CN1625399A - 硬变肝再生的药物组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种药物组合物及其在肝组织再生以治疗肝硬变中的应用，该组合物包含5－(2－吡嗪基)－4－甲基－1，2－二硫酚－3－硫酮(奥替普拉)作为活性成分。奥替普拉组合物促进在硬变肝中肝组织的再生，因此用于治疗肝硬变。

Description

硬变肝再生的药物组合物
发明领域
本发明涉及用于再生患肝硬变的患者肝组织的药物组合物以及该组合物作为硬变肝的肝组织再生剂的应用。
相关技术描述
肝在生物异源物质的代谢和内源物质的代谢中起着重要作用。肝是一个重要器官，恒定的酶促反应和能量代谢在肝中进行。在韩国的许多慢性病中，肝炎、肝硬变和肝癌是次于心血管病分布最广和威胁生命的疾病。特别是长期饮酒和暴饮导致很可能损伤肝。由病毒感染或酒精消费导致的慢性肝损伤经常是肝硬变或纤维化的原因。
肝硬变是一种高死亡率的慢性肝病，症状是实质细胞的破坏和结缔组织的累积。硬变被认为是在肝感染和其它慢性肝病中损害最严重的一种。硬变发生在损伤的肝细胞不恢复为正常细胞而是转变成纤维组织如胶原并且肝的实质细胞被破坏的时候，其导致肝功能和尺寸的衰退。因为硬变可能导致人死亡，急需开发合适的治疗和预防药物。然而，没有用于治疗硬变、再生肝细胞的已知药物。
各种物质，包括几种合成化合物和草药制剂在体内和体外都显示护肝功能。尽管已知作为细胞因子抑制或谷胱甘肽水平提高的结果，水飞蓟素和甜菜碱具有保护肝的作用，但这种结果的作用低，因此难以获得治疗成功。
已经知道在十字花科蔬菜中天然发现的几种含硫二硫酚硫酮的取代基有保护肝的作用。它们之中，由化学式1表示的奥替普拉在二十世纪八十年代早期被用作血吸虫病的治疗剂。
[化学式1]
奥替普拉增加细胞的硫醇含量，诱导负责维持谷胱甘肽(GSH)库的酶的表达，并且解除组织中亲电分子的毒害作用。奥替普拉增加以下酶的活性：NAD(P)H醌还原酶，微粒体环氧化物水解酶，谷胱甘肽硫转移酶(GST)和UDP葡糖醛酸基转移酶(UDP-GT)。特别是，GST保护肝免受四氯化碳和对乙酰氨基酚(Ansher SS，Dolan P，和Bueding E.Chemoprotective effects of two dithiolthiones and of butylhydroxyanisoleagainst carbon tetrachloride and acetaminophen toxicity.1983，Hepatology 3，932-935)。
此外，奥替普拉抑制由苯并[a]芘、NDEA和尿嘧啶芥子气的化学致癌作用，以及黄曲霉毒素B1诱导的肝致肿瘤作用和氧化偶氮甲烷诱导的结肠致癌作用(Bolton MG，Munoz A，Jacobson L P，Groopman JD，MaxuitenkoYY，Roebuck BD，和Kensler TW.Transient intervention with oltiprazprotects against aflatoxin-induced hepatic tumorigenesis.1993，Cancer Res.53，3499-3504)。
已知通过奥替普拉的致癌作用的抑制机制如下。第一，奥替普拉增加组织中一种抗氧化剂，还原型GSH的水平。第二，它通过抑制I期酶如细胞色素P450抑制致癌物的生物激活。第三，它通过诱导包括GST和UDP-GT的II期解毒酶促进致癌物的解毒。第四，奥替普拉抑制人类免疫缺陷病毒(HIV)的体外复制。第五，它通过增加硫醇水平来消除细胞中的活性中间体并且促进DNA修复。据报道奥替普拉提高大部分组织中的GSH水平并且清除辐射和异生素产生的自由基。也已经知道奥替普拉通过协助保持细胞稳态起抗辐射的保护剂的作用。
