CN1682971A - 一种复方板蓝根冻干粉针剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种复方板蓝根冻干粉针剂及其制备方法。它是由茵陈提取的挥发油的HP－β－CD包合物0.5－2重量份，板蓝根、茵陈、甘草经提取纯化得到的提取物30－50重量份和药用辅料制备而成。本发明的特征还在于提取物中靛玉红含量大于40μg/g，靛蓝含量大于42μg/g。药理实验结果说明，本发明复方板蓝根冻干粉针剂药理作用更强。
Description
所属技术领域
本发明属中药制药技术领域，具体涉及一种复方板蓝根冻干粉针剂及其制备方法。
背景技术
板蓝根为十字花科植物菘蓝Isatis indigotica Fort.的干燥根。板蓝根性寒，味苦。具清热解毒、凉血利咽之功效，用于温毒发斑、舌绛紫暗、痄腮、喉痹、烂喉丹痧、大头瘟疫、丹毒、痈肿。
茵陈为菊科植物茵陈蒿Artemisia capillaris Thumb.或滨蒿Artemisia scopariaWaldst.et Kit.的干燥幼苗。茵陈性微寒，味苦、辛。能清湿热，退黄疸。用于黄疸尿少，湿疮瘙痒；传染性黄疸型肝炎。
甘草为豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.、胀果甘草Glycyrrhizainflate Bat.或光果甘草Glycyrrhiza glabra L.的干燥根及根茎。性平，味甘。具有补脾益气，润肺止咳，缓急止痛，缓和药性之功效。用于脾胃虚弱、倦怠乏力，心悸气短，咳嗽痰多，脘腹、四肢挛急疼痛，痈肿疮毒，缓解药物毒性、烈性。
复方板蓝根注射液(WS-11308(ZD-1308)-2002)由板蓝根、茵陈、甘草三味中药经提取制备而成，具有清热利湿功效，用于黄疸及无黄疸型急性肝炎属肝胆湿热症。
该注射液中板蓝根、甘草采用水煎醇沉法进行提取，有大量研究表明板蓝根采用该方法提取存在许多问题，板蓝根的化学成分，经抑菌试验表明，靛玉红、靛蓝为有效成分，由于靛玉红、、靛蓝是脂溶性成分，采用水作溶媒进行加热提取，其主要成分不但溶出甚少，相反，由于水是极性溶媒，对原药材的许多无效成分如胶质、鞣质、粘液质等却被大量浸出，给制剂工作带来麻烦，板蓝根木质部的薄壁细胞中含有大量的淀粉粒，原工艺煮沸提取使得板蓝根的木栓层和皮层被煮烂，树脂状物、植物蛋白和木质部薄壁细胞中大量的淀粉粒大量溶出，且在煮沸过程中淀粉粒进一步糊化，以至提取液浓缩时，常常是一锅糊状物，易产生焦屑。虽然靛玉红在板蓝根中以苷的形式存在，在热水中也能溶出，但分子中含有酯键易被水解为吲哚醇和糖酮酸，其溶解度降低，醇沉时，由于大量沉淀物的吸附和包裹作用，使得排弃的醇沉杂质中留有较大量的靛玉红。复方板蓝根注射液中茵陈用水蒸气重蒸馏法提取挥发油类成分，但研究表明茵陈水煎液也具有很好的保肝作用。由于含有挥发油类等成分，复方板蓝根注射液产品质量不稳定，对保存的要求较高，保存不当药液会由于氧化出现浑浊、沉淀、变色等情况；复方板蓝根注射液质量标准中没有对相关成分的含量进行了测定，不利于产品质量的控制和稳定性。注射液在携带、储藏、运输时容易破碎，也带来许多麻烦。
在资料检索中未发现有关复方板蓝根冻干粉针剂的报道。
发明内容
