CN1458163A - 泽泻甾醇提取物及其制备方法、质量控制方法 - Google Patents

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Abstract

本申请采用超临界C02流体萃取泽泻制得泽泻总甾醇提取物，其中的泽泻醇B单乙酸酯(bm)含量不少于3.5％，按分光光度法测定的总甾醇含量以泽泻B单乙酸酯计不少于50％的部位提取物。此提取物有效成分含量高，能够达到中药二类新药的开发要求，我们在此基础上进一步将其制成具有特定剂型的产品，具有抗脂肪肝、高血压、高血脂的功效。同时，本申请中还提供了用高效液相法测定原料及提取物中泽泻醇B单乙酸酯含量的方法，及用分光光度法测定原料及提取物中总甾醇含量的方法，作为控制原料及产品质量的方法。

Description

泽泻甾醇提取物及其制备方法、质量控制方法
技术领域
本发明涉及泽泻甾醇提取物及其制备方法、泽泻原料及提取物的质量控制方法。
背景技术
泽泻具有抗脂肪肝、高血压及高脂血症等作用，其有效物质主要为甾醇类。通常以乙醇提取甾醇类，方法是：取泽泻粉(过20目筛)，用90％乙醇回流提取，回收乙醇，得浸油，收率为6％左右。将浸油上大孔树脂(AB-8)柱，分别以水、40％乙醇、95％乙醇洗脱，各部收率分别为27.4％、5.7％、34.9％。乙醇洗脱部位即为泽泻大孔树脂精制物。用比色法测定总甾醇含量，以泽泻B单乙酸酯计，该精制物中总甾醇含量为10％，由于精制物中总甾醇含量过低，会影响此有效部位发挥疗效，且不符合中药二类新药开发要求，不能开发成中药二类新药。
发明内容
本申请采用超临界CO2流体萃取泽泻，并对此工艺进行了进一步优选，优选出最佳化的工艺条件，制得的提取物中泽泻醇B单乙酸酯(bm)含量不少于3.5％，按分光光度法测定的总甾醇含量以泽泻B单乙酸酯计不少于50％。此提取物有效成分含量高，能够达到中药二类新药的开发要求，我们在此基础上进一步将其制成具有特定剂型的产品，现正在进行中药二类新药的申报工作。同时，本申请中还提供了用高效液相法测定原料及提取物中泽泻醇B单乙酸酯含量的方法，及用分光光度法测定原料及提取物中总甾醇含量的方法，作为控制原料及产品质量的方法。
一、超临界CO2流体萃取(SFE-CO2)泽泻总甾醇的工艺研究
影响泽泻甾醇SFE-CO2的因素有萃取温度、萃取压力、药材粒度、CO2流量及萃取时间等。CO2的临界温度为31.1℃，临界压力为7.32Mpa。常用的超临界萃取区域为温度为31～92℃，压力为5.8～30.0Mpa。因为在该区域内，只要压力或温度稍加改变，超临界流体的密度就产生较大的变化，对溶质的溶解度也相应地产生较大的变化。这一特征也使得萃取物与超临界流体可以很方便地得以分离。超临界CO2分离纯化植物油脱臭物中植物甾醇(甾醇作为萃余物，留在萃取釜中)的试验结果表明，在一定温度下，压力低时，CO2溶解能力小，甾醇收率高，但纯度低；相反，压力高时，CO2溶解能力大，甾醇损失大，但纯度高。在相同压力下，温度升高，CO2溶解能力减小，甾醇收率提高，但纯度降低。为了确定泽泻甾醇SFE-CO2正交试验的水平，我们进行了泽泻总甾醇超临界CO2萃取预试验。
(一)萃取工艺预试验
预试验的条件根据以往类似物的萃取条件和初试而定。
1、药材的鉴定与前处理
萃取所用泽泻为泽泻药材除去杂质，喷淋清水，稍润切制而成的干燥厚片，原药材应符合中国药典2000版一部P184泽泻项下的规定。
2、泽泻总甾醇超临界萃取预试验
(1)固定萃取温度、压力、时间及流量，考察药材粒度的影响萃取条件温度：60℃；压力：23MPa；时间：1.5h；流量：15～18kg/h。药材粒度及萃取结果见表1。
       表1 药材粒度对泽泻甾醇SFE-CO2的影响粒度(目)     得油率(％)    油中Bm含量(％)     油中总甾醇含量(％)80           1.36          4.35               53.0660           1.40          4.31               53.4440           1.25          4.30               53.2020           1.03          4.22               53.465～10        0.75          3.97               53.37
(2)固定萃取压力、时间、流量及药材粒度，考察温度的影响萃取条件压力：23MPa；时间：1.5h；流量：15～18kg/h；粒度：60目。萃取温度及萃取结果见表2。
        表2萃取温度对泽泻甾醇SFE-CO2的影响温度(℃)    得油率(％)     油中Bm含量(％)      油中总甾醇含量(％)80          0.84           2.89                49.2670          1.36           3.59                52.4160          1.40           4.31                53.4450          1.21           4.24                57.9040          0.87           3.69                50.78