已经进行了奥替普拉对肝癌发生的化学预防作用的临床试验。结果表明奥替普拉有微弱的抑制肝癌发生的活性，并且奥替普拉至少中等程度保护肝避免毒物诱导的肝毒性。另外，奥替普拉的安全性已经在大鼠和狗中进行的毒性研究中证实(Fund.Appl.Toxicol.1997年1月；35(1)：9-21)。
然而，还未报道有效再生硬变肝的肝细胞的化学组合物。因此，考虑到肝在人体内的生物学功能和重要性，有必要开发在治疗肝硬变中具有成功治疗效果的药物。
发明概述
本发明提供一种有效再生硬变肝的肝组织的药物组合物。在一方面，本发明提供用于再生硬变肝的肝组织的组合物，其包含5-(2-吡嗪基)-4-甲基-1，2-二硫酚-3-硫酮(奥替普拉)作为活性成分。
附图简述
通过参考附图详细描述其例举的实施方案，本发明的特征和优势将变得明显，在附图中：
图1是显示施用奥替普拉的肝硬变大鼠存活率增加的图表。
图2是肝硬变大鼠肝组织和在奥替普拉给药和Masson’s三色染色后的肝组织的照片。
图3a是显示在奥替普拉给药后肝硬变大鼠中腹水减少的图表。
图3b是显示在奥替普拉给药后肝硬变大鼠中血浆清蛋白增加的图表。
图4a表示在奥替普拉给药后肝硬变大鼠肝重增加的图表。
图4b表示显示通过奥替普拉给药于肝硬变大鼠激活肝细胞分裂的照片。
图5a表示在肝硬变大鼠中通过奥替普拉给药导致肝细胞分裂和再生的在PCNA染色后的照片。
图5b表示照片，其显示在肝硬变大鼠中由于奥替普拉给药促使未分化的干细胞变成分化干细胞。(上：Thy.1染色，下：Flt-3染色)
图6a是凝胶电泳照片，其显示在肝硬变大鼠中由于奥替普拉给药导致c-Met表达的增加。
图6b是凝胶电泳照片，其显示在奥替普拉给药后在肝硬变大鼠中C/EBP-β活化剂LAP的增加，抑制因子LIP的减少，以及C/EBP-α表达的恢复。
图7a是凝胶电泳照片，其显示在肝细胞与奥替普拉温育后在细胞的核级分中C/EBP-β量的逐渐增加。
发明详述
基于为了最终治疗肝硬变的事实，不仅需要抑制肝硬变的进展，而且必须恢复和再生损伤的组织，发明人努力开发一种具有很小的副作用并有效再生硬变肝组织的药物组合物，并且发现奥替普拉在再生硬变肝组织中有效。
奥替普拉对肝组织的再生能力通过本发明的试验结果来证明。
在本发明中，在大鼠模型中观察奥替普拉在校正肝组织硬变和纤维化中的治疗和再生作用，为了诱导肝硬变或肝纤维化所述大鼠已经施用二甲基亚硝胺(DMA)4周。结果表面尽管在给药奥替普拉之前，大鼠的存活率逐渐减小，在给药后，大鼠存活率有统计学显著的提高。另外，与肝硬变大鼠的血浆中增加的天冬氨酸氨基转移酶(AST)相比，奥替普拉给药后的血浆显示减小的AST活性。
血浆中白蛋白含量是肝脏症状的一种代表性指示物，白蛋白对控制血浆的渗透压是必要的。肝硬变大鼠中的奥替普拉显著恢复降低的白蛋白水平到正常水平，并进一步使血浆中渗透压正常化，由此使肝硬变伴随的腹水减少。
根据对硬变肝的组织病理学显微镜检查所得到的纤维化分数和Knodell分数，观察到大量纤维累积在门静脉和发炎区域。然而，在奥替普拉给药后，这些肝损伤被显著修复。
除前述作用以外，奥替普拉给药增加先前由于肝硬变导致萎缩的肝重量。对硬变肝进行组织病理学显微镜检查表明频繁的肝细胞分裂。另外，增殖细胞核抗原(PCNA)通常仅在细胞生长期出现，通过在细胞免疫化学染色后在显微镜下研究PCNA，施用奥替普拉的大鼠显示具有PCNA的肝细胞的数量显著增加。这种PCNA表达的增加通过蛋白质印迹分析证实。
另外，与肝细胞增殖相关的其它蛋白，如c-Met，肝细胞生长因子的受体，和CCAAT/增强子结合蛋白(C/EBP-β)，一种肝脏富含的活性蛋白(LAP)，其在肝硬变大鼠中都减少，但在施用奥替普拉的大鼠中都恢复了。另一方面，奥替普拉给药减少了C/EBP-β的截短同工型(isoform)的表达，C/EBP-β是一种肝脏富含的抑制蛋白(LIP)。
当肝的未分化干细胞被染色后，肝硬变大鼠显示有许多干细胞。然而，施用奥替普拉的大鼠显示肝中的干细胞显著减少。这个发现支持了奥替普拉诱导未分化干细胞转变成分化肝细胞的推论。
