CN107638431A - 一种艾叶精油的制备工艺及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于中药技术领域，具体涉及一种艾叶精油的制备工艺及其应用。本发明提供了一种艾叶精油的制备工艺，包括以下步骤：艾叶粉碎，酶提取，过滤，水蒸气蒸馏；艾叶残渣超声提取，过滤；合并，干燥，浓缩。本发明提供的艾叶精油的制备工艺不仅可以提高挥发油提取率，减小挥发油损失，提高了其安全性。同时本发明制备的艾叶精油对鸭血清及肝脏中DHBV DNA均有抑制作用，且效果较好。
Description
技术领域
本发明属于中药技术领域，具体涉及一种艾叶精油的制备工艺及其应用。
背景技术
艾叶，为菊科植物艾的干燥叶，是常用中药材，具有散寒止痛、温经止血，调经安胎、除湿止痒和通经活络等功效。中医取艾叶入药，归肝、脾、肾经，味辛苦，性温，具有抗菌、抗病毒、抗过敏、散寒止痛，温经止血等功能。艾叶的主要有效成分是挥发油类物质，对艾叶挥发油通过大量的研究，鉴定出其中含有黄酮类、桉叶烷、萜类和多糖等药用的有效成分。现代药理研究表明，其挥发油不仅具有抑菌抗炎、抗病毒、平喘、镇咳、祛痰、止血等功能，而且是香料工业、食品工业及化妆品行业的重要原料。目前，艾叶挥发油的提取方法有很多种，有水蒸气蒸馏法、溶剂萃取法、石油醚提取法等，但是目前的提取方法，挥发油提取率低，挥发油损失大。
中国专利申请CN105462690A公开了一种艾叶精油，所述艾叶精油的制备包括如下步骤：A)向环己烷中加入乙醇，加热回流，分液收集萃取后环己烷；B)将艾叶粉碎，加入所述萃取后环己烷，浸泡，超声波提取，过滤，收集滤液；C)向所述滤液中加入乙醇，混匀，分液收集含艾叶油的乙醇；D)将所述含艾叶油的乙醇通过硅胶柱，然后用乙醇清洗硅胶柱，再用含乙酸乙酯的环己烷溶液洗脱硅胶柱，收集洗脱液；E)将所述洗脱液旋转蒸发，经二次冷凝分离，得到艾叶精油。虽然该发明提供的艾叶精油不含蜡质成分，且挥发性高，但其挥发油提取率低，挥发油损失大。
中国专利申请CN104178352A公开了一种艾叶挥发油的提取方法及其应用，所述提取方法的工艺步骤是：原材料的处理→浸泡→酶解→蒸馏→萃取→干燥，即得艾叶挥发油。该工艺过程简单、合理、操作时间短，但是其挥发油提取率低，挥发油损失大。
发明内容
为了解决现有技术中存在的问题，本发明的目的在于提供一种艾叶精油的制备工艺及其应用。本发明提供的艾叶精油的制备工艺不仅可以提高挥发油提取率，减小挥发油损失，提高了其安全性；同时可以有效缩短极性较大物质的洗脱时间。
本发明提供了一种艾叶精油的制备工艺，包括以下步骤：
(1)将艾叶粉碎，过40目筛，得艾叶粉末；
(2)向步骤(1)所得粉末中加入蒸馏水，在30-40℃条件下浸泡10-30min，再搅拌加入艾叶粉末0.4-1.0％重量的生物酶处理40-60min，过滤，得滤液A和艾叶残渣；
(3)将步骤(2)所得滤液A水蒸气蒸馏处理，蒸馏提取20-40min，静置，分离，得提取液；
(4)向步骤(2)所得艾叶残渣中加入所述艾叶残渣2-5倍重量的提取剂，浸泡20-30min，超声波提取30-60min，过滤，得滤液B；
(5)将步骤(3)所得提取液与步骤(4)所得滤液B合并，得混合液C；
(6)将步骤(5)所得混合液C无水硫酸钠干燥，过滤，60℃常压浓缩，即得。
本发明通过生物酶破坏艾叶细胞壁，进而提高其挥发油的提取率；通过30-60℃石油醚与二氯甲烷混合对滤渣进行提取，有效提高了挥发油的提取率。30-60℃石油醚，购于济南世纪通达化工有限公司。
进一步地，所述步骤(2)中生物酶由纤维素酶和果胶酶按重量比3:1组成。
进一步地，所述步骤(4)中超声波的频率为20-40kHz。
进一步地，所述步骤(4)中提取剂由30-60℃石油醚与二氯甲烷按体积比2:1组成。
进一步地，所述的艾叶精油的制备工艺制备得到的艾叶精油在制备治疗乙型肝炎药物中的应用。
本发明采用酶及超声提取的方法提取艾叶精油，艾叶得到了充分的利用，减少了浪费。
与现有技术相比，本发明提供的艾叶精油的制备工艺不仅可以提高挥发油提取率，减小挥发油损失，提高了其安全性。同时本发明制备的艾叶精油对鸭血清及肝脏中DHBVDNA均有抑制作用，且效果较好。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明做进一步的说明，这些实施例仅用于例证的目的，并不限制本发明的保护范围。