基于以上原因，本发明研究人员根据复方板蓝根中所含药材的有效成分的性质，对提取纯化工艺进行了改进，使有效成分的提取更全面、含量更高，杂质含量更少；将挥发油制成包合物后与提取物合并，制成冻干粉针剂也提高了制剂的稳定性，本发明还对制剂的质量标准进行了提高，使制剂的质量可控性更强，药理实验结果表明，本发明复方板蓝根冻干粉针剂具有更好的药理作用。
本发明的目的是公开一种富含活性成分、疗效好、质量稳定、方便使用的复方板蓝根冻干粉针制剂。
本发明的另一个目的是提供上述复方板蓝根冻干粉针制剂的制备方法。
本发明通过以下技术方案实现。
一、制备方法
(1)原料药重量份组成为：板蓝根4-6份，茵陈2-3份，甘草0.4-0.6份。
(2)取茵陈药材，加水浸泡30分钟后，用水蒸气蒸馏法提取挥发油，将收集的挥发油缓慢加入到10-30倍量HP-β-CD饱和水溶液(v/g)中，50℃-60℃保温条件下搅拌2-4小时，室温下继续搅拌3小时，冷藏过夜，过滤，干燥，得到茵陈挥发油包合物。
(3)取板蓝根加4-6倍量60％-80％乙醇回流提取，乙醇回流液减压回收乙醇并浓缩，得板蓝根浓缩液；茵陈药渣和甘草加水煎煮2次，第一次2小时，第二次1小时，合并煎煮液，滤过，滤液减压浓缩，与板蓝根浓缩液合并，用大孔吸附树脂吸附，用水洗脱至近无色后，用4-6倍柱体积50％-70％乙醇洗脱，洗脱液减压回收乙醇，用截留分子量为10000-20000的超滤膜超滤，滤液减压浓缩并真空干燥，粉碎，得到提取物。
(4)取上述包合物、提取物加注射用水溶解，滤过，加入药用辅料，加注射用水至规定量，调节pH值至60-7.0，微孔滤膜过滤，灌装，冷冻干燥，即得。
在复方板蓝根冻干粉针剂的制备中，采用水蒸气蒸馏法提取茵陈中的挥发油后，再用羟丙基-β-环糊精(HP-β-CD)进行包合。HP-β-CD为水溶性的包合物，用其包合的挥发油制成粉针剂溶解性好，注射时易吸收，生物利用度高，患者痛感小，易于被患者愉快的接受；而且用HP-β-CD对挥发油进行包合，使其在制备、贮藏、运输的过程中不易被空气氧化而变质，增加了挥发油的稳定性，提高了疗效。
由于板蓝根的水提醇沉法的缺陷，因此我们经研究将板蓝根采用乙醇回流提取，并将甘草和茵陈药渣的水提取液与板蓝根提取液合并，然后采用大孔吸附树脂对提取物进行了分离纯化，超滤膜分离技术是一种新分离方法，它可以通过分子量的选择性筛选去除蛋白质、鞣质、树脂、淀粉等分子量较大的杂质，保留所需的有效成分，该方法在常温进行，分离效率高，本发明研究人员将经大孔树脂纯化后的提取液进一步用超滤膜进行纯化，并筛选了适合于本发明提取物的超滤膜的分子量。本发明用超滤工艺处理，可以进一步去除杂质，提高有效成分的纯度，从而提高制剂质量，同时超滤工艺的运用对于热原的去除也具有一定作用。本发明采用的超滤膜的分子量为10000-20000。采用上述制备方法，使得本发明的提取物中有效成分更加全面、含量显著提高；本发明的特征在于经纯化后的复方板蓝根提取物中主要有效成分靛玉红含量大于40μg/g，靛蓝含量大于42μg/g。
本发明制剂中含茵陈提取的挥发油的HP-β-CD的包合物0.5-2.0重量份，板蓝根、茵陈、甘草经提取纯化得到的提取物30-50重量份。本发明制剂采用的药用辅料为甘露醇、葡萄糖、乳糖、葡聚糖和右旋糖酐中的一种或两种；本发明制备过程中采用的大孔吸附树脂型号为HPD-450型或D101型。
二、含量测定分析
1、复方板蓝根制剂中靛玉红、靛蓝的含量测定
参照文献(王邦林等，板蓝根、大青叶中靛玉红、靛蓝的高效液相色谱分析.天津药学.1994，6(3)：30-33)方法进行测定，结果见表1。
