CN1402709A - 4－吡啶基－n－酰基－l－苯丙氨酸 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了式(I)的化合物，其中R1－R7如申请中所定义，其具有作为VCAM－1与表达VLA－4的细胞间结合的抑制剂活性，因此其用于治疗涉及VCAM－1与表达VLA－4的细胞结合的病症和/或损伤，如慢性炎性疾病。
Description
作为免疫球蛋白(Ig)超基因家族中一员的血管细胞附着分子-1(VCAM-1)在活化的但不是静止的内皮上表达。整联蛋白VLA-4(α4β1)，其可在许多类型的细胞包括循环淋巴细胞、嗜曙红细胞、嗜碱细胞、和单核细胞上表达，但其不能在嗜中性粒细胞上表达，它是VCAM-1的主要受体。VCAM-1或VLA-4的抗体在体内可以阻止这些单核白细胞以及黑素瘤细胞附着到活性内皮上。在几种炎症动物模型中，这两种蛋白中任意一种的抗体能有效抑制白细胞浸润和防止组织损伤。已表明抗-VLA-4单克隆抗体能阻断佐剂诱导的关节炎中的T-细胞迁出，防止哮喘模型中嗜曙红细胞累积和支气管收缩，在实验性自身免疫性脑炎(EAE)中减少麻痹和抑制单核细胞和淋巴细胞浸润。已表明抗-VCAM-1单克隆抗体能延长心脏同种移植存活时间。最近的研究表明抗-VLA-4mAbs可以防止非肥胖型糖尿病小鼠的胰岛炎和糖尿病，明显减轻结肠炎的棉顶绢毛猴(cotton-top tamarin)模型中的炎症。进一步表明VCAM在炎症性肠病的TNB/乙醇大鼠模型中的炎性结肠组织的内皮细胞上表达(Gastroenterology 1999，116，874-883)。
因此，能抑制含有α4的整联蛋白与VCAM-1间相互作用的化合物可以用作用于慢性炎性疾病如类类风湿性关节炎(RA)、多发性硬化(MS)、哮喘、和炎性肠病(IBD)的治疗药物。本发明的化合物具有该作用。
在本文中使用的术语“卤素”是指四个卤素原子氯、溴、氟和碘中的任何一个，优选溴、氟和氯。
术语“低级烷基”，单独或结合的，指含有最多6个碳原子(C1-C6)的直链或支链烷基，如甲基，乙基，正丙基，异丙基，正丁基，仲丁基，叔丁基，正戊基，正己基等等。
术语“取代的低级烷基”是指被独立选自下组的一个或多个基团取代的上述定义的低级烷基：环烷基，硝基，芳氧基，芳基，羟基，卤素，氰基，低级烷氧基，低级烷酰基，低级烷硫基，低级烷基亚磺酰基，低级烷基磺酰基，氨基或一-或二-低级烷基氨基。取代的低级烷基的例子包括：2-羟基乙基、3-氧代丁基、氰基甲基和2-硝基丙基。尽管本发明在R3和R5位具体涉及取代的低级烷基三氟甲基，但在这些位置也考虑五氟乙基。该情况同样适用于R22和R23。
术语“环烷基”(或低级环烷基)指未取代的或取代的3-至7-元碳环(carbacyclic ring)。用于本发明的取代基为羟基，卤素，氰基，低级烷氧基，低级烷酰基，低级烷基，芳酰基，低级烷硫基，低级烷基亚磺酰基，低级烷基磺酰基，芳基，杂芳基和一-或二-低级烷基取代的氨基。
术语＂低级烯基＂是指具有在两个相邻的碳原子间的双键的具有2-10个碳原子的亚烷基(alkylene group)。
术语＂低级烷氧基＂是指含有最多6个碳原子的直链或支链烷氧基，如甲氧基，乙氧基，正丙氧基，异丙氧基，正丁氧基，叔丁氧基等。
术语＂低级烷硫基＂是指低级烷基通过二价硫原子键合到分子的其余部分上，例如，甲基巯基或异丙基巯基。术语＂低级烷基亚磺酰基＂是指上述定义的低级烷基通过亚磺酰基的硫原子键合到分子的其余部分上。术语＂低级烷基磺酰基＂是指上述定义的低级烷基通过磺酰基的硫原子键合到分子的其余部分上。
术语＂芳基＂是指一-或二-环芳基，如苯基或萘基，其是未取代的或被常规的取代基取代。优选的取代基为低级烷基，低级烷氧基，羟基低级烷基，羟基，羟基烷氧基，卤素，低级烷硫基，低级烷基亚磺酰基，低级烷基磺酰基，氰基，硝基，全氟低级烷基，烷酰基，芳酰基，芳基炔基，低级炔基和低级烷酰基氨基。可以用于本发明的芳基的例子有苯基，对-甲苯基，对-甲氧基苯基，对-氯苯基，间-羟基苯基，间-甲基硫苯基，2-甲基-5-硝基苯基，2，6-二氯苯基，1-萘基等。
术语＂芳基烷基＂是指前述定义的低级烷基中的一个或多个氢原子被本文定义的芳基或杂芳基取代。任何常规的芳烷基可以用于本发明，如苄基等。
术语＂杂芳基＂是指未取代的或取代的含有1、2、3或4个杂原子(独立为N、S或O)的5-或6-元单环芳香杂环或9-或10-元双环芳香杂环。杂芳基环的例子为吡啶，苯并咪唑，吲哚，咪唑，噻吩，异喹啉，喹啉等。上述定义的＂芳基＂的取代基包括在杂芳基的定义中。
术语＂低级烷氧基羰基＂是指通过羰基键合的低级烷氧基。烷氧基羰基的例子有乙氧基羰基等。
术语＂低级烷基羰基氧基＂是指通过氧原子键合的低级烷基羰基氧基，例如乙酰氧基。它与术语＂酰基氧基＂的定义相同。
术语＂低级烷酰基＂是指通过羰基键合的低级烷基，其在含义上包括上述定义的基团，如乙酰基、丙酰基等。术语＂全氟低级烷酰基＂是指通过羰基键合到分子的其余部分上的全氟低级烷基(所有的氢被氟取代的取代低级烷基，优选三氟甲基或五氟乙基)。术语＂全氟低级烷酰基氨基＂是指通过氨基键合到分子的其余部分上的全氟低级烷酰基。
术语＂低级烷基羰基氨基＂是指通过氮原子键合到分子的其余部分上的低级烷基羰基，如乙酰基氨基。术语＂低级烷基氨基羰基＂是指通过羰基键合键合到分子的其余部分上的低级烷基氨基。术语＂芳基氨基羰基＂是指键合到进一步通过羰基键合到分子的其余部分上的氨基上的芳基。
术语＂芳酰基＂是指通过羰基键合到分子的其余部分上的单或双环芳基或杂芳基。芳酰基的例子有苯甲酰基，3-氰基苯甲酰基，2-萘甲酰基，烟酰基等。
可药用的盐是本领域公知的那些，考虑到化合物的化学性质可以通过常规方法制备。酸性化合物可药用盐的例子有碱金属盐或碱土金属盐，如钠、钾、钙、镁、碱性胺或碱性氨基酸、铵或烷基铵盐。本发明化合物特别适合的盐是钠盐，例如其中R6为H时。通过用氢氧化钠处理酸，可以很容易地获得本发明任何酸的钠盐。对于碱性化合物，例子有无机酸或有机酸，如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、柠檬酸、甲酸、富马酸、马来酸、乙酸、琥珀酸、酒石酸、甲磺酸和对-甲苯磺酸。
本发明包括式I化合物：及其可药用的盐。本发明还包括含有它们的组合物，它们作为治疗某些疾病的药物的用途，以及用于制备它们的方法和中间体。
按照本发明，R1为如下述的基团Y-1、Y-2或Y-3：Y-1为下式的基团：其中R22和R23独立为氢，低级烷基，低级烷氧基，环烷基，芳基，芳基烷基，硝基，氰基，低级烷硫基，低级烷基亚磺酰基，低级烷基磺酰基，低级烷酰基，卤素，或全氟低级烷基，并且R22和R23中至少一个不为氢，R24为氢，低级烷基，低级烷氧基，芳基，硝基，氰基，低级烷基磺酰基，或卤素；
Y-2为式Y-2的基团，其为通过碳原子键合到酰胺羰基上的五或六元芳香杂环，其中所述环含有一个、两个或三个选自N、O和S的杂原子，所述环的一个或两个原子被低级烷基，环烷基，卤素，氰基，全氟低级烷基，或芳基独立取代，并且至少一个所述取代原子与键合到酰胺羰基上的碳原子相邻。
Y-3为下式的3-7元环：其中R25为低级烷基，未取代的或氟取代的低级烯基，或式R26-(CH2)e-的基团，R26为芳基，杂芳基，叠氮基，氰基，羟基，低级烷氧基，低级烷氧基羰基，低级烷酰基，低级烷硫基，低级烷基磺酰基，低级烷基亚磺酰基，全氟低级烷酰基，硝基，或R26为式-NR28R29的基团，其中R28为氢或低级烷基，R29为氢，低级烷基，低级烷氧基羰基，低级烷酰基，芳酰基，全氟低级烷酰基氨基，低级烷基磺酰基，低级烷基氨基羰基，芳基氨基羰基，或R28和R29与连接的氮原子一起形成4、5或6元饱和杂环，并且所述环任选含有一个选自O、S和N-R40的另外的杂原子。Q为-(CH2)fO-，-(CH2)fS-，-(CH2)fN(R27)-，-(CH2)f-，R27为H，低级烷基，芳基，低级烷酰基，芳酰基或低级烷氧基羰基，R40为H，低级烷基，芳基，低级烷酰基，芳酰基或低级烷氧基羰基，环中的碳原子为未取代的或被低级烷基或卤素取代，e为0至4的整数，f为0至3的整数；R2为氢，低级烷基，取代的低级烷基，芳基，或芳基低级烷基，R3为氢，卤素，低级烷基，或芳基，并且还可以包括三氟甲基，R4为氢，卤素，低级烷基，或芳基，R5为氢，低级烷基，低级烷氧基，三氟甲基，或OH，R6为氢，低级烷基，低级烷基羰基氧基低级烷基，或R6为式P-3的基团：
其中：R32为氢或低级烷基；R33为氢，低级烷基，芳基，R34为氢或低级烷基，h为0至2的整数，g为0至2的整数，h和g的总数为1至3；或R6为式P-4的基团：其中：R32、g和h如前所定义，Q’为O，S，-(CH2)j-，或式N-R35的基团，R35为氢，低级烷基，低级烷酰基，低级烷氧基羰基，j为0、1或2，R7为氢，氯，低级烷氧基，或低级烷基。优选Q为-(CH2)fO-，-(CH2)fS-，或-(CH2)f(式1a)。式I或式1a化合物中还优选R5为氢，低级烷基或三氟甲基(式1b)。
本发明的化合物可以作为立体异构体和非对映体形式存在，它们都包括在本发明的范围内。
在式I、式1a或式1b化合物的第一个优选实施方案中，R2为氢，低级烷基，或芳基低级烷基，R3为氢，低级烷基，或三氟甲基，优选为氢，R4为氢或卤素，优选为卤素，R5为氢，低级烷基，三氟甲基，并且另外可以是低级烷氧基，但优选为氢，R6为氢或低级烷基，R7为氢，氯，低级烷氧基，或低级烷基。
本发明的第一个优选实施方案的进一步优选实施方案为式I、式1a或式1b化合物：
其中R1为基团Y-1：
其中R22和R23独立为氢，低级烷基，低级烷氧基，环烷基，芳基，芳基烷基，硝基，氰基，低级烷硫基，低级烷基亚磺酰基，低级烷基磺酰基，低级烷酰基，卤素，或全氟低级烷基，并且R22和R23中至少一个不为氢，R24为氢，低级烷基，低级烷氧基，芳基，硝基，氰基，低级烷基磺酰基，或卤素，更特别地R22和R23独立为低级烷基或卤素，R24为氢或低级烷氧基；或其中R22和R23独立为氢，低级烷基或卤素，R24为氢，低级烷基或低级烷氧基，特别是氢。在这些化合物中，优选R2为氢，低级烷基或芳基低级烷基，特别是芳基低级烷基。并且，这些化合物优选R2为氢；R4为氢，或卤素，或另外可以是低级烷基(但优选为卤素)；R5为氢，低级烷基，或三氟甲基，或另外可以是低级烷氧基(但优选为氢)；R6为氢或低级烷基；R7为氢，氯，低级烷氧基，或低级烷基。
本发明更优选的实施方案为上面式I、式1a或式1b化合物，其中R1为基团Y-1：其中R22和R23独立为氢，低级烷基或卤素，特别是低级烷基或卤素；R24为氢，低级烷基或低级烷氧基，特别是氢。在这些化合物中，优选R2为氢，低级烷基或芳基低级烷基；R3为氢；R4为氢或卤素，R5为氢，或低级烷基，R6为氢或低级烷基；R7为氢，氯，低级烷氧基，或低级烷基。在该更优选实施方案的尤其优选化合物中，R22和R23独立为氢，低级烷基或卤素，R24为氢或低级烷氧基，R2为芳基低级烷基。或者，在这些化合物中，优选R2为氢，低级烷基或芳基低级烷基；R3为氢；R4为氢，或卤素，或另外可以是低级烷基(但优选为卤素)；R5为氢，低级烷基，或三氟甲基，或另外可以是低级烷基(但优选为氢)；R6为氢或低级烷基；R7为氢，氯，低级烷氧基，或低级烷基。
本发明另一个实施方案为上面式I、式1a或式1b化合物，特别是第一个优选实施方案，其中R1为通过碳原子键合到酰胺羰基上的五或六元芳香杂环，其中所述环含有一个、两个或三个选自N、O和S的杂原子，所述环的一个或两个原子被低级烷基，环烷基，卤素，氰基，全氟低级烷基，或芳基独立取代，并且至少一个所述取代原子与键合到酰胺羰基上的碳原子相邻。在这些化合物中，特别优选R2为氢，低级烷基或芳基低级烷基；R3为氢；R4为氢或卤素(优选为卤素)；R5为氢，三氟甲基或低级烷基(优选为氢)；R6为氢或低级烷基；R7为氢，氯，低级烷氧基，或低级烷基。或者，在这些化合物中，优选R2为氢，低级烷基或芳基低级烷基；R2为氢；R4为氢，或卤素，或另外可以是低级烷基(但优选为卤素)；R5为氢，低级烷基，或三氟甲基，或另外可以是低级烷氧基(但优选为氢)；R6为氢或低级烷基；R7为氢，氯，低级烷氧基，或低级烷基。
本发明另一个优选实施方案为上面式I、式1a或式1b化合物，其中R1为式Y-3的基团，其为下式的3-7元环：
其中R25为低级烷基，未取代的或氟取代的低级烯基，或式R26-(CH2)e-的基团，R26为芳基，杂芳基，叠氮基，氰基，羟基，低级烷氧基，低级烷氧基羰基，低级烷酰基，低级烷硫基，低级烷基磺酰基，低级烷基亚磺酰基，全氟低级烷酰基，硝基，或R26为式-NR28R29的基团，其中R28为氢或低级烷基，R29为氢，低级烷基，低级烷氧基羰基，低级烷酰基，芳酰基，全氟低级烷酰基氨基，低级烷基磺酰基，低级烷基氨基羰基，芳基氨基羰基；或R28和R29与连接的氮原子一起形成4、5或6元饱和杂环，并且所述环任选含有一个选自O、S和N-R40的另外的杂原子。Q为-(CH2)fO-，-(CH2)fS-，-(CH2)fN(R27)-，-(CH2)f-，R27为H，低级烷基，芳基，低级烷酰基，芳酰基或低级烷氧基羰基，R40为H，低级烷基，芳基，低级烷酰基，芳酰基或低级烷氧基羰基，环中的碳原子为未取代的或被低级烷基或卤素取代，e为0至4的整数，f为0至3的整数。在这些化合物中，特别优选R2为氢，低级烷基或芳基低级烷基；R3为氢，低级烷基或三氟甲基；R4为氢或卤素(优选卤素)；R5为氢，三氟甲基，或低级烷基(优选氢)；R6为氢或低级烷基；R7为氢，氯，低级烷氧基，或低级烷基。或者，在这些化合物中，优选R2为氢，低级烷基或芳基低级烷基；R3为氢；R4为氢，或卤素，或另外可以是低级烷基(但优选为卤素)；R5为氢，低级烷基，或三氟甲基)，或另外可以是低级烷氧基(但优选为氢)；R6为氢或低级烷基；R7为氢，氯，低级烷氧基，或低级烷基。
本发明的更优选实施方案为上面式I、式1a或式1b化合物，特别是第一个优选实施方案，其中R1为上述定义的式Y-3基团，其为下式的3-7元环：
其中R25为式R26-(CH2)e-的基团，其中R26为低级烷氧基，Q为-(CH2)f-，e为0至4的整数，f为0至3的整数；这些化合物特别优选其中R2为氢，低级烷基，取代的低级烷基，芳基，或芳基低级烷基，特别是芳基低级烷基。当R2为低级烷基或芳基低级烷基；R3为氢；R4为氢或卤素；R5为氢；R6为氢或低级烷基；R7为氢，氯，低级烷氧基，或低级烷基时，这些化合物也是优选的。或者，在这些化合物中，优选R2为氢，低级烷基或芳基低级烷基；R3为氢；R4为氢，或卤素，或另外可以是低级烷基(但优选为卤素)；R5为氢，低级烷基，或三氟甲基)，或另外可以是低级烷氧基(但优选为氢)；R6为氢或低级烷基；R7为氢，氯，低级烷氧基，或低级烷基。
在本发明的式I、式1a或式1b的任何一个化合物中，R1可以是式Y-1的基团或式Y-3的基团；R2可以是氢，低级烷基或芳基低级烷基，优选低级烷基，特别是甲基，或芳基低级烷基，特别是苄基，R3可以是氢，低级烷基，或三氟甲基，优选氢或低级烷基；R4可以是氢或卤素；R5可以是氢，低级烷基，或三氟甲基；R6可以是氢，低级烷基，低级烷基羰基氧基低级烷基，或式P-3的基团，并且另外可以是式P-4的基团；R7可以是低级烷基或氢，优选氢。
在本发明的式I、式1a或式1b或上一段描述的优选化合物的任何一个化合物中，Y-1和Y-3中的基团可以具体是选自下列的基团：R22和R23为氢，卤素，低级烷基，R24为氢或低级烷氧基，R25为式R26-(CH2)e-的基团，其中R26为低级烷氧基，Q为-(CH2)f-，e为0至4的整数，f为0至3的整数，和/或其中R2为低级烷基，R4为氢，R3和R5为低级烷基或三氟甲基，R6为氢，低级烷基，或低级烷基羰基氧基低级烷基，或式P-3的基团，优选其中R32为氢；R33和R34为低级烷基；g和h中的一个为1，另一个为0。在这些化合物中，优选R6和R7为氢，和/或R2为低级烷基；R3为氢；R4为氢或卤素；R5为氢或低级烷基，并优选R22和R23为低级烷基或卤素，特别是卤素，R24为氢，或R22和R23为氢或卤素，R24为氢或低级烷氧基，优选氢，或R1为Y-3。具体的化合物为：
N-[(2，6-二氯苯基)羰基]-4-[1，6-二甲基-4-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸；
N-[(2-乙基-6-甲基苯基)羰基]-4-[1，6-二甲基-4-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸；
N-[(2-(1-甲基乙基)-6-甲基苯基)羰基]-4-[1，6-二甲基-4-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸；
N-[(2-氯-6-甲基苯基)羰基]-4-[1，6-二甲基-4-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸；
N-[(2，6-二氯苯基)羰基]-4-(1，4-二甲基-6-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基)-L-苯丙氨酸；或r
N-[(2-氯-6-甲基苯基)羰基]-4-(1，4-二甲基-6-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基)-L-苯丙氨酸。
在其它这些化合物中，R22和R23优选为卤素，或低级烷基，R24为氢，或低级烷氧基，R25为式R26-(CH2)e-的基团，其中R26为低级烷氧基，Q为-(CH2)f-，e为0至4的整数，f为0至3的整数，具体是N-[[1-(2-甲氧基乙基)环戊基]羰基]-4-[1，6-二甲基-4-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸，和/或R2为芳基低级烷基；R3为氢，R4为卤素，R5、R6和R7为氢。还优选R1为Y-1。
在式I、式1a或式1b特别优选的化合物中，R1为式Y-1的基团或式Y-3的基团；R2为低级烷基或芳基低级烷基；R2为氢，低级烷基，或三氟甲基；R4为氢或卤素；R5为氢，低级烷基，或三氟甲基；R6为氢，低级烷基，低级烷基羰基氧基低级烷基，或式P-3的基团；R7为氢(式A)。
