JPS5887461A - 分析素子の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、生物学的液体のよう表液体試料の欄定用試験
臭もしくは素子の分野における改真に関する。特に、本
発明は、均一性特異的結合試験用の試験試薬をはじめと
する試験試薬を包含せしめ九試験具もしくは素子に関す
る。

試験片及び同様の固体状分析素子は、種々のタイプの液
体試料、特に、生、物学的液体の分析においてあた）ま
先のこととなってきている。それらは、例えば、病気の
診断において有益である。それらは、床机な分野、特に
、グルコース、蛋白質、漕血岬種々の尿成分及び血液成
分を検出するための生体外の診断具として、多年に亘ｐ
、知られかつ用いられている６例えば、米ｆｆｌ特許纂
３．０１Ｌ９７＠号；第３，１６４．５３４号；及び第
３．４８５，５８７号を参照され良い。

特異的結合パ試験を行うのに用いることができる試験具
が製造されている。＃異的納会試験は、液体媒体中に極
めて低濃産で現われ、診断上、医学上、環境上及び工業
上重要な種々な有機物質を測定するのに有用である。そ
れらの試験は配位子（ｌｉｇａｎｄりがンド）とも言わ
れていて、測定下で結合可能な分析対象物とそれに対す
る結合相手との間の特異な相互作用を基礎としている。

分析対象物及びその結合相手の１つがハプテン（ｈａｐ
ｔｅｎ。

不完全抗原）もしくは抗原であシ、他方がそれに相当す
る抗体である場合、この試験は、免疫試験として知られ
ている。例えば、米国特許出願第２５５、５２１号（１
９８１年４月２０日出願）、菖２０２．３７８　Ｍ（１
９８０年１０月３０日ａ［）及び第２５３，１４７号（
１９８１年４月１０日出ｉＩ）を参照されたい。その各
々には、かかる特異的結合試験具が開示されて一般に引
き合いに出されている。

これらの試験片、及び同様の試験＾では、試料を適用し
て試験具への適用場所から試薬が移動し去ってしまう原
因を招く場合には、それら試験＾がもたらす結果の信頼
性が不確かなものとなっていた。このことは、試験具全
体に亘っての試薬濃度の非一様性及びその結果として、
検出しうる信号もしくは応答ｌ！！度の非一様性の原因
となる。このために、単一試料と接触している単一試験
具が、試験具表面のどの部分が読み取９に用いられたか
によって、１つに定まらない様々な信号濃度を与えるこ
とになる。

リンイング（ｒｌｎｇｉｎｇ）効果と呼ばれているとこ
ろのものを１避するための試みに、従来用いられてきた
方法は４、展開層（ｓｐｒｅａｄｉｎｇ　ｌａｙ＠ｒｓ
）　　を使用することであった。例えば、米国籍許菖３
．９９２，１５８号及び英国特許出願２．０１５２．０
５７号を参照されたい。それらの主張するところによる
と、展開は展開層においておこり、かつ展開された試料
は、横方向の静水圧を受けずに、試薬含有層に存在する
ので、′りンギンダ現象が回避される。これらの層は、
試験具Ｏ製造を更に複雑とし、かつ費用もかさむものに
する。

本発明は、試薬の移行の問題に向けられ、かつ解決する
ものであや、更には、展開層の必要性を回避するもので
ある。試験具全体に亘っての試薬濃度の一様性は、液体
試料の適用後でさえも保たれる。試験具表面のどの部分
が読み皐られるかと関係なく、シかも、展開層を必要と
する試験具より実質的に簡単彦試峡具で、信頼性の高い
一様かつ正確な信号濃度を伯ることができる。

本発明は、特定の分析対象物についての液体試料の測定
に有用か分析素子の製造方法を提供するものである。本
方法は、α）１体中の組成物であって、分析対象物−検
出系の少なくとも１つの試薬からなるものを、非イオン
化形態では該液体に不溶で、かづイオン化されると該液
体に溶解する試薬移行阻止物質をイオン化するのに効果
的な条件下で、担体に包含せしめ、ついで、この担体を
乾燥する工程；及び次に、 ｂ）工程６Ｌ）で得られた担体に、工程（ａ）の液体と
は異なる液体中の第２の組成物であって、工程−）の少
なくとも１つの試薬と反応し、分析対象物−検出系の残
りの試薬、及びその非イオン形態では、該液体に溶解す
る試薬移行阻止物質とからなるものを包含せしめ、ここ
で該液体は、素子１が試料と一触するまでは、工程船の
少なくと４１つの試薬と第２の組成物が反応することを
妨げ、試料と接触するまでは、移行阻止物質がイオン化
することを妨げるのに効果的であゐ液体であり、ついで
、この担体を乾燥する工程からなることを特徴とする。

試薬移行阻止物質は、メチル−ニルエーテルとマレイン
酸モノメチルエステルの典型金体のような、マレイン酸
モノエステルｌリマーであることが好ましく、試薬移行
阻止物質をイオン化する条件は、工程−）の液体が水性
であり、かつ、−が少なくとも約６であり、緩衝液の介
在によって達成されることが好ましい。

工程も）の液体は、好ましくは、アセ）ｙのような有機
質の筒体である０本発明によって達成される便利さは、
例えば、免疫試験素子等の特異的結合試験において、特
に貴重である。好ましい実線態様においては、水性試料
を、本発明に従って製造され元特異的結合試験片に加え
ると、複合体（後に詳細に述べるが）が、水に不溶でイ
オン化されない酸の形の試薬移行阻止物質中に一時的に
捕獲され、そのことによって、試料が展開する間移行す
ることｔ−阻止される。しかしながら、工程ｒＪ＆）の
緩衡液がそのイオン化効果を発揮するだけの時間が経過
するや否や、試薬移行阻止物質は、イオンの形でかつ溶
解する形に変換され、従って複合体は、自由に、分析対
象物一応答反応に参加するようになる。

本発明は、従来の献験片及び同様のデザインの他の分析
素子の便利さの特徴のすべてを有する試験具を提供する
ものである。試験されるべき媒体は、分析対象物を含有
すると思われる、天然に存在する液体又は人工的に形成
された液体でもよく、通常、生物学的液体又はその稀釈
液である。試験できる生物学的液体としては、血清、プ
ラズマ、尿、−液及び羊膜液と脳を髄液が挙げられる。

本発明の試験素子には、血液、プラズマ、血清及び尿の
成分（分析対象物）の測定用として周知の、ここでは、
分析対象物検出系と呼ばれている試薬組成物を包含させ
ることができる。これらとしては、酵素もしくは分析対
象物に対して特異的な基質、及び検出しうる費化ｔ−シ
こすレドックス指示薬及び螢光団（ｆｌｕｏｒｓ）　　
をはじめとする更なる必要試薬をしばしば包含する。そ
れらとしては、分析対象物に対する特異的結合相手が存
在する分析対象物（リガンド）検出用の系、また、逆に
分析対象物もしくはリガンドと結合すべＩｌ１体媒体の
容量を検出するための系（通常は、分析対象物もしくは
りｌンドとの結合相手が溶媒中に存在するため）も包含
する。特定の分析対象−ＫｌＭする液体試料の測定は、
これらの試験方法のすべてを含むよう意図されでいる０
分析対象物は、通常、ペプチド、Ｉリペデチド、蛋白質
、炭水化物、糖蛋白質、ステロイド、又は生物学的系に
、それに対する特異的結合相手が存在するか又は含酸さ
れうる他の有機分子である。治療薬監視法（ｔｈ・ｒａ
ｐｎｔｌ・ｄｒｕｇ　ｍｏｄ　ｔｏｒｌｔＪ　）は、こ
れらの特異的結合試験素子を応用したもので価値のある
ものである。

