CN1523989A - 巨噬细胞转移抑制因子抑制剂及其鉴定方法 - Google Patents

巨噬细胞转移抑制因子抑制剂及其鉴定方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了MIF抑制剂，其用于治疗多种疾病，包括治疗与MIF活性相关的病理性症状。MIF抑制剂具有下列结构：(Ia)(Ib)，包括其立体异构体、前药和药用盐，其中n，R1，R2，R3，R4，X，Y和Z如本发明所定义。本发明还提供了含有MIF抑制剂和药用载体的组合物，及其使用方法。

Description

巨噬细胞转移抑制因子抑制剂及其鉴定方法
技术领域
本发明总体涉及巨噬细胞转移抑制因子(MIF)抑制剂，鉴定MIF抑制剂的方法，以及通过施用该抑制剂治疗MIF-相关性疾病的方法。
背景技术
巨噬细胞转移抑制因子(MIF)作为一种淋巴因子，已被鉴定是一种宿主防御体系中巨噬细胞发挥功能的介质，其表现与迟发过敏性、免疫调节、炎症、和细胞免疫相关。参见Metz和Bucala，Adv.Immunol.66：197-223，1997。巨噬细胞转移抑制因子(MIFs)，大小在12-13千道尔顿(kDa)之间，已在几种哺乳动物和禽类中发现存在；参见，例如，Galat等，Fed.Eur.Biochem.Soc.319：233-236，1993；Wistow等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90：1272-1275，1993；Weiser等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86：7522-7526，1989；Bernhagen等，Nature 365：756-759，1993；Blocki等，Protein Science 2：2095-2102，1993；和Blocki等，Nature 360：269-270，1992。虽然最初发现MIF能够阻断巨噬细胞转移，后来发现MIF还通过不同于干扰素-γ的作用机制产生巨噬细胞粘附作用；诱导巨噬细胞表达白细胞介素-1-β，白细胞介素-6，肿瘤坏死因子α；上调HLA-DR；增加一氧化氮合成酶和一氧化氮浓度；激活巨噬细胞杀死杜诺凡氏利什曼原虫(Leishmania donovani)肿瘤细胞和抑制鸟支原体(Mycoplasmaavium)生长。除了作为免疫逃避分子(immunoevasive molecule)，MIF还能充当免疫佐剂，当配合给予不完全弗氏佐剂中的牛血清白蛋白或HIVgp120或者脂质体时，诱导的抗原诱发增殖可与完全弗氏佐剂所致反应相当。此外，MIF被认为是一种糖皮质激素反调节剂(counter regulator)和血管生成因子。做为少数被糖皮质激素诱导但不被其抑制的蛋白质之一，MIF可使糖皮质激素的免疫抑制作用减弱。也因此，MIF被视为调节糖皮质激素的免疫抑制作用的重要因素。所以当使用过量外源糖皮质激素(例如临床用药以抑制发炎，免疫力等)，而过度诱导MIF的活性/基因表达时，会导致明显毒性，因为MIF自身会加重炎症/免疫反应。参见，Buccala等，Ann.Rep.Med.Chem.33：243-252，1998。
虽然MIF被认为通过特定受体作用于细胞，反向激活胞间级联反应，所述反应包括erk磷酸化和MAP激酶以及上调胞间质金属蛋白酶，cjun，c-fos，和IL-1 mRNA(参见Onodera等，J.Biol.Chem.275：444-450,2000)，它还拥有内源性酶活性，例如具有使适当底物互变异构的能力(例如，多巴色素)。进一步地，该酶活性是否介导针对MIF的生物应答并介导该蛋白在体外和体内的活性还不清楚。针对MIF的定点诱变已产生拥有完全内在活性的突变体，然而这些突变体不具有酶活性(Hermanowski Vosatka等，Biochemistry 38：12841-12849，1999)，Swope等曾报道了MIF的细胞因子活性和催化位点之间的直接关联性(Swope等，EMBO J.17(13)：3534-3541，1998)。因此，单独通过抑制多巴色素互变异构酶而鉴定MIF活性抑制剂的方法产生在临床上有价值的MIF活性抑制剂尚未完全清楚。评价MIF对其细胞表面受体的抑制作用的能力也由于目前还未找到高亲合受体而受到限制。
研发MIF抑制剂的兴趣来自于发现MIF在感染部位浓缩巨噬细胞的细胞因子活性和细胞介导的免疫性。而且，发现MIF是巨噬细胞粘附、噬菌作用和肿瘤杀伤活性的介质。参见See Weiser等，J.Immunol.147：2006-2011，1991。因此，MIF的抑制导致细胞因子、生长因子、趋化因子和淋巴因子的间接抑制，从而巨噬细胞可能不会聚集到炎症部位。人MIF cDNA已经从T-细胞系分离出来，其编码分子量约为12.4kDa、具有115个氨基酸残基的蛋白质，其形成均三聚体的活性形式(Weiser等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86：7522-7526，1989)。MIF最初在激活的T-细胞中观察到，现在报道很多组织包括肝、肺、眼睛角膜(eye lens)、卵巢、脑、心脏、脾脏、肾脏、肌肉等。参见Takahashi等，Microbiol.Immunol.43(1)：61-67，1999。MIF的另一个特征是它缺乏通过ER/高尔基体途径引导常规分泌所需的常规先导序列(即，它是一种无先导序列的蛋白质)。
通过中和MIF的细胞因子活性发挥作用的MIF抑制剂(和鉴定MIF抑制剂的方法)呈现明显优于其他类型抑制剂的优点。例如，单独互变异构酶活性和炎症反应之间的关系是有争议的。而且，在胞间发挥作用的抑制剂由于它们对相关靶的作用或胞内靶的活性，而经常表现出毒性。配体受体复合物的小分子抑制剂难于鉴定，更不用说优化和研发。向MIF这样的细胞因子的理想抑制剂是一种改变MIF自身，从而当其从细胞中释放后能被有效地中和。由于蛋白质和例如药物这样的化合物之间的根本差异，具有这种活性的小分子是理想的抗体。
发明内容
发明概述
随着MIF在很多组织中被鉴定出来，并且发现其与大量病理事件相关，因此本领域有必要鉴定MIF抑制剂。还有必要研发含有该抑制剂的药物组合物，以及与其治疗，例如，免疫相关性疾病或其他MIF诱导的病理事件，例如与肿瘤相关的血管发生的用途有关的方法。优选实施方案可以实现这些需要，并提供其他优点。
在优选实施方案中，MIF抑制剂具有下列通式结构(Ia)和(Ib)：
Figure A0281050100461
包括其立体异构体、前药、和药用盐，其中n，R1，R2，R3，R4，X，Y和Z如下面所定义。
优选实施方案的MIF抑制剂具有广泛的治疗应用，可用于治疗多种疾病、或病理症状，包括但不限于，多种免疫相关反应，肿瘤生长(例如，前列腺癌，等)，肾小球肾炎，炎症，疟疾性贫血，脓毒性休克，与肿瘤相关的血管发生，玻璃体视网膜病(vitreoretinopathy)，银屑病，移植物抗宿主反应(组织排斥)，特异性皮炎，类风湿性关节炎，炎症性肠病，中耳炎，克罗恩氏病(Crohn’s diease)，急性呼吸窘迫综合征，迟发型变态反应，等。参见，例如，Metz和Bucala(同上)；Swope和Lolis，Rev.Physiol.Biochem.Pharmacol 139：1-32，1999；Waeber等，Diabetes M.Res.Rev.15(1)：47-54，1999；Nishihira，Int J.Mol.Med.2(1)：17-28，1998；Bucala，Ann.MY.Acad.Sci.840：74-82，1998；Bernhagen等，J.Mol.Med.76(34)：151-161，1998；Donnelly和Bucala，Mol.Med.Today 3(11)：502-507，1997；Bucala等，FASEB J.10(14)：1607-1613，1996。该方法包括给所需动物，优选以药物组合物形式，施用有效量的一种或多种优选实施方案所述的MIF抑制剂。因此，在另一个实施方案中，提供了含有一种或多种优选实施方案的MIF抑制剂，以及药物可接受载体和/或稀释剂的药物组合物。
优选实施方案的一种策略是鉴定与MIF相互作用的分子，从而诱导MIF的构象改变，进而使其对单克隆抗体丧失免疫反应性。当通过筛选鉴定出该改变，即可确认MIF的小分子抑制剂。该特定特征或可延伸到任何生物活性多肽，其中免疫反应性的丧失可能可以作为某些活性(例如，细胞因子活性，酶活性，辅-因子活性，等)的替代物。
在第一种实施方案中，提供的化合物具有如下结构：
或其立体异构体，前药，或药用盐，其中X为氧或硫；Y包括-NO，-NO2，-C(＝O)R5，-C(＝O)OR5，-C(＝O)NR5R6，-NR5C(＝O)R5，-NR5SO2R5，和-S(O)mR5；Z为-CH2-或-C(＝O)-；m为0，1，或2；n为0，1，或2，条件是当n为0时，Z为-C(＝O)-；R1包括氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基或取代的杂环烷基，二烷基，和R’R”N(CH2)x-，其中x为2至4，其中R’和R”独立地包括氢，烷基，取代的烷基，芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，取代的杂环烷基，和二烷基；R2和R3独立地包括卤素，-R5，-OR5，-SR5，和-NR5R6；R4包括-CH2R7，-C(＝O)NR5R6，-C(＝O)OR7，-C(＝O)R7，和R8；R5和R6独立地包括氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；或R5和R6一起与它们连接的氮原子形成杂环或取代的杂环；R7包括烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；和R8选自氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；条件是当R1为苯基，R2和R3均为氢，X为氧，和Y为-C(＝O)OCH2CH3时，R4不为氢或甲基；当R1为甲基，R2和R3均为氢，X为氧，和Y为-NO2时，R4不为甲基；当R1为氢或甲基，R2为7-氯，R3为氢，X为氧和Y为-C(＝O)OCH2CH3时，R4不为-CH2CH2OH；和当R1为甲基，R2为氢或7-氯，R3为氢，X为氧，和Y为-C(＝O)OCH2CH3时，R4不为甲基。
在第二种实施方案中，化合物具有如下结构：
Figure A0281050100481
或其立体异构体，前药，或药用盐，其中X为氧或硫；Y包括-NO，-NO2，-C(＝O)R5，-C(＝O)OR5，-C(＝O)NR5R6，-NR5C(＝O)R5，-NR5SO2R5，和-S(O)mR5；Z为-CH2-；m为0，1，或2；n为1；R1包括氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基或取代的杂环烷基，二烷基，和R’R”N(CH2)x-，其中x为2至4，R’和R”独立地包括氢，烷基，取代的烷基，芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，取代的杂环烷基，和二烷基；R2和R3独立地包括卤素，-R5，-OR5，-SR5，和-NR5R6；R4包括-CH2R7，-C(＝O)NR5R6，-C(＝O)OR7，-C(＝O)R7，和R8；R5和R6独立地包括氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；或R5和R6一起与它们连接的氮原子形成杂环或取代的杂环；R7包括烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；和R8包括氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；条件是当R1为苯基，R2和R3均为氢，X为氧，和Y为-C(＝O)OCH2CH3时，R4不为氢或甲基；当R1为甲基，R2和R3均为氢，X为氧，和Y为-NO2时，R4不为甲基；当R1为氢或甲基，R2为7-氯，R3为氢，X为氧和Y为-C(＝O)OCH2CH3时，R4不为-CH2CH2OH；和当R1为甲基，R2为氢或7-氯，R3为氢，X为氧，和Y为-C(＝O)OCH2CH3时，R4不为甲基。
在第二种实施方案所包括的方面中，X为氧；或Y为-C(＝O)OCH2CH3；或Y为-NO2；或
R4为 或 或 或
在第三种实施方案中，提供的化合物具有如下结构：
或其立体异构体，前药，或药用盐，其中X为氧或硫；Y为-NO2；Z为-CH2-或-C(＝O)-；m为0，1，或2；n为0，1，或2，条件是当n为0时，Z为-C(＝O)-；R1包括氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基或取代的杂环烷基，二烷基，和R’R”N(CH2)x-，其中x为2至4，R’和R”独立地包括氢，烷基，取代的烷基，芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，取代的杂环烷基，和二烷基；R2和R3独立地包括卤素，-R5，-OR5，-SR5，和-NR5R6；R4包括-CH2R7，-C(＝O)NR5R6，-C(＝O)OR7，-C(＝O)R7，和R8；R5和R6独立地包括氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；或R5和R6一起与它们连接的氮原子形成杂环或取代的杂环；R7包括烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；和R8包括氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；条件是当R1为甲基，R2和R3均为氢，X为氧，和Y为NO2时，R4不为甲基。
在第三种实施方案所包括的方面中，X为氧；或Z为-CH2-和n为1；
或R4为
Figure A0281050100502
或 或
Figure A0281050100504
或
Figure A0281050100505
在第四种实施方案中，提供的化合物具有如下结构：
或其立体异构体，前药，或药用盐，其中X为氧或硫；Y为-C(＝O)OCH2CH3；Z为-CH2-或-C(＝O)-；m为0，1，或2；n为0，1，或2，条件是当n为0时，Z为-C(＝O)-；R1包括氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基或取代的杂环烷基，二烷基，和R’R”N(CH2)x-，其中x为2至4，R’和R”独立地包括氢，烷基，取代的烷基，芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，取代的杂环烷基，和二烷基；R2和R3独立地包括卤素，-R5，-OR5，-SR5，和-NR5R6；R4包括-CH2R7，-C(＝O)NR5R6，-C(＝O)OR7，-C(＝O)R7，和R8；R5和R6独立地包括氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；或R5和R6一起与它们连接的氮原子形成杂环或取代的杂环；R7包括烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；和R8包括氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；条件是当R1为苯基，R2和R3均为氢，和X为氧时，R4不为氢或甲基；当R1为氢或甲基，R2为7-氯，R3为氢，和X为氧时，R4不为-CH2CH2OH；和当R1为甲基，R2为氢或7-氯，R3为氢，和X为氧时，R4不为甲基。
在第四种实施方案所包括的方面中，X为氧；或Z为-CH2-和n为1；
或R4为
Figure A0281050100512
或 或
Figure A0281050100514
或
Figure A0281050100515
在第五种实施方案中，提供的化合物具有如下结构：
Figure A0281050100521
或其立体异构体，前药，或药用盐，其中X为氧或硫；Y包括-NO，-NO2，-C(＝O)R5，-C(＝O)OR5，-C(＝O)NR5R6，-NR5C(＝O)R5，-NR5SO2R5，和-S(O)mR5；Z为-CH2-或-C(＝O)-；m为0，1，或2；n为0，1，或2，条件是当n为0时，Z为-C(＝O)-；R1包括氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基或取代的杂环烷基，二烷基，和R’R”N(CH2)x-，其中x为2至4，R’和R”独立地包括氢，烷基，取代的烷基，芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，取代的杂环烷基，和二烷基；R2和R3独立地包括卤素，-R5，-OR5，-SR5，和-NR5R6；
R4为
Figure A0281050100522
或
Figure A0281050100523
和R5和R6独立地选自氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；或R5和R6一起与它们连接的氮原子形成杂环或取代的杂环。
在第五种实施方案所包括的方面中，X为氧；或Z为-CH2-和n为1；或Y为-C(＝O)OCH2CH3；或Y为-NO2。
在第六种实施方案中，提供的化合物具有如下结构：
Figure A0281050100531
或其立体异构体，前药，或药用盐，其中X为氧或硫；Y包括-NO，-NO2，-C(＝O)R5，-C(＝O)OR5，-C(＝O)NR5R6，-NR5C(＝O)R5，-NR5SO2R5，和-S(O)mR5；Z为-CH2-或-C(＝O)-；m为0，1，或2；n为0，1，或2，条件是当n为0时，Z为-C(＝O)-；R1包括氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基或取代的杂环烷基，二烷基，和R’R”N(CH2)x-，其中x为2至4，R’和R”独立地包括氢，烷基，取代的烷基，芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，取代的杂环烷基，和二烷基；R2和R3独立地包括卤素，-R5，-OR5，-SR5，和-NR5R6；
R4为 或
Figure A0281050100533
和R5和R6独立地包括氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；或R5和R6一起与它们连接的氮原子形成杂环或取代的杂环。
在第六种实施方案所包括的方面中，X为氧；或Z为-CH2-和n为1；或Y为-C(＝O)OCH2CH3；或Y为-NO2。
在第七种实施方案中，提供的化合物具有如下结构：
或其立体异构体，前药，或药用盐，其中X为氧；Y包括-NO，-NO2，-C(＝O)R5，-C(＝O)OR5，-C(＝O)NR5R6，-NR5C(＝O)R5，-NR5SO2R5，和-S(O)mR5；Z为-CH2-或-C(＝O)-；m为0，1，或2；n为0，1，或2，条件是当n为0时，Z为-C(＝O)-；R1包括氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基或取代的杂环烷基，二烷基，和R’R”N(CH2)x-，其中x为2至4，R’和R”独立地选自氢，烷基，取代的烷基，芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，取代的杂环烷基，和二烷基；R2和R3独立地包括卤素，-R5，-OR5，-SR5，和-NR5R6；R4包括-CH2R7，-C(＝O)NR5R6，-C(＝O)OR7，-C(＝O)R7，和R8；R5和R6独立地包括氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；或R5和R6一起与它们连接的氮原子形成杂环或取代的杂环；R7包括烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；和R8包括氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；条件是当R1为苯基，R2和R3均为氢，和Y为-C(＝O)OCH2CH3时，R4不为氢或甲基；当R1为甲基，R2和R3均为氢，和Y为-NO2时，R4不为甲基；当R1为氢或甲基，R2为7-氯，R3为氢，和Y为-C(＝O)OCH2CH3时，R4不为-CH2CH2OH；和当R1为甲基，R2为氢或7-氯，R3为氢，和Y为-C(＝O)OCH2CH3时，R4不为甲基。
在第七种实施方案所包括的方面中，Z为-CH2-和n为1；或Y为-C(＝O)OCH2CH3；或Y为-NO2；
或R4为 或
Figure A0281050100552
或 或
Figure A0281050100554
在第八种实施方案中，提供的组合物包括第一种实施方案的化合物以及药用载体或稀释剂。
在第九种实施方案中，提供了降低所需患者MIF活性的方法，包括给所述患者施用有效量的具有如下结构的化合物：
Figure A0281050100555
或其立体异构体，前药，或药用盐，其中X为氧或硫；Y包括-NO，-NO2，-C(＝O)R5，-C(＝O)OR5，-C(＝O)NR5R6，-NR5C(＝O)R5，-NR5SO2R5，和-S(O)mR5；Z为-CH2-或-C(＝O)-；m为0，1，或2；n为0，1，或2，条件是当n为0时，Z为-C(＝O)-；R1包括氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基或取代的杂环烷基，二烷基，和R’R”N(CH2)x-，其中x为2至4，其中R’和R”独立地包括氢，烷基，取代的烷基，芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，取代的杂环烷基，和二烷基；R2和R3独立地包括卤素，-R5，-OR5，-SR5，和-NR5R6；R4包括-CH2R7，-C(＝O)NR5R6，-C(＝O)OR7，-C(＝O)R7，和R8；R5和R6独立地包括氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；或R5和R6一起与它们连接的氮原子形成杂环或取代的杂环；R7包括烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；和R8包括氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；条件是当R1为苯基，R2和R3均为氢，X为氧，和Y为-C(＝O)OCH2CH3时，R4不为氢或甲基；当R1为甲基，R2和R3均为氢，X为氧，和Y为-NO2时，R4不为甲基；当R1为氢或甲基，R2为7-氯，R3为氢，X为氧和Y为-C(＝O)OCH2CH3时，R4不为-CH2CH2OH；和当R1为甲基，R2为氢或7-氯，R3为氢，X为氧，和Y为-C(＝O)OCH2CH3时，R4不为甲基。
在第十种实施方案中，提供了治疗温血动物炎症的方法，包括给所述动物施用有效量的第一种实施方案的化合物。
在第十一种实施方案中，提供了治疗温血动物脓毒性休克的方法，包括给所述动物施用有效量的第一种实施方案的化合物。
在第十二种实施方案中，提供了治疗温血动物关节炎的方法，包括给所述动物施用有效量的第一种实施方案的化合物。
在第十三种实施方案中，提供了治疗温血动物癌症的方法，包括给所述动物施用有效量的第一种实施方案的化合物。
在第十四种实施方案中，提供了治疗温血动物急性呼吸窘迫综合征的方法，包括给所述动物施用有效量的第一种实施方案的化合物。
在第十五种实施方案中，提供了治疗温血动物炎性疾病的方法，包括给所述动物施用有效量的第一种实施方案的化合物。在第十五种实施方案所包括的方面中，所述炎性疾病可以包括类风湿性关节炎，骨关节炎，炎症性肠病，和哮喘。
在第十六种实施方案中，提供了治疗温血动物自身免疫性疾病的方法，包括给所述动物施用有效量的第一种实施方案的化合物。在第十六种实施方案所包括的方面中，所述自身免疫性疾病包括糖尿病，哮喘，和多发性硬化。
在第十七种实施方案中，提供了抑制温血动物免疫反应的方法，包括给所述动物施用有效量的第一种实施方案的化合物。
在第十八种实施方案中，提供了降低温血动物血管生成的方法，包括给所述动物施用有效量的第一种实施方案的化合物。
在第十九种实施方案中，提供了治疗温血动物与过量糖皮质激素水平相关的疾病的方法，包括给所述动物施用有效量的第一种实施方案的化合物。在第十九种实施方案所包括的方面中，所述疾病是库欣病(Cushing’s disease)。
在第二十种实施方案中，提供了一种检测调节MIF活性的物质的方法，包括将含有MIF的样品与一种物质接触；和通过测定抗体结合MIF的能力差异检测所述物质调节MIF的能力。在第二十种实施方案所包括的方面中，所述抗体为单克隆抗体。在第二十种实施方案所包括的方面中，MIF包括其融合蛋白、突变体或变异体。
在第二十一种实施方案中，提供了一种用于抗体结合作为代用标记，筛选调节多肽活性的物质的方法，包括将多肽与一种可能的调节物质接触，将多肽与单克隆抗体接触，检测多肽相对于对照的活性差异。
在第二十二种实施方案中，提供了一种具有如下结构的化合物：
或其立体异构体，前药，或药用盐，其中X为氧或硫；Y包括-NO，-NO2，-C(＝O)R5，-C(＝O)OR5，-C(＝O)NR5R6，-NR5C(＝O)R5，-NR5SO2R5，和-S(O)mR5；Z为-CH2-或-C(＝O)-；m为0，1，或2；n为0，1，或2，条件是当n为0时，Z为-C(＝O)-；R1包括氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基或取代的杂环烷基，二烷基，和R’R”N(CH2)x-，其中x为2至4，其中R’和R”独立地选自氢，烷基，取代的烷基，芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，取代的杂环烷基，和二烷基；R2和R3独立地包括卤素，-R5，-OR5，-SR5，和-NR5R6；R4包括-CH2R7，-C(＝O)NR5R6，-C(＝O)OR7，-C(＝O)R7，和R8；R5和R6独立地包括氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；或R5和R6一起与它们连接的氮原子形成杂环或取代的杂环；R7包括烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；和R8包括氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；条件是当R1为苯基，R2和R3均为氢，X为氧，和Y为-C(＝O)OCH2CH3时，R4不为氢或甲基；当R1为甲基，R2和R3均为氢，X为氧，和Y为-NO2时，R4不为甲基；当R1为氢或甲基，R2为7-氯，R3为氢，X为氧和Y为-C(＝O)OCH2CH3时，R4不为-CH2CH2OH；和当R1为甲基，R2为氢或7-氯，R3为氢，X为氧，和Y为-C(＝O)OCH2CH3时，R4不为甲基。
在第二十三种实施方案中，提供了一种具有如下结构的化合物：
Figure A0281050100581
或其立体异构体，前药，或药用盐，其中X为氧或硫；Y包括-NO，-NO2，-C(＝O)R5，-C(＝O)OR5，-C(＝O)NR5R6，-NR5C(＝O)R5，-NR5SO2R5，和-S(O)mR5；Z为-CH2-；m为0，1，或2；n为1；R1包括氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基或取代的杂环烷基，二烷基，和R’R”N(CH2)x-，其中x为2至4，R’和R”独立地包括氢，烷基，取代的烷基，芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，取代的杂环烷基，和二烷基；R2和R3独立地包括卤素，-R5，-OR5，-SR5，和-NR5R6；R4包括-CH2R7，-C(＝O)NR5R6，-C(＝O)OR7，-C(＝O)R7，和R8；R5和R6独立地包括氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；或R5和R6一起与它们连接的氮原子形成杂环或取代的杂环；R7包括烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；和R8包括氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；条件是当R1为苯基，R2和R3均为氢，X为氧，和Y为-C(＝O)OCH2CH3时，R4不为氢或甲基；当R1为甲基，R2和R3均为氢，X为氧，和Y为-NO2时，R4不为甲基；当R1为氢或甲基，R2为7-氯，R3为氢，X为氧和Y为-C(＝O)OCH2CH3时，R4不为-CH2CH2OH；和当R1为甲基，R2为氢或7-氯，R3为氢，X为氧，和Y为-C(＝O)OCH2CH3时，R4不为甲基。
在第二十三种实施方案所包括的方面中，R1为-NCH2CH2CH2N(CH3)2；或X为氧；或Y为C(＝O)OCH2CH3；或Y为-NO2；
或R4为 或 或
Figure A0281050100593
或
在第二十四种实施方案中，提供了一种具有如下结构的化合物：
Figure A0281050100595
或其立体异构体，前药，或药用盐，其中X为氧或硫；Y为-C(＝O)OCH2CH3；Z为-CH2-或-C(＝O)-；m为0，1，或2；n为0，1，或2，条件是当n为0时，Z为-C(＝O)-；R1包括氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基或取代的杂环烷基，二烷基，和R’R”N(CH2)x-，其中x为2至4，R’和R”独立地包括氢，烷基，取代的烷基，芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，取代的杂环烷基，和二烷基；R2和R3独立地包括卤素，-R5，-OR5，-SR5，和-NR5R6；R4包括-CH2R7，-C(＝O)NR5R6，-C(＝O)OR7，-C(＝O)R7，和R8；R5和R6独立地选自氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；或R5和R6一起与它们连接的氮原子形成杂环或取代的杂环；R7包括烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；和R8包括氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；条件是当R1为苯基，R2和R3均为氢，和X为氧时，R4不为氢或甲基；当R1为氢或甲基，R2为7-氯，R3为氢，和X为氧时，R4不为-CH2CH2OH；和当R1为甲基，R2为氢或7-氯，R3为氢，和X为氧时，R4不为甲基。
在第二十四种实施方案所包括的方面中，X为氧；或Z为-CH2-和n为1；
或R4为
Figure A0281050100601
或 或
Figure A0281050100603
或
Figure A0281050100604
在第二十五种实施方案中，提供了一种具有如下结构的化合物：
Figure A0281050100605
或其立体异构体，前药，或药用盐，其中X为氧或硫；Y包括-NO，-NO2，-C(＝O)R5，-C(＝O)OR5，-C(＝O)NR5R6，-NR5C(＝O)R5，-NR5SO2R5，和-S(O)mR5；Z为-CH2-或-C(＝O)-；m为0，1，或2；n为0，1，或2，条件是当n为0时，Z为-C(＝O)-；R1为-NCH2CH2CH2N(CH3)2；R2和R3独立地包括卤素，-R5，-OR5，-SR5，和-NR5R6；R4包括-CH2R7，-C(＝O)NR5R6，-C(＝O)OR7，-C(＝O)R7，和R8；R5和R6独立地包括氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；或R5和R6一起与它们连接的氮原子形成杂环或取代的杂环；R7包括烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；和R8包括氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基。
在第二十五种实施方案所包括的方面中，Z为-CH2-和n为1；或Y为-C(＝O)OCH2CH3；或Y为NO2；
或R4为
Figure A0281050100611
或
Figure A0281050100612
或
Figure A0281050100613
或
在第二十六种实施方案中，提供了一种具有如下结构的化合物：
Figure A0281050100615
或其立体异构体，前药，或药用盐，其中X为氧或硫；Y为-NO2；Z为-CH2-或-C(＝O)-； m为0，1，或2；n为0，1，或2，条件是当n为0时，Z为-C(＝O)-；R1包括氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基或取代的杂环烷基，二烷基，和R’R”N(CH2)x-，其中x为2至4，R’和R”独立地包括氢，烷基，取代的烷基，芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，取代的杂环烷基，和二烷基；R2和R3独立地包括卤素，-R5，-OR5，-SR5，和-NR5R6；R4包括-CH2R7，-C(＝O)NR5R6，-C(＝O)OR7，-C(＝O)R7，和R8；R5和R6独立地包括氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；或R5和R6一起与它们连接的氮原子形成杂环或取代的杂环；R7包括烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；和R8包括氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；条件是当R1为甲基，R2和R3均为氢，和X为氧时，R4不为甲基。
