CN1283653C - 泽泻甾醇提取物及其制备方法、质量控制方法 - Google Patents
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Abstract
本申请采用超临界CO2流体萃取泽泻制得泽泻总甾醇提取物，其中的泽泻醇B单乙酸酯(bm)含量不少于3.5%，按分光光度法测定的总甾醇含量以泽泻B单乙酸酯计不少于50%的部位提取物。此提取物有效成分含量高，能够达到中药二类新药的开发要求，我们在此基础上进一步将其制成具有特定剂型的产品，具有抗脂肪肝、高血压、高血脂的功效。同时，本申请中还提供了用高效液相法测定原料及提取物中泽泻醇B单乙酸酯含量的方法，及用分光光度法测定原料及提取物中总甾醇含量的方法，作为控制原料及产品质量的方法。
Description
技术领域
本发明涉及泽泻甾醇提取物及其制备方法、泽泻原料及提取物的质量控制方法。
背景技术
泽泻具有抗脂肪肝、高血压及高脂血症等作用，其有效物质主要为甾醇类。通常以乙醇提取甾醇类，方法是：取泽泻粉(过20目筛)，用90％乙醇回流提取，回收乙醇，得浸油，收率为6％左右。将浸油上大孔树脂(AB-8)柱，分别以水、40％乙醇、95％乙醇洗脱，各部收率分别为27.4％、5.7％、34.9％。乙醇洗脱部位即为泽泻大孔树脂精制物。用比色法测定总甾醇含量，以泽泻B单乙酸酯计，该精制物中总甾醇含量为10％，由于精制物中总甾醇含量过低，会影响此有效部位发挥疗效，且不符合中药二类新药开发要求，不能开发成中药二类新药。
发明内容
本申请采用超临界CO2流体萃取泽泻，并对此工艺进行了进一步优选，优选出最佳化的工艺条件，制得的提取物中泽泻醇B单乙酸酯(bm)含量不少于3.5％，按分光光度法测定的总甾醇含量以泽泻B单乙酸酯计不少于50％。此提取物有效成分含量高，能够达到中药二类新药的开发要求，我们在此基础上进一步将其制成具有特定剂型的产品，现正在进行中药二类新药的申报工作。同时，本申请中还提供了用高效液相法测定原料及提取物中泽泻醇B单乙酸酯含量的方法，及用分光光度法测定原料及提取物中总甾醇含量的方法，作为控制原料及产品质量的方法。
一、超临界CO2流体萃取(SFE-CO2)泽泻总甾醇的工艺研究
影响泽泻甾醇SFE-CO2的因素有萃取温度、萃取压力、药材粒度、CO2流量及萃取时间等。CO2的临界温度为31.1℃，临界压力为7.32Mpa。常用的超临界萃取区域为温度为31～92℃，压力为5.8～30.0Mpa。因为在该区域内，只要压力或温度稍加改变，超临界流体的密度就产生较大的变化，对溶质的溶解度也相应地产生较大的变化。这一特征也使得萃取物与超临界流体可以很方便地得以分离。超临界CO2分离纯化植物油脱臭物中植物甾醇(甾醇作为萃余物，留在萃取釜中)的试验结果表明，在一定温度下，压力低时，CO2溶解能力小，甾醇收率高，但纯度低；相反，压力高时，CO2溶解能力大，甾醇损失大，但纯度高。在相同压力下，温度升高，CO2溶解能力减小，甾醇收率提高，但纯度降低。为了确定泽泻甾醇SFE-CO2正交试验的水平，我们进行了泽泻总甾醇超临界CO2萃取预试验。
(一)萃取工艺预试验
预试验的条件根据以往类似物的萃取条件和初试而定。
1、药材的鉴定与前处理
萃取所用泽泻为泽泻药材除去杂质，喷淋清水，稍润切制而成的干燥厚片，原药材应符合中国药典2000版一部P184泽泻项下的规定。
2、泽泻总甾醇超临界萃取预试验
(1)固定萃取温度、压力、时间及流量，考察药材粒度的影响萃取条件温度：60℃；压力：23MPa；时间：1.5h；流量：15～18kg/h。药材粒度及萃取结果见表1。
表1 药材粒度对泽泻甾醇SFE-CO2的影响
| 粒度(目) | 得油率(％) | 油中Bm含量(％) | 油中总甾醇含量(％) |
| 806040205～10 | 1.361.401.251.030.75 | 4.354.314.304.223.97 | 53.0653.4453.2053.4653.37 |