表1制剂中靛玉红、靛蓝的含量测定(μg/支)
| 复方板蓝根注射液 | 本发明复方板蓝根冻干粉针剂 | |||||
| 1 | 2 | 3 | 1 | 2 | 3 | |
| 靛玉红含量靛蓝含量 | 1.11.2 | 0.91.1 | 1.01.2 | 4.04.2 | 3.63.9 | 4.24.5 |
结果表明采用本发明制备方法有效成分含量明显提高。
2、复方板蓝根制剂中甘草酸的含量测定
参照《中国药典》2000版一部甘草项下的甘草酸的含量测定方法进行测定，结果见表2。
表2制剂中甘草酸的含量测定(mg/支)
| 批次 | 复方板蓝根注射液 | 本发明复方板蓝根冻干粉针剂 |
| 123 | 0.110.120.10 | 0.120.130.12 |
3、提取物中靛玉红、靛蓝和甘草酸的含量测定
测定仪器、试药及方法同上。提取物1(复方板蓝根注射液提取物，按复方板蓝根注射液的制备方法所得)；提取物2(本发明复方板蓝根冻干粉针剂提取物，按照本发明复方板蓝根冻干粉针剂的制法方法制备所得)；以上提取物由广东天之骄药物开发有限公司提供。含量测定结果见表3、4。
表3提取物中靛玉红、靛蓝及甘草酸的含量测定
| 提取物1 | 提取物2 | |||||
| 1 | 2 | 3 | 1 | 2 | 3 | |
| 靛玉红含量(μg/g)靛蓝含量(μg/g)甘草酸(mg/g) | 15.416.21.75 | 17.218.31.80 | 16.017.11.82 | 43.9.45.51.86 | 52.354.61.88 | 58.659.21.92 |
以上含量测定结果说明，本发明的制备方法得到的复方板蓝根提取物中的有效成分靛玉红、靛蓝含量明显高于复方板蓝根注射液提取物中的靛玉红、靛蓝的含量，甘草酸含量也略高。说明本发明的制备方法制得的提取物纯度更高，工艺更加合理、科学。为了更好控制本发明制剂的质量，考虑药材来源的差异及制备工艺，确定控制本发明提取物靛玉红含量大于40μg/g，靛蓝含量大于42μg/g。
三、药理实施例
试药与动物；复方板蓝根注射液(江西青峰制药厂)；本发明复方板蓝根冻干粉针剂(广东天之骄药物开发有限公司实验室提供)；昆明种小鼠，体重18-22g；Wistar大鼠，体重160-200g。
1.对小鼠肝保护作用
取雄性小鼠，随机分成4组，每组10只。分别为正常对照组、生理盐水组、复方板蓝根注射液组、本发明复方板蓝根冻干粉针剂组。第一天上午，下午；次日上午除正常组外，各组给药1次(腹腔注射0.2ml，相当于1.5g生药/kg体重)，生理盐水组给予等容量生理盐水，末次给药后0.5h，除正常组之外的各组小鼠均静脉注射扑热息痛200mg/kg，24h后取血清，根据标准曲线测定血清谷氨酸-丙酮酸转氨酶，结果见表4。同时剖取肝脏作病理检查，根据病理切片观察组织学变化。
表4对小鼠肝血清谷氨酸转氨酶(SGPT)的作用
| 组别 | 动物数(只) | SGPT(U/ml) |
| 正常对照组生理盐水组复方板蓝根注射液组本发明复方板蓝根冻干粉针剂组 | 10101010 | 60.87±15.01127.05±38.92ΔΔ65.44±11.46*54.10±12.02** |
与正常对照组比较ΔΔp＜0.01，与生理盐水组比较，*P＜0.05，**P＜0.01