本発明の分析素子に用いられる担体は、種々の形をとる
ことかで自、本願において、床机なも０表る吸収性又は
他の物理的性質を有する若しくはそれ以上の適切外材料
又は媒体からなることができる。例えば、米国特許第３
，５５２，９２８号；第４．０４６，５１４号；及び４
，８４５．２４７号を参照せよ。

担体は、ろ紙のような吸収性のある材料からなることが
好ましく、分析対象物−検出系の試薬の溶液もしくは懸
濁液がそこに含浸される。これらの担体についての概念
のすべては、他の物ができるように、この発明において
用いるととができる。

担体として、どんな材料が選ばれても、その構造と形状
が何であっても、その選択は、試薬系及び試験共の予定
された用途によって決められる。

これらの試験系を有する試験具は、検出しうる応答即ち
螢光、燐光、化学ルンネセンスのような主と“して電磁
輻射線信号及び液体試料中で試験している分析対象物（
リガンド）の存在若しくは量に関連した可視スペクトル
内又は外の光徴収又は光反射の変化をもたらす。検出し
うる応答は、ＴＮ接に感覚を通して又は分光光度計、紫
外光−読み取り装置、螢光計、又は池の読み取り装置の
ような付属検出装置を用いて観察することができる。

試験具の製造 試薬移行によって引き起こされる難点を克服するための
広範囲な研究の過程で、数多くの化合物が試験された。

これらの化合物としては、Ｋｌｕｅ＠ｌ＠ＬＦ（クルー
セル・エルエフ、登ＩＩＩ商標）１困Ｑｗ＠ＩＧ（クル
ーセル・シー）のヒドロキＶプロピルセルｐ−ス（ヘル
キュース、インコーＩレーテッド。

ウィルイントン、デラウエ・ア（Ｈ・ｒｏｕｌ・鵬６Ｉ
ｎｅ−ｓＷ１１ｍｉｎｇｔｏｎ、Ｄｇ　）　）、Ｇａｆ
ｑｕａｔ　７３４■（ガフコツト７３４＃登録商標）の
第４ゾメデルア建ノエデルメタクリレートとビニルピロ
リドｙの共重合体（ノーニーエフ・コーボレーシロｙ、
ニュー運−り、　二＄−ｇ−り（ＧＡＦ　ＣｏｒＰ、　
ｓ　Ｎ＠ｗ　Ｙｏｒｋ、ＮＹ）　）、Ｇａｎｔｒｅ７　
ＡＮ−１３９（がントレツツＡＮ−１３９，登１１ｍ１
ｌ［）のメチルビニをエーテルと無水マレイン酸ノ共重
合体（ソーニーエフ・コーＩレーション（ＧＡＦ　Ｃ’
ｏｒｐ、）　、同上）、酢酸−＠ｔｂａ−ｘ（４−ｘＦ
マンｅケミカル畳デロ〆タツ、インコーポレーテツド、
キンゲスポート、テネシー（ＥａｓｔｍａｎＣｈｅｍｉ
ｃａｌ　Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、Ｉｎｃ、、Ｋｉｎｇｓｐｏ
ｒｔ、ＴＮ）　）　、及びＮａｔｒｏｓｏｌ■ＭＲ（ナ
トロゾール・エムアール、登録商標）とＮａｔｒｏｓｏ
ｌ　ＬＲ（ナトロゾール・エルアール）のヒドロキシエ
チルセルロース（ヘルキュース・インコーホレーテッド
牽（Ｈｅｒｃｕｌｅｓ、Ｉｎｃ、）　。

同上）が挙げられる。いずれも、問題解決の能力を示さ
なかった。

従来の試験共の場合のように、本発明は所与の試験を行
うのに必要なすべての試薬を包含せしめた、１種又は別
種から作られた固体状担体を提供するもので、これによ
って、使用者は、試験共を試験すべき試料と接触させ、
かつ得られた応答を測定する仕事をするだけでよい。か
かる従来の試験共とは異なり、本発明の試験具は、次の
説明及び実施例によって、詳細に述べられかつ示される
ように、試薬移行阻止の利点を達成するものである。

それ自体、本発明工、結果の信頼性に悪影響を伴う、液
体試料と接触し九際の試薬の移行が実質的にない試験具
を提供するものである。

ｂ）液体中の組成物であって、分析対象物−検出系の少
なくとも１つの試薬からなるものを、非イオン化形態で
は該液体に不溶で、かつイオン化されると該液体Ｋ１１
ｌ解する試薬移行阻止物質をイオン化するのに効果的な
条件下で、担体に包含ぜしめ、ついて、この、担体を乾
燥する工程；及び次に１ Ｃｂ）工ＩＩ（−で得られた担体に、工Ｓ（−の液体と
は異なる液体中の纂２の組成物であって、工１ｉ（ａ）
の少なくとも１つの試薬と反応しうる、分析対象−一検
出系の残りの試薬、及びそＯ非イオン形態では、該液体
に溶解する試薬移行阻止物質とからなるものを包含せし
め、こ仁で皺液体は、素子が試料と接触する壕では、工
１１（ａ）の少なくと４１つの試薬と第２の組成物が反
応することを妨げ、試料と接触する壕では、移行阻止物
質がイオン化することを妨げるのに効果的である液体で
あシ次に、この担体を乾燥する工程からなる方法によっ
て、上述の試験具は提供される。

ある好ましい実施態様においては、試薬移行阻止物質は
カルｌン酸のＩリマーである。かがるカルーン酸のｄｌ
　ｌＪ　、−類として、例えば、（１）メチルビニルエ
ーテルとマレイン酸モノメチルエステルの共ｌ１体、（
２）メチルビニルエーテルとマレイン酸モノエチルエス
テルの共重合体、（３）メチルビニルエーテルとマレイ
ン酸モノプロピルエステルの共重合体、（４）メチルビ
ニルエーテルとマレイン酸モノエチルエステルの共重合
体、（５）酢酸ビニルとマレイン酸モノメチルエステル
の共重合体、（６）酢酸ビニルとマレイン酸モノエチル
ニス？ＡＣ１共重合体ｉ７）エチレンとマレイン酸モノ
メチルエステルの共重合体、（８）エチレンとマレイン
酸モノエチルエステルの共重合体、（９）オクタデシル
ビニルエーテルとマレイン酸モノメチルエステルの共重
合体及ヒｆｉｑオクタデシルビニルニーテルトマレイン
酸モノメチルエステルの共重合体であってよい。

カルＩンＩ！！４リマーをイオン化するのに効果的な条
件は、例えば、工程−）において、その−が少なくとも
約５である水性溶液管用いることにょって達成される。

これは、例えば、パイシンナトリウＡ　（ｚ４４　シン
（）１ｃｉｎｅ）はＮｓＮ　−Ｖ　ｘ　（２−＊ドロオ
中ジエチル）ダリシンである。）、ダリシルグリシン、
エーエムピづ（ＡＭＰ　）　ＩＩＩＩ箪（２−ア々／−
２−メチル−１−デ■ｄノール〕、ティーニーピーニス
（ＴｉＦ４）（Ｎ−）’Ｊｘ−（ｋ）ロキ＆）ｆｋ）−
）１チル−３−アミノデーパンスルホン酸〕、及びティ
ーアールアイニス（ＴＲＩｓ）　［）リス−（ヒドロキ
シメチル）−アイツメタン）を會む適切な緩衝液を用い
るごとによって達成される。

