同法按处方比例制备不含苦参的空白溶液一份。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)测定，分别吸取对照品和供试品溶液及空白溶液各5ul，点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-氨水(5∶0.6∶0.2)为展开剂，展开，取出，凉干，喷以碘化铋钾试液显色，样品与对照品应在相同位置出现橘红色斑点。

结果：样品与对照品的相同位置出现橘红色斑点，而不含苦参的空白样品在相同位置未出现斑点，对鉴别无干扰。所以该方法可以作为本品中苦参的鉴别方法。

实验例12：本发明乳剂鸦胆子的鉴别

鸦胆子中的脂肪油是主要的药效成分，亚油酸占脂肪油的大部分，因此以亚油酸为对照，用薄层层析法来鉴别本品中的鸦胆子。

方法：称取乳剂样品约5g，加无水乙醇约10ml，超声破乳，趁热过滤，滤液水浴蒸干，残渣加5ml石油醚溶解后，过滤至澄清，取滤液作为供试品溶液。另取亚油酸对照品，用石油醚制备成每1ml中含约2mg的溶液，作为对照品溶液。同法按处方比例制备不含鸦胆子的空白溶液一份。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)测定，分别吸取对照品和供试品溶液及空白溶液各5ul，点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯-乙酸(85∶15∶0.1)为展开剂，饱和1小时，上行展开，取出，凉干，置于碘缸中用碘蒸气熏约15分钟，直至出现清晰斑点。样品与对照品在相同位置出现棕色斑点。

结论：三批样品均显正反应，而空白溶液为负反应，不干扰鉴别。证明此鉴别反应可作为本品中鸦胆子的鉴别试验。

实验例13：本发明乳剂冰片、桉油的鉴别

冰片、桉油的分子结构相似，极性相近，因此我们分别以冰片、桉油精为对照，用同一个薄层层析条件来鉴别本品中的冰片、桉油。

方法：称取乳剂样品约5g，加无水乙醇约10ml，超声破乳，于4℃冷却约6-8分钟，过滤至澄清，取滤液作为供试品溶液。另取冰片、桉油精对照品适量，分别加无水乙醇制备成每1ml中约含5μg的溶液，作为对照品溶液。同法按处方比例制备不含冰片、不含桉油的空白溶液各一份。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)测定，分别吸取对照品和供试品溶液及空白溶液各5ul，点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯(9∶0.5)为展开剂，展开，取出，凉干，喷以新配制的1％香草醛硫酸溶液显色，即可。结果与冰片对照品相同位置出现紫红色斑点，与桉油精相同位置出现紫褐色斑点。

结论：三批样品均显正反应，而空白溶液为负反应，不干扰鉴别。证明此鉴别反应可作为本品中冰片、桉油的鉴别试验。

实验例14：本发明乳剂含量测定的方法学研究：

1.检测波长的选择

方法：取鬼臼毒素对照品适量，用流动相配制成每1ml中约含50μg的溶液作为供试品溶液。照中国药典2000年版一部附录V A分光光度法，测定上述供试品溶液的紫外吸收光谱图。

结果：鬼臼毒素在210nm虽然也有吸收峰，但是由于此处为末端吸收，其它成分易造成干扰，因此不列为特征吸收峰。在291nm处有一特征峰，重现性较好，且与文献报道的最大吸收波长292nm基本一致，因此选择292nm作为本品的检测波长。

2.专属性试验

空白样品溶液：取空白样品约10.0g，照含量测定方法配制溶液，即得。

对照品溶液：称取本品对照品15mg，照含量测定项下的对照品方法配制溶液，即得。

乳剂样品：取本品约10.0g，照含量测定方法配制溶液，即得。

分别取上述溶液各20μl，注入液相色谱仪中，记录色谱图，结果见表30。

                                     表30  系统适用性试验结果

项目	主峰(min)	其它峰	主峰柱效(n)	主峰相临峰的分离度
						前	后
				空白溶剂	无			无	--	--	--
空白样品溶液	无	2.41，2.76，3.01，3.97，4.14，6.29，7.69，9.92，10.61，16.97	--			--	--
				对照品溶液	8.78			6.21	6896	--	--
乳剂样品溶液	8.40	2.53，3.01，3.95，4.13，5.65，6.28，7.30，7.90，10.69，14.27，17.42	6965			1.549	2.526

结果表明：在所选用的色谱条件下，样品的杂质峰与主峰均能完全分离，空白溶剂与去除桃儿七后制成的空白对照样均无干扰，对照品及乳剂样品按鬼臼毒素峰计算的理论板数均大于2000，与相邻峰的分离度大于1.5，符合系统适用性要求。

3.检测限

将检测器灵敏度调至最大，取对照品适量，用流动相稀释成每1ml中含4.48′10-5mg的供试液，精密量取一定量注入液相色谱仪，量取峰高，当进样量为10ml时鬼臼毒素峰高约为基线噪音的三倍，故最低检出限为0.45ng。

4.含量测定时样品处理方法的研究

4.1样品处理方法选择

本品为均一的乳剂，含量测定时为充分提取出有效成分，进行了样品处理方法的研究。即：分别取样品10g，采用以下三种方法进行破乳处理：(1)加无水乙醇约50ml，超声处理后，冰浴40分钟过滤；(2)直接加流动相(63％的甲醇)约50ml超声溶解后，冰浴40分钟过滤；(3)将乳剂加酸(并对加酸的量进行考察)后，再加流动相(63％的甲醇)约50ml超声溶解后，冰浴40分钟过滤。

结果：第一种方法处理后的样品，过滤后，滤液转移到流动相中，又出现浑浊现象，过滤多次，仍混浊，无法进样。第二种方法处理的样品，虽然已经破乳，但仍然很粘稠，难于过滤。第三种方法处理后的样品，易于过滤，滤液澄清，是因为加酸后利于破乳，并使有效成分溶于流动相中，但加酸过多，考虑可能对有效成分的稳定性有影响，所以为选择最小的盐酸用量即可破乳，又对样品稳定性无影响，我们作了以下研究。