在第二十六种实施方案所包括的方面中，R1为-NCH2CH2CH2N(CH3)2；或X为氧；或Z为-CH2和n为1；
或R4为
Figure A0281050100621
或
Figure A0281050100622
或
Figure A0281050100623
或
Figure A0281050100624
在第二十七种实施方案中，提供了一种具有如下结构的化合物：
Figure A0281050100625
或其立体异构体，前药，或药用盐，其中X为氧或硫；Y包括-NO，-NO2，-C(＝O)R5，-C(＝O)OR5，-C(＝O)NR5R6，-NR5C(＝O)R5，-NR5SO2R5，和-S(O)mR5；Z为-CH2-或-C(＝O)-；m为0，1，或2；n为0，1，或2，条件是当n为0时，Z为-C(＝O)-；R1包括氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基或取代的杂环烷基，二烷基，和R’R”N(CH2)x-，其中x为2至4，R’和R”独立地选自氢，烷基，取代的烷基，芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，取代的杂环烷基，和二烷基；R2和R3独立地包括卤素，-R5，-OR5，-SR5，和-NR5R6；
R4包括 和
R5和R6独立地包括氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；或R5和R6一起与它们连接的氮原子形成杂环或取代的杂环；R7包括烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；和R8包括氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基。
在第二十七种实施方案所包括的方面中，R1为-NCH2CH2CH2N(CH3)2；或X为氧；或Z为-CH2-和n为1；或Y为-C(＝O)OCH2CH3；或Y为-NO2。
在第二十八种实施方案中，提供了一种降低所需患者MIF活性的方法，包括给所述患者施用有效量的具有如下结构的化合物：
Figure A0281050100634
或其立体异构体，前药，或药用盐，其中X为氧或硫；Y包括-NO，-NO2，-C(＝O)R5，-C(＝O)OR5，-C(＝O)NR5R6，-NR5C(＝O)R5，-NR5SO2R5，和-S(O)mR5；Z为-CH2-或-C(＝O)-；m为0，1，或2；n为0，1，或2，条件是当n为0时，Z为-C(＝O)-；R1包括氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基或取代的杂环烷基，二烷基，和R’R”N(CH2)x-，其中x为2至4，其中R’和R”独立地选自氢，烷基，取代的烷基，芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，取代的杂环烷基，和二烷基；R2和R3独立地包括卤素，-R5，-OR5，-SR5，和-NR5R6；R4包括-CH2R7，-C(＝O)NR5R6，-C(＝O)OR7，-C(＝O)R7，和R8；R5和R6独立地包括氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；或R5和R6一起与它们连接的氮原子形成杂环或取代的杂环；R7包括烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；和R8包括氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；条件是当R1为苯基，R2和R3均为氢，X为氧，和Y为-C(＝O)OCH2CH3时，R4不为氢或甲基；当R1为甲基，R2和R3均为氢，X为氧，和Y为-NO2时，R4不为甲基；当R1为氢或甲基，R2为7-氯，R3为氢，X为氧和Y为-C(＝O)OCH2CH3时，R4不为-CH2CH2OH；和当R1为甲基，R2为氢或7-氯，R3为氢，X为氧，和Y为-C(＝O)OCH2CH3时，R4不为甲基。
在第二十九种实施方案中，提供了一种治疗温血动物炎症的方法，包括给所述动物施用有效量的第二十八种实施方案的化合物。
在第三十种实施方案中，提供了一种治疗温血动物脓毒性休克的方法，包括给所述动物施用有效量的第二十八种实施方案的化合物。
在第三十一种实施方案中，提供了一种治疗温血动物关节炎的方法，包括给所述动物施用有效量的第二十八种实施方案的化合物。
在第三十二种实施方案中，提供了一种治疗温血动物癌症的方法，包括给所述动物施用有效量的第二十八种实施方案的化合物。
在第三十三种实施方案中，提供了一种治疗温血动物急性呼吸窘迫综合征的方法，包括给所述动物施用有效量的第二十八种实施方案的化合物。
在第三十四种实施方案中，提供了一种治疗温血动物炎性疾病的方法，包括给所述动物施用有效量的第二十八种实施方案的化合物。在三十四种实施方案所包括的方面中，所述炎性疾病包括类风湿性关节炎，骨关节炎，炎症性肠病，和哮喘。
在第三十五种实施方案中，提供了一种治疗温血动物自身免疫性疾病的方法，包括给所述动物施用有效量的第二十八种实施方案的化合物。在三十五种实施方案所包括的方面中，所述自身免疫性疾病包括糖尿病，哮喘，和多发性硬化。
在第三十六种实施方案中，提供了一种抑制温血动物免疫反应的方法，包括给所述动物施用有效量的第二十八种实施方案的化合物。
在第三十七种实施方案中，提供了一种降低温血动物血管生成的方法，包括给所述动物施用有效量的第二十八种实施方案的化合物。
在第三十八种实施方案中，提供了一种治疗温血动物与过量糖皮质激素水平相关的疾病的方法，包括给所述动物施用有效量的第二十八种实施方案的化合物。在第三十八种实施方案所包括的方面中，所述疾病是库欣病。
在第三十九种实施方案中，提供了一种化合物的制备方法，包括以下步骤：将式I的化合物：
Figure A0281050100651
   (式I)
与式II的化合物：
Figure A0281050100652
  (式II)
反应，得到式III的化合物：
其中R3包括R4为氨基，取代的氨基氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；以及将式III的化合物与包含X-R4的化合物反应，其中X包括Cl，Br，和I，其中R4选自氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基或取代的杂环烷基，二烷基，和氨基烷基R’R”N(CH2)x-，其中R’和R”独立地选自氢，烷基，取代的烷基，芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，取代的杂环烷基，和二烷基，x为2至4，由此得到式IV的化合物：
Figure A0281050100662
   (式IV)
其中式IV的化合物适于用作MIF抑制剂。
在第三十九种实施方案所包括的方面中，
R4为 或
Figure A0281050100664
在第四十种实施方案中，提供了一种化合物的制备方法，包括以下步骤：使AI的化合物：
Figure A0281050100671
  (式AI)
与式II的化合物：
Figure A0281050100672
  (式II)
反应，得到式AIII的化合物：
  (式AIII)
其中R3包括R4为氨基，取代的氨基氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；以及将式AIII的化合物与包含X-R4的化合物反应，其中X包括Cl，Br，和I，其中R4选自氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基或取代的杂环烷基，二烷基，和氨基烷基R’R”N(CH2)x-，其中R’和R”独立地选自氢，烷基，取代的烷基，芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，取代的杂环烷基，和二烷基，其中x为2至4，由此得到式AIV的化合物：
   (式AIV)
其中式IV的化合物适于用作MIF抑制剂。
在第四十种实施方案所包括的方面中，
R4为
Figure A0281050100682
或
Figure A0281050100683
在四十一种实施方案中，提供了一种治疗MIF呈病理性的疾病或病症的药物组合物，所述药物组合物包含MIF抑制化合物和治疗疾病的另一种药物，其中所述药物不具有可测量的MIF抑制活性。
在第四十二种实施方案中，提供了一种治疗MIF呈病理性的疾病或病症的药物组合物，所述药物组合物包含MIF抑制化合物和一种选自非甾类抗炎药，抗传染药，β兴奋剂，甾类，抗组胺药，抗癌药，哮喘药，脓毒病药，关节炎药，和免疫抑制剂。
上述和其他实施方案及其所包括的方面在参考下列详细说明的基础上将更加清楚。最后，本发明还提供了各种更详细描述某些方法、化合物和/或组合物的参考文献，这些参考文献全文并入本发明作为参考。
附图简述
图1A-1B是扫描的放射自显影图像，显示抗体与抗-MIF的单克隆抗体(图1A)和抗-MIF的多克隆血清(图1B)在胞质提取物(C)中，以及在THP-1细胞的条件培养基(M)中随后用LPS激活和用各种微摩尔浓度的化合物7e处理的抗体免疫沉淀。还显示了各组分中检测到的互变异构酶活性的结果。“+”表示具有互变异构酶活性，“-”表示没有可检测的活性，“+/-”表示具有部分活性。
图2显示了用本发明所要求保护的组合物的五种类似物处理LPS激活的THP-1细胞而得到酶联免疫吸附分析(ELISA)的结果谱。显示了各类似物抑制单克隆抗体结合的能力，并且该能力是剂量依赖型的。
图3是以图表形式描绘了MIF的免疫反应性，利用ELISA检测在条件培养基中经LPS激活以及在培养各种时期添加10μM化合物7e处理的THP-1细胞。在该图中，LPS在零时刻加入，而化合物7e在LPS处理后6小时的0、2、4时刻加入。该实验中使用了六组THP1细胞，所有培养均在标准培养条件下。在实验开始时，在第1组的细胞中仅加入缓冲液，第2组细胞中加入含有化合物7e的缓冲液。之后在各时间点向其他各组加入在缓冲液中的化合物7e，组3在2小时，组4在4小时，组5在6小时，组6在22小时。在加完缓冲液或缓冲液加样品之后，在指示的时间点从各组取样，用抗-MIF单克隆抗体分析可检测水平的MIF。在没有加化合物的组1中，可检测的MIF水平在实验过程不断增加。在有化合物的组中，MIF的检测被封闭。
图4是以图表形式描绘的ELISA实验，检测化合物7e对MIF检测的效果；在该实验设计中，试验样品是经澄清以除去细胞残渣的预先条件化细胞培养基。MIF在试验样品中的起始浓度约是22ng/ml。化合物在37℃培养开始后的不同时间点加入。然后在再度检测MIF的可检测水平之前，将每个样品再培养30分钟。
图5是表示经ELISA测得的，与未经化合物处理的对照细胞群相比，化合物7e处理的和LPS诱导的RAW 264.7细胞的条件培养基中存在的MIF的相对百分含量的柱状图。上栏表示利用ELISA检测的下栏中的相同级分的Western印迹。
图6是表示经ELISA测得的，与未经化合物处理的对照细胞群相比，化合物7e处理的和TSST-1诱导的RAW 264.7细胞的条件培养基中存在的MIF的相对百分含量的柱状图。上栏表示利用ELISA检测的下栏中的相同组分的Western印迹。
图7A-7B是以图表形式描绘的经腹膜内注射化合物7e(图7A)或口腔填喂给药20mg化合物7e(图7B)后，化合物7e在小鼠血清中的HPLC检测结果。结果表示为平均值+/-SEM(N＝5只小鼠)。
图8是以图表形式描绘的在LPS/半乳糖胺攻击后各时间点，通过ELISA检测的小鼠血清中的MIF的释放。结果表示为平均值+/-SEM(N＝5只小鼠)。
图9A-9B是以图表形式表示，在有或没有化合物7e(0.4mg/20克小鼠)的情况下，10mg/kg LPS攻击后5小时血清MIF浓度(ng/ml)(图9A)或5mg/kg LPS攻击后4小时中和的血清MIF(图9B)的ELISA数据。
图10是以图表形式表示的ELISA测量结果，证明血清IL-1β(pg/ml)与LPS/半乳糖胺激活雌性Balb/c小鼠后5小时血清MIF(ng/ml)之间存在相关性。
图11A-11B是柱状图，说明LPS(5mg/kg)刺激并且添加或不添加20mg/kg体重化合物7e(i.p.)后4小时，IL-1β和TNF-α的ELISA检测结果。
图12A-12C描绘了在用LPS(2mg/kg(12A)，5mg/kg(图12B)，或10mg/kg(图12C))和D-半乳糖胺(50mg/kg)处理Balb/c小鼠时，给Balb/c小鼠施用20mg/kg化合物7e(i.p.)或对照溶剂后，小鼠的累积存活量与生存时间(小时)之间的关系(Kaplan-Meier生存评价法)。
图13是说明在存在或缺乏化合物7e(20mg/kg体重)的情况下，25％小鼠的存活时间对LPS浓度(mg；Sigma 055：B5)和D-半乳糖胺(50mg/kg)之间关系的图。数据表示每次实验30只小鼠共六次实验的平均值。
图14表示在胶原-诱导的关节炎小鼠模型中测试MIF抑制剂抑制关节炎的实验方案。化合物7e每天给药两次，连续四天。
图15是一个柱状图，表示用卡尺测量爪子厚度的结果，以第74天的爪子水肿表示。数值表示为平均值+/-SEM，每组十只动物。
图16A-16B是柱状图，说明在胶原诱导的关节炎小鼠的鼠血清中，通过ELISA测定的MIF(图16A)和TNF(图16B)水平。数值表示为七只动物的平均值+/-SEM。对照是未用胶原或化合物处理的小鼠，CIA表示胶原诱导的关节炎小鼠，化合物7e代表处理过的CIA小鼠。
优选实施方案的详细描述
下面的描述和实施例详细说明了本发明的优选实施方案。本领域技术人员将认识到，存在大量包括在本发明范围内的针对本发明的改动和修饰。因此，优选实施方案的描述不应当理解为是对本发明范围的限制。
为了更好地理解优选实施方案，下面描述了某些定义。
本文使用的术语“MIF活性”是一个宽泛的术语，本发明使用其一般含义，包括但不限于，至少部分由巨噬细胞转移抑制因子介导的活性或作用。因此，MIF活性包括但不限于，抑制巨噬细胞转移，互变异构酶活性(例如，苯基丙酮酸或多巴色素)，内毒素诱导的休克，炎症，糖皮质激素反向调节，诱导胸苷整合入3T3成纤维细胞，诱导erk磷酸化和MAP激酶活性。
本文使用的术语“输出”是一个宽泛的术语，本文使用其一般含义，包括但不限于，通过不同于标准先导序列指导的、经由常规先导序列的机制，运输翻译后的细胞产物到达细胞膜或胞外空间的代谢活性过程，其可以是也可以不是能量-依赖型的。而且，不象先导序列-依赖型的分泌，“输出”对布雷菲儿德菌素A(即，输出蛋白不经过ER/高尔基体运输；预期布雷菲儿德菌素A对运输蛋白的转运没有直接作用)和其他类似化合物具有抗性。本文使用的“输出”还可以指“非-经典途径的分泌”。
本文使用的术语“无先导序列的蛋白质”是一个宽泛的术语，本文使用其普通含义，包括但不限于，缺乏常规先导序列的蛋白质或多肽，从胞内“输出”到胞外环境。胞外环境中的无先导序列的蛋白质指位于胞外空间的蛋白质，或与细胞膜外表面有关的蛋白质。在优选实施方案中，无先导序列的蛋白质包括天然蛋白，如巨噬细胞转移抑制因子及其片段，以及通过基因工程操作缺乏先导序列并被输出的蛋白质，和通过基因工程操作包括无先导序列的蛋白质或其片段与另一种蛋白质的融合体。
本文使用的术语“抑制剂”是一个宽泛的术语，本文使用其普通含义，包括但不限于，无先导序列的蛋白质能够改变MIF构象和/或与单克隆抗体竞争结合MIF，降低MIF的至少一种活性或其从细胞内的输出(与缺乏该抑制剂的活性或输出相比)的分子(例如，天然或合成化合物)。换句话说，如果存在抑制剂所进行的分析中，胞外和/或胞内MIF的测定量、MIF活性、检测到MIF蛋白，与不存在抑制剂所进行的分析相比，发生统计学上的显著改变，则“抑制剂”改变了构象和/或活性和/或输出。
本文使用的术语“结合物质”是一个宽泛的术语，本文使用其普通含义，包括但不限于，结合MIF的任何分子，包括其抑制剂。
通常，MIF抑制剂抑制MIF的生理功能，因此其用于治疗MIF呈病理性的疾病。
在某些优选实施方案中，MIF的抑制剂具有下列结构(Ia)和(Ib)：
包括其立体异构体，前药，或药用盐，其中X为氧或硫；Y包括-NO，-NO2，-C(＝O)R5，-C(＝O)OR5，-C(＝O)NR5R6，-NR5C(＝O)R5，-NR5SO2R5，或-S(O)mR5；Z为-CH2-或-C(＝O)-；m为0，1，或2；n为0，1，或2，条件是当n为0时，Z为-C(＝O)-；R1为氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基或取代的杂环烷基，二烷基，和氨基烷基R’R”N(CH2)x-，其中R’和R”独立地为氢，烷基，取代的烷基，芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，取代的杂环烷基，或二烷基，和其中x为2至4；R2和R3相同或不同，独立地为卤素，-R5，-OR5，-SR5，或-NR5R6；R4为-CH2R7，-C(＝O)NR5R6，-C(＝O)OR7，-C(＝O)R7，或R8；R5和R6相同或不同，独立地为氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，或取代的杂环烷基；或R5和R6一起与它们连接的氮原子形成杂环或取代的杂环；R7为烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，
Figure A0281050100731
杂环烷基，或取代的杂环烷基；和R8为氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，或取代的杂环烷基；条件是当R1为苯基，R2和R3均为氢，X为氧，和Y为-C(＝O)OCH2CH3时，R4不为氢或甲基；当R1为甲基，R2和R3均为氢，X为氧，和Y为-NO2时，R4不为甲基；当R1为氢或甲基，R2为7-氯，R3为氢，X为氧和Y为-C(＝O)OCH2CH3时，R4不为-CH2CH2OH；和当R1为甲基，R2为氢或7-氯，R3为氢，X为氧，和Y为-C(＝O)OCH2CH3时，R4不为甲基。在某些实施方案中，可能并不应用上述一个或多个条件。
在一个优选实施方案中，提供了在所需患者中降低MIF活性的方法，包括给所述患者施用有效量的具有下列结构(Ia)和/或(Ib)的化合物：
Figure A0281050100732
包括其立体异构体，前药，或药用盐，其中X为氧或硫；Y包括-NO，-NO2，-C(＝O)R5，-C(＝O)OR5，-C(＝O)NR5R6，-NR5C(＝O)R5，-NR5SO2R5，或-S(O)mR5；Z为-CH2-或-C(＝O)-；m为0，1，或2；n为0，1，或2，条件是当n为0时，Z为-C(＝O)-；R1为氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基或取代的杂环烷基，二烷基，或氨基烷基R’R”N(CH2)x-，其中R’和R”独立地为氢，烷基，取代的烷基，芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，取代的杂环烷基，或二烷基，其中x为2至4；R2和R3相同或不同，独立地为卤素，-R5，-OR5，-SR5，和-NR5R6；R4为-CH2R7，-C(＝O)NR5R6，-C(＝O)OR7，-C(＝O)R7，或R8；R5和R6相同或不同，独立地为氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，或取代的杂环烷基；或R5和R6一起与它们连接的氮原子形成杂环或取代的杂环；R7为烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，或取代的杂环烷基；和R8为氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，或取代的杂环烷基；条件是当R1为苯基，R2和R3均为氢，X为氧，和Y为-C(＝O)OCH2CH3时，R4不为氢或甲基；当R1为甲基，R2和R3均为氢，X为氧，和Y为-NO2时，R4不为甲基；当R1为氢或甲基，R2为7-氯，R3为氢，X为氧和Y为-C(＝O)OCH2CH3时，R4不为-CH2CH2OH；和当R1为甲基，R2为氢或7-氯，R3为氢，X为氧，和Y为-C(＝O)OCH2CH3时，R4不为甲基。在某些实施方案中，可能并不应用上述一个或多个条件。
在本发明中使用的上述术语具有下面的含义。本发明中使用的术语“烷基”是一个广义的术语，使用其普通的含义，包括但不限于直链或支链、非环状或环状、非饱和的或饱和的含有1-10个碳原子的脂肪族烃，而术语“低级烷基”具有与烷基相同的含义，但是含有1-6个碳原子。有代表性的饱和直链烷基包括甲基，乙基，n-丙基，n-丁基，n-戊基，n-己基，等等；而饱和支链烷基异丙基，仲-丁基，异丁基，叔-丁基，异戊基，等等。有代表性的饱和环烷基包括环丙基，环丁基，环戊基，环己基，CH2环丙基，CH2环丁基，-CH2环戊基，-CH2环己基，等等；而不饱和环烷基包括环戊烯基和环己烯基等等。环烷基也被称作“碳环”，包括二-和多元碳环，如萘烷和金刚烷。不饱和烷基在相邻的碳原子之间含有至少一个双键或三键(分别称为“烯基”或“炔基”)。有代表性的直链或支链烯基包括乙烯基，丙烯基，1-丁烯基，2-丁烯基，异丁烯基，1-戊烯基，2-戊烯基，3-甲基-1-丁烯基，2-甲基-2-丁烯基，2，3-二甲基2-丁烯基，等等；而有代表性的直链或支链炔基包括乙炔基，丙炔基，1-丁炔基，2-丁炔基，1-戊炔基，2-戊炔基，3-甲基-1-丁炔基，等等。
本发明中使用的术语“芳基”是一个广义的术语，使用其普通的含义，包括但不限于芳香碳环部分如苯基或萘基。
本发明中使用的术语“芳基烷基”是一个广义的术语，使用其普通的含义，包括但不限于具有至少一个烷基氢原子被芳基部分替换的烷基，如苄基，-CH2(1或2-萘基)，-(CH2)2苯基，-(CH2)3苯基，-CH(苯基)2，等等。
本发明中使用的术语“杂烷基”是一个广义的术语，使用其普通的含义，包括但不限于具有至少一个选自氮、氧和硫的杂原子，并含有至少一个碳原子，包括单环或双环系统的5-10元芳香杂环。有代表性的杂芳基包括(但不限于)呋喃基，苯并呋喃基，苯硫基，苯并苯硫基，吡咯基，吲哚基，异吲哚基，氮杂吲哚基，吡啶基，喹啉基，异喹啉基，噁唑基，异噁唑基，苯并噁唑基，吡唑基，咪唑基，苯并咪唑基，噻唑基，苯并噻唑基，异噻唑基，哒嗪基，嘧啶基，吡嗪基，三嗪基，噌啉基，2，3-二氮杂萘基，和喹唑啉基。
本发明中使用的术语“杂芳基烷基”是一个广义的术语，使用其普通的含义，包括但不限于具有至少一个烷基氢原子被杂芳基部分替换的烷基，如-CH2吡啶基，-CH2嘧啶基，等等。
本发明中使用的术语“杂环”和“杂环环”是一个广义的术语，使用其普通的含义，包括但不限于5-至7-元单环或7-至14-多元环，杂环是饱和的、未饱和的或芳香的，其含有1-4个独立选自氮、氧和硫的杂原子，其中氮和硫杂原子可以任选地被氧化，氮杂原子可以任选地被季铵化，包括双环(其中上述杂环与苯环稠和)以及三环(及更高)杂环。该杂环可以通过任何杂原子或碳原子连接。杂环包括如上定义的杂芳基。因此，除上述列出的芳香杂芳基，杂环还包括(但不限于)吗啉基，pyrrolidinonyl，吡咯烷基，哌啶基，乙内酰脲基，戊内酰胺基，环氧乙烷基，oxetanyl，四氢呋喃基，四氢吡喃基，四氢吡啶基，四氢嘧啶基，四氢苯硫基，四氢硫代吡喃基，四氢嘧啶基，四氢苯硫基，四氢硫代吡喃基，等等。
本发明中使用的术语“杂环烷基”是一个广义的术语，使用其普通的含义，包括但不限于具有至少一个烷基氢原子被杂环替换的烷基，如-CH2吗啉基等等。
本发明中使用的术语“取代的”是一个广义的术语，使用其普通的含义，包括但不限于任何上述基团(例如，烷基，芳基，芳基烷基，杂芳基，杂芳基烷基，杂环或杂环烷基)，其中至少一个氢原子被取代基取代。在酮取代基(＂-C(＝O)-＂)的情形，两个氢原子被取代。当被取代时，在优选实施方案的上下文中的“取代基”包括卤素，羟基，氰基，硝基，氨基，烷基氨基，二烷基氨基，烷基，烷氧基，烷硫基，卤代烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂芳基，取代的杂芳基，杂芳基烷基，取代的杂芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，取代的杂环烷基，-NRaRb，-NRaC(＝O)Rb，-NRaC(＝O)NRaRb，-NRaC(＝O)ORb，-NRaSO2Rb，-ORa，-C(＝O)Ra，-C(＝O)ORa，-C(＝O)NRaRb，-OC(＝O)NRaRb，-SH，-SRa，-SORa，-S(＝O)2Ra，-OS(＝O)2Ra，-S(＝O)2ORa，其中Ra和Rb相同或不同，独立为氢，烷基，卤代烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂芳基，取代的杂芳基，杂芳基烷基，取代的杂芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基或取代的杂环烷基
本发明中使用的术语＂卤素＂是一个广义的术语，使用其普通的含义，包括但不限于氟，氯，溴和碘。
本发明中使用的术语＂卤代烷基＂是一个广义的术语，使用其普通的含义，包括但不限于具有至少一个氢原子被卤素等替换的烷基如三氟甲基。
本发明中使用的术语＂烷氧基＂是一个广义的术语，使用其普通的含义，包括但不限于通过氧桥(即，-O-烷基)连接的烷基部分，如甲氧基，乙氧基等。
本发明中使用的术语＂硫代烷基＂是一个广义的术语，使用其普通的含义，包括但不限于通过硫桥(即，-S-烷基)连接的烷基部分，如甲硫基，乙硫基等。
本发明中使用的术语＂烷基磺酰基＂是一个广义的术语，使用其普通的含义，包括但不限于通过磺酰基桥(即，-SO2-烷基)连接的烷基部分，如甲基磺酰基，乙基磺酰基等。
本发明中使用的术语＂烷基氨基＂和＂二烷基氨基＂是一个广义的术语，使用其普通的含义，包括但不限于分别通过氮桥(即，-N-烷基)连接的一个烷基部分或两个烷基部分，如甲基氨基，乙基氨基，二甲基氨基，二乙基氨基等。
本发明中使用的术语＂羟基烷基＂是一个广义的术语，使用其普通的含义，包括但不限于被至少一个羟基基团取代的烷基。
本发明中使用的术语＂一-或二(环烷基)甲基＂是一个广义的术语，使用其普通的含义，包括但不限于分别被一个或两个环烷基基团取代的甲基基团，如环丙基甲基，二环丙基甲基等。
本发明中使用的术语＂烷基羰基烷基＂是一个广义的术语，使用其普通的含义，包括但不限于被-C(＝O)烷基基团取代的烷基。
本发明中使用的术语＂烷基羰氧基烷基＂是一个广义的术语，使用其普通的含义，包括但不限于被-C(＝O)O烷基基团或-OC(＝O)烷基基团取代的烷基。
本发明中使用的术语＂烷氧基烷基＂是一个广义的术语，使用其普通的含义，包括但不限于被-O-烷基基团取代的烷基。
本发明中使用的术语＂烷硫基烷基＂是一个广义的术语，使用其普通的含义，包括但不限于被-S-烷基基团取代的烷基。
本发明中使用的术语＂一-或二(烷基)氨基＂是一个广义的术语，使用其普通的含义，包括但不限于分别被一个烷基或两个烷基取代的氨基。
本发明中使用的术语＂一-或二(烷基)氨基烷基＂是一个广义的术语，使用其普通的含义，包括但不限于被一-或二(烷基)氨基取代的烷基。
在优选实施方案的上下文中使用下列编号方案：
根据Z部分，优选实施方案的代表化合物包括下列当Z为亚甲基(-CH2-)的结构(II)和当Z为羰基(-C(＝O)-)的结构(III)：
在另外的实施方案中，n为0，1，或2，分别如结构(IV)、(V)和(VI)表示：
在另外的实施方案中，优选实施方案的化合物具有当X为氧的结构(VII)和当X为硫的结构(VIII)：
Figure A0281050100791
根据Y基团，优选实施方案的化合物具有下列结构(IX)至(XIII)：
Figure A0281050100792
优选实施方案的化合物可以通常作为游离酸或游离碱被使用。备选地，优选实施方案的化合物可以优选地为酸或碱加成盐的形式。优选实施方案的游离碱氨基化合物的酸加成盐可以通过本领域公知的方法制备，可以从有机和无机酸形成。适合的有机酸包括马来酸，富马酸，苯甲酸，抗坏血酸，琥珀酸，甲磺酸，乙酸，草酸，丙酸，酒石酸，水杨酸，柠檬酸，葡糖酸，乳酸，扁桃酸，肉桂酸，天冬氨酸，硬脂酸，棕榈酸，羟基乙酸，谷氨酸，和苯磺酸。适合的无机酸包括盐酸，氢溴酸，硫酸，磷酸和硝酸。游离酸的碱加成盐可以通过类似本领域公知的方法制备，可以从适当的碱，如选自碱和碱土金属(例如，锂，钠，钾，镁，钡或钙)以及铵离子形成。结构(Ia)或(Ib)的术语“药用盐”意图包括任何和所有的可接受的盐形式。
结构(Ia)或(Ib)的化合物可以按照本领域技术人员已知的有机合成技术以及实施例1中提出的代表性的方法制备。通常，结构(Ia)的化合物可以按照下列反应路线制备。
反应路线1
通常，结构iii的氯中间体可以通过已知技术从相应的醇ii制备。该醇中间体可以依次通过与适当的试剂反应，从起始原料i制备。代表性的反应物和条件在实施例1中列出。
反应路线2
Figure A0281050100811
结构vi的N-取代的哌嗪可以通过使保护的中间体v(在这种情况下，为了例举的目的，用N-叔-丁氧基羰基或＂Boc＂保护)去保护进行制备。该保护的中间体可以通过加成所需的R4基团从N-保护的哌嗪iv制备。
反应路线3
Figure A0281050100812
来自反应路线1中间体iii可以与来自反应路线3的中间体vi反应，得到具有结构(Ia)的优选实施方案的化合物。
反应路线4
Figure A0281050100821
备选地，反应路线1的中间体iii可以与保护的中间体iva反应，得到保护的反应产物vii。然后，保护的反应产物可以被去保护，得到中间体viii，然后加成所需的R4基团，得到具有结构(Ia)的优选实施方案的化合物。
MIF作为药物的靶体
巨噬细胞转移抑制因子(MIF)可以非常适于作为药物的靶体进行分析，因为其活性涉及多种病理生理条件。例如，曾报道MIF在炎症反应和细胞增殖过程中都是重要的介质。在这一点上，曾报道MIF发挥细胞因子，垂体激素的作用，发挥糖皮质激素-诱导的免疫调节剂的作用，并且也就是最近认为它发挥神经免疫调节剂作用和在神经元中发挥功能。Takahashi等，Mol.Med.4：707-714，1998；Bucala，Ann.N.Y.Acad.Sci.840：74-82，1998；Bacher等，Mol.Med.4(4)：217-230，1998。而且，最近还曾论证，抗-MIF的抗体具有多种用途，主要有降低肿瘤生长，并伴随可观察到的血管生成的减少。Ogawa等，Cytokine 12(4)：309-314，2000；Metz和Bucala(同上)。因此，能够抑制MIF的小分子在治疗炎性反应、减少血管生成、病毒感染、细菌感染、治疗癌症(具体来说是肿瘤发生和细胞凋亡)，治疗移植物抗宿主反应及相关组织排斥中具有重要价值。MIF抑制剂特别可用于多种免疫相关反应，肿瘤生长，肾小球肾炎，炎症，疟疾性贫血，脓毒性休克，与肿瘤相关的血管发生，玻璃体视网膜病，银屑病，移植物抗宿主反应(组织排斥)，特异性皮炎，类风湿性关节炎，炎症性肠病，炎性肺病，中耳炎，克罗恩氏病，急性呼吸窘迫综合征，迟发型变态反应。MIF抑制剂还可用于治疗应激和糖皮质激素功能紊乱，例如糖皮质激素作用的反向调节；糖皮质激素介导的花生四烯酸释放的抑制作用优势化(基于Cys-60的催化MIF氧化还原酶活性或基于JABI/CSNS-MIF-相互作用的机制)。
MIF抑制剂应用的一个实例可由下列事实说明，在接触内毒素后，血清中可检测的MIF浓度在急性期(1-8小时)逐渐递增，在8小时达峰，并在后-急性期(＞8小时)维持达20小时之久。不论是何种工作原理，MIF可能是由活化的T-细胞和巨噬细胞在内毒素-诱导的休克的发炎前期所产生，如对感染的部分局部化反应。若经发炎前期刺激物如低剂量的LPS或TNF-α或IFN-γ所激化释放，巨噬细胞-衍生的MIF极可能成在内毒素休克急性期间MIF的来源。在内毒素休克后-急性期，此时感染不再限于局部位置，则对LPS应答而释放MIF的脑垂体和巨噬细胞均是可能的MIF来源。参见如美国专利号第6,080,407号，其全文并入本文作为参考，其中描述了与抗-MIF抗体的上述实验结果。
如本发明所论证，优选实施方案的抑制剂可在LPS攻击小鼠后抑制对小鼠的致命性，并且可能降低IL-1β和TNF-α的水平。因此，MIF的抑制剂可用于治疗多种炎性症状。关于所有优点中的这一点，抑制MIF活性和/或释放可用来治疗发炎反应和休克。不论早期还是晚期介入休克反应，都可以达到有益效果。在这方面，不论MIF抑制的保护作用为何种理论或机制，抗MIF的研究应经证明引入抗MIF抗体可导致循环系统的血清中TNF-α水平相当程度(高至35-40％)的减少。该减少与体外MIF对巨噬细胞的TNF-α诱导活性一致，并提示MIF可能在某种程度上与内毒素给药后1-2小时血清中产生的TNF-α极端高水平有关，尽管此时循环系统中尚不能检测到MIF。因此，MIF的抑制治疗或许在发炎反应的早期有益。
MIF还在休克反应的后急性期起作用，故有可能介入其他治疗如抗TNF-α治疗无效的发炎反应后期。MIF抑制能防止动物被高浓度(即诱导释放垂体MIF至循环系统中的浓度)内毒素攻击和被TNF-α攻击所致的致命休克。因此，抑制MIF和保护遭受TNF攻击的动物的能力，表明中和MIF或许在脓毒性休克后期、后急性期有效。
