CN103301134B - 一种治疗高脂血症的药物组合物及制备方法和用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种治疗高脂血症的药物组合物及其制备方法，所述的药物组合物按以下组分及重量比组成：吴茱萸碱1～10重量份，小檗碱5～15重量份。本发明由天然药用原料的有效成分或其药用原料的有效成分的提取物组合而成，其组成简单，疗效肯定，无须煎煮服用，在制备成片剂、胶囊、丸剂、颗粒剂、口服液后便于携带，且服用方便。本发明组合物与传统天然药物配方相比具有杂质含量少，纯度高，作用机制明确，性状稳定，在产业化时能更好的控制产品质量等优点。

Description

一种治疗高脂血症的药物组合物及制备方法和用途

技术领域

本发明属于药物领域，涉及一种治疗高脂血症的药物组合物，特别是涉及一种以中药饮片提取物为原料制成的用于治疗高脂血症的药物组合物及制备方法。

背景技术

高脂血症是血液中脂蛋白异常增加的一种症状，是目前心血管系统中常见的疾病之一，主要原因是体内脂质代谢障碍引起高密度脂蛋白下降，使消除血脂的能力下降，从而引起血液中甘油三酯、胆固醇升高，并伴有形体肥胖、胸闷、头重、眩晕、腹胀、纳呆等症状。该病与高血压、高血糖及衰老有着紧密的关系，且与冠心病的发病关系最为密切。

目前，在临床上西医常选用他汀类、贝特类和烟酸类药物治疗高血脂症。他汀类药物属于HMG-CoA还原酶抑制剂，为临床治疗高脂血症的首选药物，但该类药物在有效降脂的同时往往会伴随肝功下降、肾功能损害、肌肉疼痛等毒副作用。贝特类药物对降低血中甘油三酯的含量疗效确切，但它对降低血中胆固醇含量的作用则明显弱于他汀类，且在用药过程中常常导致腹胀、腹泻等胃肠不适症状，长期服用可致肝肾功损害及促使胆结石的形成。烟酸类药物一方面可使脂肪组织的脂解作用减慢，另一方面还能在辅酶A的作用下与甘氨酸合成烟尿酸，从而干扰胆固醇的合成。因此，烟酸类药物仅适用于治疗高甘油三酯血症及以甘油三酯升高为主的混合性高脂血症，且在临床使用时常常出现面部潮红、皮肤灼热或瘙痒等副作用，故临床上已经较少使用烟酸类药物治疗高脂血症。

中医学将此病归属“痰浊”、“血瘀”、“水饮”等病范畴，其病机主要是脏腑功能失调或虚损，其中尤以脾、肾虚损为首要。脾气虚弱，健运失调，饮食不能化为精微，酿成痰浊而发本病，或由于年老肾衰，或年虽未老而肾已亏，气不化津，痰浊壅聚于内，致心血瘀阻，脉络壅滞不畅而发本病，或由于肝肾阴虚，阴虚则生内热，热灼津液，津亏不能载血运行，终致血行不畅而发本病。在临床治疗时，中医根据不同的病机辨证施治，给予每一独立个体不同的方药进行治疗。虽然该方法在临床治疗上取得了满意的治疗效果，但该方法仅适用于独立个体而不适用于普遍受众。因此，现在临床急需疗效肯定而毒副作用小且适用于普遍受众的新型药物。

黄连为多年生草本植物，属毛茛科黄连属，始载于《神农本草经》，列为上品，其主要有效成分为小檗碱、黄连碱、甲基黄连碱、掌叶防己碱、药根碱、非洲防己碱、黄柏内酯及阿魏酸等，其中小檗碱的含量约为5%～8%。吴茱萸为芸香科植物吴茱萸的成熟果实，始载于《本经》，列入中品，其主要有效成分为吴茱萸碱、吴茱萸次碱、吴茱萸因碱、羟基吴茱萸碱、吴茱萸卡品碱、柠檬内酯、辛弗林及吴茱萸烯等，其中吴茱萸碱、吴茱萸次碱、吴茱萸因碱、羟基吴茱萸碱、吴茱萸卡品碱混合一起后统称为吴茱萸总碱。

