CN100344309C - 六味地黄复方制剂的膜技术分离精制方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及由中药材熟地、山茱萸、牡丹皮、山药、茯苓、泽泻组成的中药六味地黄复方制剂的膜技术分离精制方法，在常规水提工艺中，采用膜的截留分子量为5000～40000的聚砜或醋酸纤维素有机膜进行超滤去除杂质进一步分离精制，提取活性成分，再浓缩、干燥；该方法简化了提取精制工艺，不需消耗有机溶剂，操作简单，降低了成本，且生产易实现自动化；在保证产品疗效的基础上，减少服用量。

Description

六味地黄复方制剂的膜技术分离精制方法

                                 技术领域

本发明涉及中药六味地黄复方制剂的膜技术分离精制方法，即针对六味地黄复方制剂的水煎液，利用膜分离工艺提取活性成分，去除杂质，减少服用量的提取精制方法。

                                 背景技术

六味地黄汤是宋，钱乙在“小儿药证直诀”中首创，系滋阴补肾之经典名方，由熟地黄、山茱萸、山药、牡丹皮、泽泻、茯苓配伍组成，但见有潮热盗汗、腰膝酸软，失眠多梦，舌红少苔，脉细数等肝肾阴虚之证者均可使用，适用于一切阴虚火旺之证。

六味地黄复方制剂的配方来源于六味地黄汤，方中熟地的化学成分主要有环烯醚萜甙类和多糖，还有氨基酸、有机酸及无机元素等；牡丹皮的化学成分主要有甙类(主要为芍药甙)、丹皮酚，还有萜类、鞣质及挥发油等；山茱萸的化学成分主要有糖甙类及甙元(山茱萸甙及马钱素)，有机酸(熊果酸、齐墩果酸、没食子酸)，还有鞣质及微量元素等；山药的化学成分主要有薯蓣皂甙、多糖，还有淀粉、蛋白质、维生素类、无机元素及胡萝卜素、碳水化合物等；茯苓的化学成分主要有多糖类、三萜类(茯苓酸、茯苓素)，还有蛋白质、无机成分等；泽泻的化学成分主要有三萜类(泽泻醇)，还有生物碱、甙类、有机酸、氨基酸、多糖、挥发油等。方中的化学成分大多溶于水，采用水煎工艺能将方中的水溶性成分都提取出来，但提取物的量很大，如不进行除杂精制，势必导致服用剂量大，无法满足患者的需求。

目前六味地黄制剂有合剂，口服液，颗粒剂，片剂，蜜丸，水丸，浓缩丸，膏滋，软胶囊，硬胶囊等各种剂型，提取工艺大多采用了水提，水提醇沉或醇回流提取等技术制备而成，工艺过程较复杂，消耗大量的有机溶剂，而提取物中含大量杂质成份，存在难服用或服用剂量较大(每次8粒)的不足；现有公开号为1449806的专利文献“中药六味地黄制剂的生产工艺”中公开了用多次超滤技术提取六味地黄方中的多糖，用大孔树脂吸附方中的小分子有效成分，其工艺过程相当复杂；非专利文献如王厚廷等在《解放军药学学报》2001年第二期发表的“超滤法提取六味地黄汤活性多糖的工艺研究”一文中公开了用超滤技术提取多糖的方法，但方中其它小分子活性成份未能分离；又如郭立玮等在《南京中医药大学学报》1999年第二期发表的文章“大孔树脂吸附与超滤联用对六味地黄丸中丹皮酚和马钱素含量的影响”中，其提取工艺先采用大孔树脂技术提取水煎液中的小分子活性成分，再用超滤技术提取其中的多糖，虽能有效地减小服用量，但其工艺过程较复杂，生产成本相对较高；因此，寻找一种能有效提取六味地黄复方制剂中的活性成分，进一步分离精制，除去无效杂质，工艺简单，低成本的方法显得尤为迫切。