(2)固定萃取压力、时间、流量及药材粒度，考察温度的影响萃取条件压力：23MPa；时间：1.5h；流量：15～18kg/h；粒度：60目。萃取温度及萃取结果见表2。
表2 萃取温度对泽泻甾醇SFE-CO2的影响
| 温度(℃) | 得油率(％) | 油中Bm含量(％) | 油中总甾醇含量(％) |
| 8070605040 | 0.841.361.401.210.87 | 2.893.594.314.243.69 | 49.2652.4153.4457.9050.78 |
(3)固定萃取温度、时间、流量及药材粒度，考察压力的影响萃取条件温度：60℃；时间：1.5h；流量：15～18kg/h；粒度：60目。萃取压力及萃取结果见表3。
表3 萃取压力对泽泻甾醇SFE-CO2的影响
| 压力(MPa) | 得油率(％) | 油中Bm含量(％) | 油中总甾醇含量(％) |
| 353026232017 | 1.561.471.451.401.180.86 | 2.973.864.054.314.213.82 | 48.5350.6956.8253.4452.2148.32 |
(4)固定萃取温度、压力、时间及药材粒度，考察流量的影响萃取条件温度：60℃；压力23MPa；时间：1.5h；粒度：60目。CO2流量及萃取结果见表4。
表4 CO2流量对泽泻甾醇SFE-CO2的影响
| CO2流量(kg/h) | 得油率(％) | 油中Bm含量(％) | 油中总甾醇含量(％) |
| 25～2820～2315～1810～135～8 | 0.931.391.401.330.75 | 4.324.354.314.464.33 | 53.2553.5653.4453.3253.27 |
(5)固定萃取温度、压力、药材粒度及流量，考察时间的影响萃取条件温度：60℃；压力23MPa；CO2流量：15～18kg/h；粒度：60目。萃取时间及萃取结果见表5。
表5 萃取时间对泽泻甾醇SFE-CO2的影响
| 萃取时间(h) | 得油率(％) | 油中Bm含量(％) | 油中总甾醇含量(％) |
| 2.521.51 | 1.491.471.401.11 | 4.254.274.314.39 | 53.2453.2953.4453.57 |
(6)两级分离罐中萃取物的Bm和总甾醇含量比较
由于压力或温度稍加改变，超临界流体的密度就产生较大的变化，对溶质的溶解度也随之产生较大的变化。这一特征不仅使萃取物与超临界流体可以很方便地得以分离，而且通过使用多级分离罐及改变分离温度和/或压力，使萃取物进一步纯化成为可能。我们考察了两级分离罐中萃取物的Bm和总甾醇含量，结果见表6。
表6 两级分离罐中萃取物的Bm和总甾醇含量比较
| 试验号 | 分离罐号 | 分离压力(MPa) | 分离温度(℃) | 得油率(％) | 油中Bm含量(％) | 油中总甾醇含量(％) |
| 123 | IIIIIIIII | 868686 | 504050405040 | 1.060.390.970.351.100.39 | 4.214.663.924.164.673.40 | 53.6554.4352.8553.0753.0654.38 |
上述试验萃取条件：萃取温度60℃，萃取压力23MPa，药材粒度60目，CO2流量15～18kg/h，萃取时间1.5h。
由预试结果可以看出，泽泻甾醇SFE-CO2的最佳条件应在：压力20～26MPa、温度50～70℃、CO2流量10～23kg/h、药材粒度20～60目、时间1～2小时范围之内。考虑到超临界流体萃取操作参数(如温度、压力等)与收率或有效成分的浓度之间关系的多样性(如有S形、抛物线形等)及变化趋势的非单一性，我们把泽泻甾醇SFE-CO2正交试验的水平设置在压力20～26MPa、温度50～70℃、CO2流量10～23kg/h、药材粒度20～60目、时间1～2小时范围之内，以便筛选出真正的最佳萃取条件。