(3)固定萃取温度、时间、流量及药材粒度，考察压力的影响萃取条件  温度：60℃；时间：1.5h；流量：15～18kg/h；粒度：60目。萃取压力及萃取结果见表3。
         表3 萃取压力对泽泻甾醇SFE-CO2的影响压力(MPa)    得油率(％)    油中Bm含量(％)    油中总甾醇含量(％)35           1.56           2.97             48.5330           1.47           3.86             50.6926           1.45           4.05             56.8223           1.40           4.31             53.4420           1.18           4.21             52.2117           0.86           3.82             48.32
(4)固定萃取温度、压力、时间及药材粒度，考察流量的影响萃取条件温度：60℃；压力23 MPa；时间：1.5h；粒度：60目。CO2流量及萃取结果见表4。
        表4 CO2流量对泽泻甾醇SFE-CO2的影响CO2流量(kg/h)  得油率(％)       油中Bm含量(％)     油中总甾醇含量(％)25～28         0.93             4.32               53.2520～23         1.39             4.35               53.5615～18         1.40             4.31               53.4410～13         1.33             4.46               53.325～8           0.75             4.33               53.27
(5)固定萃取温度、压力、药材粒度及流量，考察时间的影响萃取条件温度：60℃；压力23MPa；CO2流量：15～18kg/h；粒度：60目。萃取时间及萃取结果见表5。
        表5 萃取时间对泽泻甾醇SFE-CO2的影响萃取时间(h)  得油率(％)    油中Bm含量(％)  油中总甾醇含量(％)2.5          1.49          4.25            53.242            1.47          4.27            53.291.5          1.40          4.31            53.441            1.11          4.39            53.57
(6)两级分离罐中萃取物的Bm和总甾醇含量比较
由于压力或温度稍加改变，超临界流体的密度就产生较大的变化，对溶质的溶解度也随之产生较大的变化。这一特征不仅使萃取物与超临界流体可以很方便地得以分离，而且通过使用多级分离罐及改变分离温度和/或压力，使萃取物进一步纯化成为可能。我们考察了两级分离罐中萃取物的Bm和总甾醇含量，结果见表6。
         表6 两级分离罐中萃取物的Bm和总甾醇含量比较
                                                        油中总甾
             分离压力   分离温度   得油率   油中Bm试验号   分离罐号
                                                        醇含量
             (MPa)      (℃)       (％)     含量(％)
                                                        (％)
         I    8          50         1.06    4.21        53.651
         II   6          40         0.39    4.66        54.43
         I    8          50         0.97    3.92        52.852
         II   6          40         0.35    4.16        53.07
         I    8          50         1.10    4.67        53.063
         II   6          40         0.39    3.40        54.38
上述试验萃取条件：萃取温度60℃，萃取压力23MPa，药材粒度60目，CO2流量15～18kg/h，萃取时间1.5h。