如本发明所证明，TNF-α和IL-1B水平至少在某些情况下与MIF水平相关。因此，抗-MIF的小分子可能用于多种与TNF-α和/或IL-1β相关的疾病状况，包括移植排斥、免疫-介导的和炎症性CNS疾病(例如阿尔茨海默病，帕金森氏症，多发性硬化等)，肌营养不良、止血疾病(例如凝血病、静脉闭锁疾病等)、过敏性神经炎、肉芽肿、糖尿病、移植物抗宿主反应、慢性肾脏损伤、脱发症(毛发掉落)、急性胰腺炎、关节疾病、充血性心力衰竭、心血管病(再狭窄，动脉硬化症)和骨关节炎。
而且，本领域的其他证据已表明，作为细胞因子产生的强效抑制剂的甾类实际上增加MIF的表达。Yang等，Mol.Med.4(6)：413-424，1998；Mitchell等，J.Biol.Chem.274(25)：18100-18106，1999；Calandra和Bucala，Crit.Rev.Immunol.17(1)：77-88，1997；Bucala，FASEB J.10(14)：1607-1613，1996。因此，联合使用MIF抑制剂与甾类治疗，用于治疗细胞因子介导的病理生理状况，例如炎症、休克、和其他细胞因子-介导的病理状况，特别是慢性炎症状况例如类风湿性关节炎可能特别有用。这样的联合治疗或许对疾病发作后或其他发炎反应有益。例如临床实践中，脓毒性休克症状发作后再施用甾类证明几乎没有益处。参见Bone等，N.Engl.J.Med.317：653-658，1987；Spring等，N.Engl.J.Med.311：1137-1141，1984。甾类/MIF抑制治疗的联合应用可以用来克服这张障碍。而且，本领域技术人员可以理解，这种治疗可以被特别设计为局部和/或系统地抑制MIF释放和/或活性。
分析
可以通过多种分析方法确定化合物作为MIF抑制剂的效果。优选实施方案的适当抑制剂能够降低与MIF和/或MIF输出有关的活性。式(Ia)或(Ib)或任何其他结构的化合物可以通过一种或多种通常用于该目的的方法，包括但不限于下面描述的分析法，用于评价其作为MIF抑制剂的活性。
分析法通常被分为三类，它们是：监测输出的分析法；监测效应器或结合的小分子的分析法；和监测MIF活性的分析法。然而，应当注意到，这些分析法的组合在本应用的范围内。出乎意料地发现，MIF的表位谱似乎可以用作生物活性的替代物。例如，在一项分析中，当用单克隆抗体(例如R&D系统商业提供的(Minneapolis，MN))测定时，存在一种侯选抑制剂阻止MIF从细胞(例如，THP-1细胞)输出的检测，而应用多克隆抗体时，证明存在MIF。而且，可以应用细胞学分析或体外分析法论证这些潜在抑制剂抑制MIF活性的能力。或者，可以将这两种分析法(即结合和活性分析)组合成为一个分析法，其检测实验化合物的结合能力(例如，置换单克隆抗体的能力或抑制它们结合的能力)，同时还影响MIF的活性。这种分析法包括ELISA型分析法(或类似的结合分析法)和MIF互变异构性分析或类似的功能分析。如本领域普通技术人员可以容易认识到的那样，应用的准确分析是相对的，条件是其能够检测目标化合物结合MIF的能力。另外，优选的分析法检测化合物抑制MIF活性的能力，因为其能够选择与化合物结合的MIF，其中化合物与生物活性MIF相互作用，而与非生物活性MIF不发生相互作用。
还应当理解，证明具有抑制单克隆抗体结合生物活性MIF，而不结合无活性MIF能力的化合物(例如，起抑制作用的小分子)，则表明一定存在，以改变MIF构象或封闭抗体结合必须表位的方式与MIF相互作用的化合物(例如，小分子)。在另一个实施方案中，还可以通过干扰包括MIF的多肽复合物的形成，而识别MIF抑制活性；干扰这种复合物可能导致抑制检测的构象改变。因此，当附加检测化合物(例如小分子)与mAb之间的竞争性的分析或者作为这种分析的替代时，应用检测MIF构象改变的分析法是有利的。本领域已知很多这种分析，包括，量热法、圆二色性(CD)，萤光能量迁移，光-散射，核磁共振(NMR)，表面等离子体激元共振(surface plasmon resonance)，闪烁逼近分析(scintillationproximity assays)(参见美国专利第5,246,869号)等。也参见WO02/07720-A1和WO97/29635-A1。因此，本领域技术人员可以认识到，表明MIF的结合能力，优选构象改变或MIF活性区附近位置的任何分析法都可以使用。下面将描述几个更为复杂的逼近分析(proximityassays)和构象分析，这些讨论仅仅是举例性的，绝不应当构成优选实施方案中可能使用的方法类型的限制。
在一个实施例中，可以使用圆二色性测定侯选抑制剂的结合。圆二色性(CD)部分基于这样的事实，即大多数生物蛋白质大分子都由不对称单体单元，L-氨基酸构成，因此它们都拥有光学活性。另外，象DNA或α螺旋状多肽这样的刚性结构具有光学活性，能够用适当的分光系统测量。事实上，容易测量的分光参数的大幅改变能够提供选择性方法，以鉴定构象状态以及各种环境下构象状态的改变，有时可以观察高分子中的或附着于高分子的单独基团的扰动。而且，CD分析已经被频繁使用，以探测各种高分子与小分子和配体之间的相互作用。参见Durand等，Eur.Biophys.J.27(2)：147-151，1998；Kleifeld等，Biochem 39(26)：7702-7711，2000；Bianchi等，Biochem 38(42)：13844-13852，1999；Sarver等，Biochim Biophys Acta 1434(2)：304-316，1999。
Pasteur原理说明，光活性分子必须是不对称的；也就是说，分子和其镜像不能重叠。平面偏振光是同相中传播的左圆偏振光和右圆偏振光的集合。该光与不对称分子相互作用导致一种圆偏振光成分产生优势相互作用，其在吸收区可观察到不同的吸收值(即，二色性)。参见Urry，D.W.，生物分子构象的光谱研究(Spectroscopic Approaches toBiomolecular Conformation)，American Medical Association Press，Chicago，III.，pp.33-120(1969)；Berova和Woody，圆二色性：原理和应用，John Wiley & Sons，N.Y.，(2000)。因此，圆二色性是一种发色团与平面偏振光在特定波长相互作用而产生的吸收现象。根据右和左圆偏振光对该发色团的吸收差异，吸收带可以为负或正。不象旋光色散(ORD)从实际光相互作用区之外数豪微米外测量背景和目标发色团的贡献，CD的优势在于在光发生相互作用的波长测量光的相互作用。因此，圆二色性具体针对发色团的电子跃迁。参见Berova和Woody，圆二色性：原理和应用，John Wiley & Sons，N.Y.，(2000)。
圆二色性应用于高分子溶液，可以鉴定构象状态(Berova和Woody，圆二色性：原理和应用，John Wiley & Sons，N.Y.，(2000))。该方法可以分辨高分子的随机盘绕、α螺旋、和β链构象状态。在蛋白质中，α螺旋纤维状蛋白显示与α螺旋蛋白非常相似的吸收曲线，但是在已知结构的球形蛋白中，例如溶菌酶和核糖核酸酶，螺旋结构很少与X-射线晶体学的结果一致。球状蛋白的进一步困难在于分子中280nm附近的芳香发色团占主流。在一个有趣的实施例中，应用肌红蛋白和脱辅基红蛋白证实了螺旋的改变。当除去辅基血红素后，保留的脱辅基蛋白剩余的圆二色性椭圆率降低了25％。这种螺旋丧失的原因在于分子中10-15个残基伸展所致。其他的非-肽类，光学活性发色团包括高分子一级氨基酸序列中的酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、和半胱氨酸。非肽类实施例的椭圆性包括核糖核酸酶中二硫化物的跃迁和胰岛素中半胱氨酸的跃迁。
因此，圆二色性可以用于筛选具有影响MIF构象能力的侯选抑制剂。
在本发明提供的某些实施方案中，可以通过检测包括MIF和可检测的标记结合试剂的复合物的是否存在来确定MIF-结合试剂或抑制剂复合物的形成。如下面将进一步详细描述的那样，荧光能力信号检测，例如荧光偏振性，可以测量代表MIF-结合试剂分子复合物形成的信号水平。因此，如本发明所描述的，在缺乏和存在侯选抑制剂的情况下，通过荧光能量信号比较MIF-结合试剂复合物的形成，提供了一种鉴定该物质是否改变了MIF和结合试剂之间相互作用的方法。例如，结合试剂可以是MIF底物、抗-MIF抗体、或已知抑制剂，而候选抑制剂可以是待测化合物，反之亦然。
如上所述，某些优选实施方案还部分涉及基于荧光能量信号测定MIF结合试剂复合物的形成。荧光能量信号检测可以通过，例如，荧光偏振或荧光共振能量转移，或者本领域已知的其他荧光法进行。作为另一些实施方案的实施例，MIF多肽可以被标记，候选抑制剂也可以被标记，MIF多肽可以包括能量转移分子供体-受体对，同时测定荧光共振能量从能量供体到能量受体的转移水平。
在某些实施方案中，对候选抑制剂和/或结合试剂进行可检测标记，特别是在优选实施方案中，候选抑制剂和/或结合试剂能够产生荧光能量信号。候选抑制剂和/或结合试剂通过共价或非共价结合于适当的报告分子或基团进行可检测标记，例如本领域已知的、根据待用的特定荧光能量方法和按照本发明描述的方法选择的任何荧光材料(例如，荧光团)。本发明提供的荧光报告基团和方法可以在以下文献中找到，例如Haugland(1996荧光探针和研究化合物手册(Handbook of FluorescentProbe and Research Chemicals)-第六版，Molecular Probes，Eugene，OR；1999荧光探针和研究化合物手册-第七版，Molecular Probes，Eugene，OR，http：//www.probes.com/lit/)和其中被引证的参考文献。在优选实施方案中特别适用的荧光团是荧光素、若丹明(rhodamine)、德州红(Texas Red)、AlexaFluor-594、AlexaFluor-488、奥勒冈绿(OregonGreen)、BODIPY-FL和Cy-5。然而，可以使用任何适当的荧光团，在某些实施方案中，前面列出的荧光团之外的其他荧光团可能是优选的。
如本发明所述，荧光能量信号包括任何荧光发散、激发、能量转移、淬灭、和去淬灭等。荧光能量信号通常由荧光可检测标记的候选抑制剂和/或结合试剂响应适当波长的光而产生。简单的说，不限于任何理论，荧光能量信号的产生通常涉及荧光被适当能源(例如，为荧光报告基团和荧光团所选择的适当波长的光)所激发，该荧光团的能态瞬时从基础态上升到激发态。激发的荧光团反过来发射可检测光形式的能量，其通常具有不同于激发光的波长(例如，通常较长)，从而返回其能量的基础态。优选实施方案试图根据特定荧光团，底物标记法和检测设备使用任何荧光能量信号，按照本领域普通技术人员熟悉的标准，它们可被容易地选择，不会花费过度劳动。
在某些实施方案中，荧光能量信号是荧光偏振(FP)信号。在另一些实施方案中，荧光能量信号可以是荧光共振能量转移(FRET)信号。在其他一些优选实施方案中，荧光能量信号可以是荧光淬灭(FQ)信号或荧光共振光谱(FRS)信号。(关于FP，FRET，FQ和FRS的详细描述，参见例如，WO97/39326；WO99/29894；Haugland，H荧光探针和研究化合物手册-第六版，1996，Molecular Probes，Inc.，Eugene，OR，p.456；和其中引证的文件)。
FP测量的是荧光团从能量源吸收光子到其随后发射光子之间发生的荧光团的平均角位移(由于分子的旋转扩散)，FP根据荧光团激发态期间旋转扩散的范围和比率、分子大小和形状、溶液粘度和溶液温度而改变(Perrin，1926 J.Phys.Rad.1：390)。当粘度和稳定保持稳定时，FP与荧光团的表观分子体积和大小直接相关。偏振值是不同平面(例如，垂直面和水平面)测得的荧光强度的比值，因此它是一个不受荧光团强度影响的无量纲量。低分子量荧光团，如本发明描述的可检测标记的候选抑制剂和/和结合试剂，能够在溶液中快速分子旋转(即，低各向异性)，因此产生较低的荧光偏振读数。然而，当与高分子量分子如本发明描述的MIF形成复合物时，底物的荧光基团与复合物结合，在溶液中表现相对低的分子旋转(即，高各向异性)，产生较高的荧光偏振读数。
游离的可检测标记的候选抑制剂/或结合试剂的偏振值与MIF∶候选抑制剂和/或结合试剂复合物的偏振值相比的差值，可以用于测定复合型(例如，结合)与游离型的比率。该差值还可以用于检测候选试剂(即，候选抑制剂)对上述复合物形成和/或对形成前复合物稳定性的影响，例如比较缺乏试剂时检测的FP与存在该试剂时检测的FP。FP的测量可以不必分离反应成份即可进行。
如上所述，优选实施方案的一个方面应用单克隆抗体、已知抑制剂、或其他结合试剂和/或候选抑制剂的复合型与MIF的结合或取代，以提供鉴定改变MIF活性的抑制剂的方法。出乎意料地发现，优选实施方案的抑制剂以这样一种非常规的方式被鉴定出来。在这一方面，证明了一类化合物具有抑制/降低单克隆抗体结合细胞自然产生的生物活性MIF的能力，而不影响抗体识别非活性(重组)MIF(商业提供)的能力，还证明在体内显著调节MIF活性。因此，抗体结合可能是一种酶活性的优选替代方式，其不必对每个候选化合物都进行昂贵和复杂的酶分析。本领域普通技术人员容易理解，避免使用酶分析，能够使分析法成为适于高通量应用的优秀分析方法。
而且，本领域普通技术人员容易理解，象这样的分析法可以在MIF环境外使用，不管在何处酶或生物活性都可被结合分析法所替代。例如，优选使用单克隆抗体能够识别其生物活性型，而不能识别非活性型(例如，被小分子抑制的形式)的酶或其他多肽。在酶活动过程中，单克隆抗体可以结合活性位点，但是可被小分子置换。因此，置换抗体的任何小分子极有可能成为潜在酶抑制剂。本领域技术人员可以理解，抗体可以识别表位，其根据酶的活性状态改变构象，且该表位可以结合小分子，以致排除抗体结合该表位，因此这也可以作为酶活性的替代法，虽然表位可能不是活性部位。因此，本发明所应用的分析类型可以扩展到用于基本上任何多肽，其中抗体的取代成为活性丧失的先兆。因此，任何最简单形式的多肽，例如，酶和其结合的中和抗体可以用于筛选取代该抗体的小分子，由此鉴定可能的抑制剂。
可以用任何本领域已知的、用于证明MIF和上述其他分子之间相互作用的技术鉴定MIF-结合试剂/候选抑制剂复合物，例如，共—纯化、共—沉淀、共—免疫沉淀、放射测定或荧光测定分析、western免疫印迹分析、包括亲合技术的亲合捕获如固相配体—反配体吸附技术、亲合色谱和表面亲合胞质团共振(surface affinity plasmon resonance)、NMR等(参见例如，U.S.Patent No.5,352,660)。可以使用特异性结合MIF或结合试剂的抗体，包括单克隆抗体、多克隆抗体、嵌合和单链抗体等，测定该复合物的存在。
也可以用标记的MIF和/或标记的结合试剂/候选抑制剂检测复合物的存在。目标分子可以通过共价或非共价结合适当的报告分子或基团而被标记，例如各种酶、荧光物质、发光物质、和放射性物质。适当酶的例子包括但不限于，辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、半乳糖苷酶和乙酰胆碱酯酶。适当的荧光物质的例子包括但不限于，7-羟基香豆素、荧光素、萤光素异硫氰酸酯、若丹明、二氯三嗪胺(dichlorotriazinylamine)萤光素、丹磺酰氯、藻红蛋白、德州红(Texas Red)、AlexaFluor-594、AlexaFluor-488、奥勒冈绿(Oregon Green)、BODIPY-FL和Cy-5。适当的发光物质包括但不限于，发光氨，适当的放射性物质包括放射性磷[32P]、碘[125I或131I]或氚[3H]。
MIF与结合试剂和/或候选抑制剂在特定条件下并保持允许成份间形成分子间复合物的足够时间进行结合。形成该复合物的适当条件本领域已知，并且可以根据本发明提供的教导容易地确定，其中包括检测复合物是否存在和/或检测溶液中游离底物的溶液条件和测定方法。
可以按照优选实施方案，通过检测底物产生的荧光能量信号鉴定复合物中可检测标记的结合试剂和/或候选抑制剂与MIF的结合、和/或非该复合物部分的结合试剂或候选抑制剂。通过，按照本领域普通技术人员熟悉的标准选择检测荧光能量信号的能源。将含有MIF和可检测标记的结合试剂和/或候选抑制剂的试验溶液，与能源接触，以产生荧光能量信号，其通过任何已知设备检测并根据特定荧光能量信号鉴定。在优选实施方案中，荧光能量信号是荧光偏振信号，其能够应用配备有偏光滤光器的分光荧光计检测。在特别优选的实施方案中，荧光偏振检测对大量反应室中的每一个同时进行，可以利用例如LJL CRITERIONTM分析仪(LJL Biosystems，Sunnyvale，CA)的平板读数器读数，从而对具有不同反应成分或条件的大量反应室提供高通量筛选(HTS)。其他包含荧光偏振记录的适当装置的例子包括，POLARSTARTMTM(BMG LabTechnologies，Offenburg，Germany)，BEACONTM(Panvera，Inc.，Madison，WI)和POLARIONTM(Tecan，Inc.，Research Triangle Park，NC)装置。
如上所述，测定MIF与结合试剂和/或候选抑制剂之间形成的复合物的存在，可以通过多种方法进行，包括本发明描述和本领域已知的荧光能量信号法。这种方法可以包括，以举例说明而非限定的方式，FP、FRET、FQ、其他荧光分析法、共-纯化、共-沉淀、共-免疫沉淀、放射法、western免疫印迹分析、包括亲合技术的亲合捕获如固相配体—反配体吸附技术、亲合色谱和表面亲合胞质团共振、圆二色性等。对于这些和其他有用的亲合技术，参见，例如，Scopes，R.K.，蛋白质纯化：原理和方法，1987，Springer Verlag，NY；Weir，D.M.，实验免疫学手册(Handbook of Experimental Immunology)，1986，Blackwell Scientific，Boston；和Hermanson，G.T.等，固定亲合配体技术(Immobilized AffinityLigand Techniques)，1992，Academic Press，Inc.，California；它们全文并入本发明作为参考，其中详细描述了分离和鉴定复合物的方法，包括亲合法。在各实施方案中，MIF可以与结合试剂和/或候选抑制经特异性结合发生相互作用，条件是MIF结合结合试剂和/或候选抑制剂的Ka高于或等于约104M-1，优选高于或等于约105M-1，更优选高于或等于约106M-1，特别优选高于或等于约107M-1到1011M-1。结合配体的亲合性可以从上述荧光能量信号法产生的数据并应用常规数据处理方法容易地计算出来。例如，Scatchard等，Ann.N.Y.Acad.Sci.51：660(1949)描述的方法。
例如，在荧光能量信号是荧光偏振信号的各实施方案中，可以在缺乏MIF时测定游离可检测标记的候选抑制剂和/或结合试剂的荧光各向异性(在偏振光中)，在存在滴定量MIF时测定完全结合底物的荧光各向异性(在偏振光中)。荧光在偏振光中的各向异性随着荧光团处于激发态过程中标记的候选抑制剂和/或结合试剂所发生的旋转运动的量而改变，因此游离的和完全结合的候选抑制剂和/或结合试剂的各向异性可以用于确定特定实验条件下结合于MIF的候选抑制剂和/或结合试剂部分，例如，其中存在候选试剂的复合物(参见，例如，Lundblad等，1996Molec.Endocrinol.10：607；Dandliker等，1971 Immunochem.7：799；Collet，E.，偏振光：基础和应用，1993 Marcel Dekker，New York)。
某些优选实施方案部分涉及应用分子间能量转移，监测MIF-结合试剂复合物的形成和稳定性和/或MIF-候选抑制剂复合物的形成。
能量转移(ET)由两个分子：提供能量的“供体”分子和接受能量的“受体”分子之间共振相互作用而产生。在以下条件下，可以发生能量转移，(1)供体的发射光谱与受体的吸收光谱重叠和(2)供体和受体在特定距离范围内(例如，少于约10nm)。能量转移的效率很大程度上由供体和受体之间的接近程度决定，其以距离的6次方减少。因此ET的测量显著反应受体和供体化合物之间的接近度，ET灵敏度的变化反应化合物接近度的变化，例如，供体和受体结合或分离。
因此，优选实施方案的一个方面在于提供一种分析候选MIF抑制剂的方法，在相关部分中，使其接触MIF或包括一种或多种ET供体和ET受体分子的MIF-结合试剂复合物，激发ET供体产生激发态的ET供体分子，检测从ET供体分子到ET受体分子的能量转移所产生的信号。如本发明所描述，该方法可应用任何适当的能够发挥供体—受体对作用的ET供体分子和ET受体分子。
在某些优选实施方案中，ET供体和受体分子之间的能量转移所产生的可检测的信号来自前面已经涉及的荧光共振能量转移(FRET)。在一个分子内部，或在两个不同类型的分子间，当能量从激发态供体荧光团直接转移到受体荧光团时，产生FRET(参见综述Wu等，AnalyticalBiochem.218：1-13，1994)。
在优选实施方案的另一方面，测试了候选抑制剂影响MIF输出的能力。
该分析的第一步是检测胞外MIF。在该检测中，使用了表达MIF的实验细胞(例如，THP-1细胞)。实验细胞既可以天然产生该蛋白，也可以从被转染的表达载体产生。优选实验细胞正常表达该蛋白，而转染仅增加表达水平。因此，对于表达MIF和IL-1，THP1细胞是优选的。就像本领域技术人员容易理解的，如果分析来源于病毒的蛋白质，如HIV tat，如果实验细胞不能天然产生该蛋白，则可以用适当的载体容易地转染，从而使试验细胞表达所需蛋白质。
表达后，用任何一种已知方法和步骤即可检测MIF。这类方法包括抗体染色结合流式细胞测量术、共焦显微术、成像分析、细胞溶质或培养基的免疫沉淀、细胞培养基的Western印迹、ELISA、1-或2-D凝胶分析、HPLC、或生物测定。初筛的方便分析法是ELISA。MIF的输出可以通过其他分析法证实，优选通过代谢物标记后细胞培养基的免疫沉淀分析。简单的说，表达MIF蛋白的细胞在无蛋氨酸和/或半胱氨酸的培养基中，用35S-蛋氨酸和/或35S-半胱氨酸脉冲标记15分钟，并在添加过量蛋氨酸和/或半胱氨酸的培养基中追加。收集培养基，例如在微离心机中离心澄清。向澄清培养基中加入含有1％NP-40，0.5％脱氧胆盐(DOC)，20mM Tris，pH7.5，5mM EDTA，2mM EGTA，10nM PMSF，10ng/ml抑肽酶，10ng/ml亮抑蛋白酶肽，和10ng/ml抑胃酶肽的溶胞缓冲液。加入针对MIF的抗体，然后在冷环境中孵育，加入用于沉淀的第二抗体或免疫球蛋白结合蛋白，如蛋白A-Sepharose或GammaBindTM-Sepharose进一步孵育。在作为对照的平行试验中，监测了胞质蛋白，在免疫沉淀中优选使用胞质蛋白的抗体。免疫复合物沉降，用冰-冷却的溶胞缓冲液洗涤。复合物用冰—冷却的IP缓冲液(0.15M NaCl，10mM磷酸钠，pH7.2，1％DOC，1％NP-40，0.1％SDS)再次洗涤。直接将免疫复合物洗脱到SDS-凝胶样品缓冲液中，然后进行SDS-PAGE电泳。将凝胶进行荧光照像处理，干燥，然后接触X-射线胶片。或者可以将细胞进行基因工程处理，使其产生报告物标记的MIF，从而可以通过确定报告物的活性替代确定活性MIF。
不希望被任何理论束缚，据信本发明的抑制剂通过与天然MIF复合物以改变该蛋白构象而足以阻断其生物活性的方式直接作用发挥功能。该相互作用可以通过对MIF-化合物共晶体进行X-射线晶体衍射作图反映，以确定相互作用的准确部位。一个部位位于构成MIF互变异构酶活性的口袋。
MIF输出抑制剂的筛选分析根据抑制剂的类型和被影响的活性的性质而改变。分析可以在体外也可以在体内进行。通常，体外分析被设计用于评价MIF活性或多聚化，体内分析被设计评价模型细胞或动物系统中MIF活性、胞外和保内位置。在一些分析中，与适当的对照相比，增强或抑制显示为具有统计学的显著增加或降低。
在体外分析中，可以考察候选化合物对MIF抑制巨噬细胞转移能力的影响。简单的说，基本上如Weiser等，Cell.Immunol.90：167178，1985和Harrington等，J.Immunol.110：752-759，1973所述，优选使用人外周血单核细胞作为琼脂糖—小滴分析系统中的指示细胞。也可以使用其他分析巨噬细胞转移的分析系统。Hermanowski-Vosatka等，Biochem.38：12841-12849，1999描述了这类分析法。
设计的另一种体外分析法，是测量MIF催化多巴色素的D-型异构互变异构的能力(参见Rosengren等，Mol.Med.2：143-149，1996；Winder等，J.Cell Sci.106：153-166，1993；Aroca等，Biochem.J.277：393-397)。简要地说，该方法中，在存在和缺乏候选抑制剂的情况下，将D-多巴色素加入MIF，监测催化异构化为5，6-二羟基吲哚-2-羧酸(DHICA)的能力。然而，使用D-多巴色素的甲基酯更为优选，从而可以观察到较快的反应速率。可以使用任何一种标准方法检测互变异构化。
在一个类似分析中，测试了MIF催化苯基丙酮酸酯互变异构化的能力(参见Johnson等，Biochem.38(48)：16024-16033，1999)。简单的说，该方法中，苯基丙酮酸酯或(p-羟基苯基)丙酮酸酯的典型酮基化作用通过光谱测定。而且通过用MIF处理这些化合物，随后经1H NMR分析转化为苹果酸酯证实产物形成。
可以在用含有如本发明描述的MIF核酸分子的表达载体临时或稳定转染的细胞中，进行体内分析。优选用这些细胞测量存在和缺乏候选化合物时，MIF活性(例如，调节细胞凋亡、增殖等)或胞外和胞内位置。当分析细胞凋亡时，可以使用多种细胞分析法，包括，例如，染料染色法和显微镜法观察核酸片断和细胞的孔隙。
在模型细胞或动物系统中可以进行其他分析，即在存在或缺乏实验化合物时，向该系统中加入一种重组的或天然的MIF或者诱导内源性MIF表达，由此确定该系统病理学是否出现统计学的显著增强或降低。例如，可以使用LPS诱导毒性休克反应。
本发明简要描述的该分析法可以用于鉴定对MIF具有特异性的抑制剂。
在本发明描述的任何分析中，实验细胞可以天然表达MIF(例如，THP-1细胞)，或者导入编码该蛋白的重组DNA分子。转染和转化方案在本领域是已知的，包括Ca2PO4-介导的转染，电融合，病毒载体感染，DEAE-葡聚糖介导的转染等。作为上述蛋白质的替代，可以使用嵌合MIF蛋白(即，MIF蛋白与其他蛋白质和蛋白片段融合)、或经基因工程操作去除先导序列的蛋白序列。在一个类似模式中，构建的融合体可以直接分泌、输出、或保留在胞质中。这些序列的部分或全部可以用于具有MIF的融合构建体中，以帮助分析抑制剂。宿主细胞还可以由于疾病或被病毒感染等而表达产生MIF。利用先导序列输出的分泌蛋白是已知的，包括人绒毛膜促性腺素(hCGa)，生长激素，肝细胞生长因子，转铁蛋白，神经生长因子，血管内皮生长因子，白蛋白，和胰岛素—样生长因子。同样，胞质蛋白也是已知的，包括新霉素磷酸转移酶，p-半乳糖苷酶，肌动蛋白和其他细胞骨架蛋白，以及酶，如蛋白激酶A或C。最有用的胞质或分泌蛋白是利用常规方法，如ELISA容易测量的蛋白质。三种蛋白质(无先导序列的、分泌的、和胞质的)可以天然共同表达、或者共—转染到实验细胞中、或者分别转染到不同的实验细胞中。而且，对于本发明描述的分析，细胞可以稳定地转化或临时表达蛋白质。
免疫沉淀是一种可用于测定抑制作用的分析法。简单的说，天然表达或导入载体构件体表达MIF的细胞在无蛋氨酸-和/或半胱氨酸的细胞培养基中，用35S-蛋氨酸和/或35S-半胱氨酸短期标记，通常15分钟或稍多。然后脉冲标记，用添加过量无标记蛋氨酸和半胱氨酸以及肝素(如果无先导序列的蛋白质是结合肝素的)的培养基洗涤细胞。然后在相同的追加培养基中培养细胞不同时间。候选抑制剂或增强剂以不同浓度添加到培养物中。收集培养悬浮液，澄清。上清液与抗-MIF的免疫血清或单克隆抗体，或抗—标记抗体(如果存在多肽标记)共同孵育，然后加入显影剂如金黄色葡萄球菌Cowan菌株I、蛋白A-Sepharose、或Gamma-bindTM G-Sepharose。免疫复合物通过离心沉降，在含有1％NP-40和0.5％脱氧胆盐，EGTA，PMS F，抑肽酶，亮抑蛋白酶肽，和抑胃酶肽的缓冲液中洗涤。然后在含磷酸钠pH7.2，脱氧胆盐，NP-40，和SDS的缓冲液中洗涤沉淀。将免疫复合物洗脱到SDS凝胶样品缓冲液中，通过SDS-PAGE分离。处理凝胶用于荧光图像摄影，干燥，接触X-射线胶片。
或者，优选用ELISA检测并确定细胞上清液中MIF的量。ELISA在高通量筛选中进行检测是优选的。简单的说，96-孔平板用抗-MIF抗体或抗-标记抗体包被，洗涤，用2％BSA封闭。然后向孔中加入细胞上清液。然后孵育和洗涤，加入第二抗体(例如针对MIF的)。第二抗体可以偶联标记和检测试剂，如酶或生物素。再次孵育，加入显影剂，用ELISA平板读数仪测定MIF的量。显影剂是一种偶联第二抗体的酶的底物(通常是一种抗—同种型抗体)或者是偶联链霉抗生物素蛋白的酶的底物。适当的酶在本领域是已知的，包括辣根过氧化物酶，其作用于底物(例如，ABTS)产生比色反应。应当认识到，使用偶联于酶的第二抗体，不如直接将抗-MIF抗体偶联于辣根过氧化物酶，或其他相当的检测试剂。如果需要，可以浓缩细胞上清液，以提高检测水平。而且，可以使用例如ELISA等检测方法，监测胞内及胞外MIF水平。如果需要胞内水平，则优选使用细胞溶解液。如果需要胞外水平，则筛选培养基。
也可以方便地调整ELISA，以高通量地筛选多种候选抑制剂或增强剂。简单的说，该分析可以方便地以细胞为基础，在96孔平板中进行。天然或稳定表达MIF的实验细胞以足以使表达产物被检测出的水平铺板，例如约20,000细胞/孔。然而，如果细胞不能天然表达蛋白，可以通过，例如电融合或Ca2PO4-介导的转染实现临时表达。对于电融合，将100pl细胞混合物(例如，150,000细胞/ml)和载体DNA(5pg/ml)置于96孔平板的每个孔。用配备有96孔电极的装置(例如，ECM 600电融合系统，BTX，Genetronics，Inc.)使细胞电融合。对于特定宿主细胞的优化电融合条件可以通过试验确定。电压、电阻、和脉宽是常规可变参数。优化电融合的指导方法可以从生产商处获得，和从技术手册中找到，例如分子生物学当前方案(Current Protocols in Molecular Biology)(Ausubel等(ed.)，Wiley Interscience，1987)。细胞用等体积培养基稀释，培养48小时。可以对各种细胞类型进行电融合，包括哺乳动物细胞、酵母细胞、细菌等。培养完成后，加入有和没有抑制剂的培养基，进一步培养细胞1-2天。此时，收获培养基，通过本发明的任何一种分析法分析蛋白质。优选使用ELISA检测蛋白。试验的初始浓度为50M。如果输出或单克隆抗体检测的量表现统计学的显著减少，则进一步试验候选抑制剂的剂量反应。
或者，浓缩上清液可以在SDS-PAGE凝胶上电泳，然后转移到固体支持物上，如尼龙或硝基纤维素。然后通过免疫印迹(参见Harlow，抗体：实验室手册，Cold Spring Harbor Laboratory，1988)，用含有同位素标记或无同位素标记的报告基团的MIF抗体检测MIF。这些报告基团包括但不限于，酶、辅因子、染料、放射性同位素、发光分子、荧光分子、和生物素。优选地，报告基团是125I或辣根过氧化物酶，其可以通过与2，2′-连氮基-二-3-乙基苯并噻唑啉磺酸共同孵育检测。如果MIF含有肽标记，可以方便地调整使用上述检测分析法。其他分析包括根据大小或电荷的色谱，包括HPLC，和亲合色谱。
或者，可以使用生物检测确定细胞培养基中存在的活性MIF的量。例如，MIF的生物活性可以通过巨噬细胞转移分析测定。简单的说，将用含有MIF的表达载体转染的细胞培养约30小时，其间加入候选抑制剂或增强剂。培养后，将细胞转移动低血清培养基中进一步培养16小时。除去培养基，离心澄清。向培养基中加入含有蛋白酶抑制剂的溶胞缓冲液，或者，溶解细胞，按照下述方法测定胞内水平。然后通过巨噬细胞转移分析、异构酶活性、或增殖分析测定MIF的生物活性。将不同量的洗出液加入培养静止期的3T3细胞，进行增殖分析。将氚标记的胸苷加入培养基，约24小时后测定TCA沉淀数。活体染料MTT的减少是测定增殖的替代方法。可以使用纯化的重组人FGF-2作为标准品。本领域存在的其他适当生物分析可用于分析其他功能，如CPS诱导的毒性休克，TSST-1诱导的毒性休克，胶原诱导的关节炎，等。
其他体外血管生成分析包括在胶原凝胶中测定内皮细胞增殖的生物分析(Goto等，Lab Invest.69：508，1993)，脑毛细血管内皮细胞在胶原上与输出MIF蛋白的细胞的分隔区间隔共培养(Okamure等，B.B.R.C.186：1471，1992；Abe等，J.Clin.Invest.92；54，1993)，或细胞转移分析(see Warren等，J.Clin.Invest.95：1789，1995)。
抗体的产生
本发明使用的术语“抗体”是一个宽泛的术语，本文使用其普通含义，包括但不限于，多克隆、单特异性、和单克隆抗体，以及该抗体的抗原结合片断。关于优选实施方案的抗-MIF/目标抗体，本发明使用的术语“抗原”是一个宽泛的术语，本发明使用其一般含义，包括但不限于，巨噬细胞转移抑制因子多肽和目标多肽，其变异体、或功能片断。抗-MIF/目标抗体、或该抗体的抗原结合片断与目标多肽或其表位的特异性结合活性为，至少约1×105M-1，通常至少约1×106M-1，优选至少约1×108M-1。抗-MIF/目标抗体的Fab，F(ab′)2，Fd和Fv片断，保持对MIF/目标多肽-特异性表位的特异性结合活性，它们包括在优选实施方案中。特别感兴趣的是那些结合活性多肽，并在抑制性小分子结合后被置换的抗体。本领域技术人员容易理解，这种置换可以是构象改变的结果，因此改变了表位的性质，与表位结合的竞争性，或抗体与其表位结合的空间位阻。在一个实施例中，酶的活性部位可以是特定抗体的表位，小分子结合于该活性部位或附近后，抗体的免疫反应性丧失，由此可以利用抗体的免疫反应性丧失作为酶活性的替代标记。