由表6可见，两级分离罐中萃取物的Bm和总甾醇含量无明显差异，因此两级分离罐中的萃取物可以合并。
(二)萃取工艺正交试验
1、考察指标及正交表的确定
泽泻的有效成分在脂溶性部位，主要是总甾醇(以Bm计)，故选择得油率、油中Bm和总甾醇含量作为工艺研究的考察指标。影响指标的主要因素是萃取温度(A)、萃取压力(B)、萃取时间(C)、CO2流量(D)和药材粒度(E)。根据预试验结果，按五因素三水平，设计正交表，见表7。根据L18(37)正交表安排试验。
表7 泽泻SFE-CO2正交试验因素水平表
| 因素水平 | AT(℃) | BP(Mpa) | Ct(h) | DFt(kg/h) | E粒度(目) |
| 123 | 706050 | 262320 | 21.51 | 20-2315-1810-13 | 204060 |
2、实验方法
(1)超临界CO2萃取方法：
称取经粉碎并于65℃干燥8小时的泽泻药材300g，装入1L提取罐中，按正交表试验条件进行萃取，并于分离罐II(50℃，8Mpa)和分离罐III(40℃，6Mpa)中进行分离，得泽泻油，称定重量，计算得油率，并测定油中Bm和总甾醇含量。
(2)Bm测定方法
取泽泻提取物适量于10ml容量瓶中，精密称定，加入4ml乙腈超声溶解后，加乙腈至刻度，摇匀后取250μl于2ml的容量瓶中，乙腈定容、过微孔滤膜(0.45μm)，进样20μl于高效液相色谱仪。流动相：乙腈-水(65∶35)，检测波长λ为208nm，流速1ml/min。测定峰面积，以外标法计算即得。
(3)总甾醇含量测定方法
对照品溶液的制备精密称取对照品泽泻醇B单乙酸酯(Bm)10mg，置于10ml容量瓶中，加氯仿溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml中含泽泻醇B单乙酸酯1.0mg)。
标准曲线的制备对照品溶液0，20，40，60，80，100，120μl分别加入具塞试管中，晾干，各精密加入新鲜配制的5％香草醛-冰醋酸0.2ml，高氯酸0.8ml，混匀，密塞。置60℃水浴中加热15分钟，立即冷却后再加5ml冰醋酸，混匀，以第一份为空白，照分光光度法(《中国药典》2000版第一部附录V B)，在555nm波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
供试品含量测定 取泽泻油约0.05g，置于称量瓶中，精密称定，用6ml氯仿溶解并转移到10ml容量瓶中，加氯仿稀释至刻度。吸取20μl加入具塞试管中，照标准曲线的制备项下的方法，自“晾干，加入新鲜配制的5％香草醛-冰醋酸0.2ml”起，依法测定吸光度，从标准曲线中求得供试品溶液中总甾醇浓度(μg/ml)，计算，即得。
3、正交试验结果 正交试验极差及方差分析结果见表8、表9。
表8 泽泻SFE-CO2正交试验及极差分析表
| 列号试验号 | A | B | C | D | E | F | G | y1 | y2 | y3 | y11 | y22 | y33 | Y | |||
| 123456789101112131415161718 | 111222333111222333 | 123123123123123123 | 123123231312231312 | 123231123312312231 | 123231312231123312 | 123312231231312123 | 123312312123231231 | 1.310.880.410.901.151.061.350.901.370.751.300.841.300.941.121.131.021.35 | 53.6252.1050.4653.8157.8954.6764.0362.9053.7552.7853.2952.2552.4950.2151.5564.1952.0050.57 | 3.563.703.093.154.354.843.954.354.343.494.063.615.123.944.483.654.204.95 | 93.7548.96051.0477.0867.7197.9251.0410035.4292.7144.7992.7155.2173.9675.0063.5497.92 | 24.3913.521.7925.7554.9431.9098.8690.7725.3218.3822.0314.5916.3109.5910012.802.58 | 11.5815.0201.4831.0343.1021.1831.0330.799.8523.8912.815020.9434.2413.7927.3445.81 | 129.7277.501.7978.27163.05142.71217.95172.85156.1163.65138.6372.19159.0276.14117.78188.79103.69146.30 | |||
| K1K2K3K1 2K2 2K3 2R*6 | 483.48736.97985.69233752.9543124.8971584.81748462 | 837.40731.36636.88701238.8535619.1405616.11642474 | 724.2836.01645.93524465.6698912.7417225.61640604 | 851.5707.4647.3724967.1500386.5419010.21644364 | 780.2598.0828.0608680.8357568.1685567.41651816 | 786.0723.3696.96177965231.34485613.91626544 | 793.4862.8550.0629404.2744354.83025331676292 | G＝2206.14CT＝270391.9 | 629.82686.14427.87396673470788183073258.27 | ||||||||
表中：y1为得油率(％)，y2为总甾醇含量(％)，y3为Bm含量(％)，y11、y22和y33分别为y1、y2和y3在0-100间标准化后的值，y11＝(y1-y1min)/(y1max-y1min)×100％，y22＝(y2-y2min)/(y2max-y2min)×100％，y33＝(y3-y3min)/(y3max-y3min)×50％；Y＝y11+y22+y33。G＝∑y；CT＝G2/n；R*6＝K1 2+K2 2+K3 2
表9 泽泻SFE-CO2正交试验方差分析表
| 方差来源 | 偏差平方和 | 自由度 | 均方 | F比 | 显著性 |
| SASBSCSDSE误差 | 21018.5393353.7873042.1153668.7624910.86012512.848 | 222227 | 10509.2701676.8931521.0581834.3812455.4301787.550 | 5.879.938.8511.0261.374 | .032.436.467.407.314 |
F0.01(2，7)＝9.55 F0.05(2，7)＝4.74
其中：偏差平方和S＝R*6/6-CT；均方MS＝S/υ(υ为自由度)；F＝S/误差
表9的方差分析结果表明，因素B、C、D、E在本试验设计中无显著性影响，因素A在本试验中有显著差异。根据表8极差分析结果，最佳萃取工艺为A3B1C2D1E3，即萃取温度(A)为50℃、萃取压力(B)为26Mpa、萃取时间(C)为1.5h、CO2流量(D)为20-23kg/h、药材粒度(E)为60目。
最佳工艺验证：按照正交试验选定的最佳条件，重复进行了三次实验，见表10。
表10 最佳条件提取试验结果
| 批次 | 得油率(％) | 油中Bm含量(％) | 油中总甾醇含量(％) |
| 123平均 | 1.4531.4101.5331.465 | 4.354.214.444.33 | 62.357.456.958.87 |
根据上述萃取工艺研究结果，确定泽利肝原料的萃取工艺为：
