CN101744937B - 一种抗脑缺血玄参的有效成分提取及滴丸制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种抗脑缺血玄参的有效成分提取方法，以及利用该方法获得的玄参有效成分制备抗脑缺血滴丸的方法。本发明采用将中药材经水提后上树脂柱富集有效成分的方法，最终获得提取物中有效成分含量提高约9倍，改善传统中药制剂“粗、大、黑”的外观和服用量过大等缺点。采用本发明方法制备抗脑缺血玄参滴丸，使易水解、易氧化的药物和易挥发的药物包埋而增加其稳定性，又可提高生物利用度，起效迅速，用于临床治疗缺血性脑卒中，可预见重要应用价值和广阔发展前景。

Description

一种抗脑缺血玄参的有效成分提取及滴丸制备方法

(一)技术领域

本发明涉及一种抗脑缺血玄参的有效成分提取方法，以及利用该方法获得的玄参有效成分制备抗脑缺血滴丸的方法。

(二)背景技术

随着人类社会的发展，人类疾病谱发生变化，脑血管疾病逐渐增多，成为威胁人类生命和影响生活质量的主要疾病。化学药物的研制由于投资大、时间长、风险高，变得越来越困难。中药以其扎实的临床基础、完整的理论体系和较好的功效引起了国际制药界的普遍重视，近年来，国内、国际市场对天然药物的需求量日益增加，呈现出无可估量的巨大市场空间。

玄参(Radix Scrophulariae)为玄参科植物玄参(Scrophularianingpoensis Hemsl.)的干燥根，别名元参、黑参、浙玄参等，为著名“浙八味”之一。玄参始载于《神农本草经》，列为中品其味甘、苦、咸，性微寒；归肺、胃、肾经；有凉血滋阴，泻火解毒的作用。其主要化学成分为环烯醚萜苷类和苯丙素苷类，现代药理学实验研究表明，其在抑制血小板聚集、促纤溶、扩张血管、抗氧化、抗脑缺血损伤、改善神经功能等方面发挥了显著的作用。

玄参药材分布广泛，市场流通量每年高达4000吨以上，其中浙江省磐安地区玄参资源丰富，常年种植面积达1.0万亩，但绝大多数玄参都以原药材外销，急需对玄参进行深加工开发。现代医学研究表明，玄参主要化学成分为环烯醚萜苷类和苯丙素苷等化合物，其已在预防和治疗脑血管疾病发生方面呈现突出的药理功效，采用先进分离富集技术，提高浙玄参有效部位得率，并将其开发成防治脑血管新药和保健品将具有广阔的市场前景。

目前国内普遍采用传统溶剂提取法提取玄参有效部位，这类提取方法有效成分利用率低下、周期长、工序多，规模化生产受到极大制约，远远不能满足工业化大生产的需求。随着科学技术的发展，一批新技术应运而生，如超声波萃取(SE)、超临界流体萃取(SFE)等。SE目前仍较多用于实验室，SFE由于设备复杂，运行成本高，提取范围有限等问题应用受到限制。

大孔吸附树脂为一种选择性有机高聚吸附剂，具有吸附快、解吸快、吸附容量大、易于再生、使用寿命长等优点。在我国，采用大孔吸附树脂分离纯化中药提取液已越来越受到人们的重视，其在分离、纯化中药提取液方面已日益显示其独特的效果，它有着广阔的应用前途，不仅为中药制剂质量控制和中药现代化研究提供更有效、可靠的纯化手段，更重要的是能改善传统中药制剂“粗、大、黑”的外观和服用量过大等缺点，对中药制剂的革新起积极的推动作用。大孔吸附树脂现已被广泛应用于天然产物的分离和富集，但在玄参有效成分提取分离方面的研究报道甚少。

滴丸是指固体或液体药物与基质混匀加热熔化后，滴入不相混溶的冷却剂中，收缩冷凝成丸的一种速效剂型，主要供口服应用。这种滴法制丸过程，实际上是将固体分散体制成滴丸的形式。滴丸剂中药物呈分子、胶体或晶体状态分散于滴丸基质中，不仅增大了总表面积，而且因其基质为水溶性，有利于药物在人体内的溶解和吸收，具有溶解快、吸收好、生物利用度高等特点，因此得以广泛应用于临床治疗。