                                  发明内容

本发明的目的是简化产品的制备工艺，在保证产品疗效的基础上，减少服用量，采用膜技术提取六味地黄复方中的活性成分，除去蛋白质、淀粉、鞣质等杂质，对其进行精制。

本发明通过以下技术方案来实现：

采用有机膜对方中熟地、山茱萸、牡丹皮、山药、茯苓、泽泻六味中药材的水煎液进行超滤去除杂质，再浓缩、干燥。

该有机膜选用聚砜膜或醋酸纤维素膜。

本发明优选的方案可以是：

选用膜的截留分子量为5000～40000的聚砜膜或醋酸纤维素膜。

本发明更优选的方案可以是：

选用膜的截留分子量为6000～20000的聚砜膜或醋酸纤维素膜。

本发明六味地黄复方制剂中六味中药材混合后，采用常规水提工艺提取，经膜分离精制后，浓缩、干燥，加入药学上可接受的各种辅料，制成不同的剂型。

本发明与现有技术相比具有如下优点：

1.简化了提取精制工艺，操作简单，且生产易实现自动化；

2.膜技术分离精制过程是物理分离方法，不需消耗有机溶剂，降低了生产成本；

3.在保证产品疗效的基础上，减少服用量。

以下是六味地黄复方制剂不同提取工艺的药效对比实验：

一.实验材料

1.1试药

①六味地黄汤  1g生药/ml，10ml/日/60kg(人)，置4℃冰箱备用。

样品的制备：按六味地黄方处方比例称取各药材共1500克，加水煎煮二次，时间为1小时，0.5小时，合并煎液，称重，将煎液分成三等份，取其中一份作为六味地黄汤样品(500克生药)，将其减压浓缩制成1g生药/ml的浓缩液即得。

②精制工艺I样品  1g生药/ml，10ml/日/60kg(人)，置4℃冰箱备用

样品的制备：取上述煎液一份(500克生药)，高速离心后定容，离心液选用平均截留分子量为6千的超滤膜按“全过滤”操作方法进行超滤，所得透析液进行减压浓缩制成1g生药/ml的浓缩液即得

③精制工艺II样品  1g生药/ml，10ml/日/60kg(人)，置4℃冰箱备用

样品的制备：取上述煎液一份(500克生药)，高速离心后定容，离心液选用平均截留分子量为2万的超滤膜按“全过滤”操作方法进行超滤，所得透析液进行减压浓缩制成1g生药/ml的浓缩液即得

④六味地黄胶囊(精提型)  规格0.3克/粒，每次1粒，每日二次，

批号：20020902四川泰华药业有限公司生产。

1.2药品

三碘甲状腺原氨酸钠  批号20021207  上海长城生化制药厂

1.3动物

昆明种小白鼠  18-22克  ♂♀兼用  均由江西省动物中心提供。

2.各样品剂量的配制

2.1精制工艺I样品高低剂量的配制：取六味地黄片精制工艺I样品6.75ml、3.90ml用NS分别稀释至100ml，制成1.35ml/kg，0.78ml/kg高低剂量的溶液。

2.2精制工艺II样品高低剂量的配制：取六味地黄片精制工艺II样品6.75ml、3.90ml用NS分别稀释至100ml，制成1.35ml/kg，0.78ml/kg高低剂量的溶液。

2.3六味地黄汤：取六味地黄汤6.75ml用NS稀释至100ml，制成1.35ml/kg的溶液。

2.4六味地黄胶囊：取六味地黄胶囊0.39g用NS稀释至100ml，制成0.078g/kg的溶液。

2.5造模药液的配制：取三碘甲状腺原氨酸钠4.5mg用注射用水稀释至100ml，制成0.9mg/kg的溶液。

二.方法与结果

3.1动物分组：取小鼠80只，♂♀兼用，随机分8组。空白对照组、模型组、汤剂组、胶囊组、工艺I高剂组、工艺I低剂组，工艺II高剂组、工艺II低剂组

3.2给药：各组均灌胃给药

3.3观察指标：体重及耐缺氧时间

3.4对小鼠体重影响实验

以上各组小鼠，除空白对照组给每鼠灌服注射用水外，其余组每鼠每天上午灌服三碘甲状腺原氨酸钠0.9mg/kg(容积0.2ml/鼠)，连续5d，造成肾阴虚模型。

从第6d开始(每天下午)，各给药组小鼠分别灌服上述各不同剂量药液20ml/kg，空白对照组、模型组分别灌服等量的生理盐水，连续6d。每天称体重，计算给药前一天体重与最后一次给药体重差值，结果见表1。

3.5对小鼠耐缺氧能力实验

取上述最后一次给药称重后的小鼠，分别将其投入盛有2g钠石灰的密闭广口瓶内，每瓶一只。观察和记录每组各小鼠死亡时间(min)，结果下表：

表1  六味地黄不同精制工艺样品对三碘甲状腺原氨酸所致肾阴虚小鼠体重及耐缺氧的影响

组别	动物数	体重(kg)		耐缺氧(min)
					0天	6天增长差值
		NS组模型组精制工艺I  高精制工艺I  低精制工艺II 高精制工艺II 低六味地黄汤六味地黄胶囊	1010101010101010				22.46±2.1523.36±1.1922.93±1.5523.35±2.1223.53±2.2722.54±3.8423.39±2.2922.81±1.11	4.49±0.83*0.22±1.871.53±1.111.65±1.321.37±1.591.17±1.131.79±0.93*1.51±1.18	14.12±1.37*12.31±1.4213.58±1.3913.41±2.3013.33±1.3113.52±1.4114.47±1.55*13.05±0.53

注：X+SD与模型组比较*P＜0.05.

