具体实施例
设计和反应实例
本发明的化合物可参照下面说明通过所知步骤合成得到。所有购买的溶剂和试剂都未经过处理而直接使用。所有合成的化合物可以通过,但不限于以下方法分析验证:LCMS(liquid chromatography mass spectrometry,液相质谱)和NMR(nuclear magneticresonance,核磁共振)。核磁共振(NMR)由Bruker AVANCE-500核磁仪测定,测定时所用的氘代溶剂为氘代二甲基亚砜(d6-DMSO)、氘代氯仿(CDCl3),四甲基硅烷(TMS)作为内标物。以下缩写表示各种类型的分裂峰:单峰(s)、双重峰(d)、三重峰(t)、多重峰(m)、宽峰(br)。质谱(MS)的测定采用Thermo Fisher-MSQ Plus液质联用仪,手性化合物的拆分用大赛璐的
AD-H手性柱(0.46cm I.D.×15cm L,HEP:ETOH(0.1%DEA)=60:40(V/V))分离。
本发明的化合物可参照下面来制备。
通用路线一:
中间体F的合成(顺式和反式混合物、外消旋化合物)
第一步:将4-氧代环己烷乙酸乙酯(2.0g,10.86mmol)溶于60mL超干四氢呋喃中,在氮气氛和-78℃下向该溶液中滴加双(三甲基硅基)氨基钠(2mol/L四氢呋喃溶液)(6.5mL,13.03mmol)。反应液在该温度下搅拌1小时。然后加入N-苯基双(三氟甲烷磺酰)亚胺(4.65g,13.03mmol)的四氢呋喃(20mL)溶液。滴加完毕后反应混合物在室温下继续搅拌过夜直至TLC检测反应原料消耗完全。反应液用5mL硫酸氢钾水溶液淬灭,过滤除去固体,浓缩滤液。向残余液中加入50mL甲基叔丁基醚,有机层用1.0mol/L氢氧化钠溶液洗(3x20mL),20mL饱和食盐水洗。有机层用无水硫酸钠干燥,过滤,浓缩得到中间体A(3.12g),橘红色油状液体,收率91%。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ5.74–5.70(m,1H),4.15(q,J=7.0Hz,2H),2.48–2.40(m,1H),2.38–2.32(m,2H),2.30(d,J=7.0Hz,2H),2.18–2.10(m,1H),1.97–1.89(m,2H),1.57–1.48(m,1H),1.27(t,J=7.0Hz,3H).
第二步:将中间体A(3.12g,9.86mmol)溶于15mL二氧六环中,依次加入联硼酸频那醇酯(3.26g,12.82mmol),醋酸钾(2.90g,29.59mmol),溴化钠(406mg,3.95mmol)和Pd(dppf)Cl2(722mg,0.98mmol)。反应混合物在氮气氛下回流反应过夜。然后蒸干反应溶剂二氧六环,加入乙酸乙酯,用硅藻土过滤,滤液浓缩之后用快速过柱机分离得到中间体B(1.66g),无色液体,收率57%。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.54–6.48(m,1H),4.12(q,J=6.5Hz,2H),2.30–2.02(m,7H),1.84–1.72(m,2H),1.27–1.23(m,15H).
第三步:将中间体B(1.66g,5.64mmol)溶于12mL/3mL二氧六环/水中,依次加入4-氯-6-氟喹啉(860mg,4.74mmol),碳酸钾(1.96g,14.21mmol)和Pd(PPh3)4(274mg,0.24mmol)。反应混合物在氮气氛下回流反应过夜。然后浓缩反应液,加入50mL水稀释,用乙酸乙酯萃取(3x50 mL),有机相浓缩之后用快速过柱机分离得到中间体C(1.48g),淡黄色液体,收率100%。MS(ESI):m/z313.9(M+H)+.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.81(d,J=4.5Hz,1H),8.16(dd,J=8.5,5.5Hz,1H),7.62(dd,J=10.0,2.5Hz,1H),7.52–7.46(m,1H),7.22(d,J=4.5Hz,1H),5.86–5.81(m,1H),4.19(q,J=7.0Hz,2H),2.56–2.26(m,6H),2.08–1.98(m,2H),1.64–1.55(m,1H),1.30(t,J=7.0Hz,3H).
第四步:将中间体C(1.48g,4.72mmol)溶于30mL乙醇中,加入10%钯碳(300mg)。反应混合物在氢气氛下室温搅拌过夜。然后用硅藻土滤除钯碳,浓缩滤液。残留物用快速过柱机分离得到中间体D(1.31g),淡黄色液体,收率88%。MS(ESI):m/z 316.0(M+H)+.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.84–8.79(m,1H),8.13(dd,J=9.0,5.5Hz,1H),7.66(dd,J=10.5,2.5Hz,1H),7.51–7.44(m,1H),7.34(d,J=4.5Hz,1H),4.20–4.14(m,2H),3.26–3.18(m,1H),2.53–2.43(m,2H),2.31(d,J=7.0Hz,1H),2.07–1.97(m,2H),1.90–1.70(m,5H),1.68–1.58(m,1H),1.31–1.25(m,3H).
第五步:将二异丙胺(1.54g,15.22mmol)溶于18mL四氢呋喃中。在氮气氛和-78℃条件下,向该溶液中滴加2.5M正丁基锂(6.1mL,15.22mmol)的正己烷溶液。然后滴加中间体D(2.4g,7.61mmol)的四氢呋喃(6mL)溶液。反应混合液在-78℃继续搅拌1.5小时。接着滴加碘甲烷(2.16g,15.22mmol),反应混合液升至室温搅拌过夜。用饱和氯化铵淬灭反应,乙酸乙酯萃取(3x50 mL),合并有机相,用50mL饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,过滤,浓缩。残留物用快速过柱机分离得到中间体E(1.96g),淡黄色液体,收率78%。MS(ESI):m/z 330.5(M+H)+.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.84–8.79(m,1H),8.16–8.10(dd,1H),7.66(d,J=10.5Hz,1H),7.51–7.44(m,1H),7.35(d,J=4.5Hz,1H),4.22–4.14(m,2H),3.32–3.23(m,1H),2.82–2.72(m,1H),2.12–1.98(m,2H),1.96–1.55(m,7H),1.32–1.24(m,3H),1.20(d,J=6.5Hz,3H).