因此，由于奥替普拉通过增强的细胞分裂和增殖再生组织的能力，获得本发明组合物活性成分奥替普拉的治疗作用。
当生产实际使用的本发明的药物组合物时，按照适当药物领域中采用的常规方法配制和施用适于口服给药、注射等的单位剂量形式。
适当的口服制剂包含硬或软胶囊、片剂、散剂、糖浆等。除了作为药物活性剂的奥替普拉以外，口服制剂可以包含一种或多种药物非活性常规载体。例如，口服制剂可以包含赋形剂如淀粉、乳糖、羧甲基纤维素和高岭土；粘合剂如水、明胶、醇、葡萄糖，阿拉伯胶和黄芪胶；崩解剂如淀粉、糊精和藻酸钠；和润滑剂如硬脂酸、硬脂酸镁和液体石蜡。
按照本发明的药物组合物的日剂量取决于各种因素，如患者肝硬变程度、病发时间、年龄、健康状况、其它并发症等。然而，对于普通成人，奥替普拉每天给药1次或2次，总日剂量为10-1000mg，更优选50-300mg。然而，如果病人的肝硬变很严重，本发明可以超出上面的药物组合物的范围，使用甚至更大的剂量。
在下面实施例中更详细地解释本发明。然而，本发明不局限于这些实施例。
实施例
下述实施例中使用6周龄的140-160g的Sprague-Dawley大鼠。
实施例1-肝硬变大鼠的存活率
通过对大鼠连续施用二甲基亚硝胺(DMN)3次/周共4周，得到肝硬变的试验模型。此时，将只显示肝纤维化的大鼠和显示肝硬变的大鼠放在不同组，在接下来的4周内研究肝硬变大鼠和肝纤维化大鼠的存活率。
肝硬变试验模型的存活率随时间推移逐渐减少，4周后存活率为48％。对大鼠施用30mg/kg的奥替普拉，每周3次共4周，存活率增加到83％，表明在统计学上有显著改善。另外，在每周3次对大鼠施用30mg/kg的奥替普拉后，肝纤维化大鼠没有死亡。
实施例2-通过研究组织样品肝硬变的改善
研究了奥替普拉对肝硬变的组织病理学作用。肝硬变大鼠的肝组织显示有大量纤维累积在血管周围，作为累积的结果形成硬变结节。当将肝硬变大鼠施用15或30mg/kg奥替普拉，每周3次共4周时，纤维的累积以剂量依赖性的方式减少。
通过在Masson’s三色染色后获得的纤维化分数和通过显示门静脉炎症和肝纤维化程度的Knodell分数，组织病理学确定奥替普拉对肝硬变的治疗作用(图2，表1)。结果表明当施用15或30mg/kg的奥替普拉时有效治疗肝硬变。
在图2中，A是正常大鼠肝组织的照片。B是来自患有肝硬变的组的肝组织的照片。C是来自施用15mg/kg奥替普拉，每周3次共4周，患有肝硬变的组的肝组织照片，D是来自施用30mg/kg奥替普拉，每周3次共4周，患有肝硬变的组的肝组织照片。
表1  奥替普拉对肝硬变的作用
    组     纤维化分数     Knodell分数
    对照        0         0
    肝硬变组     3.8±0.2     14.0±0.8
    肝硬变组+15mg/kg奥替普拉     2.9±0.4     8.7±1.1**
    肝硬变组+30mg/kg奥替普拉     2.8±1.1*     6.8±2.5**
    纤维化组     2.2±0.5a     6.0±1.2a
    纤维化组+15mg/kg奥替普拉     2.8±0.4     7.0±1.2
    肝纤维化组+30mg/kg奥替普拉     1.0±0.0**     2.6±0.4*
每个值都以平均值±标准偏差表示。使用动物数为5～10。每组的显著性通过配对student’s t-检验确定。显著性通过与肝硬变和肝纤维化的大鼠比较*p＜0.05，**p＜0.01表示。肝纤维化的大鼠比肝硬变大鼠的Knodell分数低(a，p＜0.05)。纤维化程度度0＝正常，1＝弱纤维化组织出现，2＝中度纤维化组织出现，3＝明显纤维化组织出现，4＝明显严重纤维化。将以下几种值相加：门静脉周桥连(最大值＝10)、小叶内细胞损失(最大值＝4)、门静脉发炎(最大值＝4)、纤维化(最大值＝4)即得Knodell分数。
实施例3--肝硬变动物血液生化参数