3.结论：

六味地黄汤，二种不同精制工艺样品，四川泰华药业有限公司生产的六味地黄胶囊(精提型)对三碘甲状腺原氨酸所致肾阴虚模型小鼠体重影响及其耐缺氧能力的作用无显著性差异。

                            具体实施方式

实施例1

处方：

熟地黄  320g        山茱萸  160g         牡丹皮  120g

茯苓    120g        山药    160g         泽泻    120g

取以上六味药共1公斤，加水浸泡40分钟后水煎提取2次，第一次加水量为药材量的9倍，煎煮1小时，第二次加水量为药材量的7倍；煎煮0.5小时，合并水煎液，经高速离心(2万转/分钟)，滤液定容至14升，取截留分子量为6000的材质为聚砜的平板式超滤膜0.04平方米按“全过滤”操作方法进行超滤(料液温度20～45℃，进压4～6bar，出压0.5～1.5bar)，收集超滤液16升，超滤液进行减压浓缩，减压干燥，得提取物92克，加适量辅料混匀，制成片剂。

实施例2

处方：

熟地黄  320g        山茱萸  160g        牡丹皮  120g

茯苓    120g        山药    160g        泽泻    120g

取以上六味药共1公斤，加水浸泡40分钟后水煎提取2次，第一次加水量为药材量的9倍，煎煮1小时，第二次加水量为药材量的7倍；煎煮0.5小时，合并水煎液，经高速离心(2万转/分钟)，滤液定容至14升，取截留分子量为6000的材质为醋酸纤维素的平板式超滤膜0.04平方米按“全过滤”操作方法进行超滤(料液温度20～45℃，进压4～6bar，出压0.5～1.5bar)，收集超滤液16升，超滤液进行减压浓缩，减压干燥，得提取物96克，加适量辅料混匀，制成片剂。

实施例3

熟地黄  160g      山茱萸  80g       牡丹皮  60g

茯苓    60g       山药    80g       泽泻    60g

取以上六味药共0.5公斤，加水浸泡40分钟后水煎提取2次，第一次加水量为药材量的9倍，煎煮1小时，第二次加水量为药材量的7倍；煎煮0.5小时，合并水煎液，经高速离心(2万转/分钟)，滤液定容至6升，取截留分子量为5000的材质为聚砜的平板式超滤膜0.04平方米按“全过滤”操作方法进行超滤(料液温度20～45℃，进压4～6bar，出压0.5～1.5bar)，收集超滤液8升，超滤液进行减压浓缩，减压干燥，得提取物46克，加适量辅料混匀，制成颗粒剂。

实施例4

处方：

熟地黄  160g       山茱萸  80g       牡丹皮  60g

茯苓    60g        山药    80g       泽泻    60g

取以上六味药共0.5公斤，加水浸泡40分钟后水煎提取2次，第一次加水量为药材量的9倍，煎煮1小时，第二次加水量为药材量的7倍；煎煮0.5小时，合并水煎液，经高速离心(2万转/分钟)，滤液定容至6.5升，取截留分子量为5000的材质为醋酸纤维素的平板式超滤膜0.04平方米按“全过滤”操作方法进行超滤(料液温度20～45℃，进压4～6bar，出压0.5～1.5bar)，收集超滤液8升，超滤液进行减压浓缩，减压干燥，得提取物40克，加适量辅料混匀，制成颗粒剂。

实施例5

处方：

熟地黄  176g       山茱萸  88g         牡丹皮  66g

茯苓    66g        山药    88g         泽泻    66g

取以上六味药，加水浸泡40分钟后水煎提取3次，第一次加水量为药材量的12倍，煎煮2小时，第二次加水量为药材量的10倍；煎煮2小时，第三次加水量为药材量的8倍；煎煮1小时，合并水煎液，经高速离心(2万转/分钟)，滤液定容至9升，取截留分子量为40000的材质为聚砜的平板式超滤膜0.04平方米按“全过滤”操作方法进行超滤(料液温度20～45℃，进压4～6bar，出0.5～1.5bar)，收集超滤液11升，超滤液进行减压浓缩，减压干燥，得提取物125克，加适量辅料混匀，制成胶囊剂。