在式A的优选化合物中，Y-1和Y-3可以具体是选自下列的基团：R22和R23为氢，卤素，低级烷基，R24为氢或低级烷氧基，R25为式R26-(CH2)e-的基团，其中R26为低级烷氧基，Q为-(CH2)f-，e为0至4的整数，f为0至3的整数(式A-1)。
在式A-1的优选化合物中，R2为低级烷基，R4为氢，和R3和R5为低级烷基或三氟甲基(式A-1a)。在式A-1a的一个实施方案中，R6为氢。在该实施方案中，R1可以是Y-1，特别是其中R22和R23为卤素或低级烷基，或R1可以是Y-3。在式A-1a的其它实施方案中，R6为低级烷基，特别是甲基，或为低级烷基羰基氧基低级烷基，特别是1-(乙酰氧基)乙基，或为式P-3的基团，其中R32为氢；R33和R34为低级烷基，特别是甲基或乙基；g和h中的一个为1，另一个为0。
其中R6为低级烷基，具体化合物为：
N-[(2，6-二氯苯基)羰基]-4-[1，6-二甲基-4-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸乙酯；
N-[(2，6-二氯苯基)羰基]-4-[1，4-二甲基-6-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸乙酯；
N-[(2-氯-6-甲基苯基)羰基]-4-[1，6-二甲基-4-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸乙酯；或
N-[(2-氯-6-甲基苯基)羰基]-4-[1，4-二甲基-6-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸乙酯。
其中R6为低级烷基羰基氧基-低级烷基，具体化合物为：
N-[(2，6-二氯苯基)羰基]-4-[1，6-二甲基-4-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸1-(乙酰氧基)乙酯；
N-[(2，6-二氯苯基)羰基]-4-[1，4-二甲基-6-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸1-(乙酰氧基)乙酯；
N-[(2-氯-6-甲基苯基)羰基]-4-[1，6-二甲基-4-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸1-(乙酰氧基)乙酯；或
N-[(2-氯-6-甲基苯基)羰基]-4-[1，4-二甲基-6-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸1-(乙酰氧基)乙酯。
其中R6为P-3，具体化合物为：
N-[(2，6-二氯苯基)羰基]-4-[1，6-二甲基-4-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸2-[(N，N-二乙基)氨基]乙酯；
N-[(2，6-二氯苯基)羰基]-4-[1，4-二甲基-6-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸2-[(N，N-二乙基)氨基]乙酯；
N-[(2-氯-6-甲基苯基)羰基]-4-[1，6-二甲基-4-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸2-[(N，N-二乙基)氨基]乙酯；或
N-[(2-氯-6-甲基苯基)羰基]-4-[1，4-二甲基-6-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸2-[(N，N-二乙基)氨基]乙酯。
在式A-1另一个优选的化合物中，R6为氢。优选R2为低级烷基；R3为氢；R4氢或卤素；R5为氢或低级烷基(式A-1b)。在式A-1b的一个实施方案中，R1为Y-1。优选R22和R23为低级烷基或卤素，R24为氢，或R22和R23为卤素，R24为氢，特别是
N-[(2-氯-6-甲基苯基)羰基]-4-(5-氯-1-甲基-2-氧代-3-吡啶基)-L-苯丙氨酸；
N-[(2-氯-6-甲基苯基)羰基]-4-(1-甲基-2-氧代-3-吡啶基)-L-苯丙氨酸；
N-[(2-氯-6-甲基苯基)羰基]-4-(1，4-二甲基-2-氧代-3-吡啶基)-L-苯丙氨酸；或
N-[(2，6-二氯苯基)羰基]-4-(1，4-二甲基-2-氧代-3-吡啶基)-L-苯丙氨酸，
或者R22和R23为氢或卤素，R23为低级烷氧基。在式A-1b的另一个实施方案中，R1为Y-3，特别是4-(5-氯-1-甲基-2-氧代-3吡啶基)-N-[[1-(2-甲氧基乙基)环戊基]羰基]-L-苯丙氨酸。
在式A的另一个优选的化合物中，其中R1为Y-1，其中R22和R23为卤素，或低级烷基，R24为氢或低级烷氧基，或其中R1为Y-3，其中R25为式R26-(CH2)e-的基团，其中R26为低级烷氧基，Q为-(CH2)f-，e为0至4的整数，f为0至3的整数。优选R2为芳基低级烷基；R3为氢，R4为卤素，R5、R6和R7为氢。优选地，R1为Y-1，特别是：
4-(1-苄基-5-氯-2-氧代-3-吡啶基)-N-[(2-氯-6-甲基苯基)羰基]-L-苯丙氨酸；或
4-(1-苄基-5-氯-2-氧代-3-吡啶基)-N-[[1-(2-甲氧基乙基)-环戊基]羰基]-L-苯丙氨酸。
另一方面，在本发明涉及式II的化合物：
其中R2-R5和R7如上式I中所定义，P1和P2分别为保护基团。更具体地，P1为标准的氮保护基团，如叔丁氧羰基(Boc)或苯甲氧羰基，P2为标准的羧基保护基团，如低级烷基或取代的低级烷基。这些化合物用作制备式I化合物的中间体。
本发明的化合物能抑制VCAM-1和纤连蛋白结合到在循环淋巴细胞、嗜曙红细胞、嗜碱细胞、和单核细胞(＂VLA-4-表达细胞＂)的VLA-4上。已知VCAM-1和纤连蛋白结合到这些细胞的VLA-4上与某些疾病状态有关，如类风湿性关节炎、多发性硬化、炎症性肠病，特别是相关于嗜曙红细胞结合到呼吸道内皮，而后者引起在哮喘中发生的肺部炎症。因此，本发明的化合物可以用于治疗哮喘。
根据它们抑制VCAM-1和纤连蛋白结合到在循环淋巴细胞、嗜曙红细胞、嗜碱细胞、和单核细胞上VLA-4的能力，本发明的化合物可以分别用作药物或药物组合物，特别是用于治疗已知与该结合有关的疾病。这些疾病的例子有类风湿性关节炎、多发性硬化、哮喘、炎性肠病。本发明的化合物优选用于治疗涉及肺部炎症的疾病，如哮喘。该哮喘中出现的肺部炎症涉及嗜曙红细胞、单核细胞和淋巴细胞的活化和肺浸润，这些细胞已被一些哮喘-诱发事件或物质活化。
并且，本发明的化合物还能抑制VCAM-1和MadCAM结合到细胞受体α4-β7上，细胞受体α4-β7也被称为LPAM，其在淋巴细胞、嗜曙红细胞和T-细胞上表达。尽管α4-β7与炎症中多种配体相互作用的精确作用还不完全清楚，能抑制α4-β1和α4-β7受体结合的本发明化合物在哮喘动物模型中特别有效。并且，α4-β7的单克隆抗体研究也表明能抑制α4-β7结合到MadCAM或VCAM的化合物可有效用于治疗炎性肠病。它们还有效地用于治疗其中涉及该结合作为疾病损伤或症状原因的其它疾病。
本发明的化合物可以口服给药、直肠给药或胃肠外给药，例如静脉内给药、肌肉内给药、皮下给药、鞘内给药、或经皮给药；或舌下给药，或眼内给药，或当肺炎时作为气溶胶给药。给药剂型的例子有口服给药中的胶囊剂、片剂、混悬剂、溶液剂，栓剂，注射液，滴眼液，油膏剂，喷雾剂。
静脉内、肌肉内、口服或吸入给药是优选使用的剂型。本发明化合物的有效剂量基于特定活性成分的性质，患者的年龄和要求，以及给药的剂型。通过常规方法例如剂量限制临床实验，可以确定剂量。因此，本发明进一步含有治疗患有VCAM-1和纤连蛋白结合到VLA-4表达细胞为疾病症状或损伤病因的疾病的宿主方法，它是通过给药一定量的本发明化合物，该剂量足以抑制VCAM-1和纤连蛋白结合到VLA-4表达细胞上，能够减少所述症状或损伤。通常，优选剂量为0.1-100mg/kg体重/天，更优选1-25mg/kg体重/天，最优选1-10mg/kg体重/天。
本发明另一方面进一步涉及药物及药物组合物，其含有药用有效量的按照本发明的化合物(包括其可药用的盐)和可药用的载体。本发明还涉及制备药物组合物的方法，该方法包括将按照本发明的化合物(包括其可药用的盐)和可药用的载体制成盖仑(galenical)给药剂型。该组合物可以采用常规方法制备。片剂或颗粒剂可以含有多种粘合剂、填充剂、载体或稀释剂。液体组合物例如可以作成无菌水性溶液的形式。胶囊剂除活性成分外可以含有填充剂或增稠剂。并且，本发明还可以含有改善风味的添加剂，以及通常用作防腐剂、稳定剂、保湿剂和乳化剂的物质，以及改变渗透压的盐，缓冲液和其它添加剂。
上述载体材料和稀释剂可以含有任何常规的可药用的有机或无机物质，例如水、明胶、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、滑石、阿拉伯胶、聚亚烷基乙二醇等。
口服单位剂型如片剂和胶囊，优选含有25mg至1000mg本发明的化合物。
通常，本发明的化合物可以从适合的苯丙氨酸衍生物通过钯催化的与3-卤代-2-吡啶酮反应而制备。
如反应路线1所示，4-碘代-或4-溴代苯丙氨酸衍生物如1转化成保护的苯丙氨酸衍生物2，其R7’为氢，氯，低级烷基或低级烷氧基，P1为标准氮保护基团如Boc或苯甲氧甲酰基，P2为低级烷基或取代的低级烷基经适当选择作为保护基团或前药成分。可以通过肽化学领域普通技术人员熟悉的常规方法引入P2基团。引入P1和P2的顺序并不重要，根据实际试剂的选择。在Theodora W.Greene和Peter G.M.Wuts.的：有机合成中的保护基团，Wiley Interscience，New York，1991中提供有保护基团的应用和引入的论述。或者，式1化合物可以转化成式4化合物，其中R1’表示本发明的酰基部分。便利的方法是先引入酯基，然后在叔胺碱如二乙基异丙胺存在下应用常规的肽偶合剂例如HBTU进行游离碱的偶合反应。另外，选择具体的试剂可以显示能改变引入R1’和P2的顺序。在钯源存在下，通过用适当种类物质处理例如六甲基二锡、六丁基二锡或四烷氧基二硼进行处理，可以有效进行式2或4的化合物向衍生物3或5的转化，其中M表示取代的锡或硼原子。该方法可以参见F.Diederich和P.J.Stang编辑，Metal Catalyzed Cross Coupling Reactions，Wiley-VCH，Weinheim，Germany，1998。
反应路线1
其中R3’、R4’和R5’为氢、低级烷基、全氟低级烷基、卤素、芳基、羟基或低级烷氧基的式6的取代吡啶酮可以商业购买获得，或通过下列文献的方法制备(例如，这些已知的方法可参见：P.Wirth等，Ger.Offen.2817 293，1979年8月12日，Masaru Hojo等Chem.Lett.1976，499-502，Robert W.Lang等Helvetica Chimica Acta，1988，71，596-601)。在碱如碳酸钾和任选的相转移催化剂存在下，通过用烷基化剂如碘甲烷、苄基溴处理，将式6化合物进行烷基化得到式7化合物，其中R2’为低级烷基或芳基低级烷基。对于活性较差的烷基化剂，可能需要更强的碱如碱金属氢氧化物和加热反应混合物。通过在适当溶剂如冰醋酸或醋酸水溶液中的常规卤化剂如溴、N-碘代琥珀酰亚胺或N-溴代琥珀酰亚胺处理，上述定义的式7化合物可以在3-位卤代，得到式8的卤代吡啶酮，其中X＝Br或I，R2’独立为氢，低级烷基，取代的低级烷基，或芳基低级烷基，R3’和R5’为氢、低级烷基或全氟低级烷基。通过用过量的卤化剂处理导致形成R4’＝卤素的式8化合物。对于R2’＝芳基的化合物，可以方便地从已知化合物N-芳基吡啶酮开始合成，或例如应用Masakatusu等Chem.Pharm.Bull.1997，45，719中描述的Ullmann偶合反应引入芳基部分。
反应路线2
如反应路线3所示，式8化合物可以用于式3或5的苯丙氨酸衍生物的钯催化偶合反应。例如，当M为取代的锡时，在室温至100℃的温度下用在惰性溶剂如DMF中的钯源如四(三苯膦)钯或二(三苯膦)钯氯化物处理8化合物和式3或5的苯丙氨酸混合物，得到式9或10化合物。通过除去保护基团P1，式9化合物可以转化成式10化合物，其根据P1的选择不同，可以通过常规方法完成。例如，如果P1为Boc基团，它可以通过任选在溶剂如二氯甲烷和清除剂存在下用强酸如三氟乙酸处理除去。应用常规的肽偶合技术然后用式R1’CO2H的酸酰基化最终的游离胺。例如，在质子惰性溶剂如DMF中、在叔胺碱如二乙基异丙胺存在，用HBTU处理得到式10化合物。
如果游离酸是所需的最终产物，可以通过常规方法除去酯基P2。例如，当P2为低级烷基例如甲基时，可以通过碱金属氢氧化物如氢氧化锂除去，其在适当的溶剂如THF水溶液中进行，并任选含有甲醇以帮助溶解。当P2为苄基或取代的苄基，可以通过贵金属催化剂例如碳钯进行催化氧化除去。反应路线3
或者，如反应路线4所示，其中X为溴或碘的式8化合物可以转化成式12的一类化合物，其中M′表示取代的锡、硼或锌原子。当其中M′表示取代的锡或硼原子的锡或硼衍生物时，在钯源存在下，用适当种类的化合物例如六甲基二锡、六丁基二锡或四烷氧基二硼进行处理，可以有效进行转化。为了形成MC＝Zn(卤素)的锌衍生物12，用在适当的惰性溶剂如二甲基乙酰胺中的活化锌金属源处理X＝I的式8化合物，其中在室温至100℃下进行转化直至转化完成，得到M′＝Zn(卤素)的式12化合物。在钯源存在下，这些式12化合物可以与其中X′为碘、溴或三氟甲基磺酰基氧基的式4′的4-取代苯丙氨酸反应，得到式10′化合物。当其中P2表示的酯基不是目标化合物的一部分时，其可以通过适合于具体P2的酯水解方法除去。例如，当P2为低级烷基例如甲基时，它可以应用碱金属氢氧化物如氢氧化锂通过标准碱水解除去。在该方法的改变方法中，可能需要通过偶合反应而带有保护基团，并在以后步骤中将其取代。在这种情况下，其中P1′为低级烷氧基羰基或苄基氧基羰基并且X′如上定义的式2′化合物可以与式12的吡啶酮进行偶合，得到式9′的化合物，然后可以应用上面反应路线3所示的一般方法转化成本发明的化合物。
反应路线4
本发明化合物一个可选择的反应路线如反应路线5所示，其具体应用其中R7′不为氢的化合物，构建式14的醛。这可以通过式12化合物与式13化合物进行反应而完成，其中R7′表示低级烷基或低级烷氧基，X″表示碘、溴、三氟甲基磺酰基氧基部分，R8表示保护的醇或醛。对于醇，适合的保护基团包括甲硅烷基醚、苄基醚。如果需要，醛可以作为缩醛衍生物的形式被保护。式12化合物可以通过常规步骤转化为式15化合物，当R8为醇时，会涉及保护基团的去除，如果需要，随后进行氧化。可以使用伯苄基醇向醛选择性氧化的任何常用的试剂，例如，用在惰性溶剂中的活化二氧化锰进行处理。当其中R8表示保护的醛时，可以通过进行适当的保护基团去除例如缩醛与稀酸的水解，转化成式15的醛。通过用式17的Wittig试剂进行处理，其中P1′为低级烷氧基羰基或苄基氧基羰基和P2如上所定义，化合物15反应得到式16的氨基酸。例如，在适当的碱例如四甲基胍存在下，用(±)-N-(苄基氧基羰基)-α-膦酰基甘氨酸三甲酯处理15，直接得到式16的去氢氨基酸，其中P2＝甲基、P1＝苄基氧基羰基。通过应用适合该目的的多种还原剂例如最近描述的乙基-DuPHOS铹试剂(Burk，M.J.，Feaster，J.E.；Nugent，W.A.；Harlow，R.L.J.Am.Chem.Soc.1993，115，10125)、应用文献方法，可以将式16化合物进行对映选择性(Enantioselective)还原，得到L-氨基酸18。应用上述论述的常规方法，可以进一步将18转化成本发明化合物。或者反应路线5中归纳的一般性方法可以用于制备其中R7不为氢的式4或4′化合物。然后，这些式4或4′化合物可以用于制备如反应路线1-4中所描述的本发明化合物。反应路线5
在一个实施方案中，N-酰基，式11的R1′，衍生于2-取代的苯甲酸。适合的2-取代的苯甲酸可以商业购买，也可以通过常规方法制备。例如，在一氧化碳和适当的钯催化剂存在下，邻取代的芳基碘化物或triflate可以被羰基化。这些碘化物或triflate中间体的制备根据所需的具体取代类型确定，它们可以通过苯胺的直接碘化或重氮化获得，随后用碘源例如碘化钾处理。在碱如在惰性溶剂中的三乙胺或二异丙基乙胺存在下，通过常规方法如通过用三氟甲烷磺酸酐进行处理，可以从相应的酚，制备triflate。如反应路线6所示，另外一种获得邻取代的苯甲酸的方法涉及用烷基Grignard试剂处理2-甲氧基苯基噁唑啉衍生物，如化合物19，其中Z1和Z2＝氢、烷基、氯、全氟低级烷基、低级烷氧基，然后按照Meyers，A.I.，Gabel，R.，Mihelick，E.D，J.Org.Chem.1978，43，1372-1379中描述的一般性方法进行噁唑啉环的水解，得到式20的酸。2-或2，6-二取代的苄腈也可以用作相应苯甲酸的常规前体。在高位阻(hindered)腈的情况，例如2-氯-6-甲基苄腈在酸或碱条件下的常规水解很困难，通过DIBAL还原到相应的苯甲醛，随后应用铬基氧化剂进行氧化，可以得到更好的结果。其它方法的例子可以参见Chen等的WO9910312。
反应路线6
参照反应路线7，式23的环状酸是已知化合物，可以应用已知方法进行制备。为了取代的烷基或环烷基羧酸的制备，应用酸的二价阴离子或相应酯的单价阴离子碱金属化合物，可以进行烷基化反应。例如，可以应用在惰性溶剂如THF中的强碱如二异丙基酰胺处理式21的羧酸环烷基酯，随后通过加成基团R41-Lv，其中R41表示所需的侧链，如取代的苄基，低级烷基，低级烷氧基烷基，叠氮基低级烷基等，Lv表示离去基团如溴、碘、甲磺酸酯、或已知参与酯烯醇化物烷基化反应的类似基团。在适当的溶剂例如醇水溶液中应用碱金属氢氧化物，产物酯22可以水解成酸23。根据R41和最终目标化合物的性质，化合物23可以偶合到胺如化合物1上，直接转化成目标化合物，或者在合成的适当点进一步处理R41。例如，如果R41为叠氮基低级烷基部分，该叠氮化物可以应用例如三烷基膦试剂进行还原，随后通过烷基化、酰基化、磺酰基化以及本领域普通技术人员公知的相关方法对产物胺进行官能团化。如果R41包括离去基团例如末端溴原子，该基团可以被适当的亲核体例如甲基硫醇钠置换，在这种情况下得到硫醚，其可以是所需产物，或者本身可以进一步处理，例如通过在标准反应条件下氧化成亚砜或砜。制备本发明化合物中间体可以使用的其它亲核体包括：氰化钠、甲醇钠、叠氮化钠、吗啉等。当R41包括酮缩醇基团，该基团可以在合成的方便的时间点进行水解，得到酮基。然后可以进一步处理该基团，例如通过还原成醇或转化成衍生物如肟。