发明内容

本发明的目的在于解决现有技术的不足，提供一种组成简单，且由天然药用原料的有效成分或其药用原料的有效成分的提取物组合而成的具有治疗高脂血症的药物组合物。该药物组合物具有疗效好，无毒副作用，不易产生耐受性，服用方便，普遍适用于高脂血症患者。

本发明的另一个目的在于提供一种该药物组合物的制备方法和用途。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：一种治疗高脂血症的药物组合物，其特征在于：它由以下组分及重量比组成：吴茱萸碱1～10重量份，小檗碱5～15重量份；优选地，吴茱萸碱2～8重量份，小檗碱6～14重量份；优选地，吴茱萸碱3～6重量份，小檗碱8～12重量份；吴茱萸碱5重量份，小檗碱10重量份。

一种治疗高脂血症的药物组合物，它包括以下步骤：

S1：称取原料：按前述组分及重量比称取原料；

S2：将原料混合均匀后，加入药学上可接受的辅料制备成药学上常用的药物制剂。

本发明的药物组合物可以根据制药领域的常规方法制备成任何一种药剂学上所述的剂型；本发明的药物组合物可以通过口服、吸入或肠外给药的方式施用于患者。口服给药时可以制备成片剂、胶囊剂、丸剂、粉剂、颗粒剂、糖浆或口服液等；在肠外给药时可以制备成冻干粉针及注射液等。

本发明所述的药学上可接受的辅料包括淀粉、硬脂酸镁、糊精和微晶纤维素。

本发明还提供了该药物组合物在制备治疗高脂血症药物中的用途。

本发明的有益效果是：

（1）本发明组合物选用黄连、吴茱萸两味天然植物药为初始原料，黄连、吴茱萸合用见于宋代《太平圣惠方》、《圣济总录》及元代著名医家朱丹溪《丹溪心法》，方如甘露散、左金丸、吴茱萸丸等。运用现代科技分别对其进行提取分离与纯化，各提取组份符合药品法律规定和中医处方原则，突出中医辨证与西医辨病相结合、病因治疗与对症治疗相结合的基本特色；

（2）本发明组合物为有效成分的提取物，其组成简单，无须煎煮服用，在制备成片剂、胶囊、丸剂、颗粒剂、口服液后便于携带，且服用方便。

（3）本发明组合物为有效成分的提取物，与天然药物配方相比其杂质含量相对较少，作用机制更加明确，在产业化时则能更好的控制产品质量。

（4）本发明组合物经药效实验验证表明吴茱萸碱、小檗碱在单独应用时对高脂血症的相关指标改善作用不明显，但是两种成分按本发明比例混合后，能够明显降低高脂模型小鼠血脂水平，对高脂血症疾病具有良好的治疗作用，表明吴茱萸碱和小檗碱按本发明比例配伍后具有协同增效的作用。

具体实施方式

下面结合实施例进一步详细描述本发明的技术方案，但本发明的保护范围不局限于以下所述。

实施例1：吴茱萸碱的提取方法

称取吴茱萸饮片100克，粉碎至过60目筛，经超声波处理180-300s，并于50-60℃低温干燥，置于萃取罐内；按照4.2∶100的比例加入夹带剂无水乙醇；在萃取压力19-20MPa，萃取温度35-40℃，CO₂流量2.0-3.0L/min的条件下进行分离，动态运行120-150分钟后，得到吴茱萸碱粗品4.50g，粗品得率为4.50％；回收无水乙醇，分离后干净的CO₂流体经冷凝器冷凝后在装置中循环利用。萃取的吴茱萸碱进行色谱纯化，纯化仪器为安捷1100，色谱柱条件为：C18柱，流动相：乙腈-水(42∶55)；流速：1.0mL·min^-1；柱温：40℃；检测波长290nm；进样量：10μL，吴茱萸碱纯度≥98％。