以上实验结果表明：本发明复方板蓝根冻干粉针剂的保肝作用优于复方板蓝根注射液组。
小鼠肝脏切片结果表明：正常组包膜完整，无渗出，肝细胞排列整齐，无明显瘀血及变性坏死现象。生理盐水组有大量肝细胞浆疏松化，范围超过肝小叶范围的1/2，肝脏瘀血明显。复方板蓝根注射液组包膜完整，无渗出，肝细胞浆疏松广泛，个别细胞出现脂肪性变，无明显瘀、坏死现象。本发明复方板蓝根冻干粉针剂组包膜完整，无渗出，肝细胞弥漫性胞浆疏松化广泛，个别细胞气球样变，无明显窟血、坏死现象。
2.，对四氯化碳所致大鼠急性肝损伤的影响
取体重180-220g的Wistar大鼠60只，雌雄各半，随机分成生理盐水组、模型组、复方板蓝根注射液组、本发明复方板蓝根冻干粉针剂组。参照文献方法(李仪奎，等.中药药理实验方法学.上海：上海科学技术出版社，1991：834)，除生理盐水组外，模型及给药各组均以15％四氯化碳橄榄油溶液，按2ml/kg体重，每隔一天皮下注射一次，连续注射4次。同时，分别给各组大鼠腹腔注射生理盐水或药液，连续7天，给药组给药剂量为1g生药/kg(配成0.5ml)，生理盐水组腹腔注射0.5ml生理盐水。末次给药24h后，采集血液，分离血清，测定谷丙转氨酶(SGPT)、谷草转氨酶(SGOT)及乳酸脱氨酶(LDH)，结果见表5，并取肝脏样品，10％甲醛溶液固定，作病理学切片检查。
表5不同制剂对CCl4肝损伤的影响
| 组别 | SGPT | SGOT | LDH |
| 生理盐水组模型组复方板蓝根注射液组本发明板蓝根冻干粉针剂组 | 42.80±6.8592.35±9.24ΔΔ73.66±6.72*45.37±6.54** | 35.78±4.86104.21±18.1ΔΔ85.49±15.667.60±12.8* | 195.67±35.41240.75±30.26ΔΔ185.91±25.19*150.2±22.84** |
注：与生理盐水组比较，ΔΔp＜0.01，与模型组组比较，*P＜0.05，**P＜0.01
结果显示：复方板蓝根注射液组及本发明复方板蓝根冻干粉针剂组均有极显著降低急性肝损伤大鼠血清SGOT及LDH含量的作用。本发明板蓝根冻干粉针剂组SGPT含量也有显著下降。病理学检查也发现各给药组均可显著抑制四氯化碳所致大鼠肝脏炎性反应，其中本发明复方板蓝根冻干粉针剂具有比复方板蓝根注射液更显著的作用。
结论：以上药理实验结果表明本发明复方板蓝根冻干粉针剂具有比复方板蓝根注射液更好的药理作用。
六、制备实施例
实施例1：
(1)原料药为：板蓝根500g，茵陈250g，甘草50g。
(2)取茵陈药材，加水浸泡30分钟后，用水蒸气蒸馏法提取挥发油，将收集的挥发油缓慢加入到10倍量HP-β-CD饱和水溶液中，50℃-60℃保温条件下搅拌2小时，室温下继续搅拌3小时，冷藏过夜，过滤，干燥，得到茵陈挥发油包合物0.7g。
(3)取板蓝根加6倍量60％乙醇回流提取，乙醇回流液减压回收乙醇并浓缩，得板蓝根浓缩液；茵陈药渣和甘草加水煎煮2次，第一次2小时，第二次1小时，合并煎煮液，滤过，滤液减压浓缩，与板蓝根浓缩液合并，用D101型大孔吸附树脂吸附，用水洗脱至近无色后，用4倍柱体积70％乙醇洗脱，洗脱液减压回收乙醇，用截留分子量为10000-20000的超滤膜超滤，滤液减压浓缩并真空干燥，粉碎，得到提取物40g。
(4)制剂处方为：挥发油包合物0.75g，提取物40g，甘露醇40g。
