CN1520517A - 总蛋白检测方法和装置 - Google Patents
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Abstract
一种用于在含水检测液体中测定蛋白的测试方法，其包括将检测液体与缓冲剂和染料组合。缓冲剂选自瓜氨酸、丙二酸、氰乙酸、柠康酸、甲基膦酸、肌氨酸、糖精，或它们的组合的缓冲剂。缓冲剂以足够的量加入，以维持包括检测液体的测试物的pH维持在大约2.0至大约3.0的选定的目标范围内。染料具有的pKa值使它可以在目标pH范围作为蛋白指示剂。染料也对蛋白具有亲和性，使得它能够在存在大于大约15mg/dL蛋白时提供可检测的响应，由此使该测试方法适于检测液体中的总蛋白。缓冲剂和染料可被吸收于吸收材料的试条中。
Description
技术领域
本发明一般地涉及检测蛋白的方法和装置。具体地说，本发明涉及在低pH下用不同的缓冲液检测蛋白的方法和装置。
背景技术
检测尿蛋白的方法通常对白蛋白比对其他尿蛋白更敏感。然而，检测除白蛋白之外的蛋白是重要的，特别是对Bence-Jones蛋白尿症而言。由于临床医生的判定水平(decision level)和推荐采取的措施依赖于患者尿中受检测的蛋白的浓度而变化，蛋白的检测应当覆盖较宽的蛋白浓度范围。例如，持续的大于50mg/dL的蛋白尿是肾病的明显证据，而蛋白水平大于300mg/dL与肾变病(nephrotic)综合症的诊断一致。尿蛋白的浓度大于800mg/dL表明大量的蛋白流失，需要进行肾活组织检查和/或类固醇治疗。显然，对尿中蛋白的检测应当在宽的蛋白数值范围内有效。
确定含水液体中的蛋白的不同方法已在文献中报导。这些方法包括Kjeldahl法、双缩脲法、Lowery法、染料组合法、紫外法和荧光测定法。一般地说，蛋白与不同的物质反应，所述物质包括染料，例如溴酚蓝、考马斯亮蓝和曙红，以及金属离子，例如银(I)、铜(II)、锌(II)和铅(II)。
尿含有一定量的盐，随个体的不同而不同。当诊断测试需要在与尿样不同的pH下进行时，这些盐中的一些可作为缓冲剂。例如，含有例如碳酸氢盐、乙酸盐和磷酸盐的尿样难以降低pH。尿中的普通组分肌酸酐也可作为阻碍pH降低的缓冲剂。这种缓冲的结果是某些尿样的试纸pH值(strip pH)高于最佳值。高于最佳值的试纸pH值可能导致蛋白指示染料产生颜色，提供蛋白存在的错误指示。人们需要降低这种尿效应的缓冲体系，所述缓冲体系不与存在的化学物质相互作用。
相应地，人们需要检测临床浓度和pH值范围很宽的蛋白的方法和装置。
发明概述
根据一个实施方案，在含水检测液体中确定蛋白的测试方法包括将检测液体与缓冲剂和染料进行组合。缓冲剂选自瓜氨酸、丙二酸、氰乙酸、柠康酸、甲基膦酸、肌氨酸、糖精，或它们的组合。缓冲剂以足够的量加入，以维持包括检测液体的测试物的pH维持在选定的目标范围，在大约2.0至大约3.0的范围内。染料具有的pKa值使它可以在目标pH范围作为蛋白指示剂。染料对蛋白具有亲和性，使得它能够在存在大于大约15mg/dL蛋白时提供可检测的响应，由此使测试方法适于检测液体中的总蛋白。