除按照上述方法提取吴茱萸碱之外，也可以采用水提、索氏提取法等常规方法提取吴茱萸碱。

实施例2：小檗碱的提取方法

称取黄连饮片100克，粉碎至过60目筛，放入500ml圆底烧瓶中，加入800ml的75%乙醇，热水浴加热60℃回流30min，放置浸泡2h，抽滤，滤渣重复上述处理两次，合并3次滤液，减压蒸出乙醇直到为棕红色糖浆状。在棕红色糖浆状物中加入1%醋酸(约30～40ml)加热使溶解，抽滤以除去不溶物，然后在溶液中滴加浓盐酸至溶液浑浊为止，即小檗碱析出，再进行抽滤，结晶用水洗涤两次，再用丙酮洗涤一次，干燥烘干称重，即得到小檗碱精制品。小檗碱纯度≥98％。

除按照上述方法提取小檗碱之外，也可以采用酸水法、超声法等常规方法提取小檗碱。

实施例3：

称取原料吴茱萸碱10g，小檗碱50g，加入辅料淀粉200g制粒，硬脂酸镁4g，糊精100g、微晶纤维素100g，均匀制得颗粒，压片，得到片剂。

实施例4：

称取原料吴茱萸碱20g，小檗碱60g，加入辅料淀粉300g制粒，硬脂酸镁4g，糊精100g、微晶纤维素100g，均匀制得颗粒，压片，得到片剂。

实施例5：

称取原料吴茱萸碱30g，小檗碱80g，加入辅料淀粉300g制粒，硬脂酸镁4g，糊精100g、微晶纤维素100g，均匀制得颗粒，压片，得到片剂。

实施例6：

称取原料吴茱萸碱50g，小檗碱100g，加入辅料淀粉600g制粒，硬脂酸镁8g，糊精200g、微晶纤维素150g，均匀制得颗粒，压片，得到片剂。

实施例7：

称取原料吴茱萸碱60g，小檗碱120g，加入辅料淀粉700g制粒，硬脂酸镁8g，糊精220g、微晶纤维素200g，均匀制得颗粒，压片，得到片剂。

实施例8：

称取原料吴茱萸碱80g，小檗碱140g，加入辅料淀粉800g制粒，硬脂酸镁10，糊精240g、微晶纤维素220g，均匀制得颗粒，压片，得到片剂。

实施例9：

称取原料吴茱萸碱100g，小檗碱150g，加入辅料淀粉1000g制粒，硬脂酸镁15，糊精300g、微晶纤维素300g，均匀制得颗粒，压片，得到片剂。

实施例10：

称取原料吴茱萸碱10g，小檗碱50g，加入辅料淀粉200g制粒，硬脂酸镁4g，糊精100g、微晶纤维素100g，均匀制得颗粒，装入胶囊，得到胶囊剂。

实施例11：

称取原料吴茱萸碱20g，小檗碱60g，加入辅料淀粉300g制粒，硬脂酸镁4g，糊精100g、微晶纤维素100g，均匀制得颗粒，装入胶囊，得到胶囊剂。

实施例12：

称取原料吴茱萸碱30g，小檗碱80g，加入辅料淀粉300g制粒，硬脂酸镁4g，糊精100g、微晶纤维素100g，均匀制得颗粒，装入胶囊，得到胶囊剂。

实施例13：

称取原料吴茱萸碱50g，小檗碱100g，加入辅料淀粉600g制粒，硬脂酸镁8g，糊精200g、微晶纤维素150g，均匀制得颗粒，装入胶囊，得到胶囊剂。

实施例14：

称取原料吴茱萸碱60g，小檗碱120g，加入辅料淀粉700g制粒，硬脂酸镁8g，糊精220g、微晶纤维素200g，均匀制得颗粒，装入胶囊，得到胶囊剂。

实施例15：

称取原料吴茱萸碱80g，小檗碱140g，加入辅料淀粉800g制粒，硬脂酸镁10，糊精240g、微晶纤维素220g，均匀制得颗粒，装入胶囊，得到胶囊剂。

实施例16：

称取原料吴茱萸碱100g，小檗碱150g，加入辅料淀粉1000g制粒，硬脂酸镁15，糊精300g、微晶纤维素300g，均匀制得颗粒，装入胶囊，得到胶囊剂。

上述片剂、胶囊剂均可以按照常规制备方法制备成规格为5mg/片、10mg/片、20mg/片、0.5g/片，或制备成规格为5mg/粒、10mg/粒、20mg/粒、0.5g/粒等不同规格。