別の実ｍａｎにかいて鉱、試薬移行阻止物質鉱、スルホ
ン酸ポリマーである。例えば、かかるスルホンｌＩ４サ
マー類としては、−リステレンスルホン酸塩、２−アク
リルア建ドー２−メチルプロｄンスルホン酸とスチレン
０共重合体、及びポリＶニルスルホン駿であってよい。

ＩリスルホンＨｍをイオン化するのに効果的な条件は、
例えに、工程−）において、ある水性Ｓ液を用いて達成
され、その−は、用いられ良特定の４リスルホン酸のｐ
ムに関連し九範囲に保良れて、スルホン酸基をイオン化
する。

更に別の冥１１１ｊ！１様においては、試薬移行阻止物
質はある一範囲ではイオン化され、異々る一範囲では、
イオン化されないぼりアミンである。例えば、かかる４
リアンン類としては、−リリジン、ポリアルギニン及び
ポリヒスチジンてあって奄よい。

ポリアミンａｔイオン化するのに効果的々条件は、工Ｃ
４伽）において、ある水性溶液を用いて達成され、その
−は、用いられている特定のｆリアシンのｐＫａに関連
した範囲に保たれて、アミン基がイオン化される。

更に別の実施１！！様においては、試薬移行阻止物質！
１．イオン化しうるフェノールである。例えば、かかる
イオン化しうるフェノール類としてはＩリテロシンであ
ってもよい。

イオン化しうるフェノールをイオン化するのに効果的条
件は、例えば、工程−）において、ある水性液体を用い
て速成されその−は用いられている特定のフェノールの
ｐＫａに関連し九範囲に、保九れて、フェノール基がイ
オン化されゐ。

本発明において意図されているように、移行阻止物質の
溶解性としては、完全な溶解がおこることを要求しては
いない。存在する移行阻止物質の１０１というようだ、
少ない比率の溶解でさえ４、所望の結果を達成すゐのに
十分でありうる。分析対象物−検出系の成分同志の相互
反応を可能にする程度の溶解が要求されているだけなの
である。

・非イオン形の移行阻止物質の、工１ｉ（転）の液体へ
の不溶性は、そのイオン形、と比較して、溶解度及び溶
解速度が着しく低減されたものてなければならない。

本発明において意図されて％ＡＪＩ・ようＫＪＩ行阻止
物質のイオン化として社、移行阻止物質のイオン化され
うる官能基の各々又は大部分がイオン化されることを要
求してはいない。実際、試験真中に成分を適切に配合す
れば、＄行阻止物質のイオン化されうる官能基のｌＯノ
譬−セントというような、少ない比率のイオン化でさえ
、試験＾金体Ｋｌる、試薬濃度及び信号濃度の所望の、
一様性を達成するのに十分でありうる− 侃）の試薬は、例えば、（１）分析対象物に対する特異
的結合相手、又は（１）分析対象物に対する特異的結合
相手、及び標識成分を添着するために、分析対象物部分
（ｍｏｌ・ｔｙ）もしくはその特異的納金類縁体に結合
した標識成分からなる標識複合体と反応しつる成分とか
らなってよい。

この１つの実施態様としては、−）水性溶液中の組成物
であって、β−ガラクトシダーゼ、及び分析対象物に対
する抗体から表るものを、マレイン酸モノエステルＩリ
マーのカルメキシル基をイオン化するのに効果的な条件
下で、担体に含浸せしめ、次に、この担体を乾燥する工
程；及び次に、６）工程←）で得られた担体に、有機溶
媒中の組成物であって、β−ガラクトシル−ウンベリフ
ェロン−分析対象物もしくは分析対象物類縁禎合体及び
マレイン酸モノエステルポリｉ−からなる組成物を含浸
せしめ、ついでとの担体を乾燥する工程で構成され念、
液体試料中の分析対象物を測定するための均−系特異的
結合試験真の製造方法があ為。

一異体的例としては、−）水性溶液中の１組成物であっ
て、！−ガラタトシ〆−ヤ、及びｒン！マイシンに対す
る抗体から衾為組成物を、！レイン酸モノエステルｆリ
マー〇カル＃中シル基をイオン化するのに効果的な条件
下で、担体に含浸せしめ、ついで、との担体を乾燥する
工程；及び次に、伽）工程（ａ）で得られた担体に、ア
セトン含有液体中の組成物であって、β−ガッタトシル
ーウンペリフエロンーシソｉイシン複合体及びマレイン
酸モノエステルーリマーからなる組成物を含浸せしめ、
ついで、との担体を乾燥する工程からなる、液体試料中
のｒンタマイシンを測定するための均一系特異的結合試
験素子の製造方法がある。

別の実施態様としては、＆）水性溶液中の組成−゛であ
って、ｒルコース、ベルオキシ〆−ヤ、ダルコースオキ
シメーゼ７４Ｗ＃素及び分析対象−に対する抗体からな
る組成物を、マレイｙ　９４ノエステルぼりｉ−のカル
が中シル基をイオン化するのに効果的な条件下で、担体
に含浸せしめ、ついで、　　・との担体を乾燥する工程
；及び次に、（ｂ）工程（ａ）で得られた担体に、アセ
トン含有液体中の組成物であって、フラピンアデニン、
ジヌクレオチド−分析対象物もしくは分析対象物類縁僚
合体、３ａ３’＊５．５′−テトラメチルベンゾシンの
ようなテトラアルキルベンゾシン及ヒマレイン酸七ノエ
ステルポリマーからなる、組成物上含浸せしめ、ついで
、との担体を乾燥する工程からなる、液体試料中の分析
対象物を測定する九めの均一系特異的結合試験素子の製
造方法がある。

別の実施態様としては、工程−）及び工程ら）に先立ち
、素子が試料と接触する前に、指示試薬が工程０）の試
薬と反応をおこさないようにするのに効果的な液体中で
指示試薬を、担体に含浸し、次に、この担体を乾燥する
付加工程からなる方法がある。

この指示試薬は、３．３’、５．５’−テトラメチルベ
ンジシンのようなテトラアルキルベンゾシンからなるこ
とが好ましい。

この実施態様の一真体例としては、（１）アセトン含有
液体中の、ある組成物、すなわち％ｉ３’ｔ５．５′−
テトラメチルベンゾシンからなる組成物を担体に含浸し
、ついで、この担体を乾燥する工程；次に、（２）水性
溶液中Ｏある組成物、すなわちグルコース、ベルオキク
ダーヤ、ダルコースオ中シメーゼアＩ酵票及びテオフィ
リンに対する抗体カラ々る組成物を、マレイン酸モノエ
ステルＩリマーのカル−キシル基をイオノ化するのに効
果的な条件下１、工程（１）で得られ九担体に含浸せし
め、ついで、この担体を乾燥すゐ工程；及び、次に（圓
アセトン含有液中のある組、酸物、すなわち、フラビン
アデニンジヌクレオチド−テオフィリン複會体及びマレ
イン酸モノエステル／　ＩＪ　ｊ−からなる組成物を、
工程（２）で得られえ担体に含浸せしめ、ついで、この
担体を乾燥すゐ工程からなる、液体試料中のテオフィリ
ンを測定するためＯ均−輪特異的結倉試験素子の製造方
法がある。