(5)取上述包合物、提取物加注射用水溶解，滤过，加入甘露醇，加注射用水至规定量，调节pH值至6.0-7.0，微孔滤膜过滤，灌装，冷冻干燥，即得本发明冻干粉500瓶。
实施例2：
(1)原料药重量份组成为：板蓝根500g，茵陈250g，甘草50g。
(2)取茵陈药材，加水浸泡30分钟后，用水蒸气蒸馏法提取挥发油，将收集的挥发油缓慢加入15倍量HP-β-CD饱和水溶液中，50℃-60℃保温条件下搅拌3小时，室温下继续搅拌3小时，冷藏过夜，过滤，干燥，得到茵陈挥发油包合物1.1g。
(3)取板蓝根加5倍量65％乙醇回流提取，乙醇回流液减压回收乙醇并浓缩，得板蓝根浓缩液；茵陈药渣和甘草加水煎煮2次，第一次2小时，第二次1小时，合并煎煮液，滤过，滤液减压浓缩，与板蓝根浓缩液合并，用HPD-450型大孔吸附树脂吸附，用水洗脱至近无色后，用5倍柱体积60％乙醇洗脱，洗脱液减压回收乙醇，用截留分子量为10000-20000的超滤膜超滤，滤液减压浓缩并真空干燥，粉碎，得到提取物45g。
(4)制剂处方为：挥发油包合物1.1g，提取物45g，葡萄糖55g。
(5)取上述包合物、提取物加注射用水溶解，滤过，加入葡萄糖，加注射用水至规定量，调节pH值至6.0-7.0，微孔滤膜过滤，灌装，冷冻干燥，即得本发明冻干粉500瓶。
实施例3：
(1)原料药重量份组成为：板蓝根500g，茵陈250g，甘草50g。
(2)取茵陈药材，加水浸泡30分钟后，用水蒸气蒸馏法提取挥发油，将收集的挥发油缓慢加入20倍量HP-β-CD饱和水溶液中，50℃-60℃保温条件下搅拌3小时，室温下继续搅拌3小时，冷藏过夜，过滤，干燥，得到茵陈挥发油包合物1.5g。
(3)取板蓝根加5倍量70％乙醇回流提取，乙醇回流液减压回收乙醇并浓缩，得板蓝根浓缩液；茵陈药渣和甘草加水煎煮2次，第一次2小时，第二次1小时，合并煎煮液，滤过，滤液减压浓缩，与板蓝根浓缩液合并，用HPD-450型大孔吸附树脂吸附，用水洗脱至近无色后，用4倍柱体积70％乙醇洗脱，洗脱液减压回收乙醇，用截留分子量为10000-20000的超滤膜超滤，滤液减压浓缩并真空干燥，粉碎，得到提取物42g。
(4)制剂处方为：挥发油包合物1.5g，提取物42g，加入葡聚糖57g。
(5)取上述包合物、提取物加注射用水溶解，滤过，加入葡聚糖，加注射用水至规定量，调节pH值至6.0-7.0，微孔滤膜过滤，灌装，冷冻干燥，即得本发明冻干粉500瓶。
实施例4：
(1)原料药重量份组成为：板蓝根400g，茵陈200g，甘草40g。
(2)取茵陈药材，加水浸泡30分钟后，用水蒸气蒸馏法提取挥发油，将收集的挥发油缓慢加入10倍量HP-β-CD饱和水溶液中，50℃-60℃保温条件下搅拌2小时，室温下继续搅拌3小时，冷藏过夜，过滤，干燥，得到茵陈挥发油包合物1.25g。
(3)取板蓝根加4倍量75％乙醇回流提取，乙醇回流液减压回收乙醇并浓缩，得板蓝根浓缩液；茵陈药渣和甘草加水煎煮2次，第一次2小时，第二次1小时，合并煎煮液，滤过，滤液减压浓缩，与板蓝根浓缩液合并，用D101型大孔吸附树脂吸附，用水洗脱至近无色后，用5倍柱体积70％乙醇洗脱，洗脱液减压回收乙醇，用截留分子量为10000-20000的超滤膜超滤，滤液减压浓缩并真空干燥，粉碎，得到提取物30g。
(4)制剂处方为：挥发油包合物0.5g，提取物30g，甘露醇30g，右旋糖酐20g。