另外，本发明使用的术语“抗体”是一个宽泛的术语，本发明使用其一般含义，包括但不限于，天然抗体以及非天然抗体，包括例如，单联抗体、嵌合、双功能、和人源化抗体，以及其抗原结合片断。这类非天然抗体可以用固相肽合成构建，可以重组产生，或者例如筛选包括可变重链和可变轻链的常规文库得到(Huse等，Science 246：1275-1281(1989))。这些和其他制备例如嵌合、人源化、CDR-接枝、单链、和双功能抗体的方法是本领域已知的(Winter和Harris，Immunol.Today14：243-246(1993)；Ward等，Nature 341：544-546(1989)；Harlow和Lane，抗体：实验室手册，Cold Spring Harbor Laboratory，NewYork(1992)；Borrabeck，抗体工程，2d ed.，Oxford Univ.Press(1995)；Hilyard等，蛋白质工程：实践研究，IRL Press(1992))。
在某些优选实施方案中，抗-MIF/目标抗体可以用免疫原提高，例如包括MIF活性部位区域的分离多肽和目标多肽，其可以如上所述从天然来源得到或重组制备，或者MIF/目标多肽的免疫原性片断(例如，包括8-30或更多连续氨基酸序列的免疫原性序列)，如上所述包括合成肽。MIF/目标多肽的非免疫原性肽部分可以通过将该半抗原偶联于载体分子得到免疫原性，载体分子如牛血清白蛋白(BSA)或匙孔帽贝血蓝蛋白(KLH)，或者将肽部分作为融合蛋白表达。其他各种载体分子和将半抗原偶联于载体分子的方法是本领域已知的(Harlow和Lane，同上，1992)。
例如在兔、山羊、小鼠或其他哺乳动物中提高多克隆抗体的方法是本领域已知的。另外，可以利用本领域已知的方法和途径得到单克隆抗体(Harlow和Lane，同上，1992)。例如，来自目标多肽—免疫哺乳动物的脾细胞与适当骨髓瘤细胞系，如SP/02骨髓瘤细胞融合，产生杂交瘤。克隆的杂交瘤细胞系可以用标记的目标多肽或其功能片段筛选，以鉴定分泌具有理想特异性的目标多肽的单克隆抗体。可以分离表达具有理想特异性和亲合性的目标多肽的单克隆抗体，并用作抗体的连续来源，其可被用于，例如制备标准试剂盒。同样，表达例如单链抗-目标多肽的重组噬菌体也能够提供单克隆抗体，用于制备标准试剂盒。
MIF抑制剂的应用及应用方法
如上所述，MIF抑制剂具有广泛的应用领域。侯选MIF抑制剂可从多种来源分离或得到，例如细菌、真菌、植物、寄生虫、化学药品文库(小分子)、肽或肽衍生物等。而且，本领域技术人员可以认识到，当观察到相对于对照产生统计学上显著改变时，则产生抑制作用。
假定MIF在病理学和内环境平衡方面发挥各种作用，则MIF活性的抑制或MIF胞外定位可能具有治疗作用。例如，最近的研究已经证明，MIF是一种内毒素性血症的介质，该疾病中抗-MIF抗体可以充分保护小鼠免遭LPS-诱导的死亡。See Bernhagen等，Nature 365：756-759，1993；Calandra等，J.Exp.Med.179：1895-1902，1994；Bernhagen等，TrendsMicrobiol.2：198-201，1994。而且，抗-MIF抗体显著提高革兰氏阳性细菌攻击小鼠导致的脓毒性休克的存活率。Bernhagen等，J.Mol.Med.76：151-161，1998。其他研究已经证实了MIF在肿瘤细胞生长中的作用，MIF的反义抑制剂能够对抗该细胞凋亡性刺激物。Takahashi等，Mol.Med.4：707-714，1998；Takahashi等，Microbiol.Immunol.43(1)：61-67，1999。另外，MIF是一种糖皮质激素活性的反向调节剂的结论，表明抑制MIF胞外定位的方法可能能够治疗多种病理症状，包括自身免疫性疾病、炎症、内毒素性血症和成人呼吸窘迫综合征、炎症性肠病、中耳炎、炎性关节病和克罗恩氏病。Bernhagen等，J.Mol.Med.76：151-161，1998；Calandra等，Nature 377：68-71，1995；Donnelly等，Nat.Med.3：320-323，1997。由于还认识到MIF与血管生成有关，该细胞因子的抑制可能具有抗-血管生成活性，在血管生成性疾病中有特殊用途，这类疾病包括但不限于，癌症、糖尿病性视网膜病、银屑病、血管病、生殖性疾病、肥胖、以及象库欣氏病和阿狄森氏病这样的糖皮质激素失调性遗传病。
MIF活性或输出的抑制剂可以用于治疗，也可用于与特异于特定细胞的细胞表面受体结合的目标基团联合应用。抑制剂或增强剂的给药通常按照成熟方案。可以配制用于指定给药方式的优选实施方案的组合物，包括例如，口腔、鼻腔、静脉、颅内、腹膜内、皮下、或肌内给药。在其他实施方案中，本发明所述的组合物可以作为缓释植入剂的一部分给药。还有一些实施方案中，优选实施方案的组合物可以应用保持冻干剂稳定的适当的赋形剂配制成冻干剂，之后重新水化。
在另一个实施方案中，提供了含有一种或多种MIF抑制剂的药物组合物。为了便于给药，优选实施方案的化合物可以配制成药物组合物。优选实施方案的药物组合物含有一种或多种优选实施方案的MIF抑制剂(即，结构(Ia)或(Ib)的化合物)，及其药用载体和/或稀释剂。组合物中MIF抑制剂的量是治疗特定疾病、症状的有效量，即足以实现MIF水平或活性降低的量，和/或优选对患者的毒性是可接受的。优选实施方案的药物组合物优选包括MIF抑制剂的量根据给药途径从每剂量少于约0.01mg到多于约1000mg，优选约0.025，0.05，0.075，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6，0.7，0.8，或0.9mg到约65，70，75，80，85，90，95，100，125，150，175，200，225，250，300，350，375，400，425，450，500，600，700，800，或900mg，和更优选从约1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，15，20，或25mg到约30，35，40，45，50，55，或60mg。然而在某些实施方案中，比上述更低或更高的剂量可能是优选的。本领域技术人员可以容易地确定合适的浓度和剂量。
药用载体和/或稀释剂是本领域技术人员熟悉的。对于制成液体溶液的组合物，药用载体和/或稀释剂包括盐水无菌水，可以任选地包括抗氧剂，缓冲剂，抑菌剂，以及其它常用添加剂。该组合物也可以配制成微丸，胶囊，颗粒，或片剂，除MIF抑制剂外，这些制剂含有稀释剂，分散剂，和表面活性剂，粘合剂和润滑剂。本领域技术人员可以进一步以合适的方式，并按照可接受的实践(如在Remington′s PharmaceuticalSciences，Gennaro，Ed.，Mack Publishing Co.，Easton，PA 1990中描述的那些)进一步配置MIF抑制剂。
此外，前药也包括在优选实施方案的上下文中。前药是任何共价结合的载体，当将其给药患者时，前药在体内释放结构(Ia)或(Ib)的化合物。前药通常通过修饰官能团制备，或通过常规操作或在体内使修饰裂解，得到母体化合物。
对于立体异构体，结构(Ia)或(Ib)的化合物可以具有手性中心，可以作为外消旋物、外消旋混合物以及作为单独的对映异构体或非对映异构体存在。所有这些异构体形式包括在优选实施方案内，并包括其混合物。并且，结构(Ia)或(Ib)的化合物的一些晶型可以存在多晶型，其包括在优选实施方案内。此外，一些结构(Ia)或(Ib)的化合物还可以与水或其它有机溶剂形成溶剂合物。类似地，这些溶剂合物包括在优选实施方案的范围内。
在另一个实施方案中，描述了治疗多种疾病的方法，包括炎性疾病，关节炎，免疫相关性疾病等。这类方法包括给温血动物施用足以治疗疾病量的优选实施方案的化合物。该方法包括优选实施方案的MIF抑制剂的系统给药，优选以药物组合物的形式给药。本发明所述的系统给药包括口服和非肠道给药。对于口服给药，MIF抑制剂的适当药物组合物包括粉末、颗粒、丸剂、片剂、和胶囊，以及液体剂、糖浆、悬浮液、和乳剂。这些组合物还可以包括食用香料、防腐剂、悬浮剂、增稠剂、和乳化剂，以及其他药用添加剂。对于非肠道给药，优选实施方案的化合物可以配制成含水注射溶液、其中除了MIF活性和/或输出抑制剂之外，还可以含有缓冲液、抗氧化剂、抑菌剂、和其他该溶液中常用的添加剂。
如上所述，优选实施方案的化合物可以用于治疗很多疾病。特别地，可以给温血动物施用优选实施方案的化合物，治疗炎症、癌症、免疫性疾病等。
MIF抑制性化合物可以用于与其他药物化合物联合治疗。在优选实施方案中，MIF抑制性化合物与其他常规药物联合应用，治疗病程中MIF呈病理性或MIF发挥关键或其他作用的疾病或症状。在特别优选的实施方案中，药物组合物含有一种或多种MIF抑制性化合物，包括但不限于结构(Ia)或(Ib)的化合物，以及一种或多种其他药物化合物，包括但不限于治疗各种癌症、哮喘或其他呼吸性疾病、脓毒病、关节炎、炎症性肠病(IBD)、或其他炎性疾病、免疫性疾病、或其他MIF呈病理性的疾病或病症的药物。
在特别优选的实施方案中，一种或多种MIF抑制化合物与一种或多种非甾体抗炎药(NSAIDs)或治疗关节炎或其它炎性疾病的其它药物化合物组合。优选的化合物包括但不限于塞来考昔；rofecoxib；NSAIDS，例如，阿司匹林，塞来考昔，三水杨酸胆碱镁，双氯芬酸钾，双氯芬酸钠，diflunisal，依托度酸，苯氧布洛芬，氟比洛芬，布洛芬，消炎痛，酮基布洛芬，酮咯酸，melenamic acid，萘丁美酮，萘普生，甲氧萘丙酸钠，噁丙嗪，炎痛喜康，rofecoxib，双水杨酸酯，舒林酸，和托耳米丁；和皮质甾类，例如，可的松，氢化可的松，甲基波尼松龙，强的松，强的松龙，倍他米松，倍氯美松双丙酸酯，布地缩松，地塞米松磷酸钠，9-去氟肤轻松，丙酸氟地松，醋酸曲安缩松，倍他米松，氟轻松，醋酸氟轻松，双丙酸倍他米松，戊酸倍他米松，丙缩羟强龙，去羟米松，氟轻松，去炎松，醋酸去炎松，丙酸氯氟美松，和地塞米松。
在特别优选的实施方案中，一种或多种MIF抑制化合物与一种或多种β-兴奋剂、吸入性皮质甾类、抗组胺药、激素或用于治疗哮喘、急性呼吸窘迫或其它呼吸道疾病的其它药物化合物组合。优选的化合物包括但不限于β-兴奋剂，例如，普通处方的支气管扩张药；吸入性皮质甾类，例如，丙酸倍氯米松，氟地松，醋酸去炎松，莫米他松，和强的松的形式，如强的松，强的松龙，和甲基波尼松龙；抗组胺药，例如，阿扎他定，氯苯吡醇胺/伪麻黄碱，西替立嗪，二苯环庚啶，右氯苯那敏，非索非那定，氯雷他定，异丙嗪，曲吡那敏，溴苯吡胺，cholopheniramine，氯苯苄咯，苯海拉明；和激素，例如，肾上腺素。
在特别优选的实施方案中，一种或多种MIF抑制化合物在药物组合物中与用于治疗IBD的药物化合物如硫唑嘌呤或皮质甾类组合。
在特别优选的实施方案中，一种或多种MIF抑制化合物在药物组合物中与用于治疗癌症的药物化合物如紫杉醇组合。
在特别优选的实施方案中，一种或多种MIF抑制化合物在药物组合物中与免疫抑制化合物组合。
在特别优选的实施方案中，一种或多种MIF抑制化合物与一种或多种治疗自身免疫性疾病，例如莱姆病，狼疮(例如，系统性红斑狼疮(SLE))，或获得性免疫缺损综合症(AIDS)的药物组合。这些药物可以包括蛋白酶抑制剂，例如茚地那韦，安普奈韦，沙奎那韦，洛匹那韦，ritonavir，和奈非那韦；核苷逆转录酶抑制剂，例如，齐多夫定，阿巴卡韦，拉米夫定，idanosine，扎西他滨，和司他夫定；核苷逆转录酶抑制剂，例如，替诺福韦disoproxil富马酸盐；非核苷逆转录酶抑制剂，例如，地位韦啶，依法韦仑，和奈韦拉平；生物反应调节剂，例如，依那西普，英夫利昔单抗，和抑制或干扰肿瘤坏死因子的其它化合物；抗病毒药，例如，amivudine和齐多夫定。
在特别优选的实施方案中，一种或多种MIF抑制化合物与用于治疗脓毒病如甾体或抗感染药的药物化合物组合。甾体的例子包括皮质甾类，例如，可的松，氢化可的松，甲基波尼松龙，强的松，强的松龙，倍他米松，倍氯美松双丙酸酯，布地缩松，地塞米松磷酸钠，9-去氟肤轻松，丙酸氟地松，醋酸曲安缩松，倍他米松，氟轻松，醋酸氟轻松，双丙酸倍他米松，戊酸倍他米松，丙缩羟强龙，去羟米松，氟轻松，去炎松，醋酸去炎松，丙酸氯氟美松，和地塞米松。抗感染药的例子包括抗肠虫药类(甲苯咪唑)，抗生素包括aminoclycosides(庆大霉素，新霉素，妥布霉素)，抗真菌抗生素类(两性霉素b，氟康唑，灰黄霉素，依曲康唑，酮康唑，制霉菌素，硝酸咪康唑，托萘酯)，头孢菌素类(头孢克洛，头孢唑啉，头孢噻肟，头孢他定，头孢曲松，头孢呋辛，头孢氨苄)，β-内酰胺抗生素类(头孢替坦，美罗培南)，氯霉素，大环内酯类(阿奇霉素，克拉霉素，红霉素)，青霉素类(青霉素G钠盐，阿莫西林，氨苄西林，双氯青霉素，萘夫西林，哌拉西林，替卡西林)，四环素类(强力霉素，二甲胺四环素，四环素)，杆菌肽；氯林可霉素；多粘菌素E甲磺酸钠；硫酸多粘菌素b；万古霉素；抗病毒药，包括阿昔洛韦，金刚烷胺，去羟肌苷，依法韦仑，膦甲酸，更昔洛韦，茚地那韦，拉米夫定，奈韦那韦，利托那韦，沙奎那韦，司他夫定，伐昔洛韦，缬更昔洛韦，齐多夫定；喹诺酮(环丙沙星，左氧氟沙星)；磺胺类药(磺胺嘧啶，磺胺异噁唑)；砜类(氨苯砜)；呋喃唑酮；甲硝哒唑；喷他脒；sulfanilamidum crystallinum；加替沙星；和新诺明/甲氧苄氨嘧啶。
在治疗某些疾病时，应用MIF抑制剂与麻醉剂组合是有益的，麻醉剂例如有乙醇，丁哌卡因，氯普鲁卡因，左布比卡因，利多卡因，甲哌卡因，普鲁卡因，罗哌卡因，丁卡因，地氟烷，异氟烷，氯胺酮，丙泊酚，七氟烷，可待因，芬太尼，氢吗啡酮，布比卡因，哌替啶，美沙酮，吗啡，羟考酮，瑞芬太尼，舒芬太尼，布托啡诺，纳布啡，曲马多，苯佐卡因，地布卡因，氯乙烷，利多卡因，和非那吡啶。
实施例
优选实施方案的MIF抑制剂可以通过实施例1描述的方法制备。实施例2提供了筛选优选实施方案化合物对于活性或输出抑制的检测。
实施例1
代表化合物的合成
Figure A0281050101051
将硝基乙酸乙酯(6.70ml，60.1mmol)的N，N-二甲基乙酰胺(35ml)溶液分几次用95％NaH(1.52g，60.2mmol)处理。停止冒出氢气后，将反应混合物在80℃下加热15分钟。在15分钟内加入N-甲基靛红酸酐1(11.1g，62.5mmol)的N，N-二甲基乙酰胺(65ml)溶液，其后将反应在120℃下加热18小时。通过蒸馏除去溶剂，将残渣溶解于水中，用6NHCl酸化。收集产生的沉淀，用水洗涤。从二氯甲烷/乙醚中重结晶剩余的残渣，得到黄色固体状的喹啉酮2a(5.75g，43％)。
Figure A0281050101052
将丙二酸二乙酯(18.8ml，111mmol)的N，N-二甲基乙酰胺(35ml)溶液分几次用95％NaH(2.80g，111mmol)处理。停止冒出氢气后，将反应混合物在80℃下加热15分钟。在15分钟内加入N-甲基靛红酸酐1(22.0g，124mmol)的N，N-二甲基乙酰胺(140ml)溶液，其后将反应在120℃下加热18小时。通过蒸馏除去溶剂，将残渣溶解于水中，用6NHCl酸化。收集产生的沉淀，用水洗涤。从二氯甲烷/乙醚中重结晶剩余的残渣，得到白色固体状的喹啉酮2b(11.7g，40％)。
2a Y＝NO2      3a Y＝NO2
2b Y＝CO2Et     3b Y＝CO2Et
将醇2(6.2g 2a；11.1g 2b)溶解于POCl3(对于2a，70mL；对于2b，140mL)中，并在95℃下加热3小时。通过蒸馏除去POCl3，将反应混合物倒入500mL冰水中。用饱和碳酸氢钠中和水溶液，通过过滤收集沉淀，重新溶解于二氯甲烷中，通过硫酸钠干燥，在真空下除去溶剂。通过从乙醚重结晶纯化粗反应产物，得到3.5g 3a(52％)或7.8g 3b(65％)。
Figure A0281050101062
5a R4＝CO(2-噻吩基)  6a R4＝CO(2-噻吩基)
5b R4＝CO(苯基)      6b R4＝CO(苯基)
                      6c R4＝CO(2-呋喃基)
将N-BOC哌嗪4(5.0g；27mmol)溶解于吡啶(15mL)中，加入20mgDMAP。在0-5℃下，在5分钟内将纯的酰基氯加入到该溶液中。在将其倒入冰上前，在室温下搅拌得到的稠糊过夜(15小时)。通过过滤收集白色结晶沉淀，空气干燥，在真空下干燥得到相应的N-BOC-N-酰基哌嗪5a(6.5g；83％)或5b(4.8g；94％)。通过将该化合物溶解于100mL二氯甲烷中，并加入纯的TFA(10mL)，立即将粗反应产物应用于下一步。在室温下3小时后，蒸发溶液，将残渣溶解于二氯甲烷中，并用碳酸氢钠(饱和的)洗涤。用二氯甲烷萃取水层10次，通过硫酸钠干燥合并的有机层，在真空下蒸发溶剂，得到化合物6a(4.5g；91％；75％(两步内))或化合物6b(2.95g；70％；66％(两步内))，或化合物6c，其从LancasterSynthesis商业获得(目录编号18698)。
3a Y＝NO2                            7a Y＝NO2，R4＝CO(2-噻吩基)
3b Y＝CO2Et   6a R4＝CO(2-噻吩基)    7b Y＝NO2，R4＝CO(苯基)
               6b R4＝CO(苯基)        7c Y＝CO2Et，R4＝CO(2-噻吩基)
               6c R4＝CO(2-呋喃基)    7d Y＝CO2Et，R4＝CO(苯基)
                                       7e Y＝NO2，R4＝CO(2-呋喃基)
向氯喹诺酮3的甲苯溶液中加入哌嗪6，随后加入10滴吡啶，之后加热至100℃12至14小时。将该混合物冷却至室温，蒸发至干燥，重新溶解于二氯甲烷中，用盐水洗涤。通过硫酸钠干燥有机溶剂，并在真空下除去。色谱层析(silica，CHCl3∶MeOH 85∶15)，得到CBX产物7，一起回收起始原料(30-40％)。反应得到的产物列在表1中。
表1
      N-酰基哌嗪      氯喹诺酮     CBX哌嗪喹诺酮加合物
  6a   1.9g   3a     1.8g     7a     0.9g   28％
  6a   1.6g   3b     1.5g     7b     0.9g   34％
  6b   2.6g   3a     2.5g     7c     1.3g   32％
  6b   2.7g   3b     2.4g     7d     1.5g   35％
  6c   2.7g   3a     3.2g     7e     2.8g   55％
分析数据
7a.mp 167-159℃；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ 7.95(dd，1H)，7.70(dt，1H)，7.49(d，1H)，7.44(d，1H)7.35(m，2H)，7.08(m，1H)，3.95(bs，4H)，3.75(s，3H)，3.3(t，4H)；HRMS(FAB)C19H19O4N4S计算值399.1127，实际值399.1117；C19H18N4O4S分析计算值：C，57.28；H，4.55；N，14.06；O，16.06；S，8.05实际值：C，56.78；H，4.50；N，13.73。
7b.mp 215-217℃；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ57.85(dd，1H)，7.70(m，1H)，7.44(m，5H)，7.42(m，1H)，3.74(m，4H)，3.28(m，4H)；HRMS(FAB)C21H21N4O4计算值393.1563，实际值393.1540；C21H20N4O4分析计算值：C，64.28；H，5.14；N，14.28；O，16.31实际值；C，64.84；H，5.16；N，13.78。
7c.mp 183-185℃；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ7.95(dd，1H)，7.61(m，1H)，7.48(m，1H)，7.38(d，1H)7.32(m，1H)，7.25(M，1H)，7.07(M，1H)，4.44(q，2H)3.95(bs，4H)，3.70(s，3H)3.35(bs，4H)，1.44(t，3H)；HRMS(FAB)C22H24N3O4S计算值426.1488实际值426.1487；C22H23N3O4S分析计算值C，62.10；H，5.45；N，9.88；O，15.04；S，7.54实际值：C，62.08；H，5.45；N，9.77。
7d.mp 164-166℃；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ7.92(dd，1H)，7.60(m，1H)，7.44(m，5H)，7.37(m，1H)，7.27(m，1H)，4.45(q，2H)，3.65(bs，7H)，3.20(bs，4H)，1.45(t，3H)；HRMS(FAB)C24H26NO3计算值420.1923，实际值420.1934；C24H25N3O4分析计算值C，69.72；H，6.01；N，10.02；O，15.26实际值：C，66.32；H，6.01；N，9.66。
7e.mp 189-191℃；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ 7.96(dd，1H)，7.71(dt，1H)，7，51(bd，1H)，7.44(bd，1H)，7.37(bt，1H)，7.09(d，1H)，6.51(m，1H)，4.03(bm，4H)，3.74(s，3H)，3.33(t，4H)；HRMS(FAB)C19H19N4O5计算值383.1355，实际值383.1358；C19H18N4O5分析计算值：C，59.68；H，4.74；N，14.65实际值：C，59.39，H，4.79，N，14.36。
实施例2
巨噬细胞转移分析
例如Harrington和Stastny等，J.Immunol.110(3)：752-759，1973所述的琼脂糖小滴分析和毛细管法测定巨噬细胞转移。简单地说，将含巨噬细胞的样品加入血流比容计的试管中，试管长75mm，内径1.2mm。热封试管，在100×G离心3分钟，在细胞-流体表面(cell-fluid interface)切开，埋入Sykes-Moore培养仓的硅脂小滴中。培养仓含有对照蛋白(BSA)或样品。37℃培养24和48小时后，跟踪巨噬细胞展开的突出图像，用面积测量法测量转移面积。
或者，用1微升0.8％(w/v)Sea Plaque琼脂糖在水中的液体预先包被96孔平板的每个孔，分别装到每孔的中间位置。然后，将平板置于光照箱微微加热，直到琼脂小滴刚好干燥。将高达25％(v/v)的含巨噬细胞的细胞悬浮液置于加热到37℃、含有0.2％琼脂糖(w/v)的培养基(有或没有MIF或其他对照制成细胞悬浮液，取2微升加入预包被的平板的孔中，冷却到4℃5分钟。然后向各孔填充培养基，在37℃，5％CO2-95％空气下孵育48小时。在24和48小时，通过测定小滴边缘到转移外围的距离，测定从琼脂糖小滴的转移。
转移分析
在改进的Boyden反应室模式(Boyden chamber format)中，用人外周血单核细胞或排除T-细胞的单核细胞分析了重组鼠和人野生型和鼠突变MIF抑制单核细胞转移的活性。将钙黄绿素AM标记的单核细胞以2.5至5×106/mL悬浮于加有L-谷氨酰胺(无酚红)和0.1mg/mL人血清白蛋白或牛血清白蛋白的RPMI 1640培养基。将200μL细胞悬浮液加入预热到37℃的U-型底96孔培养板(Costar，Cambridge，MA)的孔中。将RPMI 1640中的MIF加入细胞悬浮液，至终浓度为1，10，100，和1000ng/mL。将培养板置于控温平板读数仪的保温仓中，混合30秒，37℃孵育10-20分钟。孵育过程中，将28μL预热的、在含0.1mg/mL HSA的RPMI 1640中的人单核细胞趋化蛋白1(MCP-1；Pepro Tech.，Inc.，RockyHill，NJ)(10或25ng/mL)加入ChemoTX平板(Neuro Probe Inc.，Gaithersburg，MD；3mm孔径，5μM过滤孔径)的底部孔。将过滤板小心加入基础板。从培养箱中取出处理后的细胞悬浮液，向过滤板的各孔中加入30μL。组合板在37℃、5％CO2的潮湿保温仓中孵育90分钟。孵育结束后，从滤板表面吸出细胞悬浮液，然后从基础板上取出滤板，向各滤器节(filter segment)加入50μL 1X HBSS洗涤三次。两次洗涤之间，用橡皮刮板(squeegee)(NeuroProbe)除去残留的HBSS。将滤器空气干燥，然后直接在荧光板读数仪上读数，激发光为485nm，发射光为535nm。趋化性或随机转移指数定义为，预定孔的平均滤板结合荧光除以既不含MCP-1也不含MIF的孔的平均滤板荧光。荧光标记细胞的滴度表明该分析中检测的荧光水平与细胞数存在线性关系(未显示)。
实施例3
互变异构酶分析
基本上如Rosengren等，Mol.Med.2(1)：143-149，1996所述进行互变异构反应。评价了D-多巴色素转化向5，6-二羟基吲哚-2-羧酸的转化。在1ml样品试管中，加入0.42mM底物和在含0.1mM EDTA和10mM磷酸钠缓冲液，pH6.0的样品溶液中的1.4μg MIF，观察了475nm处亚氨基色素(iminochrome)吸光率的降低速率。L-多巴色素用作对照。另外，反应产物可以用HPLC，用含有20mM KH2PO4缓冲液(pH4.0)和15％甲醇的流动相以1.2ml/min的流速分析反应产物。荧光检测在295/345nm。
或者，基本上如Johnson等，Biochem.38：16024-16033，1999所述，利用苯基丙酮酸盐或(p-羟基苯基)丙酮酸盐进行互变异构酶反应。该方法中，苯基丙酮酸盐的酮化作用在288nm(ε＝17300M-1cm-1)监测，(p-羟基苯基)丙酮酸盐的酮化作用在300nm(ε＝21600M-1cm-1)监测。分析混合物含有50mM Na2HPO4缓冲液(1mL，pH6.5)和部分MIF充分稀释液(0.5-1.0μL，2.3mg/mL溶液，终浓度为93-186nM)，制备初始线性率(liner rate)。加入少量(1-3.3μL)苯基丙酮酸盐或(p-羟基苯基)丙酮酸盐(来自在乙醇中制备的储备液)开始分析。作为烯醇异构体，苯基丙酮酸盐和(p-羟基苯基)丙酮酸盐的晶体形式非常独特(Larsen等，ActaChem.Scand.8 28：92-g6，1974)。底物的浓度范围从10到150M，少于0.5％v/v时，在乙醇中没有观察到明显抑制MIF活性。
实施例4
免疫沉淀和Western印迹分析
细胞培养实验被设计成有利于区别侯选化合物的活性、MIF表达、运输和输出。基本上如前面所述(Florkiewicz等，Growth Factors 4：265-275，1991；Florkiewicz等，Ann.N.Y.Acad.Sci.638：109-126)，除了在微离心机中离心15分钟澄清后，向培养基部分加入400μl溶胞缓冲液(1％NP-40，0.5％脱氧胆盐，20mM Tris pH7.5，5mM EDTA，2mM EGTA，0.01mM苯基甲基磺酰氟(phenylmethylsufonyl fluoride)，10ng/ml抑肽酶，10ng/ml亮抑蛋白酶肽，10ng/ml抑胃酶肽)稍有不同，制备用于免疫沉淀的细胞和条件培养基组分。细胞或培养基部分与MIF的单克隆或多克隆抗体一起孵育，加入GammaBindTM G Sepharose(PharmaciaLKB Biotechnology，Uppsala，Sweden)再次孵育30分钟。通过微离心机离心沉降免疫复合物，用溶胞缓冲液洗涤三次，用冰冷却的免疫沉淀洗涤缓冲液(0.15M NaCl，0.01M磷酸钠pH7.2，1％脱氧胆盐，1％NP-40，0.1％十二烷基磺酸钠)洗涤四次。将免疫复合物在SDS凝胶样品缓冲液(125mM Tris，pH6.8，4％SDS，10％甘油，0.004％溴酚蓝，2mMEGTA)中直接解离，通过12％SDS-PAGE分离。将凝胶进行处理以便进行荧光照相术，干燥，在-70℃接触X-线胶片。当新霉素磷酸转移酶被免疫沉淀后，则使用兔抗-NPT抗体(5Prime-3Prime，Boulder，CO)。
对于Western印迹分析，将蛋白质从12％SDS-PAGE凝胶转移到处于冷缓冲液(含25mM 3-[二甲基(羟基甲基)甲基氨基]-2-羟基丙烷-磺酸，pH9.5，20％甲醇)中的硝基纤维素膜(孔径0.45μm)上，在0.4amps下保持90分钟。对于细胞条件培养基的Western印迹分析，离心(在800g下10分钟)培养基，将上清液通过膜过滤(截留分子量10kDa，Centricon-10 Amicon)浓缩10倍。然后在还原条件下将样品溶解于16％SDS Tris-甘氨酸凝胶(Novex，San Diego，CA)，然后转移到硝基纤维素膜(Novex)在20V下保持3小时。将膜与兔多克隆抗-大鼠抗体(1：1000)(Torrey Pines Biolab，San Diego，CA)一起孵育，然后与辣根过氧化物酶-结合物(1∶1000)(Pierce，Rockford，IL)孵育。用氯萘酚(chloronaphtnol)/H2O2显色可观察到MIF。将重组MIF(2ng，购自R &D systems，Minneapolis)作为标准品进行电泳和转移。将膜在10mM Tris，pH7.5，150mM NaCl，5mM NaN3，0.35％聚氧乙烯山梨糖单月桂酸酯，和5％脱脂奶粉(Camation Co.，Los Angeles，CA)中在室温下封闭1小时。将膜与单克隆抗体(Catalog Number MAB289，购自R & D Systems，Minneapolis，MN)或多克隆(山羊多克隆血清，R & D Systemscat&num；AF-289-PB)一起孵育。孵育完成后，在室温下用缓冲液(150mMNaCl，500mM磷酸钠pH7.4，5mM NaN3，和0.05％聚氧乙烯山梨糖单月桂酸酯)洗涤膜10轮。当用单克隆抗体时，之后将膜在含有1μg/ml兔抗小鼠IgG(H+L，亲合纯(affinipure)，Jackson immune ResearchLaboratories，West Grove，PA)的封闭缓冲液中在室温下孵育30分钟。对于多克隆探针，用兔抗-山羊(Sigma，分类号G5518)孵育。然后在1L上述缓冲液中洗涤膜，在100ml含有15μ Ci125I-protein A(ICNBiochemicals，Costa Mesa，CA)的封闭缓冲液中孵育1小时，再用1L缓冲液洗涤。通过放射自显影法观察放射性信号。
在一个实验中，从用LPS(10μg/ml)处理、又用不同量侯选化合物，如化合物7e处理的THP-1细胞，收集过夜的条件培养基，并通过免疫沉淀法用单克隆或多克隆抗体检测MIF结合，筛选化合物。如图1所证明，在存在10μM化合物7e情况下用单克隆抗体的条件培养基显示可检测的MIF显著丧失，而用多克隆抗体则没有观察到。该反应表明了化合物7e对MIF酶活性的影响。因此，该实验证明单克隆反应性可以作为酶活性的替代标记。
在另一个实验中(图2)，将不同浓度的五种不同抑制剂类似物加入LPS刺激的THP-1细胞，孵育过夜。下一天，通过ELSA评价被检测的免疫反应性MIF的量。化合物7e抑制抗体识别MIF的能力是剂量依赖模式，ED50为2μM，与类似化合物7b和化合物7d得到的结果相似。相比较而言，类似物化合物7a和化合物7c的活性比其高约100倍。
在另一个实验中(图3)，测定了化合物7e降低THP-1细胞产生的MIF的免疫反应性的能力。用10μg/ml LPS处理THP-1细胞，然后在LPS刺激后的各不同时间加入10μM化合物7e，用抗-MIF单克隆抗体监测免疫反应性。如图所示，随着化合物7e的加入，免疫反应性迅速丧失。因此，该实验测定了，当各不同时间向细胞培养物中加入化合物，之后按照时间依赖模式处理相应的条件培养基样品时，化合物或单独缓冲液的对照对MIF检测的影响。
在前面的实验(图3)中，分析了化合物7e在LPS-刺激的THP-1细胞中调节结合MIF蛋白的抗体的能力。然而，在图4所示的实验中，在不存在活细胞的条件下，利用预处理培养基考察了化合物7e调节抗体识别MIF的能力。在该实验中，如上所述将LPS加入培养中的THP-1细胞。六小时后，取出条件培养基，澄清细胞碎片，测定的MIF的量为22ng/ml。然后将该预处理培养基分成两组。两组在37℃下孵育不同时间，之后加入化合物7e或单独缓冲液(对照)，在37℃下再孵育30分钟。然后通过ELISA用检测用单克隆抗-MIF抗体测定可检测的MIF水平。随着化合物7e的加入，MIF针对的ELISA信号迅速丧失。MIF的对照水平没有发生改变。因此，该实验证明化合物7e与MIF相互作用，阻抑抗体与MIF随后相互作用的能力，甚至在不存在细胞的情况下也如此。因为该相互作用发生在催化位点，或者限制催化活性，因此免疫反应性的丧失与酶活性丧失和/或MIF相关活性丧失有关。
实施例5胞外定位分析
为了进一步评价化合物7e调节MIF输出的体外活性，选择了小鼠巨噬细胞RAW 264.7细胞(美国典型培养物中心，Manassas，VA)。