将玄参有效成分制备成滴丸，与其他剂型相比，又可使易水解、易氧化的药物和易挥发的药物包埋而增加其稳定性，又可提高生物利用度，起效迅速，用于临床治疗缺血性脑卒中，可预见重要应用价值和广阔发展前景。

(三)发明内容

本发明目的是提供一种抗脑缺血玄参的有效成分提取方法，以及利用该方法获得的玄参有效成分制备抗脑缺血滴丸的方法。

本发明采用的技术方案是：

一种抗脑缺血玄参的有效成分提取方法，所述方法包括：

(1)上样液制备：取玄参干燥粉末，加入6～10倍质量的水回流提取1～3次，每次2～4h，过滤，合并滤液浓缩至浓度为0.5～1g/mL作为上样液；

(2)树脂前处理：大孔吸附树脂用70～95％乙醇浸泡12～24h，去除上层漂浮的杂质及小颗粒，抽干乙醇后，湿法上柱并测定柱体积，再用乙醇洗脱至流出液加水不变浑浊为止，再用水洗脱至无醇味，得树脂柱备用；

(3)有效成分提取：步骤(1)上样液上步骤(2)所述树脂柱，以2～4mL/min吸附速度动态吸附2～3次，先以3～7倍柱体积的水洗脱，然后用30～70％乙醇洗脱，所得乙醇洗脱液经浓缩、干燥，得抗脑缺血的玄参提取物。

所述大孔吸附树脂可选用本领域常规大孔吸附树脂，优选为DM130大孔树脂、D101大孔树脂或D201大孔树脂。

所述大孔吸附树脂(装柱量，干重)与上样液中的玄参(生药量)质量比为1∶1～4。

一种利用所述方法获得的抗脑缺血的玄参提取液制备抗脑缺血玄参滴丸的方法，所述方法包括：

(1)上样液制备：取玄参干燥粉末，加入6～10倍质量的水回流提取1～3次，每次2～4h，过滤，合并滤液浓缩至浓度为0.5～1g/mL作为上样液；

(2)树脂前处理：大孔吸附树脂用70～95％乙醇浸泡12～24h，去除上层漂浮的杂质及小颗粒，抽干乙醇后，湿法上柱并测定柱体积，再用乙醇洗脱至流出液加水不变浑浊为止，再用水洗脱至无醇味，得树脂柱备用；

(3)有效成分提取：步骤(1)上样液上步骤(2)所述树脂柱，以2～4mL/min吸附速度动态吸附2～3次，先以3～7倍柱体积的水洗脱，然后用30～70％乙醇洗脱，所得乙醇洗脱液经浓缩、干燥，得抗脑缺血的玄参提取物；

(4)按照玄参提取物干燥粉末与聚乙二醇质量比1∶1～6，将玄参提取物干燥粉末加入熔融的聚乙二醇中，搅拌至融合均匀，得混合物；

(5)以滴速20～50滴/min、滴距4～6cm，将熔融的混合物滴入冷凝液中，所述冷凝液为二甲基硅油和液体石蜡体积比5～7∶1～3的混合液，0～3℃冷凝成丸，收集滴丸，干燥，即得所述抗脑缺血玄参滴丸。

所述聚乙二醇优选为PEG4000和PEG6000质量比1～4∶1～6的混合物。

本发明的有益效果主要体现在：

1.经大孔树脂富集后，玄参有效成分含量提高约9倍，改善传统中药制剂“粗、大、黑”的外观和服用量过大等缺点；

2.以PEG4000作基质，滴丸的流动性和耐热性均较差；以PEG6000作基质，与药物混合后粘度较大，滴制相对比较困难，因此采用PEG4000与PEG6000混合滴制效果较好。