与正常动物相比，肝硬变大鼠的丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)的活性各自增加了3～4倍。当对大鼠给药奥替普拉15mg/kg，每周3次共4周时，血浆中ALT和AST活性降低，当给药奥替普拉30mg/kg时，AST值降低约70％，显示统计显著性(表2)。
血浆中胆红素量是肝能力的指示物。作为在肝硬变大鼠中施用奥替普拉的结果，作为肝硬变作用生产的胆红素量趋于减少。血浆中的总胆固醇水平在肝硬变大鼠和奥替普拉治疗的肝硬变大鼠中没有显示出显著变化(表2)。
表2  血浆中ALT、AST、胆红素和胆固醇
组 ALT  AST  胆红素  胆固醇
对照 55±4  141±18  1.1±0.1  97±6
肝硬变组 138±14*  275±36*  2.7±0.8  152±30
肝硬变组+15mg/kg奥替普拉 124±47  206±24  1.8±0.4  116±9
肝硬变组+30mg/kg奥替普拉 110±39  185±22#  1.4±0.2  104±7
每个值都以平均值±标准偏差表示。使用动物数为8～11。每组的显著性通过配对Student’s t-检验确定。显著性通过与对照比较*p＜0.05和与肝硬变大鼠比较#p＜0.05来表示。
实施例4-奥替普拉对血浆白蛋白含量和腹水形成得影响
肝硬变的另一代表性临床症状是腹水的累积。腹水形成指数为0＝无可见腹水，1＝器官间存在少量腹水，2＝腹部切开后肉眼可见累积腹水的显著流动，和3＝腹部切开后累积腹水显著喷发，当检查10只模型肝硬变大鼠的腹水形成时，肝硬变大鼠的值为1.7。在施用15mg/kg和30mg/kg奥替普拉后，值分别下降到0.9和0.4(图3)。显著性通过与对照比较**p＜0.05和与肝硬变大鼠比较#p＜0.05来表示。
当肝组织中血浆蛋白(特别是白蛋白)的合成减少，引起维持血液中的渗透平衡的波动时，形成腹水。肝硬变大鼠的血浆中白蛋白的量显著减少。然而，在施用30mg/kg奥替普拉，每周3次共4周后，白蛋白含量恢复(图3b)。显著性通过与对照比较**p＜0.05和与肝硬变大鼠比较#p＜0.05来表示。
实施例5-奥替普拉对肝硬变大鼠肝组织再生的影响。
肝硬变不仅导致肝功能的降低，而且导致肝组织的萎缩。研究10只肝硬变大鼠的肝重，重量减少到正常肝重的约56％。在施用15mg/kg和30mg/kg奥替普拉，每周3次共4周后，肝重几乎恢复到正常重量(图4a)。另一方面，肾重没有显示出显著的变化(图4a上部)。由于重量损失伴随肝硬变，为将检测结果标准化，将脑重量用作相对重量以获取重量变化，因为脑重量通常不会受肝硬变影响。显著性通过与对照比较**p＜0.05和与肝硬变大鼠比较#p＜0.05来表示。
在对肝硬变大鼠给药奥替普拉30mg/kg，每周3次共4周后，用显微镜观察肝细胞分裂(图4b)。图4b的左边是肝组织照片，其是在对肝硬变大鼠给药奥替普拉以后在Masson’s三色染色后拍摄的。相片清楚地显示分裂细胞，这种细胞在正常和肝硬变组织中非常稀少。甚至当使用选择性地对每个核染色的核固红染色时，在施用奥替普拉的肝硬变大鼠中观察到分裂的细胞和染色体迁移(图4b右侧)。
PCNA免疫化学染色法常被用来检测动物模型中的细胞增殖。PCNA是一种稳定的细胞周期核蛋白(36kDa)，其在细胞周期的G1后期和S期表达，可作为增殖细胞的非常好的标记。(Kawamura K，Kobayashi Y，Tanaka T，Ikeda R，Fujukawa-Yamamoto K，Suzuki K.Intranuclearlocalization of proliferating cell muclear antigen during the cell cycle in renalcell carcinoma，2000 Anal Quant Cytol Histol 22，107-113)。