根据另一实施方案，用于确定液体检测样品中的蛋白水平的干式装置包括一种吸收材料，该吸收材料具有吸收在内的缓冲剂和染料。缓冲剂选自瓜氨酸、丙二酸、氰乙酸、柠康酸、甲基膦酸、肌氨酸、糖精，或它们的组合。缓冲剂以足够的量加入，以维持包括检测液体的测试物的pH维持在选定的目标范围，在大约2.0至大约3.0的范围内。染料具有的pKa值使它可以在目标pH范围作为蛋白指示剂。染料对蛋白具有亲和性，使得它能够在存在大于大约15mg/dL蛋白时，通过所述装置与液体检测样品接触，提供可检测的响应，由此使所述装置适于检测液体检测样品中的总蛋白。
根据进一步的实施方案，在含水检测液体中确定蛋白的测试方法包括将检测液体与缓冲剂和染料进行组合。缓冲剂选自瓜氨酸、丙二酸，或它们的组合。缓冲剂以足够的量加入，以维持包括检测液体的测试物的pH维持在选定的目标范围，在大约2.0至大约3.0的范围内。染料具有的pKa值使它可以在目标pH范围作为蛋白指示剂。染料对蛋白具有亲和性，使得它能够在存在大于大约15mg/dL蛋白时提供可检测的响应，由此使测试方法适于检测液体中的总蛋白。
根据另一进一步的实施方案，用于确定液体检测样品中的蛋白水平的干式装置包括一种吸收材料，该吸收材料具有吸收在内的缓冲剂和染料。缓冲剂选自瓜氨酸、丙二酸，或它们的组合。缓冲剂以足够的量加入，以维持包括检测液体的测试物的pH维持在大约2.0至大约3.0的选定的目标范围内。染料具有的pKa值使它可以在目标pH范围作为蛋白指示剂。染料对蛋白具有亲和性，使得它能够在存在大于大约15mg/dL蛋白时，通过所述装置与液体检测样品接触，提供可检测的响应，由此使所述装置适于检测液体检测样品中的总蛋白。
例示的实施方案的详细描述
本发明的蛋白测试方法可以以湿式或干式进行。最方便的是以吸收性试纸的方式进行，所述试纸浸渍了(a)一种缓冲剂，其选自瓜氨酸、丙二酸、氰乙酸、柠康酸、甲基膦酸、肌氨酸、糖精，或它们的组合；和(b)一种染料，其具有使它能够在大约2.0至大约3.0的pH下作为蛋白指示剂(例如颜色指示剂)。
缓冲剂
本发明使用的缓冲剂以足够的量加入，以维持包括检测液体的测试物的pH维持在大约2.0至大约3.0的范围内。缓冲剂可具有预先调节的pH值，这通常由以下方法完成：将酸和碱加入缓冲剂溶液中，达到特定的pH值，或者加入缓冲剂和它的盐的特定比例的混合物，得到特定的pH值。缓冲剂优选地将包括检测液体的测试物的pH值维持在目标pH的大约+/-0.2pH单位之内。缓冲剂优选地以足够的量加入，以维持包括检测液体的测试物的pH维持在大约2.4至大约3.0的范围内。
优选的缓冲剂是瓜氨酸、丙二酸或它们的组合。缓冲剂可以选自瓜氨酸、丙二酸、氰乙酸、柠康酸、甲基膦酸、肌氨酸、糖精，或它们的组合。可以使用不同浓度的缓冲剂，缓冲剂的浓度一般为大约200至大约500mM。
瓜氨酸可以是L-瓜氨酸、D-瓜氨酸和D，L-瓜氨酸形式，由式A表示：
式A
本发明所用的丙二酸由式B表示：
本发明所用的氰乙酸由式C表示：
本发明所用的柠康酸由式D表示：
本发明所用的甲基膦酸由式E表示：
式E
本发明所用的肌氨酸由式F表示：
本发明所用的糖精由式G表示：
据信瓜氨酸、丙二酸、氰乙酸、柠康酸、甲基膦酸、肌氨酸和/或糖精可通过市售得到，例如从Aldrich化学公司得到。
染料
本发明所用的染料所具有的pKa值使得它们可以在pH大约2.0至大约3.0的范围内作为蛋白指示剂。例如，当蛋白在pH大约2.0至大约3.0的范围内的选定目标pH范围内存在时，染料所具有的pKa值使它们指示颜色的差异。选定的靶pH范围优选是在+/-0.2pH单位内。此外，染料可具有在蛋白不存在时，在选定靶pH范围内不具有明显颜色差异的pKa值。优选地，本发明所用的染料所具有的pKa值使得它们可以在pH大约2.4至大约3.0的范围内作为蛋白指示剂。不被理论所束缚，据信这样的染料，当与蛋白结合时，会暴露于与在溶液中的游离状态下不同的环境，并有效地产生较低的pKa值，用于颜色改变所必需的离子化。如果在不存在蛋白时染料也能在目标pH范围内作为pH敏感性颜色指示剂，则一般不会准确地检测到加入的蛋白。