4.2对加盐酸的量进行考察

方法：取样品10g，精密称定，分别加入0.1ml、0.13ml、0.16ml的盐酸来处理样品，按含量测定项下的方法来测定含量，结果发现加盐酸的量对本品的稳定性无影响，但考虑到加酸处理后的样品pH较低(约为2.5)，对色谱柱有损害，需要调pH到3.0～5.0，为方便调pH值，所以我们选择加0.1ml的盐酸来进行样品的处理。

由于加盐酸后样品溶液pH值低，对色谱柱的使用寿命影响较大，因此用碱将pH值调节至色谱柱的正常使用范围内。

4.3对照品溶液的配制

由4.2可知，供试品溶液的pH值为3.0～5.0，为减少含量测定的误差，我们将对照品溶液的pH值也调为3.0～5.0之间，同时用不调pH的对照品溶液作对比，结果发现：调pH值的对照品溶液与不调pH的对照品溶液的稳定性无差别，峰面积几乎一致。所以为方便操作，对照品溶液直接用流动相配制，即可。

5.进样精密度试验

称取鬼臼毒素对照品适量，精密称定，加流动相制成每1ml中分别约含150μg的溶液，照含量测定项下的色谱条件测定，连续进样5次，记录色谱图，记录峰面积，计算RSD％。测定结果见表31

                          表31  进样精密度试验结果

次数	1	2	3	4	5	RSD％
							峰面积	2049408	2046165	2050037	2048264	2053049	0.12

结论：本品精密度实验结果符合要求。

6.线性范围试验

取本品对照品约38mg，精密称定，置于50ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密量取3.0、4.0、5.0、6.0、7.0ml，置于25ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试液1、2、3、4、5；吸取上述溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。以样品浓度C(mg/ml)为横坐标，峰面积A为纵坐标，按最小二乘法计算回归方程和相关系数。结果见表32及下图。

                        表32  线性范围试验结果

浓度(mg/ml)	0.09	0.12	0.15	0.18	0.21
						峰面积	1233531	1644170	2030468	2453572	2844653

结论：鬼臼毒素浓度为0.09～0.21mg/ml时线性关系良好。

7.溶液稳定性试验

取乳剂样品，照含量测定项下方法配制溶液，分别在0、2、4、6、8小时进样，记录色谱图。结果见表33。

                             表33  溶液稳定性试验结果

时间(H)	0	2	4	6	8	RSD％
							峰面积	2205212	2245659	2203581	2212844	2171480	1.20
变化率	/	1.83％	-0.07％	0.35％	-1.53％

结论：样品溶液在8小时内峰面积基本稳定，测定误差在±2％以内，故在8小时内测定对结果无影响。

8.加样回收率试验

取对照品约15mg，精密称定，用流动相制成每1ml中约含鬼臼毒素0.15mg的溶液，作为对照品溶液；分别精密称取乳剂样品约5.0g，置100ml锥形瓶中，另取鬼臼毒素对照品约10mg6份，精密称定，置于上述100ml锥形瓶中，轻摇使混合后，以下按含量测定项下方法进行试验，计算回收率。结果见表34。

                          表34  回收率试验结果

供试品中鬼臼毒素的量(mg)	加入量(mg)	测得量(mg)	回收率％	平均回收率	RSD％
						7.48	9.60	17.02	99.4	99.6％	1.10
7.45	10.20	17.55	99.0
				7.30	9.80	17.35	100.2
7.56	9.85	17.44	100.3
				7.49	10.05	17.61	100.7
7.49	10.12	17.38	97.7

结论：本方法回收率试验较好，符合测试要求。

9.重复性试验

方法：照含量测定项下方法平行配制供试品溶液6份，在同一实验室由同一人员，用同一台仪器测定，计算其含量。结果见表35。

                                 表35  重复性试验结果

序号	1	2	3	4	5	6
							含量mg/g	1.48	1.49	1.50	1.47	1.46	1.49

平均含量＝1.49                 RSD(％)＝1.05％

结论：本法重复性试验符合规定。

10.中间精密度试验

方法：照含量测定项下方法配制供试品溶液6份，在不同时间，由不同人员，用不同仪器测定样品含量。结果见表36。

                              表36  中间精密度试验结果

样品号	1	2	3	4	5	6
							含量mg/g	1.47	1.50	1.51	1.49	1.47	1.49

平均含量＝1.49                 RSD(％)＝1.06％

结论：中间精密度试验结果良好，符合测试要求。

11.三批样品含量测定

取三批样品，按上述含量测定方法进行实验，结果见表37。

              表37  三批样品的含量测定结果

批号	20031201	20031205	20031212
				含量mg/g	1.50	1.49	1.48

附图说明：

图1：线性范围试验结果图

实施例1：本发明乳剂

桃儿七65g    鸦胆子574g  大黄100g      苦参100g

桉油10g      冰片10g     维生素E 4g    山梨酸1g

单硬脂酸甘油酯52g    十二烷基硫酸钠12g；

桃儿七用10倍量二氯甲烷，回流提取3次，每次3小时，合并提取液，过滤，滤液回收二氯甲烷，得到固体粉末，将固体粉末40℃真空(-0.1MP)干燥4小时后，过100目筛备用；冰片过80目筛后备用；鸦胆子用6倍量石油醚，回流提取2次，每次3小时，合并提取液，过滤，滤液回收石油醚至无石油醚味，得到鸦胆子油，加1％活性炭于100℃搅拌15分钟，趁热过滤除炭，滤液备用；大黄、苦参用10倍量的70％乙醇回流提取3次，每次2小时，合并提取液，过滤，滤液回收乙醇，浓缩到相对密度为1.016，离心除沉淀，上清液备用。