下面通过具体的药学试验来证明本发明的有益效果：

一、对大鼠红细胞内谷胱甘肽含量的影响

1、材料和方法

1.1材料

1.1.1药物和制剂

黄连和吴茱萸均购自成都市同仁堂大药房，品质优良。制剂时称取所需药材，加5倍量水浸泡30min，电炉加热至沸，20min后过滤。滤渣再加3倍量水，加热至沸，20min后过滤。合并两次滤液，用水浴锅60℃恒温加热，浓缩至相当于药材1g/ml的水煎液，冰箱保存备用。

1.1.2实验动物

SD大鼠40只，雌雄各半，体重180～220g，由成都中医药大学实验动物中心提供。按体重随机分为4组，即空白对照组、黄连小剂量组、黄连大剂量组和黄连配伍吴茱萸组，每组10只。

1.1.3实验试剂

谷胱甘肽试剂盒：南京建成生物工程研究所生产，批号：2005072。

1.1.4实验仪器

721分光光度仪(上海第三分析仪器厂)。

1.2方法

1.2.1实验方法

（1）给药:将四组药物煎剂，采用灌胃的方法给予SD大鼠。黄连小剂量组0.05g/100g；黄连大剂量组0.15g/100g；黄连加吴茱萸组0.175g/100g；空白对照组给与等量的水。每天1次，共给药15天。

（2）指标测定:给药结束后，大鼠禁食24h，不禁水。从股动脉采取3ml血，装入抗凝管中。肝素抗凝全血制成1:99溶血液。用721分光光度仪比色定量检测。

1.2.2统计学处理

实验资料中的数据采用SPSS11.0forWindows统计分析软件分析处理，数据用表示，组间比较采用单因素方差分析。显著性水准及结果的判断按通用的假设检验标准，即P>0.05时，无统计学意义；当P<0.01时，有极显著性差异。

2、实验结果

对红细胞谷胱甘肽（GSH）含量的影响，测定结果表明：与空白对照组比较，小剂量黄连组和黄连配伍吴茱萸组没有统计学意义（P>0.05），黄连大剂量组有显著统计学意义（P<0.01）；与黄连配伍吴茱萸组比较，黄连大剂量有统计学意义（P<0.05）。详见表1。

表1GSH含量的变化

注：与空白组比较，**P<0.01；与黄连配伍吴茱萸组比较，△P<0.05。

二、对实验性高脂模型小鼠的降脂实验

1材料

1.1实验药物

120%黄连水煎液，120%吴茱萸水煎液，90%黄:吴(1:1)水煎液、90%黄:吴(2:1)水煎液、90%黄:吴(6:1)水煎液，由本校中药化学教研室提供。复方药物的剂量是根据左金丸的临床用量(12g/60kg体重/d)制定的，为临床成人每天用量20倍。辛伐他汀:5mg/片，扬子江药业提供。

1.2实验试剂

蛋黄乳剂:75%蛋黄生理盐水混悬液；高脂乳剂:20%胆固醇、1%丙硫氧嘧啶、40%猪油、20%猪胆酸钠溶液(浓度10%)、1%吐温、2%丙二醇，加蒸馏水至100mL组成；胆固醇：成都科龙化工试剂厂，050505；猪胆酸钠：北京奥博星生物技术责任有限公司，20030105；丙硫氧嘧啶：南通精华制药有限公司，050302。猪油：自制；TC试剂盒：四川迈克科技有限责任公司，0805031、0905041；TG试剂盒：四川迈克科技有限责任公司，1105051、0605031。

1.3实验动物

ICR小鼠，普通级，雄性，体重20～25g，四川省医学科学院实验动物研究所，川实动管质第15号。

1.4实验仪器

BASIC自动生化分析仪，SECOMAM。

2实验方法及结果

2.1不同比例配伍样品对高脂乳剂所致高脂模型小鼠血脂水平的影响

选用健康雄性ICR种小鼠130只，按体重随机分为7组，除空白组25只外其余各组每组15只，分组及剂量见表1。各组动物连续灌胃给药11d，给药体积为0.2mL/10g。除空白组每日灌胃给予蒸馏水2次外，其余各组上午灌胃给予高脂乳剂0.5mL/只，下午灌胃给药，连续10d。末次给药前小鼠禁食不禁水12h，末次给药后1h小鼠摘眼球取血(即实验第11d)，3000r/min离心5min，分离血清，按照试剂盒说明进行血清TC、TG测定。结果见表2。