应用这些方法合成式23化合物的例子在Chen等的WO9910313中提供。
反应路线7
通常，用于制备其中R1＝Y-1的化合物的邻取代的芳香酸可以按Chen等的WO9910312作为示例制备。
对于合成其中R43为低级烷基或环烷基的式28的2-氯-6-烷基苯甲酸，反应路线8中所描述的方法是特别适用的。通过在惰性疏水有机溶剂例如庚烷中的丁胺进行处理，式24的商业购买的醛转化成亚胺25，其中R42为低级烷基，优选丁基。应用在惰性溶剂如THF中的过量Grignard衍生物处理得到的式25化合物，随后在反应中通过酸处理，得到式27的醛。通过常规方法，例如在室温或低于室温的温度下用亚氯酸钠和30％过氧化氢处理27在适当溶剂如乙腈中的溶液，可以将27氧化成式28的酸。
反应路线8
对于在合成结束时可以更方便地引入酯部分的情况，制成本发明化合物的前药酯是合乎需要的。为此，可以使用多种常规技术从羧酸制成酯。可以使用的典型方法包括：在酸如盐酸存在下将醇偶合到羧酸上，一种通常被称为Fisher酯化的方法。或者，可以使用二酰亚胺介导的羧酸和醇之间的偶合，其可以任选使用促进剂4，4-二甲基氨基吡啶。典型的二酰亚胺为二环己基碳二亚胺。另一种可选择的方法是在惰性溶剂如DMF中、碱如碳酸氢钠存在下，用活性烷基卤化物如烷基氯化物或酰基氧基甲基氯化物处理羧酸。根据羧酸和所需酯部分的特定组合，可以确定选择特定的方法，这是本领域普通技术人员所熟知的。在合成的任何方便点可以引入可以构成前药的酯基部分。例如式1中的基团P2可以表示所需的前药酯基，可以保留在最终的产物中。
实施例
下列实施例只是为了进一步举例说明本发明，绝不是为了限制本发明。
一般性方法：熔点采用Thomas-Hoover装置测定，未经校正。应用Perkin-Elmer 241型旋光计测定旋光性。应用四甲基硅烷TMS)作为内标，通过Varian XL-200、Mercury 300和Unityplus 400MHz分光计记录1H-NMR光谱。电子轰击(EI，70ev)和高速原子轰击(FAB)质谱采用VGAutospec或VG 70E-HF质谱分光剂。用于柱色谱的硅胶为用于快速色谱层析的Mallinkrodt SiliCar 230-400目硅胶；柱在柱头压力0-5psi下运行，氮帮助流动。薄测色谱在应用E.Merck(E.Merck#1.05719)提供的硅胶涂布的玻璃薄层板上进行，通过在观察箱中254nm UV光下目视观察、通过暴露于碘蒸汽下、通过用在醇水溶液中的磷钼酸(PMA)喷雾、或暴露于Cl2后用按照E.Von Arx，M.Faupel和M Brugger，J.Chromatography，1976，120，224-228制备的4，4′-四甲基二氨基二苯基甲烷显色，来观察薄层色谱。
反相高效液相色谱(RP-HPLC)应用Rainin HPLC进行测定，其使用41.4×300mm、8μM、Dynamax C-18柱，在流速49mL/min下使用5-95％乙腈的乙腈：水(每个含有0.75％TFA)梯度洗脱35-40分钟。HPLC条件通常如前所述(5-95-35-214)；参考在35分钟内用5-95％乙腈/水线性梯度洗脱，在波长214nM处用紫外监测器监控洗脱物。
除非另有说明，使用的二氯甲烷、2-丙醇、DMF、THF、甲苯、己烷、乙醚和甲醇为Fisher试剂级并且直接使用没有进一步的纯化，使用的乙腈为Fisher或Baker hplc级并且直接使用。本文使用的定义THF为四氢呋喃，DMF为N，N-二甲基甲酰胺，DMA为N，N-二甲基乙酰胺HOBT为1-羟基苯并三唑，BOP为[(苯并三唑-1-基)氧基]三-(二甲基氨基)鏻六氟磷酸盐，HATU为O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲鎓六氟磷酸盐，HBTU为O-苯并三唑-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐，DIPEA为二异丙基乙胺，DMAP为4-(N，N-二甲基氨基)吡啶DPPA为二苯基磷酰基叠氮化物DPPP为1，3-二(二苯基膦基)丙烷DBU为1，8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯NaH为氢化钠盐水为饱和氯化钠水溶液TLC为薄层色谱LDA为二异丙基酰胺锂BOP-Cl二(2-氧代-3-噁唑烷基)膦酰氯NMP为N-甲基吡咯烷酮(pyrrolidinone)Lawesson试剂为[2，4-二(4-甲氧基苯基)-1，3-二噻-2，4-二phosphetane-2，4-二硫化物]NIS为N-碘代琥珀酰亚胺。Biotage柱硅胶色谱是指由Dyax Corporation的Biotage Division提供的快色色谱层析(flash chromatography)系统，其使用预填装40g(40s柱)，90g(40m柱)或800g(75m柱)。在10-15psi氮气压下用己烷-乙酸乙酯混合物进行洗脱。实施例1.N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-4-[(三丁基)甲锡烷基]-L-苯丙氨酸甲酯
通过可选的在真空下液氮浴中冷冻混合物，并在氩气下熔化(3x)，将N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-4-碘代-L-苯丙氨酸甲酯(5.3g，13mmol)和六丁基二锡(27.5mL，54mmol)在甲苯(50mL)中的溶液去氧。加入四(三苯膦)钯(280mg，0.22mmol)，并将该反应混合物加热回流45分钟，颜色由黄色变为黑色。TLC(1∶6乙酸乙酯∶己烷)显示存在一些起始原料碘化物，加入其余部分的催化剂(140mg，0.11mmol)。继续回流1小时。将该混合物冷却并浓缩。将残渣置于己烷(200mL)和三乙胺(30mL)中，搅拌30分钟，过滤。滤液经过含有150g硅胶的干硅胶柱进行色谱层析，先用己烷洗脱，随后用1∶6乙酸乙酯∶己烷洗脱，得到透明油状的N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-4-[(三丁基)甲锡烷基]-L-苯丙氨酸甲酯(5.7g，77％)。LR(+)LSIMS(C27H47NO4Sn)：m/z1081(2M-C4H9)570(M+H)。实施例2.2-氨基-3-溴代-5-氯代吡啶
将2-氨基-5-氯吡啶(5.14g，40mmol)和无水乙酸钠(3.29g，40mmol)在乙酸(25mL)中的混悬液机械搅拌，并升温至水浴温度45℃。在1小时内加入溴(2.1mL，40mmol)在乙酸(2mL)中的溶液。将得到的橙色混合物冷却至15℃，过滤。将固体置于400mL水中，通过加入1N NaOH使混悬液呈碱性，将该混悬液用乙酸乙酯(5×100mL)萃取。合并萃取液用10％NaHSO3(1×100mL)洗涤，MgSO4干燥。浓缩得到2-氨基-3-溴代-5-氯代吡啶(4g，48％)，mp82-84℃。实施例33-溴代-5-氯代-1H-2-吡啶酮
用冰浴将2-氨基-3-溴代-5-氯代吡啶(4.0g，19.3mmol)在水(30mL)和浓HCl(5.2mL)中的溶液冷却至0℃，在10分钟内用亚硝酸钠(1.33g，19.3mmol)在水(12mL)处理。再搅拌该混合物10分钟，在48小时内升温至室温。过滤该混合物。固体用水洗涤，然后用CCl4洗涤，真空、50℃下干燥3小时，得到3-溴代-5-氯代-1H-2-吡啶酮(2.77g，69％)，mp173.5-175℃。实施例4.3-溴代-5-氯代-1-甲基-2-吡啶酮
将3-溴代-5-氯代-1H-2-吡啶酮(930mg，4.46mmol)、碳酸钾(1.25g，9.1mmol)和碘甲烷(2.8mL，45mmol)在10mL DME中的混合物加热回流18小时。趁热过滤该混合物，并浓缩。残渣在乙酸乙酯中重结晶得到3-溴代-5-氯代-1-甲基-2-吡啶酮(740mg，74％)，mp162-163℃ HRMS(C6H5BrClNO)：实测质谱220.9249，理论质谱220.9243(M+H)。实施例5.4-(5-氯-1-甲基-2-氧代-3-吡啶基)-N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-L-苯丙氨酸甲酯
通过可选的在真空下液氮浴中冷冻混合物，并在氩气下熔化(3x)，将3-溴代-5-氯代-1-甲基-2-吡啶酮(660mg，2.97mmol)和N[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-4-[(三丁基)甲锡烷基]-L-苯丙氨酸甲酯(1.7g，2.99mmol)在DMF(30mL)中的溶液去氧。加入四(三苯膦)钯(140mg，0.20mmol)，并将该反应混合物加热至90℃3小时，至混合物变为暗色。TLC显示反应未完全，加入其余部分140mg的催化剂，继续回流4小时。将该混合物冷却，用二氯甲烷稀释，通过硅藻土垫过滤。将滤液蒸发至干燥状态，将残渣溶解于1∶1乙醚∶乙酸乙酯(60mL)中。溶液用水(3×10mL)和盐水(1×10mL)洗涤，硫酸镁干燥。将浓缩得到的残渣过150g硅胶色谱，用7∶3乙酸乙酯∶己烷洗脱，得到4-(5-氯-1-甲基-2-氧代-3-吡啶基)-N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-L-苯丙氨酸甲酯(670mg，54％)。LRMS-电喷射：m/z 863(2M+Na)，858(2M+NH4)，443(M+Na)，438(M+NH4)，421(M+H)。实施例6.4-(5-氯-1-甲基-2-氧代-3-吡啶基)-L-苯丙氨酸甲酯盐酸盐
将4-(5-氯-1-甲基-2-氧代-3-吡啶基)-N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-L-苯丙氨酸甲酯(210mg，0.50mmol)在4N HCl(在10mL二噁烷)中的溶液搅拌1小时，浓缩得到白色粉末状4-(5-氯-1-甲基-2-氧代-3-吡啶基)-L-苯丙氨酸甲酯(140mg)。LR(+)LSIMS：m/z 641(2M+H)，321(M+H)。实施例7.N-[(2-氯-6-甲基苯基)羰基]-4-(5-氯-1-甲基-2-氧代-3-吡啶基)-L-苯丙氨酸甲酯
将4-(5-氯-1-甲基-2-氧代-3-吡啶基)-L-苯丙氨酸甲酯盐酸盐(89.5mg，0.25mmol)、2-氯-6-甲基苯甲酸(47mg，0.28mmol)、DIEA(175pL，1.0mmol)和HBTU(133mg，0.35mmol)在DMF(3mL)中的溶液在室温下搅拌4小时。浓缩该混合物，将残渣溶解于乙酸乙酯(15mL)中，用0.5N HCl(1×5mL)、饱和NaHCO3(1×5mL)、盐水(1×5mL)洗涤，干燥(MgSO4)。将蒸发后得到的残渣过25g硅胶色谱，用3∶1乙酸乙酯∶己烷洗脱，得到N-[(2-氯-6-甲基苯基)羰基]-4-(5-氯-1-甲基-2-氧代-3-吡啶基)-L-苯丙氨酸甲酯(54mg)。LR(+)LSIMS：m/z 962(2M+NH4)，945(2M+H)，490(M+NH4)，473(M+H(2Cl))。实施例8.N-[(2-氯-6-甲基苯基)羰基]-4-(5-氯-1-甲基-2-氧代-3-吡啶基)-L-苯丙氨酸
将N-[(2-氯-6-甲基苯基)羰基]-4-(5-氯-1-甲基-2-氧代-3-吡啶基)-L-苯丙氨酸甲酯(51mg，0.108mmol)在THF(3mL)中的溶液用氢氧化锂一水合物(18mg，0.43mmol)在水(1.0mL)中的溶液处理。加入另外的THF以得到澄清溶液，将该反应混合物搅拌1小时。TLC(乙酸乙酯)显示起始原料被消耗掉。加入几滴乙酸，将整个反应混合物应用到4×30cm、C-18反相HPLC柱，在35分钟内用5-95％乙腈/水进行线性梯度洗脱。将含有产物的馏分冻干，得到白色固体N-[(2-氯-6-甲基苯基)-羰基]-4-(5-氯-1-甲基-2-氧代-3-吡啶基)-L-苯丙氨酸(40mg，82％)。LR-电喷射：m/z阳离子，481(M+Na)，459(M+H(2Cl))；阴离子，457(M-H(2Cl))。实施例9.4-(5-氯-1-甲基-2-氧代-3-吡啶基)-N-[[1-(2-甲氧基乙基)环戊基]-羰基]-L-苯丙氨酸甲酯
将4-(5-氯-1-甲基-2-氧代-3-吡啶基)-L-苯丙氨酸甲酯盐酸盐(47.4mg，0.25mmol)、1-(2-甲氧基乙基)环戊烷羧酸(47mg，0.28mmol)、DIEA(175μL，1.0mmol)和HBTU(133mg，0.35mmol)在DMF(3mL)中的溶液在室温下搅拌4小时。浓缩该混合物，将残渣溶解于乙酸乙酯(15mL)中，用0.5NHCl(1×5mL)、饱和NaHCO3(1×5mL)、盐水(1×5mL)洗涤，并干燥(MgSO4)。将蒸发后得到的残渣过25g硅胶色谱，用乙酸乙酯洗脱，得到4-(5-氯-1-甲基-2-氧代-3-吡啶基)-N-[[1-(2-甲氧基乙基)环戊基]羰基]-L-苯丙氨酸甲酯(70.5mg，59％)。LR-电喷射：m/z阳离子，943(2M+Na)，483(M+Na)，478，(M+NH4)，461(M+H)；阴离子919(2M-H)，521，459(M-实施例10.4-(5-氯-1-甲基-2-氧代-3-吡啶基)-N-[[1-(2-甲氧基乙基)环戊基]羰基]-L-苯丙氨酸
将4-(5-氯-1-甲基-2-氧代-3-吡啶基)-N-[[1-(2-甲氧基乙基)环戊基]羰基]-L-苯丙氨酸甲酯(69mg，0.145mmol)在THF(3mL)中的溶液用氢氧化锂一水合物(24.3mg，0.58mmol)在水(1.0mL)中的溶液处理。向混合物中加入足量的THF以得到溶液，将该混合物搅拌1小时，加入几滴乙酸。将整个反应混合物应用到4×30cm、C-18反相HPLC柱，在35分钟内用5-95％乙腈/水进行线性梯度洗脱。将含有产物的馏分冻干，得到白色固体4-(5-氯-1-甲基-2-氧代-3-吡啶基)-N-[[1-(2-甲氧基乙基)环戊基]羰基]-L-苯丙氨酸(48mg，72％)。LR-电喷射：m/z阳离子943(2M+Na)，483(M+Na)，478，(M+NH4)，461(M+H)；阴离子919(2M-H)，521，459(M-H)。实施例11.1-苄基-3-溴代-5-氯代-2-吡啶酮
将3-溴代-5-氯代-1H-2-吡啶酮(950mg，4.56mmol)、新鲜制备的碳酸钾(1.26g，9.1mmol)和四丁基氯化铵(100mg)的混合物不加溶剂机械搅拌30分钟，加入苄基溴(0.56mL，4.7mmol)。将该混合物在室温下搅拌72小时。用乙酸乙酯稀释该混合物，过滤，用乙酸乙酯洗涤固体。蒸发滤液至干燥状态，残渣用己烷分几次研制。将该残渣过90g硅胶色谱，用3∶1己烷∶乙酸乙酯、然后用100％乙酸乙酯洗脱，得到1-苄基-3-溴代-5-氯-2-吡啶酮(423mg，31％)，mp108-110℃。LR(+)LSIMS：m/z595(2M+H，2Cl，2Br)，298(M+H，1Cl，1Br)。实施例12.4-(1-苄基-5-氯-2-氧代-3-吡啶基)-N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-L-苯丙氨酸甲酯
通过可选的在真空下液氮浴中冷冻混合物，并在氩气下熔化(3x)，将1-苄基-3-溴代-5-氯代-2-吡啶酮(296mg，0.98mmol)和N[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-4-[(三丁基)甲锡烷基]-L-苯丙氨酸甲酯(560mg，0.99mmol)在DMF(15mL)中的溶液去氧。加入二(三苯膦)钯(80mg，0.11mmol)，并将该反应混合物加热至90℃3小时，至混合物变为暗色。加入另外量的60mg催化剂，连续加热2小时。然后将该混合物冷却，用二氯甲烷稀释，通过硅藻土垫过滤。将滤液蒸发至干燥状态，将浓缩得到的残渣过150g硅胶色谱，用1∶2乙酸乙酯∶己烷洗脱，得到4-(1-苄基-5-氯-2-氧代-3-吡啶基)-N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-L-苯丙氨酸甲酯(255mg，52％)。LMS-电喷射：m/z1015(2M+Na)(4Cl)519(M+Na)514(M+NH4)497(M+H)。实施例13.4-(1-苄基-5-氯-2-氧代-3-吡啶基)-L-苯丙氨酸甲酯盐酸盐
将1-苄基-4-(5-氯-2-氧代-3-吡啶基)-N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-L-苯丙氨酸甲酯(248mg，0.50mmol)在4N HCl(在10mL二噁烷)中的溶液搅拌1小时，浓缩。将残渣用乙醚(15mL)研制，过滤得到白色粉末状4-(1-苄基-5-氯-2-氧代-3-吡啶基)-L-苯丙氨酸甲酯(202mg，94％)。LR-电喷射：m/z 1015(2M+Na，4Cl)，519(M+Na)514(M+NH4)，497(M+H)。HRMS：实测质谱496.1774，理论质谱496.1765(M+H)。实施例14.4-(1-苄基-5-氯-2-氧代-3-吡啶基)-N-[(2-氯-6-甲基苯基)羰基]-L-苯丙氨酸甲酯