按处方量取上述鸦胆子油、单硬脂酸甘油酯、维生素E、冰片置于容器中，水浴加热至60-70℃，搅拌溶解，再将处方量的桉油及上述桃儿七提取物置于油相中，搅拌均匀后，作为油相；称取处方量的山梨酸、十二烷基硫酸钠置于中药液中，水浴加热至60-70℃，搅拌溶解，作为水相；将水相缓慢加入到油相中，边加边搅拌至乳化均匀，冷至室温，制成乳剂1000ml。

实施例2：本发明洗剂

称取桃儿七75g、鸦胆子500g、大黄110g、苦参90g；桃儿七用12倍量二氯甲烷，回流提取2次，每次2小时，合并提取液，过滤，滤液回收二氯甲烷，得到固体粉末，将固体粉末40℃真空(-0.1MP)干燥4小时后，过100目筛，得桃儿七提取物，备用；冰片过80目筛，备用；鸦胆子用7倍量石油醚，回流提取3次，每次1小时，合并提取液，过滤，滤液回收石油醚至无石油醚味，得到鸦胆子油，加1％活性炭于100℃搅拌15分钟，趁热过滤除炭，滤液备用，得鸦胆子油精品；大黄、苦参用11倍量的60％乙醇回流提取4次，每次1小时，合并提取液，过滤，滤液回收乙醇，浓缩到相对密度为1.016，离心除沉淀，上清液备用；取桃儿七提取物、鸦胆子油精品、上清液，加入常规辅料或赋形剂，制备成洗剂。

实施例3：本发明凝胶剂

称取桃儿七55g、鸦胆子650g、大黄90g、苦参110g、桉油11g、冰片9g；桃儿七用12倍量二氯甲烷，回流提取2次，每次2小时，合并提取液，过滤，滤液回收二氯甲烷，得到固体粉末，将固体粉末40℃真空(-0.1MP)干燥4小时后，过100目筛，得桃儿七提取物，备用；冰片过80目筛，备用；鸦胆子用7倍量石油醚，回流提取3次，每次1小时，合并提取液，过滤，滤液回收石油醚至无石油醚味，得到鸦胆子油，加1％活性炭于100℃搅拌15分钟，趁热过滤除炭，滤液备用，得鸦胆子油精品；大黄、苦参用11倍量的60％乙醇回流提取4次，每次1小时，合并提取液，过滤，滤液回收乙醇，浓缩到相对密度为1.016，离心除沉淀，上清液备用；取桃儿七提取物、鸦胆子油精品、上清液、桉油、冰片，加入常规辅料或赋形剂，制备成凝胶剂。

实施例4：本发明乳剂(提取物)

取桃儿七提取物2.78g，鸦胆子油70.0g，大黄、苦参中药液600ml，桉油10.0g，冰片10.1g，维生素E 4g，山梨酸1.0g，十二烷基硫酸钠12.0g，单硬脂酸甘油酯52g。桃儿七提取物过100目筛后备用；将冰片过80目筛后备用；按处方量称取鸦胆子油、单硬脂酸甘油酯、维生素E、冰片置于容器中，60-70℃水浴加热溶解，作为油相；称取处方量的山梨酸、十二烷基硫酸钠置于中药液中，60-70℃水浴加热，作为水相；将处方量的桉油及桃儿七提取物置于油相中，搅拌均匀后，将水相缓慢加入到油相中，边加边搅拌至乳化均匀，冷至室温，制成乳剂1000ml。

实施例5：桃儿七的质量控制方法

鉴别：取桃儿七粉末约0.5g，加10ml二氯甲烷超声提取约10分钟，过滤，滤液水浴蒸干，加2ml无水乙醇使溶解，作为供试品溶液；另取鬼臼毒素对照品10mg，加无水乙醇2ml使溶解，作为对照品溶液；取对照品与供试品溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以9∶1的氯仿∶甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％的硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点清晰，则供试品与对照品应在相同位置出现相同斑点。

含量测定：照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI D)测定；

色谱条件与系统适用性试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以63∶37的甲醇∶水为流动相；检测波长为292nm；理论板数按鬼臼毒素峰计应不低于1500，主峰与相邻杂质峰的分离度应符合要求；取经70℃干燥至恒重的鬼臼毒素对照品适量，用上述流动相溶解制成每1ml中约含0.13mg的溶液，即得对照品溶液；取桃儿七粉末(过4号筛)约0.5g[同时另取本品粉末测定水分(中国药典2000年版一部附录IXH第一法)]，精密称定，置烧瓶中，加二氯甲烷80ml，回流提取4小时，提取液回收二氯甲烷并浓缩至干，残渣用无水乙醇溶解并转移至100ml量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液；吸取上述对照品溶液与供试品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，即得；本品按干燥品计算，含鬼臼毒素(C22H22O8)不得少于2.0％。

实施例6：本发明乳剂的质量控制方法

含量测定：照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VID)测定；

色谱条件与系统适用性试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(63∶37)为流动相；检测波长为292nm。理论板数按鬼臼毒素峰计算应不低于2000，主峰与相邻杂质峰的分离度应符合要求。

测定法：取乳剂约10g，精密称重，置于100ml的锥形瓶中，加0.1ml盐酸轻摇，加入约50ml流动相，超声20分钟(超声时上下摇动2次)，溶解后冰浴30分钟，立即减压过滤，用流动相少量多次洗涤沉淀及滤瓶，将洗涤液及滤液合并置烧杯中，放至室温，用1mol/L的氢氧化钠调pH值3.0～5.0，将此滤液转移至100ml量瓶中，流动相加至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另取鬼臼毒素对照品适量，用流动相配制成每1ml中约含0.15mg的溶液，作为对照品溶液。精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算含量，即得。