由预试结果可以看出，泽泻甾醇SFE-CO2的最佳条件应在：压力20～26MPa、温度50～70℃、CO2流量10～23kg/h、药材粒度20～60目、时间1～2小时范围之内。考虑到超临界流体萃取操作参数(如温度、压力等)与收率或有效成分的浓度之间关系的多样性(如有S形、抛物线形等)及变化趋势的非单一性，我们把泽泻甾醇SFE-CO2正交试验的水平设置在压力20～26MPa、温度50～70℃、CO2流量10～23kg/h、药材粒度20～60目、时间1～2小时范围之内，以便筛选出真正的最佳萃取条件。
由表6可见，两级分离罐中萃取物的Bm和总甾醇含量无明显差异，因此两级分离罐中的萃取物可以合并。(二)萃取工艺正交试验
1、考察指标及正交表的确定
泽泻的有效成分在脂溶性部位，主要是总甾醇(以Bm计)，故选择得油率、油中Bm和总甾醇含量作为工艺研究的考察指标。影响指标的主要因素是萃取温度(A)、萃取压力(B)、萃取时间(C)、CO2流量(D)和药材粒度(E)。根据预试验结果，按五因素三水平，设计正交表，见表7。根据L18(37)正交表安排试验。
  表7 泽泻SFE-CO2正交试验因素水平表因素水     A        B          C       D           E平         T(℃)    P(Mpa)     t(h)    Ft(kg/h)    粒度(目)1          70       26         2       20-23       202          60       23         1.5     15-18       403          50       20         1       10-13       60
2、实验方法
(1)超临界CO2萃取方法：
称取经粉碎并于65℃干燥8小时的泽泻药材300g，装入1L提取罐中，按正交表试验条件进行萃取，并于分离罐II(50℃，8Mpa)和分离罐III(40℃，6Mpa)中进行分离，得泽泻油，称定重量，计算得油率，并测定油中Bm和总甾醇含量。
(2)Bm测定方法
取泽泻提取物适量于10ml容量瓶中，精密称定，加入4ml乙腈超声溶解后，加乙腈至刻度，摇匀后取250μl于2ml的容量瓶中，乙腈定容、过微孔滤膜(0.45μm)，进样20μl于高效液相色谱仪。流动相：乙腈-水(65：35)，检测波长λ为208nm，流速1ml/min。测定峰面积，以外标法计算即得。
(3)总甾醇含量测定方法
对照品溶液的制备精密称取对照品泽泻醇B单乙酸酯(Bm)10mg，置于10ml容量瓶中，加氯仿溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml中含泽泻醇B单乙酸酯1.0mg)。
标准曲线的制备  对照品溶液0，20，40，60，80，100，120μl分别加入具塞试管中，晾干，各精密加入新鲜配制的5％香草醛-冰醋酸0.2ml，高氯酸0.8ml，混匀，密塞。置60℃水浴中加热15分钟，立即冷却后再加5ml冰醋酸，混匀，以第一份为空白，照分光光度法(《中国药典》2000版第一部附录VB)，在555nm波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
供试品含量测定  取泽泻油约0.05g，置于称量瓶中，精密称定，用6ml氯仿溶解并转移到10ml容量瓶中，加氯仿稀释至刻度。吸取20μl加入具塞试管中，照标准曲线的制备项下的方法，自“晾干，加入新鲜配制的5％香草醛-冰醋酸0.2ml”起，依法测定吸光度，从标准曲线中求得供试品溶液中总甾醇浓度(μg/ml)，计算，即得。
3、正交试验结果  正交试验极差及方差分析结果见表8、表9。
                    表8 泽泻SFE-CO2正交试验及极差分析表列号
      A         B        C        D       E       F      G      y1    y2    y3    y11    y22     y33    Y试验号1         1         1        1         1         1          1      1      1.31    53.62  3.56   93.75   24.39  11.58    129.722         1         2        2         2         2          2      2      0.88    52.10  3.70   48.96   13.52  15.02    77.503         1         3        3         3         3          3      3      0.41    50.46  3.09   0       1.79   0        1.794         2         1        1         2         2          3      3      0.90    53.81  3.15   51.04   25.75  1.48     78.275         2         2        2         