3.以滴丸的重量差异变异系数为指标，在最佳成型工艺条件下对滴距、滴速及冷凝液温度用L₉(3⁴)正交实验，对玄参滴丸的滴制工艺进行筛选，制成的滴丸圆整、具光泽、无拖尾粘连。

4.按最佳制备工艺重复试验6次，进行质量检查，滴丸重量、溶散时限及外观无明显差异，设计与优化结果可靠。

5.采用本发明方法制备的滴丸符合2005年版《中国药典》要求。

(四)附图说明

图1为玄参滴丸的TLC鉴别；1为阴性对照品，2为有效成分对照品，3～5为实施例5～7滴丸样品。

(五)具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：

实施例1：玄参有效成分的提取

上样液制备：

取玄参干燥粉末100g，第一次加入1000g水、加热回流提取2h，过滤，滤渣再加入800g水、加热回流提取4h，过滤，合并滤液，浓缩至浓度为0.8g/mL作为上样液；

树脂前处理：

DM130大孔吸附树脂用80％乙醇浸泡24h，去除上层漂浮的杂质及小颗粒，抽干乙醇后，湿法上柱并测定柱体积，再用乙醇洗脱至流出液加水不变浑浊为止，再用水洗脱至无醇味，得树脂柱备用；有效成分提取：

取6g处理后的DM130大孔吸附树脂装柱，10mL上样液以2～4mL/min吸附速度动态吸附2次，先以5倍柱体积的水洗脱，然后用70％乙醇洗脱，所得乙醇洗脱液，浓缩成浸膏后干燥制成粉末，得抗脑缺血的玄参提取物干燥粉末。

实施例2：玄参有效成分的提取

上样液制备：

取玄参干燥粉末100g，第一次加入800g水、加热回流提取3h，过滤，滤渣再加入600g水、加热回流提取4h，过滤，合并滤液，浓缩至浓度为0.8g/mL作为上样液；

树脂前处理：

D101大孔吸附树脂用95％乙醇浸泡18h，去除上层漂浮的杂质及小颗粒，抽干乙醇后，湿法上柱并测定柱体积，再用乙醇洗脱至流出液加水不变浑浊为止，再用水洗脱至无醇味，得树脂柱备用；

有效成分提取：

取7g处理后的D101大孔吸附树脂装柱，10mL上样液以2～4mL/min吸附速度动态吸附2次，先以6倍柱体积的水洗脱，然后用60％乙醇洗脱，所得乙醇洗脱液，浓缩成浸膏后干燥制成粉末，得抗脑缺血的玄参提取物。

实施例3：玄参有效成分的提取

上样液制备：

取玄参干燥粉末100g，第一次加入800g水、加热回流提取3h，过滤，滤渣再加入800g水、加热回流提取3h，过滤，合并滤液，浓缩至浓度为0.8g/mL作为上样液；

树脂前处理：

D102大孔吸附树脂用90％乙醇浸泡20h，去除上层漂浮的杂质及小颗粒，抽干乙醇后，湿法上柱并测定柱体积，再用乙醇洗脱至流出液加水不变浑浊为止，再用水洗脱至无醇味，得树脂柱备用；

有效成分提取：

取7g处理后的D102大孔吸附树脂装柱，10mL上样液以2～4mL/min吸附速度动态吸附2次，先以7倍柱体积的水洗脱，然后用50％乙醇洗脱，所得乙醇洗脱液，浓缩成浸膏后干燥制成粉末，得抗脑缺血的玄参提取物。

实施例4：玄参有效成分含量测定：

1、对照品溶液的制备

精密称取有效成分对照品(购自中国药品生物制品检定所，批号：111730-200604)1.00mg，用40％甲醇溶解定容至10mL，备用。

2、供试品溶液的制备

称取适量的玄参粗粉用6～10倍质量水加热回流提取2～4h两次，过滤，合并滤液后浓缩至浓度为0.5g/mL作上样液，按照实施例1方法，对DM130大孔吸附树脂进行预处理，并将上样液按最佳纯化工艺过大孔树脂柱，将上样液和洗脱液浓缩、挥去溶剂，用40％甲醇定容后作供试液。