将4-(1-苄基-5-氯-2-氧代-3-吡啶基)-L-苯丙氨酸甲酯盐酸盐(100mg，0.23mmol)、2-氯-6-甲基苯甲酸(47mg，0.28mmol)、DIEA(200μL，1.2mmol)和HBTU(133mg，0.35mmol)在DMF(2mL)中的溶液在室温下搅拌18小时。浓缩该混合物，将残渣溶解于乙酸乙酯(15mL)中，用0.5N HCl(1×5mL)、饱和NaHCO3(1×5mL)、盐水(1×5mL)洗涤，并干燥(MgSO4)。将蒸发后得到的残渣过25g硅胶色谱，用45∶55乙酸乙酯∶己烷洗脱，得到4-(1-苄基-5-氯-2-氧代-3-吡啶基)-N-[(2-氯-6-甲基苯基)羰基]-L-苯丙氨酸甲酯(74mg，58％)。实测质谱397.1313，理论质谱397.1320(M+H)。实施例15.4-(1-苄基-5-氯-2-氧代-3-吡啶基)-N-[(2-氯-6-甲基苯基)羰基]-L-苯丙氨酸
将N-[(2-氯-6-甲基苯基)羰基]-4-(1-苄基-5-氯-2-氧代-吡啶基)-L-苯丙氨酸甲酯(72mg，0.13mmol)在THF(3mL)中的溶液用氢氧化锂一水合物(24.3mg，0.58mmol)在水(1.0mL)中的溶液处理。向该混合物中加入另外量的THF以得到澄清溶液，将该混合物搅拌1.5小时，这时TLC(乙酸乙酯)显示起始原料已被消耗掉。加入几滴乙酸。将整个反应混合物应用到4×30cm、C-18反相HPLC柱，在35分钟内用5-95％乙腈/水进行线性梯度洗脱。将含有产物的馏分冻干，得到白色固体4-(1-苄基-5-氯-2-氧代-3-吡啶基)-N-[(2-氯-6-甲基苯基)羰基]-L-苯丙氨酸(50mg，71％)。LR-电喷射：m/z阴离子533(M-H(2Cl))；阳离子557(M+Na)，552(M+NH4)，535(M+H(2Cl))。HRMS：实测质谱535.1190，理论质谱535.1191(M+H)。实施例16.4-(1-苄基-5-氯-2-氧代-3-吡啶基)-N-[[1-(2-甲氧基乙基)环戊基]羰基]-L-苯丙氨酸甲酯
将4-(1-苄基-5-氯-2-氧代-3-吡啶基)-L-苯丙氨酸甲酯盐酸盐(100mg，0.25mmol)、1-(2-甲氧基乙基)环戊烷羧酸(47mg，0.28mmol)、DIEA(2001L，1.2mmol)和HBTU(133mg，0.35mmol)在DMF(2mL)中的溶液在室温下搅拌18小时。浓缩该混合物，将残渣溶解于乙酸乙酯(15mL)中，用0.5NHCl(1×5mL)、饱和NaHCO3(1×5mL)、盐水(1×5mL)洗涤，并干燥(MgSO4)。将蒸发后得到的残渣过25g硅胶色谱，用60∶40乙酸乙酯∶己烷洗脱，得到4-(1-苄基-5-氯-2-氧代-3-吡啶基)-N-[[1-(2-甲氧基乙基)环戊基]羰基]-L-苯丙氨酸甲酯(80mg，63％)。LR-电喷射：m/z 1123(2M+Na)，1118(2M+NH4)，573(M+Na)，568(M+NH4)，551(M+H(1Cl))。HRMS：实测质谱551.2297，理论质谱551.2313(M+H)。实施例17.4-(1-苄基-5-氯-2-氧代-3-吡啶基)-N-[[1-(2-甲氧基乙基)环戊基]羰基]-L-苯丙氨酸
将4-(1-苄基-5-氯-2-氧代-3-吡啶基)-N-[[1-(2-甲氧基乙基)环戊基]羰基]-L-苯丙氨酸甲酯(78mg，0.142mmol)在THF(3mL)中的溶液用氢氧化锂一水合物(24mg，0.57mmol)在水(1.0mL)中的溶液处理。向该混合物中加入足量的THF以得到溶液，将该混合物搅拌1小时，加入几滴乙酸。将整个反应混合物应用到4×30cm、C-18反相HPLC柱，在35分钟内用5-95％乙腈/水进行梯度洗脱。将含有产物的馏分冻干，得到白色固体4-(5-氯-1-苄基-2-氧代-3-吡啶基)-N-[[1-(2-甲氧基乙基)环戊基]-羰基]-L-苯丙氨酸(45mg，60％)。LRMS-电喷射：m/z阳离子559(M+Na)，554(M+NH4)，537(M+H(1Cl))；阴离子535(M-H(1Cl))。HRMS：实测质谱537.2151，理论质谱537.2156(M+H)。实施例18.3-溴代-1H-2-吡啶酮
向1H-2-吡啶酮(1.9g，20mmol)在1M溴化钾水溶液(20mL)中的溶液中，在5分钟内加入在1M溴化钾水溶液(40mL)中的溴的溶液(3.2g，20mmol)。进行该反应过夜，收集得到的沉淀为1.4g。在乙腈中重结晶得到0.78g 3-溴代-1H-2-吡啶酮。实施例19.3-溴代-1-甲基-2-吡啶酮
将3-溴代-1H-2-吡啶酮(740mg，4.25mmol)、碳酸钾(1.18g，8.5mmol)和碘甲烷(2.65mL，42.5mmol)在DME(10mL)中的混合物加热过夜。过滤该混合物，用乙酸乙酯洗涤，蒸发滤液至干燥状态。将残渣通过27g硅胶色谱纯化，用乙酸乙酯洗脱，得到3-溴代-1-甲基-2-吡啶酮(0.63g，79％)。LRMS(电喷射)，阳离子，188(M+H)。实施例20.3-溴代-1-甲基-2-吡啶酮和3，5-二溴代-1-甲基-2-吡啶酮
将1-甲基-2-吡啶酮(2.73g，25mmol)和溴(1.4mL，27mmol)在冰醋酸(150mL)中的溶液在室温下搅拌48小时。浓缩该混合物。将残渣置于水(100mL)中，用10N氢氧化钠使石蕊试纸呈碱性，用二氯甲烷(3×50mL)萃取。用盐水(30mL)洗涤合并的萃取液，并干燥(MgSO4)。过滤，蒸发溶剂得到4.7g，将其通过150g硅胶干色谱纯化，用1∶6乙酸乙酯∶己烷、随后用1∶1乙酸乙酯∶己烷洗脱。洗脱的第一个化合物为3，5-二溴代-1-甲基-2-吡啶酮(2.0g，30％)，LR-电喷射：m/z266(M+H(2Br))。NMR(CDCl3)δ3.597(s，3H)，7.426(d，j＝2.7，1H)，7.791(d，j＝2.7，1H)。洗脱的第二个化合物为3-溴代-1-甲基-2-吡啶酮(1.39g，30％)，LR-电喷射：m/z阳离子251(M+Na+CH3CN)，188(M+H)。实施例21.N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-4-(1-甲基-2-氧代-3-吡啶基)-L-苯丙氨酸甲酯
通过可选的在真空下液氮浴中冷冻混合物，并在氩气下熔化(3x)，将3-溴代-1-甲基-2-吡啶酮(94mg，0.50mmol)和N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-4-[(三丁基)甲锡烷基]-L-苯丙氨酸甲酯(284mg，0.50mmol)在DMF(3mL)中的溶液去氧。加入二(三苯膦)钯(40mg，0.057mmol)，并将该反应混合物加热至90℃3小时，至混合物变为暗色。TLC显示反应未完全，加入另外部分的20mg催化剂，连续加热4小时。然后将该混合物冷却，用二氯甲烷(20mL)稀释，通过硅藻土垫过滤。将滤液蒸发至干燥状态，残渣溶解于1∶1乙醚∶乙酸乙酯(20mL)中。用水(1×10mL)、5％氟化钾(2×5mL)和水(1×10mL)洗涤该溶液，并干燥(MgSO4)。将浓缩得到的残渣过25g硅胶色谱，用4∶6乙酸乙酯∶己烷洗脱，得到N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-4-(1-甲基-2-氧代-3-吡啶基)-L-苯丙氨酸甲酯(64mg，33％)。LRMS-电喷射：m/z阳离子，795(2M+Na)409(M+Na)387(M+H)。HRMS：实测质谱387.1935，理论质谱387.1920(M+H)。实施例22.4-(1-甲基-2-氧代-3-吡啶基)-L-苯丙氨酸甲酯盐酸盐
将N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-4-(1-甲基-2-氧代-3-吡啶基)-L-苯丙氨酸甲酯(60mg，0.155mmol)在4N HCl(在10mL二噁烷)中的溶液搅拌2小时，浓缩。将残渣用乙醚分几次研制，得到白色粉末状4-(1-甲基-2-氧代-3-吡啶基)-L-苯丙氨酸甲酯盐酸盐(55mg，quant)。LRMS-电喷射：m/z阳离子573(2M+H)328(M+H+CH3CN)319(M+H+CH3OH)287(M+H)。HRMS：实测质谱287.1396，理论质谱287.1396(M+H)。实施例23.N-[(2-溴代-5-甲氧基苯基)羰基]-4-(1-甲基-2-氧代-3-吡啶基)-L-苯丙氨酸甲酯
将4-(1-甲基-2-氧代-3-吡啶基)-L-苯丙氨酸甲酯盐酸盐(52mg，0.16mmol)、2-溴代-5-甲氧基苯甲酸(45mg，0.19mmol)、DIEA(140μL，0.80mmol)和HBTU(85mg，0.22mmol)在DMF(3mL)中的溶液在室温下搅拌18小时。浓缩该混合物，将残渣溶解于乙酸乙酯(15mL)中，用0.5N HCl(1×5mL)、饱和NaHCO3(1×5mL)、盐水(1×5mL)洗涤，并干燥(MgSO4)。将蒸发后得到的残渣(85mg)过25g硅胶色谱，用乙酸乙酯洗脱，得到N-[(2-溴代-5-甲氧基苯基)羰基]-4(1-甲基-2-氧代-3-吡啶基)-L-苯丙氨酸甲酯(54mg，68％)。HRMS：实测质谱499.0872，理论质谱499.0869(M+H)。实施例24.N-[(2-溴代-5-甲氧基苯基)羰基]-4-(1-甲基-2-氧代-3-吡啶基)-L-苯丙氨酸
将N-[(2-溴代-5-甲氧基苯基)羰基]-4-(1-甲基-2-氧代-3-吡啶基)-L-苯丙氨酸甲酯(52mg，0.104mmol)在THF(3mL)中的溶液用氢氧化锂一水合物(20mg，0.47mmol)在水(1.0mL)中的溶液处理。加入甲醇(0.5mL)以得到澄清溶液，将该混合物搅拌18小时。加入乙酸(0.5mL)，将整个反应混合物应用到4×30cm、C-18反相HPLC柱，在35分钟内用5-95％乙腈/水进行梯度洗脱。将含有产物的馏分冻干，得到白色固体N-[(2-溴代-5-甲氧基苯基)羰基]-4-(1-甲基-2-氧代-3-吡啶基)-L-苯丙氨酸(39mg，78％)。HRMS：实测质谱485.0703，理论质谱485.0712(M+H)。实施例25.4-(5-溴代-1-甲基-2-氧代-3-吡啶基)-N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-L-苯丙氨酸甲酯
通过可选的在真空下液氮浴中冷冻混合物，并在氩气下熔化(3x)，将3，5-二溴代-1-甲基-2-吡啶酮(267mg，1.0mmol)和N-[(1，1二甲基乙氧基)羰基]-4-[(三丁基)甲锡烷基]-L-苯丙氨酸甲酯(568mg，1.0mmol)在DMF(7mL)中的溶液去氧。加入二(三苯膦)钯(80mg，0.11mmol)，并将该反应混合物加热至90℃3小时，至混合物变为暗色。TLC显示反应未完全，加入另外部分的40mg催化剂，连续加热4小时。然后将该混合物冷却，用二氯甲烷(40mL)稀释，通过硅藻土垫过滤。将滤液蒸发至干燥状态，残渣溶解于乙酸乙酯(30mL)中。用水(1×10mL)、5％氟化钾(2×5mL)和盐水(1×5mL)洗涤该溶液，并干燥(MgSO4)。将浓缩得到的残渣过45 g硅胶色谱，用3∶7乙酸乙酯∶己烷洗脱，得到4-(5-溴代-1-甲基-2-氧代-3-吡啶基)-N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-L-苯丙氨酸甲酯(140mg，30％).FAB MS：465(M+H(1Br))。实施例26.4-(5-溴代-1-甲基-2-氧代-3-吡啶基)-L-苯丙氨酸甲酯盐酸盐
将N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-4-(5-溴代-1-甲基-2-氧代-3-吡啶基)-L-苯丙氨酸甲酯(135mg，0.29mmol)在4N HCl(在5mL二噁烷)中的溶液搅拌2小时，浓缩。将残渣用乙醚分几次研制，得到白色粉末状4-(5-溴代-1-甲基-2-氧代-3-吡啶基)-L-苯丙氨酸甲酯盐酸盐(120mg，quant)。LRMS-电喷射：m/z阳离子729，2M+H(2Br)，406(M+H+CH3CN)，397(M+H+CH3CN(1Br))，365(M+H(1Br))。HRMS：实测质谱365.0504，理论质谱365.0501(M+H)。实施例27.N-[(2-溴代-5-甲氧基苯基)羰基]-4-(5-溴代-1-甲基-2-氧代-3-吡啶基)-L-苯丙氨酸甲酯
将4-(5-溴代-1-甲基-2-氧代-3-吡啶基)-L-苯丙氨酸甲酯盐酸盐(120mg，0.30mmol)、2-溴代-5-甲氧基苯甲酸(82mg，0.36mmol)、DIEA(260μL，1.5mmol)和HBTU(157mg，0.41mmol)在DMF(4mL)中的溶液在室温下搅拌18小时。浓缩该混合物，将残渣溶解于乙酸乙酯(15mL)中，用0.5N HCl(1×5mL)、饱和NaHCO3(1×5mL)、盐水(1×5mL)洗涤，并干燥(MgSO4)。将蒸发后得到的残渣(180mg)过25g硅胶色谱，用3∶1乙酸乙酯∶己烷洗脱，得到N-[(2-溴代-5-甲氧基苯基)羰基]-4-(5-溴代-1-甲基-2-氧代-3-吡啶基)-L-苯丙氨酸甲酯(130mg，76％)。HRMS：实测质谱576.9959，理论质谱576.9973(M+H)。实施例28.N-[(2-溴代-5-甲氧基苯基)羰基]-4-(5-溴代-1-甲基-2-氧代-3-吡啶基)-L-苯丙氨酸
将N-[(2-溴代-5-甲氧基苯基)羰基]-4-(5-溴代-1-甲基-2-氧代-3-吡啶基)-L-苯丙氨酸甲酯(29mg，0.05mmol)在THF(3mL)中的溶液用氢氧化锂一水合物(20mg，0.47mmol)在水(1.0mL)中的溶液处理。加入甲醇(0.5mL)以得到澄清溶液，将该混合物搅拌18小时。加入乙酸(0.5mL)，将整个反应混合物应用到4×30cm、C-18反相HPLC柱，在35分钟内用5-95％乙腈/水进行梯度洗脱。将含有产物的馏分冻干，得到白色固体N-[(2-溴代-5-甲氧基苯基)羰基]-4-(5-溴代-1-甲基-2-氧代-3-吡啶基)-L-苯丙氨酸(22mg，79％)。HRMS：实测质谱562.9814，理论质谱562.9817(M+H)。实施例29：N-[(2-氯-6-甲基苯基)羰基]-4-(1-甲基-2-氧代-3-吡啶基)-L-苯丙氨酸甲酯的制备
在室温下，向4-(1-甲基-2-氧代-3-吡啶基)-L-苯丙氨酸甲酯盐酸盐(101mg，0.313mmol)、2-氯-6-甲基苯甲酸(60mg，0.35mmol)和HBTU(133mg，0.35mmol)在DMF(2mL)的溶液中，加入DIEA(122μL，0.88mmol)。将得到的混合物搅拌15小时。然后将该混合物到入水(25mL)中，用乙酸乙酯(2×15mL)萃取该有机化合物。连续用0.5N HCl(25mL)、饱和NaHCO3溶液(25mL)，盐水溶液(25mL)洗涤合并的乙酸乙酯萃取液，通过无水硫酸镁干燥。干燥剂过滤，浓缩，得到粗产物，将其通过应用Biotage(40s)柱的硅胶色谱纯化，得到122mg(88％产率)无定型白色固体N-[(2-氯-6-甲基苯基)羰基]-4-(1-甲基-2-氧代-3-吡啶基)-L-苯丙氨酸甲酯。FAB-HRMS m/e C24H23ClN2O4(M+H)理论值439.1425，实测值439.1414。实施例30：N-[(2-氯-6-甲基苯基)羰基]-4-(1-甲基-2-氧代-3-吡啶基)-L-苯丙氨酸的制备
在室温下，向N-[-(2-氯-6-甲基苯基)羰基]-4-(1-甲基-2-氧代-3-吡啶基)-L-苯丙氨酸甲酯(118mg，0.269mmol)在乙醇(6mL)中的混悬液中，加入1N氢氧化钠水溶液(4mL)。将得到的溶液加热至50℃，搅拌2小时。然后在真空下除去乙醇，将该残渣用水(25mL)稀释。将该水溶液用二乙醚(25mL)洗涤，以除去任何中性杂质。水相用1.0N HCl酸化，产物用乙酸乙酯(2×25mL)萃取。用盐水溶液(50mL)洗涤合并的有机萃取液，通过无水硫酸镁干燥。干燥剂过滤，浓缩得到81mg(71％产率)白色固体N-[(2-氯-6-甲基苯基)羰基]-4-(1-甲基-2-氧代-3-吡啶基)-L-苯丙氨酸：mp204-210℃。FAB-HRMS m/e理论值C23H21ClN2O4(M+H)425.1268，实测值425.1267。实施例31：N-[(2，6-二氯苯基)羰基]4-(1，4-二甲基-2-氧代-3-吡啶基)-L-苯丙氨酸的制备a)1，4-二甲基-2(1H)-吡啶酮的制备
在室温下，向4-甲基-2(1H)-吡啶酮(5g，45.82mmol)和碳酸钾(12.64g，91.64mmol)在DME(100mL)的混悬液中，加入碘甲烷(50.5g，366mmol)，将该反应混合物加热回流过夜。将该反应混合物冷却至室温，倒入水(200mL)中，用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。用盐水溶液(200mL)洗涤合并的萃取液，通过无水硫酸镁干燥。干燥剂过滤，浓缩得到粗产物，将其通过应用Biotage(40m)柱的硅胶色谱纯化，得到2.5g(44％产率)无定型白色固体1，4-二甲基-2(1H)-吡啶酮。FAB-HRMS m/e理论值C7H9NO(M+H)123.0241，测定值123.0246。b)1，4-二甲基-3-碘代-2(1H)-吡啶酮和1，4-二甲基-5-碘代-2(1H)-吡啶酮的制备
将含有1，4-二甲基-2-吡啶酮(2.46g，20mmol)、三氟乙酸(31mL)和三氟乙酸酐(6.25mL)的反应混合物回流5分钟。然后加入NIS(5.62g，25mmol)，将该混合物搅拌15小时。将该反应混合物冷却至室温，在真空下除去溶剂。将残渣用乙酸乙酯(100mL)稀释，通过过滤收集形成的白色固体。将该滤液用饱和碳酸氢钠溶液(2×100mL)、盐水溶液(100mL)洗涤，通过无水硫酸镁干燥。干燥剂过滤，浓缩溶剂得到粗产物，将其通过应用Biotage(40m)柱的硅胶色谱纯化，得到0.92g(5％产率)1，4-二甲基-3-碘代-2(1H)-吡啶酮和1，4-二甲基-5-碘代-2(1H)-吡啶酮的大约1∶1混合物，其直接用于下一步反应。1H NMR(300MHz，D6-DMSO，ppm)8.06(s，1H)，7.6(d，1H，J＝5.5Hz)，6.4(s，1H)，6.2(d，1H，J＝5.5Hz)，3.4(s，3H)，3.3(s，3H)，2.3(s，3H)，2.15(s，3H)。c)N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-4-(1，4-二甲基-2-氧代-3吡啶基)-L-苯丙氨酸甲酯和N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-4-(1，4-二甲基-2-氧代-5-吡啶基)-L-苯丙氨酸甲酯的制备