实施例1 一种艾叶精油的制备工艺
所述艾叶精油的制备工艺包括以下步骤：
(1)将艾叶粉碎，过40目筛，得艾叶粉末；
(2)向步骤(1)所得粉末中加入蒸馏水，在30℃条件下浸泡10min，再搅拌加入艾叶粉末0.4％重量的生物酶处理40min，过滤，得滤液A和艾叶残渣；
(3)将步骤(2)所得滤液A水蒸气蒸馏处理，蒸馏提取20min，静置，分离，得提取液；
(4)向步骤(2)所得艾叶残渣中加入所述艾叶残渣2倍重量的提取剂，浸泡20min，20kHz频率超声波提取30min，过滤，得滤液B；
(5)将步骤(3)所得提取液与步骤(4)所得滤液B合并，得混合液C；
(6)将步骤(5)所得混合液C无水硫酸钠干燥，过滤，60℃常压浓缩，即得。
所述步骤(2)中生物酶由纤维素酶和果胶酶按重量比3:1组成。
所述步骤(4)中提取剂由30-60℃石油醚与二氯甲烷按体积比2:1组成。
实施例2 一种艾叶精油的制备工艺
所述艾叶精油的制备工艺包括以下步骤：
(1)将艾叶粉碎，过40目筛，得艾叶粉末；
(2)向步骤(1)所得粉末中加入蒸馏水，在35℃条件下浸泡20min，再搅拌加入艾叶粉末0.7％重量的生物酶处理50min，过滤，得滤液A和艾叶残渣；
(3)将步骤(2)所得滤液A水蒸气蒸馏处理，蒸馏提取30min，静置，分离，得提取液；
(4)向步骤(2)所得艾叶残渣中加入所述艾叶残渣3.5倍重量的提取剂，浸泡25min，30kHz频率超声波提取45min，过滤，得滤液B；
(5)将步骤(3)所得提取液与步骤(4)所得滤液B合并，得混合液C；
(6)将步骤(5)所得混合液C无水硫酸钠干燥，过滤，60℃常压浓缩，即得。
所述步骤(2)中生物酶由纤维素酶和果胶酶按重量比3:1组成。
所述步骤(4)中提取剂由30-60℃石油醚与二氯甲烷按体积比2:1组成。
实施例3 一种艾叶精油的制备工艺
所述艾叶精油的制备工艺包括以下步骤：
(1)将艾叶粉碎，过40目筛，得艾叶粉末；
(2)向步骤(1)所得粉末中加入蒸馏水，在40℃条件下浸泡30min，再搅拌加入艾叶粉末1.0％重量的生物酶处理60min，过滤，得滤液A和艾叶残渣；
(3)将步骤(2)所得滤液A水蒸气蒸馏处理，蒸馏提取40min，静置，分离，得提取液；
(4)向步骤(2)所得艾叶残渣中加入所述艾叶残渣5倍重量的提取剂，浸泡30min，超声波提取60min，过滤，得滤液B；
(5)将步骤(3)所得提取液与步骤(4)所得滤液B合并，得混合液C；
(6)将步骤(5)所得混合液C无水硫酸钠干燥，过滤，60℃常压浓缩，即得。
所述步骤(2)中生物酶由纤维素酶和果胶酶按重量比3:1组成。
所述步骤(4)中提取剂由30-60℃石油醚与二氯甲烷按体积比2:1组成。
实施例4 一种艾叶精油口服制剂
将实施2制备的艾叶精油作为原料，加入常规辅料，制备成艾叶精油口服制剂。
对比例1 一种艾叶精油的制备工艺
所述艾叶精油的制备工艺包括以下步骤：
(1)将艾叶粉碎，过40目筛，得艾叶粉末；
(2)向步骤(1)所得粉末中加入蒸馏水，在35℃条件下浸泡20min，再搅拌加入艾叶粉末0.7％重量的生物酶处理50min，过滤，得滤液A和艾叶残渣；
(3)将步骤(2)所得滤液A水蒸气蒸馏处理，蒸馏提取30min，静置，分离，得提取液；
(4)向步骤(2)所得艾叶残渣中加入所述艾叶残渣3.5倍重量的提取剂，浸泡25min，30kHz频率超声波提取45min，过滤，得滤液B；
(5)将步骤(3)所得提取液与步骤(4)所得滤液B合并，得混合液C；
(6)将步骤(5)所得混合液C无水硫酸钠干燥，过滤，60℃常压浓缩，即得。
所述步骤(2)中生物酶由纤维素酶和果胶酶按重量比3:1组成。
所述步骤(4)中提取剂为30-60℃石油醚。
与实施例2的区别在于，所述步骤(4)中提取剂中未添加二氯甲烷。
试验例一、挥发油提取率及蜡质含量比较
对实施例1-3及对比例1所制备的艾草精油检测分析，并计算其挥发油提取率及蜡质等含量，结果如表1所示。
表1 艾草精油挥发油提取率及蜡质含量结果
| 组别 | 实施例1组 | 实施例2组 | 实施例3组 | 对比例1组 |
| 挥发油提取率/％ | 3.01 | 3.24 | 3.13 | 2.72 |