实施例6

处方：

熟地黄  176g       山茱萸  88g        牡丹皮  66g

茯苓    66g        山药    88g        泽泻    66g

取以上六味药，加水浸泡40分钟后水煎提取3次，第一次加水量为药材量的12倍，煎煮2小时，第二次加水量为药材量的10倍；煎煮2小时，第三次加水量为药材量的8倍；煎煮1小时，合并水煎液，经高速离心(2万转/分钟)，滤液定容至9升，取截留分子量为40000的材质为醋酸纤维素的平板式超滤膜0.04平方米按“全过滤”操作方法进行超滤(料液温度20～45℃，进压4～6bar，出压0.5～1.5bar)，收集超滤液11升，超滤液进行减压浓缩，减压干燥，得提取物135克，加适量辅料混匀，制成胶囊剂。

实施例7

处方：

熟地黄  160g         山茱萸  80g         牡丹皮  60g

茯苓    60g          山药    80g         泽泻    60g

取以上六味药，加水浸泡40分钟后水煎提取3次，第一次加水量为药材量的12倍，煎煮2小时，第二次加水量为药材量的10倍；煎煮2小时，第三次加水量为药材量的8倍；煎煮1小时，合并水煎液，经高速离心(2万转/分钟)，滤液定容至8升，取截留分子量为20000的材质为聚砜的平板式超滤膜0.04平方米按“全过滤”操作方法进行超滤(料液温度20～45℃，进压4～6bar，出压0.5～1.5bar)，收集超滤液10升，超滤液进行减压浓缩，减压干燥，得提取物94克，加适量辅料混匀、制成胶囊剂。

实施例8

处方：

熟地黄  160g       山茱萸  80g         牡丹皮  60g

茯苓    60g        山药    80g         泽泻    60g

取以上六味药，加水浸泡40分钟后水煎提取3次，第一次加水量为药材量的12倍，煎煮2小时，第二次加水量为药材量的10倍；煎煮2小时，第三次加水量为药材量的8倍；煎煮1小时，合并水煎液，经高速离心(2万转/分钟)，滤液定容至8升，取截留分子量为20000的材质为醋酸纤维素的平板式超滤膜0.04平方米按“全过滤”操作方法进行超滤(料液温度20～45℃，进压4～6bar，出压0.5～1.5bar)，收集超滤液10升，超滤液进行减压浓缩，减压干燥，得提取物99克，加适量辅料混匀，制成胶囊剂。

实施例9

处方：

熟地黄  160g       山茱萸  80g        牡丹皮  60g

茯苓    60g        山药    80g        泽泻    60g

取以上六味药，加水浸泡40分钟后水煎提取3次，第一次加水量为药材量的12倍，煎煮2小时，第二次加水量为药材量的10倍；煎煮2小时，第三次加水量为药材量的8倍；煎煮1小时，合并水煎液，经高速离心(2万转/分钟)，滤液定容至8升，取截留分子量为19000的材质为聚砜的平板式超滤膜0.04平方米按“全过滤”操作方法进行超滤(料液温度20～45℃，进压4～6bar，出压0.5～1.5bar)，收集超滤液10升，超滤液进行减压浓缩，减压干燥，得提取物92克，加适量辅料混匀，制成胶囊剂。

实施例10

处方：

熟地黄  160g        山茱萸  80g         牡丹皮  60g

茯苓    60g         山药    80g         泽泻    60g

取以上六味药，加水浸泡40分钟后水煎提取3次，第一次加水量为药材量的12倍，煎煮2小时，第二次加水量为药材量的10倍；煎煮2小时，第三次加水量为药材量的8倍；煎煮1小时，合并水煎液，经高速离心(2万转/分钟)，滤液定容至8升，取截留分子量为19000的材质为醋酸纤维素的平板式超滤膜0.04平方米按“全过滤”操作方法进行超滤(料液温度20～45℃，进压4～6bar，出压0.5～1.5bar)，收集超滤液10升，超滤液进行减压浓缩，减压干燥，得提取物95克，加适量辅料混匀，制成胶囊剂。

Claims (3)

1.一种由中药材熟地、山茱萸、牡丹皮、山药、茯苓、泽泻组成的六味地黄复方制剂的膜技术分离精制方法，在常规水提工艺中，采用膜技术进一步分离精制，再浓缩、干燥；其特征在于：分离精制采用聚砜或醋酸纤维素有机膜进行超滤去除杂质。

2.根据权利要求1所述的六味地黄复方制剂膜技术分离精制方法，其特征在于：聚砜膜或醋酸纤维素膜的截留分子量为5000～40000。

3.根据权利要求2所述的六味地黄复方制剂膜技术分离精制方法，其特征在于：聚砜膜或醋酸纤维素膜的截留分子量为6000～20000。