3、标准曲线的绘制

精密吸取上述对照品溶液0.4、0.5、0.6、0.7、0.8mL于25mL量瓶中，定容，得到不同浓度的对照品溶液，在278nm波长处测定吸光度。以对照品的质量浓度为纵坐标，吸光度为横坐标，绘制标准曲线，得线性回归方程A＝0.037C+0.0144，r＝0.9991，结果表明哈巴俄苷在8.0～16.0mg/L时，质量浓度与吸光度呈良好的线性关系。

4、富集程度的考察

测定上样液和上样后大孔树脂的洗脱液中的总环烯醚萜苷含量及浸膏量，测定结果见表1。

表1：大孔树脂富玄参有效成分的程度考察

由表1可知：提取液经上柱，上样前后固型物中的有效成分含量由5.17％提高至46.3％，含量提高将近9倍。

实施例5：玄参滴丸的制备

冷凝液的制备：选择二甲基硅油和液体石蜡混合液为冷凝液，二甲基硅油和液体石蜡体积比5∶2，冷凝管长度16cm。

精密称取基质PEG4000-PEG6000(质量比2∶1)共7g，水浴上加热熔融，混合均匀，按照提取物：基质质量比为1∶5精密称取实施例1中药提取物，加入熔融的基质中，搅拌至融合均匀；

保持温度，调节滴速为20±2滴/min，滴距4～6cm，将混合物滴入冷凝液中，0～3℃冷凝成丸，收集滴丸，放入干燥机中干燥24h，即得所述抗脑缺血玄参滴丸。

滴制工艺的选择：

滴丸丸重受滴制过程中滴距、滴速、温度等因素的影响。故以滴丸的重量差异变异系数为指标，参照前述滴丸制备工艺，对滴距、滴速及冷凝液温度用L₉(3⁴)正交表对玄参滴丸的滴制工艺进行筛选。因素水平见表2，实验方案及结果见表3、4。

表2：正交试验中的因素水平表

表3：正交实验方案及结果

由表2、表3可知，影响滴丸重量的主次因素为C＞B＞A，B、C因素对其有显著性影响。

实施例6：玄参滴丸的制备

冷凝液的制备：选择二甲基硅油和液体石蜡混合液为冷凝液，比例2∶1，冷凝管长度18cm。

精密称取基质PEG4000-PEG6000(质量比3∶2)共6g，水浴上加热熔融，混合均匀，按照提取物：基质质量比为1∶4精密称取实施例2中药提取物，加入熔融的基质中，搅拌至融合均匀；

保持温度，调节滴速为20±2滴/min，滴距4～6cm，将混合物滴入冷凝液中，0～3℃冷凝成丸，收集滴丸，放入干燥机中干燥24h，即得所述抗脑缺血玄参滴丸。

实施例7：玄参滴丸的制备

冷凝液的制备：选择二甲基硅油和液体石蜡混合液为冷凝液，比例7∶3，冷凝管长度14cm。

精密称取基质PEG4000-PEG6000(质量比4∶1)共5g，水浴上加热熔融，混合均匀，按照提取物：基质质量比为1∶3精密称取实施例3中药提取物，加入熔融的基质中，搅拌至融合均匀；

保持温度，调节滴速为30±2滴/min，滴距4～6cm，将混合物滴入冷凝液中，0～3℃冷凝成丸，收集滴丸，放入干燥机中干燥24h，即得所述抗脑缺血玄参滴丸。

实施例8：抗脑缺血玄参滴丸质量标准

(1)抗脑缺血玄参滴丸TLC测定：

分别称取实施例5～7滴丸各约2g，于研钵中研细，放入具塞锥形瓶中，加40％甲醇10mL，超声处理20分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。

取空白基质所制备滴丸同法制成滴丸阴性对照液。

精密称取哈巴俄苷对照品5.0mg，用40％甲醇定容到10ml，作为对照品溶液。

照薄层色谱法(附录VIB)试验，吸取上述溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-醋酸-水(8∶2∶3)为展开剂，用展开剂预饱和20分钟，展开，取出，晾干，喷以香草醛硫酸试液，热风吹至斑点清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，而阴性对照无相应的斑点。结果见图1。