鉴别：A.桃儿七的鉴别：称取鬼臼毒素对照品适量，加流动相制成每1ml中含0.15mg的溶液，作为对照品溶液；取装量差异项下的样品适量(约相当于鬼臼毒素15mg)，照含量测定项下的色谱条件及方法进行实验，记录色谱图；以不加桃儿七制成的乳剂为空白对照样品同法进行试验；对照品溶液及供试品溶液主峰保留时间基本一致，而空白对照无干扰。

B.大黄的鉴别：色谱条件与系统适用性试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-0.1％磷酸溶液(80∶20)为流动相；检测波长为440nm。理论板数按大黄素峰计算应不低于1500；称取乳剂10g，置小烧杯中，加入适量无水乙醇，超声破乳后，置冰箱中冷却20分钟，过滤，滤液水浴蒸干，残渣加2ml无水乙醇溶解后，过滤，滤液加到3ml的流动相中，置冰箱中冷却20分钟后用0.45μm的滤膜过滤至澄清，作为供试品溶液；另取大黄素对照品，用流动相制备成每1ml中约含2μg的溶液，作为对照品溶液；取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；以不加大黄制成的乳剂为空白对照样品同法进行试验；对照品溶液及供试品溶液主峰保留时间基本一致，而空白对照无干扰。

C.苦参的鉴别：称取乳剂样品约5g，加无水乙醇约10ml超声破乳后，于4℃冷却20分钟，过滤，滤液水浴蒸干，残渣加5ml水溶解后，加入1滴氨水，轻轻振摇，转移至分液漏斗中，用氯仿萃取3次，每次10ml，合并萃取液，转移至蒸发皿中，水浴挥干，用约5ml无水乙醇溶解，过滤，作为供试品溶液；另取氧化苦参碱对照品，用无水乙醇制备成每1ml中约含5μg的溶液，作为对照品溶液；同法按处方比例制备不含苦参的空白溶液一份；照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)测定，分别吸取对照品和供试品溶液及空白溶液各5ul，点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-氨水(5∶0.6∶0.2)为展开剂，展开，取出，凉干，喷以碘化铋钾试液显色，样品与对照品应在相同位置出现橘红色斑点，而不含苦参的空白样品应在相同位置未出现斑点。

D.鸦胆子的鉴别：称取乳剂样品约5g，加无水乙醇约10ml，超声破乳，趁热过滤，滤液水浴蒸干，残渣加5ml石油醚溶解后，过滤至澄清，取滤液作为供试品溶液；另取亚油酸对照品，用石油醚制备成每1ml中含约2mg的溶液，作为对照品溶液；同法按处方比例制备不含鸦胆子的空白溶液一份；照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)测定，分别吸取对照品和供试品溶液及空白溶液各5ul，点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯-乙酸(85∶15∶0.1)为展开剂，饱和1小时，上行展开，取出，凉干，置于碘缸中用碘蒸气熏约15分钟，直至出现清晰斑点；样品与对照品在相同位置出现棕色斑点。

E、冰片、桉油的鉴别：称取乳剂样品约5g，加无水乙醇约10ml，超声破乳，于4℃冷却约6-8分钟，过滤至澄清，取滤液作为供试品溶液；另取冰片、桉油精对照品适量，分别加无水乙醇制备成每1ml中约含5μg的溶液，作为对照品溶液；同法按处方比例制备不含冰片、不含桉油的空白溶液各一份；照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)测定，分别吸取对照品和供试品溶液及空白溶液各5ul，点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯(9∶0.5)为展开剂，展开，取出，凉干，喷以新配制的1％香草醛硫酸溶液显色，即可；结果应与冰片对照品相同位置出现紫红色斑点，与桉油精相同位置出现紫褐色斑点。

Claims (27)

1、一种治疗尖锐性湿疣、生殖器疱疹的药物组合物，其特征在于该药物组合物是由如下重量配比的原料药制成：

桃儿七52～78重量份         鸦胆子460～690重量份

大黄80～120重量份          苦参80～120重量份。

2、如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物是由如下重量配比的原料药制成：

桃儿七65重量份             鸦胆子574重量份

大黄100重量份              苦参100重量份。

3、如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物是由如下重量配比的原料药制成：

桃儿七55重量份             鸦胆子650重量份

大黄90重量份               苦参110重量份。

4、如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物是由如下重量配比的原料药制成：

桃儿七75重量份             鸦胆子500重量份

大黄110重量份              苦参90重量份。

5、如权利要求1-4所述的任意一种药物组合物，其特征在于该药物组合物原料药中加入桉油8～12重量份、冰片8～12重量份。

6、如权利要求5所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物原料药中桉油与冰片的重量份为：桉油10重量份、冰片10重量份，桉油9重量份、冰片11重量份或桉油11重量份、冰片9重量份。

7、如权利要求1、2、3、4或6所述的药物组合物，其特征在于取本发明药物组合物原料药，经对各药的有效成分分别或组合进行加工提取后，加入常规辅料或赋形剂，制备成各种临床可接受的外用药物剂型：真溶液类剂型、胶体溶液类剂型、乳浊液类剂型、混悬液类剂型或气体分散体剂型。

8、如权利要求5所述的药物组合物，其特征在于取本发明药物组合物原料药，经对各药的有效成分分别或组合进行加工提取后，加入常规辅料或赋形剂，制备成各种临床可接受的外用药物剂型：真溶液类剂型、胶体溶液类剂型、乳浊液类剂型、混悬液类剂型或气体分散体剂型。

9、如权利要求7所述的药物组合物，其特征在于所说的真溶液类剂型选自于芳香水剂、溶液剂或醑剂等中的一种；所说的胶体溶液类剂型选自于胶浆剂、火棉胶剂或凝胶剂等中的一种；所说的乳浊液类剂型选自于O/W型或W/O型乳剂等中的一种；所说的混悬液类剂型选自于合剂、洗剂或混悬剂等中的一种；所说的气体分散体剂型选自于喷雾剂等中的一种。