取泽泻粉末(过60目筛，含水量＜5％)，装入超临界CO2萃取罐，调节萃取压力为26Mpa、温度为50℃、CO2流量为20-23Kg/h、萃取1.5h，得萃取物。
与常规的溶剂提取法相比：超临界CO2流体萃取具有操作周期短，效率高；二氧化碳价廉易得，无毒、无害，不存在有机溶剂残留等优点；另外，工艺过程控制在接近室温条件和缺氧的提取系统中，可防止热敏成分的氧化和降解。超临界二氧化碳对脂类物质植物甾醇具有较好的溶解性。经实验证明，采用本申请的最佳工艺提取泽泻甾醇，所得提取物中泽泻醇B单乙酸酯(bm)含量不少于3.5％，按分光光度法测定的总甾醇含量以泽泻B单乙酸酯计不少于50％，能够达到中药二类新药的要求，从而能够开发成商业化的产品，在产业上制备，并能用于临床，超越了以前仅限于实验室小量提取和动物实验的阶段，实现了科研成果向应用的转化。
二.泽泻原药材的质量控制方法
为提高产品质量，应从控制原料质量入手，因此制定了定量测定原料中总甾醇和泽泻醇B单乙酸酯(Bm)含量的方法。
1.总甾醇的含量测定
1.1对照品溶液的制备 精密称取对照品泽泻醇B单乙酸酯(Bm)10mg，置于10ml容量瓶中，加氯仿溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml中含泽泻醇B单乙酸酯1.0mg)。
1.2标准曲线的制备 对照品溶液0，20，40，60，80，100，120μl分别加入具塞试管中，晾干，各精密加入新鲜配制的5％香草醛-冰醋酸0.2ml，高氯酸0.8ml，混匀，密塞。置60℃水浴中加热15分钟，立即冷却后再加5ml冰醋酸，混匀，以第一份为空白，照分光光度法(附录V B)，在555nm波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
1.3供试品含量测定 取泽泻药材粉末(过60目筛)约0.5g，精密称重，置25ml容量瓶中，精密加入15.0ml氯仿，精密称重，超声提取(功率250W，20KHz)30分钟。滤纸擦干容量瓶外部，放冷，精密称重，氯仿补足重量，摇匀，过滤，取续滤液80μl加入具塞试管中，照标准曲线的制备项下方法，自“晾干，加入新鲜配制的5％香草醛-冰醋酸0.2ml”起，依法测定吸光度，从标准曲线读出供试品溶液中总甾醇含量(μg/ml)，计算，即得。泽泻中含总甾醇以Bm计，不得少于1.25％。
2.高效液相色谱法测定泽泻醇B单乙酸酯(Bm)的含量
2.1色谱条件与系统适应性试验 用十八烷基硅烷键合相为填充剂；乙腈-0.01mol/L磷酸盐缓冲液(pH6.8)(67∶33)为流动相；检测波长为208nm。理论塔板数按泽泻醇B单乙酸酯峰计算应不低于6000。
2.2对照品溶液的制备 精密称取泽泻醇B单乙酸酯(Bm)3mg，置5ml容量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取10μl、40μl于2ml容量瓶，加乙腈稀释至刻度，摇匀，过膜(0.45μm)，即得(每1ml中含泽泻醇B单乙酸酯分别为0.003mg、0.012mg)。
2.3供试品溶液的制备 称药材粉末(超细粉碎)约0.1g，精密称定，置于10ml容量瓶中，加入8ml乙腈，浸泡1h后超声提取(功率250W，20KHz)30min，取出，放冷，加乙腈至刻度，摇匀，过滤，取续滤液过膜(0.45μm)，即得。
2.4测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入高效液相色谱仪，测定峰面积，以外标法二点法计算，即得。
本品含泽泻醇B单乙酸酯不得少于0.05％。
三.泽泻油(泽泻甾醇提取物)的质量控制方法
泽泻油为泽泻科植物泽泻Alisma orientalis(Sam.)Juzep的干燥块茎，经粉碎后采用以上条件经CO2超临界萃取得到的油状物。为棕红色液体；气香，味苦凉。
【检查】相对密度：参照《中国药典》2000版一部附录VIIA，相对密度不得低于0.9700。