表1不同比例配伍样品对高脂乳剂所致高脂模型小鼠血脂水平的影响

注：与模型组比较，**P<0.01；*P<0.05；样品测定值=样品实测值/对照组实测值的平均值×100%，TC、TG是由各测定值/对照组平均值所得的相对值，该做法是为了消除不同批次间动物及试剂的差异性，使结果更为准确。

表2结果表明，灌胃高脂乳剂10d可以造成模型小鼠TG、TC的显著升高，说明造模成功。黄连、吴茱萸和黄:吴(1:1)可以显著降低高脂小鼠的TG值；黄:吴(1:1)、黄:吴(2:1)、黄:吴(6:1)和黄连可以显著降低高脂小鼠的TC值。

2.2辛伐他汀和黄:吴(1:1)配方对高脂乳剂所致高脂模型小鼠血脂水平的影响

选用健康雄性ICR种小鼠60只，按体重随机分为4组，每组15只，分组及剂量见表3。给药及实验方法同2.1。结果见表3。

表3辛伐他汀和黄：吴(1:1)配方对高脂乳剂所致高脂模型小鼠血脂水平的影响

与模型组比较，**P<0.01，*P<0.05

表3结果表明，黄:吴(1:1)组和辛伐他汀组对高脂血症小鼠的降血脂效果显著，能明显降低升高的TG、TC值。

2.3不同比例配伍样品对蛋黄乳剂所致高脂模型小鼠血脂水平的影响

选用健康雄性ICR种小鼠96只，按体重随机分为8组，每组12只，分组及剂量见表3。各组动物连续灌胃给药11d，给药体积为0.2mL/10g。实验第10d除空白组外，其余各组腹腔注射75%蛋黄乳剂0.1mL/10g进行造模。末次给药前小鼠禁食不禁水12h，末次给药后1h小鼠摘眼球取血(即造模后24h)，3000r/min离心5min，分离血清，按照试剂盒说明进行血清TC、TG测定。结果见表4。

表4不同比例配伍样品对蛋黄乳剂所致高脂模型小鼠血脂水平的影响

与模型组比较，**P<0.01，*P<0.05

表4结果表明，腹腔注射蛋黄乳剂可以显著升高高脂模型小鼠血清TC、TG水平，显示造模成功。各组实验药物都可以降低升高的TC值；黄:吴(1:1)组、黄连和辛伐他汀组可以降低升高的TG值。

四、对高脂血症大鼠模型的实验研究

在前期的研究过程中，将小檗碱、黄连碱、甲基黄连碱、吴茱萸碱、吴茱萸次碱、吴茱萸总碱单独或两两配对组合进行药效学筛选，结果显示小檗碱与吴茱萸碱之间组合后的药效最佳，下述试验以此为基础进行深入的比例筛选研究。

1实验材料

1．1实验药物

1%小檗碱水溶液、1%吴茱萸碱水溶液，4.5%小檗碱水溶液，0.045%吴茱萸总碱水溶液，100%黄连吴茱萸(黄连：吴茱萸=1：1)水煎剂，以及黄连、吴茱萸药材粉末，吴茱萸总碱包括吴茱萸碱、吴茱萸次碱、吴茱萸因碱、羟基吴茱萸碱、吴茱萸卡品碱等混合物，均由中药化学教研室提供。

总碱高剂量（小檗碱：吴茱萸总碱=100:1）组药物的配制：将4.5%小檗碱水溶液、0.045%吴茱萸总碱水溶液按1:1比例等体积混合，得到相对于45g原生药浓度的药液，大鼠给药体积1.06mL/100g，即4.8g原生药/kg。