在室温下，向锌粉(0.66g，10mmol)在THF(1.0mL)中的混悬液中，加入1，2-二溴甲烷(86μL，1mmol)。应用热风器将该混悬液加热至60-65℃，直至不再冒出乙烯气体。然后将该混悬液冷却至室温，加入三甲基氯硅烷(0.126mL，1mmol)，将该混合物搅拌15分钟。加热1，4-二甲基-3-碘代-2(1H)-吡啶酮和1，4-二甲基-5-碘代-2(1H)-吡啶酮(0.92g，3.69mmol)在DMA(3mL)中的混合物，使其溶解，将其一次性加入到该反应混合物中。加入后，将该混合物加热至70℃，搅拌15小时，这时将用饱和氯化铵溶液淬灭过的一部分进行TLC分析，显示已不存在起始原料。将该反应混合物用THF(4mL)稀释，冷却至室温。使过量的锌粉沉降，直至形成澄清的上清液(大约3h)。
在室温下，将上述制备的含有锌化合物(3.69mmol)的溶液加入到Pd(dba)2(54mg，0.1mmol)、三呋喃基膦(102mg，0.4mmol)和N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-4-碘代-L-苯丙氨酸甲酯(1.01g，2.5mmol)在THF(4mL)中的溶液中，将该淡黄色混合物在室温下搅拌15小时。然后，将该混合物倒入饱和氯化铵溶液中，用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。用盐水溶液(150mL)洗涤合并的萃取液，通过无水硫酸镁干燥。干燥剂过滤并浓缩，得到粗产物，将其通过Biotage(40m)柱硅胶色谱进行纯化，得到0.141g(14％产率)无定型白色固体N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-4-(1，4-二甲基-2-氧代-3-吡啶基)-L-苯丙氨酸甲酯。ES-HRMS m/e理论值C22H28N2O5(M+Na)423.1890，测定值423.1894，和0.350g(35％产率)无定型白色固体N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-4-(1，4-二甲基-2-氧代-5-吡啶基)-L-苯丙氨酸甲酯。ES-HRMS m/e理论值C22H28N2O5(M+Na)423.1890，实测值423.1897。d)4-(1，4-二甲基-2-氧代-3-吡啶基)-L-苯丙氨酸甲酯盐酸盐的制备
在室温下，向N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-4-(1，4-二甲基-2-氧代-3-吡啶基)-L-苯丙氨酸甲酯(132mg，0.33mmol)在二噁烷(1mL)的溶液中，加入在二噁烷(1.5mL)中的4N HCl溶液。将该溶液搅拌4小时，在真空下浓缩。将残渣溶解于甲醇(5ml)和甲苯(5mL)中，真空下得到111mg(99％产率)无定型白色固体4-(1，4-二甲基-2-氧代-3-吡啶基)-L-苯丙氨酸甲酯盐酸盐。EI-HRMS m/e理论值C17H20N2O3(M+)300.1474，实测值300.1486。e)N-[(2，6-二氯苯基)羰基]-4-(1，4-二甲基-2-氧代-3吡啶基)-L-苯丙氨酸甲酯的制备
在室温下，向4-(1，4-二甲基-2-氧代-3-吡啶基)-L-苯丙氨酸甲酯盐酸盐(34mg，0.1mmol)和2，6-二氯苯甲酰氯(25mg，0.12mmol)在二氯甲烷(2mL)中的溶液中，加入DIEA(174μL，1.0mmol)。5分钟后，得到澄清溶液，将其搅拌72小时。然后浓缩该混合物，将残渣溶解于乙酸乙酯(25mL)中，用0.5N HCl(25mL)、饱和NaHCO3溶液(25mL)、盐水溶液(15mL)洗涤，通过无水硫酸镁干燥。干燥剂过滤并浓缩得到粗产物，将其通过Biotage(40m)柱硅胶色谱进行纯化，得到23mg(49％产率)无定型白色固体N-[(2，6-二氯苯基)羰基]-4-(1，4-二甲基-2-氧代-3-吡啶基)-L-苯丙氨酸甲酯。ES-HRMS m/e理论值C24H22Cl2N2O4(M+Na)495.0850，实测值495.0859。f)N-[(2，6-二氯苯基)羰基]-4-(1，4-二甲基-2-氧代-3-吡啶基)-L-苯丙氨酸的制备
在室温下，向N-[(2，6-二氯苯基)羰基]-4-(1，4-二甲基-2-氧代-3-吡啶基)-L-苯丙氨酸甲酯(20mg，0.04mmol)在乙醇(1mL)中的混悬液中，加入1N氢氧化钠水溶液(0.5mL)。将该混合物加热至40-45℃，搅拌3小时。然后在真空下除去乙醇，残渣用水(10mL)稀释。将该水溶液用二乙醚(25mL)洗涤，以除去任何中性杂质。将该水层用1.0N HCl酸化，产物用乙酸乙酯(2×25mL)萃取。用盐水溶液(50mL)洗涤合并的有机萃取液，通过无水硫酸镁干燥。过滤干燥剂并浓缩得到17mg(89％产率)无定型白色固体N-[(2，6-二氯苯基)羰基]-4-(1，4-二甲基-2-氧代-3-吡啶基)-L-苯丙氨酸。ES-HRMS m/e理论值C23H20Cl2N2O4(M+Na)481.0691，实测值481.0699。实施例32：N-[(2-氯-6-甲基苯基)羰基)-4-(1，4-二甲基-2-氧代-3-吡啶基)-L-苯丙氨酸的制备a)N-[(2-氯-6-甲基苯基)羰基]-4-(1，4-二甲基-2-氧代-3-吡啶基)-L-苯丙氨酸甲酯的制备
在室温下，向4-(1，4-二甲基-2-氧代-3-吡啶基)-L-苯丙氨酸甲酯盐酸盐(68mg，0.2mmol)、2-氯-6-甲基苯甲酸(45mg，0.25mmol)和HBTU(95mg，0.25mmol)在DMF(1.5mL)的混悬液中，加入DIEA(174μL，1.0mmol)。将得到的溶液搅拌72小时，将该混合物倒入水(25mL)中，用乙酸乙酯(2×15mL)萃取。用0.5N HCl(25mL)、饱和NaHCO3溶液(25mL)、盐水溶液(25mL)连续洗涤合并的乙酸乙酯萃取液，通过无水硫酸镁干燥。干燥剂过滤，浓缩溶剂得到粗产物，将其通过Biotage(40m)柱硅胶色谱进行纯化，得到24mg(27％产率)无定型白色固体N-[(2-氯-6-甲基苯基)羰基]-4-(1，4-二甲基-2-氧代-3-吡啶基)-L-苯丙氨酸甲酯。ES-HRMS m/e理论值C25H25ClN2O4(M+Na)475.1395，实测值475.1400。b)N-[(2-氯-6-甲基苯基)羰基]-4-(1，4-二甲基-2-氧代-3-吡啶基)-L-苯丙氨酸的制备
在室温下，向N-[(2-氯-6-甲基苯基)羰基]-4-(1，4-二甲基-2-氧代-3-吡啶基)-L-苯丙氨酸甲酯(22mg，0.048mmol)在乙醇(1mL)中的混悬液中，加入1N氢氧化钠溶液(0.5mL)。将得到的溶液加热至40-45℃，搅拌2小时。然后在真空下除去乙醇，残渣用水(25mL)稀释。将该水溶液用二乙醚(25mL)稀释以除去任何中性杂质。水层用1.0N HCl酸化，产物用乙酸乙酯(2×25mL)萃取。将合并的萃取物用盐水溶液(50mL)洗涤，通过无水硫酸镁干燥。干燥剂过滤并浓缩，得到18mg(86％产率)无定型白色固体N-[(2-氯-6-甲基苯基)羰基]-4-(1，4-二甲基-2-氧代-3吡啶基)-L-苯丙氨酸。ES-HRMS m/e理论值C24H23ClN2O4(M+H)439.1419，实测值439.1425。实施例33：N-[(2，6-二氯苯基)羰基]-4-[1，6-二甲基-4-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸的制备a)1，6-二甲基-4-(三氟甲基)-2-吡啶酮的制备
在室温下，向6-甲基-4-(三氟甲基)-1H-2-吡啶酮(2g，11.25mmol)和碳酸钾(4.68g，33.9mmol)在DME(25mL)的混悬液中，加入碘甲烷(9.62g，67.8mmol)，将该反应混合物加热回流过夜。将该反应混合物冷却至室温，倒入水(100mL)中，用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。用盐水溶液(200mL)洗涤合并的萃取液，通过无水硫酸镁干燥。干燥剂过滤，浓缩得到粗产物，将其通过应用Biotage(40m)柱的硅胶色谱纯化，得到2.1g(97％产率)白色固体1，6-二甲基-4-(三氟甲基)-2-吡啶酮：mp80-82℃。EI-HRMS m/e理论值C8H8F3NO(M+)191.0558，实测值191.0559。b)1，6-二甲基-3-碘代-4-(三氟甲基)-2-吡啶酮的制备
将含有1，6-二甲基-4-(三氟甲基)-2-吡啶酮(2.1g，10.98mmol)、三氟乙酸(18mL)和三氟乙酸酐(3.5mL)的反应混合物回流5分钟。然后加入NIS(3.15g，14mmol)，将该混合物搅拌15小时。将该反应混合物冷却至室温，在真空下除去溶剂。将残渣用乙酸乙酯(100mL)稀释，用饱和碳酸氢钠溶液(2×100mL)、盐水溶液(100mL)洗涤，通过无水硫酸镁干燥。干燥剂过滤，浓缩溶剂得到粗产物，将其通过应用Biotage(40m)柱的硅胶色谱纯化，得到2.15g(62％产率)无定型白色固体1，6-二甲基-3-碘代-4-(三氟甲基)-2-吡啶酮。EI-HRMS m/e理论值C8H7F3INO(M+)316.9524，实测值316.9527。c)N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-4-[1，6-二甲基-4(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸甲酯的制备
在室温下，向锌粉(1.96g，30mmol)在THF(2.0mL)中的混悬液中，加入1，2-二溴甲烷(172μL，2mmol)。应用热风器将该混悬液加热至60-65℃，直至不再冒出乙烯气体。然后将该混悬液冷却至室温，加入三甲基氯硅烷(127μL，1mmol)，将该混合物搅拌15分钟。用热风器加热1，6-二甲基-3-碘代-4-(三氟甲基)-2-吡啶酮(2.15g，6.78mmol)在DMA(6mL)中的混合物，使其溶解，将其一次性加入到反应混合物中。加入后，将该混合物加热至70℃，搅拌15小时，这时将用饱和氯化铵溶液淬灭过的一部分进行TLC分析，显示已不存在起始原料。将该反应混合物用THF(6mL)稀释，冷却至室温，并且使过量的锌粉沉降。
在室温下，将上述制备的含有锌化合物(6.78mmol)的溶液加入到Pd(dba)2(108mg，0.2mmol)、三呋喃基膦(204mg，0.8mmol)和N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基)-4-碘代-L-苯丙氨酸甲酯(1.62g，4mmol)在THF(8mL)中的溶液中，将该淡黄色混合物在50℃下搅拌15小时。然后，将该混合物倒入饱和氯化铵溶液中，用乙酸乙酯(3×70mL)萃取。用盐水溶液(150mL)洗涤合并的萃取液，通过无水硫酸镁干燥。干燥剂过滤并浓缩，得到粗产物，将其通过Biotage(40m)柱硅胶色谱进行纯化，得到0.711g(38％产率)无定型白色固体N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-4-[1，6-二甲基-4-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸甲酯。ES-HRMS m/e理论值C23H27F3N2O5(M+Na)491.1764，实测值491.1770。d)4-[1，6-二甲基-4-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸甲酯盐酸盐的制备
在室温下，向N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-4-[1，6-二甲基-4(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸甲酯(132mg，0.33mmol)在二噁烷(3mL)的溶液中，加入在二噁烷(4.5mL)中的4N HCl溶液。将该溶液搅拌4小时，形成白色固体。将该混合物用二乙醚(50mL)稀释，用二乙醚洗涤通过过滤收集的固体。在高真空下干燥后，得到315mg(92％产率)无定型白色固体4-[1，6-二甲基-4-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸甲酯盐酸盐。ES-HRMS m/e理论值C18H19F3N2O3(M+Na)391.1241，实测值391.1241。e)N-[(2，6-二氯苯基)羰基]-4-[1，6-二甲基-4-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸甲酯的制备
在室温下，向4-[1，6-二甲基-4-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸甲酯盐酸盐(150mg，0.37mmol)和2，6-二氯苯甲酰氯(85mg，0.4mmol)在二氯甲烷(2mL)中的溶液中，加入DIEA(257μL，1.48mmol)。5分钟后，得到澄清溶液，将其搅拌48小时。然后浓缩该混合物，将残渣溶解于乙酸乙酯(50mL)中。连续用0.5N HCl(50mL)、饱和NaHCO3溶液(50mL)、盐水溶液(50mL)洗涤，通过无水硫酸镁干燥。干燥剂过滤并浓缩得到粗产物，将其通过Biotage(40m)柱硅胶色谱进行纯化，得到190mg(95％产率)无定型白色固体N-[(2，6-二氯苯基)羰基]-4-[1，6-二甲基-4-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸甲酯。ES-HRMS m/e理论值C25H21Cl2F3N2O4(M+Na)563.0724，实测值563.0726。f)N-[(2，6-二氯苯基)羰基]-4-[1，6-二甲基-4-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸的制备
在室温下，向N-[(2，6-二氯苯基)羰基]-4-[1，6-二甲基-4-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸甲酯(177mg，0.326mmol)在乙醇(6mL)中的混悬液中，加入1N氢氧化钠水溶液(4mL)。将该混合物搅拌5小时。然后在真空下除去乙醇，残渣用水(20mL)稀释。将该水溶液用二乙醚(50mL)洗涤，以除去任何中性杂质。将该水层用1.0N HCl酸化，产物用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。用盐水溶液(50mL)洗涤合并的有机萃取液，通过无水硫酸镁干燥。干燥剂过滤并浓缩得到159mg(92％产率)白色固体N-[(2，6-二氯苯基)羰基]-4-[1，6-二甲基-4-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸：mp238-240℃。ES-HRMS m/e理论值C24H19Cl2F3N2O4(M+Na)549.0567，实测值549.0570。实施例34：N-[(2-乙基-6-甲基苯基)羰基]-4-[1，6-二甲基-4-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸的制备a.2-乙基-6-甲基苯甲酸的制备
向250mL压力瓶中加入2-乙基-6-甲基碘代苯(30.07mmol，7.4g)、Pd(OAc)2(1.43mmol，334mg)和dppp(1.43mmol，620mg)。用隔膜密封烧瓶，用氩气抽空烧瓶内气体三次。然后通过注射管连续加入乙腈(96mL)、三乙胺(189mmol，19.0g，26.25mL)和水(19.1mL)，将橡胶隔膜用连有一氧化碳源的聚四氟乙烯护板盖(lined cap)代替。将烧瓶用一氧化碳(40psi)加压，然后释放过量的压力。将该过程重复三次，最后混合物在40psi一氧化碳压力下搅拌5分钟。然后将烧瓶与一氧化碳汽缸相分离，浸入到预热的油浴中(83-85℃)。该混合物在1小时内变黑，在该温度下再搅拌14小时。然后，将该反应混合物冷却至室温，释放压力。将得到的混合物用乙醚(200mL)和1.0N NaOH(20mL)稀释。用水(2×100mL)萃取形成的酸液。合并的水萃取液用1.0N HCl中和，酸液用二氯甲烷(3×100mL)萃取。用盐水溶液洗涤合并的二氯甲烷萃取液，硫酸镁干燥。过滤干燥剂，在真空下除去溶剂，得到3.58g(72.5％)粘稠棕色油状物，缓慢固化过夜。HR MS：实测质谱，164.0833，理论质谱，164.0837(M+)。b.2-乙基-6-甲基苯甲酰氯的制备
分子量＝182.65分子式＝C10H11ClO
将含有DMF(1滴)的2-乙基-6-甲基苯甲酸(49mg，0.30mmol)在二氯甲烷(3mL)中的溶液用草酰氯(0.14mL，1.6mmol)处理，将该混合物搅拌15小时。浓缩该混合物，与甲苯共沸除去痕量的草酰氯，残渣直接用于下一步反应。c.N-[(2-乙基-6-甲基苯基)羰基]-4-[1，6-二甲基-4-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸甲酯的制备
分子量＝514.54
分子式＝C28H29F3N2O4