第六步:将中间体E(400mg,1.21mmol)溶于4mL/4mL四氢呋喃/乙醇中,加入2mL水。然后向溶液中加入氢氧化钠(243mg,6.07mmol)。反应混合物在50℃搅拌过夜,浓缩。加入3mL水稀释,用4mol/L盐酸溶液调节pH=3,过滤得到中间体F(330mg),白色固体,收率90%。MS(ESI):m/z 302.6(M+H)+.1H NMR(500MHz,d6-DMSO)δ12.22(s,1H),8.81(d,J=4.5Hz,1H),8.14–8.06(m,1H),8.01–7.94(m,1H),7.66(t,J=8.5Hz,1H),7.52(s,1H),3.32–3.23(m,1H),2.76–2.66(m,1H),1.97–1.62(m,7H),1.61–1.51(m,1H),1.49–1.31(m,1H),1.09(d,J=6.5Hz,3H).
通用路线二:非对称合成路线
中间体K’的非对称合成方法采用文献报道的合成方法(WO2016073774A2)
通用路线三:
第一步:将中间体F(或者K’,1.0eq)溶于N,N-二甲基甲酰胺中,加入HATU(1.1eq)和二异丙基乙胺(3.0eq)。再向反应液中加入取代的1,2-二胺或取代的邻氨基苯胺(1.5eq)。反应混合物在30℃下搅拌过夜。然后向反应液中加入水和乙酸乙酯,有机相用饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,过滤,浓缩,得到粗品中间体不需要纯化直接用于下一步。
第二步:将上一步得到的粗品中间体(1.0eq)溶于醋酸中,混合物在100℃下搅拌反应19小时,然后浓缩反应液。残留物用反向高效液相制备色谱纯化得到最终化合物。
通用路线四:
第一步:将膦酰基乙酸三乙酯(968mg,4.32mmol)溶于16mL超干四氢呋喃中,在0℃冰浴下加入叔丁醇钠(415mg,4.32mmol)。10分钟后,将中间体E’(1g,4.12mmol)的四氢呋喃(4mL)溶液加入反应液中。反应2小时后,用水淬灭。水溶液用20mL乙酸乙酯萃取三次,合并有机相,用20mL饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,过滤,浓缩。残留物用快速过柱机分离得到中间体F”(1.18g),白色固体,收率92%。MS(ESI):m/z 314.0(M+H)+.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.81(d,J=4.5Hz,1H),8.17(dd,J=9.0,5.5Hz,1H),7.72(dd,J=10.0,2.5Hz,1H),7.53–7.47(m,1H),7.28(d,J=4.5Hz,1H),5.75(s,1H),4.19(q,J=7.0Hz,2H),3.52–3.42(m,1H),2.54–2.48(m,2H),2.26–2.11(m,4H),1.80–1.68(m,2H),1.30(t,J=7.0Hz,3H).
第二步:将NaH(383mg,9.57mmol)加入15mL二甲基亚砜中,向该悬浊液中加入三甲基碘化亚砜(2.11g,9.57mmol)。混合物在室温下搅拌1.5小时。然后将中间体F”(1.0g,3.19mmol)的二甲基亚砜(5mL)溶液加入到反应液中。反应在室温条件下搅拌过夜。然后用水淬灭,用乙酸乙酯萃取,用快速过柱机分离得到中间体G”(820mg),无色油状液体,收率78%。MS(ESI):m/z 328.1(M+H)+.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.83(d,J=4.5Hz,1H),8.24(dd,J=9.0,5.5Hz,1H),7.71(dd,J=10.0,2.5Hz,1H),7.55–7.49(m,1H),7.35(d,J=4.5Hz,1H),4.19(q,J=7.0Hz,2H),3.32–3.24(m,1H),2.17(td,J=13.0,3.5Hz,1H),2.07–1.90(m,4H),1.87–1.78(m,1H),1.58(dd,J=8.0,5.5Hz,1H),1.46–1.37(m,1H),1.30(t,J=7.0Hz,3H),1.28–1.24(m,2H),1.16–1.11(m,1H),1.00(dd,J=8.0,4.5Hz,1H).
第三步:将中间体G”(200mg,0.61mmol)溶于10mL乙醇中,加入4mL 2mol/L氢氧化钠溶液。反应液加热至50℃,反应2小时。待反应液冷却至室温,用4mol/L盐酸溶液中和至pH=1。用乙酸乙酯萃取水相。合并有机相,用无水硫酸钠干燥,过滤,浓缩。残留物用制备薄层层析分离得到中间体H”(150mg),白色固体,产率83%。MS(ESI):m/z 300.0(M+H)+.1H NMR(500MHz,d6-DMSO)δ12.02(br,1H),8.83(d,J=4.5Hz,1H),8.10(dd,J=9.0,5.5Hz,1H),8.03(dd,J=10.0,2.5Hz,1H),7.71–7.64(m,1H),7.38(d,J=4.5Hz,1H),3.48–3.41(m,1H),2.21–2.13(m,1H),2.01–1.80(m,4H),1.75–1.65(m,1H),1.51(dd,J=8.0,5.5Hz,1H),1.38–1.32(m,1H),1.11–1.05(m,1H),1.04–0.99(m,1H),0.95(dd,J=7.5,4.0Hz,1H).