本发明所用的染料一般在总蛋白为大约2至大约500mg/dL时提供可检测的响应。染料优选地对大约15至大约300mg/dL的总蛋白提供可检测的、特别有用的响应。染料的量可以改变，以在上述优选范围之外提供可检测的、有用的响应。
这些染料的示例包括取代的酚磺酞(phenolsulfonephthaleins)、焦酚红(pyrogallol red)，或它们的组合。本发明也可以使用其他染料，只要这些染料在不存在蛋白时，在大约2至大约3的pH范围内，在染料吸收或荧光光谱(指示跃迁)方面具有可检测的指标，而在存在蛋白时，在相同条件下，具有不同的指标。在存在和不存在蛋白时提供不同的可检测响应的pH值，应当在本发明所用的缓冲剂所维持的范围之内。
例如，本发明可用的染料可以是溴氯酚蓝(3’，3”-二溴-5’，5”-二氯酚磺酞)、溴酚蓝(四溴酚蓝)、碱性品红(碱性红9)、碱性紫14、martius黄(酸性黄24)、焰红B(酸性红92)、甲基黄(溶剂黄2)、刚果红(直接(direct)红28)、甲基橙(酸性橙52)、乙基橙(4-(4-二乙基氨基苯基偶氮)苯磺酸)。这些染料可以与例如酚磺酞和焦酚红组合使用。
在本发明中特别有用的酚磺酞指示剂由式H和I表示：
式H 式I
式H表示在质子溶剂例如水或醇中酚磺酞衍生物的结构，式I表示主要在干燥状态或在非质子溶剂例如醚和乙腈中存在的形式。酚磺酞“蛋白误差(error)”指示剂是pH指示剂，它包括具有某一pKa值的可离子化的质子，除非蛋白存在，该质子在特定的pH值下不被离子化。
如下所示的一般的酚磺酞指示剂(式J)的pKa值是这样一个pH值，在该pH值下，指示剂分子数目的一半包括去质子化的C环酚羟基基团。在上面例示的酚磺酞蛋白误差指示剂中，发生了两个去质子化事件，产生可观察的颜色改变。第一去质子化是从A环上的芳基磺酸除去质子，得到式J所示的离子：
所述质子的pKa值小于1，导致在所有有用的pH值下该部分都被离子化。该可离子化基团也与化合物的水溶性有关。第二去质子化涉及从C环酚羟基释放质子，得到式K和L所示的二价阴离子：
式K 式L
对于这种类型的蛋白误差指示剂，第二去质子化引起可观察的颜色改变，所述颜色改变指示受试样品中存在蛋白。酚磺酞蛋白误差指示剂典型地与缓冲剂一起施加到吸收基质材料上，所述缓冲剂提供pH恒定的环境，使得可以确信颜色的改变是由蛋白存在导致的，而不是由与检测液体接触后pH改变引起的。
在本发明中，只有具有第二pKa值，使得在存在蛋白时，在pH值在大约2.0至大约3.0的范围内发生第二去质子化的酚磺酞蛋白误差指示剂才是有用的。具有第二pKa值，使得在不存在蛋白时，在所维持的pH值范围之外发生第二去质子化的酚磺酞蛋白误差指示剂在本发明中可能是有用的。优选地，在不存在蛋白时，在pH值不在大约2.4至大约3.0的范围内，最优选pH值在3.0以上的条件下，出现第二pKa值。也给出可检测指示(例如颜色反应)的对蛋白的存在敏感的离子化反应可以是不同类别的可离子化取代基的第一、第二等去质子化。