10、如权利要求8所述的药物组合物，其特征在于所说的真溶液类剂型选自于芳香水剂、溶液剂或醑剂等中的一种；所说的胶体溶液类剂型选自于胶浆剂、火棉胶剂或凝胶剂等中的一种；所说的乳浊液类剂型选自于O/W型或W/O型乳剂等中的一种；所说的混悬液类剂型选自于合剂、洗剂或混悬剂等中的一种；所说的气体分散体剂型选自于喷雾剂等中的一种。

11、如权利要求1、2、3、4或6所述的药物组合物的制备方法，其特征在于该方法为：

按重量配比称取原料药，桃儿七用6～14倍量二氯甲烷，回流提取1～3次，每次1～3小时，合并提取液，过滤，滤液回收二氯甲烷，得到固体粉末，将固体粉末40℃、-0.1MP真空干燥4小时后，过100目筛，得桃儿七提取物，备用；冰片过80目筛，备用；鸦胆子用6～10倍量石油醚，回流提取1～3次，每次1～3小时，合并提取液，过滤，滤液回收石油醚至无石油醚味，得到鸦胆子油，加1％活性炭于100℃搅拌15分钟，趁热过滤除炭，得鸦胆子油精品；大黄、苦参用8～12倍量的60％～85％乙醇回流提取1～4次，每次1～3小时，合并提取液，过滤，滤液回收乙醇，浓缩到相对密度为1.016，离心除沉淀，上清液备用；取上述桃儿七提取物、鸦胆子油精品、大黄、苦参合并提取的上清液，或再加入桉油、冰片，加入常规辅料或赋形剂，制备成各种临床可接受的药物剂型：真溶液类剂型、胶体溶液类剂型、乳浊液类剂型、混悬液类剂型或气体分散体剂型。

12、如权利要求11所述的药物组合物的制备方法，其特征在于该方法为：

按重量配比称取原料药，桃儿七用12倍量二氯甲烷，回流提取2次，每次2小时，合并提取液，过滤，滤液回收二氯甲烷，得到固体粉末，将固体粉末40℃、-0.1MP真空干燥4小时后，过100目筛，得桃儿七提取物，备用；冰片过80目筛，备用；鸦胆子用7倍量石油醚，回流提取3次，每次1小时，合并提取液，过滤，滤液回收石油醚至无石油醚味，得到鸦胆子油，加1％活性炭于100℃搅拌15分钟，趁热过滤除炭，滤液备用，得鸦胆子油精品；大黄、苦参用11倍量的60％乙醇回流提取4次，每次1小时，合并提取液，过滤，滤液回收乙醇，浓缩到相对密度为1.016，离心除沉淀，上清液备用；取桃儿七提取物、鸦胆子油精品、上清液，或再加入桉油、冰片，加入常规辅料或赋形剂，制备成各种临床可接受的药物剂型：真溶液类剂型、胶体溶液类剂型、乳浊液类剂型、混悬液类剂型或气体分散体剂型。

13、如权利要求5所述的药物组合物的制备方法，其特征在于该方法为：

按重量配比称取原料药，桃儿七用6～14倍量二氯甲烷，回流提取1～3次，每次1～3小时，合并提取液，过滤，滤液回收二氯甲烷，得到固体粉末，将固体粉末40℃、-0.1MP真空干燥4小时后，过100目筛，得桃儿七提取物，备用；冰片过80目筛，备用；鸦胆子用6～10倍量石油醚，回流提取1～3次，每次1～3小时，合并提取液，过滤，滤液回收石油醚至无石油醚味，得到鸦胆子油，加1％活性炭于100℃搅拌15分钟，趁热过滤除炭，得鸦胆子油精品；大黄、苦参用8～12倍量的60％～85％乙醇回流提取1～4次，每次1～3小时，合并提取液，过滤，滤液回收乙醇，浓缩到相对密度为1.016，离心除沉淀，上清液备用；取上述桃儿七提取物、鸦胆子油精品、大黄、苦参合并提取的上清液，再加入桉油、冰片，加入常规辅料或赋形剂，制备成各种临床可接受的药物剂型：真溶液类剂型、胶体溶液类剂型、乳浊液类剂型、混悬液类剂型或气体分散体剂型。

14、如权利要求13所述的药物组合物制备方法，其特征在于该方法为：

按重量配比称取原料药，桃儿七用12倍量二氯甲烷，回流提取2次，每次2小时，合并提取液，过滤，滤液回收二氯甲烷，得到固体粉末，将固体粉末40℃、-0.1MP真空干燥4小时后，过100目筛，得桃儿七提取物，备用；冰片过80目筛，备用；鸦胆子用7倍量石油醚，回流提取3次，每次1小时，合并提取液，过滤，滤液回收石油醚至无石油醚味，得到鸦胆子油，加1％活性炭于100℃搅拌15分钟，趁热过滤除炭，滤液备用，得鸦胆子油精品；大黄、苦参用11倍量的60％乙醇回流提取4次，每次1小时，合并提取液，过滤，滤液回收乙醇，浓缩到相对密度为1.016，离心除沉淀，上清液备用；取桃儿七提取物、鸦胆子油精品、上清液，再加入桉油、冰片，加入常规辅料或赋形剂，制备成各种临床可接受的药物剂型：真溶液类剂型、胶体溶液类剂型、乳浊液类剂型、混悬液类剂型或气体分散体剂型。

15、一种治疗尖锐性湿疣、生殖器疱疹的药物组合物，其特征在于该药物组合物是由如下重量配比的原料药制成乳剂：

桃儿七52～78重量份、鸦胆子460～690重量份、大黄80～120重量份、苦参80～120重量份、桉油8～12重量份、冰片8～12重量份、维生素E 3.2～4.8重量份、山梨酸0.8～1.2重量份、单硬脂酸甘油酯41.6～63.4重量份、十二烷基硫酸钠9.6～14.4重量份。