種々の濃［０移行阻止物質で実験をした蒙呆・所望の効
果を達成するのに十分な最低量が含まれていること以外
は、濃度範囲は善に重要ではないことが観察された。こ
の最低量は、用いられて−１られるであろう。

試験具に、自己支持でもあるいは支持体に固着されても
よい。支持体は、光もしくは他のエネルギーに対し、不
透明であっても透明であってもよい。どんな特定の担体
用の支持体の選択は、信号検出の意図された型式と両立
するものとなゐであろう８支持体としては、約２００　
ｎｍ　と約９００ｎｍ間の範囲内の波長の電磁輻射線を
伝達できる不透明支持体材及び透明支持体材が挙げられ
る。

１又はそれ以上の狭い波長帯域を伝達するが、近接する
波長帯域に対しては不透明である支持体含有することも
又望ましい。このことは、例えば、適切な吸収特性を有
する１又はそれ以上の着色剤を支持体に含浸もしくは塗
布することによｐ達成されるであろう。典型的な支持体
は、Ｉリスプレン、厚紙（ｃａｒｄｂｏａｒｄ）もしく
は様々の他の構造的に安守な材料から製造される。

次の実施例は、本発明に一達する際に行われた実験を述
べるものである。それらは、本発明の重要な４Ｉ黴を証
拠だでる比較例を提供すると同時に実際の製造及び好ま
しい実施態様の使用を示すものであるが、それらは本発
明の範囲ｔ−限定するものではない。

実施例Ｉ・−■では、螢光が、水平位置に保持された分
析素子からの螢光発光ｔ＃！ｌ定するために、特に製造
され九（エイムズ・シンｐ４ニー、マイルス・９＆Ｆ）
＋７−ス′、インコーポレーテツド、エルクハート、イ
ンデアナのデイビｙ１ン（Ａｍｅ膳ＣｏｍｐａｎＬＤｔ
ｖｉａｉｏｎ　ｏｆ　）４ｔｌｓｓ　Ｌａｂｏｒａｔｏ
ｒｉｅｓ　Ｉｎｃ、　＊Ｅ１ｋｈａｒｔ、ＩＮ）によシ
）光学繊維壁光計を用いて測定された。この計器は、連
続発光水銀ランデ励起光源、光学繊維読み取り部、螢光
検出用光電子増情管及び読み取られるべき分析素子の機
械的保持器を用いた。この機械的素子保持器は％　５ｅ
ｒａｌ）Ｉ’ｍ・ｒ［株］（七うライブー、登録商標）
反射光度計（エイムズ・カンパニー（緬・ｓ　Ｃｏｒｎ
ｐａｎＦ）ｓ同上）Ｏ保持器と同様である。素子は、水
平位置に静止して保持され、読み取られる露出面は上に
向いておｐ、そして上から読み取られる。螢光計は、表
面に対し９０＠Ｏ角で素子表面を照射する４　０５　ｎ
ｍの波長の励起光源をつくるために、波長干渉フィルタ
ーを備えている。４５０　ｎｍの波長で発すゐ螢光光線
の前面測定は、又パッドの表面と９０′の角でなされる
。

例！−ポリマーなしに製造され九票子 この例は、本発明による試薬移行阻止物質なしに、素子
が製造された場合の実験を報告する。

素子の製造 素子の製造においては、与りられた量の螢光複合体β−
ガラクトース−ウンベリフェロン−フェノ・ぐルビター
ル（β−ＧＵＰＢ）ｔ−％素子に導入することが必要で
ある。この例で用いられたβ−〇ＵＰＢ複合体は、米国
特許第４，２７９，９９２号の例９に記載されているよ
りにして製造した。フェノ・櫂ルビタールは、鎮痙剤、
催眠剤及び鎮静剤として有用である。これらの実験で試
験された素子の製造に用いた溶液は、以下の成分を含有
した：り正常なうさぎの血清　　　　　　　　　８ミリ
リットルーり　　１．２Ｍパイシンナトリウム及び　　
　　　　　　　１０５ｇ０．１ＭＭＩＣ１富水溶液、−
９，０ ３）β−ガツタトシメーイ貯蒙溶ｉｌｌ　　　　　　　
　　　　１−（５０ｍＭパイシンナトリウ＾水溶液ｒ−
中に１６５エイ五を単位（Ａｌｌｌ＠Ｉ　ｕｎｉｔｓ’
）を含むもの、４ｇ、５） ４）　ＩＩＡ溜水　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　１１ｓｌβ−ガツタトシ〆−ヤの１エイ五ズ（Ａ
ｍ・Ｉ）　　ｊｌＬ位ハ、２ＩＣで、０．００３Ｍ０Ｎ
ＰＧ　を含有ｔＡｐＨ８，１の０．、ＯＢ　Ｍ　Ａイン
／ナトリウムの水性緩ＩＩ液中で、１分間に、１．０マ
イク！２４ルのオルト−ニトロフェニル−／−Ｄ−、ｆ
ｆツタトビラノシＰ（ＯＮＰＧ）　　を加水分解して、
オルト−ニトロフェノールを生成する酵素量である。

有機性ｆＩＩＩ液 成　　　分　　　　　　　　　　　　　　　　量１）　
　４．８μＭβ〜ＧＵＰＢ　　７１４７滴１［１０ｍ１
枚の７．６　ｅｓ　Ｘ　１５．２　ｅｍのホワットマン
（％Ｖｈａｔｍａｎ）３１ＥＴ　ろ紙（ホワットマｙ、
インコーーレーデット、／ｌ）７ト７、＝ｘ−＄／ヤー
ｓ／　−（Ｗｈａｔｍａｍ。

した水性ｆｓｐ１１・を含浸し、次に、！ｓＯ℃で１５
分間対流炉中で乾燥した。ついで、水性溶液の乾燥残査
を含有するろ紙に、同様の方法で飽和するまで、有機性
溶液を含浸し、次に再び、５０℃で１５分間対流炉中で
乾燥した。

この含浸紙を銀メッキし九＃１ａｒ”　　＜マイラー。

登録Ｍｉｌｌ）／リエステルフイルム（スリーエム・カ
ン／４ニー、セント・−−ル、建ネソタ（３ＭＣａｍｐ
ａｎｙ、ｓｔ、Ｐａｕｌ、ＭＮ）　）の接着面に貼り、
−面に取り外し可能な裏打ちを有するＹ９１５１１着剤
（スリーエム・カンパニー（３Ｍ　ＣａｍｐａｎｙＬ　
Ｍ上）に更に貼り着けた積層体を形成した。この最後の
積層体１ｋｌＣ１１Ｍ巾のりｌンに裁断し、取シ外し可
能な裏打ちを取シ外してから、８．３５１巾のＴｒ７ｃ
ｉｔｅ■（トリサイト、登録商標）−１！リスチレンフ
イルム（スリーエム＠ｆＪ７パニー　（３Ｍ　Ｃａｍｐ
ａｎｙ）　ｅ同上）の側端から０．６４ｍの位置に貼シ
着は友。トリサイト貼付積層体を、横方向に切断して、
５餌巾の試験片とし、従って最終的試験片の各々は、５
１ＸＩＯ−の含浸紙切片（−にダメント）を具備する。