将上述制备的酰基氯、4-(1，3-二甲基-2，4-二氧-6-(三氟甲基)-5-嘧啶基)-L-苯丙氨酸(100mg，0.25mmol)在二氯甲烷(5mL)中的混合物用DIPEA(0.17mL，1.0mmol)处理，将得到的淡棕色溶液搅拌3天。浓缩该混合物，用乙酸乙酯稀释，1N HCl和盐水溶液洗涤，通过硫酸镁干燥。过滤、蒸发得到残渣，将其通过应用Biotage柱(40s)的硅胶色谱纯化，得到白色泡沫状N-[(2-乙基-6-甲基苯基)羰基]-4-[1，3-二甲基-2，4-二氧-6-(三氟甲基)-5-嘧啶基]-L-苯丙氨酸甲酯(79mg，62％)。ES-HRMS m/e理论值C28H29F3NO4(M+Na)537.1974，实测值537.1972。d.N-[(2-乙基-6-甲基苯基)羰基]-4-[1，6-二甲基-4-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸的制备
将N-[(2-乙基-6-甲基苯基)羰基]-4-(1，3-二甲基-2，4-二氧-6(三氟甲基)-5-嘧啶基)-L-苯丙氨酸甲酯(74mg，0.14mmol)和1N氢氧化钠(2mL，2mmol)的乙醇(3mL)溶液加热至40-45℃3小时。然后在真空下除去乙醇，残渣用水稀释。用二乙醚洗涤该水溶液，以除去任何中性杂质。水层用1.0N HCl酸化，用乙酸乙酯萃取产物。合并的有机萃取液用盐水溶液洗涤，通过无水硫酸镁干燥。干燥剂过滤和浓缩得到68mg(95％产率)N-[(2-乙基-6-甲基苯基)羰基]-4-[1，6-二甲基-4-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸(mp219-221℃)。ES-HRMS m/e理论值C27H27F3N2O4(M+Na)523.1815，实测值523.1816。实施例35：N-[(2-(1-甲基乙基)-6-甲基苯基)羰基]-4-[1，6-二甲基-4-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸的制备a)2-(1-甲基乙基)-6-甲基碘代苯的制备
分子量＝260.11分子式＝C10H13I
在-5至5℃下，向2-(1-甲基乙基)-6-甲基苯胺(15.57mmol，14.9g)在浓HCl(50mL)和30g冰的混悬液中，在30分钟内逐滴加入NaNO2(110mmol，8g)的水(35mL)溶液。加入后，将该红色溶液再搅拌30分钟。然后在0-5℃下20分钟内逐滴加入KI(200mmol，33.2g)在水(50mL)中的溶液。加入后，将该混合物升温至室温，在这段时间发生产生气体的放热反应。将得到的红色溶液搅拌18小时。然后将该混合物用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。用硫代硫酸钠溶液(200mL)、盐水溶液洗涤合并的萃取液，硫酸镁干燥。干燥剂过滤，真空下浓缩溶剂，得到有色化合物，将其通过硅胶柱色谱纯化，得到纯的黄色油状2-(1-甲基乙基)-6-甲基碘代苯(17.8g，68％)。HR MS：实测质谱，260.0063，理论质谱，260.0062(M+)。b)2-(1-甲基乙基)-6-甲基苯甲酸的制备
分子量＝260.11 分子量＝178.23分子式＝C10H13I 分子式＝C11H14O2
向250mL压力瓶中加入2-(1-甲基乙基)-6-甲基碘代苯(25.2mmol，6.55g)、Pd(OAc)2(1.2mmol，280mg)和dppp(1.2mmol，520mg)。用隔膜密封烧瓶，用氩气抽空烧瓶内气体三次。然后通过注射管连续加入乙腈(96mL)、三乙胺(188.7mmol，19.0g，26.25mL)和水(19.1mL)。将橡胶隔膜用连有一氧化碳源的聚四氟乙烯护板盖(lined cap)代替。将烧瓶用一氧化碳(40psi)加压，然后释放过量的压力。将该过程重复三次，最后混合物在40psi一氧化碳压力下搅拌5分钟。然后将烧瓶与一氧化碳汽缸相分离，浸入到预热的油浴中(83-85℃)。该混合物在1小时内变黑，在该温度下再搅拌4小时。然后，将该反应混合物冷却至室温，释放压力。将得到的混合物用乙醚(200mL)和1.0N NaOH(20 mL)稀释。用水(2×100mL)萃取酸液。合并的水萃取液用1.0N HCl中和，酸液用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。用盐水溶液洗涤合并的有机萃取液，硫酸镁干燥。过滤干燥剂，浓缩得到2.8g(62％)粘稠黄色油状物，HR MS：实测质谱，178.0996，理论质谱，178.0994(M+)。c.2-(1-甲基乙基)-6-甲基苯甲酰氯的制备
分子量＝196.68
分子式＝C11H13ClO
将含有DMF(2滴)的2-(1-甲基乙基)-6-甲基苯甲酸(64mg，0.35mmol)在二氯甲烷(3mL)中的溶液用草酰氯(0.16mL，1.8mmol)处理，将该混合物搅拌15小时。浓缩该混合物，与甲苯共沸除去痕量的草酰氯，残渣直接用于下一步反应。d.N-[[2-(1-甲基乙基)-6-甲基苯基]羰基]-4-[1，6二甲基-4-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸的制备
应用实施例33中描述的一般方法，从4-[1，6-二甲基-4-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸甲酯和2-(1-甲基乙基)-6-甲基苯甲酰氯制备N-[[2-(1-甲基乙基)-6-甲基苯基]羰基]-4-[1，6-二甲基-4-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸。ES-HRMS m/e理论值C28H29F3N2O4(M+Na)537.1972，实测值537.1977。实施例36：N-[(2-氯-6-甲基苯基)羰基]-4-[1，6-二甲基-4-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸的制备a)N-[(2-氯-6-甲基苯基)羰基]-4-[1，6-二甲基-4-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸甲酯的制备
在室温下，向4-[1，6-二甲基-4-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸甲酯盐酸盐(100mg，0.25mmol)、2-氯-6-甲基苯甲酸(60mg，0.35mmol)和HBTU(132mg，0.35mmol)在DMF(2mL)的混悬液中加入DIEA(174μL，1.0mmol)。将得到的混合物搅拌72小时。然后，将该混合物倒入水(25mL)中，用乙酸乙酯(2×15mL)萃取。连续用0.5N HCl(25mL)、饱和NaHCO3溶液(25mL)、盐水溶液(25mL)洗涤合并的乙酸乙酯萃取液，通过无水硫酸镁干燥。干燥剂过滤，浓缩得到粗产物，将其通过应用Biotage(40s)柱的硅胶色谱纯化，得到98mg(75％产率)无定型白色固体N-[(2-氯-6-甲基苯基)羰基]-4-[1，6-二甲基-4-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸甲酯。ES-HRMS m/e理论值C26H24ClF3N2O4(M+Na)543.1268，实测值543.1275。b)N-[(2-氯-6-甲基苯基)羰基]-4-[1，6-二甲基-4-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸的制备
在室温下，向N-[(2-氯-6-甲基苯基)羰基]-4-[1，6-二甲基-4-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸甲酯(91mg，0.174mmol)在乙醇(5mL)中的混悬液中，加入1N氢氧化钠水溶液(4mL)。将得到的溶液加热至40-45℃，搅拌4小时。然后在真空下除去乙醇，用水(25mL)稀释残渣。将该水溶液用二乙醚(25mL)洗涤，以除去任何中性杂质。水层用1.0N HCl酸化，乙酸乙酯(2×25mL)萃取。用盐水溶液(50mL)洗涤合并的有机萃取液，通过无水硫酸镁干燥。干燥剂过滤，浓缩滤液得到71mg(80％产率)白色固体N-[(2-氯-6-甲基苯基)羰基]-4-[1，6-二甲基-4-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸：mp 220-223℃。ES-HRMS m/e理论值C25H22ClF3N2O4(M+Na)529.1111，实测值529.1119.实施例37：N-[[1-(2-甲氧基乙基)环戊基]羰基]-4-[1，6-二甲基-4-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸的制备
应用实施例36中描述的一般方法，从4-[1，6-二甲基-4-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸甲酯和1-(2-甲氧基乙基)环戊烷羧酸(如WO9910313所述制备)制备N-[[1-(2-甲氧基乙基)环戊基]羰基]-4-[1，6-二甲基-4-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸(mp181-183℃)。ES-HRMS m/e理论值C26H31F3N2O5(M+Na)531.2077，实测值531.2084。实施例38：N-[(2，6-二氯苯基)羰基]-4-[1，6-二甲基-4-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸乙酯的制备
在室温下，向N-[(2，6-二氯苯基)羰基]-4-[1，6-二甲基-4(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸(145mg，0.275mmol)和碳酸氢钠(185mg，2.2mmol)在DMF(2mL)中的混悬液中，加入碘代乙烷(343mg，2.2mmol)。在室温下搅拌该混合物72小时。然后将该混合物倒入水(30mL)中，用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。用盐水溶液(60mL)洗涤合并的有机萃取液，通过无水硫酸镁干燥。过滤干燥剂，浓缩滤液得到129mg(85％产率)白色固体结晶N-[(2，6-二氯苯基)羰基]-4-[1，6-二甲基-4(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸乙酯：86-91℃。ES-HRMS m/e理论值C26H23Cl2F3N2O4(M+Na)577.0876，实测值577.0887。实施例39：N-[(2，6-二氯苯基)羰基]-4-[1，6-二甲基-4-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸2-[(N，N二乙基)氨基]乙酯的制备
在室温下，向N-[(2，6-二氯苯基)羰基]-4-[1，6-二甲基-4(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸(145mg，0.275mmol)、2-二乙基氨基乙基氯盐酸盐(487mg，2.75mmol)和碳酸钾(380mg，2.7mmol)的混合物中，加入乙酸乙酯(3mL)和水(3mL)。在室温下搅拌该混合物72小时。然后，将该混合物倒入水(30mL)和乙酸乙酯(30mL)的混合物中。进行相分离，水层用乙酸乙酯(2×20mL)萃取。用盐水溶液(60mL)洗涤合并的有机萃取液，通过无水硫酸镁干燥。干燥剂过滤，浓缩得到粗产物，将其通过应用Biotage(40s)柱的硅胶色谱纯化，得到122mg(71％产率)无定型白色固体N-[(2，6-二氯苯基)羰基]-4-[1，6-二甲基-4-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸2-[(N，N-二乙基)氨基]乙酯。ES-HRMS m/e理论值C30H32Cl2F3N3O4(M+H)626.1796，实测值626.1802。实施例40：N-[(2，6-二氯苯基)羰基]-4-[1，6-二甲基-4-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸1-(乙酰氧基)乙酯的制备
在室温下，向N-[(2，6-二氯苯基)羰基]-4-[1，6-二甲基-4-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸(145mg，0.275mmol)和碳酸氢钠(185mg，2.2mmol)在DMF(2mL)的混悬液中加入1-氯乙酸乙酯(270mg，2.2mmol)。在室温下搅拌该混合物48小时。然后，将该混合物倒入水(30mL)中，用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。用盐水溶液(60mL)洗涤合并的有机萃取液，通过无水硫酸镁干燥。干燥剂过滤，浓缩得到粗产物，将其通过应用Biotage(40s)柱的硅胶色谱纯化，得到110mg(65％产率)无定型白色固体N-[(2，6-二氯苯基)羰基]-4-[1，6-二甲基-4-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸1-(乙酰氧基)乙酯。ES-HRMS m/e理论值C28H25Cl2F3N2O6(M+Na)635.0931，实测值635.0932。实施例41：N-[(2-氯-6-甲基苯基)羰基]-4-[1，6-二甲基-4-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸乙酯的制备
应用实施例38中描述的一般性方法，可以从N-[(2-氯-6-甲基苯基)羰基]-4-[1，6-二甲基-4-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸和碘代乙烷制备N-[(2-氯-6-甲基苯基)羰基]-4-[1，6-二甲基-4-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸乙酯。实施例42：N-[(2-氯-6-甲基苯基)羰基]-4-[1，6-二甲基-4-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸2-[(N，N-二乙基)氨基]乙酯的制备
应用实施例39中描述的一般性方法，可以从N-[(2-氯-6-甲基苯基)羰基]-4-[1，6-二甲基-4(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸和2-[(N，N-二乙基)氨基]乙基氯盐酸盐制备N-[(2-氯-6-甲基苯基)羰基]-4-[1，6-二甲基-4-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸2-[(N，N-二乙基)氨基]乙酯。实施例43：N-[(2-氯-6-甲基苯基)羰基]-4-[1，6-二甲基-4-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸1-(乙酰氧基)乙酯的制备
应用实施例40中描述的一般性方法，可以从N-[(2-氯-6-甲基苯基)羰基]-4-[1，6-二甲基-4-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸和1-氯乙酸乙酯制备N-[(2-氯-6-甲基苯基)羰基]-4-[1，6-二甲基-4-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸1-(乙酰氧基)乙酯。实施例44：N-[(2，6-二氯苯基)羰基]-4-(1，4-二甲基-6-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基)-L-苯丙氨酸的制备a)4-甲氧基-1，1，1-三氟戊-3-烯-2-酮
在0℃下10-12分钟内，向2-甲氧基丙烯(3.68g，51.03mmol)和吡啶(1.35g，16.69mmol)的二氯甲烷(15mL)溶液中，加入三氟乙酸酐(10mL，46.56mmol)的二氯甲烷(8mL)溶液。加入后，溶液变为红棕色，除去冷水浴，停止搅拌。将该混合物放置16小时，用冰水(45mL)和二氯甲烷(120mL)稀释。进行相分离，有机层连续需用2N HCl(35mL)、饱和碳酸钠溶液(75mL)和盐水溶液(25mL)洗涤，通过无水硫酸钠干燥。干燥剂过滤，浓缩得到粗产物，将其通过在高真空下蒸馏进行纯化，得到5.546g(65％产率)淡黄色油状4-甲氧基-1，1，1-三氟戊-3-烯-2-酮。b)4-甲基-2(1H)-氧代-6-(三氟甲基)吡啶-3-羧酸乙酯的制备
在室温下，向4-甲氧基-1，1，1-三氟戊-3-烯-2-酮(5.53g，32.89mmol)和乙基丙二酸酯单酰胺(4.31g，32.89mmol)在乙醇(30mL)的混悬液中，加入乙醇钠(11.72g，36.18mmol，21％纯度)，将该混合物加热至大约85℃。搅拌18小时后，将该反应混合物冷却至室温，加入15％HCl(10mL)。然后，将其用水(10mL)稀释，氯仿(2×50mL)萃取。用盐水溶液(100mL)洗涤合并的有机萃取液，通过无水硫酸镁干燥。干燥剂过滤，浓缩得到粗产物，将其通过应用Biotage(40s)柱的硅胶色谱纯化，得到5.22g(62％产率)无定型白色固体4-甲基-2(1H)-氧代-6-(三氟甲基)吡啶-3-羧酸乙酯。ES-LRMS：m/z 313.4(M+Na+CH3CN)。c.1，4-二甲基-2(1H)-氧代-6-(三氟甲基)吡啶-3-羧酸乙酯的制备
在室温下，向4-甲基-2(1H)-氧代-6-(三氟甲基)吡啶-3-羧酸乙酯(5.2g，20.87mmol)和碳酸钾(8.65g，62.59mmol)的DME(50mL)混悬液中，加入碘甲烷(12mL，192.8mmol)，将该反应混合物加热回流18小时。将该反应混合物冷却至室温，过滤无机固体，用DME洗涤该固体。真空下浓缩溶剂，通过应用Biotage(40s)柱的硅胶色谱纯化，得到4.02g(71％产率)无定型白色固体1，4-二甲基-2(1H)-氧代-6-(三氟甲基)吡啶3-羧酸乙酯。ES-HRMS m/e理论值C11H12F3NO3(M+Na)286.0661，实测值286.0664。d)1，4-二甲基-6-(三氟甲基)-1H-吡啶-2-酮的制备