第四步:将中间体H”(1.0eq)溶于N,N-二甲基甲酰胺中,加入HATU(1.1eq)和二异丙基乙胺(3.0eq)。再向反应液中加入取代的1,2-二胺或取代的邻氨基苯胺(1.5eq)。反应混合物在30℃下搅拌过夜。然后向反应液中加入水和乙酸乙酯,有机相用饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,过滤,浓缩。将得到的粗品中间体溶于醋酸中,混合物在100℃下搅拌反应19小时,然后浓缩反应液。残留物用反向高效液相制备色谱纯化得到最终化合物。
通用路线五:
第一步:在-78℃条件下,将正丁基锂(0.49mL,1.22mmol)滴加到二异丙胺(123mg,1.22mmol)的四氢呋喃(15mL)溶液中。再向其中滴加中间体G”(200mg,0.61mmol)的四氢呋喃(5mL)溶液。反应在-78℃下搅拌1小时。然后向反应液中滴加碘甲烷(173mg,1.22mmol)的四氢呋喃(2mL)溶液,反应维持在-78℃半小时后升至室温,搅拌过夜。用饱和氯化铵溶液淬灭,用乙酸乙酯萃取水相。合并有机相,用无水硫酸钠干燥,过滤,浓缩。残留物用制备薄层层析分离得到化合物中间体H”’(121mg),无色油状液体,产率58%。MS(ESI):m/z 342.4(M+H)+.
第二步:将中间体H”’(100mg,0.29mmol)溶于10mL乙醇中,加入2mL 2mol/L氢氧化钠溶液。反应液加热至50℃,反应2小时。待反应液冷却至室温,用4mol/L盐酸溶液中和至pH=1。用乙酸乙酯萃取水相。合并有机相,用无水硫酸钠干燥,过滤,浓缩。残留物用制备薄层层析分离得到中间体I”’(76mg),白色固体,产率83%。MS(ESI):m/z 314.3(M+H)+.
第三步:将中间体I”’(1.0eq)溶于N,N-二甲基甲酰胺中,加入HATU(1.1eq)和二异丙基乙胺(3.0eq)。再向反应液中加入取代的1,2-二胺或取代的邻氨基苯胺(1.5eq)。反应混合物在30℃下搅拌过夜。然后向反应液中加入水和乙酸乙酯,有机相用饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,过滤,浓缩。将得到的粗品中间体溶于醋酸中,混合物在100℃下搅拌反应19小时,然后浓缩反应液。残留物用反向高效液相制备色谱纯化得到最终化合物。
实施例1:化合物1
化合物1从中间体F(20mg)和4-氯-1,2-苯二胺出发,经由通用路线一和通用路线三制备而来。得到化合物1(10.05mg),白色固体,收率37%。MS(ESI):m/z408.3(M+H)+.1HNMR(500MHz,d6-DMSO)δ12.40(s,1H),8.79(d,J=4.5Hz,1H),8.11–8.04(m,1H),7.97(d,J=10.5Hz,1H),7.65(t,J=8.5Hz,1H),7.60–7.45(m,2H),7.42(d,J=4.0Hz,1H),7.15(d,J=8.5Hz,1H),3.30–3.24(m,1H),2.95–2.88(m,1H),1.95(t,J=10.5Hz,2H),1.90–1.79(m,2H),1.61–1.47(m,3H),1.45–1.32(m,5H).
实施例2:化合物17和化合物18
化合物17(反式,外消旋)和化合物18(顺式,外消旋)从中间体F(40mg)和4-氟-1,2-苯二胺出发,经由通用路线一和通用路线三制备而来。
得到化合物17(8.49mg),第一个洗脱的异构体,白色固体,收率16%。MS(ESI):m/z392.5(M+H)+.1H NMR(500MHz,d6-DMSO)δ12.28(s,1H),8.79(s,1H),8.11–8.04(m,1H),7.97(d,J=10.5Hz,1H),7.65(t,J=8.5Hz,1H),7.45–7.39(m,2H),7.34(d,J=10.0Hz,1H),7.02–6.92(m,1H),3.29–3.23(m,1H),2.93–2.87(m,1H),2.00–1.91(m,2H),1.89–1.79(m,2H),1.61–1.46(m,3H),1.45–1.33(m,5H).
得到化合物18(9.24mg),第二个洗脱的异构体,白色固体,收率18%。MS(ESI):m/z392.5(M+H)+.1H NMR(500MHz,d6-DMSO)δ12.31(s,1H),8.86(s,1H),8.13–8.06(m,1H),7.97(d,J=11.0Hz,1H),7.66(t,J=8.5Hz,1H),7.58(s,1H),7.44–7.39(m,1H),7.23(d,J=9.0Hz,1H),7.01–6.92(m,1H),3.45–3.35(m,2H),2.15–2.09(m,1H),2.06–1.99(m,1H),1.93–1.83(m,2H),1.82–1.71(m,2H),1.68–1.60(m,1H),1.59–1.53(m,1H),1.34(d,J=6.5Hz,3H),1.21–1.14(m,1H).
实施例3:化合物21和化合物22
化合物21(反式,外消旋)和化合物22(顺式,外消旋)从中间体F(40mg)和4-甲基-1,2-苯二胺出发,经由通用路线一和通用路线三制备而来。
得到化合物21(11.40mg),第一个洗脱的异构体,白色固体,收率22%。MS(ESI):m/z 388.5(M+H)+.1H NMR(500MHz,d6-DMSO)δ11.98(s,1H),8.79(s,1H),8.11–8.04(m,1H),7.97(d,J=10.5Hz,1H),7.65(t,J=8.5Hz,1H),7.44–7.38(m,2H),7.20(s,1H),6.93(t,J=9.5Hz,1H),3.30–3.23(m,1H),2.91–2.83(m,1H),2.39(s,3H),2.00–1.91(m,2H),1.89–1.78(m,2H),1.61–1.46(m,3H),1.44–1.33(m,5H).
得到化合物22(13.51mg),第二个洗脱的异构体,白色固体,收率26%。MS(ESI):m/z 388.5(M+H)+.1H NMR(500MHz,d6-DMSO)δ12.02(s,1H),8.86(s,1H),8.13–8.06(m,1H),7.97(d,J=11.0Hz,1H),7.66(t,J=9.0Hz,1H),7.58(s,1H),7.39(d,J=8.5Hz,1H),7.20(s,1H),6.93(t,J=10.0Hz,1H),3.46–3.34(m,2H),2.38(s,3H),2.16–2.09(m,1H),2.06–1.99(m,1H),1.93–1.83(m,2H),1.82–1.70(m,2H),1.67–1.51(m,2H),1.33(d,J=6.5Hz,3H),1.21–1.14(m,1H).