许多酚磺酞蛋白误差指示剂具有适当范围的第二pKa，因此适用于本发明。可用的酚磺酞包括在式J和L的A、B或C环上被去电子和/或加电子基团取代的那些，所述基团例如氨基、酰氨基、芳族基团、烷基、羟基、硫代、羧基、烷氧基、ketoxy、乙酰基、卤素、硝基和氰基。环中的一个或几个可以包含卤素。特定的取代基和它们在染料分子上的位置不是关键性的，只要所得到的染料具有适当范围的pKa值，并保持所需的物理特性，例如溶解性，蛋白亲和性和颜色。未取代的酚磺酞是不合适的，因为它们的pKa值不在适当的范围内。已发现八取代的砜酞指示剂，即在3’、3”、5’、5”、3、4、5和6位取代的酚磺酞衍生物特别适用于本发明。这些指示剂优选地被卤素和硝基取代，可以由式M表示：
式M
其中X是硝基，Y和Z是氯、溴或碘。也可使用美国专利5,279,790公开的硝基取代的多卤代酚磺酞，其中Y是硝基，X和Z是氯、溴或碘。这些指示剂据说具有检测液体样品中大约2至500mg/dL蛋白的能力。然而，本发明的测试系统适用于测量到蛋白尿大于30mg/dL，但没有测量到微白蛋白尿(microalbuminuria)为2mg/dL的情形。
例如，在诊断儿童肾病时，不希望测量微白蛋白，因为这样的反应的可变性使得可能给出疾病的错误指示。显然本发明所用的酚磺酞指示剂的芳香环可带有不同的取代基。这样的取代基仅由本领域普通技术人员制备稳定化合物的能力所限，所述化合物具有适当的蛋白误差指示剂特性，使得它们适用于本发明。
酚磺酞染料的一些特定的实例是在5’、5”位用硝基取代，在3’、3”、3、4、5和6位用氯、溴或碘取代。例如，可以使用的酚磺酞包括5，5”-二硝基-3’，3”，3，4，5，6-六溴酚磺酞或5’-硝基-5”-碘-3’，3”，3，4，5，6-六溴酚磺酞。
如上所述，一种可用的染料是焦酚红。焦酚红典型地包括使用钼酸盐和钨酸盐以提供鲜艳的颜色。美国专利5,399,498公开了钨酸盐与指示剂反应，形成一种复合物，当存在蛋白时，其颜色以类似于钼的方式变化(shift)。美国专利5,399,498也公开了在这种测试中用植酸(phytic acid)或其衍生物降低背景干扰。虽然这一测试对于在液体检测样品(例如尿)中检测低量蛋白是非常出色的，但其分辨力在高蛋白浓度，特别是在蛋白浓度大于大约150mg/dL的条件下，显著降低。该方法是总蛋白测试方法，因为响应不依赖于检测样品中存在的蛋白的类型。因此，15mg/dL的人血清白蛋白(HAS)与15mg/dL的IgG提供相同的响应。由于总蛋白测试在某些疾病状态的检测中是有用的，尿中总蛋白超出越多，潜在的问题越严重。因此需要在高蛋白浓度下提供可检测的响应的总蛋白测试方法。然而，钼酸盐/钨酸盐测试不能有效检测高浓度的蛋白，即高于大约150mg/dL，因为所用的染料对蛋白有很强的亲和性。
其他可能的组分
测试装置或组分可含有任意数量的表面活性剂、去污剂、背景染料、增强剂聚合物(enhancer polymer)或螯合剂，它们是本领域已知的用于基于染料结合的蛋白检测方法的物质。这些测试装置或组分典型地包括质子(protic)溶剂，例如浓度在表1中给出的水/甲醇混合物。典型地，溶液含有螯合剂，例如肌醇六磷酸和/或草酸，以抑制或防止尿样中其他成分的干扰。浸纸法中的酸可通过加入氢氧化钠等调节到优选pH，即大约2.4至大约3。
表1
任选组分
| 成分 | 功能 | 所用浓度 | 一般范围 |
| 水 | 溶剂 | 95mL | -- |