(5)取上述包合物、提取物加注射用水溶解，滤过，加入甘露醇、右旋糖酐，加注射用水至规定量，调节pH值至6.0-7.0，微孔滤膜过滤，灌装，冷冻干燥，即得本发明冻干粉500瓶。
实施例5：
(1)原料药重量份组成为：板蓝根600g，茵陈300g，甘草60g。
(2)取茵陈药材，加水浸泡30分钟后，用水蒸气蒸馏法提取挥发油，将收集的挥发油缓慢加入30倍量HP-β-CD饱和水溶液中，50℃-60℃保温条件下搅拌4小时，室温下继续搅拌3小时，冷藏过夜，过滤，干燥，得到茵陈挥发油包合物2.0g。
(3)取板蓝根加6倍量80％乙醇回流提取，乙醇回流液减压回收乙醇并浓缩，得板蓝根浓缩液；茵陈药渣和甘草加水煎煮2次，第一次2小时，第二次1小时，合并煎煮液，滤过，滤液减压浓缩，与板蓝根浓缩液合并，用HPD-450型大孔吸附树脂吸附，用水洗脱至近无色后，用6倍柱体积70％乙醇洗脱，洗脱液减压回收乙醇，用截留分子量为10000-20000的超滤膜超滤，滤液减压浓缩并真空干燥，粉碎，得到提取物50g。
(4)制剂处方为：挥发油包合物2.0g，提取物50g，乳糖50g。
(5)取上述包合物、提取物加注射用水溶解，滤过，加入乳糖，加注射用水至规定量，调节pH值至6.0-7.0，微孔滤膜过滤，灌装，冷冻干燥，即得本发明冻干粉500瓶。
Claims (4)
1、一种复方板蓝根冻干粉针剂，其特征在于它是由茵陈提取的挥发油的HP-β-CD包合物0.5-2重量份，板蓝根、茵陈、甘草经提取纯化后得到的提取物30-50重量份和药用辅料制备而成，其中药用辅料为甘露醇、葡萄糖、乳糖、葡聚糖和右旋糖酐中的一种或两种；其特征还在于上述提取物中靛玉红含量大于40μg/g，靛蓝含量大于42μg/g。
2、根据权利要求1的复方板蓝根冻干粉针剂的制备方法，其特征包括以下步骤：
(1)原料药重量份组成为：板蓝根4-6份，茵陈2-3份份，甘草0.4-0.6份。
(2)取茵陈药材，加水浸泡30分钟后，用水蒸气蒸馏法提取挥发油，将收集的挥发油缓慢加入到10-30倍量HP-β-CD饱和水溶液(v/g)中，50℃-60℃保温条件下搅拌2-4小时，室温下继续搅拌3小时，冷藏过夜，过滤，干燥，得到茵陈挥发油包合物。
(3)取板蓝根加4-6倍量60％-80％乙醇回流提取，乙醇回流液减压回收乙醇并浓缩，得板蓝根浓缩液；茵陈药渣和甘草加水煎煮2次，第一次2小时，第二次1小时，合并煎煮液，滤过，滤液减压浓缩，与板蓝根浓缩液合并，用大孔吸附树脂吸附，用水洗脱至近无色后，用4-6倍柱体积50％-70％乙醇洗脱，洗脱液减压回收乙醇，用截留分子量为10000-20000的超滤膜超滤，滤液减压浓缩并真空干燥，粉碎，得到提取物。
(4)取上述包合物、提取物加注射用水溶解，滤过，加入药用辅料，加注射用水至规定量，调节pH值至60-7.0，微孔滤膜过滤，灌装，冷冻干燥，即得。
3、根据权利要求2的制备方法，其特征在于大孔吸附树脂型号为HPD-450型。
4、根据权利要求2的制备方法，其特征在于大孔吸附树脂型号为D101型。
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2005
- 2005-03-18 CN CN 200510055293 patent/CN1682971A/zh active Pending
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