16、如权利要求15所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物是由如下重量配比的原料药制成乳剂：

桃儿七65重量份、鸦胆子574重量份、大黄100重量份、苦参100重量份、桉油10重量份、冰片10重量份、维生素E 4重量份、山梨酸1重量份、单硬脂酸甘油酯52重量份、十二烷基硫酸钠12重量份。

17、如权利要求15所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物是由如下重量配比的原料药制成乳剂：

桃儿七55重量份、鸦胆子650重量份、大黄90重量份、苦参110重量份、桉油9重量份、冰片11重量份、维生素E 3.5重量份、山梨酸1.1重量份、单硬脂酸甘油酯45重量份、十二烷基硫酸钠14重量份。

18、如权利要求15所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物是由如下重量配比的原料药制成乳剂：

桃儿七75重量份、鸦胆子500重量份、大黄110重量份、苦参90重量份、桉油11重量份、冰片9重量份、维生素E4.5重量份、山梨酸0.9重量份、单硬脂酸甘油酯60重量份、十二烷基硫酸钠10重量份。

19、如权利要求15、16、17或18所述的药物组合物的制备方法，其特征在于该方法为：

按重量配比称取原料药，桃儿七用6～14倍量二氯甲烷，回流提取1～3次，每次1～3小时，合并提取液，过滤，滤液回收二氯甲烷，得到固体粉末，将固体粉末40℃、-0.1MP真空干燥4小时后，过100目筛，得桃儿七提取物，备用；冰片过80目筛，备用；鸦胆子用6～10倍量石油醚，回流提取1～3次，每次1～3小时，合并提取液，过滤，滤液回收石油醚至无石油醚味，得到鸦胆子油，加1％活性炭于100℃搅拌15分钟，趁热过滤除炭，滤液备用，得鸦胆子油精品；大黄、苦参用8～12倍量的60％～85％乙醇回流提取1～4次，每次1～3小时，合并提取液，过滤，滤液回收乙醇，浓缩到相对密度为1.016，离心除沉淀，上清液备用；取上述鸦胆子油精品、单硬脂酸甘油酯、维生素E、冰片置于容器中，水浴加热至60-70℃，搅拌溶解，再将桉油及上述桃儿七提取物置于油相中，搅拌均匀后，作为油相；称取山梨酸、十二烷基硫酸钠置于中药液中，水浴加热至60-70℃，搅拌溶解，作为水相；将水相缓慢加入到油相中，边加边搅拌至乳化均匀，冷至室温，制成乳剂。

20、如权利要求19所述的药物组合物的制备方法，其特征在于该方法为：

按重量配比称取原料药，桃儿七用10倍量二氯甲烷，回流提取3次，每次3小时，合并提取液，过滤，滤液回收二氯甲烷，得到固体粉末，将固体粉末40℃、-0.1MP真空干燥4小时后，过100目筛备用；冰片过80目筛后备用；鸦胆子用6倍量石油醚，回流提取2次，每次3小时，合并提取液，过滤，滤液回收石油醚至无石油醚味，得到鸦胆子油，加1％活性炭于100℃搅拌15分钟，趁热过滤除炭，滤液备用；大黄、苦参用10倍量的70％乙醇回流提取3次，每次2小时，合并提取液，过滤，滤液回收乙醇，浓缩到相对密度为1.016，离心除沉淀，上清液备用；取上述鸦胆子油、单硬脂酸甘油酯、维生素E、冰片置于容器中，水浴加热至60-70℃，搅拌溶解，再将处方量的桉油及上述桃儿七提取物置于油相中，搅拌均匀后，作为油相；称取处方量的山梨酸、十二烷基硫酸钠置于中药液中，水浴加热至60-70℃，搅拌溶解，作为水相；将水相缓慢加入到油相中，边加边搅拌至乳化均匀，冷至室温，制成乳剂。

21、一种治疗尖锐性湿疣、生殖器疱疹的药物组合物，其特征在于该药物组合物直接以桃儿七提取物，鸦胆子油，大黄、苦参中药液按如下g/ml的重量体积比投料入药：桃儿七提取物2.78重量份，鸦胆子油70重量份，大黄、苦参中药液600体积比，桉油10重量份，冰片10重量份，维生素E 4重量份，山梨酸1重量份，十二烷基硫酸钠12重量份，单硬脂酸甘油酯52重量份，加水至1000重量份制成乳剂。

22、如权利要求21所述药物组合物的制备方法，其特征在于该方法为：

桃儿七提取物过100目筛后备用；将冰片过80目筛后备用；按处方量称取鸦胆子油、单硬脂酸甘油酯、维生素E、冰片置于容器中，于60-70℃水浴中加热溶解，作为油相；称取处方量的山梨酸、十二烷基硫酸钠加入中药液中，60-70℃水浴加热搅拌溶解，作为水相；将处方量的桉油及桃儿七提取物加入到油相中，搅拌均匀后，将水相缓慢加入到油相中，边加边搅拌至乳化均匀，冷至室温，将其分装于适宜的瓶中，即得。

23、如权利要求1、2、3、4、6、15、16、17或18所述药物组合物中桃儿七药材的质量控制方法，其特征在于该方法包括下述鉴别和/或含量测定方法中的一种或两种：

鉴别：取桃儿七粉末0.5g，加10ml二氯甲烷超声提取10分钟，过滤，滤液水浴蒸干，加2ml无水乙醇使溶解，作为供试品溶液；另取鬼臼毒素对照品10mg，加无水乙醇2ml使溶解，作为对照品溶液；取对照品与供试品溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以10～8∶1的氯仿-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％的硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点清晰，供试品与对照品应在相同位置出现相同斑点；