3         3          1      1      1.15    57.89  4.35   77.08   54.94  31.03    163.056         2         3        3         1         1          2      2      1.06    54.67  4.84   67.71   31.90  43.10    142.717         3         1        2         1         3          2      3      1.35    64.03  3.95   97.92   98.86  21.18    217.958         3         2        3         2         1          3      1      0.90    62.90  4.35   51.04   90.77  31.03    172.859         3         3        1         3         2          1      2      1.37    53.75  4.34   100     25.32  30.79    156.1110        1         1        3         3         2          2      1      0.75    52.78  3.49   35.42   18.38  9.85     63.6511        1         2        1         1         3          3      2      1.30    53.29  4.06   92.71   22.03  23.89    138.6312        1         3        2         2         1          1      3      0.84    52.25  3.61   44.79   14.59  12.81    72.1913        2         1        2         3         1          3      2      1.30    52.49  5.12   92.71   16.31  50       159.0214        2         2        3         1         2          1      3      0.94    50.21  3.94   55.21   0      20.94    76.1415        2         3        1         2         3          2      1      1.12    51.55  4.48   73.96   9.59   34.24    117.7816        3         1        3         2         3          1      2      1.13    64.19  3.65   75.00   100    13.79    188.7917        3         2        1         3         1          2      3      1.02    52.00  4.20   63.54   12.80  27.34    103.6918        3         3        2         1         2          3      1      1.35    50.57  4.95   97.92   2.58   45.81    146.30K1     483.48    837.40     724.2     851.5     780.2      786.0      793.4                        629.82K2     736.97    731.86     826.01    707.4     598.0      723.3      862.8       G＝2206.14       686.14K3     985.69    636.88     645.93    647.3     828.0      696.9      550.0       CT＝270391.9     427.87K1 2   233752.9  701238.8   524465.6  724967.1  608680.8   617796     629042                       396673K2 2   543124.8  535619.1   698912.7  500386.5  357568.1   523134     744354.8                     470788K3 2   971584.8  405616.1   417225.6  419010.2  685567.4   485613.9   302533                       183073R*6     1748462   1642474    1640604   1644364   1651816    1626544    167292                       258.27