分析操作 このようにして製造した各試験Ａｔ、ａｏｘｚ量の蒸溜
水に接触させて試験した。

試験具を、装置の試験片保持器に設置し良後、一定量の
試験溶液を、試験具の露出表面にピペットで添加し、試
験片保持器を、螢光検出計に挿入した。

複合体と！−ガラクトシ〆−ゼとｔ３分間反応させ、＋
、後、螢光種（ｇｐ＠ａ量・１）の移動ｔ１含浸紙の露
出表面の異なる位置点から、発光する螢光を走査して測
定した。移行指数、ｂは各試験具の前端及び後端での螢
光信号の平均値に対する試薬／４ツドの中心点での（試
料の添加位置点での）螢光信号の比とし、・て計算した
。

結果 実験番号　　　　　　　　　　　　ｂ ｉ　　　　　　　　　　　　　　ｏ、ｇ　。

２　　　　　　　　　　　　　０．７９３０゜９０ 平均値−０，８３ 標準偏差−０，０６ 結論 この例で述べ九ようにして製造された素子は、移行指数
によって定量されたように、含浸紙の露出表面の異なる
場所で発せられる螢光には、実質的な偏倚のあることを
示した。この現象は、信頼性の欠如の原因とな夛、これ
を容認できない。

を配合する。

この例は、マレイン酸モノエステルポリマーを、第１含
浸工程に用いる水性溶液に含有させ、β−ＧＵＳ　１２
合体を添加した第２含浸工程に用いる第２の有機溶媒溶
液には含有させないで素子を製造し九実験を報告する。

ガントレツツ（Ｇａｎｔｒ＠＋ｃ）　ＡＮ−１３９のモ
ノメチルエステルの合成゛ 無水メタノール５７０−を１ｔのビーカーに入れ、ガン
トレツッＡＮ−１３９５０ｆを磁気撹拌板上で急速撹拌
しながら添加し友。濃硫酸１ｏ声ｔを添加し、スラリー
を室温で１時間撹拌した。温度を５５〜６０℃に上げ、
３時間、Ｖ−カーの蓋を僅かに開けたま〜にしておい友
。この間、大部分の固体状原料は溶解して、僅かに曇っ
た溶液となった。仁の溶液を室温まで冷却し、更に１ｇ
時間撹拌し九。残留固体は全＜ｉｌ＃Ｌなかった。ガン
トレツツムＮ−１３９のモノメチルエステルの約１０チ
（ｗ／ｖ）溶液を４℃で貯蔵し、必要に応じて用いた。

。 素子の製造 素子の製造においては、与えられた量の螢光複合体、！
−ガラクトースーウムペリフエロンーシソマイシン（β
−ＧＵＭ）を各素子に導入することが必要である。この
例で用いた！−〇ＵＳ複合体は、米国特許第４．２７９
．９９２号の例１に述べられているようにして製造した
。シソ！イシｙはｒンタマイシンの特異的結合類縁体で
ある。ｒｙタマイシンは、水溶性の、広いスペクトルを
もつア（ノダリコシドの抗生物質であゐ。ｒンタ！イシ
ンに同頁（１９７２）に記載されているようにして製造
した。

これらの実験で試験され次素子の製造に用いた溶液は、
以下の成分を含有していた： 水性溶液 成　　　分　　　　　　　　　　　　　　　　　量１）
　　ガントレツッＡＮ−１３９のモノメチル　　　　　
　１０ｍエステル （１０％（ｗ／ｖ）メタノール溶液〕 ２）ハイシンナトリウムの１ｌｆＲ１ｆ！　　　　　　
　　　　　　９０ｗ１（５０ｍＭ、　ｐ）１８．５　） 有機性溶液 成　　　分　　　　　　　　　　　　　　　　量１）　
アセトン　　　　　　　　　　　　　　　　　１００ｓ
ｄ２１　　β−ＧＵＳ貯蔵溶液　　　　　　　　　　　
　　　０．２０ｄＣ２２５０μＭツメチルスルホキシド （ＤＭＳＯ）溶液〕 上の水性溶液を用いて、１０．２ｍ巾のホワットｗ　ｙ
　（ｗｈａｔｍａｎ）　３１　ＥＴろ紙ロール（ホワッ
トマン。

インコーポレーテツド、クリフトン、ニューツヤ−ｃ／
　−（Ｗｈａｔｍａｎ、Ｉｎｃ、、Ｃ１１ｆｔｏｎ、Ｎ
Ｊ　）　Ｉ　Ｋ飽和す為まで含浸し、７．５分間、強制
空気オ／奢り−（Ｏｎｒｌｙ）乾［Ｈオパリー・インコ
ーーレーテッド、ニーナ、ウィスｊ　ンシン（Ｏｖ＊ｒ
ｌＦ　Ｉｎｃ、　、Ｎ＊ｅｍａｋ、ＷＩ　）　）中で５
０℃で乾燥した。第冨浸漬液（有機性漕ＩＩ）も同様に
含浸し九。しか為のち、試験＾を例Ｉで述べたようにし
て製造し良。

分析操作 この例で述べたよ５ＫＬで創造した試験具を、施こされ
た試料が０．３Ｍベイシｙナトリウム緩、ＩＩ液にβ−
ガラクトシ〆−ゼを脇見た−８．５の１ｌＩＩＫ（２単
位／ｄ）２５μＬであった他は、例！で述べたと同様の
分析操作を用いて試験した。

結果 実験番号　　　　　　　　　　　　　Ｒｍｌ　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．６
６２　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　０．７８３　　　　　　　　　　　　　　　０．
７７平均値冨０．７４ 標準偏差−０，０７ 結論 この例に述べたようにして製造され九素子は、移行指数
によって定量されたように、含浸厭の露出表面の異なる
場所で発せられる螢光には、実質的な偏倚のあることを
示した。この現象は信頼性の欠如の原因となり、これを
容認できない。

例膳　両含浸工程で４　ＩＪママ−配合するこの例は、
マレイン酸モノエステルｌリマーを、菖ｌ含浸処理に用
いる水性溶液及びそれによってβ−〇ＵＰＢ　　１１合
体を添加した萬２含浸旭理に用いる第２の有機性溶液の
両者に含有させて螢光素子を製造した実験を報告する。

素子の製造 これらの実験で試験された素子全製造するのに用いられ
た溶液は以下の成分を含有してい九：１）正常なうさぎ
の血清　　　　　　　　　　　　　　　５５ｇ２）　　
１．２Ｍパイシンナトリウム及び０．１Ｍ　　　　　　
　５０ｄＭｇＣ１，の水溶液に２１（ｗ／ｖ）のガント
レツツＥ８−２２５を含むもの、−９，０８）！−ｆツ
クトシメーゼ貯蔵溶ＩＩ　　　　　　　　　　　３４ｍ
（０，０５Ｍパイシンナトリウム水溶液１−中に１６５
工イ五ズ単位（Ａｎ＠ｓ　ｕｎｉｔｓ）を含むもの、ｐ
）１８．５ ４１　　蒸溜水　　　　　　　　　　　　　　　　　　
４１．６ｓｇガントレツツＥＳ−２２ｓは陶業的にλ手
可能なガントレツツ２にＮ−１１９のモノエチルエステ
ルである。

１）ガｙトｖｙｙｌｃ８−２２５　　　　　　　　　　
　　　　６ｍ１（５０嘔Ｃｖｒ／マ）工！ノール漕１１
１）！）　ア七）／　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　９４５ｇ３）　β−〇〇ＰＢ、貯蔵溶＊　　　
　　　　　　　　　　　０．５０ｍｇ（９４８μＭＤＭ
８０１１液） 上記の溶液を用いて、その後の素子製造操作は５．１ａ
＋巾のホ、ワットマン（９ｖｈａｔｍａｎ）　８１　Ｅ
Ｔろ紙■−ルを用い、かつ全乾燥時間が墨分間であり九
ことを除いては、倒置においで述べ九とおりでありた。