含量测定：照高效液相色谱法测定；

色谱条件与系统适用性试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以60～65∶40～35的甲醇-水为流动相；检测波长为292nm；理论板数按鬼臼毒素峰计应不低于1500，主峰与相邻杂质峰的分离度应为1.5以上；

取经70℃干燥至恒重的鬼臼毒素对照品，用上述流动相溶解制成每1ml中含0.13mg的溶液，即得对照品溶液；取桃儿七粉末0.5g，过4号筛，称定，置烧瓶中，加二氯甲烷80ml，回流提取4小时，提取液回收二氯甲烷并浓缩至干，残渣用无水乙醇溶解并转移至100ml量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液；吸取上述对照品溶液与供试品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，即得；本品按干燥品计算，含鬼臼毒素不得少于2.0％。

24、如权利要求23所述桃儿七药材的质量控制方法，其特征在于该方法包括下述鉴别和/或含量测定方法中的一种或几种：

鉴别：取桃儿七粉末0.5g，加10ml二氯甲烷超声提取10分钟，过滤，滤液水浴蒸干，加2ml无水乙醇使溶解，作为供试品溶液；另取鬼臼毒素对照品10mg，加无水乙醇2ml使溶解，作为对照品溶液；取对照品与供试品溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以9∶1的氯仿-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％的硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点清晰，供试品与对照品应在相同位置出现相同斑点；

含量测定：照高效液相色谱法测定；

色谱条件与系统适用性试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以63∶37的甲醇-水为流动相；检测波长为292nm；理论板数按鬼臼毒素峰计应不低于1500，主峰与相邻杂质峰的分离度应为1.5以上；

取经70℃干燥至恒重的鬼臼毒素对照品，用上述流动相溶解制成每1ml中含0.13mg的溶液，即得对照品溶液；取桃儿七粉末0.5g，过4号筛，称定，置烧瓶中，加二氯甲烷80ml，回流提取4小时，提取液回收二氯甲烷并浓缩至干，残渣用无水乙醇溶解并转移至100ml量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液；吸取上述对照品溶液与供试品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，即得；本品按干燥品计算，含鬼臼毒素不得少于2.0％。

25、如权利要求15、16、17或18所述本发明药物组合物乳剂的质量控制方法，其特征在于该方法包括下述含量测定和/或鉴别方法中的一种或几种：

含量测定：照高效液相色谱法测定；

色谱条件与系统适用性试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以60～65∶40～35的甲醇-水为流动相；检测波长为292nm；理论板数按鬼臼毒素峰计算应不低于2000，主峰与相邻杂质峰的分离度应符合要求；

测定法，取乳剂10g，称重，置于100ml的锥形瓶中，加0.1ml盐酸轻摇，加入50ml流动相，超声20分钟，溶解后冰浴30分钟，立即减压过滤，用流动相少量多次洗涤沉淀及滤瓶，将洗涤液及滤液合并置烧杯中，放至室温，用1mol/L的氢氧化钠调pH值3.0～5.0，将此滤液转移至100ml量瓶中，流动相加至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另取鬼臼毒素对照品，用流动相配制成每1ml中含0.15mg的溶液，作为对照品溶液；吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算含量，即得；

鉴别：A.桃儿七的鉴别：称取鬼臼毒素对照品，加上述含量测定项下的流动相制成每1ml中含0.15mg的溶液，作为对照品溶液；取装量差异项下的样品，相当于鬼臼毒素15mg，照含量测定项下的色谱条件及方法进行实验，记录色谱图，对照品溶液及供试品溶液主峰保留时间应一致；

B.大黄的鉴别：色谱条件与系统适用性试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，75～85∶25～15的甲醇-0.1％磷酸溶液为流动相；检测波长为440nm；理论板数按大黄素峰计算应不低于1500；称取乳剂10g，置小烧杯中，加入无水乙醇，超声破乳后，置冰箱中冷却20分钟，过滤，滤液水浴蒸干，残渣加2ml无水乙醇溶解后，过滤，滤液加到3ml的流动相中，置冰箱中冷却20分钟后用0.45μm的滤膜过滤至澄清，作为供试品溶液；另取大黄素对照品，用流动相制备成每1ml中含2μg的溶液，作为对照品溶液；取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，对照品溶液及供试品溶液主峰保留时间应一致；

C.苦参的鉴别：称取乳剂样品5g，加无水乙醇10ml超声破乳后，于4℃冷却20分钟，过滤，滤液水浴蒸干，残渣加5ml水溶解后，加入1滴氨水，轻轻振摇，转移至分液漏斗中，用氯仿萃取3次，每次10ml，合并萃取液，转移至蒸发皿中，水浴挥干，用5ml无水乙醇溶解，过滤，作为供试品溶液；另取氧化苦参碱对照品，用无水乙醇制备成每1ml中含5μg的溶液，作为对照品溶液；同法按处方比例制备不含苦参的空白溶液一份；照薄层色谱法测定，分别吸取对照品和供试品溶液及空白溶液各5ul，点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以4～6∶0.6∶0.2的氯仿-甲醇-氨水为展开剂，展开，取出，凉干，喷以碘化铋钾试液显色，样品与对照品应在相同位置出现橘红色斑点，而不含苦参的空白样品应在相同位置未出现斑点；

D.鸦胆子的鉴别：称取乳剂样品5g，加无水乙醇10ml，超声破乳，趁热过滤，滤液水浴蒸干，残渣加5ml石油醚溶解后，过滤至澄清，取滤液作为供试品溶液；另取亚油酸对照品，用石油醚制备成每1ml中含2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法测定，分别吸取对照品和供试品溶液各5ul，点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以80～90∶20～10∶0.1的60～90℃石油醚-乙酸乙酯-乙酸为展开剂，饱和1小时，上行展开，取出，凉干，置于碘缸中用碘蒸气熏15分钟，直至出现清晰斑点；样品与对照品在相同位置出现棕色斑点；