PCNA免疫分析采用PCNA的特异性抗体(Santa Cruz Biotech)进行。分析采用间接的亲和素-生物素-碱性磷酸酶技术，根据制造商(InnoGenex)提供的方案进行。将对照大鼠、肝硬变大鼠以及施用30mg/kg奥替普拉，每周3次共4周的肝硬变大鼠的肝组织涂石蜡的切片放置在载玻片上，去除石蜡，室温下水合。通过使用封闭血清，防止非特异性抗体结合。然后在湿润小室中，将切片与抗体在室温下温育30分钟。温育后，用含有0.1％吐温的磷酸盐缓冲盐水(PBS)漂洗载玻片。将切片接触生物素化的第二抗体并在37℃下反应5分钟，然后加入链霉抗生物素偶联的碱性磷酸酶在37℃下反应5分钟。然后将5-溴-4-氯-3-吲哚-磷酸(BCIP)和氮蓝四唑(NBT)用作磷酸酶底物与载玻片上的切片温育直至适当的颜色变得可见。此后，将切片再次用核固红染色。
这种PCNA免疫化学染色法的结果表明对照动物没有显示含有PCNA的任何细胞，但肝硬变大鼠显示在靠近血管纤维处有阳性PCNA反应。在施用奥替普拉的肝硬变大鼠中，在整个试样中广泛观察到含有PCNA的细胞。与来自没有给药奥替普拉的肝硬变大鼠的样品相比，施用奥替普拉的大鼠中PCNA出现的频率约大2倍(图5a)。
将对照大鼠、肝硬变大鼠和施用奥替普拉(30mg/kg，每周3次共4周)的肝硬变大鼠的肝的核级分溶于含十二烷基硫酸钠(SDS)的稀释液中以形成样品，并保存在-70℃。SDS-聚丙稀酰胺凝胶电泳后，进行免疫印迹分析。通过使用12％的凝胶电泳将样品分级，并电转移至硝酸纤维素膜上。硝酸纤维素膜与多克隆小鼠抗-PCNA抗体(1∶1000)(Santa CruzBiotech)温育，然后再与辣根过氧化物酶偶联的第二抗体温育。最后，使用由Amersham公司制备的ECL化学发光试剂盒将条带显色。
即使当使用蛋白质印迹分析来研究PCNA的表达时，PCNA的表达有显著的增加，如通过施用奥替普拉的肝硬变大鼠与对照大鼠及未治疗的肝硬变大鼠相比在肝组织中36kDa PCNA条带强度增加所证明。
已经知道再生肝组织的细胞来源于干细胞。在本发明中，使用与PCNA相似的染色方法对干细胞中特异的标记蛋白Thy1.1和Flt-3(Santa CruzBiotech)进行染色，以研究肝硬变期间干细胞的分布。在肝硬变大鼠中，观察到许多含有Thy1.1和Flt-3的细胞，而在对照大鼠中却没有观察到这些细胞(图5b)。在施用奥替普拉(30mg/kg，每周3次共4周)的肝硬变大鼠中，与未治疗的肝硬变大鼠相比，含有Thy1.1和Flt-3的细胞的数量大大减少。该结果被认为是奥替普拉作用将未分化干细胞转变成分化的肝细胞的结果。
实施例6 奥替普拉对被肝硬变抑制的c-Met表达的影响
c-Met是肝细胞生长因子(HGF)受体，可适用于肝细胞的增值与分化。c-Met的表达随肝硬变而减少(图6a)。当c-Met不恰当地存在时，即使存在HGF，肝组织也不会形成。
在施用(30mg/kg，每周3次共4周)奥替普拉的肝硬变大鼠中，c-Met的表达显著高于未给药的大鼠(图6a)。这个结果与奥替普拉再生已经进行肝硬变的肝组织的观念一致。
实施例7 奥替普拉对C/EBP向核的转移的影响
与肝细胞增值相关的重要转录因子是属于C/EBP家族的C/EBP-β和C/EBP-α。两者中，C/EBP-β被认为在肝细胞的增值中更重要。当将C/EBP-β基因从小鼠中去除时，在肝部分切除术后肝尺寸的恢复显著降低。(Greenbaum LE，Li W，Cressman DE，Peng Y，Ciliberto G，Poli V，TaubR.，CCAAT/enhancer-bingding protein beta is required for normal hapatocyteproliferation in mice after partical hepatectomy.J Clin Invest.(1998)102：996-1007).