表中：y1为得油率(％)，y2为总甾醇含量(％)，y3为Bm含量(％)，y11、y22和y33分别为y1、y2和y3在0-100间标准化后的值，y11＝(y1-y1min)/(y1max-y1min)×100％，y22＝(y2-y2min)/(y2max-y2min)×100％，y33＝(y3-y3min)/(y3max-y3min)×50％；Y＝y11+y22+y33。G＝∑y；CT＝G2/n；R*6＝K1 2+K2 2+K3 2
               表9 泽泻SFE-CO2正交试验方差分析表方差来源           偏差平方和           自由度          均方        F比        显著性SA               21018.539              2           10509.270    5.879        .032SB               3353.787               2           1676.893     .938         .436SC               3042.115               2           1521.058     .851         .467SD               3668.762               2           1834.381     1.026        .407SE               4910.860               2           2455.430     1.374        .314误差               12512.848              7           1787.550
F0.01(2，7)＝9.55  F0.05(2，7)＝4.74其中：偏差平方和S＝R*6/6-CT；  均方MS＝S/υ(υ为自由度)；F＝S/误差
表9的方差分析结果表明，因素B、C、D、E在本试验设计中无显著性影响，因素A在本试验中有显著差异。根据表8极差分析结果，最佳萃取工艺为A3B1C2D1E3，即萃取温度(A)为50℃、萃取压力(B)为26 Mpa、萃取时间(C)为1.5h、CO2流量(D)为20-23kg/h、药材粒度(E)为60目。
最佳工艺验证：按照正交试验选定的最佳条件，重复进行了三次实验，见表10。
         表10 最佳条件提取试验结果批次  得油率(％)    油中Bm含量(％)      油中总甾醇含量(％)1     1.453             4.35                  62.32     1.410             4.21                  57.43     1.533             4.44                  56.9平均  1.465             4.33                  58.87根据上述萃取工艺研究结果，确定泽利肝原料的萃取工艺为：取泽泻粉末(过60目筛，含水量＜5％)，装入超临界CO2萃取罐，调节萃取压力为26Mpa、温度为50℃、CO2流量为20-23Kg/h、萃取1.5h，得萃取物。
与常规的溶剂提取法相比：超临界CO2流体萃取具有操作周期短，效率高；二氧化碳价廉易得，无毒、无害，不存在有机溶剂残留等优点；另外，工艺过程控制在接近室温条件和缺氧的提取系统中，可防止热敏成分的氧化和降解。超临界二氧化碳对脂类物质植物甾醇具有较好的溶解性。经实验证明，采用本申请的最佳工艺提取泽泻甾醇，所得提取物中泽泻醇B单乙酸酯(bm)含量不少于3.5％，按分光光度法测定的总甾醇含量以泽泻B单乙酸酯计不少于50％，能够达到中药二类新药的要求，从而能够开发成商业化的产品，在产业上制备，并能用于临床，超越了以前仅限于实验室小量提取和动物实验的阶段，实现了科研成果向应用的转化。
二.泽泻原药材的质量控制方法
为提高产品质量，应从控制原料质量入手，因此制定了定量测定原料中总甾醇和泽泻醇B单乙酸酯(Bm)含量的方法。
1.总甾醇的含量测定
1.1对照品溶液的制备    精密称取对照品泽泻醇B单乙酸酯(Bm)10mg，置于10ml容量瓶中，加氯仿溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml中含泽泻醇B单乙酸酯1.0mg)。
1.2标准曲线的制备  对照品溶液0，20，40，60，80，100，120μl分别加入具塞试管中，晾干，各精密加入新鲜配制的5％香草醛-冰醋酸0.2ml，高氯酸0.8ml，混匀，密塞。置60℃水浴中加热15分钟，立即冷却后再加5ml冰醋酸，混匀，以第一份为空白，照分光光度法(附录VB)，在555nm波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