总碱低剂量组药物的配制：直接用蒸馏水将总碱高剂量药液稀1倍，给药体积1.06mL/100g，即2.4g原生药/kg。

组合物A剂量（小檗碱：吴茱萸碱=1:1）组药物的配制：将1%小檗碱水溶液和1%吴茱萸碱水溶液按等体积的比例混合，大鼠给药体积1mL/100g。

组合物B剂量组药物的配制：取100mL剂量组的混合溶液浓缩成50mL，制备成高剂量混合药液，大鼠给药体积1mL/100g

组合物C剂量组药物的配制：取50mL剂量组的混合溶液加入蒸馏水稀释成100mL的药液，制备成低剂量混合药液，大鼠给药体积1mL/100g。

小檗碱组：取100mL的1%小檗碱水溶液浓缩成50mL的2%小檗碱水溶液，直接灌胃给药，大鼠给药体积1mL/100g。

吴茱萸碱组：取100mL的1%小檗碱水溶液浓缩成50mL的2%小檗碱水溶液，直接灌胃给药，大鼠给药体积1mL/100g。

水煎液组药物的配制：将100%(黄连:吴茱萸=1:1)水煎剂用蒸馏水稀释成24%的浓度，大鼠给药体积1mL/100g，即2.4g原生药/kg。

粉剂组药物的配制:将黄连粉(8.3g)、吴茱萸粉(8.3g)加水至100mL混匀得到16.6%浓度的药液，大鼠给药体积1mL/100g，即1.66g原生药/kg。

辛伐他汀组:20mg/片，杭州默沙东制药有限公司生产，批号：06080，国药准字H19990366。用蒸馏水配成0.2%浓度的药液，大鼠给药体积1mL/100g，即20mg/kg。每日临用前新鲜配制。

1.2实验试剂

胆固醇:成都科龙化工试剂厂，批号20060705；猪胆酸钠：北京奥博星生物技术责任有限公司，批号20061022；丙硫氧嘧啶：上海复兴朝晖药液有限公司，批号060401；胆固醇(TCH)检测试剂盒，浙江东瓯生物工程有限公司，批号2006100127；甘油三酯(TG)检测试剂盒：浙江东瓯生物工程有限公司，批号2006100010；载脂蛋白(apoB)检测试剂盒：浙江伊利康生物技术有限公司，批号060410；载脂蛋白(apoA₁)检测试剂盒：浙江伊利康生物技术有限公司，批号060410；HDL-C试剂盒：瑞士罗氏诊断仪器公司，674698-01；LDL-C试剂盒：瑞士罗氏诊断仪器公司，673145-01。

1.3实验动物

SD大鼠，SPF级，雄性，体重200～230g，上海斯莱克实验动物有限责任公司提供，合格证号scxk(沪2003-0003)。

1.4主要仪器

Integra400plus全自动生化分析仪，瑞士罗氏诊断仪器公司；MultiskanMK3酶标仪，Thermo公司。

1.5实验动物设施条件

壹级。设施合格证：四川省实验动物管理委员会实验动物设施条件

合格证书:川实动管使第2003-015号。

1.6实验场地

成都中医药大学国家中医药管理局三级中药药理实验室，证书登编号:TCM-03-043。

2实验方法

2.1高脂乳剂的制备

高脂乳剂组成:10%胆固醇、1%丙硫氧嘧啶、20%猪油、2%猪胆酸钠、20%吐温、20%丙二醇，加蒸馏水至100mL配制而成。

制备方法:取猪油80g置于500mL烧杯中，加热溶化，加入40g胆固醇溶化，再加入8g胆酸钠和4g丙硫氧嘧啶，充分搅匀，然后加入80mL吐温-80、1,2丙二醇及适量蒸馏水至400mL，充分混匀，即成，4℃冰箱保存，临用前水浴加热融化使用。

2.2实验分组与给药

选用健康SD雄性大鼠120只，体重200～230g，SPF级，按体重分层随机分为12组:正常对照组、模型对照组、模型+总碱高、模型+低剂量组、模型+组合物A组、模型+组合物B组、模型+组合物C组、模型+小檗碱组、模型+吴茱萸碱组、模型+水煎液组、模型+粉剂组、模型+辛伐他汀组，每组10只动物。各组动物连续灌胃给药12天，给药体积为1～1.06mL/100g。除正常对照组每日灌胃给予蒸馏水两次外，其余各组上午9:00～11:00灌胃给予高脂乳剂1mL/100g，下午灌胃给药，连续12天。