考虑到C/EBP在肝再生调节中的重要性，研究在施用(30mg/kg，每周3次共4周)奥替普拉的肝硬变大鼠中C/EBP-β和C/EBP-α的表达。在肝硬变大鼠中降低的C/EBP-β表达在施用奥替普拉的大鼠中增加。在对肝硬变大鼠施用奥替普拉30mg/kg、每周3次共4周后，C/EBP-β的同工型，肝富含抑制蛋白(LIP)的出现和其在肝硬变大鼠中增加的表现几乎完全消失。尽管在对照大鼠中明显，C/EBP-α在肝硬变大鼠中显著减少。然而，在对肝硬变大鼠施用30mg/kg奥替普拉、每周3次共4周后，C/EBP-α的表达显著恢复。
因为在施用奥替普拉的肝硬变大鼠中发现的C/EBP的明显活性，下一测试是使用蛋白质印迹方法将在原代培养的肝细胞中转移到核中的C/EBP定量，以检测奥替普拉对肝细胞中C/EBP活性的直接影响。当将原代培养的肝细胞与浓度为30μM的奥替普拉温育时，肝细胞核中的C/EBP-β和C/EBP-α的量逐渐增加(图7a)。然而，当将从肝硬变大鼠中分离的肝细胞与奥替普拉温育时，未观察到显著变化。该结果证明奥替普拉直接引发C/EBP活性。
之后，为了研究奥替普拉是否促进C/EBP-β向核的转移，将大鼠肝细胞与浓度为30μM的奥替普拉温育6小时。根据免疫细胞化学分析，奥替普拉明显促进C/EBP-β向核的转移(图7b)。
因此，通过奥替普拉的肝组织再生伴随C/EBP的激活。
如前所示，奥替普拉能有效再生肝组织，本发明的药物组合物在再生经受肝硬变的肝组织和治疗肝硬变中高度有效。
制备例1
奥替普拉                           25mg
乳糖                               50mg
淀粉                               10mg
硬脂酸镁                           适量
将以上成分混合并通过常规片剂制备方法制备片剂。
制备例2
奥替普拉                           100mg
乳糖                               50mg
淀粉                               10mg
硬脂酸镁                           适量
将以上成分混合并通过常规片剂制备方法制备片剂。
制备例3
奥替普拉                           250mg
乳糖                               50mg
淀粉                               10mg
硬脂酸镁                           适量
将以上成分混合并通过常规片剂制备方法制备片剂。
制备例4
奥替普拉                           25mg
乳糖                               30mg
淀粉                               28mg
滑石                               2mg
硬脂酸镁                           适量
将以上成分混合并通过常规明胶硬胶囊制备方法制备凝胶硬胶囊
制备例5
奥替普拉                           100mg
乳糖                               30mg
淀粉                               28mg
滑石                               2mg
硬脂酸镁                           适量
将以上成分混合并通过常规明胶硬胶囊制备方法制备明胶硬胶囊。
制备例6
奥替普拉                           250mg
异构蔗糖                           10g
蔗糖                               30mg
羧甲基纤维素钠                     100mg
柠檬香料                           适量
(加蒸馏水至总体积100ml)
将以上成分根据常规混悬剂制备方法制备混悬剂。将混悬剂装满100ml棕色瓶并灭菌。
制备例7
奥替普拉                           500mg
异构蔗糖                           20g
蔗糖                               20mg
精氨酸钠                           100mg
橙子香料                           适量
(加蒸馏水至总体积100mL)
将以上成分根据常规混悬剂制备方法制备混悬剂。将混悬剂装满100ml棕色瓶并灭菌。
制备例8
奥替普拉                           250mg
乳糖                               20mg
淀粉                               20mg
硬脂酸镁                           适量
将以上成分混合，装在聚乙烯包覆的封袋中并密封制备散剂。
制备例9
一个软胶囊包含
奥替普拉                           100mg
聚乙二醇                           400mg
浓缩甘油                           55mg
蒸馏水                             35mg
将聚乙二醇与浓缩甘油混合，然后加入蒸馏水。保持混合物于60℃，将奥替普拉加入混合物中。在约1,500rpm下混合物搅拌。在将混合物混合均匀后，在缓慢搅拌下在室温下冷却混合物。用真空泵去除气泡，留下软胶囊的内容物。