分析操作 この例に述べたようにして製造された試験具を例ＩＫ述
べたと同様の分析操作を用いて試験した。

結果 １　　　　　　　　　　　　　　０．９８２　　　　　
　　　　　　　　０．９４３　　　　　　　　　　　　
　０．９６平均値”　０．９６ 標準偏差＝　０．０２ 結論 この例において述べられたようにして製造された素子は
、移行指数によって定量され九ように、含浸紙の露出表
面の異なる場所で尭光した螢光が、無視しうるほどの偏
倚しか示さなかった。これは本発明による改良が、例！
及びＨに示されたような先行技術による試験Ａｔ−悩ま
せた信頼性の欠如を克服し九こと、及び更には仁の改良
が移行阻止物質を両含浸操作に含有したことによって損
われなかったことを実証していゐ。

この例は、マレイン酸モノエステル４リマーをβ−〇Ｕ
ＰＢ複合体の含浸に用いる第２の有機性＃Ｉ筐にのみ含
有させて、基質−標識螢光免疫試験素子を製造した実験
について報告する。Ｉリマーは、＠１含浸処理に用いる
水性＃液には含有させなかった。

素子の製造 これらの実験で試験された素子の製造に用いた溶液は以
下の成分を含有していた； 水性ｍｓ 成　　　分　　　　　　　　　　　　　　　　　量１）
正常なうさぎの血清　　　　　　　　　　　　　　　８
−２）　　１．２Ｍパイシンナトリウム、０．１Ｍ　　
　　　　　　２０４ＭｇＣ１，及び０．１係（Ｗ／’マ
）。

アジ化すＦリウム水溶液、４ｓ、。

３）β−がラクトシメーゼ貯賊漕液　　　　　　　　　
　　ｌ−（５０ｍＭパイシンナトリウム緩債液 １−中に１６５エイ五を単位（Ａｍ＠５ｕｎｉｔｓ　）
を含むもの、ｐ）（８，５１４）蒸溜水　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　１１−有機性溶液 成　　　分　　　　　　　　　　　　　　　　　　　量
１１　４．８４Ｍβ−ＧＵＰＢ及び３ｑｂ（Ｗ／Ｖ）　
　　　　　　　１０ｍｇｆントレツツアセトン溶液 上記の溶液を用いて、例！で述べ庚操作によって、試験
具を製造した。

分析操作 この例で述べたようにして製造し九試験具を、試験溶液
及び実施例■に述べ九と同様の分析操作を用いて試験さ
れた。

結果 １　　　　　　　　　　　　　０．９６２　　　　　　
　　　　　　０．９７ ３　　　　　　　　　　　　０．９８ 平均値＝０．９７ 標準偏差”＝０．０１ 結論 この例に述べ友ようにして製造され九素子は、移行指数
によって定量され喪ように、含浸紙の露出表面の異なる
場所から発光した螢光が、無視しうるほどの偏倚しか示
さなかった。これは、本発明による改良が、例！及びｌ
Ｋ示されたような従来技術による試験具を悩ませた信頼
性の欠如を克服したことと共に、移行阻止物質は％纂２
含浸め理（工程）にのみ含有されればよいということを
実証している。

免疫試験素子 この例は、マレイン酸モノエステルＩリマーｔ。

β−ＧＵＰＢ複合体の含浸に用い良路ｇａｌｌｌ性溶液
にのみ含有させて、基質−標識螢光免疫試験素子を製造
し良実験を報告すゐ。ポリマーは、纂ｌ含浸工根に用諭
た水性溶液には含有させなかった。

素子の製造 これらの実験で試験され九素子の製造に用いた＃１液は
、以下の成分を含有していた。

１１　１．２Ｍパイシンナトリスム及び０．１Ｍ　　　
　　　　７．５ｄＭｇＣ１ｍ水＃！Ｆ液、−９，０ ２１７ｃ、／”ルビタールに対する抗血清　　　　　　
　　６−３）β−がラクトシダーゼ貯蔵溶液　　　　　
　　　　０．５−（５０ｍＭパイシンナトリウム水溶液 １−に１７６工イムズ単位（Ａｍｐｓ ｕｎｉｔｓ）を含む、ｐＨ８，５） ４）水　　　　　　　　　　　　　　　　　　１．０−
有機性溶液 １）　　１　’ｌｋ　（ｖ／ｖ）ガントレツツｌＳ−３
３５−１１１５ｄ（ガントレツツＡＮ−１１９のモノイ
ンプロピルエステルアセトン１ｍ） ２）　β−ＧＵＰＢ貯墓漕液　　　　　　　　　　　　
　０．１８８ｍ（９５８声ＭＤＭＳＯ溶液） フエノパルピタールに対する抗体は、フェノパルＶター
ル−がウパイン−（ｂｏ’マ１ｎ・、ウシ科の動物）血
清アルプイン免疫原複合体で免疫化されたりさぎから採
集された。上記の溶液を用いて、そＯＩＩの素子調造操
作がＬｌ　ａｗ巾のホヮットマンーー）３１１Ｔろ紙−
−ルを用い大ことを除いては、倒置に述べたとお夛であ
った。

分析操作 この例に述べたようにして製造し九試験＾を、試料が、
Ｉｓ　囁（ｖ／マ）の正常な人間の血清及びフェノ・譬
ルＶタール（３μｔ／−）を含有する水性ＩＩＩＩ液３
０ＪＩＡ　であったことを除いては、例ＩＫ述べ九と同
様の分析操作を用−て試験し九。

結果 実験番号　　　　　　　　　　Ｒ１ １１，０４ ２０，９８ ３０，９９ 平均値”１．００ 標準偏差口Ｏ，ＯＳ 結論 この例で述べ友ようにして創造し九素子は、移行指数に
よって定量されたように、含浸紙の露出表面の異なる場
所から発光する螢光が、無視しうる種変の偏倚しか示さ
なかつ九。これは、本発明による改良が、例！及び皿に
示されたような、先行技術を悩ませ几信頼性の欠如を克
服していることを実証している。更に、この例の実験は
、移行阻止物質と、完全基質−標識免疫試験系との両立
性を実証している。

この例は、マレイン酸モノエステルポリマーを、β−Ｇ
ＵＳ　複合体の含浸に用いた第２の有機性溶液にのみ含
有させて、基質−標識螢光免疫試験素子を製造した実験
について報告する。ポリマーは、第１含浸工程に用い念
水性溶液には含有させなかつ次。

素子の製造 これらの例で試験した素子の製造に用いたＩｓ液は、以
下の成分を含有していた： 水性溶液 成　　　分　　　　　　　　　　　　　　　　　　　量
１）　　１．２Ｍパイシンナトリウム及び０．１Ｍ　　
　　　　　７．５ｄＭｇＣ１，水溶液、−９，０ ２１ｒンタ！イシｙに対する抗血清　　　　　　　　　
１．２−３）！−ガラクトシメー臂貯賦潴筐　　　　　
　　　　０．５−（５０ｍＭパイシｙナトリウム水溶液 １−に１６０ニイムＩ単位（Ａｎ１＠５ｕｎｉｔｓ）を
含むもの、ＦＨ８，！５）４）水　　　　　　　　　　
　　　　　　　　５．８−有機性溶液 成　　　分　　　　　　　　　　　　　　　　　　　量
１）　　２慢（ｗ／ｖ）ガｙトレツツＥ８−２’ｌｔＨ
の　　　　　　１！ｉ−七ノエチルエステルのアセトン
溶液 ２１　２．８ｍＭβ−ＧＵｆ９貯或溶ｉ１ｍ　　　　　
　　　　　　　２！Ｓ、’１ｌＬＬ（０，００５Ｍギ酸
すＦリウム、０．１饅（Ｗ／’マ）アゾ化ナトリウム中
、ｐＨａ、ｓ） 上記の溶液を用いて、装置に述ぺ喪操作によって、試験
具を製造した。