折光率：参照《中国药典》2000版一部附录VIIF，折光率应为1.4750~1.4950。
【含量测定】
1.总甾醇的含量测定
1.1对照品溶液的制备 精密称取对照品泽泻醇B单乙酸酯(Bm)10mg，置于10ml容量瓶中，加氯仿溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml中含泽泻醇B单乙酸酯1.0mg)。
1.2标准曲线的制备 对照品溶液0，20，40，60，80，100，120μl分别加入具塞试管中，晾干，各精密加入新鲜配制的5％香草醛-冰醋酸0.2ml，高氯酸0.8ml，混匀，密塞。置60℃水浴中加热15分钟，立即冷却后再加5ml冰醋酸，混匀，以第一份为空白，照分光光度法(《中国药典》2000版第一部附录V B)，在555nm波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
1.3供试品含量测定 取泽泻油约0.05g，置于称量瓶中，精密称定，用6ml氯仿溶解并转移到10ml容量瓶中，加氯仿稀释至刻度。吸取20μl加入具塞试管中，照标准曲线的制备项下的方法，自“晾干，加入新鲜配制的5％香草醛-冰醋酸0.2ml”起，依法测定吸光度，从标准曲线中读出供试品溶液中总甾醇含量(μg/ml)，计算，即得。本品含总甾醇以Bm计，不得少于50％。
2.泽泻醇B单乙酸酯(Bm)的含量测定
2.1色谱条件与系统适应性试验 参照高效液相色谱法(《中国药典》2000版第一部附录VI D)测定。用十八烷基硅烷键合相为填充剂；乙腈-0.01mol/L磷酸盐缓冲液(pH6.8)(67∶33)为流动相；检测波长为208nm。理论塔板数按泽泻醇B单乙酸酯峰计算应不低于6000。
2.2对照品溶液的制备 精密称取泽泻醇B单乙酸酯(Bm)3mg，置5ml容量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取20μl、60μl于2ml容量瓶，加乙腈稀释至刻度，摇匀，过膜(0.45μm)，即得(每1ml中含泽泻醇B单乙酸酯分别为0.006mg、0.018mg)。
2.3供试品溶液的制备 取泽泻油约0.025g于称量瓶中，精密称定，加入4ml乙腈溶解，转移至10ml容量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，取250μl于2ml容量瓶中，加乙腈至刻度，摇匀，过膜(0.45μm)，即得。
2.4测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入高效液相色谱仪，测定峰面积，以外标法二点法计算即得。本品含泽泻醇B单乙酸酯不得少于3.5％。
四.制得的产品及功效
将按以上条件经CO2超临界萃取得到的油状物加常规辅料制粒，制成硬胶囊剂，商品名为泽利肝，每粒含内容物(油加辅料重)450mg
每日服用量：(提取物：600mg/日，胶囊内容物：1.8g)
成品：口服，一次二粒，一天两次。
药效：采用小鼠四氯化碳脂肪肝模型、地塞米松脂肪肝模型、高脂脂肪肝模型、酒精高脂脂肪肝模型、酒精高脂伴糖尿病脂肪肝模型、大鼠乙硫氨酸引起的脂肪肝模型、大鼠酒精性脂肪肝模型、豚鼠肥胖型脂肪肝模型，用生化方法检测肝胆固醇、甘油三酯及血胆固醇、甘油三酯、血糖等，并对肝组织进行病理切片，观察肝组织学变化。结果，泽利肝能降低CCl4、地塞米松、酒精高脂脂肪肝小鼠的肝TC、TG；降低高脂脂肪肝小鼠的肝TC、TG、血TC，升高血HDL-C；降低高脂酒精伴高血糖脂肪肝小鼠的肝TC、TG、血TC和血糖；降低乙硫氨酸脂肪肝大鼠肝TC、TG；
降低酒精性脂肪肝大鼠的肝TC、TG和血AST、ALT、MDA，升高血SOD；降低肥胖豚鼠脂肪肝的肝TC、TG。各脂肪肝模型的肝组织学均有相应的变化。证明泽利肝对多种因素诱发的脂肪肝具有明显的对抗作用。
五、具体实施例
按工艺研究部分得到的最佳参数进行中试生产，共提取三批原料。三批泽泻油含量测定结果见表11。