(2)抗脑缺血玄参滴丸性状：

本品为棕黑色圆整、具光泽的滴丸，气微香，味微苦。

每丸重量：36mg，每丸含生药量：0.44g

(3)抗脑缺血玄参滴丸检查：

1、溶散时限

照崩解时限检查法(中国药典2005版一部附录X II A)检查，选择筛孔内径为0.42mm的崩解仪，3批样品(实施例5～7)中每批取供试品6丸，不加挡板进行检查。结果3批样品均在30min内全部溶散，符合药典规定。

2、重量差异

照滴丸剂(中国药典2005版一部附录IK)项下〔重量差异〕的检查法，3批样品(实施例5～7)每批取供试品20丸，精密称定总重量，求得平均丸重后，再分别精密称定每丸的重量，每丸重量与平均丸重相比较，计算重量差异，超出重量差异限度(±12％)的不得多于2丸，并不得有1丸超出限度1倍。结果3批样品重量差异检查均符合药典规定。

3、微生物限度

照微生物限度检查法(中国药典2005版一部附录XIIIC)检查，3批样品(实施例5～7)均符合药典规定。

Claims (3)

1.一种抗脑缺血玄参的有效成分提取方法，所述方法包括：

(1)上样液制备：取玄参干燥粉末，加入6～10倍质量的水回流提取1～3次，每次2～4h，过滤，合并滤液浓缩至浓度为0.5～1g/mL作为上样液；

(2)树脂前处理：大孔吸附树脂用70～95％乙醇浸泡12～24h，去除上层漂浮的杂质及小颗粒，抽干乙醇后，湿法上柱并测定柱体积，再用乙醇洗脱至流出液加水不变浑浊为止，再用水洗脱至无醇味，得树脂柱备用；所述大孔吸附树脂为下列之一：DM130大孔树脂、D101大孔树脂或D201大孔树脂；

(3)有效成分提取：步骤(1)上样液上步骤(2)所述树脂柱，以2～4mL/min吸附速度动态吸附2～3次，先以3～7倍柱体积的水洗脱，然后用30～70％乙醇洗脱，所得乙醇洗脱液经浓缩、干燥，得抗脑缺血的玄参提取物。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述大孔吸附树脂与玄参质量比为1∶1～4。

3.一种利用权利要求1所述方法获得的抗脑缺血的玄参提取液制备抗脑缺血玄参滴丸的方法，所述方法包括：

(1)上样液制备：取玄参干燥粉末，加入6～10倍质量的水回流提取1～3次，每次2～4h，过滤，合并滤液浓缩至浓度为0.5～1g/mL作为上样液；

(2)树脂前处理：大孔吸附树脂用70～95％乙醇浸泡12～24h，去除上层漂浮的杂质及小颗粒，抽干乙醇后，湿法上柱并测定柱体积，再用乙醇洗脱至流出液加水不变浑浊为止，再用水洗脱至无醇味，得树脂柱备用；

(3)有效成分提取：步骤(1)上样液上步骤(2)所述树脂柱，以2～4mL/min吸附速度动态吸附2～3次，先以3～7倍柱体积的水洗脱，然后用30～70％乙醇洗脱，所得乙醇洗脱液经浓缩、干燥，得抗脑缺血的玄参提取物；

(4)按照玄参提取物干燥粉末与聚乙二醇质量比1∶1～6，将玄参提取物干燥粉末加入熔融的聚乙二醇中，搅拌至融合均匀，得混合物；

所述聚乙二醇为PEG4000和PEG6000质量比1～4∶1～6的混合物；

(5)以滴速20～50滴/min、滴距4～6cm，将熔融的混合物滴入冷凝液中，所述冷凝液为二甲基硅油和液体石蜡体积比5～7∶1～3的混合液，0～3℃冷凝成丸，收集滴丸，干燥，即得所述抗脑缺血玄参滴丸。

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