1.3供试品含量测定  取泽泻药材粉末(过60目筛)约0.5g，精密称重，置25ml容量瓶中，精密加入15.0ml氯仿，精密称重，超声提取(功率250W，20KHz)30分钟。滤纸擦干容量瓶外部，放冷，精密称重，氯仿补足重量，摇匀，过滤，取续滤液80μl加入具塞试管中，照标准曲线的制备项下方法，自“晾干，加入新鲜配制的5％香草醛-冰醋酸0.2ml”起，依法测定吸光度，从标准曲线读出供试品溶液中总甾醇含量(μg/ml)，计算，即得。泽泻中含总甾醇以Bm计，不得少于1.25％。
2.高效液相色谱法测定泽泻醇B单乙酸酯(Bm)的含量
2.1色谱条件与系统适应性试验  用十八烷基硅烷键合相为填充剂；乙腈-0.01mol/L磷酸盐缓冲液(pH6.8)(67∶33)为流动相；检测波长为208nm。理论塔板数按泽泻醇B单乙酸酯峰计算应不低于6000。
2.2对照品溶液的制备  精密称取泽泻醇B单乙酸酯(Bm)3mg，置5ml容量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取10μl、40μl于2ml容量瓶，加乙腈稀释至刻度，摇匀，过膜(0.45μm)，即得(每1ml中含泽泻醇B单乙酸酯分别为0.003mg、0.012mg)。
2.3供试品溶液的制备  称药材粉末(超细粉碎)约0.1g，精密称定，置于10ml容量瓶中，加入8ml乙腈，浸泡1h后超声提取(功率250W，20KHz)30min，取出，放冷，加乙腈至刻度，摇匀，过滤，取续滤液过膜(0.45μm)，即得。
2.4测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入高效液相色谱仪，测定峰面积，以外标法二点法计算，即得。本品含泽泻醇B单乙酸酯不得少于0.05％。
三.泽泻油(泽泻甾醇提取物)的质量控制方法
泽泻油为泽泻科植物泽泻Alisma orientalis(Sam.)Juzep的干燥块茎，经粉碎后采用以上条件经CO2超临界萃取得到的油状物。为棕红色液体；气香，味苦凉。【检查】相对密度：参照《中国药典》2000版一部附录VIIA，相对密度不得低于0.9700。折光率：参照《中国药典》2000版一部附录VIIF，折光率应为1.4750~1.4950。【含量测定】
1.总甾醇的含量测定
1.1对照品溶液的制备  精密称取对照品泽泻醇B单乙酸酯(Bm)10mg，置于10ml容量瓶中，加氯仿溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml中含泽泻醇B单乙酸酯1.0mg)。
1.2标准曲线的制备  对照品溶液0，20，40，60，80，100，120μl分别加入具塞试管中，晾干，各精密加入新鲜配制的5％香草醛-冰醋酸0.2ml，高氯酸0.8ml，混匀，密塞。置60℃水浴中加热15分钟，立即冷却后再加5ml冰醋酸，混匀，以第一份为空白，照分光光度法(《中国药典》2000版第一部附录VB)，在555nm波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
1.3供试品含量测定  取泽泻油约0.05g，置于称量瓶中，精密称定，用6ml氯仿溶解并转移到10ml容量瓶中，加氯仿稀释至刻度。吸取20μl加入具塞试管中，照标准曲线的制备项下的方法，自“晾干，加入新鲜配制的5％香草醛-冰醋酸0.2ml”起，依法测定吸光度，从标准曲线中读出供试品溶液中总甾醇含量(μg/ml)，计算，即得。本品含总甾醇以Bm计，不得少于50％。
2.泽泻醇B单乙酸酯(Bm)的含量测定
2.1色谱条件与系统适应性试验  参照高效液相色谱法(《中国药典》2000版第一部附录VID)测定。用十八烷基硅烷键合相为填充剂；乙腈-0.01mol/L磷酸盐缓冲液(pH6.8)(67∶33)为流动相；检测波长为208nm。理论塔板数按泽泻醇B单乙酸酯峰计算应不低于6000。
2.2对照品溶液的制备  精密称取泽泻醇B单乙酸酯(Bm)3mg，置5ml容量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取20μl、60μl于2ml容量瓶，加乙腈稀释至刻度，摇匀，过膜(0.45μm)，即得(每1ml中含泽泻醇B单乙酸酯分别为0.006mg、0.018mg)。
2.3供试品溶液的制备  取泽泻油约0.025g于称量瓶中，精密称定，加入4ml乙腈溶解，转移至10ml容量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，取250μl于2ml容量瓶中，加乙腈至刻度，摇匀，过膜(0.45μm)，即得。
2.4测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入高效液相色谱仪，测定峰面积，以外标法二点法计算即得。本品含泽泻醇B单乙酸酯不得少于3.5％。
四.制得的产品及功效