表11三批泽利肝(泽泻油)中试生产结果
| 批号 | 泽泻粉投料量(kg) | 药材总甾醇含量(％) | 药材Bm含量(％) | 原料泽泻油(g) | 得率(％) | 油中总甾醇含量(％) | 油中Bm含量(％) | 总甾醇转移率(％) | Bm转移率(％) |
| 010113010120010127 | 500742751 | 1.311.281.23 | 0.0680.0660.065 | 7320101659988 | 1.461.371.33 | 53.9557.0657.34 | 4.134.264.44 | 60.161.162.0 | 88.788.490.8 |
Claims (8)
1、泽泻总甾醇提取物，其特征在于所述泽泻总甾醇提取物是以泽泻为原料，按以下参数进行二氧化碳超临界萃取得到的：萃取温度50-70℃，萃取压力20-26Mpa，二氧化碳流量10-23kg/h；萃取时间：1-2小时；泽泻药材粒度20-60目；其中的泽泻醇B单乙酸酯含量不少于3.5％，按分光光度法测定的总甾醇含量以泽泻醇B单乙酸酯计不少于50％，相对密度不得低于0.9700，折光率应为1.4750～1.4950。
2、如权利要求1所述的泽泻总甾醇提取物，其特征在于所述泽泻总甾醇提取物是以泽泻为原料，按以下参数进行二氧化碳超临界萃取得到的：萃取温度50℃，萃取压力26Mpa，二氧化碳流量20-23kg/h；萃取时间：1.5小时；泽泻药材粒度60目；其中的泽泻醇B单乙酸酯含量不少于3.5％，按分光光度法测定的总甾醇含量以泽泻醇B单乙酸酯计不少于50％，相对密度不得低于0.9700，折光率应为1.4750～1.4950。
3、一种如权利要求1所述的泽泻总甾醇提取物的制备方法，其特征在于是以泽泻为原料，按以下参数进行二氧化碳超临界萃取得到的：萃取温度50-70℃，萃取压力20-26Mpa，二氧化碳流量10-23kg/h；萃取时间：1-2小时；泽泻药材粒度20-60目。
4、如权利要求3所述的泽泻总甾醇提取物的制备方法，其特征在于是以泽泻为原料，按以下参数进行二氧化碳超临界萃取得到的：萃取温度50℃，萃取压力26Mpa，二氧化碳流量20-23kg/h；萃取时间：1.5小时；泽泻药材粒度60目。
5、如权利要求1或2所述的泽泻总甾醇提取物在制备具有抗脂肪肝、抗高血压或抗高血脂作用的药物中的用途。
6、如权利要求1或2所述的泽泻总甾醇提取物中泽泻醇B单乙酸酯含量的测定方法，其特征在于该方法为：
色谱条件与系统适应性试验，参照高效液相色谱法测定，用十八烷基硅烷键合相为填充剂；以pH6.8，体积配比为67∶33乙腈-0.01mol/L磷酸盐缓冲液为流动相；检测波长为208nm；理论塔板数按泽泻醇B单乙酸酯峰计算应不低于6000；
称取泽泻醇B单乙酸酯3mg，置5ml容量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，分别吸取20μl、60μl于2ml容量瓶，加乙腈稀释至刻度，摇匀，过0.45μm膜，即得对照品溶液；对照品溶液每1ml中含泽泻醇B单乙酸酯分别为0.006mg、0.018mg；
取泽泻总甾醇提取物0.025g于称量瓶中，称定，加入4ml乙腈溶解，转移至10ml容量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，取250μl于2ml容量瓶中，加乙腈至刻度，摇匀，过0.45μm膜，即得供试品溶液；
分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入高效液相色谱仪，测定峰面积，以外标法二点法计算即得；
泽泻总甾醇提取物含泽泻醇B单乙酸酯不得少于3.5％。
7、如权利要求1或2所述的泽泻总甾醇提取物中总甾醇含量的测定方法，其特征在于该方法为：
称取对照品泽泻醇B单乙酸酯10mg，置于10ml容量瓶中，加氯仿溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液，每1ml中含泽泻醇B单乙酸酯1.0mg；