将Raw 264.7巨噬细胞(3×106个细胞/孔)在12-孔组织培养板(Costar)上铺板，在RPMI/1％热灭活的胎牛血清(FBS)(HycloneLaboratories，Logan，UT)上培养。在37℃、含5％CO2的潮湿空气下培养3小时后，除去非粘附细胞，用RPMI/1％FBS洗涤孔两次。然后将细胞与LPS(0111：B4)或TSST-1(Toxin Technology，Sarasota，FL)共培养24小时，其中LPS或TSST-1纯度约为95％，重悬浮于无热原的水中，浓度范围从1pg/ml到1000ng/ml(针对剂量反应实验)。对于时间-过程实验，平行培养物的条件培养基在用1ng/ml TSST-1或LPS刺激后，以0.5，1，2，4，8和24小时间隔取出。对于抑制研究，将RAW 264.7细胞(3×106个细胞/孔)与1ng/ml LPS(0111：B4)或1ng/ml TSST-1在0.01M至10M化合物7e或缓冲液(作为对照)存在下共培养24小时。在滤器上浓缩了细胞-条件培养基中的MIF，通过Western印迹分析了样品中保留的MIF，然后用Stratagene Eagle Eye测定了MIF色带密度。
加入1ng/ml TSST-1或LPS诱导RAW细胞表达MIF，并培养24小时。如上所述测定了条件培养基中的MIF。如图5所证明，与仅用缓冲液培养的细胞相比，化合物7e以浓度依赖方式降低了条件培养基中免疫可检测量的MIF水平，IC50约为0.04μM。如图6所示，在化合物7e存在下，随后用TSST-1刺激的RAW细胞检测MIF的水平，与仅用缓冲液培养的细胞相比，IC50约为0.3μM。
实施例6
细胞培养，转染，和代谢标记
将来自美国典型培养物中心(ATCC No.CRL 1650)的目标细胞在附加10％胎牛血清，2mM L-谷氨酰胺，1mM丙酮酸钠，100nM非基本氨基酸，和50μg/ml庆大霉素的DMEM中，在48孔平板中培养过夜。然后用2μg/ml CsCl-纯化的质粒DNA在转染缓冲液(140mM NaCl，3mMKCl，1mM CaCl2，0.5mM MgCl2，0.9mM Na2HPO4，25mM Tris，pH7.4)中转染目标细胞。向每个孔中加入在转染缓冲液中的300μl DNA。将细胞在37℃培养30分钟，吸出缓冲液。加入添加了100μm氯喹的温培养基保持1.5小时。除去该培养基，用完全培养基洗涤细胞两次。然后培养细胞40-48hr。用含有可选择标记新霉素磷酸转移酶的pMAMneo(Clontech，Palo Alto，CA)共转染目标质粒。当用10μg pMAMneo共转染2μg目标质粒后，通过免疫荧光显微镜法测定，超过70％的转染细胞既表达MIF也表达neo。
对于免疫沉淀分析，将目标细胞用100μCi of 35S-蛋氨酸和35S-半胱氨酸(Trans 35S-标记，ICN Biomedicals，Irvine，CA)在1ml不含蛋氨酸和半胱氨酸的DMEM中代谢脉冲-标记15分钟。标记后，用添加过量(10mM)标记的蛋氨酸和半胱氨酸的DMEM清洗细胞单层1-2分钟，一次。然后将细胞在2ml该培养基中培养指定时间，将细胞上清液中存在的无先导序列的蛋白质进行免疫沉淀。对于指定培养物，向追加培养基中添加指示浓度的调节剂。
或者，对于ELISA分析，将目标细胞用250μl 0.1M碳酸钠，pH11.4洗涤1-2分钟一次，立即吸出。或者优选高盐溶液。用含有0.5％FBS加25μg/ml肝素的培养基洗涤细胞，然后将细胞在相同培养基中培养指定时间长度。对于指定培养物，向追加培养基中加入调节剂。对于用编码有先导序列的蛋白质，如hCG-α或任何其它非-肝素结合蛋白的载体转染的细胞，碳酸盐洗涤和含肝素培养基可以省略。
实施例7
MIF抑制剂的高通量筛选分析
在96-孔板中用THP-1细胞产生的MIF进行MIF抑制剂的高通量筛选分析，具体方法如下。用上述ELISA进行MIF分析。将THP-1细胞以约5×106细胞/ml重悬浮于含有20μg/ml细菌LPS的RPMI培养基中，培养细胞18-20小时。收集细胞上清液，与假定的抑制剂共同孵育。简单地说，在37℃下，用MIF-单克隆抗体(R & D Systems分类号MAB289)，以4μg/ml的浓度包被96-孔ELISA平板(Costar Number3590)2小时。将未稀释培养基上清液加入ELISA平板在室温下孵育2小时。然后清洗孔，加入生物素酰化MIF多克隆抗体(R&D Systems #AF-289-PB)，然后加入链霉抗生物素蛋白-HRP和发色底物。通过插入MIF标准曲线计算MIF的量。
实施例8
血清中侯选抑制剂的HPLC分析
在评价任何小分子的体内作用之前，需要能够定量检测体液如血液中的化合物。建立了一种分析方法，首次可重现地检测实验化合物，如包括化合物7e在内的MIF抑制剂，然后测定其在生物体液中的浓度。
利用Symmetry Shield RP-8(4.6×75mm id，Waters，Milord，MA)，用Hewlett-Packard Model HP-1100 unit进行RP-HPLC。流动相是含有0.1％三氟乙酸的35％乙腈/水无梯度溶液。在235nm监测吸光率。为了测定血清中实验化合物的量，首先用50％乙腈(4℃过夜)初步分离样品血清蛋白质，然后以14000rpm转速离心30分钟。然后通过RP-HPLC分析上清液，化合物浓度的计算根据已知标准品的校正曲线。按照该方法，例用有尖峰(spiked)的实验样品用反相HPLC检测线性范围1.5-800ng(R2＝1)内的化合物7e(未显示)。当上述分析方法用于接受化合物7e(0.4mg/20克小鼠)给药的动物血清，定量测定化合物7e的循环浓度。
随着上述化合物7e的定量方法的发展，有可能评价化合物不同给药途径的效率，并描述生物活性特征。为了测试时间依赖性血清生物活性，通过腹膜内注射(i.p.)(图7A)和口腔填喂(图7B)，用化合物7e处理动物。
实施例9
MIF的体内抑制
下面的体内实验的目的在于确认化合物7e抑制MIF的初步体外分析结果。LPS-诱导的毒性看起来与MIF以及TNF-α和IL-1β的过度产生过关。因为内毒素性休克的动物可以通过中和或抑制这类炎症介质而受到保护。之所以选择本实验模型的原因是，它提供了脓毒病和脓毒性休克的可重现的、和快速的致死性模型。
每次实验之前新鲜配制脂多糖(LPS)剂量。向装有5mg内毒素的小瓶中加入0.5％TEA(1ml USP水+5ml三乙胺(Pierce))，重构LPS(大肠杆菌0111：B4，Sigma)。重构后，将溶液于37℃保温30分钟。随后，将溶液在56-60℃水浴超声仪中超声3次，每次30秒。超声后，将混合液继续旋涡振荡3分钟。LPS的储备液即可使用。
血液中IL-1β和TNF-α和MIF的检测
将10只10-周龄(20±2克)雌性BALB/c小鼠(Charles RiverLaboratories，Kingston，NY)以每笼5只饲养于笼中，自由取食和取水，在实验前至少一周使小鼠适应环境。在实验的当天，给小鼠称重，按照10只动物相当平均体重随机分组。将小鼠腹膜内注射(i.p.)200μl配成制剂的化合物7e或单独缓冲液后，立即腹膜内注射LPS(大肠杆菌0111：B4，10mg/kg或5mg/kg体重)和D-半乳糖胺(50mg/kg体重)。腹膜内给药单剂量LPS(20克小鼠0.2ml)，与终浓度为50mg/ml的D-半乳糖胺混合。心脏穿刺收集血液样品后，处死动物。收集血样一般在LPS处理后4小时进行。按照生产商的方案在血清分离器(Microtainer BectonDickinson，Minneapolis，NJ)中分离血清。按照生产商的指示用“小鼠IL-1β免疫分析或小鼠TNF-α免疫分析”试剂盒(R & D System Minneapolis，MN)，通过ELISA测定小鼠血清II-1和TNF-。小鼠血清中血清MIF浓度通过夹层ELISA(ChemiKine MIF Kit，Chemicon，San Diego，CA)定量。样品分析两次，结果取平均值。
鼠LPS模型
如上述饲养八只8至10周-龄(20±2克)雌性BALB/c小鼠，并使其适应环境。实验当天，称重小鼠，随机分成相当平均体重的5只动物组。将小鼠注射200l配制成制剂的化合物7e或其缓冲液(平均mg/kg化合物)，然后i.p.注射LPS(E.Coli 055B5，Sigma)(40，10，5，2或0.5mg/kg体重)和50mg/kg D-半乳糖胺。在前18小时中，每2小时观察小鼠一次，之后一天两次，观察7天。对于这些研究，使用Kaplan-Meier评估法评价动物存活。
对于所有体内研究，对分类数据用Fisher检验，对连续变量用Mantel-Cox检验，进行处理组间标准统计学比较。为了确定血清IL-1水平是否与血清MIF相关，应用Fisher检验。用Stat View 5.0软件(AbacusConcepts，Berkeley，CA)对数据进行分析。所有报道的为两方面的(two-sided)及该值小于0.05的p值都认为表明统计学的显著性。
进行了一个初步对照实验，确定鼠模型系统(雌性Balb/c小鼠)中内源性MIF的基线水平，并进一步确定LPS(10mg/kg)处理后内源性MIF增加的速率和程度。用LPS(Sigma 0111：B1)与50mg/kg β-D-半乳糖胺混合处理雌性Balb/c小鼠。在LPS/半乳糖胺处理后0，2，5和6小时，如上述用HPLC测定血清MIF水平。在该代表性实验开始时，内源性MIF的基线水平约为45ng/ml。然而，在六小时实验过程中，在收集的血清样品中被检测的MIF水平存在时间依赖性增加。当小鼠用化合物7e(配制成50％水溶液)和10mg/kg LPS处理后，能够检测的循环系统中的MIF水平显著降低(p＝0.05)。在图9A所示的实验中，在LPS给药时，将BALB/c(n＝20)小鼠i.p.注射20mg/kg体重化合物7e。5.5小时后收集血样。结果证明，抑制剂处理的动物对LPS应答的能力降低，检测到较低的MIF水平。在进一步的研究中，对小鼠给药减半剂量的LPS(5mg/kg)，处理后4小时测定血清MIF。该数据表明MIF出现高统计学显著(p＝0.0003)60％降低(图9B)。在进一步的实验中，用ELISA测定了小鼠血清中MIF和IL-1β。如图10所示，二者之间存在直接、且高度显著的相关性。在MIF和TNF-α之间也存在这种相关性(数据未显示)。在类似实验中，在20mg/kg化合物7e给药后，观察到血清IL-1β水平和血清TNF-α水平减少(图11)。
LPS诱导的实验性毒性休克研究揭示了MIF和TNF-α的关键作用。LPS刺激巨噬细胞-样细胞产生MIF，其反过来诱导巨噬细胞样细胞分泌TNF-α的事实提示，MIF在LPS的发病机理中发挥潜在作用。为了验证化合物7e是否能够预防LPS休克，使用β-D-半乳糖胺激活的BALB/c小鼠LPS介导的致死性休克模型。在注射致死剂量LPS(2，5和10mg/kg)时，用化合物7e处理，存活率从6％增加到47％(p＝0.0004)(图12)。使用的LPS的浓度影响该效果，证明当使用高浓度LPS时，化合物7e的效果达到饱和，因此具有特异性。表2是几个存活实验(共210只小鼠)的概述，其表明化合物7e以浓度依赖方式保护小鼠免遭LPS诱导的毒性休克。图13也以图形形式描述了这些数据，左轴表示25％存活的时间。
                          表2
    LPS剂量     75％动物死亡(小时)
    (mg/kg)     溶剂     化合物7e
    40     10.2     11.6
    10     9.9     18.0
    5     10.0     32.0
    2     10.2     ＞100
    0.5     22.0     ＞100
    0.1     ＞100     ＞100
MIF抵消化合物7e的作用
当施用化合物7e时，外源性重组人MIF能够逆转化合物的有益效果，支持了化合物7e通过调节小鼠血清中MIF的水平而增加动物对LPS的抗性的假设。该实施例中，将小鼠用标准LPS方案处理，除了加入1mg/kg LPS和20mg/kg抑制剂化合物7e，还对某些动物施用300μg/kg人重组MIF。在12小时，LPS加化合物7e组小鼠存在显著较多(p＜0.01)，但是施用MIF能够中和该存活率(数据未显示)。
实施例10在胶原诱导的关节炎模型中的MIF抑制剂
在第0天，用在完全弗氏佐剂(FCA；GibcoBRL)中乳化的牛II型胶原(CII 100g)，对二十只DBA/1 LacJ小鼠(10-12周龄)尾根部免疫。在第7天，经同样途径(在不完全弗氏佐剂中乳化)施用第二剂量胶原。在第14天，给小鼠皮下注射100mg LPS(055：B5)。在第70天，给小鼠腹膜内注射40g LPS(0111：B4)。按照爪子厚度分组，爪子厚度通过卡尺测量，随机化后，产生平衡的起始组。在第71，72，73，和74天，给小鼠施用配制于缓冲液中的化合物。然后在第74天，由两个观察者观察小鼠的爪子厚度。图14描绘了实验的时间曲线。该实验中，将消退小鼠(完全成熟关节炎的衰退)用第70天最后一次腹膜内注射的LPS刺激产生细胞因子，以及急性炎症。图15表明，化合物7e处理小鼠与仅用介质处理的对照(1.99mm)相比，爪子水肿略微有所减轻(1.87mm)，p＜0.05。在之后的时间点，与其对照相比，处理组的动物没有达到胶原诱导的关节炎的完全成熟表现(数据未显示)。
在另一个实验中，在第0天，用在完全弗氏佐剂(FCA；GibcoBRL)中乳化的牛胶原II型(CII 100g)，在十五只DBA/1J小鼠(10-12周龄)的尾根部免疫接种。在第21天，经同样途径施用在不完全弗氏佐剂中乳化的第二剂量的胶原。在第28天，给小鼠皮下注射100μg LPS(055：B5)。在第71天，给小鼠i.p.注射40g LPS(0111：B4)。分组和处理方案与上述相同。在第74天，收集血样，测量细胞因子。图16显示，与未处理的CIA样品相比，化合物7e降低了血清中MIF水平。检测到血清TNF-α水平甚至更显著地被抑制。
实施例11
通过实施例1描述的方法制备了下列MIF抑制剂。这些MIF抑制剂中的每一个都属于上述结构(1a)化合物一类，并且并入下列部分：
互变异构酶检测的结果显示每一种MIF抑制剂化合物表现出对MIF活性的明显抑制。
Figure A0281050101231
Figure A0281050101241
Figure A0281050101251
Figure A0281050101271
Figure A0281050101281
Figure A0281050101301
Figure A0281050101321
Figure A0281050101341
Figure A0281050101351
Figure A0281050101371
Figure A0281050101381
Figure A0281050101391
Figure A0281050101401
Figure A0281050101411
Figure A0281050101431
Figure A0281050101441
Figure A0281050101461
Figure A0281050101481
Figure A0281050101511
Figure A0281050101521
Figure A0281050101531
Figure A0281050101551
Figure A0281050101561
Figure A0281050101581
Figure A0281050101601
Figure A0281050101611
Figure A0281050101641
Figure A0281050101651
Figure A0281050101691
Figure A0281050101701
Figure A0281050101731
实施例12
互变异构酶检测的结果显示实施例11的化合物表现出对MIF活性特别高水平的抑制。
表3
Figure A0281050101751
Figure A0281050101761
Figure A0281050101771
Figure A0281050101781
Figure A0281050101801
Figure A0281050101811
实施例13
制备了下列MIF抑制剂。这些MIF抑制剂中的每一个都属于具有上述结构(Ib)的一类。
其中R1，R2，R3，R4，X，Y，Z和n如上述结构(Ib)所定义。互变异构酶检测的结果显示每一种MIF抑制剂化合物表现出对MIF活性的明显抑制。
Figure A0281050101841
Figure A0281050101851
实施例14
可以按照下列反应路线，反应路线5和反应路线6制备某些实施方案的抑制剂。这些MIF抑制剂中的每一个都属于上述结构(1a)化合物一类。
反应路线5
在该反应路线中，靛红酸酐与丙二酸二乙酯在NaH的N，N-二甲基乙酰胺溶液中反应。得到的中间体(被称作＂1M00＂)然后通过与POCl3反应被氯化，得到中间体(被称作＂1M00(Cl2)＂)。1M00(Cl2)然后与在乙酸中的NH4OAC反应，得到中间体(被称作＂1M00(Cl)＂)。1M00(Cl)然后与在DMF中的N-酰基哌嗪反应。该哌嗪化合物的酰基包括如反应路线5描述的呋喃基或噻吩基或者随后实施例中列举的其它基团作为取代基(被称作＂R3＂)。得到的中间体然后与卤素化合物反应。结合到卤素原子的取代基(被称作＂R4＂)可以包括随后实施例中列举的多种基团。得到的化合物为如上所述的结构(1a)。该反应路线中的步骤详细描述如下。按照反应路线5制备的化合物在下面被含有＂M＂的参考号表示，并且并入-COOEt部分。
反应路线6
在该反应路线中，4-羟基-2(1H)-喹诺酮与硝酸和乙酸的混合物反应。所得中间体通过和POCl3反应被氯化而产生另一中间体。该中间体然后与在DMF中的N-酰基哌嗪反应。该哌嗪化合物的酰基包括反应路线5的描述中被称为R3基团的取代基。所得中间体然后与包括在反应路线5的描述中被称为R4基团的取代基的卤素化合物。得到的化合物为如上所述的结构(1a)。该反应路线中的步骤详细描述如下。按照反应路线5制备的化合物在下面被含有＂N＂的参考号表示，并且并入-NO2部分。
Figure A0281050101871
按照反应路线5或反应路线6，制备属于具有结构1(a)化合物类的多种MIF抑制剂。表4提供了制备的化合物的一系列参考号。名称＂1M1##＂表示反应路线5制备的化合物，并且并入-COOEt部分和呋喃部分作为R3。名称＂1M2##＂表示反应路线5制备的化合物，并且并入-COOEt部分和噻吩部分作为R3。名称＂1N1##＂表示反应路线6制备的化合物，并且并入-NO2部分和呋喃基部分作为R3。名称＂1N2##＂表示反应路线6制备的化合物，并且并入-NO2部分和噻吩部分作为R3。在名称末端的两个数字鉴定化合物的R4基团。
表4
卤化的R4基团＂09＂在MARCH的高级有机化学，反应，机理和结构，第5版，Michael B.Smith和Jerry March，Eds.，A Wiley-IntersciencePublication，John Wiley & Sons，Inc.，p.437(2001)中公开。稍微不同的反应路线，反应路线7和8用于制备并入该部分的MIF抑制剂。
反应路线7
反应路线8
按照反应路线9或反应路线10，制备属于具有结构1(a)化合物类的多种MIF抑制剂。
反应路线9
Figure A0281050101893
反应路线10
表5提供了制备的化合物的一系列参考号。名称＂1M##1＂表示反应路线9制备的化合物，并且并入-COOEt部分。名称＂1M##2＂表示反应路线9制备的化合物，并且并入-NO2部分。名称＂1N##1＂表示反应路线10制备的化合物，并且并入-COOEt部分。名称＂1N##2＂表示反应路线10制备的化合物，并且并入-NO2部分。在字母M或N后的两个数字对应于鉴定R3部分的编号。
表5
Figure A0281050101902
Figure A0281050101911
Figure A0281050101921
按照下列反应路线，制备属于具有结构1(a)化合物类的多种MIF抑制剂。
反应路线11
Figure A0281050101922
向1M00(33.0g；0.14mole)在甲苯(40ml)的混悬液中加入108gPOCl3(0.7摩尔)。将得到的溶液加热回流1.5小时。在减压下蒸馏溶剂，连续用庚烷萃取残留的油(通过TLC控制)。蒸发合并的庚烷级分，将残渣与200ml水加热，并过滤。产率为27克(70％)。
在室温下干燥18小时后，将得到的二氯化合物转移至250ml圆底烧瓶中，向其中加入150ml乙酸和24.0g醋酸铵。将反应混合物加热回流大约6小时(通过LCMS和TLC控制)。当在反应混合物中检测不到起始原料时，将该热的溶液倒入水中，过滤得到的沉淀。表6提供了产率数据(g和％)；熔点；质荷比(M/Z)，其中M/Z＝754.1[3×M]+，503.3[2×M]]+；τ(8min.run)，并且通过LCMS测定纯度。
表6
  化合物  产量g  产率％   熔点℃     M/Z    τ，min(8min.run)  纯度％(LCMS)
  1M00(Cl)  23.0  92   198-200     754.1；503.3；252.2；206.0     2.97   ＞96
反应路线12
Figure A0281050101931
向1M00(Cl)(3.27g；13.0mmol)的20ml NMP溶液中，依次加入酰基哌嗪(2.34g；13.0mmol)和DABCO(1.46g；13.0mmol)。将反应混合物在100-120℃下搅拌15小时。用20％氯化铵溶液淬灭反应，过滤得到的沉淀，并用水洗涤。在干燥器中通过五氧化二磷在室温、减压下干燥产物。产物不经过进一步纯化用于下一步反应。
将氯喹诺酮1N00(Cl)(2.9g；13.0mmol)、酰基哌嗪三氟醋酸盐AV-0020(4.0g；13.0mmol)和DABCO(2.91g；26.0mmol)在25ml NMP中的混合物在100℃下搅拌过夜。将混合物倒入50ml盐水中，过滤得到的固体，用水洗涤，在干燥器中通过五氧化二磷在室温、减压下干燥产物。产物不经过进一步纯化用于下一步反应。
得到的化合物的产率和其它信息提供在表7中。对于被指定为1M1的化合物，X为O和R2为COOEt。对于被指定为1M2的化合物，X为S和R2为COOEt。对于被指定为1N1的化合物，X为O和R2为NO2。对于被指定为1N2的化合物，X为S和R2为NO2。
表7
    产量g   产率％     熔点℃      M/Z     τ，min     纯度％(LCMS)
    1M1     4.7   92     223-226dec.     396.2；350.2     2.67     ＞94
    1M2     4.9   92     220-222     366.2；412.3     2.84     ＞94
    1N1     4.5   95     266-267dec.     369.0     2.73     ＞92
    1N2     4.7   95     265dec.     385.2     2.89     ＞92
反应路线13
向NaH(0.04g；1.0mmol)在干燥NMP(3ml)的混悬液中，加入化合物1M1(或1M2)或1N1(或1N2)(0.8mmol)。气体停止冒出后，加入溴化物(06-20)(1.0mmol)。搅拌反应混合物，直到检测不到痕量的起始原料(通过LCMS控制)。向反应中加入10％氯化铵溶液(20ml)，用DCM萃取得到的混合物。分离化合物1M1和1M2，通过制备性HPLC(C-18 silicacolumn，150mm×41mm，40ml/min，梯度∶水-乙腈＝从60∶40至5∶95，20min)纯化。按照该反应路线制备的化合物为在表5的化合物名称后标有上标“A”。
向化合物1M1(或1M2)或1N1(或1N2)(0.8mmol)的干燥DMF(5ml)的溶液中，加入溴化物(06-20)(2.0mmol)和碳酸钾(200mg)。在1，4-二噁烷中应用4.0mmol环戊基溴化物得到化合物1M122；1M222；1N122；1N222。在80-100℃下搅拌反应混合物20-40小时(通过LCMS控制)。向反应中加入10％氯化铵溶液(20ml)，用DCM萃取得到的混合物。分离化合物1M106-1N220，通过制备性HPLC(C-18 silica column，150mm×41mm，40ml/min，梯度∶水-乙腈＝从80∶20至5∶95，40min)纯化。表5提供了得到的化合物的纯度数据和其它信息。通过制备性HPLC(C-18 silica column，150mm×41mm，40ml/min，梯度∶水-乙腈-HCl(0.001％)＝从80∶20至5∶95，40min)纯化化合物1N119*HCl。按照该反应路线制备的化合物为在表8的化合物名称后标有上标“B”。在表8中提供了该化合物的物理性质。包括＂(1)＂的标识表示该化合物为区域异构体。
表8
  化合物   产量mg   产率％     熔点℃     M/Z  τ，min UV(波长254nm，跑10分钟)   纯度％(LCMS)
  1M112A   78   19     151-152.5    506.2；460.4     6.46   ＞97
  1M115A   96   23     177.5-179    516.4；470.5     5.09   ＞97
  1N110A   99   29     163-166    423.2     4.96   ＞99
  1M214A   116   29     180.5-182.5    508.3；462.1     5.26   ＞99
  1M106A   98   27     141-143    452.3；406.3     5.13   ＞97
  1N106A   152   45     114-116    425.1     5.13   ＞99
  1N114A   97   26     216-217    465.4     5.08   ＞96
  1N206A   148   42     72-74    441.6     5.41   ＞97
  1N111(1)B   137   29     99-100    465.4；447.4     5.91   ＞99
  1N115B   157   32     105-110    489.4     5.14   ＞921
  1N116A   143   34     205-208    527.3     5.69   ＞99
  1N211(1)A   107   22     83-85    481.3     6.21   ＞98
  1N212A   96   24     73-75    495.5     6.78   ＞97
  1N215A   87   22     220-221    505.3     5.38   ＞932
  1N216B   207   38     228-230    543.2     5.90   ＞943
  1N217B   107   21     251-252    503.3     5.23   ＞944
  化合物    产量mg    产率％     熔点℃     M/Z  τ，min UV(波长254nm，跑10分钟)   纯度％(LCMS)
  1N218B     207     39     95-97     525.5     5.92    ＞96
  1M118B     104     19     159-161     536.4；490.3     5.64    ＞97
  1M215B     107     20     87-88     532.3；486.3     5.34    ＞99
  1M218B     147     27     110-112     552.4；506.3     5.89    ＞99
  1N120B     92     19     179-181     473.4；455.3     5.49    ＞98
  1N210B     99     23     187-190     439.4     5.22    ＞96
  1M107B     138     30     70-72     465.5；420.3     5.31    ＞95
  1M108B     213     45     71-73     478.3；432.2     4.79    ＞96
  1M110B     142     32     161-162     450.3；404.3；350.1     4.84    ＞97
  1M111(1)B     185     38     174-175     492.4；446.2     5.84    ＞93
  1M207B     131     27     65-67     482.4；436.4     3.88    ＞99
  1M208B     189     38     71-72     494.5；448.2     5.05    ＞97
  1M211(1)B     148     29     161-163     462.3；508.5     6.19    ＞99
  1M212B     105     20     163-165     522.7；476.3     6.74    ＞98
  1N107B     114     35     103-107     439.5     5.40    ＞99
  1N108B     301     59     200-203     451.2     4.83    ＞97
  1N207B     187     27     70-72     455.2     5.69    ＞98
  1N214B     146     38     172-175     481.1     5.31    ＞97
  1M113B     152     32     147-150     476.3；430.2     4.71    ＞99
  1M114B     202     41     170-172     492.4；446.2     4.97    ＞99
  1M116B     227     41     185-187     554.4；508.4     5.67    ＞98
  1M117B     147     29     96-98     514.5；468.6     4.92    ＞98
  1M119A     107     27     65-67     487.4；441.6；413.3     2.95    ＞96
  1M120B     137     27     165.5-167     500.5；454.2     5.46    ＞99
    化合物     产量mg   产率％     熔点C        M/Z   τ，min UV(波长254nm，跑10分钟)   纯度％(LCMS)
    1M206B     167     36     157-158     468.6；422.3     5.31   ＞98
    1M210B     107     23     157-158     466.3；420.2     5.13   ＞99
    1M213B     107     42     60-63     492.4；446.3     5.01   ＞98
    1M216B     157     28     177-179     570.3；524.5     5.87   ＞96
    1M217B     102     19     134-135     530.4；484.3     5.18   ＞97
    1M219A     192     48     74-76     503.4；457.3     3.14   ＞97
    1M220B     92     18     143-145     516.4；470.5     5.69   ＞98
    1N112A     182     48     65-68     479.2     6.52   ＞945
    1N113     82     18     95-97     449.1     4.83   ＞97
    1N117B     124     25     233.5-235     487.2     4.99   ＞98
    1N118B     107     21     163-163.5     509.5     5.73   ＞99
    1N119*HClA     27     5     251-252     460.3     3.10   ＞98
    1N208B     179     38     204-205     467.5     5.11   ＞96
    1N219A     107     28     258.5-260.5     476.3     3.14   ＞94
    1N220B     202     41     231.5-232.5     489.3；471.5     5.75   ＞98
    1M122     107     23     157-158     464.4；418.4；350.2     5.28   ＞986
    1N122     207     47     210-211     437.4；     5.38   ＞987
    1M222     129     27     166-167     480，3；434.4；366.2     5.56   ＞998
    1N222     103     23     110-112     453.2     5.67   ＞969
1HPLC＞96％
2HPLC UV-254＞94％
3HPLC＞97％
4HPLC＞96％
5HPLC(UV254)纯度＞95％.