在室温下，向1，4-二甲基-2(1H)-氧代-6-(三氟甲基)吡啶-3-羧酸乙酯(2.5g，9.5mmol)和氯化锂(1.0g，23.6mmol)的混合物中，加入DMF(15mL)和水(0.38mL)。将该反应混合物加热至160℃的水浴温度，搅拌19小时。将该反应混合物冷却至室温，用冷乙酸乙酯和二乙醚(75mL，1∶1)稀释。用冷水(3×20mL)和盐水溶液(20mL)洗涤得到的混合物，通过无水硫酸镁干燥。干燥剂过滤，浓缩溶剂得到粗产物，将其通过应用Biotage(40s)柱的硅胶色谱进行纯化，得到1.45g(80％产率)淡黄色固体1，4-二甲基-6-(三氟甲基)-1H-吡啶-2-酮。ES-HRMS m/e理论值C8H8F3NO(M+H)192.0631，实测值192.0632。e)1，4-二甲基-3-碘代-6-(三氟甲基)-1H-吡啶-2-酮的制备
在室温下，向1，4-二甲基-3-碘代-6-(三氟甲基)-1H-吡啶-2-酮(1.44g，7.23mmol)、三氟乙酸(9mL)和三氟乙酸酐(1.53mL，10.85mmol)的溶液中，加入NIS(2.569g，10.85mmol)。然后将该混合物加热至70-85℃，搅拌2小时。将该反应混合物冷却至室温，缓慢加入饱和碳酸钠溶液，以中和该溶液。然后，将该水性混合物用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。连续用饱和硫代硫酸钠溶液(100mL)和盐水溶液(100mL)洗涤该合并的萃取液，通过无水硫酸钠进行干燥。干燥剂过滤，浓缩溶剂得到粗产物，将其通过应用Biotage(40s)柱的硅胶色谱进行纯化，得到1.02g(45％产率)无定型白色固体1，4-二甲基-3-碘代-6-(三氟甲基)-1H-吡啶-2-酮。ES-LRMS：m/z 318.1(M+H)，381.2(M+Na+CH3CN)。f)N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-4-[1，4-二甲基-6-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸甲酯的制备
在室温下，向锌粉(1.96g，30mmol)在THF(2.0mL)中的混悬液中，加入1，2-二溴甲烷(172μL，2mmol)。应用热风器将该混悬液加热至60-65℃，直至不再冒出乙烯气体。然后将该混悬液冷却至室温，加入三甲基氯硅烷(150μL，1mmol)，将该混合物搅拌15分钟。用热风器温热1，4-二甲基-3-碘代-6-(三氟甲基)-1H-吡啶-2-酮(2.4g，7.57mmol)在DMA(6mL)中的混合物，使其溶解，将其一次性加入到反应混合物中。加入后，将该混合物加热至70-75℃，搅拌2小时，这时将用饱和氯化铵溶液淬灭过的一部分进行TLC分析，显示已不存在起始原料。将该反应混合物用THF(5mL)稀释，冷却至室温并且让过量的锌粉沉降。
在室温下，将上述制备的含有锌化合物(7.57mmol)的溶液加入到Pd(dba)2(274mg，0.478mmol)、三呋喃基膦(391mg，1.287mmol)和N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-4-碘代-L-苯丙氨酸甲酯(3g，7.411mmol)在THF(7mL)中的溶液中，将该淡黄色混合物在50-55℃下搅拌40小时。然后，将该混合物倒入饱和氯化铵溶液中，用乙酸乙酯(3×70mL)萃取。用盐水溶液(100mL)洗涤合并的萃取液，通过无水硫酸镁干燥。干燥剂过滤并浓缩，得到粗产物，将其通过Biotage(40m)柱硅胶色谱进行纯化，得到1.289g(36％产率)无定型白色固体N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-4-[1，4-二甲基-6-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸甲酯。ES-HRMS m/e理论值C23H27F3N2O5(M+Na)491.1764，实测值491.1764。g)4-[1，6-二甲基-4-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸甲酯盐酸盐的制备
在室温下，将N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-4-[1，4-二甲基-6-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸甲酯(253mg，0.54mmol)用在二噁烷(4.0mL)中的4N HCl溶液处理。将该溶液搅拌2小时，形成白色固体。浓缩该混合物，将残渣溶解于甲醇中。除去甲醇后，在高真空下干燥该残渣，得到221mg(100％产率)无定型白色固体4-[1，4-二甲基-6-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸甲酯盐酸盐。ES-LRMS m/z369.3(M+H)，410.3(M+CH3CN)。h)N-[(2，6-二氯苯基)羰基]-4-[1，4-二甲基-6(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸甲酯的制备
在室温下，向4-[1，4-二甲基-6-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸甲酯盐酸盐(216mg，0.53mmol)和2，6-二氯苯甲酰氯(120mg，0.57mmol)在二氯甲烷(6mL)中的溶液中，加入DIEA(210μL，1.19mmol)。5分钟后，得到澄清溶液，将其搅拌18小时。然后将该混合物用乙酸乙酯(50mL)稀释。连续用0.5N HCl(50mL)、饱和NaHCO3溶液(50mL)、盐水溶液(50mL)洗涤，通过无水硫酸镁干燥。干燥剂过滤并浓缩得到粗产物，将其溶解于乙酸乙酯(大约3mL)，加入己烷(大约3-4mL)，在冰箱中储存。收集固体，用己烷洗涤。高真空下干燥后，得到270mg(93.5％产率)N-[(2，6-二氯苯基)羰基]-4-[1，4-二甲基-6-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸甲酯白色固体：mp170-173℃。ES-HRMS m/e理论值C25H21Cl2F3N2O4(M+Na)563.0724，实测值563.0730。i)N-[(2，6-二氯苯基)羰基]-4-(1，4-二甲基-6-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基)-L-苯丙氨酸的制备
在室温下，向N-[(2，6-二氯苯基)羰基]-4-[1，4-二甲基-6-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸甲酯(243mg，0.45mmol)在乙醇(5mL)中的混悬液中，加入1N氢氧化钠水溶液(1.8mL)。将该混合物加热至45-50℃，搅拌2小时。然后在真空下除去乙醇，残渣用水(20mL)稀释。将该水溶液用乙酸乙酯(50mL)洗涤，以除去任何中性杂质。将该水层用1.0N HCl酸化，产物用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。用盐水溶液(50mL)洗涤合并的有机萃取液，通过无水硫酸镁干燥。过滤干燥剂并浓缩得到186mg(79％产率)无定型白色固体N-[(2，6-二氯苯基)羰基]-4-[1，4-二甲基-6-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸。ES-HRMS m/e理论值C24H19Cl2F3N2O4(M+Na)549.0567，实测值549.0573。实施例45：N-[(2-氯-6-甲基苯基)羰基]-4-(1，4-二甲基-6-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基)-L-苯丙氨酸的制备
应用实施例44中描述的一般性方法，从4-[1，4-二甲基-6-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸甲酯和2-氯-6-甲基苯甲酰氯制备N-[(2-氯-6-甲基苯基)羰基]-4-(1，4-二甲基-6-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基)-L-苯丙氨酸。ES LRMS m/z507.1(M+H)，529.1(M+Na)。实施例46：N-[(2-氯-6-甲基苯基)羰基]-4-[1，4-二甲基-6-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸乙酯的制备
应用实施例38中描述的一般性方法，从N-[(2-氯-6-甲基苯基)羰基]-4-[1，4-二甲基-6-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸和碘代乙烷制备N-[(2-氯-6-甲基苯基)羰基]-4-[1，4-二甲基-6-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸乙酯。实施例47：N-[(2-氯-6-甲基苯基)羰基]-4-[1，4-二甲基-6-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸2-[(N，N-二乙基)氨基]乙酯的制备
应用实施例39中描述的一般性方法，从N-[(2-氯-6-甲基苯基)羰基]-4-[1，4-二甲基-6-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸和2-[(N，N-二乙基)氨基]乙基氯盐酸盐制备N-[(2-氯-6-甲基苯基)羰基]-4-[1，4-二甲基-6-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸2-[(N，N-二乙基)氨基]乙酯。实施例48：N-[(2-氯-6-甲基苯基)羰基]-4-[1，4-二甲基-6-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸1-(乙酰氧基)乙酯的制备
应用实施例40中描述的一般性方法，可以从N-[(2-氯-6-甲基苯基)羰基]-4-[1，4-二甲基-6-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸和1-氯乙酸乙酯制备N-[(2-氯-6-甲基苯基)羰基]-4-[1，4-二甲基-6-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸1-(乙酰氧基)乙酯。实施例49：N-[(2，6-二氯苯基)羰基]-4-[1，4-二甲基-6-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸乙酯的制备
应用实施例38中描述的一般性方法，可以从N-[(2，6-二氯苯基)羰基]-4-[1，4-二甲基-6-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸和碘代乙烷制备N-[(2，6-二氯苯基)羰基]-4-[1，4二甲基-6-(三氟甲基)-2-氧代-3吡啶基]-L-苯丙氨酸乙酯。实施例50：N-[(2，6-二氯苯基)羰基]-4-[1，4-二甲基-6-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸2-[(N，N-二乙基)氨基]乙酯的制备
应用实施例39中描述的一般性方法，可以从N-[(2，6-二氯苯基)羰基]-4-[1，4-二甲基-6-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸和2-[(N，N-二乙基)氨基]乙基氯盐酸盐制备N-[(2，6-二氯苯基)羰基]-4-[1，4-二甲基-6-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸2-[(N，N-二乙基)氨基]乙酯。实施例51：N-[(2，6-二氯苯基)羰基]-4-[1，4-二甲基-6-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸1-(乙酰氧基)乙酯的制备
应用实施例40中描述的一般性方法，可以从N-[(2，6-二氯苯基)羰基]-4-[1，4-二甲基-6-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸和1-氯乙酸乙酯制备N-[(2，6-二氯苯基)羰基]-4-[1，4-二甲基-6-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸1-(乙酰氧基)乙酯。生物检测实施例实施例AVLA-4/VCAM-1筛选检测
应用固相、双重抗体ELISA定量通过竞争性结合到固定化VCAM-1的能力所定义的VLA-4拮抗活性。结合到VCAM-1的VLA-4(α4 β1整联蛋白)通过抗整联蛋白β1抗体：HRP-结合的抗小鼠IgG：显色底物(K-Blue)的复合物进行测定。开始，需要用重组人VCAM-1(0.4μg在100μl PBS中)包被96孔平板(Nunc Maxisorp)，将每个平板密封，使平板在4℃下防置大约18小时。随后，将VCAM-包被的平板用250μl 1％BSA/0.02％NaN3封闭，以减少非特异性结合。在检测日，将所有的平板用VCAM检测缓冲液(每孔200μl 50mM Tris-HCl，100mM NaCl，1mMMnCl2，0.05％吐温20；pH7.4)洗两次。将测试化合物溶解于100％DMSO中，然后用补充有1mg/mL BSA的VCAM检测缓冲液以1∶20稀释(即最终DMSO＝5％)。进行一系列1∶4稀释，以获得每个测试化合物0.005nM-1.563μM的浓度范围。将每种稀释液每孔100μl加入到VCAM包被的板上，随后加入10μl Ramos细胞衍生的VLA-4。随后将这些平板在平台振荡器上混合1分钟，在37℃下温育2小时，然后用200μl/孔VCAM检测缓冲液洗涤4次。将100μl小鼠抗-人整联蛋白β1抗体加入到每孔(0.6Mg/mL，在VCAM检测缓冲液+1mg/mL BSA中)，将其在37℃下温育1小时。在结束温育时，所有平板用VCAM检测缓冲液洗涤4次(200μl/孔)。然后将相应的第二抗体HRP-结合的山羊抗小鼠IgG(100μl/孔@在VCAM检测缓冲液+1mg/mL BSA中的1∶800稀释液)加入到每孔，随后在室温下温育1小时，结束时用VCAM检测缓冲液洗3次(200μl/孔)。每孔通过加入100μl K-Blue开始显色(室温下温育15分钟)，每孔通过加入100μl Red Stop缓冲液终止。然后将所有的平板在UV/可见分光光度计于650nM下读板。以全部结合(即不存在测试化合物时的VLA-4+VCAM-1)的抑制百分比计算结果。结果如下表I所示(A＝IC50＜1nM，B＝IC50＜10nM)：表I
实施例B基于Ramos(VLA-4)/VCAM-1细胞的筛选检测方案材料：
| 实施例的化合物 | VCAM/VLA-4 ELISA检测的活性 |
| 8 | A |
| 10 | B |
| 15 | B |
| 17 | B |
| 24 | A |
| 28 | A |
可溶性重组人VCAM-1(5-和7-Ig区的混合物)应用免疫亲和色谱从CHO细胞培养基纯化，在含有0.1M Tris-甘氨酸(pH7.5)、0.1M NaCl、5mM EDTA、1mM PMSF、0.02％0.02％NaN3和10μg/mL亮抑蛋白酶肽的溶液中维持。钙黄绿素-AM从Molecular Probes Inc.购买。方法：
VLA-4(α4β1整联蛋白)拮抗活性，其通过与细胞表面VLA-4对固定化VCAM-1的结合的竞争能力所定义，应用Ramos-VCAM-1细胞附着进行检测。带有细胞表面VLA-4的Ramos细胞用荧光染料(钙黄绿素-AM)进行标记，在存在或不存在测试化合物下使其结合VCAM-1。与附着细胞结合的荧光强度的减少(抑制百分比)反应了通过测试化合物进行的VLA-4介导的细胞粘附的竞争性抑制。
开始，需要用重组人VCAM-1(100μg，在100μl PBS中)包被96孔平板(Nunc Maxisorp)，将每个平板密封，使平板在4℃下放置大约18小时。随后，将VCAM-包被的平板用在PBS中的0.05％吐温-20洗两次，用200μl封闭缓冲液(1％BSA/0.02％硫柳汞)封闭1小时(在室温下)，以减少非特异性结合。与封闭缓冲液温育后，翻转平板，吸印，吸去其余的缓冲液。然后将每个平板用300μl PBS洗涤，翻转，吸出其余的PBS。
将测试化合物溶解于100％DMSO中，然后，用VCAM细胞粘附检测缓冲液(4mM CaCl2，4mM MgCl2在50mM TRIS-HCl中，pH7.5)以1∶25稀释(最终DMSO＝4％)。对每个测试化合物进行一系列1∶4稀释(一般浓度范围1nM-12,500nM)。将每种稀释液每孔100μl加入到VCAM包被的板上，随后加入100μl Ramos细胞(200,000细胞/孔，在1％BSA/PBS中)。将含有测试化合物和Ramos细胞的平板在室温下温育45分钟，之后加入165μl/孔PBS。翻转平板以除去非粘附性细胞，吸印，加入300μl/孔PBS。然后再次翻转平板，吸印，轻轻吸去其余的缓冲液。向每个孔加入100μl裂解缓冲液(在50mM TRIS-HCl中的0.1％SDS，pH8.5)，在旋转振荡平台上振荡2分钟。然后将该平板在Cytofluor 2300(Millipore)荧光测定系统(激发＝485nm，发射＝530nm)读取荧光强度。结果如下表所示：