2.3样本处理

实验第13天，末次给药前大鼠禁食不禁水8h，末次给药后60min，大鼠股动脉取血，3000r/min离5min，分离血清，冰冻保存待测，所有血清样本在1h内分离完毕。同时迅速取出大鼠肝脏，冷生理盐水洗净血液，滤纸吸尽水分，称重，计算肝脏指数，然后迅速将肝脏分为3份，2份-20℃冻存备用，1份进行肝脏组织TC、TG含量测定，1份采用实时荧光PCR方法进行ABCA₁、HMG-CoA基因表达测定；第3份置入10%甲醛溶液中固定。同时解剖取出大鼠心脏、肾脏和脑组织，10%甲醛固定，留作病理形态学的观察。

2.4指标检测

按照试剂盒的说明，采用酶法测定血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量；采用免疫透射比浊法测定血清载脂蛋白A₁(apoA₁)、载脂蛋白B(apoB)含量。肝脏组织TC、TG含量测定时，先采用甲醇:丙酮(1:1)溶液制备20%的肝脏匀浆，离心取上清液，然后按试剂盒的说明测定TC、TG含量。

2.5统计学处理

实验结果以均数±标准差表示，采用单因素方差分析，组间采用t检验。

3、实验结果

3.1各给药组对高脂血症大鼠血脂水平的影响

大鼠连续给予高脂乳剂12天，可使血清中TC、TG、LDL-C含量明显高于正常对照组(P<0.001)，并使血清HDL-C含量低于正常对照组(P>0.05)，提示高脂血症模型的成功。黄连、吴茱萸生物碱混合物4.8g/kg能显著降低模型动物血清TC、TG水平(P<0.01)，总碱2.4g/kg能显著降低模型动物血清TG含量(P<0.05)；组合物A、B、C剂量组均能降低模型动物血清TC、TG、LDL-C含量(P<0.01，P<0.05)；小檗碱组、吴茱萸碱组对血清中TC、TG、LDL-C的含量下降，对血清HDL-C有一定程度的升高趋势，但无统计学意义；黄连、吴茱萸配伍水煎液2.4g/kg对模型动物血清TC、TG、LDL-C的异常升高均有显著的降低作用(P<0.01，P<0.05)。然而，组合物A、B、C剂量组均对模型动物血清HDL-C的降低有升高作用，但无统计学意义，其余各给药组对模型动物血清HDL-C水平的低下无明显改善作用，同样处于较低水平(结果见表5)。

表5各给药组对高脂血症大鼠血脂水平的影响

模型对照组与正常对照组比较，***P<0.001；给药组与模型对照组比较，▲P<0.05，▲▲P<0.01。

3．2各给药组对高脂血症大鼠载脂蛋白含量的影响

大鼠连续给予高脂乳剂12天，模型动物血清中apoA₁含量明显低于正常对照组(P<0.05)，而apoB含量显著高于正常对照组(P<0.001)，提示高脂血症模型的成功。黄连、吴茱萸生物碱混合物4.8g/kg组，组合物A剂量、组合物剂量B组、组合物剂量C组及辛伐他汀组能显著降低模型动物血清apoB水平(P<0.05)。小檗碱组、吴茱萸碱组、黄：吴总碱高剂量组、组合物A、B、C剂量组、水煎液、粉剂组及辛伐他汀组对模型动物血清apoA₁水平有提高趋势，其中组合物C剂量组有统计学意义(P<0.05)，其余各组无统计学意义(结果见表6)。

表6各给药组对高脂血症大鼠载脂蛋白含量的影响

模型对照组与正常对照组比较，*P<0.05；***P<0.001；给药组与模型对照组比较，▲P<0.05

3.3各给药组对高脂血症大鼠肝脏TC、TG含量的影响

大鼠连续给予高脂乳剂12天,模型动物肝脏中TC、TG含量明显高于正常对照组(P<0.05，P<0.001)，提示高脂血症模型的成功。组合物B组、C组、小檗碱组、吴茱萸碱组对模型动物肝脏TC含量有降低趋势，但无统计学意义，黄连、吴茱萸总碱混合物组及水煎液等其余各组的大鼠肝脏TC含量甚至高于模型对照组(P<0.01)。组合物A、B、C组、小檗碱组、辛伐他汀组对模型动物肝脏TG含量有降低趋势，但无统计学意义，吴茱萸碱组、黄连、吴茱萸总碱混合物组及水煎液等其余各组的大鼠肝脏TG含量甚至高于模型对照组(结果见表7)。