6HPLC＝100％
7HPLC＞94％
8HPLC＝100％
9HPLC＞96
反应路线14
Figure A0281050101981
向喹诺酮1N01(或1M01)(14.08g；63.94mmol)和三乙基苄基氯化铵(58.4g；256.5mmol)的MeCN(235ml)溶液中加入26ml POCl3(282.4mmol)。将该混合物在室温下搅拌过夜。在减压下除去溶剂，将残渣在水(335ml)中搅拌2小时。过滤沉淀，用水洗涤，干燥，用热的环己烷洗涤，并干燥。在表9中提供了制备的化合物的物理性质。
表9
    产量g   产率％     熔点℃       M/Z     τ，min     纯度，％(LCMS)
 1N01(Cl)     5.59    89     258-259   239；193     3.34     ＞95
 1M01(Cl)     8.63    51     95.5-98   266.1；220.1     3.34     ＞98
反应路线15
向1N01(CI)(640mg；2.68mmol)的3ml DMF溶液中依次加入叔丁氧基羰基哌嗪(500mg；2.68mmol)和DABCO(300mg；2.68mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。(对于1M01(Cl)，反应混合物在60℃下搅拌过夜)。用水(15ml)淬灭反应，过滤得到的沉淀，并用水洗涤。(对于1M01(Cl)，用20％氯化铵溶液(15ml)淬灭反应，用DCM(3×3ml)萃取，通过硫酸钠干燥，在减压下除去溶剂，用己烷研制残渣。过滤得到的沉淀，并用己烷洗涤)。在干燥器中通过五氧化二磷在室温、减压下干燥产物。将其溶解于1ml TFA中，保持1小时。用20ml乙醚研制溶液，过滤沉淀，用乙醚洗涤，并在空气中干燥。在表10中提供了制备的化合物的物理性质。
表10
  产量g   产率％      熔点℃       M/Z    τ，min     纯度，％(LCMS)
 1MP1TFA   0.84   59    214-215 dec.   316.1；270.1    1.98     ＞97
 1NP1TFA   1.01   75    234-234 dec.   589.2；241.2    1.98     ＞98
反应路线16
Figure A0281050102001
向1N01(Cl)(50mg；0.419mmol)的3ml DMF溶液中依次加入3-thienoyl哌嗪三氟乙酸盐(69mg；0.440mmol)和DABCO(47mg；0.419mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。用水(15ml)淬灭反应，过滤得到的沉淀，并用水洗涤。在干燥器中通过五氧化二磷在室温、减压下干燥产物。按照该反应路线制备的化合物为在表11中在化合物名称后标有上标“A”进行标识。
反应路线17
Figure A0281050102002
将吡咯-2-羧酸(91mg；0.82mmol)和CDI(133mg；0.82mmol)在2mlDMF中的混合物在室温下搅拌过夜。(在1M081，1M091，1M221，1M271，1N081，1N211的情形中为在NMP(1ml)中；在1M071，1M151，1M181，1M191，1M211，1N071，1N151，1N181，1N271的情形中为在DMSO(1ml)中)。然后加入1NP1 TFA，将该混合物在60℃下搅拌6小时。(在1M181，1N181的情形中为在室温下)。用盐水5ml稀释混合物，并用二氯甲烷(3×2ml)萃取。用水(1ml)洗涤合并的萃取液，通过硫酸钠干燥并在减压下蒸发。(在1M071，1M151，1M191，1M211，1N071，1N151，1N191，1N211的情形中，为用水稀释混合物，过滤沉淀的粉末，空气干燥，溶解于5-6N盐酸的i-PrOH溶液中。加热回流溶液10分钟。在减压下蒸发溶剂，将残渣在乙醚或丙酮中研制。过滤得到的沉淀，得到目标化合物的盐酸盐)。该得到的残渣为目标化合物。按照该反应路线制备的化合物为在表11中在化合物名称后标有上标“B”进行标识。按照反应路线16和17制备的化合物的产率数据和性质提供在表1 1中。包括＂(2)＂的标识表示该化合物为区域异构体。
表11
  化合物   产量g   产率％     熔点℃     M/Z     τ，min(跑10分钟)     纯度，％(LCMS)
  1M311A   82   53   113-115     406.3；361.4     2.381     ＞97
  1N111A   62   77   182     383.1     3.011     ＞99
  1N131A   68   81   252-254     399.0     3.011     100
  1N311A   138   87   212-214     379.1     2.381     ＞97
  1M101B   146   77   225.5-227     409.2；270.3     4.11     ＞97
  1N121A   87   82   227-230     428.2     4.57     ＞94
  1N161B   88   93   157.5-160     383.2     3.46     ＞99
  1N201B   162   84   215-217     461.2     4.81     ＞97
  1N301B   121   100   227-230     430.3     5.08     ＞97
  1N341B   87   85   225-227     413.0     4.56     ＞932
  1N171B   122   41   175-177     398.0     4.36     ＞95
  1N221B   238   81   187-188     394.1；348.2     3.69     ＞98
  1N241B   175   60   258-260     394.1     2.89     ＞96
  1N351B   210   74   229-231     383.0；337.3     2.72     ＞97
  1M111(2)B   174   91   155.5-158     410.2；364.2     4.01     ＞97
  1M131B   186   94   137.5-140     426.1；380.1     4.22     ＞97
  1M161B   170   89   189-190     410.1；364.2；346.1     3.43     ＞96
  1M201B   221   97   176-178     490.1；442.4；416.0     4.67     ＞95
    化合物   产量g   产率％     熔点℃     M/Z     τ，min(跑10分钟)     纯度，％(LCMS)
    1M291B     212     97     210-211     471.3；425.2     4.22     ＞98
    1N091B     227     79     84-87     387.3；369.2     3.70     ＞98
    1N141B     124     36     223-224.5     467.3     5.41     ＞98
    1M121B     146     69     52-54     455.3；409.1；381.2     4.45     ＞943
    1M241B     116     59     209-210     421.3；375.1     3.01     ＞95
    1M281x1.5H2OB     222     98     164-166     459.4；413.1     4.86     ＞97
    1M301B     168     79     67-70     457.3；411.0；383.1     4.94     ＞944
    1M351B     119     62     206-208     409.9；364.3；336.4     2.76     ＞98
    1N101B     228     80     218-221     382.2；289.2     4.19     ＞98
    1N191*HClB     250     77     270-273     400.1     2.74     ＞96
    1N231B     256     87     217-219     394.1     2.99     ＞95
    1N281B     249     77     283-285     432.2     4.99     ＞99
    1N291B     254     77     293.5-294     444.4     4.30     ＞97
    1N321A     392     84     146.5-149     369.0     2.85     ＞99
    1N331A     455     94     189-190     385.1     2.99     ＞99
    1M141B     103     45     130-131     494.5；448.2     5.31     ＞97
    1M171B     129     65     125-127     425.0；379.2；351.4     4.22     ＞96
    1M231B     149     76     49-52     375.1；421.1     3.01     ＞96
    1M321A     247     55     130.5-131.5     396.3；350.2；269.3     3.04     ＞98
    1M331A     276     59     113-114.5     412.3；366.2     2.91     ＞99
    1M341B     114     56     225-227     440.5；394.1；270.3     4.39     ＞99
    1M071*HCl     233     56     43-45     413.4；367.1；270.1     2.76     ＞97
    1M081     65     15     143-145     427.2；270.2     3.09     ＞99
    1M091     171     39     60-62     414.4；270.0     3.59     ＞99
    1M151*HCl     147     27     108-111     431.3；385.1；270.3     2.18     ＞99
    1M181     124     43     67-69     411.5；365.3；     3.97     .99
  化合物   产量g   产率％     熔点℃     M/Z     τ，min(跑10分钟)     纯度，％(LCMS)
    337.4
  1M191*HCl     327     76     105-107     427.3；270.3     2.13     ＞98
  1M211(2)     70     14     427.3；381.4；270.0     2.79     ＞96
  1M221     247     56     160-160.5     421.4；375.1；357.1；347.3     3.60     ＞93
  1M271     135     31     65-67     422.3；376.2；348.0     3.56     ＞94
  1N071*HCl     141     34     83-86     386.2     3.14     ＞96
  1N081     85     14     263-265     400.2     3.12     ＞97
  1N151*HCl     227     69     198-200     404.2     2.82     ＞95
  1N181     246     86     200-201     384.1     4.00     ＞97
  1N211(2)*HCl     71     11     78-80     400.2     2.36     ＞95
  1N271     247     84     214-215     395.1；349.2；242.3     3.65     ＞99
1 跑8分钟
2 HPLC＞98％
3 HPLC＞96％
4 HPLC＞97％
如选择的反应路线描述所制备的MIF抑制剂的产率提供在表12中。包括＂(1)＂或＂(2)＂的标识表示该化合物为区域异构体。
表12
  编号     化合物     重量mg     熔点，(℃)
    1     1M071*HCl     226     43-45
    2     1M081     58     143-145
    3     1M091     164     60-62
    4     1M101     139     225.5-227
    5     1M106     84     141-143
    6     1M107     131     70-72
    7     1M108     196     71-73
    8     1M110     135     161-162
    9     1M111(1)     178     174-175
    10     1M111(2)     167     155.5-158
    11     1M112     72     151-152.5
    12     1M113     145     147-150
    13     1M114     195     170-172
    14     1M115     91     177.5-179
    15     1M116     220     185-187
    16     1M117     140     96-98
    17     1M118     97     159-161
    18     1M119     100     65-67
    19     1M120     130     165.5-167
    20     1M121     139     52-54
    21     1M122     100     157-158
    22     1M131     179     137.5-140
    23     1M141     96     130-131
    24     1M151*HCl     140     108-111
    25     1M161     163     189-190
    26     1M171     122     125-127
    27     1M181     117     67-69
    28     1M191*HCl     320     105-107
    29     1M201     214     176-178
    30     1M206     160     157-158
    31     1M207     124     65-67
    32     1M208     182     71-72
    33     1M210     100     157-158
    34     1M211(1)     141     161-163
    35     1M211(2)*HCl     112     80-81
    36     1M212     98     163-165
    37     1M213     200     60-63
    38     1M214     109     180.5-182.5
    39     1M215     100     87-88
    40     1M216     150     177-179
    41     1M217     95     134-135
    42     1M218     140     110-112
    43     1M219     185     258.5-260.5
    44     1M220     85     143-145
    45     1M221     240     160-160.5
    46     1M222     122     166-167
    47     1M231     142     49-52
    48     1M241     109     209-210
    49     1M271     128     65-67
    50     1M281     215     164-166
    51     1M291     205     210-211
    52     1M301     161     67-70
    53     1M311     75     113-115
    54     1M321     230     130.5-131.5
    55     1M331     258     113-114.5
    56     1M341     107     225-227
    57     1M351     112     206-208
    58     1N071*HCl     134     83-86
    59     1N081     78     263-265
    60     1N091     220     84-87
    61     1N101     221     218-221
    62     1N106     145     114-116
    63     1N107     107     103-107
    64     1N108     294     200-203
    65     1N110     90     163-166
    66     1N111(1)     130     99-100
    67     1N111(2)     56     182
    68     1N112     175     65-68
    69     1N113     75     95-97
    70     1N114     90     216-217
    71     1N115     150     105-110
    72     1N116     133     205-208
    73     1N117     117     233.5-235
    74     1N118     100     163-163.5
    75     1N119*HCl     42     251-252
    76     1N120     85     179-181
    77     1N121     80     227-230
    78     1N122     200     210-211
    79     1N131     60     252-254
    80     1N141     117     223-224.5
    81     1N151*HCl     220     198-200
    82     1N161     81     157.5-160
    83     1N171     115     175-177
    84     1N181     239     200-201
    85     1N191*HCl     243     270-273
    86     1N201     155     215-217
    87     1N206     141     72-74
    88     1N207     180     70-72
    89     1N208     172     204-205
    90     1N210     92     187-190
91 1N211(1) 100 83-85
    92     1N211(2)*HCl     64     78-80
    93     1N212     89     73-75
    94     -     -     -
    95     1N214     139     172-175
    96     1N215     80     220-221
    97     1N216     200     228-230
    98     1N217     100     251-252
    99     1N218     200     95-97
    100     1N219     100     258.5-260.5
    101     1N220     195     231.5-232.5
    102     1N221     231     187-188
    103     1N222     96     110-112
    104     1N231     246     217-219
    105     1N241     168     258-260
    106     1N271     240     214-215
    107     1N281     242     283-285
    108     1N291     247     293.5-294
    109     1N301     114     227-230
    110     1N311     131     212-214
    111     1N321     385     146.5-149
    112     1N331     448     189-190
    113     1N341     80     225-227
    114     1N351     202     229-231
实施例15
下列反应路线提供了合成酸的Boc-衍生物的一般性方法。
反应路线20
搅拌L-噻唑烷-4-羧酸(1g；7.51mmol，98％纯度，AVOCADO，#15033)、碳酸钠(1.75g；16.5mmol)在水(9ml)和i-PrOH(1ml)中的混合物直到溶解。然后加入Boc2O(1.967g；9.01mmol)，在室温下搅拌混合物过夜。用水(10ml)稀释得到的混悬液，用己烷(5ml)萃取。分离下层相，加入EtOAc(20ml)，酸化搅拌的混合物调节pH至2-3。分离EtOAc相，用EtOAc(3×10ml)萃取水相。用水(10ml)洗涤合并的萃取液，通过硫酸钠干燥，并在减压下蒸发。从乙醚中结晶残渣，过滤得到的沉淀，真空下干燥得到N-Boc-噻唑烷-4-羧酸(1.03g；59％)。
实施例16
可以按照下列反应路线合成烷基哌嗪。
反应路线21
Figure A0281050102072
将新鲜蒸馏的亚硫酰二氯(3.9ml；0.053mol)在二氯甲烷(5ml)中的溶液逐滴加入到2-噻吩甲醇(4.2ml；0.044mol)和三乙胺(7.4ml；0.05mol)在二氯甲烷(25ml)的搅拌溶液中；温度保持在低于20℃。然后在1小时中提高至40℃，倒入碎冰中，分离二氯甲烷-相，并通过硫酸镁干燥。然后将其逐滴加入到N-Boc-哌嗪(2g；0.011mol)和三乙胺(1.5ml；0.011mol)在二氯甲烷(45ml)的搅拌溶液中。参见Nicholas A.Meanwell，Piyasena Hewawasam，Jeanine A.Thomas，J.J.Kim Wright，John W.Russel，Marianne Gamberdella，Harold J.Goldenberg，Steven M.Seiler，和George B.Zavoico，血小板cAMP磷酸二酯酶的抑制剂4.水溶性1，3-二氢-2H-咪唑并[4，5-b]喹啉-2-酮衍生物的侧链末端的结构变化，J.Med.Chem.(1993)Vol.36.，pp.3251-3264；Elena Carceller，Manuel Merlos，Marta Giral，Carmen Almansa，Javier Bartroli，Julian Garcia-Rafanell，和Javier Forn，作为PAF拮抗药的1-酰基-4-((2-甲基-3-比啶基)氰基甲基)哌嗪的合成和结构-活性关系，J.Med.Chem.(1993)No.36，pp.2984-2997。在室温下搅拌混合物过夜，在减压下除去溶剂，将残渣用乙醚萃取。在减压下蒸发乙醚溶液，将残渣溶解于TFA(3.3ml；0.043mol)中，保持30分钟。在减压下除去TFA，用乙醚研制残渣，过滤沉淀，空气干燥得到1-(2噻吩基甲基)哌嗪二三氟乙酸盐(3.16g；72％)。参见William J.Archer，Robert Cook，和Roger Taylor，亲电芳香取代，Part 34.二噻吩并[1，2-b：4，3b′]苯、二噻吩并[1，2-b：3，4-b′]苯和二噻吩并[2，1-b：3，4-b′]苯的除氚的部分速率因素，J.Chem.Soc.Perkin Trans.II.(1983)pp.813-819.
反应路线22
Figure A0281050102091
将新鲜蒸馏的亚硫酰二氯(3.9ml；0.053mol)在二氯甲烷(5ml)中的溶液逐滴加入到呋喃基醇(3.8ml；0.044mol)和三乙胺(7.4ml；0.05mol)在二氯甲烷(25ml)的搅拌溶液中；温度保持在低于20℃。然后搅拌混合物1小时。然后蒸发溶剂，将残渣溶解于二氯甲烷(150ml)中。然后将得到的溶液逐滴加入到N-Boc-哌嗪(2g；0.011mol)和三乙胺(1.5ml；0.011mol)在二氯甲烷(45ml)的搅拌溶液中。在室温下搅拌混合物过夜，在减压下除去溶剂，用乙醚萃取残渣。在减压下蒸发乙醚溶液，将残渣溶解于TFA(3.3ml；0.043mol)中，保持30分钟。在减压下除去TFA，用乙醚研制残渣，过滤得到的黑色沉淀。将沉淀溶解于200ml MeOH中，加入活性碳，加热回流该混合物30分钟，过滤活性碳，蒸发溶剂，用乙醚研制残渣。过滤得到的白色沉淀，空气干燥得到1-(2-呋喃基甲基)哌嗪二三氟乙酸盐(1.64g；40％)。参见R.Lukes和V.Dienstbierova，vonα-甲基呋喃的合成，Collection Czechoslov.Chem.Commun.(1954)Vol.19，pp.609-610。
实施例17
按照下列反应路线可以合成磺酰胺类。
4-羟基-1-甲基-3-硝基-1H-喹啉-2-酮(被称作595-01)
在氮气氛下，将硝基乙酸乙酯(15.96g，120mmol)的溶液缓慢加入到氢化钠(60％在矿物油中，5.28g，132mmol)在二甲基乙酰胺的混悬液中。将该混合物在室温下搅拌，直到不再有氢气冒出，然后加热至90℃30分钟，冷却至室温。缓慢加入N-甲基靛红酸酐(23.38g，132mmol)的二甲基乙酰胺溶液，并在120℃下加热过夜。将混合物冷却至室温，倒入冰水中，通过冷的10％盐酸酸化。过滤形成的固体，用水洗涤几次，得到7.1g(27％)黄色固体。Mp 193℃.1H NMR(DMSO-d6)：δ3.60(s，3H)，7.37(t，J＝7.6Hz，1H)，7.58(d，J＝8.5Hz，1H)，7.77(t，J＝7.5Hz，1H)，8.12(d，J＝7.9Hz，1H).EIMS m/z 221(M+1)，243(M+23).Anal.(C10H8N2O4)C，H，N。
Figure A0281050102101
4-氯-1-甲基-3-硝基-1H-喹啉-2-酮(被称作595-02)
将595-01(6.2g，28.18mmol)在70ml磷酰氯中的混悬液在90℃下加热3小时。在减压下除去溶剂。将该残渣混悬于冰水中，并通过碳酸氢钠中和。过滤形成的固体，干燥得到4.91g(73％)棕色固体。Mp 235℃.1H NMR(DMSO-d6)：δ3.72(s，3H)，7.56(t，J＝7.5Hz，1H)，7.78(d，J＝8.6Hz，1H)，7.92(t，J＝8.6Hz，1H)，8.12(d，J＝7.9Hz，1H).EIMSm/z 239(M+1)，261(M+23).Anal.(C10H7N2O3Cl)C，H，N。
4-(噻吩-2-羰基)-哌嗪-1-羧酸叔-丁基酯(被称作595-03)
在0℃、氮气氛下，将2-噻吩羰基氯化物(2.04g，1.49mL)加入到1-哌嗪羧酸叔-丁基酯(2.5g，13.4mmol)和DMAP(20mg)在吡啶(15mL)的溶液中，并在室温下搅拌过夜。将混合物倒入冰水中，过滤沉淀，用水洗涤几次，干燥得到白色固体(3.5g，88％).Mp 76℃.1H NMR(DMSO-d6)：δ1.42(s，12H)，3.40(m，4H)，3.61(m，4H)，7.12(m，1H)，7.43(d，J＝4.1Hz，1H)，7.77(d，J＝4.8Hz，1H).EIMS m/z 297(M+1)，319(M+23).Anal.(C14H20N2O3S)。
Figure A0281050102111
哌嗪-1-基-噻吩-2-基-甲酮(被称作595-04)
向595-03(3.5g，11.8mmol)的二氯甲烷(50mL)溶液中加入三氟乙酸(10mL)。在室温下搅拌该溶液3小时。在真空下蒸发溶剂，将残渣溶解于氯仿中。通过碳酸氢钠饱和溶液洗涤有机相，通过硫酸钠干燥并蒸发，得到2.20g(94％)棕色粘稠油。1H NMR(DMSO-d6)：δ2.78(m，4H)，3.59(m，4H)，7.12(t，J＝4.1，1H)，7.38(d，J＝4.1Hz，1H)，7.74(d，J＝4.8Hz，1H).EIMS m/z 197(M+1)。
1-甲基-3-硝基-4-[4-(噻吩-2-羰基)-哌嗪-1-基]-1H-喹啉-2-酮(被称作595-06)
将595-04(1g，5.5mmol)和二异丙基乙基胺(1.74mL，10mmol)加入到595-02(1.2g，5mmol)的甲苯(100mL)溶液中，并在100℃下加热15小时。在真空下除去溶剂。通过快速色谱层析(二氯甲烷/MeOH，49∶1)纯化残渣，得到1.05g(53％)黄色固体。Mp 105℃.1H NMR(DMSO-d6)：δ3.19(m，4H)，3.65(s，3H)，3.90(m，4H)，7.14(t，J＝4.5Hz，1H)，7.43(t，J＝7.5Hz，1H)，7.48(d，J＝4.1Hz，1H)，7.67(d，J＝8.5Hz，1H)，7.80(m，2H)，8.05(d，J＝8.5Hz，1H).EIMS m/z 399(M+1)，421(M+23).Anal.(C19H18N2O3S)C，H，N。
Figure A0281050102112
3-氨基-1-甲基4-[4-噻吩-2-羰基)-哌嗪-1-基]-1H-喹诺酮-2-酮(被称作595-09)
向595-06(600mg，1.5mmol)在乙醇的混悬液中加入Pd/C(10％，75mg)。在氢气氛、60℃下搅拌该混悬液4小时。通过硅藻土过滤热的混合物，将滤液蒸发至干燥。通过乙醇重结晶残渣，得到490mg(88％)白色固体。Mp 202℃.1H NMR(CDCl3)：δ3.20(br，2H)，3.49(br，2H)，3.65(br，2H)，3.79(s，3H)，4.13(br，2H)，4.71(br，2H)，7.08(t，J＝4.3Hz，1H)，7.22-7.26(m，3H)，7.34-7.37(m，3H)，7.48(d，J＝4.9Hz，1H)，7.79(d，J＝8.0Hz，1H).EIMS m/z369(M+1)，391(M+23).Anal.(C19H20N4O2S)C，H，N。
N-{1-甲基-2-氧-4-[4-(噻吩-2-羰基)-哌嗪-1-基]-1，2-二氢-喹啉-3-基}-甲磺酰胺(被称作595-15)
在氮气氛下，将甲磺酰氯(0.1mL，1.3mmol)逐滴加入到595-09(120mg，0.32mmol)的吡啶(2mL)溶液中，并在室温下搅拌过夜。在真空下蒸发溶剂，将残渣溶解于乙酸乙酯中。通过饱和的碳酸氢钠溶液、水和盐水连续洗涤有机相。通过硫酸钠干燥有机相，蒸发至残渣，将其通过乙醚洗涤，得到103mg(73％)白色固体。Mp 223℃.1H NMR(DMSO-d6)：δ3.08(s，3H)，3.31(m，4H)，3.64(s，3H)，3.95(m，4H)，7.15(t，J＝4.0Hz，1H)，7.33(t，J＝7.6Hz，1H)，7.44(d，J＝4.0Hz，1H)，7.56(d，J＝8.5Hz，1H)，7.66(t，J＝7.4Hz，1H)，7.79(d，J＝4.9Hz，1H)，7.98(d，J＝8.2Hz，1H)，8.84(s，1H).EIMS m/z 447(M+1)，469(M+23).Anal.(C20H22N4O4S2)C，H，N。
Figure A0281050102131
可以按照类似的反应路线制备其它的磺酰胺。
实施例18
可以按照下列反应路线合成磺酰基化合物
p-甲苯基硫烷基-乙酸乙酯(被称作595-29)
在室温下，将4-甲基苯硫醇(5g，40.25)的干燥THF溶液逐滴加入到NaH(60％在矿物油中，1.98g，48.30)在THF的混悬液中，并在氮气氛下搅拌30分钟。将溴乙酸乙酯(4.9mL，44.27)缓慢加入到该溶液中，并在室温下再搅拌3小时。在真空下除去溶剂。将残渣溶解于稀盐酸中，并通过乙酸乙酯萃取。用饱和的碳酸氢钠溶液、水和盐水连续洗涤有机相。然后通过硫酸钠干燥。蒸发有机相，得到8.46g(99％)无色油。1HNMR(CDCl3)：δ1.22(t，J＝7.2Hz，3H)，2.32(s，3H)，3.57(s，2H)，4.14(q，J＝7.2Hz，2H)，7.11(d，J＝8.0Hz，2H)，7.33(d，J＝8.0Hz，2H).EIMS m/z 210(M+1)，233(M+23)。
(甲苯-4-磺酰基)-乙酸乙酯(被称作595-35)
在0℃下，向595-29(10g，47.55mmol)的二氯甲烷溶液中，分批加入m-氯过苯甲酸(21.31g，95.10mmol)。将混合物升温至室温，搅拌过夜。过滤形成的固体，连续用1N NaOH，水和盐水洗涤滤液。通过硫酸钠干燥有机相，蒸发得到9.8g(85％)无色油。1H NMR(CDCl3)：δ1.22(t，J＝7.2Hz，3H)，2.45(s，3H)，4.08(s，2H)，4.17(q，J＝7.2Hz，2H)，7.37(d，J＝8.0Hz，2H)，7.83(d，J＝8.0Hz，2H).EIMS m/z 243(M+1)，265(M+23)。
Figure A0281050102141
4-羟基-1-甲基-3-(甲苯-4-磺酰基)-1H-喹啉-2-酮(被称作595-36)
在氮气氛下，将595-35(9.8g，40.49mmol)的溶液缓慢加入到氢化钠(60％在矿物油中，1.78g，44.52mmol)在二甲基乙酰胺的混悬液中。在室温下搅拌混合物，直到不再有氢气冒出，然后加热至90℃30分钟，并冷却至室温。缓慢加入N-甲基靛红酸酐(7.88g，44.52mmol)在二甲基乙酰胺中的溶液，并在120℃下加热过夜。将混合物冷却至室温，倒入冰水中，通过冷的10％盐酸酸化。过滤形成的固体，用水洗涤几次，得到5.7g(43％)白色固体。Mp 191℃.1H NMR(DMSO-d6)：δ2.39(s，3H)，3.44(s，3H)，7.36(t，J＝7.5Hz，1H)，7.42(d，J＝8.2Hz，2H)，7.55(d，J＝8.5Hz，1H)，7.81(t，J＝7.1Hz，1H)，7.95(d，J＝8.2Hz，2H)，8.11(d，J＝8.0Hz，1H).EIMS m/z 330(M+1)，352(M+23).Anal.(C17H15NO4S)C，H，N。
4-氯-1-甲基-3-(甲苯-4-磺酰基)-1H-喹啉-2-酮(被称作595-46)
将595-36(5.2g，5.9mmol)在30mL磷酰氯中的混悬液在130℃下加热30小时。在减压下除去溶剂。将残渣混悬于冰水中，通过碳酸氢钠中和。过滤形成的固体，干燥得到2.3g(43％)白色固体。Mp 193℃.1HNMR(DMSO-d6)：δ2.38(s，3H)，3.52(s，3H)，7.39(d，J＝8.0Hz，2H)，7.48(t，J＝7.5Hz，1H)，7.64(d，J＝8.4Hz，1H)，7.84(t，J＝7.1Hz，1H)，7.94(d，J＝8.2Hz，2H)，8.32(d，J＝8.0Hz，1H).EIMS m/z 348(M+1)，370(M+23).Anal.(C17H14NO3SCl)C，H，N。
1-甲基4-[4-(噻吩-2-羰基)-哌嗪-1-基]-3-(甲苯-4-磺酰基)-1H-喹啉-2-酮(被称作595-48)
将二异丙基乙基胺(0.38mL，2.22mmol)加入到595-46(289mg，0.83mmol)和595-04(195mg，0.99mmol)的甲苯溶液中，在105℃下加热过夜。冷却溶液，并在真空下蒸发溶剂。将水加入到油性残渣中，超声处理。过滤形成的固体，用水和乙醚洗涤，得到黄色固体360mg(86％)，mp213℃.1H NMR(DMSO-d6)：δ2.37(s，3H)，3.37(s，3H)，3.65(m，4H)，3.94(m，4H)，7.16(t，J＝4.3Hz，1H)，7.32(d，J＝8.0Hz，2H)，7.39(t，J＝7.6Hz，1H)，7.49(d，J＝4.0Hz，1H)，7.54(d，J＝8.5Hz，1H)，7.74(d，J＝8.0Hz，2H)，7.80(d，J＝4.5Hz，1H)，8.15(d，J＝8.2Hz，1H).EIMS m/z508(M+1)，530(M+23).Anal.(C26H25N3O4S2)C，H，N。
Figure A0281050102151
4-羟基-3-甲磺酰基-1-甲基-1H-喹啉-2-酮(被称作595-05)
在氮气氛下，将甲磺酰基乙酸乙酯(3.78g，22.74mmol)的溶液缓慢加入到氢化钠(60％在矿物油中，1.07g，25mmol)在二甲基乙酰胺的混悬液中。在室温下搅拌混合物，直到不再有氢气冒出，然后加热至90℃30分钟，并冷却至室温。缓慢加入N-甲基靛红酸酐(7.88g，44.52mmol)在二甲基乙酰胺中的溶液，并在120℃下加热过夜。将混合物冷却至室温，倒入冰水中，通过冷的10％盐酸酸化。过滤形成的固体，用水洗涤几次，得到2.76g(48％)白色固体。Mp 170℃.1H NMR(DMSO-d6)：δ3.51(s，3H)，3.59(s，3H)，7.39(t，J＝7.4Hz，1H)，7.62(d，J＝8.5Hz，1H)，7.84(t，J＝7.0Hz，1H)，8.09(d，J＝8.0Hz，1H).EIMS m/z 254(M+1)，276(M+23).Anal.(C11H11NO4S)C，H，N。
4-氯-3-甲磺酰基-1-甲基-1H-喹啉-2-酮(被称作595-14)
将595-05(1.5g，5.9mmol)在30mL磷酰氯中的混悬液在130℃下加热30小时。在减压下除去溶剂。将残渣混悬于冰水中，并通过碳酸氢钠中和。过滤形成的固体，干燥得到773mg(48％)白色固体。Mp 221℃.1H NMR(DMSO-d6)：δ3.48(s，3H)，3.68(s，3H)，7.49(t，J＝7.8Hz，1H)，7.72(d，J＝8.5Hz，1H)，7.89(t，J＝8.6Hz，1H)，8.29(d，J＝8.5Hz，1H).EIMS m/z 272(M+1)，294(M+23).Anal.(C11H10ClNO3S)C，H，N。
Figure A0281050102161
3-甲磺酰基-1-甲基-4-[4-(噻吩-2-羰基)-哌嗪-1-基]-1H-喹啉-2-酮(被称作595-16)
将二异丙基乙基胺(0.38mL，2.22mmol)加入到595-14(300mg，1.11mmol)和595-04(239mg，1.21mmol)的甲苯溶液中，在105℃下加热过夜。冷却溶液，并在真空下蒸发溶剂。将水加入到油性残渣中，超声处理。过滤形成的固体，用水和乙醚洗涤，得到黄色固体384mg(81％)，mp224℃.1H NMR(DMSO-d6)：δ3.36(s，3H)，3.52(m，4H)，3.60(s，3H)，3.91(m，4H)，7.16(t，J＝3.5Hz，1H)，7.37(t，J＝7.5Hz，1H)，7.47(d，J＝3.5Hz，1H)，7.61(d，J＝8.5Hz，1H)，7.57(t，J＝8.1Hz，1H)，7.79(d，J＝4.8Hz，1H)，8.10(d，J＝8.5Hz，1H).EIMS m/z 432(M+1)，454(M+23).Anal.(C20H21N3O4S2)C，H，N。
Figure A0281050102171
实施例19
4-羟基-2-氧-1，2-二氢-喹啉-3-羧酸乙酯(被称作595-68)
在氮气氛下，将丙二酸二乙酯(80g，0.50mol)的溶液缓慢加入到氢化钠(60％在矿物油中，22g，0.55mol)在二甲基乙酰胺的混悬液中。在室温下搅拌混合物，直到不再有氢气冒出，然后加热至90℃30分钟，并冷却至室温。缓慢加入靛红酸酐(89.72g，0.55mmol)在二甲基乙酰胺中的溶液，并在120℃下加热15小时。将混合物冷却至室温，倒入冰水中，通过冷的10％盐酸酸化。过滤形成的固体，用水洗涤几次，得到55g(47％)白色固体。Mp 173℃.1H NMR(DMSO-d6)：δ1.30(t，J＝6.9Hz，3H)，4.33(q，J＝6.9Hz，2H)，7.18(t，J＝7.5Hz，1H)，7.26(d，J＝8.2Hz，1H)，7.62(t，J＝7.2Hz，1H)，7.93(d，J＝8.0Hz，1H)11.50(s，1H)，13.5(s，1H).EIMS m/z 234(M+1)，256(M+23).Anal.(C12H11NO4)C，H，N。
2，4-二氯-喹啉-3-羧酸乙酯(被称作595-72)
将595-68(35g，150mmol)在200mL磷酰氯中的混悬液加热回流30分钟。在减压下除去溶剂。将残渣混悬于冰水中，并通过碳酸氢钠中和。过滤形成的固体，干燥得到39g(97％)白色固体。Mp 93℃.1HNMR(DMSO-d6)：δ1.37(t，J＝6.9Hz，3H)，4.49(q，J＝6.9Hz，2H)，7.89(t，J＝8.5Hz，1H)，8.02(t，J＝7.2Hz，1H)，8.10(d，J＝8.3Hz，1H)，8.28(d，J＝8.0Hz，1H)；EIMS m/z 270(M+1)，292(M+23).Anal.(C12H9Cl2NO2)C，H，N。
4-氯-2-氧-1，2-二氢-喹啉-3-羧酸乙酯(被称作595-76)
将醋酸铵(12.6g，164mmol)加入到595-72(40.17g，149mmol)的乙酸(150mL)溶液中。在140℃下加热混合物4小时。冷却溶液，倒入冰水中。过滤形成的固体，通过水洗涤，干燥得到白色固体(34g，91％)，Mp186℃.1H NMR(DMSO-d6)：δ1.37(t，J＝6.9Hz，3H)，4.50(q，J＝6.9Hz，2H)，7.87(t，J＝7.2Hz，1H)，8.01(t，J＝7.0Hz，1H)，8.08(d，J＝8.4Hz，1H)，8.26(d，J＝8.2Hz，1H).EIMS m/z 252(M+1).Anal.(C12H10CINO3)C，H，N。
Figure A0281050102181
2-氧-4-[4-(噻吩-2-羰基)-哌嗪-1-基]-1，2-二氢-喹啉-3-羧酸乙酯(被称作595-77)
向595-76(7g，27.8mmol)的二甲基乙酰胺溶液中加入1，4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷(6.23g，55.6mmol)和595-04(6g，30.6mmol)。在115℃下加热溶液15小时。冷却反应混合物，并倒入冰水中。过滤形成的固体，用水洗涤，干燥得到白色固体(7g，62％)，mp 198℃.1H NMR(DMSO-d6)：δ1.28(t，J＝6.9Hz，3H)，3.12(m，4H)，3.87(m，4H)，4.28(q，J＝6.9Hz，2H)，7.15(t，J＝4.3Hz，1H)，7.23(t，J＝7.5Hz，1H)，7.31(d，J＝8.1Hz，1H)，7.45(d，J＝3.1Hz，1H)，7.54(t，J＝7.4Hz，1H)，7.79(d，J＝4.9Hz，1H)，7.87(d，J＝8.0Hz，1H).EIMS m/z 412(M+1)，434(M+23).Anal.(C21H21N3O4S.0.5H2O)C，H，N。