| 甲醇 | 溶剂 | 5mL | 0-40mL |
| 肌醇六磷酸 | 螯合剂 | 1g(15mM) | 0-500mM |
| 草酸 | 螯合剂 | 0.11g(12mM) | 0-40mM |
实施例
形成干式装置(例如诊断试纸)的一个实例包括将一种材料(例如纸)浸入含水溶液中。诊断试纸可以用不同的材料制成，但典型地是用与塑料载体相连的纸制成。一种合适的纸的实例是Ahlstrom204。这些试纸可用其他材料制成，例如天然或合成的纺织或非纺织材料。
根据一个实施方案，第一含水溶液是通过加入三种亚混物(submix)而形成的。为形成亚混物1，将10ml甲醇、1.76ml的125mM TRIS(三羟甲基氨基甲烷/甲醇)和44.0mg焦酚红加在一起。这些组分混合大约20至大约30分钟，形成亚混物1。为形成亚混物2，将4.10g(3.20mL)的40％肌醇六磷酸、8.00mL的5％含水PVA(聚乙烯醇)(31-50K)、11.2ml的1N NaOH和0.654mL的100mg/mL钼酸钠，以及45.6mL的水加在一起。加入NaOH将pH调到大约2.3。这些组分混合大约60分钟，形成亚混物2。为形成亚混物3，将217.5mg的草酸二钠、120.0mL的500mM pH 2.5的L-瓜氨酸，以及100.0mgCibacron亮黄加在一起。组分混合大约30分钟形成亚混物3。
将亚混物1和亚混物2混合大约10分钟，然后加入亚混物3。pH值为2.6，使混合的亚混物1-3稳定化4个小时，调节到预定体积。亚混物1-3形成大约200毫升的第一浸渍溶液。将纸浸入第一浸渍溶液中，在三段烤箱中在50/50/70℃下以1英寸气流干燥。所用的纸是Ahlstrom 204纸。
然后将纸浸入160毫升的第二浸渍溶液。第二浸渍溶液是通过将144毫升甲苯、16毫升THF(稳定化的)、0.48克如美国专利5,424,215公开的KOK(polypropyleneglycol carbonate)和36.57毫克DNHB(5，5”-二硝基-3’，3”，3，4，5，6-六溴酚磺酞)混合而制得的。纸在三段烤箱中在50°/50°/70℃下以1英寸气流干燥，形成诊断试纸的活性垫(pad)。诊断试纸包括与聚合试条(polymeric strip)粘合的活性垫。
虽然本发明的特定实施方案和应用已被例示和描述，但应理解本发明并不仅限于本文公开的构建物和组合物。在不背离所附权利要求限定的本发明的精神和范围之下，根据以上说明书，本发明的不同的修饰、改变和变化是显而易见的。
Claims (39)
1.一种用于在含水检测液体中测定蛋白的测试方法，其包括将检测液体与以下(a)和(b)组合，(a)选自瓜氨酸、丙二酸、氰乙酸、柠康酸、甲基膦酸、肌氨酸、糖精或它们的组合的缓冲剂，缓冲剂以足够的量加入，以维持包括检测液体的测试物的pH在大约2.0至大约3.0的选定的目标pH范围，(b)一种染料，其具有的pKa值使它可以在目标pH范围内作为蛋白指示剂，所述染料对蛋白具有亲和性，使得它能够在存在大于大约15mg/dL蛋白时提供可检测的响应，由此使测试方法适于检测液体中的总蛋白。
2.权利要求1的方法，其中缓冲剂选自氰乙酸、柠康酸、甲基膦酸、肌氨酸、糖精或它们的组合。
3.权利要求1的方法，其中缓冲剂以足够的量加入，以维持包括检测液体的测试物的pH在大约2.4至大约3.0的范围内。
4.权利要求1的方法，其中染料是取代的酚磺酞、焦酚红或它们的组合。