实施例4:化合物13和化合物14
化合物13(反式,外消旋)和化合物14(顺式,外消旋)从中间体F(50mg)和4-氯-1,2-苯二胺出发,经由通用路线一和通用路线三制备而来。
得到化合物13(7.93mg),第一个洗脱的异构体,白色固体,收率12%。MS(ESI):m/z408.4(M+H)+.1H NMR(500MHz,d6-DMSO)δ12.36(s,1H),8.80(s,1H),8.11–8.04(m,1H),7.97(d,J=11.0Hz,1H),7.65(t,J=8.5Hz,1H),7.60(s,1H),7.46–7.40(m,2H),7.15(t,J=10.5Hz,1H),3.30–3.23(m,1H),2.95–2.88(m,1H),2.00–1.91(m,2H),1.89–1.79(m,2H),1.61–1.46(m,3H),1.45–1.32(m,5H).
得到化合物14(10.25mg),第二个洗脱的异构体,白色固体,收率15%。MS(ESI):m/z 408.4(M+H)+.1H NMR(500MHz,d6-DMSO)δ12.42(s,1H),8.86(d,J=4.0Hz,1H),8.13–8.07(m,1H),7.98(d,J=11.0Hz,1H),7.67(t,J=8.5Hz,1H),7.61–7.56(m,2H),7.45(d,J=8.5Hz,1H),7.17–7.11(m,1H),3.45–3.37(m,2H),2.16–2.09(m,1H),2.07–2.00(m,1H),1.93–1.83(m,2H),1.82–1.71(m,2H),1.68–1.60(m,1H),1.59–1.52(m,1H),1.34(d,J=6.5Hz,3H),1.19–1.12(m,1H).
实施例5:化合物33和化合物34
化合物33(反式,外消旋)和化合物34(顺式,外消旋)从中间体F(40mg)和4-三氟甲基-1,2-苯二胺出发,经由通用路线一和通用路线三制备而来。
得到化合物33(5.95mg),第一个洗脱的异构体,白色固体,收率10%。MS(ESI):m/z442.4(M+H)+.1H NMR(500MHz,d6-DMSO)δ12.63(s,1H),8.79(s,1H),8.10–8.04(m,1H),7.97(d,J=11.0Hz,1H),7.91(s,1H),7.67–7.61(m,2H),7.49–7.40(m,2H),3.30–3.23(m,1H),3.02–2.94(m,1H),2.00–1.91(m,2H),1.91–1.82(m,2H),1.61–1.47(m,3H),1.46–1.35(m,5H).
得到化合物34(4.55mg),第二个洗脱的异构体,白色固体,收率8%。MS(ESI):m/z442.4(M+H)+.1H NMR(500MHz,d6-DMSO)δ12.66(s,1H),8.87(s,1H),8.12–8.06(m,1H),7.98(d,J=10.5Hz,1H),7.90(s,1H),7.69–7.62(m,2H),7.59(s,1H),7.48–7.41(m,1H),3.52–3.38(m,2H),2.21–2.11(m,1H),2.09–2.01(m,1H),1.94–1.73(m,4H),1.69–1.61(m,1H),1.60–1.54(m,1H),1.37(d,J=6.0Hz,3H),1.19–1.13(m,1H).
实施例6:化合物27和化合物28
化合物27(反式,外消旋)和化合物28(顺式,外消旋)从中间体F(50mg)和4-甲氧基-1,2-苯二胺出发,经由通用路线一和通用路线三制备而来。
得到化合物27(3.67mg),第一个洗脱的异构体,白色固体,收率5%。(ESI):m/z404.4(M+H)+.1H NMR(500MHz,d6-DMSO)δ11.99(s,1H),8.80(s,1H),8.10–8.07(m,1H),7.98(d,J=10.0Hz,1H),7.69–7.62(m,1H),7.46–7.39(m,2H),6.92(s,1H),6.78–6.70(m,1H),3.77(s,3H),3.30–3.22(m,1H),2.89–2.82(m,1H),2.00–1.91(m,2H),1.90–1.76(m,2H),1.60–1.46(m,3H),1.44–1.31(m,5H).
得到化合物28(6.69mg),第二个洗脱的异构体,白色固体,收率9%。(ESI):m/z404.4(M+H)+.1H NMR(500MHz,d6-DMSO)δ12.02(s,1H),8.87(s,1H),8.13–8.06(m,1H),7.98(d,J=11.0Hz,1H),7.67(t,J=8.5Hz,1H),7.58(s,1H),7.39(d,J=8.5Hz,1H),7.08(s,1H),6.74(t,J=10.0Hz,1H),3.76(s,3H),3.46–3.36(m,2H),2.15–2.07(m,1H),2.06–1.98(m,1H),1.92–1.83(m,2H),1.82–1.69(m,2H),1.67–1.59(m,1H),1.58–1.51(m,1H),1.33(d,J=6.5Hz,3H),1.22–1.14(m,1H).
实施例7:化合物35和化合物36
化合物35(反式,外消旋)和化合物36(顺式,外消旋)从中间体F(50mg)和4-溴-1,2-苯二胺出发,经由通用路线一和通用路线三制备而来。
得到化合物35(12.85mg),第一个洗脱的异构体,白色固体,收率17%。(ESI):m/z452.3(M+H)+.1H NMR(500MHz,d6-DMSO)δ12.39(d,J=22.9Hz,1H),8.80(s,1H),8.10–8.04(m,1H),7.98(d,J=11.0Hz,1H),7.74(s,1H),7.65(t,J=8.5Hz,1H),7.46–7.38(m,2H),7.26(t,J=9.0Hz,1H),3.31–3.24(m,1H),2.95–2.87(m,1H),1.99–1.90(m,2H),1.89–1.79(m,2H),1.61–1.46(m,3H),1.46–1.30(m,5H).