E、冰片、桉油的鉴别：称取乳剂样品5g，加无水乙醇10ml，超声破乳，于4℃冷却6-8分钟，过滤至澄清，取滤液作为供试品溶液；另取冰片、桉油精对照品，分别加无水乙醇制备成每1ml中含5μg的溶液，作为对照品溶液；同法按处方比例制备不含冰片、不含桉油的空白溶液各一份；照薄层色谱法测定，分别吸取对照品和供试品溶液及空白溶液各5ul，点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以9-9.5∶1-0.5的环己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，凉干，喷以新配制的1％香草醛硫酸溶液显色，即可；结果应与冰片对照品相同位置出现紫红色斑点，与桉油精相同位置出现紫褐色斑点。

26、如权利要求25所述本发明药物组合物乳剂的质量控制方法，其特征在于该乳剂的质量控制方法包括下述含量测定和/或鉴别方法中的一种或几种：

含量测定：照高效液相色谱法测定；

色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以63∶37的甲醇-水为流动相；检测波长为292nm；理论板数按鬼臼毒素峰计算应不低于2000，主峰与相邻杂质峰的分离度应符合要求；

测定法：取乳剂10g，称重，置于100ml的锥形瓶中，加0.1ml盐酸轻摇，加入50ml流动相，超声20分钟，溶解后冰浴30分钟，立即减压过滤，用流动相少量多次洗涤沉淀及滤瓶，将洗涤液及滤液合并置烧杯中，放至室温，用1mol/L的氢氧化钠调pH值3.0～5.0，将此滤液转移至100ml量瓶中，流动相加至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另取鬼臼毒素对照品，用流动相配制成每1ml中含0.15mg的溶液，作为对照品溶液；吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算含量，即得；

鉴别：A.桃儿七的鉴别：称取鬼臼毒素对照品，加流动相制成每1ml中含0.15mg的溶液，作为对照品溶液；取装量差异项下的样品，相当于鬼臼毒素15mg，照含量测定项下的色谱条件及方法进行实验，记录色谱图；以不加桃儿七制成的乳剂为空白对照样品同法进行试验；对照品溶液及供试品溶液主峰保留时间基本一致，而空白对照无干扰；

B.大黄的鉴别：色谱条件与系统适用性试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以比例为80∶20的甲醇-0.1％磷酸溶液为流动相；检测波长为440nm；理论板数按大黄素峰计算应不低于1500；称取乳剂10g，置小烧杯中，加入无水乙醇，超声破乳后，置冰箱中冷却20分钟，过滤，滤液水浴蒸干，残渣加2ml无水乙醇溶解后，过滤，滤液加到3ml的流动相中，置冰箱中冷却20分钟后用0.45μm的滤膜过滤至澄清，作为供试品溶液；另取大黄素对照品，用流动相制备成每1ml中含2μg的溶液，作为对照品溶液；取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；以不加大黄制成的乳剂为空白对照样品同法进行试验；对照品溶液及供试品溶液主峰保留时间基本一致，而空白对照无干扰；

C.苦参的鉴别：称取乳剂样品5g，加无水乙醇10ml超声破乳后，于4℃冷却20分钟，过滤，滤液水浴蒸干，残渣加5ml水溶解后，加入1滴氨水，轻轻振摇，转移至分液漏斗中，用氯仿萃取3次，每次10ml，合并萃取液，转移至蒸发皿中，水浴挥干，用5ml无水乙醇溶解，过滤，作为供试品溶液；另取氧化苦参碱对照品，用无水乙醇制备成每1ml中含5μg的溶液，作为对照品溶液；同法按处方比例制备不含苦参的空白溶液一份；照薄层色谱法测定，分别吸取对照品和供试品溶液及空白溶液各5ul，点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以比例为5∶0.6∶0.2的氯仿-甲醇-氨水为展开剂，展开，取出，凉干，喷以碘化铋钾试液显色，样品与对照品应在相同位置出现橘红色斑点，而不含苦参的空白样品应在相同位置未出现斑点；

D.鸦胆子的鉴别：称取乳剂样品5g，加无水乙醇10ml，超声破乳，趁热过滤，滤液水浴蒸干，残渣加5ml石油醚溶解后，过滤至澄清，取滤液作为供试品溶液；另取亚油酸对照品，用石油醚制备成每1ml中含2mg的溶液，作为对照品溶液；同法按处方比例制备不含鸦胆子的空白溶液一份；照薄层色谱法测定，分别吸取对照品和供试品溶液及空白溶液各5ul，点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以比例为85∶15∶0.1的60～90℃石油醚-乙酸乙酯-乙酸为展开剂，饱和1小时，上行展开，取出，凉干，置于碘缸中用碘蒸气熏15分钟，直至出现清晰斑点；样品与对照品在相同位置出现棕色斑点；

E、冰片、桉油的鉴别：称取乳剂样品5g，加无水乙醇10ml，超声破乳，于4℃冷却6-8分钟，过滤至澄清，取滤液作为供试品溶液；另取冰片、桉油精对照品，分别加无水乙醇制备成每1ml中含5μg的溶液，作为对照品溶液；同法按处方比例制备不含冰片、不含桉油的空白溶液各一份；照薄层色谱法测定，分别吸取对照品和供试品溶液及空白溶液各5ul，点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以比例为9∶0.5的环己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，凉干，喷以新配制的1％香草醛硫酸溶液显色，即可；结果应与冰片对照品相同位置出现紫红色斑点，与桉油精相同位置出现紫褐色斑点。

27、如权利要求1、2、3、4、6、15、16、17或18所述的药物组合物在制备治疗尖锐湿疣药物中的应用。