5.权利要求4的方法，其中染料是取代的酚磺酞，取代的酚磺酞是用氨基、酰氨基、芳基、烷基、羟基、硫代、羧基、烷氧基、ketoxy、乙酰基、卤素、硝基、氰基或它们的组合八取代的。
6.权利要求4的方法，其中染料是取代的酚磺酞，取代的酚磺酞是在5’、5”位用硝基，在3’、3”、3、4、5和6位用氯、溴或碘取代的。
7.权利要求4的方法，其中染料是取代的酚磺酞，取代的酚磺酞是5，5”-二硝基-3’，3”，3，4，5，6-六溴酚磺酞或5’-硝基-5”-碘-3’，3”，3，4，5，6-六溴酚磺酞。
8.权利要求1的方法，其中染料是焦酚红，所述方法进一步包括将检测液体与钼酸盐或钨酸盐组合。
9.权利要求1的方法，其中缓冲剂和染料被吸收在吸收材料的试条上。
10.权利要求1的方法，其中可检测的响应在蛋白浓度从大约15至大约300mg/dL提供良好的分辨力。
11.权利要求1的方法，其中在蛋白存在下，在pH为大约2.0至大约3.0的范围内，染料起到颜色指示剂的作用。
12.权利要求1的方法，其中在蛋白存在下，在pH为大约2.4至大约3.0的范围内，染料起到颜色指示剂的作用。
13.权利要求1的方法，其中缓冲剂将包括检测液体的测试物的pH维持在目标pH正负大约0.2pH单位。
14.一种用于在含水检测液体中测定蛋白的测试方法，其包括将检测液体与以下(a)和(b)组合，(a)选自瓜氨酸、丙二酸、氰乙酸、柠康酸、甲基膦酸、肌氨酸、糖精或它们的组合的缓冲剂，缓冲剂以足够的量加入，以将包括检测液体的测试物的pH维持在大约2.0至大约3.0的选定的pH范围内大约+/-0.2pH单位，(b)一种染料，其具有的pKa值使它可以在目标pH范围作为蛋白指示剂，染料对蛋白具有亲和性，使得它能够在存在大于大约2至大约500mg/dL蛋白时提供可检测的响应，由此使测试方法适于检测液体中的总蛋白。
15.一种用于在液体检测样品中测定蛋白水平干式装置，其包括一种吸收材料，所述吸收材料吸收了(a)选自瓜氨酸、丙二酸、氰乙酸、柠康酸、甲基膦酸、肌氨酸、糖精或它们的组合的缓冲剂，缓冲剂以足够的量加入，以维持包括检测液体的测试物的pH在大约2.0至大约3.0的选定的目标pH范围，(b)一种染料，其具有的pKa值使它可以在目标pH范围作为蛋白指示剂，染料对蛋白具有亲和性，使得它能够在存在大于大约15mg/dL蛋白时通过所述装置与液体检测样品的接触提供可检测的响应，由此使该装置适于检测液体检测样品中的总蛋白。
16.权利要求15的干式装置，其中缓冲剂选自氰乙酸、柠康酸、甲基膦酸、肌氨酸、糖精或它们的组合。
17.权利要求15的干式装置，其中缓冲剂以足够的量加入，以维持包括检测液体的测试物的pH在大约2.4至大约3.0的范围。
18.权利要求15的干式装置，其中染料是取代的酚磺酞、焦酚红或它们的组合。
19.权利要求18的干式装置，其中染料是取代的酚磺酞，取代的酚磺酞是用氨基、酰氨基、芳基、烷基、羟基、硫代、羧基、烷氧基、ketoxy、乙酰基、卤素、硝基、氰基或它们的组合八取代的。
20.权利要求18的干式装置，其中染料是取代的酚磺酞，取代的酚磺酞是在5’、5”位用硝基，在3’、3”、3、4、5和6位用氯、溴或碘取代的。
21.权利要求18的干式装置，其中染料是取代的酚磺酞，取代的酚磺酞是5，5”-二硝基-3’，3”，3，4，5，6-六溴酚磺酞或5’-硝基-5”-碘-3’，3”，3，4，5，6-六溴酚磺酞。