分析操作 この例で述べたようにして創造し九試験具を、試験溶液
、及び試料が１０−の正常な人間の血清とｒンタマイシ
ン（４μｆ／ｗｔ）を含有する水性溶液３０μｔ　であ
ることを除いては例１に述べたものと同様の分析操作を
用いて、試験し友。

結果 ！ｌ！験番号　　　　　　　　　　　Ｒｍｌ　　　　　
　　　　　　　　０．９５２　　　　　　　　　　　　
０．９４ ３　　　　　　　　　　　　０．９５ 平均値冨０．９５ 標準偏差−０，０１ 結論 完全基質−標識螢光免疫試験系が分析素子に包含されて
いるこの例によって、本発明によシ達成され九改良もま
た実証されている。

先の例で用いられた複合体ではなく、むしろ有機染料を
用いる実験は広いスペクトルを有する試薬系を用いる本
発明の移行阻止物質の実用性を実証した。これは、以下
の例によって示される。

に配合し、ポリマーはＩＩＩＥＩ・第２浸漬液のこの例
は、緩＊液及びプａＳフェノールブルー染料を含有する
試験片が第１の水性溶液が緩曽液を含有し、第２の有機
性溶液が周知〇−指示薬であるブロモフェノールブルー
染料を含有し、しかしいずれの溶液も本発明にょゐ移行
阻止物質を含有しないで製造された場合についての実験
を報告する。

素子の製造 これらの実験において試験された素子の製造に用いた溶
液は以下の成分を含有してい友：水性溶液 成　　　分　　　　　　　　　　　　　　　　　　　量
１）　　０．６Ｍハイシンナトリウム及び０．０５Ｍ　
　　　　　１０−ＭｇＣ１＝　水溶液、Ｐ）１９．０ 有機性溶液 成　　　分　　　　　　　　　　　　　　　　　　　量
１）ツロ峰フェノール！ルー　　　　　　　　　　　　
　５．６ｑ２１　　アセトン　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　２〇−上述の溶液を用いて、その後の
素子製造操作は、５．１　ｃｍ巾のホワットマン（Ｗｈ
ａｔｍａｎ　）　５４ろ紙ロールを用いたことｔ−除い
ては、例■において述べたとおりであった。

分析操作 ３枚の試験片ｔ−実験台の上端に載せ試験片の色の一様
性を注意深く観察しなから冨浸紙の中心に、ゆっくりと
２０μｔの水をピペットで施こした。

結果 ３枚の試験片の各々では、大部分のブロモフェノールブ
ルー染料は、含浸紙の中心から末端方向へ洗い流され、
中心点の色が弱まった。

結論 目視検査だけでも、この例で報告したようにして製造し
た試験片の色が一様性を示さないことを観察するのに十
分であつ九。

例■　ブロモフェノールブルー染料を第２浸漬液に配合
し、ポリマーを第２浸漬箪のみに配合する。

こノ例は、緩衝液及びブロモフェノールツルー染料を含
有すゐ試験片が第１の水性溶液が緩−液を含有し、第２
の有様性溶液がブロモフェノールブルー染＄４及び−ｖ
レイン酸令ノエステルｆ！　１７　マーを含有して、製
造されえ場合についての実験を報告する。

素子の製造 これらの実験で試験された素子の製造で用いた溶液は、
以下の成分を含有していた。

水性溶液 成　　　分　　　　　　　　　　　　　　　　　　量１
）　　０．６Ｍパイシンナトリウム及び０．０５Ｍ　　
　　　　１０ｍ１ＭｇＣＩ量水溶液、ｐ）１９．０ 有機性Ｓ＊ 成　　　分　　　　　　　　　　　　　　　　　　　量
１）ブロモフェノールブルー　　　　　　　　　　　　
　５．６ｑ２１　　ｔｆｙトｖツｙＥｓ−２２Ｉｓ　　
　　　　　　　　　　　１．２ｙｄ（！ｌＯ％ｖ／ｖエ
タノール溶液） ３）　アセトン　　　　　　　　　　　　　　　　　　
２〇−上記の溶液を用いて、その後の素子製造操作は、
５．１　ａｓ巾のホワットマン（Ｗｈａｔｍａｎ　）　
５４ろ紙ロールを用いたことを除いては、例ＩＫシいて
述べたとおや、であつ九。

分析操作 分析操ＰＩＩＩ櫨儒■と同様であった。

結果 ３枚の試験片の各々では、ブロモフェノールブルー染料
は、中心から末端方向へ全く又ｑはとんど、洗い流され
ず、含浸紙はそのｔ−で全体に亘って一様な色調強度を
有することが目視観察された。