得到化合物36(15.29mg),第二个洗脱的异构体,白色固体,收率20%。(ESI):m/z452.3(M+H)+.1H NMR(500MHz,d6-DMSO)δ12.42(s,1H),8.86(s,1H),8.12–8.07(m,1H),7.98(d,J=11.0Hz,1H),7.73(s,1H),7.69–7.63(m,1H),7.60–7.56(m,1H),7.49(d,J=9.0Hz,1H),7.28–7.22(m,1H),3.45–3.38(m,2H),2.15–2.08(m,1H),2.07–1.99(m,1H),1.92–1.83(m,2H),1.82–1.70(m,2H),1.68–1.59(m,1H),1.58–1.52(m,1H),1.34(d,J=6.0Hz,3H),1.18–1.11(m,1H).
实施例8:化合物37和化合物38
化合物37(反式,外消旋)和化合物38(顺式,外消旋)从中间体F(40mg)和6-氯-2,3-二氨基吡啶出发,经由通用路线一和通用路线三制备而来。
得到化合物37(4.03mg),第一个洗脱的异构体,白色固体,收率7%。MS(ESI):m/z409.4(M+H)+.1H NMR(500MHz,d6-DMSO)δ12.79(s,1H),8.80(s,1H),8.11–8.04(m,1H),8.02–7.87(m,2H),7.66(t,J=8.0Hz,1H),7.44(s,1H),7.24(d,J=8.0Hz,1H),3.30–3.23(m,1H),2.98–2.89(m,1H),2.00–1.91(m,2H),1.90–1.80(m,2H),1.61–1.47(m,3H),1.45–1.35(m,5H).
得到化合物38(7.12mg),第二个洗脱的异构体,白色固体,收率12%。MS(ESI):m/z409.4(M+H)+.1H NMR(500MHz,d6-DMSO)δ12.81(s,1H),8.87(d,J=4.5Hz,1H),8.10(dd,J=9.5,6.0Hz,1H),8.03–7.90(m,2H),7.67(td,J=9.0,3.0Hz,1H),7.59(d,J=4.5Hz,1H),7.23(d,J=8.5Hz,1H),3.47–3.39(m,2H),2.18–2.12(m,1H),2.07–2.00(m,1H),1.92–1.83(m,2H),1.82–1.71(m,2H),1.69–1.61(m,1H),1.59–1.53(m,1H),1.35(d,J=7.0Hz,3H),1.17–1.11(m,1H).
实施例9:化合物39和化合物40
化合物39(反式,外消旋)和化合物40(顺式,外消旋)从中间体F(40mg)和5-氯-2,3-二氨基吡啶出发,经由通用路线一和通用路线三制备而来。
得到化合物39(5.08mg),第一个洗脱的异构体,白色固体,收率9%。MS(ESI):m/z409.4(M+H)+.1H NMR(500MHz,d6-DMSO)δ12.80(s,1H),8.81(s,1H),8.12–8.05(m,1H),8.04–7.88(m,2H),7.65(t,J=8.0Hz,1H),7.43(s,1H),7.26(d,J=8.0Hz,1H),3.31–3.23(m,1H),2.99–2.88(m,1H),2.02–1.90(m,2H),1.93–1.81(m,2H),1.60–1.46(m,3H),1.46–1.34(m,5H).
得到化合物40(8.37mg),第二个洗脱的异构体,白色固体,收率15%。MS(ESI):m/z409.4(M+H)+.1H NMR(500MHz,d6-DMSO)δ12.81(s,1H),8.81(s,1H),8.12–8.04(m,1H),8.03–7.87(m,2H),7.64(t,J=8.0Hz,1H),7.45(s,1H),7.26(d,J=8.0Hz,1H),3.46–3.37(m,2H),2.15–2.07(m,1H),2.05–1.98(m,1H),1.93–1.85(m,2H),1.84–1.68(m,2H),1.67–1.60(m,1H),1.57–1.50(m,1H),1.36(d,J=6.5Hz,3H),1.25–1.14(m,1H).
实施例10:化合物41和化合物42
化合物41(反式,外消旋)和化合物42(顺式,外消旋)从中间体F(40mg)和6-氯-3,4-二氨基吡啶出发,经由通用路线一和通用路线三制备而来。
得到化合物41(2.98mg),第一个洗脱的异构体,白色固体,收率5%。MS(ESI):m/z409.4(M+H)+.1H NMR(500MHz,d6-DMSO)δ12.89(s,1H),8.87(s,1H),8.63(s,1H),8.14–8.08(m,1H),7.98(d,J=11.0Hz,1H),7.70–7.55(m,3H),3.48–3.40(m,1H),3.01–2.92(m,1H),2.05–1.94(m,2H),1.96–1.85(m,2H),1.65–1.49(m,3H),1.48–1.38(m,5H).
得到化合物42(3.17mg),第二个洗脱的异构体,白色固体,收率6%。MS(ESI):m/z409.4(M+H)+.1H NMR(500MHz,d6-DMSO)δ12.90(s,1H),8.87(s,1H),8.63(s,1H),8.14–8.07(m,1H),7.99(d,J=11.0Hz,1H),7.71–7.56(m,3H),3.49–3.40(m,2H),2.18–2.11(m,1H),2.07–2.01(m,1H),1.93–1.83(m,2H),1.82–1.72(m,2H),1.69–1.61(m,1H),1.60–1.53(m,1H),1.36(d,J=6.0Hz,3H),1.17–1.10(m,1H).
实施例11:化合物29和化合物30
化合物29(反式,外消旋)和化合物30(顺式,外消旋)从中间体F(40mg)和4-氯-5-氟-1,2-苯二胺出发,经由通用路线一和通用路线三制备而来。
得到化合物29(3.45mg),第一个洗脱的异构体,白色固体,收率5%。MS(ESI):m/z426.4(M+H)+.1H NMR(500MHz,d6-DMSO)δ12.49(s,1H),8.79(d,J=4.5Hz,1H),8.10–8.04(m,1H),7.97(d,J=11.0Hz,1H),7.68–7.57(m,2H),7.48(d,J=9.5Hz,1H),7.44-7.41(m,1H),3.29-3.23(m,1H),2.94-2.88(m,1H),1.99-1.90(m,2H),1.88-1.79(m,2H),1.61–1.46(m,3H),1.44-1.34(m,5H).