使用众所周知的软明胶-增塑剂配方，按照常规制备方法制备软胶囊膜，所述配方每胶囊包含明胶132mg，浓缩甘油52mg，70％二山梨糖醇(disorbitol)溶液6mg，适量乙基香兰素调味剂，和巴西棕榈蜡作为包衣剂。
工业适用性
本发明提供的包含奥替普拉的药物组合物在临床上用于促进硬变肝的肝组织的再生，并且组合物显示有效治疗肝硬变。

Claims (4)

1.一种用于肝组织再生以治疗肝硬变的药物组合物，其包含5-(2-吡嗪基)-4-甲基-1，2-二硫酚-3-硫酮(奥替普拉)和药用赋形剂。
2.按照权利要求1的药物组合物，其中以选自下列各项的形式配制所述组合物：胶囊，片剂，软胶囊，混悬剂，糖浆，注射剂，和散剂。
3.按照权利要求1的药物组合物，其中将所述组合物配制成用于口服给药的形式。
4.5-(2-吡嗪基)-4-甲基-1，2-二硫酚-3-硫酮在制备药物中的应用，所述药物通过再生肝组织治疗肝硬变。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8076311B2 (en) 2006-05-11 2011-12-13 Prendergast Patrick T Compositions and methods for modulating the immune system
CN102112128B (zh) * 2008-08-04 2014-03-26 首尔大学校产学协力团 含有1，2-二硫代硫酮衍生物的药物组合物的新制药用途

Families Citing this family (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100629771B1 (ko) * 2004-01-27 2006-09-28 씨제이 주식회사 결정성이 감소되거나 무정형화된 올티프라즈의 제조방법
KR100604261B1 (ko) 2004-10-11 2006-07-28 재단법인서울대학교산학협력재단 신규4,5,6,7-테트라히드로-[1,2]디티올로[4,3-ｃ]피리딘-3-티온계 화합물
KR20060031956A (ko) * 2004-10-11 2006-04-14 재단법인서울대학교산학협력재단 ｐ90 리보솜 Ｓ6 키나제 1 (ＲＳＫ1)의 직접적인 키나제활성증진을 통한 간섬유화와 간경변증 예방 및 치료용약학조성물
GB0704718D0 (en) * 2007-03-12 2007-04-18 Prendergast Patrick T Compounds and methods for preventing and treating mucositis
WO2010040058A1 (en) 2008-10-02 2010-04-08 George Zabrecky Methods and formulations for treating chronic liver disease
EP2674159B1 (de) 2012-06-15 2016-04-27 Phrontier S.A.R.L. Pharmazeutische Zusammensetzung für die Leber-Regeneration
CN108348781B (zh) * 2015-09-08 2022-02-11 Op2药品公司 用于治疗与线粒体活性氧簇(ros)产生相关的疾病的化合物
BR112018004518A2 (pt) 2015-09-08 2019-03-19 OP2 Drugs compostos para o tratamento de doenças ligadas à produção de espécies reativas de oxigênio (ros) mitocondriais
EP4218819A3 (en) * 2015-12-07 2023-08-23 Kyoto University Combination therapy based on pd-1 signal inhibitors
AU2018232799B2 (en) 2017-03-07 2021-11-25 Centre Hospitalier Universitaire De Bordeaux Desmethylanethole trithione derivatives for the treatment of diseases linked to mitochondrial reactive oxygen species (ROS) production
JP7133083B2 (ja) * 2019-08-29 2022-09-07 エスコ－グラフィックス イメージング ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング フォトポリマー露光で使用するためのｕｖ ｌｅｄ放射光源

Family Cites Families (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
BE794873A (fr) * 1972-02-02 1973-08-01 Rhone Poulenc Sa Nouvelles sulfones a enchainement dimethyl-1,6 hexadien-1,5 ylene
DE2505869C3 (de) * 1975-02-12 1978-05-18 Basf Ag, 6700 Ludwigshafen Verfahren zur Herstellung von symmetrischen Carotinoiden
JPS54160740A (en) * 1978-06-09 1979-12-19 Takeda Chem Ind Ltd Anti-fibrotic agent
US4883887A (en) * 1987-07-09 1989-11-28 Hoffmann-La Roche Inc. Sulfone polyene intermediates