結険 この例は、含浸紙中の、例えばブロモフェノールツルー
染料のような全く異なるタイプの試薬についても、本発
明によって改良が達成されることを証明している。

具体例について述べてきたが、本発明の細部にわたつ１
数々の変化が、本発明の範囲から逸脱する仁となしに、
行われるであろう。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、−）　　液体中の組成物であって、分析対象物−検
   出系の少なくと４１つの試薬からなるものを、非イオン
   化形態では皺液体に不溶でかつイオン化されると骸濠体
   に溶解する試薬移行阻止物質をイオン化するＯに効果的
   な条件下で、担体に包含せしめ、ついで、この担体會、
   乾繰する工程；及び次に、 伽）工１ｉ（ａ）で得られた担体に、工程−）の液体と
   は異なる液体中の第２ｔ）＠酸物であって、工程−）の
   少なくとも１つの試薬と反応し、分析対象−一検出系０
   １１１１の試薬、及びその非イオン形態で社、該液体に
   溶解する試薬移行阻止物質とからなるものを包含せしめ
   、ここで該液体は、素子が試料と接触するまでは、工程
   −）の少なくとも１つの試薬と第２の組成物が反応す為
   ことを妨げ、試料と接触す、１１までは、移行阻止物質
   がイオン化することを妨げるのに効果的である液体であ
   り、ついで、この担体全乾燥する工程からなることを特
   徴とする特定の分析対象物に関しての液体試料の測定に
   有用な分析素子の製造方法。 ２、試薬移行阻止物質が、カルビン酸、１１　リマーで
   ある特許請求の範囲第１項記載の創造方法。 ３、　　カルーン酸／　ＩＪマーカ、（１）メチルビニ
   ルエーテルとマレイン酸モノメチルエステルの共重合体
   、（２）メチルビニルエーテルとマレイン酸モノエチル
   エステルの共重合体、（３）メチルビニルエーテルとマ
   レイン酸モノプロピルエステルの共重合体、（４）メチ
   ルビニルエーテルとマレイン酸モノグチルエステルの共
   重合体、（５）酢酸ビニルとマレイン酸モノエチルエス
   テルの共重合体、（６）酢酸ビニルとマレイン酸モノエ
   チルエステルの共重合体、（７）エチレンとマレイン酸
   モノメチルエステルの共重合体、ｆ８）エチレンとルイ
   ン酸モノエチルエステルの共重合体、（９）オクタデシ
   ルビニルエーテルとマレイン酸モノメチルエステルの共
   重合体、及びａ〔オクタデシルビニルエーテルとマレイ
   ン酸モノエチルエステルの共重合体からなる群よ〉選ば
   れたものである特許請求の範囲第２項記ｓｏｎｇ造方法
   。 ４、　カル耐ン酸Ｉリマーをイオン化すゐのに効果的な
   条件が、水性液体の使用及び少々くとも約５のＰＪ（を
   保つことにより達成される特許請求の範囲第２項又は第
   ３項記載の製造方法。 ５、試薬移行阻止物質が、スルホン酸ぼりマーである特
   許請求の範囲第１項記載の製造方法。 ６、　スルホン１Ｗｘｌｅ　ＩＪママ−、Ｉリスチレン
   スルホン酸塩、２−アクリルアミド−２−メチルデロノ
   ４ンスルホン酸とスチレｙの共重合体及びぼりビニルス
   ルホン酸からかゐ群よシ選ばれたものである特許請求の
   範囲第５項記載の製造方法。 ７、スルホン酸ぼり！−をイオシンｆｔ５ｔ状濯効１１
   的な条件が、水性液体を用い、その−が、用いられた特
   定のスルホン酸ＩリマーのｐＫａと関連し九範囲に保九
   れ、スルホン酸基がイオン化されるようにして達成され
   る特許請求の範囲第５項又は第６項記載ＯＳ造°方法。 ８、試薬移行阻止物質議ある一範日では、実質的に、イ
   オン化され、異なった一範囲では、実質的に、イオン化
   されないボリアインである特許請求の範囲第１項記載の
   製造方法。 ９、　１１！リアミンが、ポリリジン、ポリアルギニン
   及びポリヒスチソンからまる群よｐ遺ばれ虎ものである
   特許請求の範囲第８項記載の製造方法。 １０　／リアインをイオン化するのに効果的彦条件が、
   水性液体管用い、その−が、用いられた特定のボリア１
   ンのｐＫａに関連した範囲に保九れて・アイン基がイオ
   ン化されるようにして達成される特許請求の範囲第８項
   又は第９項記載の製造方法。 １１、試薬移行阻止物質が、イオン化しうみフェノール
   である特許請求の範囲第１項記載の製造方法。 １２、イオン化しうるフェノールが、Ｉリテロシンであ
   る特許請求の範囲第１１項記載の製造方法。 １３　　イオン化しうるフェノールをイオン化するのに
   効果的な条件が水性液体を用い、その−が、用いられ九
   特定のフェノールのｐＫａに関連し光範囲に保たれ、フ
   ェノール基がイオン化されるようにして達成される特許
   請求の範［１１１＆１項又は第１２項記載の製造方法。 １４、工ＩＩ　（ａ）の液体が、水性液体である特許請
   求の範囲第１項記載の製造方法。 １５、工程ｔｈ）の液体が、有機溶媒である特許請求の
   範囲第１項記載の製造方法。 １６、有機溶媒が、トルエン、アセトン、クロロホルム
   、ｎ−１０パノール、塩化メチレン及びＶクロルエチレ
   ンから選ばれ、友ものである特許請求の範囲第１５項記
   載の製造方法。 １７、反応性試薬が、分析対象物に対するＩＰ＃異的結
   合相手からなる特許請求の範囲第１１項記載の製造方法
   。 １８、工程−）の少なくと４１つの試薬が、分析対象物
   に対する特異的納金相手及び標識成分を添義するために
   、分析対象物部分又はその４Ｉ異的納会類縁体に納金し
   九標織成分から成る標識被合体と反応しうる成分である
   特許請求の範囲 の製造方法。 １９、工１１伽）及び工Ｓ伽）に先立ち、素子が試料と
   接触するまでは、指示薬が工程ら）の試薬と反応するの
   を妨げるのに効果的な液体中の指示薬を、担体に含浸せ
   しめ、ついでこの担体を乾燥する付加工程から彦る特許
   請求の範囲第１項記載の製造方法。 ２０、指示薬がテトラアルキルペンジジｙからなる特許
   請求の範囲第１９項記載の製造方法。 ２１、（ａ）　　水性液体中の組成物であって、β−ガ
   ラクトシ〆−ゼ及び分析対象物に対する抗体からなるも
   のを、マレイン酸モノエステル４リマーのカルｌキシル
   基をイオン化するのに効果的な条件下で、担体に含浸せ
   しめ、ついで、この担体を乾燥する工程；及び、次に、 （ｂ）　　工程伝）で得られた担体に、有機性液体中の
   組成物であって、βーガヲクトシルーウンペリフエロン
   ー分析対象物又は秀析対象物類縁砿合体及びマレイン酸
   モノエステルポリマーからなるものを含浸せしめ、つい
   で、との担体を乾燥する工程からなる特許１求の範囲第
   １項記載の製造方法。 ２２、　（ａ）水性液体中の組成物であって、β−ガラ
   クトシ〆−ゼ及びｒンタマイシンに刺する抗体からなる
   ものを、マレイン酸モノエステルＩリマーのカルＩキシ
   ル基ｔイオｙ化するのに効果的な条件下で、担体に含浸
   せしめ、ついで、この担体を乾燥する工程；及び、次に
   、 缶）工ＩＮ＆）で得られ九担体に、アセトン含有液体中
   の組成物であって、！−ガククトｖ−ルーウン（リフエ
   ■ンーシノマイシン禎合体、及びマレイン酸モノエステ
   ルＩリマーからなるｔのｔ含浸せしめ、次に、との担体
   を乾、燥する工程からなる特許請求の範囲第１項記載の
   製造方法。 お、アセトン含有液体中の組成物であって、３゜３’、
   ！Ｓ、５’−テトラメチルペンｖｓ／ンからなるものを
   、担体に含浸せしめ、ついで、こＯ担体會乾燥する工種
   ；次に、 上の工程で得られた担体に、本性液体中の組成物テアっ
   て、グルコース、ペルオ中シ〆−ゼ、グルコースオキシ
   メーゼア／−票及びテオフイリｙに対すゐ抗体からなる
   ものを、！レイ７Ｍ４ノエステルＩリマーのカルがキシ
   ル基をイオン化するの担体を乾燥する工程；及び欲に、 上の工程で得られた担体に、アセトン含有液体中の組成
   物であってフラビンアデニンジヌクレオチド−テオフィ
   リン複合体及びマレイン酸モノエステルＩリマーからな
   るものを含浸せしめ、次に、この担体を乾燥する工程か
   らなる特許請求の範囲第１９項記載の製造方法。 ス、水性液体中の組成物であって、グルコース、ベルオ
   キシダーゼ、グルコースオキクメーゼアＩ酵素及び分析
   対象物に対する抗体からなるものを１マレイン酸モノエ
   ステルＩリマーのカルがキシル基をイオン化するのに効
   果的な条件下で、担体に含浸せしめ、ついで、この担体
   を乾燥する工程；及び、次に、 上の工程で得られた担体に、フラビンアデニンジヌクレ
   オチド−分析対象物又は分析対象物類縁接合体、３．３
   ’、５．５’−テトラメチルベンジジン及びマレイン酸
   モノエステルＩリマーからなる組成物を含浸せしめ、つ
   いで、この担体を乾燥する工程からなる特許請求の範囲
   第１項記載の製造方法。