得到化合物30(4.15mg),第二个洗脱的异构体,白色固体,收率6%。MS(ESI):m/z426.4(M+H)+.1H NMR(500MHz,d6-DMSO)δ12.54(s,1H),8.87(s,1H),8.13–8.06(m,1H),7.98(d,J=11.0Hz,1H),7.78–7.63(s,2H),7.61–7.40(m,2H),3.45–3.39(m,2H),2.16–2.08(m,1H),2.07–2.00(m,1H),1.92–1.83(m,2H),1.82–1.70(m,2H),1.68–1.60(m,1H),1.59–1.52(m,1H),1.34(d,J=6.5Hz,3H),1.18–1.11(m,1H).
实施例12:化合物45和化合物46
化合物45(反式,外消旋)和化合物46(顺式,外消旋)从中间体F(40mg)和2-氨基-4-氯苯酚出发,经由通用路线一和通用路线三制备而来。
得到化合物45(6.36mg),第一个洗脱的异构体,白色固体,收率12%。MS(ESI):m/z409.4(M+H)+.1H NMR(500MHz,d6-DMSO)δ8.87(d,J=4.5Hz,1H),8.11(dd,J=9.0,6.0Hz,1H),8.00(dd,J=11.0,3.0Hz,1H),7.93(d,J=2.0Hz,1H),7.74(d,J=8.5Hz,1H),7.69(td,J=8.5,3.0Hz,1H),7.65(d,J=4.5Hz,1H),7.42(dd,J=8.5,2.0Hz,1H),3.65–3.56(m,1H),3.48–3.44(m,1H),2.17–2.11(m,1H),2.05–1.98(m,1H),1.92–1.71(m,5H),1.67–1.61(m,1H),1.39(d,J=7.0Hz,3H),1.30–1.25(m,1H).
得到化合物46(9.27mg),第二个洗脱的异构体,白色固体,收率17%。MS(ESI):m/z409.4(M+H)+.1H NMR(500MHz,d6-DMSO)δ8.86(d,J=4.5Hz,1H),8.10(dd,J=9.0,6.0Hz,1H),8.01(dd,J=11.0,3.0Hz,1H),7.92(d,J=2.0Hz,1H),7.72(d,J=8.5Hz,1H),7.68(td,J=8.5,3.0Hz,1H),7.63(d,J=4.5Hz,1H),7.41(dd,J=8.5,2.0Hz,1H),3.64–3.50(m,2H),2.17–2.11(m,1H),2.05–1.98(m,1H),1.92–1.71(m,5H),1.67–1.61(m,1H),1.39(d,J=7.0Hz,3H),1.30–1.25(m,1H).
实施例13:化合物43和化合物44
化合物43(反式,外消旋)和化合物44(顺式,外消旋)从中间体F(40mg)和2-氨基-5-氯苯酚出发,经由通用路线一和通用路线三制备而来。
得到化合物43(8.42mg),第一个洗脱的异构体,白色固体,收率16%。MS(ESI):m/z409.4(M+H)+.1H NMR(500MHz,d6-DMSO)δ8.86(d,J=4.5Hz,1H),8.10(dd,J=9.0,6.0Hz,1H),8.01(dd,J=11.0,3.0Hz,1H),7.92(d,J=2.0Hz,1H),7.72(d,J=8.5Hz,1H),7.68(td,J=8.5,3.0Hz,1H),7.63(d,J=4.5Hz,1H),7.41(dd,J=8.5,2.0Hz,1H),3.64–3.56(m,1H),3.48–3.43(m,1H),2.17–2.11(m,1H),2.05–1.98(m,1H),1.92–1.71(m,5H),1.67–1.61(m,1H),1.39(d,J=7.0Hz,3H),1.30–1.25(m,1H).
得到化合物44(10.05mg),第二个洗脱的异构体,白色固体,收率19%。MS(ESI):m/z 409.4(M+H)+.1H NMR(500MHz,d6-DMSO)δ8.86(d,J=4.5Hz,1H),8.10(dd,J=9.0,6.0Hz,1H),8.01(dd,J=11.0,3.0Hz,1H),7.92(d,J=2.0Hz,1H),7.72(d,J=8.5Hz,1H),7.68(td,J=8.5,3.0Hz,1H),7.63(d,J=4.5Hz,1H),7.41(dd,J=8.5,2.0Hz,1H),3.64–3.50(m,2H),2.17–2.11(m,1H),2.05–1.98(m,1H),1.92–1.71(m,5H),1.67–1.61(m,1H),1.39(d,J=7.0Hz,3H),1.30–1.25(m,1H).
实施例14:化合物48
化合物48从中间体H”(40mg)和4-甲基-1,2-苯二胺出发,经由通用路线四制备而来。得到化合物48(28.67mg),白色固体,收率56%。(ESI):m/z 386.4(M+H)+.1H NMR(500MHz,d6-DMSO)δ12.32(s,1H),8.82(s,1H),8.11–8.04(m,1H),8.00(d,J=11.0Hz,1H),7.66(t,J=8.5Hz,1H),7.39(s,1H),7.37–7.29(m,1H),7.29–7.19(m,1H),6.91(d,J=8.0Hz,1H),3.42–3.37(m,1H),2.37(s,3H),2.28–2.20(m,1H),2.08–2.02(m,1H),1.95–1.86(m,3H),1.59–1.46(m,2H),1.46–1.41(m,1H),1.23(d,J=13.5Hz,1H),1.15–1.03(m,2H).