| 蜡质含量/％ | 0.27 | 0.12 | 0.20 | 0.35 |
由表1可知，本发明提供的艾草精油的制备工艺挥发油提取率较高，蜡质含量较少。而对比例1提供的艾草精油的制备工艺中挥发油的损失较大，蜡质含量较高，说明本发明采用30-60℃石油醚与二氯甲烷提取滤渣提高了挥发油提取率，且提取率高达3.01％，蜡质含量低于0.27％，取得了显著的进步。
试验例二、艾叶精油抗乙肝病毒试验
1.试验材料
实施例4制备的艾叶精油口服剂；
鸭乙肝病毒(DHBV)强阳性血清；
樱桃谷鸭100只，雌雄各半，购自广州某鸭场，用作构建动物模型；
引物：根据收录的区核苷酸的保守序列，利用软件设计对引物；DHBV DNA引物序列：上游引物SP1：5’-CGGACAACGGGTCTAT-3’，下游引物SP2：5’-GGTGGCAGAGGAGGAAGT-3’；扩增的特异性目的基因片段为148bp，引物由北京博尚生物公司合成。
2.动物模型制备
樱桃谷鸭100只，分别经颈静脉无菌釆血分离血清，并提取病毒DNA。用普通PCR方法检测筛选出先天阴性、体况基本一致的鸭供试验用。
选取70只上述阴性鸭，经腿腔静脉注射DHBV阳性鸭血清0.2mL，感染后7天自颈静脉釆血，分离血清，经PCR检测阳性者即可进入给药试验。
3.分组及给药
取阴性对照鸭10只，为阴性对照组，灌服生理盐水；
取DHBV阳性模型鸭50只，分成5组，为阳性对照组、阳性药物组、低剂量组、中剂量组和高剂量组，分别灌服生理盐水、灌服拉米夫定100mg/kg、灌服艾叶精油5mg/kg、灌服艾叶精油20mg/kg、灌服艾叶精油100mg/kg。
以上各组均在相同饲养条件下饲养，试验所有给药组按照各组剂量每天早晨于饲喂前根据体重经口腔灌服给药，共给药10天。
4.荧光定量PCR法测定给药前后对血清和肝脏中DHBV DNA水平影响
用药前、用药第5天、用药第10天和停药后第3天，以无菌操作方法从颈静脉釆血，并杀鸭取肝组织，每次每组各采3只；分离血清，将血清和肝组织置于-70℃待检。用荧光定量PCR检测DHBV方法检测各样品DHBV DNA含量。
计算各组焚光定量PCR检测DHBVDNA的Ct值的平均值，将Ct值通过标准曲线转化为拷贝数。根据公式计算每组鸭用药后不同时间血清和肝脏中与给药前的抑制率，以此判断试验药物的治疗效果。并对整个检测结果进行分析。计算DHBVDNA抑制率，公式如下：
DHBVDNA抑制率％＝(空白对照组拷贝数－给药组拷贝数)/空白对照组拷贝数×100％
5.试验结果
本发明制备的艾叶精油对鸭血清及肝脏中DHBV DNA的抑制情况见表2。
表2 艾叶精油对鸭血清及肝脏中DHBV DNA的抑制结果
由表2可知，本发明制备的艾叶精油对鸭血清及肝脏中DHBV DNA均有抑制作用。
Claims (5)
1.一种艾叶精油的制备工艺，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将艾叶粉碎，过40目筛，得艾叶粉末；
(2)向步骤(1)所得粉末中加入蒸馏水，在30-40℃条件下浸泡10-30min，再搅拌加入艾叶粉末0.4-1.0％重量的生物酶处理40-60min，过滤，得滤液A和艾叶残渣；
(3)将步骤(2)所得滤液A水蒸气蒸馏处理，蒸馏提取20-40min，静置，分离，得提取液；
(4)向步骤(2)所得艾叶残渣中加入所述艾叶残渣2-5倍重量的提取剂，浸泡20-30min，超声波提取30-60min，过滤，得滤液B；
(5)将步骤(3)所得提取液与步骤(4)所得滤液B合并，得混合液C；
(6)将步骤(5)所得混合液C无水硫酸钠干燥，过滤，60℃常压浓缩，即得。
2.如权利要求1所述的艾叶精油的制备工艺，其特征在于，所述步骤(2)中生物酶由纤维素酶和果胶酶按重量比3:1组成。
3.如权利要求1所述的艾叶精油的制备工艺，其特征在于，所述步骤(4)中超声波的频率为20-40kHz。
4.如权利要求1所述的艾叶精油的制备工艺，其特征在于，所述步骤(4)中提取剂由30-60℃石油醚与二氯甲烷按体积比2:1组成。
5.如权利要求要求1-4任一所述的艾叶精油的制备工艺制备得到的艾叶精油在制备治疗乙型肝炎药物中的应用。
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