22.权利要求15的干式装置，其中染料是焦酚红，所述方法进一步包括将检测液体与钼酸盐或钨酸盐组合。
23.权利要求15的干式装置，其中可检测的响应在蛋白浓度从大约15至大约300mg/dL提供良好的分辨力。
24.权利要求15的干式装置，其中在蛋白存在下，在pH为大约2.0至大约3.0的范围内，染料起到颜色指示剂的作用。
25.权利要求24的干式装置，其中在蛋白存在下，在pH为大约2.4至大约3.0的范围内，染料起到颜色指示剂的作用。
26.权利要求15的干式装置，其中缓冲剂将包括检测液体的测试物的pH维持在目标pH正负大约0.2pH单位。
27.一种用于在液体检测样品中测定蛋白水平干式装置，其包括一种吸收材料，所述吸收材料吸收了(a)选自瓜氨酸、丙二酸、氰乙酸、柠康酸、甲基膦酸、肌氨酸、糖精或它们的组合的缓冲剂，缓冲剂以足够的量加入，以将包括检测液体的测试物的pH维持在大约2.0至大约3.0的选定的目标范围内大约+/-0.2pH单位，(b)一种染料，其具有的pKa值使它可以在蛋白存在下在选定的目标pH范围作为蛋白指示剂，染料对蛋白具有亲和性，通过所述装置与液体检测样品接触，使得它能够在存在大于大约2至大约500mg/dL蛋白时提供可检测的响应，由此使所述装置适于检测液体检测样品中的总蛋白。
28.一种用于在含水检测液体中测定蛋白的测试方法，其包括将检测液体与以下(a)和(b)组合，(a)选自瓜氨酸、丙二酸或它们的组合的缓冲剂，缓冲剂以足够的量加入，以维持包括检测液体的测试物的pH在大约2.0至大约3.0的选定的目标范围，(b)一种染料，其具有的pKa值使它可以在目标pH范围作为蛋白指示剂，染料对蛋白具有亲和性，使得它能够在存在大于大约15mg/dL蛋白时提供可检测的响应，由此使测试方法适于检测液体中的总蛋白。
29.权利要求28的方法，其中缓冲剂是瓜氨酸。
30.权利要求28的方法，其中缓冲剂是丙二酸。
31.权利要求28的方法，其中染料是取代的酚磺酞、焦酚红或它们的组合。
32.权利要求28的方法，其中在蛋白存在下，在pH为大约2.0至大约3.0的范围内，染料起到颜色指示剂的作用。
33.权利要求32的方法，其中在蛋白存在下，在pH为大约2.4至大约3.0的范围内，染料起到颜色指示剂的作用。
34.一种用于在液体检测样品中测定蛋白水平干式装置，其包括一种吸收材料，所述吸收材料吸收了(a)选自瓜氨酸、丙二酸或它们的组合的缓冲剂，缓冲剂以足够的量加入，以维持包括检测液体的测试物的pH在大约2.0至大约3.0的选定的目标范围内，(b)一种染料，其具有的pKa值使它可以在目标pH范围作为蛋白指示剂，染料对蛋白具有亲和性，使得它能够在存在大于15mg/dL蛋白时通过所述装置与液体检测样品的接触提供可检测的响应，由此使测试方法适于检测液体检测样品中的总蛋白。
35.权利要求34的干式装置，其中缓冲剂是瓜氨酸。
36.权利要求34的干式装置，其中缓冲剂是丙二酸。
37.权利要求34的干式装置，其中染料是取代的酚磺酞、焦酚红或它们的组合。
38.权利要求34的干式装置，其中在蛋白存在下，在pH为大约2.0至大约3.0的范围内，染料起到颜色指示剂的作用。
39.权利要求38的干式装置，其中在蛋白存在下，在pH为大约2.4至大约3.0的范围内，染料起到颜色指示剂的作用。
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