实施例15:化合物49
化合物49从中间体I”’(40mg)和4-氯-1,2-苯二胺出发,经由通用路线五制备而来。得到化合物49(15.23mg),白色固体,收率28%。(ESI):m/z 420.4(M+H)+.1H NMR(500MHz,d6-DMSO)δ12.32(s,1H),8.82(s,1H),8.11–8.04(m,1H),8.00(d,J=11.0Hz,1H),7.66(t,J=8.5Hz,1H),7.39(s,1H),7.37–7.29(m,1H),7.29–7.19(m,1H),6.91(d,J=8.0Hz,1H),2.45(s,3H),3.42–3.37(m,1H),2.28–2.20(m,1H),2.08–2.02(m,1H),1.95–1.86(m,3H),1.59–1.46(m,2H),1.46–1.41(m,1H),1.15–1.03(m,2H).
实施例16:化合物19和化合物20
化合物19和化合物20由实施例2中化合物18经过手性柱拆分得到。其中,化合物19对应手性拆分中的前者,化合物20对应手性拆分中的后者。
化合物19:MS(ESI):m/z 392.4(M+H)+.1H NMR(500MHz,d6-DMSO)δ12.33(s,1H),8.86(s,1H),8.13–8.07(m,1H),7.98(d,J=10.5Hz,1H),7.67(t,J=8.5Hz,1H),7.58(s,1H),7.44–7.39(m,1H),7.24(d,J=8.5Hz,1H),7.01–6.92(m,1H),3.45–3.35(m,2H),2.15–2.09(m,1H),2.06–1.99(m,1H),1.93–1.83(m,2H),1.82–1.71(m,2H),1.68–1.60(m,1H),1.59–1.53(m,1H),1.33(d,J=6.0Hz,3H),1.21–1.14(m,1H).
化合物20:MS(ESI):m/z 392.4(M+H)+.1H NMR(500MHz,d6-DMSO)δ12.34(s,1H),8.87(s,1H),8.13–8.07(m,1H),7.98(d,J=10.5Hz,1H),7.67(t,J=8.5Hz,1H),7.58(s,1H),7.44–7.39(m,1H),7.24(d,J=8.5Hz,1H),7.01–6.92(m,1H),3.45–3.35(m,2H),2.15–2.09(m,1H),2.06–1.99(m,1H),1.93–1.83(m,2H),1.82–1.71(m,2H),1.68–1.60(m,1H),1.59–1.53(m,1H),1.34(d,J=6.5Hz,3H),1.21–1.14(m,1H).
实施例17:化合物23和化合物24
化合物23和化合物24由实施例3中化合物22经过手性柱拆分得到。其中,化合物23对应手性拆分中的前者,化合物24对应手性拆分中的后者。
化合物23:MS(ESI):m/z 388.4(M+H)+.1H NMR(500MHz,d6-DMSO)δ12.03(s,1H),8.86(s,1H),8.13–8.06(m,1H),7.97(d,J=10.5Hz,1H),7.66(t,J=9.0Hz,1H),7.58(s,1H),7.41–7.18(m,2H),6.93(s,1H),3.46–3.34(m,2H),2.38(s,3H),2.16–2.09(m,1H),2.06–1.99(m,1H),1.93–1.83(m,2H),1.82–1.70(m,2H),1.66–1.58(m,1H),1.57–1.50(m,1H),1.33(d,J=6.5Hz,3H),1.21–1.14(m,1H).
化合物24:MS(ESI):m/z 388.4(M+H)+.1H NMR(500MHz,d6-DMSO)δ12.07(s,1H),8.87(s,1H),8.13–8.06(m,1H),7.97(d,J=10.5Hz,1H),7.66(t,J=9.0Hz,1H),7.58(s,1H),7.41–7.18(m,2H),6.93(s,1H),3.46–3.34(m,2H),2.38(s,3H),2.16–2.09(m,1H),2.06–1.99(m,1H),1.93–1.83(m,2H),1.82–1.70(m,2H),1.66–1.58(m,1H),1.57–1.50(m,1H),1.33(d,J=6.5Hz,3H),1.21–1.14(m,1H).
实施例18:化合物15和化合物16
化合物15和化合物16由实施例4中化合物14经过手性柱拆分得到。其中,化合物15对应手性拆分中的前者,化合物16对应手性拆分中的后者。
化合物15:MS(ESI):m/z 408.4(M+H)+.1H NMR(500MHz,d6-DMSO)δ12.41(s,1H),8.87(s,1H),8.12–8.06(m,1H),7.98(d,J=10.5Hz,1H),7.67(t,J=8.5Hz,1H),7.61–7.56(m,2H),7.46(d,J=8.5Hz,1H),7.17–7.11(m,1H),3.45–3.37(m,2H),2.16–2.09(m,1H),2.07–2.00(m,1H),1.93–1.83(m,2H),1.82–1.71(m,2H),1.68–1.60(m,1H),1.59–1.52(m,1H),1.35(d,J=6.5Hz,3H),1.19–1.12(m,1H).
化合物16:MS(ESI):m/z 408.4(M+H)+.1H NMR(500MHz,d6-DMSO)δ12.46(s,1H),8.87(s,1H),8.12–8.06(m,1H),7.98(d,J=10.5Hz,1H),7.67(t,J=8.5Hz,1H),7.62–7.40(m,3H),7.14(d,J=8.5Hz,1H),3.45–3.37(m,2H),2.16–2.09(m,1H),2.07–2.00(m,1H),1.93–1.83(m,2H),1.82–1.71(m,2H),1.68–1.60(m,1H),1.59–1.52(m,1H),1.35(d,J=6.5Hz,3H),1.19–1.12(m,1H).
实施例19:化合物31和化合物32
化合物31和化合物32由实施例11中化合物30经过手性柱拆分得到。其中,化合物31对应手性拆分中的前者,化合物32对应手性拆分中的后者。
化合物31:MS(ESI):m/z 426.4(M+H)+.1H NMR(500MHz,d6-DMSO)δ12.55(s,1H),8.87(s,1H),8.13–8.06(m,1H),7.98(d,J=11.0Hz,1H),7.78–7.63(s,2H),7.61–7.40(m,2H),3.45–3.39(m,2H),2.16–2.08(m,1H),2.07–2.00(m,1H),1.92–1.83(m,2H),1.82–1.70(m,2H),1.68–1.60(m,1H),1.59–1.52(m,1H),1.34(d,J=6.5Hz,3H),1.18–1.11(m,1H).