将按以上条件经CO2超临界萃取得到的油状物加常规辅料制粒，制成硬胶囊剂，商品名为泽利肝，每粒含内容物(油加辅料重)450mg每日服用量：(提取物：600mg/日，胶囊内容物：1.8g)成品：口服，一次二粒，一天两次。药效：采用小鼠四氯化碳脂肪肝模型、地塞米松脂肪肝模型、高脂脂肪肝模型、酒精高脂脂肪肝模型、酒精高脂伴糖尿病脂肪肝模型、大鼠乙硫氨酸引起的脂肪肝模型、大鼠酒精性脂肪肝模型、豚鼠肥胖型脂肪肝模型，用生化方法检测肝胆固醇、甘油三酯及血胆固醇、甘油三酯、血糖等，并对肝组织进行病理切片，观察肝组织学变化。结果，泽利肝能降低CCl4、地塞米松、酒精高脂脂肪肝小鼠的肝TC、TG；降低高脂脂肪肝小鼠的肝TC、TG、血TC，升高血HDL-C；降低高脂酒精伴高血糖脂肪肝小鼠的肝TC、TG、血TC和血糖；降低乙硫氨酸脂肪肝大鼠肝TC、TG；降低酒精性脂肪肝大鼠的肝TC、TG和血AST、ALT、MDA，升高血SOD；降低肥胖豚鼠脂肪肝的肝TC、TG。各脂肪肝模型的肝组织学均有相应的变化。证明泽利肝对多种因素诱发的脂肪肝具有明显的对抗作用。
五、具体实施例按工艺研究部分得到的最佳参数进行中试生产，共提取三批原料。三批泽泻油含量测定结果见表11。
         表11 三批泽利肝(泽泻油)中试生产结果
      泽泻粉     药材总     药材      原料    得率    油中总    油中Bm  总甾醇  Bm转移批号      投料量     甾醇含     Bm含      泽泻    (％)    甾醇含    含量    转移率  率(％)
      (kg)       量(％)     量(％)    油(g)           量(％)    (％)    (％)010113    500        1.31       0.068     7320    1.46    53.95     4.13    60.1    88.7010120    742        1.28       0.066     10165   1.37    57.06     4.26    61.1    88.4010127    751        1.23       0.065     9988    1.33    57.34     4.44    62.0    90.8

Claims (10)

1、泽泻总甾醇提取物，其特征在于其中的泽泻B单乙酸酯含量不少于3.5％，按分光光度法测定的总甾醇含量以泽泻B单乙酸酯计不少于50％，相对密度不得低于0.9700，折光率应为1.4750～1.4950。
2、制备根据权利要求1所述的提取物的方法，其特征在于是按以下参数进行二氧化碳超临界萃取得到的：萃取：温度50℃-70温度，压力20-26Mpa，二氧化碳流量10-23kg/h；萃取时间：1-2小时；药材粒度20-60目。
3、制备根据权利要求1所述的提取物的方法，其特征在于是按以下参数进行二氧化碳超临界萃取得到的：萃取：温度50℃，压力26Mpa，二氧化碳流量20-23kg/h；萃取时间：1.5小时；药材粒度60目。
4、根据权利要求1所述的提取物在制备具有抗脂肪肝、高血压、高血脂作用的药物中的用途。
5、用高效液相法测定泽泻B单乙酸酯含量的方法，其特征在于测定条件为：用十八烷基硅烷键合相为填充剂；体积配比为67∶33的乙腈-0.01mol/L磷酸盐缓冲液混合溶剂为流动相；检测波长为208nm，理论塔板数按泽泻醇B单乙酸酯峰计算应不低于6000。
6、据权利要求5所述的方法，其特征在于：以泽泻醇B单乙酸酯的乙腈溶液为对照品溶液，样品的乙腈提取液为供试品溶液。
7、用高效液相法测定权利要求1所述泽泻总甾醇提取物及其制剂中泽泻B单乙酸酯含量的方法，其特征在于测定条件为：用十八烷基硅烷键合相为填充剂；体积配比为67∶33的乙腈-0.01mol/L磷酸盐缓冲液混合溶剂为流动相；检测波长为208nm，理论塔板数按泽泻醇B单乙酸酯峰计算应不低于6000。
8、根据权利要求7所述的方法，其特征在于：以泽泻醇B单乙酸酯的乙腈溶液为对照品溶液，样品的乙腈提取液为供试品溶液。
9、根据权利要求8所述的方法，其特征在于：每1ml对照品溶液中泽泻醇B单乙酸酯的含量为0.006mg-0.18mg，供试品的制备方法为：取泽泻提取物约0.025g于称量瓶中，精密称定，加入4ml乙腈溶解，转移至10ml容量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，取250μ1于2ml容量瓶中，加乙腈至刻度，摇匀，过0.45μm膜，即得。
10、用分光光度法测定权利要求1所述泽泻总甾醇提取物及其制剂中总甾醇的含量的方法，其特征在于：以泽泻B单乙酸酯的标准品的氯仿溶液为标准溶液，以试样的氯仿提取液作为测定样品，显色剂为新配制的5％香草醛-冰醋酸0.2ml，高氯酸0.8ml，显色方法为标准溶液或测定样品加入新配制的5％香草醛-冰醋酸0.2ml，高氯酸0.8ml，混匀，密塞，置60℃水浴中加热15分钟，立即冷却后再加5ml冰醋酸，混匀，在555nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，以标准溶液绘制标准曲线，计算样品中以泽泻B单乙酸酯计的总甾醇含量。
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