US6517824B1 (en) * 1990-05-14 2003-02-11 University Of Medicine & Denistry Of New Jersey Polymer compositions comprising antifibrotic agents, and methods of treatment, pharmaceutical compositions, and methods of preparation therefor
US5686436A (en) * 1993-05-13 1997-11-11 Hiv Diagnostics, Inc. Multi-faceted method to repress reproduction of latent viruses in humans and animals
KR0138005B1 (ko) * 1993-10-21 1998-05-15 김낙두 신규의 화학적 보호제(chemopreventive agent)및 그의 제조방법
CA2113229C (en) * 1994-01-11 1999-04-20 Mark Pines Anti-fibrotic quinazolinone-containing compositions and methods for the use thereof
US5786344A (en) * 1994-07-05 1998-07-28 Arch Development Corporation Camptothecin drug combinations and methods with reduced side effects
EP0827742A1 (en) * 1996-09-04 1998-03-11 Vrije Universiteit Brussel Use of histone deacetylase inhibitors for treating fribosis or cirrhosis
US6294350B1 (en) * 1997-06-05 2001-09-25 Dalhousie University Methods for treating fibroproliferative diseases
US6046199A (en) * 1998-01-14 2000-04-04 Cell Pathways, Inc. Method of inhibiting neoplastic cells with tetracyclic pyrido[3,4-B]indole derivatives
KR100261139B1 (ko) * 1998-01-16 2000-08-01 황준수 신규한 알릴티오피리다진 유도체 및 그의 제조방법
WO2001009118A2 (en) * 1999-07-29 2001-02-08 Patrick T Prendergast Dithiolthione compounds for the treatment of neurological disorders and for memory enhancement
US6242478B1 (en) * 1999-12-10 2001-06-05 Wake Forest University Five member ring sulfenate esters and thiosulfinate esters
KR100377789B1 (ko) * 2000-03-02 2003-03-26 김상건 간섬유화 및 간경화 치료 및 예방용 의약 조성물
US7078045B2 (en) * 2000-03-02 2006-07-18 Sang-Geon Kim Pharmaceutical composition for treatment and prevention of liver fibrosis and cirrhosis
ATE332693T1 (de) * 2000-03-02 2006-08-15 Sang Geon Kim Pharmazeutische zusammensetzung zur behandlung und vorbeugung von leberzirrhose und leberfibrose
JP2003530353A (ja) * 2000-04-07 2003-10-14 キム，サン，ギョン オルチプラズの肝繊維化及び肝硬変症進行の予防及び治療剤としての使用方法、及びオルチプラズを主成分として含有する製薬組成物
KR100604261B1 (ko) * 2004-10-11 2006-07-28 재단법인서울대학교산학협력재단 신규4,5,6,7-테트라히드로-[1,2]디티올로[4,3-ｃ]피리딘-3-티온계 화합물

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8076311B2 (en) 2006-05-11 2011-12-13 Prendergast Patrick T Compositions and methods for modulating the immune system
CN102112128B (zh) * 2008-08-04 2014-03-26 首尔大学校产学协力团 含有1，2-二硫代硫酮衍生物的药物组合物的新制药用途
US9370504B2 (en) 2008-08-04 2016-06-21 Snu R&Db Foundation Pharmaceutical composition containing 1,2-dithiolthione derivative for preventing or treating disease caused by overexpression of LXR-α

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