标准曲线的制备，取对照品溶液0，20，40，60，80，100，120μl分别加入具塞试管中，晾干，各加入新鲜配制的5％香草醛-冰醋酸0.2ml，高氯酸0.8ml，混匀，密塞；置60℃水浴中加热15分钟，立即冷却后再加5ml冰醋酸，混匀，以第一份为空白，照分光光度法，在555nm波长处测定吸光度；以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；
供试品含量测定，取泽泻总甾醇提取物0.05g，置于称量瓶中，称定，用6ml氯仿溶解并转移到10ml容量瓶中，加氯仿稀释至刻度；吸取20μl加入具塞试管中，照标准曲线的制备项下的方法，自“晾干，加入新鲜配制的5％香草醛-冰醋酸0.2ml”起，依法测定吸光度，从标准曲线中读出供试品溶液中总甾醇含量，单位μg/ml，计算，即得；
泽泻总甾醇提取物含总甾醇以泽泻醇B单乙酸酯计，不得少于50％。
8、如权利要求1或2所述的泽泻总甾醇提取物的质量控制方法，其特征在于该方法为：
检查：相对密度，参照《中国药典》2000版一部附录VIIA，相对密度不得低于0.9700；折光率：参照《中国药典》2000版一部附录VIIF，折光率应为1.4750～1.4950；
含量测定：
总甾醇的含量测定：
称取对照品泽泻醇B单乙酸酯10mg，置于10ml容量瓶中，加氯仿溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液，每1ml中含泽泻醇B单乙酸酯1.0mg；
标准曲线的制备，取对照品溶液0，20，40，60，80，100，120μl分别加入具塞试管中，晾干，各加入新鲜配制的5％香草醛-冰醋酸0.2ml，高氯酸0.8ml，混匀，密塞；置60℃水浴中加热15分钟，立即冷却后再加5ml冰醋酸，混匀，以第一份为空白，照分光光度法，在555nm波长处测定吸光度；以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；
供试品含量测定，取泽泻总甾醇提取物0.05g，置于称量瓶中，称定，用6ml氯仿溶解并转移到10ml容量瓶中，加氯仿稀释至刻度；吸取20μl加入具塞试管中，照标准曲线的制备项下的方法，自“晾干，加入新鲜配制的5％香草醛-冰醋酸0.2ml”起，依法测定吸光度，从标准曲线中读出供试品溶液中总甾醇含量，单位μg/ml，计算，即得；
泽泻总甾醇提取物含总甾醇以泽泻醇B单乙酸酯计，不得少于50％；
泽泻醇B单乙酸酯的含量测定：
色谱条件与系统适应性试验，参照高效液相色谱法测定，用十八烷基硅烷键合相为填充剂；以pH6.8，体积配比为67∶33乙腈-0.01mol/L磷酸盐缓冲液为流动相；检测波长为208nm；理论塔板数按泽泻醇B单乙酸酯峰计算应不低于6000；
称取泽泻醇B单乙酸酯3mg，置5ml容量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，分别吸取20μl、60μl于2ml容量瓶，加乙腈稀释至刻度，摇匀，过0.45μm膜，即得对照品溶液；对照品溶液每1ml中含泽泻醇B单乙酸酯分别为0.006mg、0.018mg；
取泽泻总甾醇提取物0.025g于称量瓶中，称定，加入4ml乙腈溶解，转移至10ml容量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，取250μl于2ml容量瓶中，加乙腈至刻度，摇匀，过0.45μm膜，即得供试品溶液；
分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入高效液相色谱仪，测定峰面积，以外标法二点法计算即得；
泽泻总甾醇提取物含泽泻醇B单乙酸酯不得少于3.5％。
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