1-(4-氟苄基)-2-氧4-[4-(噻吩-2-羰基)-哌嗪-1-基]-1，2-二氢-喹啉-3-羧酸乙酯(被称作595-78)
向氢化钠(60％在矿物油中，0.78g，19.46mmol)在DMF的混悬液中，缓慢加入595-77(7g，17.03mmol)的DMF溶液。在室温下搅拌混悬液30分钟。缓慢向该溶液中加入4-氟苄基溴，再搅拌2小时。将该混合物倒入冰水中，用冷的10％盐酸酸化。分离形成的固体，用水洗涤，并通过快速色谱层析(二氯甲烷/MeOH，49∶1)纯化，得到5.9g(67％)白色固体。Mp 52℃.1H NMR(DMSO-d6)：δ1.30(t，J＝6.9Hz，3H)，3.16(m，4H)，3.89(m，4H)，4.32(q，J＝6.9Hz，2H)，7.14-7.17(m，3H)，7.24-7.27(m，2H)，7.31(t，J＝7.6Hz，1H)，7.44-7.47(m，2H)，7.58(t，J＝8.5Hz，1H)，7.79(d，J＝4.9Hz，1H)，8.02(d，J＝8.5Hz，1H).EIMS m/z520(M+1)，542(M+23).Anal.(C28H26FN3O4S.H2O)C，H，N。
Figure A0281050102191
实施例20
下列描述了如上所述的通式结构1(a)和1(b)的化合物库的合成。在名称中包括＂M＂的化合物并入-COOEt部分。在名称中包括＂N＂的化合物并入-NO2分。在＂M＂或＂N＂后的两个数字分别对应于如下提供的官能团R2和R3编号名称。在＂M＂或＂N＂前的数字对应于官能团R1的编号名称。除了名称中包括＂+i＂的，化合物具有下列结构。
在名称中包括＂+i＂的化合物中，R3为在喹诺酮基团氧原子上的取代基，而不是在氮原子上，即，如下所描述的结构1(b)化合物。在优选实施方案的其它地方出现的标识＂i＂是指在喹诺酮基团氧原子上的取代基，而不是在氮原子上。
R1官能团的数字编号
氢 甲基 氯
1  2  3
R2官能团的数字编号
Figure A0281050102211
R3官能团的数字编号
Figure A0281050102212
制备的MIF抑制剂的数字编号提供在表13中。
表13
Figure A0281050102213
Figure A0281050102221
制备中间体或MIF抑制剂的详细反应路线提供如下。
反应路线21
Figure A0281050102231
所有的下列化合物应用类似的或相同的过程获得：化合物1M21：产率176mg，56.56％；化合物1M31：产率64mg，20.60％；化合物1M41：产率110mg，35.48％；化合物1M51：产率139mg，44.18％；化合物1M61：产率88mg，28.37％；化合物2M13产率144mg，38.09％；化合物2M21：产率113mg，36.73％；化合物2M23：产率137mg，36.16％；化合物2M31：产率27mg，8.67％；化合物2M33：产率141mg，37.45％；化合物2M41：产率72mg，23.30％；化合物2M43：产率117mg，31.54％；化合物2M51：产率65mg，21.20％；化合物2M53产率91mg，24.87％；化合物2M61：产率113mg，36.94％；化合物2M63：产率127mg，33.99％；化合物3M11：产率58mg，19.00％；化合物3M21：产率134mg，43.32％；化合物3M31：产率117mg，37.50％；化合物3M41：产率141mg，45.83％；化合物3M51产率119mg，38.42％；化合物3M61：产率142mg，45.85％；和化合物3M63：产率40mg，11.00％。
反应路线22
Figure A0281050102241
实施例21
按照下列反应路线制备酸的Boc-衍生物。
反应路线23
Figure A0281050102251
按照反应路线25制备的化合物的产率和纯度提供在表13中。
表13
    样品     产量g     产率％ 纯度，％CMS
    AV-0010     25.0     55     ＞90
    AV-0020     42.0     52     ＞90
    AV-0030     39.0     79     ＞90
    AV-0040     49.0     86     ＞90
    AV-0050     36.0     82     ＞90
    AV-0060     43.0     88     ＞90
实施例22
按照下列反应路线制备一系列MIF抑制剂。反应物缩写如下：DCM＝二氯甲烷；DMA＝二甲基乙酰胺；DMF＝N-二甲基甲酰胺；HOAc＝乙酸；MeCN＝乙腈；DABCO＝三乙二胺；TEBAC＝苄基三乙基氯化铵；NMP＝1-甲基-2-吡咯烷酮；BOC＝叔-BuOCO；PPA＝多磷酸；TFA＝三氟乙酸。
向2-氨基-5-甲基苯甲酸(67.7g，0.45摩尔)在250ml二噁烷和150ml甲苯的混合物中的剧烈搅拌溶液中，逐滴加入双光气(97.6g，0.49摩尔)在80ml二噁烷中的溶液。将反应混合物搅拌12小时，过滤沉淀后，用乙醚洗涤。合并滤液和乙醚级分，在减压下除去溶剂。用己烷研制残渣，过滤得到的沉淀，用己烷洗涤，并在室温下干燥过夜。化合物2000：产率66.5g(84％)，纯度93％(LCMS)。
Figure A0281050102262
向NaH(18.9g，0.47摩尔)在无水DMA的搅拌混悬液中，逐滴加入丙二酸酯。将反应混合物搅拌20分钟，冷却至30℃。向得到的溶液中分几批加入靛红酸酐。在130-150℃下加热反应混合物10小时，之后蒸馏掉DMA。用水研制残渣，应用10％盐酸酸化至pH＝3。过滤得到的沉淀，用水洗涤。将固体材料置于2L锥形烧瓶中，加入1L水，应用碳酸钾将pH调节至12-13。过滤得到的溶液，用10％盐酸酸化至pH＝2-3。过滤沉淀，用乙醚洗涤，从二噁烷中结晶。化合物2M00：产率23.3g(24％)，纯度；90％(LCMS)。
Figure A0281050102263
向2M00(23.0g，0.093摩尔)在甲苯(40ml)中悬浮液中加入71.3gPOCl3(43ml，0.465摩尔)。将得到的溶液在回流下加热1.5小时。减压下蒸馏溶剂后，将残存的油接着用庚烷萃取(TLC控制)。蒸发合并的庚烷组分，残留物用200ml水加热并滤去。室温干燥18小时后，将得到的二氯化合物转移到250ml圆底烧瓶中，向其中加入90ml乙酸和8.0g醋酸铵。在回流下加热反应混合物约2h(通过LCMS和TLC控制)。当反应混合物中检测不到起始材料后，将热溶液倒入水中，过滤得到的沉淀。按照上述反应路线制备的化合物的产率和纯度在表14中描述。
                          表14
    化合物     产量，g     产率，％   纯度，％LCMS
  AV-1M00(Cl)     50.00     70     ＞90
  AV-2M00(Cl)     10.96     44     ＞90
  AV-3M00(Cl)     30.00     70     ＞90
方法A：向2M00 1.0g(3.77mmol)在DMA的溶液中依次加入酰基哌嗪0.75g(4.16mmol)和DABCO 0.84g(7.5mmol)。将反应混合液在100-120℃搅拌15小时。用20％NH4Cl溶液淬灭反应，过滤出得到的沉淀，用水洗涤。在室温、减压条件下在P2O5干燥器上干燥产物。产物不经过进一步纯化用于下一步反应。
方法B：将氯喹诺酮2M00 1.0g(3.77mmol)，酰基哌嗪三氟乙酸酯，AV-0050 1.55g(4.14mmol)和DABCO 0.84g(7.53mmol)在DMF 3ml中的混合物在101℃下搅拌过夜，将混合液倒入50ml盐水，过滤出得到的固体，用水洗涤，在室温、减压条件下在P2O5干燥器上干燥产物。产物不经过进一步纯化用于下一步反应。
得到的化合物的产量在表15中提供。
表15
   化合物    方法   产量，g  产率，％   纯度，％CMS
    1M10     A     1.38     88     ＞90
    1M20     A     1.47     90     ＞90
    1M30     A     1.49     89     ＞90
    1M40     A     1.67     95     ＞90
    1M50     A     1.78     94     ＞90
    1M60     A     1.58     91     ＞90
    2M10     A     1.16     75     ＞90
    2M20     A     1.22     76     ＞90
    2M30     A     1.24     76     ＞90
    2M40     A     1.34     78     ＞90
    2M50     B     1.83     99     ＞90
    2M60     A     1.31     78     ＞90
    3M10     A     1.05     70     ＞90
    3M20     A     1.21     78     ＞90
    3M30     A     1.26     79     ＞90
    3M40     A     1.41     85     ＞90
    3M50     A     1.64     92     ＞90
    3M60     A     1.28     78     ＞90
Figure A0281050102281
向NaH 0.03g(0.8mmol)在无水DMF(1ml)中的悬浮液中加入化合物2M10 0.30g(0.7mmol)。气体发生停止后，加入苄基溴化物0.19g(1.1mmol)。搅拌反应混合液直到检测不到起始化合物(通过LCMS控制)。向反应液中加入20％NH4Cl(2ml)溶液，得到混合液用DCM萃取。通过制备性HPLC(C-18硅胶柱，150mm×41mm，40ml/min，梯度∶水-乙腈＝从60∶40到5∶95，20min)分离和纯化化合物2M12。化合物2M12：产量114mg(31％)，纯度＞99％(HPLC)
方法A：向NaH 0.03g(0.8mmol)在无水DMF(2ml)的混悬液中，加入化合物1M60 300mg(0.7mmol)。在气体停止冒出后(大约30分钟)，加入二甲基氨基乙基氯(2.1mmol)的乙醚溶液。在100℃下加热反应混合物12小时(通过蒸馏除去乙醚)。将该溶液冷却至室温，通过1％AcOH的水溶液调节混合物的pH至pH9。用DCM(3×3ml)萃取混合物，用盐水洗涤合并的DCM级分，并通过硫酸镁干燥。通过旋转蒸发仪除去DCM，通过制备TLC(AnalTech silica gel GF，1000gm，洗脱液：CHCl3∶EtOH＝4∶1)纯化产物。化合物1M64：产率84mg(24％)，纯度＞99％(HPLC)。
方法B：向NaH 0.114g(2.84mmol；of 60％在矿物油中混悬液)在3ml NMP中的混悬液中，分几批加入喹诺酮2M50 0.33g(0.676mmol)。在气体停止冒出(大约30分钟)后，在室温下搅拌混合物30分钟，加入二甲基氨基乙基氯盐酸盐0.195g(1.35mmol)。在100℃下加热得到的混合物过夜。冷却反应混合物，倒入水(25ml)中，过滤得到的固体，用水洗涤，在85(下干燥过夜。通过制备TLC(AnalTech silica gel GF，1500gm，洗脱液：10％三乙胺/EtOAc，下面斑点)分离目标异构体。化合物2M54：产率68mg(18％)。
Figure A0281050102301
向NaH 0.03g(0.8mmol)在无水DMF(2ml)的混悬液中，加入化合物1M60 300mg(0.7mmol)。在气体停止冒出后(大约30分钟)，加入二甲基氨基乙基氯(2.1mmol)的乙醚溶液。在100℃下加热反应混合物12小时(通过蒸馏除去乙醚)。将该溶液冷却至室温，通过1％AcOH的水溶液调节混合物的pH至pH9。用DCM(3×3ml)萃取混合物，用盐水洗涤合并的DCM级分，并通过硫酸镁干燥。通过旋转蒸发仪除去DCM，通过制备TLC(AnalTech silica gel GF，1000gm，洗脱液：CHCl3∶EtOH＝4∶1)纯化产物。化合物1M64：产率57mg，纯度＞99％(HPLC)。应用类似或相同的过程得到所有这些下列化合物：化合物1M34：产率77mg，22.00％；化合物1M54：产率58mg，16.88％；化合物1M64：产率84mg，24.00％；化合物2M14：产率57mg，16.25％；化合物2M34：产率63mg，17.95％；和化合物2M64：产率42mg，12.00％。
反应路线24
化合物1M15...3M65：应用上述化合物1M64描述的过程得到所有下列化合物：化合物3M15：36mg；13％；化合物3M65：5mg；1％；化合物1M65：31mg；9％；化合物1M45：34mg；10％；化合物1M55：51mg；15％；化合物1M35：51mg；14％；化合物3M45：52mg；15％；化合物3M25：24mg；7％；化合物3M35：71mg；20％；化合物3M35i；16mg；4％；化合物3M15i；22mg；8％；化合物1M65i：20mg；6％；化合物1M45i：27mg；8％；化合物1M35i：28mg；8％；化合物3M65i：23mg；6％。
反应路线25
Figure A0281050102312
在0-5℃(冰水浴)下，向对甲苯胺10g(93.3mmol)和Et3N(13.6ml)的DCM(100ml)溶液中，逐滴加入丙二酸单乙酯氯化物(17.72ml)。反应完成(通过TLC控制)后，将反应混合物倒入水(300ml)中，通过HCl(c.)调节pH至2。分离油基层，水相用DCM(3×50ml)萃取。用盐水(50ml)洗涤合并的DCM萃取液，并通过硫酸钠干燥。通过旋转蒸发仪除去DCM，将残渣溶解于600ml MeOH和400ml 1N NaOH的混合物中。加热回流反应混合物3小时，冷却至室温，并通过2N盐酸酸化至pH2。在减压下除去MeOH，并通过EtOAc(3×100ml)萃取水。用盐水洗涤有机相，通过硫酸钠干燥，在减压下除去溶剂。向残渣中加入40g PPA，通过磁力搅拌器搅拌混合物，并在170℃下加热小时。将反应混合物冷却至室温，缓慢用500ml 1N盐酸稀释。通过20％NaOH水溶液调节得到的溶液的pH值至pH4。过滤形成的沉淀，用水洗涤，在干燥器中通过NaOH干燥过夜。05的产率为13.2g(81％)。
向5-甲基-2，4-二羟基喹啉13.2g在冰醋酸(200ml)的溶液中，缓慢加入25ml硝酸(63％)。在90℃下加热反应混合物30分钟，冷却至室温，倒入水(700ml)中。过滤形成的沉淀，并用水洗涤。在干燥器中通过NaOH干燥得到的化合物过夜。06的产率为7.68g(44％)。
Figure A0281050102321
向二羟基喹啉酮01(50g)在冰醋酸(600ml)的溶液中，加入98ml硝酸(63％)。在90℃下加热反应混合物30分钟，并冷却至室温。过滤形成的沉淀，并用水(5×100ml)洗涤。在干燥器中通过P2O5干燥得到的化合物过夜。1N00的产率为52.7g(82％)。
反应路线26
Figure A0281050102331
向5-氯靛红酸酐3000 15g(75.91mmol)的DMF(75ml)溶液中，加入无水碳酸钾(8.85g)和甲基碘化物14.46g(114mmol)。在室温下搅拌反应混合物18小时，并倒入冰水中。过滤沉淀，用水洗涤，在干燥器中通过P2O5干燥过夜。化合物3001：产率15.3g(95％)，纯度＞90％(LCMS)。化合物3003：产率18.2g(79％)，纯度＞90％(LCMS)。应用类似或相同的程序得到所有的下列化合物：化合物3002：16.1g，74％产率，纯度＞90％(LCMS)；化合物3003：18.2g，78.5％产率，纯度＞90％(LCMS)。
Figure A0281050102341
向硝基乙酸乙酯7.5ml(68mmol)在50ml DMF的搅拌溶液中，逐滴加入2.85g NaH。停止冒出氢气后，在80℃下加热混合物15分钟。在15分钟的期间内加入N-甲基靛红酸酐3001 15g(71mmol)在60mlDMF中的溶液，之后在120℃下加热反应18小时。通过蒸馏除去溶剂，将残渣溶解于水中，用6N盐酸酸化至pH＝4。收集沉淀，用水洗涤，在干燥器中通过NaOH干燥过夜。化合物3N01：产率16.6g(92％)，纯度＞90％(LCMS)。化合物3N03：产率18.5g(89％)，纯度＞90％(LCMS)。化合物3N03：产率18.5g(89％)纯度＞90％(LCMS)。
反应路线27
Figure A0281050102351
向喹诺酮3N00 18.8g(78.1mmol)和三乙基苄基氯化铵71g(312mmol)的MeOH(290ml)溶液中，加入POCl3 32ml(344mmol)。搅拌混合物过夜。在减压下除去溶剂，在水(290ml)中搅拌残渣3小时。过滤固体沉淀，用水洗涤，干燥，用热的环己烷洗涤，干燥，并从THF-己烷二次结晶。化合物3N00(Cl)：产率5.59g(28％)，纯度＞95％(LCMS)。
Figure A0281050102352
搅拌氯喹诺酮3N00(Cl)0.30g(1.16mmol)、酰基哌嗪三氟乙酸盐AV-0050 0.45g(1.22mmol)和DABCO 0.26g(2.32mmol)在DMF 2ml中的混合物过夜。然后将混合物倒入水(15ml)中，过滤得到的固体，用水洗涤，在干燥器中通过P2O5干燥过夜。产物不经过进一步纯化用于下一步反应。化合物3N50：产率0.50g(90％)，纯度＞95％(LCMS)。
优选实施方案已经结合其具体的实施方案进行描述。应当理解能够进一步改变本发明，本申请旨在覆盖下列任何针对本发明的变化、用途或调整，本发明的原则，包括本发明公开内容以外的，在本发明所属技术领域的已知或现有技术范围内的内容，可以应用于前述必要技术特征，落入在本发明或其等同物的范围内。本文引用的所有文献，包括但不限于技术文献、授权的专利和专利申请，它们的全部内容在本文引用作为参考。

Claims (147)

1.一种具有如下结构的化合物：
Figure A028105010002C1
或其立体异构体，前药，或药用盐，其中：
X为氧或硫；
Y选自-NO，-NO2，-C(＝O)R5，-C(＝O)OR5，-C(＝O)NR5R6，-NR5C(＝O)R5，-NRXSO2R5，和-S(O)mR5；
Z为-CH2-或-C(＝O)-；
m为0，1，或2；
n为0，1，或2，条件是当n为0时，Z为-C(＝O)-；
R1选自氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基或取代的杂环烷基，二烷基，和R’R”N(CH2)x-，其中x为2至4，R’和R”独立地选自氢，烷基，取代的烷基，芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，取代的杂环烷基，和二烷基；
R2和R3独立地选自卤素，-R5，-OR5，-SR5，和-NR5R6；
R4选自-CH2R7，-C(＝O)NR5R6，-C(＝O)OR7，-C(＝O)R7，和R8；
R5和R6独立地选自氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；或R5和R6一起与它们连接的氮原子形成杂环或取代的杂环；
R7选自烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；和
R8选自氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；
条件是：
当R1为苯基，R2和R3均为氢，X为氧，和Y为-C(＝O)OCH2CH3时，R4不为氢或甲基；
当R1为甲基，R2和R3均为氢，X为氧，和Y为-NO2时，R4不为甲基；
当R1为氢或甲基，R2为7-氯，R3为氢，X为氧和Y为-C(＝O)OCH2CH3时，R4不为-CH2CH2OH；和
当R1为甲基，R2为氢或7-氯，R3为氢，X为氧，和Y为-C(＝O)OCH2CH3时，R4不为甲基。
2.一种具有如下结构的化合物：
Figure A028105010003C1
或其立体异构体，前药，或药用盐，其中：
X为氧或硫；
Y选自-NO，-NO2，-C(＝O)R5，-C(＝O)OR5，-C(＝O)NR5R6，-NR5C(＝O)R5，-NR5SO2R5，和-S(O)mR5；
Z为-CH2-；
m为0，1，或2；
n为1；
R1选自氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基或取代的杂环烷基，二烷基，和R’R”N(CH2)x-，其中x为2至4，R’和R”独立地选自氢，烷基，取代的烷基，芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，取代的杂环烷基，和二烷基；
R2和R3独立地选自卤素，-R5，-OR5，-SR5，和-NR5R6；
R4选自-CH2R7，-C(＝O)NR5R6，-C(＝O)OR7，-C(＝O)R7，和R8；
R5和R6独立地选自氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；或R5和R6一起与它们连接的氮原子形成杂环或取代的杂环；
R7选自烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；和
R8选自氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；条件是：
当R1为苯基，R2和R3均为氢，X为氧，和Y为-C(＝O)OCH2CH3时，R4不为氢或甲基；
当R1为甲基，R2和R3均为氢，X为氧，和Y为-NO2时，R4不为甲基；
当R1为氢或甲基，R2为7-氯，R3为氢，X为氧和Y为-C(＝O)OCH2CH3时，R4不为-CH2CH2OH；和
当R1为甲基，R2为氢或7-氯，R3为氢，X为氧，和Y为-C(＝O)OCH2CH3时，R4不为甲基。
3.根据权利要求2的化合物，其中X为氧。
4.根据权利要求2的化合物，其中Y为-C(＝O)OCH2CH3。
5.根据权利要求2的化合物，其中Y为-NO2。
6.根据权利要求2的化合物，其中R4为
Figure A028105010004C1
或
7.根据权利要求2的化合物，其中R4为 或
Figure A028105010004C4
8.一种具有如下结构的化合物：
Figure A028105010005C1
或其立体异构体，前药，或药用盐，其中：
X为氧或硫；
Y为-NO2；
Z为-CH2-或-C(＝O)-；
m为0，1，或2；
n为0，1，或2，条件是当n为0时，Z为-C(＝O)-；
R1选自氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基或取代的杂环烷基，二烷基，和R’R”N(CH2)x-，其中x为2至4，R’和R”独立地选自氢，烷基，取代的烷基，芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，取代的杂环烷基，和二烷基；
R2和R3独立地选自卤素，-R5，-OR5，-SR5，和-NR5R6；
R4选自-CH2R7，-C(＝O)NR5R6，-C(＝O)OR7，-C(＝O)R7，和R8；
R5和R6独立地选自氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；或R5和R6一起与它们连接的氮原子形成杂环或取代的杂环；
R7选自烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；和
R8选自氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；
条件是当R1为甲基，R2和R3均为氢，X为氧和Y为-NO2时，R4不为甲基。
9.根据权利要求8的化合物，其中X为氧。
10.根据权利要求8的化合物，其中Z为-CH2-和n为1。
11.根据权利要求8的化合物，其中R4为
Figure A028105010006C1
或
12.根据权利要求8的化合物，其中R4为
Figure A028105010006C3
或
Figure A028105010006C4
13.一种具有如下结构的化合物：
Figure A028105010006C5
或其立体异构体，前药，或药用盐，其中：
X为氧或硫；
Y为-C(＝O)OCH2CH3；
Z为-CH2-或-C(＝O)-；
m为0，1，或2；
n为0，1，或2，条件是当n为0时，Z为-C(＝O)-；
R1选自氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基或取代的杂环烷基，二烷基，和R’R”N(CH2)x-，其中x为2至4，R’和R”独立地选自氢，烷基，取代的烷基，芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，取代的杂环烷基，和二烷基；
R2和R3独立地选自卤素，-R5，-OR5，-SR5，和-NR5R6；
R4选自-CH2R7，-C(＝O)NR5R6，-C(O)OR7，-C(＝O)R7，和R8；
R5和R6独立地选自氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；或R5和R6一起与它们连接的氮原子形成杂环或取代的杂环；
R7选自烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；和
R8选自氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；条件是：
当R1为苯基，R2和R3均为氢，和X为氧时，R4不为氢或甲基；
当R1为氢或甲基，R2为7-氯，R3为氢，和X为氧时，R4不为-CH2CH2OH；和
当R1为甲基，R2为氢或7-氯，R3为氢，和X为氧时，R4不为甲基。
14.根据权利要求13的化合物，其中X为氧。
15.根据权利要求13的化合物，其中Z为-CH2-和n为1。
16.根据权利要求13的化合物，其中R4为 或
Figure A028105010007C2
17.根据权利要求13的化合物，其中R4为 或
18.一种具有如下结构的化合物：
Figure A028105010007C5
或其立体异构体，前药，或药用盐，其中：
X为氧或硫；
Y选自-NO，-NO2，-C(＝O)R5，-C(＝O)OR5，-C(＝O)NR5R6，-NR5C(＝O)R5，-NR5SO2R5，和-S(O)mR5；
Z为-CH2-或-C(=O)-；
m为0，1，或2；
n为0，1，或2，条件是当n为0时，Z为-C(＝O)-；
R1选自氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基或取代的杂环烷基，二烷基，和R’R”N(CH2)x-，其中x为2至4，R’和R”独立地选自氢，烷基，取代的烷基，芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，取代的杂环烷基，和二烷基；
R2和R3独立地选自卤素，-R5，-OR5，-SR5，和-NR5R6；R4为
Figure A028105010008C1
或
Figure A028105010008C2
和
R5和R6独立地选自氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；或R5和R6一起与它们连接的氮原子形成杂环或取代的杂环。
19.根据权利要求18的化合物，其中X为氧。
20.根据权利要求18的化合物，其中Z为-CH2-和n为1。
21.根据权利要求18的化合物，其中Y为-C(＝O)OCH2CH3。
22.根据权利要求18的化合物，其中Y为-NO2。
23.一种具有如下结构的化合物：
或其立体异构体，前药，或药用盐，其中：
X为氧或硫；
Y选自-NO，-NO2，-C(＝O)R5，-C(=O)OR5，-C(＝O)NR5R6，-NR5C(＝O)R5，-NR5SO2R5，和-S(O)mR5；
Z为-CH2-或-C(＝O)-；
m为0，1，或2；
n为0，1，或2，条件是当n为0时，Z为-C(＝O)-；
R1选自氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基或取代的杂环烷基，二烷基，和R’R”N(CH2)x-，其中x为2至4，R’和R”独立地选自氢，烷基，取代的烷基，芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，取代的杂环烷基，和二烷基；
R2和R3独立地选自卤素，-R5，-OR5，-SR5，和-NR5R6；R4为 或
Figure A028105010009C2
和
R5和R6独立地选自氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；或R5和R6一起与它们连接的氮原子形成杂环或取代的杂环。
24.根据权利要求23的化合物，其中X为氧。
25.根据权利要求23的化合物，其中Z为-CH2-和n为1。
26.根据权利要求23的化合物，其中Y为-C(＝O)OCH2CH3。
27.根据权利要求23的化合物，其中Y为-NO2。
28.一种具有如下结构的化合物：
或其立体异构体，前药，或药用盐，其中：
X为氧；
Y选自-NO，-NO2，-C(＝O)R5，-C(＝O)OR5，-C(＝O)NR5R6，-NR5C(＝O)R5，-NR5SO2R5，和-S(O)mR5；
Z为-CH2-或-C(＝O)-；
m为0，1，或2；
n为0，1，或2，条件是当n为0时，Z为-C(＝O)-；
R1选自氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基或取代的杂环烷基，二烷基，和R’R”N(CH2)x-，其中x为2至4，R’和R”独立地选自氢，烷基，取代的烷基，芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，取代的杂环烷基，和二烷基；
R2和R3独立地选自卤素，-R5，-OR5，-SR5，和-NR5R6；
R4选自-CH2R7，-C(＝O)NR5R6，-C(＝O)OR7，-C(＝O)R7，和R8；
R5和R6独立地选自氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；或R5和R6一起与它们连接的氮原子形成杂环或取代的杂环；
R7选自烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；和
R8选自氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；条件是：
当R1为苯基，R2和R3均为氢，和Y为-C(＝O)OCH2CH3时，R4不为氢或甲基；
当R1为甲基，R2和R3均为氢，和Y为-NO2时，R4不为甲基；
当R1为氢或甲基，R2为7-氯，R3为氢，和Y为-C(＝O)OCH2CH3时，R4不为-CH2CH2OH；和
当R1为甲基，R2为氢或7-氯，R3为氢，和Y为-C(＝O)OCH2CH3时，R4不为甲基。
29.根据权利要求28的化合物，其中Z为-CH2-和n为1。
30.根据权利要求28的化合物，其中Y为-C(＝O)OCH2CH3。
31.根据权利要求28的化合物，其中Y为-NO2。
32.根据权利要求28的化合物，其中R4为 或
Figure A028105010010C2
33.根据权利要求28的化合物，其中R4为 或
Figure A028105010011C2
34.根据权利要求26的化合物，其中所述结构包括：
Figure A028105010011C3
35.根据权利要求27的化合物，其中所述结构包括：
36.根据权利要求27的化合物，其中所述结构包括：
37.根据权利要求27的化合物，其中所述结构包括：
Figure A028105010012C1
38.根据权利要求26的化合物，其中所述结构包括：
Figure A028105010012C2
39.根据权利要求26的化合物，其中所述结构包括：
Figure A028105010012C3
40.根据权利要求27的化合物，其中所述结构包括：
Figure A028105010013C1
41.根据权利要求26的化合物，其中所述结构包括：
Figure A028105010013C2
42.根据权利要求27的化合物，其中所述结构包括：
Figure A028105010013C3
43.根据权利要求26的化合物，其中所述结构包括：
44.根据权利要求26的化合物，其中所述结构包括：
45.根据权利要求21的化合物，其中所述结构包括：
46.根据权利要求27的化合物，其中所述结构包括：
47.根据权利要求27的化合物，其中所述结构包括：
Figure A028105010015C2
48.根据权利要求27的化合物，其中所述结构包括：
Figure A028105010015C3
49.根据权利要求26的化合物，其中所述结构包括：
Figure A028105010016C1
50.根据权利要求27的化合物，其中所述结构包括：
Figure A028105010016C2
51.根据权利要求26的化合物，其中所述结构包括：
Figure A028105010016C3
52.根据权利要求21的化合物，其中所述结构包括：
53.根据权利要求26的化合物，其中所述结构包括：
Figure A028105010017C2
54.根据权利要求26的化合物，其中所述结构包括：
Figure A028105010017C3
55.根据权利要求26的化合物，其中所述结构包括：
Figure A028105010018C1
56.根据权利要求21的化合物，其中所述结构包括：
57.根据权利要求4的化合物，其中所述结构包括：
58.一种组合物，包含权利要求1的化合物与药用载体或稀释剂组合。
59.一种降低所需患者MIF活性的方法，包括给该患者施用有效量的具有如下结构的化合物：
或其立体异构体，前药，或药用盐，其中：
X为氧或硫；
Y选自-NO，-NO2，-C(＝O)R5，-C(＝O)OR5，-C(＝O)NR5R6，-NR5C(＝O)R5，-NR5SO2R5，和-S(O)mR5；
Z为-CH2-或-C(＝O)-；
m为0，1，或2；
n为0，1，或2，条件是当n为0时，Z为-C(＝O)-；
R1选自氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基或取代的杂环烷基，二烷基，和R’R”N(CH2)x-，其中x为2至4，R’和R”独立地选自氢，烷基，取代的烷基，芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，取代的杂环烷基，和二烷基；
R2和R3独立地选自卤素，-R5，-OR5，-SR5，和-NR5R6；
R4选自-CH2R7，-C(＝O)NR5R6，-C(＝O)OR7，-C(＝O)R7，和R8；
R5和R6独立地选自氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；或R5和R6一起与它们连接的氮原子形成杂环或取代的杂环；
R7选自烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；和
R8选自氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；条件是：
当R1为苯基，R2和R3均为氢，X为氧，和Y为-C(=O)OCH2CH3时，R4不为氢或甲基；
当R1为甲基，R2和R3均为氢，X为氧，和Y为-NO2时，R4不为甲基；
当R1为氢或甲基，R2为7-氯，R3为氢，X为氧和Y为-C(＝O)OCH2CH3时，R4不为-CH2CH2OH；和
当R1为甲基，R2为氢或7-氯，R3为氢，X为氧，和Y为-C(＝O)OCH2CH3时，R4不为甲基。
60.一种治疗温血动物炎症的方法，包括给所述动物施用有效量的权利要求1的化合物。
61.一种治疗温血动物脓毒性休克的方法，包括给所述动物施用有效量的权利要求1的化合物。
62.一种治疗温血动物关节炎的方法，包括给所述动物施用有效量的权利要求1的化合物。
63.一种治疗温血动物癌症的方法，包括给所述动物施用有效量的权利要求1的化合物。
64.一种治疗温血动物急性呼吸窘迫综合征的方法，包括给所述动物施用有效量的权利要求1的化合物。
65.一种治疗温血动物炎性疾病的方法，包括给所述动物施用有效量的权利要求1的化合物。
66.根据权利要求65的方法，其中炎性疾病选自类风湿性关节炎，骨关节炎，炎症性肠病，和哮喘。
67.一种治疗温血动物自身免疫性疾病的方法，包括给所述动物施用有效量的权利要求1的化合物。
68.根据权利要求67的方法，其中自身免疫性疾病选自糖尿病，哮喘，和多发性硬化。
69.一种抑制温血动物免疫反应的方法，包括给所述动物施用有效量的权利要求1的化合物。
70.一种减少温血动物血管生成的方法，包括给所述动物施用有效量的权利要求1的化合物。
71.一种治疗温血动物与过量糖皮质激素水平相关的疾病的方法，包括给所述动物施用有效量的权利要求1的化合物。
72.根据权利要求71的方法，其中所述疾病是库欣病。
73.一种检测调节MIF活性的物质的方法，包括将含有MIF的样品与一种物质接触；通过测定抗体与M IF结合的能力差异，检测该物质调节MIF的能力。
74.根据权利要求73的方法，其中所述抗体为单克隆抗体。
75.根据权利要求73的方法，其中MIF包括其融合蛋白，突变体或变异体。
76.一种用于抗体结合作为代用标记的、筛选调节多肽活性的物质的方法，包括：
使所述多肽与可能的调节物质接触，
使该多肽与单克隆抗体接触，和
检测多肽相对于对照的活性差异。
77.一种具有如下结构的化合物：
或其立体异构体，前药，或药用盐，其中：
X为氧或硫；
Y选自-NO，-NO2，-C(＝O)R5，-C(＝O)OR5，-C(＝O)NR5R6，-NR5C(＝O)R5，-NR5SO2R5，和-S(O)mR5；
Z为-CH2-或-C(=O)-；
m为0，1，或2；
n为0，1，或2，条件是当n为0时，Z为-C(＝O)-；
R1选自氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基或取代的杂环烷基，二烷基，和R’R”N(CH2)x-，其中x为2至4，R’和R”独立地选自氢，烷基，取代的烷基，芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，取代的杂环烷基，和二烷基；
R2和R3独立地选自卤素，-R5，-OR5，-SR5，和-NR5R6；
R4选自-CH2R7，-C(＝O)NR5R6，-C(＝O)OR7，-C(＝O)R7，和R8；
R5和R6独立地选自氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；或R5和R6一起与它们连接的氮原子形成杂环或取代的杂环；
R7选自烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；和
R8选自氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；条件是：
当R1为苯基，R2和R3均为氢，X为氧，和Y为-C(＝O)OCH2CH3时，R4不为氢或甲基；
当R1为甲基，R2和R3均为氢，X为氧，和Y为-NO2时，R4不为甲基；
当R1为氢或甲基，R2为7-氯，R3为氢，X为氧和Y为-C(＝O)OCH2CH3时，R4不为-CH2CH2OH；和
当R1为甲基，R2为氢或7-氯，R3为氢，X为氧，和Y为-C(＝O)OCH2CH3时，R4不为甲基。
78.一种具有如下结构的化合物：
或其立体异构体，前药，或药用盐，其中：
X为氧或硫；
Y选自-NO，-NO2，-C(＝O)R5，-C(＝O)OR5，-C(＝O)NR5R6，-NR5C(＝O)R5，-NR5SO2R5，和-S(O)mR5；
Z为-CH2-；
m为0，1，或2；
n为1；
R1选自氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基或取代的杂环烷基，二烷基，和R’R”N(CH2)x-，其中x为2至4，R’和R”独立地选自氢，烷基，取代的烷基，芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，取代的杂环烷基，和二烷基；
R2和R3独立地选自卤素，-R5，-OR5，-SR5，和-NR5R6；
R4选自-CH2R7，-C(＝O)NR5R6，-C(＝O)OR7，-C(＝O)R7，和R8；
R5和R6独立地选自氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；或R5和R6一起与它们连接的氮原子形成杂环或取代的杂环；
R7选自烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；和
R8选自氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；
条件是：
当R1为苯基，R2和R3均为氢，X为氧，和Y为-C(＝O)OCH2CH3时，R4不为氢或甲基；
当R1为甲基，R2和R3均为氢，X为氧，和Y为-NO2时，R4不为甲基；
当R1为氢或甲基，R2为7-氯，R3为氢，X为氧和Y为-C(＝O)OCH2CH3时，R4不为-CH2CH2OH；和
当R1为甲基，R2为氢或7-氯，R3为氢，X为氧，和Y为-C(＝O)OCH2CH3时，R4不为甲基。
79.根据权利要求78的化合物，其中R1为-NCH2CH2CH2N(CH3)2。
80.根据权利要求的化合物78，其中X为氧。
81.根据权利要求的化合物78，其中Y为-C(＝O)OCH2CH3。
82.根据权利要求的化合物78，其中Y为-NO2。
83.根据权利要求的化合物78，其中R4为 或
Figure A028105010024C2
84.根据权利要求的化合物78，其中R4为 或
Figure A028105010024C4
85.一种具有如下结构的化合物：
Figure A028105010024C5
或其立体异构体，前药，或药用盐，其中：
X为氧或硫；
Y为-C(＝O)OCH2CH3；
Z为-CH2-或-C(＝O)-；
m为0，1，或2；
n为0，1，或2，条件是当n为0时，Z为-C(＝O)-；
R1选自氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基或取代的杂环烷基，二烷基，和R’R”N(CH2)x-，其中x为2至4，R’和R”独立地选自氢，烷基，取代的烷基，芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，取代的杂环烷基，和二烷基；
R2和R3独立地选自卤素，-R5，-OR5，-SR5，和-NR5R6；
R4选自-CH2R7，-C(＝O)NR5R6，-C(＝O)OR7，-C(＝O)R7，和R8；
R5和R6独立地选自氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；或R5和R6一起与它们连接的氮原子形成杂环或取代的杂环；
R7选自烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；和
R8选自氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；
条件是：
当R1为苯基，R2和R3均为氢，和X为氧时，R4不为氢或甲基；
当R1为氢或甲基，R2为7-氯，R3为氢，和X为氧时，R4不为-CH2CHXOH；和
当R1为甲基，R2为氢或7-氯，R3为氢，和X为氧时，R4不为甲基。
86.根据权利要求85的化合物，其中X为氧。
87.根据权利要求85的化合物，其中Z为-CH2-和n为1。
88.根据权利要求的化合物85，其中R4为
Figure A028105010025C1
或
Figure A028105010025C2
89.根据权利要求的化合物85，其中R4为
Figure A028105010025C3
或
Figure A028105010025C4
90.一种具有如下结构的化合物：
或其立体异构体，前药，或药用盐，其中：
X为氧或硫；
Y选自-NO，-NO2，-C(＝O)R5，-C(＝O)OR5，-C(＝O)NR5R6，-NR5C(＝O)R5，-NR5SO2R5，和-S(O)mR5；
Z为-CH2-或-C(＝O)-；
m为0，1，或2；
n为0，1，或2，条件是当n为0时，Z为-C(＝O)-；
R1为-NCH2CH2CH2N(CH3)2；
R2和R3独立地选自卤素，-R5，-OR5，-SR5，和-NR5R6；
R4选自-CH2R7，-C(＝O)NR5R6，-C(＝O)OR7，-C(＝O)R7，和R8；