表7各给药组对高脂血症大鼠肝脏TC、TG含量的影响

模型对照组与正常对照组比较，*P<0.05；***P<0.001；给药组与模型对照组比较，▲P<0.05；▲▲P<0.01。

3.4各给药组对高脂血症大鼠体重及肝脏指数的影响

大鼠连续给予高脂乳剂12天，与正常对照组比较，模型组动物的体重显著降低(P<0.001)，提示高脂乳剂的给予会影响动物的胃肠吸收功能，从而影响生长发育，各给药组对模型动物体重的减轻无明显改善作用，组合物A剂量组、组合物B剂量组、组合物C剂量组、总碱高剂量组、总碱低剂量组、水煎液组和辛伐他汀组表现出一定提高趋势。此外，与正常对照组比较，模型对照组的肝脏指数无明显变化但给药组与模型对照组比较，黄连、吴茱萸生物碱混合物、水煎液使肝脏指数呈现降低的趋势，其中总碱低剂量组作用显著(P<005,结果见表8)。

表8各给药组对高脂血症大鼠体重及肝脏指数的影响

模型对照组与正常对照组比较，***P<0.001；给药组与模型对照组比较，▲P<0.05。

从上述实验结果可以看出，小檗碱与吴茱萸碱组合配伍后其治疗作用明显优于黄连吴茱萸总碱的组合、明显优于小檗碱、吴茱萸碱单独应用时的疗效，同时也优于水煎液及粉剂的疗效。

通过试验验证表明当单独运用小檗碱（30mg/kg/天）和吴茱萸碱（30mg/kg/天）的剂量分别灌胃高脂血症模型大鼠，结果显示小檗碱和吴茱萸碱在单独应用时对TC、TG、LDL-C及HDL-C等高脂血症客观指标有一定程度的改善作用，但不具统计学意义。将小檗碱和吴茱萸碱两者混合后，按照小檗碱（10mg/kg/天）和吴茱萸碱（10mg/kg/天）的剂量灌胃高脂血症模型大鼠，结果显示小檗碱和吴茱萸碱两者组合应用时对TC、TG等高脂血症客观指标有明显的改善作用，具统计学意义，进而说明在治疗高脂血症时将小檗碱和吴茱萸碱组合配伍后不仅可以提高疗效，也可以节约能耗，减少原料药的使用量。

Claims (8)

1.一种治疗高脂血症的药物组合物，其特征在于：它是由以下组分及重量比组成：吴茱萸碱1～10重量份，小檗碱5～15重量份。

2.根据权利要求1所述的一种治疗高脂血症的药物组合物，其特征在于：吴茱萸碱2～8重量份，小檗碱6～14重量份。

3.根据权利要求1所述的一种治疗高脂血症的药物组合物，其特征在于：吴茱萸碱3～6重量份，小檗碱8～12重量份。

4.根据权利要求1所述的一种治疗高脂血症的药物组合物，其特征在于：吴茱萸碱5重量份，小檗碱10重量份。

5.一种如权利要求1～4中任意一项所述的治疗高脂血症的药物组合物的制备方法，其特征在于：它包括以下步骤：

S1：称取原料：按上述组分及重量比称取吴茱萸碱和小檗碱；

S2：将原料混合均匀后，加入药学上可接受的辅料制备成药学上常用的药物制剂。

6.根据权利要求5所述的一种治疗高脂血症的药物组合物的制备方法，其特征在于：所述的药物制剂为片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、口服液、冻干粉针或注射液。

7.根据权利要求5所述的一种治疗高脂血症的药物组合物的制备方法，其特征在于：所述的药学上可接受的辅料包括淀粉、硬脂酸镁、糊精和微晶纤维素。

8.如权利要求1～4中任意一项权利要求所述的药物组合物在制备治疗高脂血症药物中的应用。