在下表II中提供了结果(A＝IC50＜100nM，B＝IC50＜10000nM，C＝IC50＜5,000nM)：
表II
实施例Cα4-β7检测方案
| 实施例的化合物 | VCAM/VLA-4 Ramos细胞检测的活性 |
| 8 | B |
| 10 | B |
| 15 | C |
| 24 | B |
| 28 | C |
| 30 | B |
| 31 | B |
| 32 | B |
| 33 | A |
| 34 | B |
| 35 | B |
| 36 | A |
| 37 | B |
在检测前两周至一天，将Nunc高-结合F96 Maxisorp免疫板#442404或#439454用25ng/孔(0.25μg/ml)MadCAM以100μl/孔体积包被。用密封层覆盖平板，用莎纶套包裹，在冰箱中保温至少24小时。使用的包被缓冲液为：10mM碳酸盐/碳酸氢盐缓冲液，其从0.8g/L碳酸钠和1.55g/L碳酸氢钠制备，用1N HCl调节pH值至9.6。
检测缓冲液由下列组成：
清洗缓冲液：在PBS中的0.05％吐温20
封闭缓冲液：在PBS中的1％Nonfat奶粉
标记缓冲液：PBS
细胞缓冲液：RPMI1640培养基(无添加剂)
结合缓冲液：1.5mM CaCl2
0.5mM MnCl2
50mM TRIS-HCl；逐滴加NaOH调节pH值至7.5
用水加至体积
调节pH值至7.5
稀释缓冲液：在结合缓冲液中的4％DMSO
将平板用清洗缓冲液洗两次，然后用封闭缓冲液在室温下至少封闭1小时。有时将密封的平板在冰箱中封闭过夜。然后用PBS洗平板，手吸印干。从孔中吸出其余的液体。
从储备液中取出足够量的用于检测的RPMI 8866细胞(2×106细胞/ml×10ml/平板x平板数)，置于离心管中。用PBS填充管到体积，在200x G下旋转8分钟。倒出缓冲液，将该细胞再混悬于PBS中至10×106/ml，以5μl/ml细胞混悬液比例加入在DMSO(5mg/mL)中的钙黄绿素储备液。将该混悬液在37℃、暗处温育30分钟。然后，用PBS洗该细胞。倒出PBS，将细胞以2×106细胞/mL的浓度再混悬于细胞缓冲液中，用于在检测中铺板。
在100％DMSO中制备所需的25x第一稀释液的测试化合物储备液。作为标准的第一稀释液以及测试化合物以1∶25比例用直接的(straight)结合缓冲液稀释，同时用稀释缓冲液(结合缓冲液/4％DMSO)稀释其余一系列稀释液。通过预期活性确定用于筛选的化合物的储备液浓度和稀释度。
为了检测，第一排孔铺板129μl结合缓冲液，其余孔铺板100μl稀释缓冲液。吸取每种化合物5.4μl等分试样至适当的标记孔，每种化合物一式三份。然后将该化合物稀释到平板上(34μl+100μl＝＞4倍稀释)。作为对照，将100μl稀释缓冲液+100μl细胞缓冲液铺板于非特异性背景孔上(没有细胞，没有化合物)，100μl稀释缓冲液稀+100μl细胞铺板于全部结合孔中(没有化合物＝100％结合)。将2×106细胞/ml、100μl/孔(＝2×105细胞/孔)的标记的细胞加入到含有化合物的各孔中。密封平板，在室温下暗处温育45分钟。温育后，通过加入150μl PBS/孔除去未结合的细胞。翻转平板，吸印到纸巾上，向孔中轻轻加入200μl PBS进行冲洗，然后再吸印。从孔中小心吸出其余的缓冲液。最后向每孔加入100μl PBS。然后将该平板在Cytofluor 2300(Millipore)荧光测定系统(激发＝485nm，发射＝530nm)读取荧光强度。通过线性回归分析测定每种化合物的IC50。结果如下表所示：
下表III提供了测试结果：
表III
| 实施例的化合物 | MadCAM/RPMI细胞检测中的活性A＝IC50＜100nM，B＝IC50＜10000nM，C＝IC50＜5,000nM) |
| 30 | B |
| 31 | B |
| 32 | B |
| 33 | A |
| 34 | B |
| 35 | C |
| 36 | B |
| 37 | B |
Claims (56)
1.下式的化合物，或其可药用的盐：
其中R1为式Y-1的基团：
其中R22和R23独立为氢，低级烷基，低级烷氧基，环烷基，芳基，芳基烷基，硝基，氰基，低级烷硫基，低级烷基亚磺酰基，低级烷基磺酰基，低级烷酰基，卤素或全氟低级烷基，并且R22和R23中至少一个不为氢，R24为氢，低级烷基，低级烷氧基，芳基，硝基，氰基，低级烷基磺酰基，或卤素；
R1为式Y-2的基团，其为通过碳原子键合到酰胺羰基上的五或六元芳香杂环，其中所述环含有一个、两个或三个选自N、O和S的杂原子，所述环的一个或两个原子被低级烷基，环烷基，卤素，氰基，全氟低级烷基，或芳基独立取代，并且至少一个所述取代原子与键合到酰胺羰基上的碳原子相邻；或
R1为式Y-3的基团，其为下式的3-7元环：
其中R25为低级烷基，未取代的或氟取代的低级烯基，或式R26-(CH2)e-的基团，R26为芳基，杂芳基，叠氮基，氰基，羟基，低级烷氧基，低级烷氧基羰基，低级烷酰基，低级烷硫基，低级烷基磺酰基，低级烷基亚磺酰基，全氟低级烷酰基，硝基，或R26为式-NR28R29的基团，其中R28为氢或低级烷基，R29为氢，低级烷基，低级烷氧基羰基，低级烷酰基，芳酰基，全氟低级烷酰基氨基，低级烷基磺酰基，低级烷基氨基羰基，芳基氨基羰基；或R28和R29与连接的氮原子一起形成4、5或6元饱和杂环，并且所述环任选含有一个另外选自O、S和N-R40的杂原子；
Q为-(CH2)fO-，-(CH2)fS-，-(CH2)fN(R27)-，-(CH2)f-，
R27为H，低级烷基，芳基，低级烷酰基，芳酰基或低级烷氧基羰基，
R40为H，低级烷基，芳基，低级烷酰基，芳酰基或低级烷氧基羰基，环中的碳原子为未取代的或被低级烷基或卤素取代，
e为0至4的整数，f为0至3的整数；
R2为氢，低级烷基，取代的低级烷基，芳基，或芳基低级烷基；
R3为氢，卤素，低级烷基，三氟甲基或芳基；
R4为氢，卤素，低级烷基，或芳基；
R5为氢，低级烷基，低级烷氧基，三氟甲基，或OH；
R6为氢，低级烷基，低级烷基羰基氧基低级烷基；
或R6为式P-3的基团：
其中：R32为氢或低级烷基；R33为氢，低级烷基，芳基；R34为氢或低级烷基；h为0至2的整数；g为0至2的整数；h和g的总数为1至3；或R6为式P-4的基团：
其中：R32、g和h如前所定义，Q’为O，S，-(CH2)j-，或式N-R35的基团，其中R35为氢，低级烷基，低级烷酰基，低级烷氧基羰基；j为0、1或2；
R7为氢，氯，低级烷氧基，或低级烷基。
2.按照权利要求1的化合物，其中R3为氢，卤素，低级烷基或芳基。
3.按照权利要求1或2的化合物，其中R1为Y-3，其中Q为-(CH2)fO-，-(CH2)fS-或-(CH2)f-。
4.按照权利要求3的化合物，其中R5为氢，低级烷基或三氟甲基。
5.按照权利要求1或2的化合物，其中R1为Y-1的基团，其中R22和R23独立为氢，低级烷基或卤素，R24为氢，低级烷基或低级烷氧基。
6.按照权利要求5的化合物，其中R22和R23独立为氢，低级烷基或卤素，R24为氢或低级烷氧基，R2为芳基低级烷基。
7.按照权利要求1或2的化合物，其中R1为式Y-3的基团，其中R25为式R26-(CH2)e-的基团，其中R26为低级烷氧基，Q为-(CH2)f-，e为0-4的整数，f为0-3的整数。
8.按照权利要求1或2的化合物，其中R1为式Y-3的基团，R2为氢，低级烷基，取代的低级烷基或芳基低级烷基。
9.按照权利要求8的化合物，其中R1为式Y-3的基团，其中R25为式R26-(CH2)e-的基团，其中R26为低级烷氧基，Q为-(CH2)f-，e为0-4的整数，f为0-3的整数；R2为芳基低级烷基。
10.按照权利要求1或2的化合物，其中
R2为氢，低级烷基或芳基低级烷基；
R3为氢；
R4为氢或卤素；
R5为氢，低级烷基，或三氟甲基，或低级烷氧基；
R6为氢或低级烷基；和
R7为氢，氯，低级烷氧基或低级烷基。
11.按照权利要求10的化合物，其中R1为式Y-1的基团。
12.按照权利要求11的化合物，其中R1为式Y-1的基团，其中R22和R23独立为氢，低级烷基或卤素，R24为氢，低级烷基或低级烷氧基。
13.按照权利要求12的化合物，其中R1为式Y-1的基团，其中R24为氢，R2为芳基低级烷基。
14.按照权利要求10的化合物，其中R1为Y-2。
15.按照权利要求10的化合物，其中R1为式Y-3的基团。
16.按照权利要求15的化合物，其中R1为式Y-3的基团，其中R25为式R26-(CH2)e-的基团，其中R26为低级烷氧基，Q为-(CH2)f-，e为0-4的整数，f为0-3的整数。
17.按照权利要求10的化合物，其中
R2为氢，低级烷基或芳基低级烷基；
R3为氢；
R4为卤素；
R5为氢；
R6为氢或低级烷基；
R7为氢，氯，低级烷氧基或低级烷基。
18.按照权利要求1、3或4的化合物，其中R1为式Y-1或式Y-3的基团；
R2为氢，低级烷基或芳基低级烷基；
R3为氢，低级烷基或三氟甲基；
R4为氢或卤素；
R5为氢，低级烷基或三氟甲基；
R6为氢，低级烷基，低级烷基羰基氧基低级烷基，式P-3或式P-4的基团；以及
R7为氢或低级烷基。
19.按照权利要求18的化合物，其中
R2为低级烷基或芳基低级烷基；
R6为氢，低级烷基，低级烷基羰基氧基低级烷基，或式P-3的基团；以及
R7为氢。
20.按照权利要求19的化合物，其中R1为Y-1，其中R22和R23为氢，卤素或低级烷基，R24为氢或低级烷氧基，R1为Y-3，其中R25为式R26-(CH2)e-的基团，其中R26为低级烷氧基，Q为-(CH2)f-，e为0-4的整数，f为0-3的整数。
21.按照权利要求20的化合物，其中R2为低级烷基，R4为氢，R3和R5为低级烷基或三氟甲基。
22.按照权利要求21的化合物，其中R6为氢。
23.按照权利要求22的化合物，其中R1为Y-1。
24.按照权利要求23的化合物，其中R22和R23为卤素或低级烷基。
25.按照权利要求24的化合物，其为
N-[(2，6-二氯苯基)羰基]-4-[1，6-二甲基-4-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸；
N-[(2-乙基-6-甲基苯基)羰基]-4-[1，6-二甲基-4-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸；
N-[(2-(1-甲基乙基)-6-甲基苯基)羰基]-4-[1，6-二甲基-4-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基1-L-苯丙氨酸；
N-[(2-氯-6-甲基苯基)羰基]-4-[1，6-二甲基-4-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸；
N-[(2，6-二氯苯基)羰基]-4-(1，4-二甲基-6-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基)-L-苯丙氨酸；或
N-[(2-氯-6-甲基苯基)羰基]-4-(1，4-二甲基-6-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基)-L-苯丙氨酸。
26.按照权利要求22的化合物，其中R1为Y-3。
27.按照权利要求26的化合物，其为N-[[1-(2-甲氧基乙基)环戊基]羰基]-4-[1，6-二甲基-4-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸。
28.按照权利要求21的化合物，其中R6为低级烷基。
29.按照权利要求28的化合物，其为
N-[(2，6-二氯苯基)羰基]-4-[1，6-二甲基-4-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸乙酯；
N-[(2，6-二氯苯基)羰基]-4-[1，4-二甲基-6-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸乙酯；
N-[(2-氯-6-甲基苯基)羰基]-4-[1，6-二甲基-4-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸乙酯；或
N-[(2-氯-6-甲基苯基)羰基]-4-[1，4-二甲基-6-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸乙酯。
30.按照权利要求21的化合物，其中R6为低级烷基羰基氧基低级烷基。
31.按照权利要求30的化合物，其为
N-[(2，6-二氯苯基)羰基]-4-[1，6-二甲基-4-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸1-(乙酰氧基)乙酯；
N-[(2，6-二氯苯基)羰基]-4-[1，4-二甲基-6-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸1-(乙酰氧基)乙酯；
N-[(2-氯-6-甲基苯基)羰基]-4-[1，6-二甲基-4-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸1-(乙酰氧基)乙酯；或
N-[(2-氯-6-甲基苯基)羰基]-4-[1，4-二甲基-6-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸1-(乙酰氧基)乙酯。
32.按照权利要求21的化合物，其中R6为式P-3的基团，其中R32为氢；R33和R34为低级烷基；g和h中一个为1，另一个为0。
33.按照权利要求32的化合物，其为
N-[(2，6-二氯苯基)羰基]-4-[1，6-二甲基-4-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸2-[(N，N-二乙基)氨基]乙酯；
N-[(2，6-二氯苯基)羰基]-4-[1，4-二甲基-6-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸2-[(N，N-二乙基)氨基]乙酯；
N-[(2-氯-6-甲基苯基)羰基]-4-[1，6-二甲基-4-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸2-[(N，N-二乙基)氨基]乙酯；或
N-[(2-氯-6-甲基苯基)羰基]-4-[1，4-二甲基-6-(三氟甲基)-2-氧代-3-吡啶基]-L-苯丙氨酸2-[(N，N-二乙基)氨基]乙酯。
34.按照权利要求20的化合物，其中R6为氢。
35.按照权利要求34的化合物，其中R2为低级烷基；R3为氢；R4为氢或卤素；以及R5为氢或低级烷基。
36.按照权利要求35的化合物，其中R1为Y-1。
37.按照权利要求36的化合物，其中R22和R23为低级烷基或卤素，R24为氢。
38.按照权利要求37的化合物，其为
N-[(2-氯-6-甲基苯基)羰基]-4-(5-氯-1-甲基-2-氧代-3-吡啶基)-L-苯丙氨酸；
N-[(2-氯-6-甲基苯基)羰基]-4-(1-甲基-2-氧代-3-吡啶基)-L-苯丙氨酸；或
N-[(2-氯-6-甲基苯基)羰基]-4-(1，4-二甲基-2-氧代-3-吡啶基)-L-苯丙氨酸。
39.按照权利要求36的化合物，其中R22和R23为卤素，R24为氢。
40.按照权利要求39的化合物，其为N-[(2，6-二氯苯基)羰基]-4-(1，4-二甲基-2-氧代-3-吡啶基)-L-苯丙氨酸。
41.按照权利要求36的化合物，其中R22和R23为卤素或氢，R24为低级烷氧基。
42.按照权利要求41的化合物，其为
N-[(2-溴代-5-甲氧基苯基)羰基]-4-(1-甲基-2-氧代-3-吡啶基)-L-苯丙氨酸；或
N-[(2-溴代-5-甲氧基苯基)羰基]-4-(5-溴代-1-甲基-2-氧代-3-吡啶基)-L-苯丙氨酸。
43.按照权利要求35的化合物，其中R1为Y-3。
44.按照权利要求43的化合物，其为4-(5-氯-1-甲基-2-氧代-3-吡啶基)-N-[[1-(2-甲氧基乙基)环戊基]羰基]-L-苯丙氨酸。
45.按照权利要求19的化合物，其中R22和R23为卤素或低级烷基，R24为氢或低级烷氧基，R25为式R26-(CH2)e-的基团，其中R26为低级烷氧基，Q为-(CH2)f-，e为0-4的整数，f为0-3的整数。
46.按照权利要求45的化合物，其中R2为芳基低级烷基；R3为氢，R4为卤素，R5、R6和R7为氢。
47.按照权利要求46的化合物，其中R1为Y-1。
48.按照权利要求47的化合物，其为
4-(1-苄基-5-氯-2-氧代-3-吡啶基)-N-[(2-氯-6-甲基苯基)羰基]-L-苯丙氨酸；或
4-(1-苄基-5-氯-2-氧代-3-吡啶基)-N-[[1-(2-甲氧基乙基)环戊基]羰基]-L-苯丙氨酸。
49.式II的化合物：
其中R2-R5和R7如权利要求1所定义，P1和P2分别为保护基团。
50.用作药物的按照权利要求1-48中任何一个的化合物。
51.一种药物组合物，其含有按照权利要求1-48中任何一个的化合物或其可药用的盐，和可药用的载体。
52.用于治疗由VCAM-1或VLA-4或VLA-4-表达细胞结合介导的疾病，特别是用于治疗类风湿性关节炎、多发性硬化、炎症性肠病和哮喘的按照权利要求1-48中任何一个的化合物。
53.按照权利要求1-48中任何一个的化合物或其可药用盐在治疗由VCAM-1或VLA-4或VLA-4-表达细胞结合介导的疾病，特别是治疗类风湿性关节炎、多发性硬化、炎症性肠病和哮喘中的应用。
54.一种制备组合物的方法，其中所述方法包括将按照权利要求1-48中任何一个的化合物或其可药用盐与相容的药用载体制成盖仑给药剂型。
55.按照权利要求1-48中任何一个的化合物或其可药用盐在制备用于治疗类风湿性关节炎、多发性硬化、炎症性肠病和哮喘的药物中的应用。
56.基本上如前文所述的本发明，特别是新的化合物、中间体、药物组合物以及其应用。
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