R5和R6独立地选自氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；或R5和R6一起与它们连接的氮原子形成杂环或取代的杂环；
R7选自烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；和
R8选自氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基。
91.根据权利要求91的化合物，其中Z为-CH2-和n为1。
92.根据权利要求91的化合物，其中Y为-C(=O)OCH2CH3。
93.根据权利要求91的化合物，其中Y为-NO2。
94.根据权利要求的化合物91，其中R4为
Figure A028105010026C2
或
Figure A028105010026C3
95.根据权利要求的化合物91，其中R4为
Figure A028105010027C1
或
96.一种具有如下结构的化合物：
Figure A028105010027C3
或其立体异构体，前药，或药用盐，其中：
X为氧或硫；
Y为-NO2；
Z为-CH2-或-C(＝O)-；
m为0，1，或2；
n为0，1，或2，条件是当n为0时，Z为-C(＝O)-；
R1选自氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基或取代的杂环烷基，二烷基，和R’R”N(CH2)x-，其中x为2至4，R’和R”独立地选自氢，烷基，取代的烷基，芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，取代的杂环烷基，和二烷基；
R2和R3独立地选自卤素，-R5，-OR5，-SR5，和-NR5R6；
R4选自-CH2R7，-C(＝O)NR5R6，-C(=O)OR7，-C(＝O)R7，和R8；
R5和R6独立地选自氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；或R5和R6一起与它们连接的氮原子形成杂环或取代的杂环；
R7选自烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；和
R8选自氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；
条件是当R1为甲基，R2和R3均为氢，和X为氧时，R4不为甲基。
97.根据权利要求96的化合物，其中R1为-NCH2CH2CH2N(CH3)2。
98.根据权利要求96的化合物，其中X为氧。
99.根据权利要求96的化合物，其中Z为-CH2-和n为1。
100.根据权利要求的化合物96，其中R4为
Figure A028105010028C1
或
101.根据权利要求的化合物96，其中R4为
Figure A028105010028C3
或
Figure A028105010028C4
102.一种具有如下结构的化合物：
Figure A028105010028C5
或其立体异构体，前药，或药用盐，其中：
X为氧或硫；
Y选自-NO，-NO2，-C(-O)R5，-C(＝O)OR5，-C(＝O)NR5R6，-NR5C(＝O)R5，-NR5SO2R5，和-S(O)mR5；
Z为-CH2-或-C(＝O)-；
m为0，1，或2；
n为0，1，或2，条件是当n为0时，Z为-C(＝O)-；
R1选自氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基或取代的杂环烷基，二烷基，和R’R”N(CH2)x-，其中x为2至4，R’和R”独立地选自氢，烷基，取代的烷基，芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，取代的杂环烷基，和二烷基；
R2和R3独立地选自卤素，-R5，-OR5，-SR5，和-NR5R6；R4选自
Figure A028105010029C1
和
R5和R6独立地选自氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；或R5和R6一起与它们连接的氮原子形成杂环或取代的杂环；
R7选自烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；和
R8选自氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基。
103.根据权利要求67的化合物，其中R1为-NCH2CH2CH2N(CH3)2。
104.根据权利要求2的化合物，其中X为氧。
105.根据权利要求8的化合物，其中Z为-CH2-和n为1。
106.根据权利要求67的化合物，其中Y为-C(＝O)OCH2CH3。
107.根据权利要求2的化合物，其中Y为-NO2。
108.根据权利要求92的化合物，其中所述结构包括：
109.根据权利要求92的化合物，其中所述结构包括：
Figure A028105010030C1
110.根据权利要求92的化合物，其中所述结构包括：
111.根据权利要求92的化合物，其中所述结构包括：
112.根据权利要求92的化合物，其中所述结构包括：
Figure A028105010031C2
113.根据权利要求92的化合物，其中所述结构包括：
114.根据权利要求92的化合物，其中所述结构包括：
Figure A028105010032C2
115.根据权利要求92的化合物，其中所述结构包括：
Figure A028105010033C1
116.根据权利要求92的化合物，其中所述结构包括：
Figure A028105010033C2
117.根据权利要求92的化合物，其中所述结构包括：
Figure A028105010034C1
118.根据权利要求92的化合物，其中所述结构包括：
Figure A028105010034C2
119.根据权利要求92的化合物，其中所述结构包括：
120.根据权利要求92的化合物，其中所述结构包括：
Figure A028105010035C1
121.根据权利要求92的化合物，其中所述结构包括：
Figure A028105010035C2
122.根据权利要求92的化合物，其中所述结构包括：
Figure A028105010036C1
123.根据权利要求92的化合物，其中所述结构包括：
Figure A028105010036C2
124.根据权利要求93的化合物，其中所述结构包括：
Figure A028105010037C1
125.根据权利要求107的化合物，其中所述结构包括：
126.一种降低所需患者MIF活性的方法，包括给该患者施用有效量的具有如下结构的化合物：
Figure A028105010037C3
或其立体异构体，前药，或药用盐，其中：
X为氧或硫；
Y选自-NO，-NO2，-C(＝O)R5，-C(＝O)OR5，-C(＝O)NR5R6，-NR5C(＝O)R5，-NR5SO2R5，和-S(O)mR5；
Z为-CH2-或-C(＝O)-；
m为0，1，或2；
n为0，1，或2，条件是当n为0时，Z为-C(＝O)-；
R1选自氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基或取代的杂环烷基，二烷基，和R’R”N(CH2)x-，其中x为2至4，R’和R”独立地选自氢，烷基，取代的烷基，芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，取代的杂环烷基，和二烷基；
R2和R3独立地选自卤素，-R5，-OR5，-SR5，和-NR5R6；
R4选自-CH2R7，-C(＝O)NR5R6，-C(＝O)OR7，-C(＝O)R7，和R8；
R5和R6独立地选自氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；或R5和R6一起与它们连接的氮原子形成杂环或取代的杂环；
R7选自烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；和
R8选自氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；
条件是：
当R1为苯基，R2和R3均为氢，X为氧，和Y为-C(＝O)OCH2CH3时，R4不为氢或甲基；
当R1为甲基，R2和R3均为氢，X为氧，和Y为-NO2时，R4不为甲基；
当R1为氢或甲基，R2为7-氯，R3为氢，X为氧和Y为-C(＝O)OCH2CH3时，R4不为-CH2CH2OH；和
当R1为甲基，R2为氢或7-氯，R3为氢，X为氧，和Y为-C(＝O)OCH2CH3时，R4不为甲基。
127.一种治疗温血动物炎症的方法，包括给所述动物施用有效量的权利要求77的化合物。
128.一种治疗温血动物脓毒性休克的方法，包括给所述动物施用有效量的权利要求77的化合物。
129.一种治疗温血动物关节炎的方法，包括给所述动物施用有效量的权利要求77的化合物。
130.一种治疗温血动物癌症的方法，包括给所述动物施用有效量的权利要求77的化合物。
131.一种治疗温血动物急性呼吸窘迫综合征的方法，包括给所述动物施用有效量的权利要求77的化合物。
132.一种治疗温血动物炎性疾病的方法，包括给所述动物施用有效量的权利要求77的化合物。
133.根据权利要求132的方法，其中炎性疾病选自类风湿性关节炎，骨关节炎，炎性肠病，和哮喘。
134.一种治疗温血动物自身免疫性疾病的方法，包括给所述动物施用有效量的权利要求77的化合物。
135.根据权利要求134的方法，其中自身免疫性疾病选自糖尿病，哮喘，和多发性硬化。
136.一种抑制温血动物免疫反应的方法，包括给所述动物施用有效量的权利要求77的化合物。
137.一种减少温血动物血管生成的方法，包括给所述动物施用有效量的权利要求77的化合物。
138.一种治疗温血动物与过量糖皮质激素水平相关的疾病的方法，包括给所述动物施用有效量的权利要求77的化合物。
139.根据权利要求138的方法，其中所述疾病是库欣病。
140.一种化合物的制备方法，包括以下步骤：
使式I的化合物：
Figure A028105010040C1
(式I)
与式II的化合物：
(式II)
反应，得到式III的化合物：
其中R3选自R4为氨基，取代的氨基氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；和
使式III的化合物与包含X-R4的化合物反应，其中X选自Cl，Br，和I，R4选自氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基或取代的杂环烷基，二烷基，和氨基烷基R’R”N(CH2)x-，其中R’和R”独立地选自氢，烷基，取代的烷基，芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，取代的杂环烷基，和二烷基，其中x为2至4，由此得到式IV的化合物：
其中式IV的化合物适于用作MIF抑制剂。
141.根据权利要求140的方法，其中R4为 或
Figure A028105010041C3
142.根据权利要求140的方法，其中R4为 或
Figure A028105010041C5
143.一种化合物的制备方法，包括以下步骤：
使式AI的化合物：
(式AI)
与式II的化合物：
Figure A028105010041C7
(式II)
反应，得到式AIII的化合物：
Figure A028105010042C1
(式AIII)
其中R3选自R4为氨基，取代的氨基氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，和取代的杂环烷基；和
使式AIII的化合物与包含X-R4的化合物反应，其中X选自Cl，Br，和I，R4选自氢，烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基或取代的杂环烷基，二烷基，和氨基烷基R’R”N(CH2)x-，其中R’和R”独立地选自氢，烷基，取代的烷基，芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，杂环，取代的杂环，杂环烷基，取代的杂环烷基，和二烷基，其中x为2至4，得到式AIV的化合物：
(式AIV)
其中式IV的化合物适于用作MIF抑制剂。
144.根据权利要求143的方法，其中R4为 或
Figure A028105010043C2
145.根据权利要求143的方法，其中R4为
Figure A028105010043C3
或
146.一种治疗其中MIF呈病理性的疾病或病症的药物组合物，该药物组合物包含一种MIF抑制化合物和一种治疗疾病或病症的药物，其中所述药物不具有可测量的MIF抑制活性。
147.一种治疗其中MIF呈病理性的疾病或病症的药物组合物，该药物组合物包含一种MIF抑制化合物和一种选自非甾类抗炎药，抗传染药，β兴奋剂，甾类，抗组胺药，抗癌药，哮喘药，脓毒病药，关节炎药，和免疫抑制剂。
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WO (1) WO2002094203A2 (zh)
ZA (1) ZA200309738B (zh)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN100457895C (zh) * 2006-05-24 2009-02-04 中国科学院生物物理研究所 鼠抗人巨噬细胞迁移抑制因子单克隆抗体及其应用
CN108137505A (zh) * 2015-07-17 2018-06-08 富士胶片株式会社 含氮杂环化合物
WO2019141153A1 (zh) * 2018-01-17 2019-07-25 杭州阿诺生物医药科技有限公司 吲哚胺2,3-双加氧酶抑制剂及其用途
CN113121435A (zh) * 2021-04-20 2021-07-16 辽宁大学 一种2,4-二氯喹啉类化合物的合成方法

Families Citing this family (42)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DK1383919T3 (da) 2001-03-29 2010-11-08 Cytokine Pharmasciences Inc Fremgangsmåder og sammensætninger til anvendelse af MHC klasse II-invariant kædepolypeptid som en receptor for makrofag migrationsinhiberede faktor
MY140679A (en) * 2001-05-24 2010-01-15 Avanir Pharmaceuticals Inhibitors of macrohage migration inhibitory factor and methods for identifying the same
US20030195192A1 (en) * 2002-04-05 2003-10-16 Fortuna Haviv Nicotinamides having antiangiogenic activity
US20040014744A1 (en) * 2002-04-05 2004-01-22 Fortuna Haviv Substituted pyridines having antiangiogenic activity
EP1500402A4 (en) 2002-04-26 2009-12-30 Takeda Pharmaceutical INHIBITOR OF CELL DEATH
EP1534681A1 (en) 2002-06-27 2005-06-01 Schering Aktiengesellschaft Substituted quinoline ccr5 receptor antagonists
TW200418829A (en) 2003-02-14 2004-10-01 Avanir Pharmaceutics Inhibitors of macrophage migration inhibitory factor and methods for identifying the same
TWI328009B (en) 2003-05-21 2010-08-01 Glaxo Group Ltd Quinoline derivatives as phosphodiesterase inhibitors
GB0316915D0 (en) 2003-07-18 2003-08-20 Glaxo Group Ltd Compounds
US7364869B2 (en) * 2003-07-29 2008-04-29 The J. David Gladstone Institutes Method of detecting antigen-specific T lymphocytes
MXJL06000006A (es) * 2003-08-22 2006-05-04 Avanir Pharmaceuticals Derivados de naftiridina sustituidos como inhibidores del factor inhibidor de la migracion de macrofagos y su uso en el tratamiento de enfermedades en el hombre.
US7592466B2 (en) 2003-10-09 2009-09-22 Abbott Laboratories Ureas having antiangiogenic activity
AU2011265309B2 (en) * 2003-11-21 2014-06-05 Array Biopharma, Inc. AKT protein kinase inhibitors
CN1882347A (zh) 2003-11-21 2006-12-20 阿雷生物药品公司 Akt蛋白激酶抑制剂
AU2005228426B2 (en) * 2004-03-29 2010-07-15 North Shore-Long Island Jewish Research Institute Treatment of type 1 diabetes with inhibitors of macrophage migration inhibitory factor
DE102004029573A1 (de) * 2004-06-18 2005-12-29 Gambro Lundia Ab MIF-Adsorbent
WO2006031199A1 (en) * 2004-09-17 2006-03-23 Alex Poh Teck Choong System and method for batch conversion of rfid tag to rfid label
CA2600175A1 (en) * 2005-03-24 2006-03-20 Avanir Pharmaceuticals Thienopyridinone derivatives as macrophage migration inhibitory factor inhibitors
PT1928438E (pt) * 2005-09-26 2013-04-03 Avigen Inc Método para tratamento de dependências de drogas e comportamentos
GB0605689D0 (en) * 2006-03-21 2006-05-03 Novartis Ag Organic compounds
AU2007230948B2 (en) 2006-03-24 2012-06-28 The Feinstein Institute For Medical Research Modified macrophage migration inhibitory factor inhibitors
US20070281924A1 (en) * 2006-05-31 2007-12-06 Gaeta Federico C MIF inhibitors for treating neuropathic pain and associated syndromes
CA2653345A1 (en) * 2006-05-31 2007-12-13 Avigen, Inc. Ibudilast for inhibiting macrophage migration inhibitory factor (mif) activity
US7845914B2 (en) * 2007-02-15 2010-12-07 Deere & Company Self-priming fast fill sprayer pump system
US9272034B2 (en) * 2007-10-04 2016-03-01 The Regents Of The University Of California Treatment of conditions related to shock
US9643922B2 (en) 2008-08-18 2017-05-09 Yale University MIF modulators
US9540322B2 (en) 2008-08-18 2017-01-10 Yale University MIF modulators
EP2198879A1 (en) 2008-12-11 2010-06-23 Institut Curie CD74 modulator agent for regulating dendritic cell migration and device for studying the motility capacity of a cell
US9050334B2 (en) 2010-07-16 2015-06-09 Innov88 Llc MIF inhibitors and their uses
WO2012031383A1 (zh) * 2010-09-06 2012-03-15 中国科学院广州生物医药与健康研究院 酰胺类化合物
EP2621521A4 (en) 2010-10-02 2014-04-23 Univ California MINIMAL REDUCTION OF INTESTINAL DYSFUNCTION
EP2748613B1 (en) 2011-10-07 2021-05-05 Baxalta GmbH Oxmif as a diagnostic marker
KR20130118612A (ko) * 2012-04-20 2013-10-30 (주)네오믹스 신규한 아미노피리딘 유도체 및 이의 용도
DK2844250T3 (en) 2012-05-01 2018-01-08 Translatum Medicus Inc METHODS OF TREATMENT AND DIAGNOSTICATION OF EYE DISEASES CONCERNING BLINDNESS
US9549988B2 (en) 2013-06-09 2017-01-24 RJS Biologics Pharmaceutical compounds targeted by MIF affinity-tethered moieties
US11397182B2 (en) 2014-10-07 2022-07-26 Cornell University Methods for prognosing and preventing metastatic liver disease
CN112368011A (zh) 2018-04-11 2021-02-12 俄亥俄州创新基金会 缓释微粒用于眼用药物递送的方法和组合物
WO2019197842A1 (en) 2018-04-13 2019-10-17 Cancer Research Technology Limited Bcl6 inhibitors
DK3814347T3 (da) 2018-06-27 2023-08-07 Bristol Myers Squibb Co Naphthyridinonforbindelse, der er nyttige som t-celleaktivatorer
RS64641B1 (sr) 2018-06-27 2023-10-31 Bristol Myers Squibb Co Supstituisana jedinjenja naftiridinona korisna kao aktivatori t ćelija
AR119821A1 (es) 2019-08-28 2022-01-12 Bristol Myers Squibb Co Compuestos de piridopirimidinonilo sustituidos útiles como activadores de células t
AR120823A1 (es) 2019-12-23 2022-03-23 Bristol Myers Squibb Co Compuestos bicíclicos sustituidos útiles como activadores de células t

Family Cites Families (59)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4324893A (en) 1979-04-18 1982-04-13 American Home Products Corporation 4-Amino-3-carboxy or cyano-1,2-dihydro-2-oxo-1,8-naphthyridine derivatives
US4299814A (en) 1979-05-25 1981-11-10 Monsanto Company Radioimmunoassay of MIF
US4284768A (en) * 1980-07-02 1981-08-18 American Home Products Corporation 1,2-Dihydro-4-amino-2-oxo-3-quinoline-carboxylic acid derivatives
DK79985A (da) 1984-02-22 1985-08-23 Wellcome Found Kloning af dna for protozoelle antigener og dets anvendelse
US5700447A (en) 1992-05-21 1997-12-23 The Picowder Institute For Medical Research Methods and materials for the diagnosis and treatment of conditions such as stroke
US5733933A (en) 1984-03-19 1998-03-31 The Picower Institute For Medical Research Methods and materials for the diagnosis and treatment of conditions such as stroke
US5801200A (en) 1984-03-19 1998-09-01 The Picower Institute For Medical Research Methods and materials for the diagnosis and treatment of conditions such as stroke
US5869534A (en) 1992-05-21 1999-02-09 The Picower Institute For Medical Research Glycosylation of lipids and lipid-containing particles, and diagnostic and therapeutic methods and materials derived therefrom
US5733524A (en) 1984-03-19 1998-03-31 The Picower Institute For Medical Research Methods and materials for the diagnosis and treatment of conditions such as stroke
AU592753B2 (en) 1984-05-24 1990-01-25 Ciba-Geigy Ag Lymphokine in pure foem, novel monoclonal antibodies hybridoma cell lines, processes and applications
JPH0672158B2 (ja) 1984-05-24 1994-09-14 チバ−ガイギ− アクチエンゲゼルシヤフト 精製されたヒトマクロファージ遊走阻止因子
US4708937A (en) 1984-10-15 1987-11-24 Brigham & Women's Hospital Purified migration inhibitory factor also having colony stimulating factor activity
US4683202A (en) 1985-03-28 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying nucleic acid sequences
GB8602626D0 (en) 1986-02-04 1986-03-12 Ciba Geigy Ag Neurite-promoting factor
DE3789413T2 (de) 1986-10-03 1994-07-28 Ciba Geigy Ag Lymphokin-ähnliche Peptide.
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
WO1990011301A1 (en) 1989-03-17 1990-10-04 Genetics Institute, Inc. Human macrophage migration inhibitory factor
FI82144C (fi) 1989-03-22 1991-01-10 Wallac Oy Foerfarande foer samtidig bestaemning av flera ligander.
GB8915414D0 (en) 1989-07-05 1989-08-23 Ciba Geigy Novel cytokines
KR0166088B1 (ko) 1990-01-23 1999-01-15 . 수용해도가 증가된 시클로덱스트린 유도체 및 이의 용도
US5328990A (en) 1991-04-26 1994-07-12 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Isolation of macrophage migration inhibition factor from ocular lens
CA2054602C (en) 1991-10-31 2003-04-22 Anthony Pawson Method for assaying for a substance that affects an sh2-phosphorylated ligand regulatory system
US5624804A (en) 1991-12-20 1997-04-29 The Rockefeller University Immunochemical detection of In vivo advanced glycosylation end products
US6774227B1 (en) 1993-05-17 2004-08-10 Cytokine Pharmasciences, Inc. Therapeutic uses of factors which inhibit or neutralize MIF activity
CA2163211C (en) 1993-05-17 2012-05-08 Richard J. Bucala Inhibition of migration inhibitory factor in the treatment of diseases involving cytokine-mediated toxicity
US6030615A (en) 1993-05-17 2000-02-29 The Picower Institute For Medical Research Combination method for treating diseases caused by cytokine-mediated toxicity
US5650295A (en) 1995-06-02 1997-07-22 Human Genone Sciences, Inc. Macrophage migration inhibitory factor-3
US6080408A (en) * 1994-08-22 2000-06-27 Connaught Laboratories Limited Human immunodeficiency virus type 1 nucleic acids devoid of long terminal repeats capable of encoding for non-infectious, immunogenic, retrovirus-like particles
SI9400363A (en) 1994-09-19 1996-08-31 Mozetic Francky Bojana Human macrophage migration inhibitory factor of nonlymphoid origin, expression of mif in e. coli and purification of recombinant protein
US5955203A (en) 1994-10-05 1999-09-21 Simpson Timber Company Resin-coated overlays for solid substrates
WO1996015242A2 (en) 1994-11-16 1996-05-23 The Government Of The United States Of America, Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Methods for inhibiting cell proliferation by inhibiting the mitogenic activity of macrophage migration inhibitory factor
DE19601697A1 (de) 1996-01-18 1997-07-24 Wacker Chemie Gmbh Redispergierbare Tackifierpulver
US6492428B1 (en) 2000-07-26 2002-12-10 The Picower Institute For Medical Research Compounds having MIF antagonist activity
US6420188B1 (en) 1996-02-16 2002-07-16 The Picower Institute For Medical Research Screening assay for the identification of inhibitors for macrophage migration inhibitory factor
WO1997039326A2 (en) 1996-04-18 1997-10-23 Ariad Pharmaceuticals, Inc. In vitro fluorescence polarization assay
US5883224A (en) 1996-04-19 1999-03-16 Cytokine Sciences, Inc. Characterization of transfer factors and methods of use
US5919815A (en) 1996-05-22 1999-07-06 Neuromedica, Inc. Taxane compounds and compositions
JPH1171351A (ja) * 1997-08-29 1999-03-16 Ss Pharmaceut Co Ltd 置換キノロン誘導体及びこれを含有する医薬
US6413939B1 (en) 1997-10-31 2002-07-02 The Picower Institute For Medical Research Inducible phosphofructokinase and the Warburg effect
US6238874B1 (en) 1998-07-28 2001-05-29 Biometric Imaging, Inc. Cell motility assay
DE69942861D1 (de) 1998-08-07 2010-11-25 Immunex Corp Ldcam genannte moleküle
US6214343B1 (en) 1999-05-24 2001-04-10 Ophidian Pharmaceuticals, Inc. Prevention and treatment of necrotizing enterocolitis
AU1235601A (en) * 1999-10-29 2001-05-14 Cytokine Pharmasciences, Inc. Compounds having mif antagonist activity
CN1842346A (zh) 2001-01-12 2006-10-04 塞托凯恩药物科学公司 由巨噬细胞迁移抑制因子调节细胞毒性淋巴细胞反应
DK1383919T3 (da) 2001-03-29 2010-11-08 Cytokine Pharmasciences Inc Fremgangsmåder og sammensætninger til anvendelse af MHC klasse II-invariant kædepolypeptid som en receptor for makrofag migrationsinhiberede faktor
MY140679A (en) * 2001-05-24 2010-01-15 Avanir Pharmaceuticals Inhibitors of macrohage migration inhibitory factor and methods for identifying the same
EP1424336A4 (en) 2001-09-03 2004-11-10 Takeda Chemical Industries Ltd 1,3-BENZOTHIAZINE DERIVATIVES AND THEIR USE
FR2829491B1 (fr) 2001-09-12 2005-09-30 Diverchim Procede de preparation des hydroxy-acides gras insatures et de leurs esters, leur utilisation comme agent anti-collagenase
AU2002365941A1 (en) 2001-12-05 2003-09-02 North Shore-Long Island Jewish Research Institute Methods of diagnosis, monitoring and treatment of fertility
US20040019921A1 (en) 2001-12-19 2004-01-29 Fingerle-Rowson Gunter R. Non-human mammal with disrupted or modified MIF gene, and uses thereof
EP1500402A4 (en) 2002-04-26 2009-12-30 Takeda Pharmaceutical INHIBITOR OF CELL DEATH
EP2319838A1 (en) 2002-06-07 2011-05-11 Cortical Pty Ltd Therapeutic Molecules and Methods-1
EP1549598A4 (en) 2002-06-07 2008-01-23 Cortical Pty Ltd naphthalene derivatives; WHICH LIMIT THE CYTOKINE OR BIOLOGICAL ACTIVITY OF THE MIGRATION INHIBITORY FACTOR (MIF) OF MACROPHAGES
JP2006502236A (ja) 2002-09-18 2006-01-19 ファイザー・プロダクツ・インク 形質転換成長因子（ｔｇｆ）阻害剤としてのトリアゾール誘導体
US7659267B2 (en) 2002-12-05 2010-02-09 Takeda Pharmaceutical Company Limited 1,3-Benzothiazinone derivatives, process for producing the same use thereof
TW200418829A (en) 2003-02-14 2004-10-01 Avanir Pharmaceutics Inhibitors of macrophage migration inhibitory factor and methods for identifying the same
US7361474B2 (en) 2003-02-24 2008-04-22 United States Of America As Represented By The Department Of Veterans Affairs Serum macrophage migration inhibitory factor (MIF) as marker for prostate cancer
MXJL06000006A (es) 2003-08-22 2006-05-04 Avanir Pharmaceuticals Derivados de naftiridina sustituidos como inhibidores del factor inhibidor de la migracion de macrofagos y su uso en el tratamiento de enfermedades en el hombre.
CA2600175A1 (en) * 2005-03-24 2006-03-20 Avanir Pharmaceuticals Thienopyridinone derivatives as macrophage migration inhibitory factor inhibitors

Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN100457895C (zh) * 2006-05-24 2009-02-04 中国科学院生物物理研究所 鼠抗人巨噬细胞迁移抑制因子单克隆抗体及其应用
CN108137505A (zh) * 2015-07-17 2018-06-08 富士胶片株式会社 含氮杂环化合物
WO2019141153A1 (zh) * 2018-01-17 2019-07-25 杭州阿诺生物医药科技有限公司 吲哚胺2,3-双加氧酶抑制剂及其用途
CN111406050A (zh) * 2018-01-17 2020-07-10 杭州阿诺生物医药科技有限公司 吲哚胺2,3-双加氧酶抑制剂及其用途
CN111518076A (zh) * 2018-01-17 2020-08-11 杭州阿诺生物医药科技有限公司 具有吲哚胺-2,3-双加氧酶(ido)抑制剂的制备方法
CN111518076B (zh) * 2018-01-17 2021-06-01 杭州阿诺生物医药科技有限公司 具有吲哚胺-2,3-双加氧酶(ido)抑制剂的制备方法
CN111406050B (zh) * 2018-01-17 2023-02-03 厦门宝太生物科技股份有限公司 吲哚胺2,3-双加氧酶抑制剂及其用途
CN113121435A (zh) * 2021-04-20 2021-07-16 辽宁大学 一种2,4-二氯喹啉类化合物的合成方法

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