化合物32:MS(ESI):m/z 426.4(M+H)+.1H NMR(500MHz,d6-DMSO)δ12.54(s,1H),8.86(s,1H),8.13–8.06(m,1H),7.98(d,J=11.0Hz,1H),7.78–7.63(s,2H),7.61–7.40(m,2H),3.45–3.39(m,2H),2.16–2.08(m,1H),2.07–2.00(m,1H),1.92–1.83(m,2H),1.82–1.70(m,2H),1.68–1.60(m,1H),1.59–1.52(m,1H),1.34(d,J=6.5Hz,3H),1.18–1.11(m,1H).
实施例20:化合物51和化合物52
化合物51(反式,外消旋)和化合物52(顺式,外消旋)从中间体F(40mg)和4,5-二氟-1,2-苯二胺出发,经由通用路线一和通用路线三制备而来。
得到化合物51(3.45mg),第一个洗脱的异构体,白色固体,收率5%。MS(ESI):m/z410.2(M+H)+.1H NMR(500MHz,d6-DMSO)δ12.49(s,1H),8.79(d,J=4.5Hz,1H),8.10–8.04(m,1H),7.97(d,J=11.0Hz,1H),7.68–7.57(m,2H),7.48(d,J=9.5Hz,1H),7.44-7.41(m,1H),3.29-3.23(m,1H),2.94-2.88(m,1H),1.99-1.90(m,2H),1.88-1.79(m,2H),1.61–1.46(m,3H),1.44-1.34(m,5H).
得到化合物52(4.15mg),第二个洗脱的异构体,白色固体,收率6%。MS(ESI):m/z410.2(M+H)+.1H NMR(500MHz,d6-DMSO)δ12.54(s,1H),8.87(s,1H),8.13–8.06(m,1H),7.98(d,J=11.0Hz,1H),7.78–7.63(s,2H),7.61–7.40(m,2H),3.45–3.39(m,2H),2.16–2.08(m,1H),2.07–2.00(m,1H),1.92–1.83(m,2H),1.82–1.70(m,2H),1.68–1.60(m,1H),1.59–1.52(m,1H),1.34(d,J=6.5Hz,3H),1.18–1.11(m,1H).
实施例21:化合物53和化合物54
化合物53和化合物54由实施例21中化合物52经过手性柱拆分得到。其中,化合物53对应手性拆分中的前者,化合物54对应手性拆分中的后者。
化合物53:MS(ESI):m/z 410.2(M+H)+.1H NMR(500MHz,d6-DMSO)δ12.54(s,1H),8.87(s,1H),8.13–8.06(m,1H),7.98(d,J=11.0Hz,1H),7.78–7.63(s,2H),7.61–7.40(m,2H),3.45–3.39(m,2H),2.16–2.08(m,1H),2.07–2.00(m,1H),1.92–1.83(m,2H),1.82–1.70(m,2H),1.68–1.60(m,1H),1.59–1.52(m,1H),1.34(d,J=6.5Hz,3H),1.18–1.11(m,1H).
化合物54:MS(ESI):m/z 410.2(M+H)+.1H NMR(500MHz,d6-DMSO)δ12.54(s,1H),8.87(s,1H),8.13–8.06(m,1H),7.98(d,J=11.0Hz,1H),7.78–7.63(s,2H),7.61–7.40(m,2H),3.45–3.39(m,2H),2.16–2.08(m,1H),2.07–2.00(m,1H),1.92–1.83(m,2H),1.82–1.70(m,2H),1.68–1.60(m,1H),1.59–1.52(m,1H),1.34(d,J=6.5Hz,3H),1.18–1.11(m,1H).
本发明的化合物在Hela细胞中的活性研究
本发明的化合物在Hela细胞和高表达人IDO1蛋白的HEK293细胞活性测试方法参照已有技术中所公开的方法(“Blood,2010,115(17):3520-3530”)。具体测试如下:
将Hela细胞接种于96孔培养板中,在37℃,100%相对湿度,5%CO2培养箱中培养24小时。将化合物溶解于DMSO并稀释至合适浓度,再用含有干扰素-γ及10%胎牛血清的DMEM培养基将候选化合物稀释100倍至作用终浓度。吸弃96孔板中的旧培养基,每孔加200μl上一步含有化合物和干扰素-γ的培养基。培养基中色氨酸含量为16mg/l,干扰素-γ浓度50ng/ml。细胞置于37℃,100%相对湿度,5%CO2培养箱中培养48小时后,吸取140μl细胞培养上清与15μl三氯乙酸混合,并置于52℃反应30min后,室温离心取离心上清与等体积Ehrlich’s试剂混合,测定480nm下的光吸收,计算IC50值。
注:A:IC50=0.1nM~10nM;B:IC50=10nM~100nM;C:IC50>100nM;
本发明的化合物化合物在高表达人IDO1蛋白的HEK293细胞中的活性研究
利用电转化制备高表达人IDO1蛋白的HEK293-IDO细胞,并将细胞接种于96孔培养板中,在37℃,100%相对湿度,5%CO2培养箱中培养24小时。将化合物溶解于DMSO并稀释至合适浓度,再用含有10%胎牛血清的DMEM培养基将候选化合物稀释100倍至作用终浓度。吸弃96孔板中的旧培养基,每孔加200μl上一步含有化合物的培养基。培养基中色氨酸含量为16mg/l。细胞置于37℃,100%相对湿度,5%CO2培养箱中培养24小时后,吸取140μl细胞培养上清与15μl三氯乙酸混合,并置于52℃反应30min后,室温离心取离心上清与等体积Ehrlich’s试剂混合,测定480nm下的光吸收,计算IC50值。
注:A:IC50=0.1nM~10nM;B:IC50=10nM~100nM;C:IC50>100nM。