CN1396951A - 细胞保存液和使用该保存液的细胞保存方法 - Google Patents

细胞保存液和使用该保存液的细胞保存方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及细胞保存液，在保存过程中既没有向其添加血清也没有添加培养基，但其仍表现出极好的保存性能。不同于已用作含血清的细胞保存液中的添加剂的二甲基亚砜，上述细胞保存液含有白蛋白混合物，其作为主要试剂，任选地和辅助试剂如磷酸根离子、二价金属离子或单糖一起，包含于在保存生殖细胞中所采用的磷酸盐缓冲溶液中。因此，不需要向保存液中添加血清或培养基，因而不存在保存期间细胞变性或被未知病毒污染的危险。因此，本发明能够提供含有确定成分的，具有高稳定品质并表现出极好的细胞保存性能的细胞保存液，以及保存细胞的方法。

Description

细胞保存液和使用该保存液的细胞保存方法
技术领域
本发明涉及含有精制白蛋白和二甲基亚砜的用于保存细胞的保存液，以及使用上述保存液保存细胞以提高保存后复活的有效细胞率的方法。
背景技术
由于原始细胞的各种性质，因而用于保存细胞的保存液和方法是未解决的。例如，诸如微生物的细胞一般以这样的方式保存：将微生物悬浮在含有大约10％甘油的微生物培养基中并在低温下保存，或者冻干这些微生物。通过以下方法完成哺乳动物细胞的保存：将细胞悬浮在含有来自牛胚胎的血清和大约10％二甲基亚砜的培养基中，预先将含有细胞的培养基急速冷冻，然后在液氮贮库中保存。
在生殖细胞如精子的保存中，将含共源白蛋白的磷酸盐缓冲盐水用作保存液。在哺乳动物细胞的保存中，一般使用含血清的保存液或不含血清的保存液。作为含血清的保存液，已知通过使培养基充满血清和二甲基亚砜而制得的细胞保存液。同时，已知含有羧甲基纤维素而没有血清的不含血清的保存液(特开平6-46840号)。
但是，不含血清的保存液的细胞保存性能差。因为普通的培养基含血清，因此在许多情况下使用含血清的保存液。由于保存哺乳动物细胞比保存微生物细胞或生殖细胞更难，因此使用用于哺乳动物细胞的保存液保存比哺乳动物细胞更容易保存的生殖细胞。
但是，用于含血清保存液的培养基随要培养的细胞而变，而且，大量不同的血清也因此而与细胞一起使用。因此，难以将自己制备的细胞保存液用作保存其它细胞的液体。此外，含血清的保存液不仅含有细胞因子、生长因子、激素等等作为含血清成分，还含有具有保存细胞根本不需要的非必要成分的宿主的培养基，因而可能被改变性质，并存在受血清中可能含有的未知病毒的影响的问题。
也就是说，上述含血清的保存液存在导致保存期间细胞变性，未知病毒污染和由于保存液组成不确定而引起的难以稳定其品质的多种缺点。
因此，本发明的目的是提供包含明确成分并具有极好的细胞保存性能的不含血清和培养基的细胞保存液，以及使用此细胞保存液的细胞保存方法。
发明内容
为了消除上述常规细胞保存液存在的各种缺陷，本发明提供包含精制白蛋白和二甲基亚砜的细胞保存液。所述精制白蛋白可以来自牛。除了精制白蛋白和二甲基亚砜以外，此保存液可以含有糖。糖可以是单糖。
而且，本发明的细胞保存液中的糖可以是葡萄糖。除了精制白蛋白和二甲基亚砜以外，还可以含有磷酸根离子。或者，除了精制白蛋白和二甲基亚砜以外，还含有金属离子。
此外，本发明的细胞保存液中的金属离子可以是二价金属离子。
而且，本发明提供细胞保存方法，所述方法包括将细胞悬浮在上述细胞保存液中，将悬浮的细胞分配到多个保存容器中，并在不进行预冷冻的情况下将要保存的悬浮的细胞冷冻。在此细胞保存方法中，将分配到保存容器中的细胞悬浮使之具有1×103-1×108的浓度以深低温保藏。
本文以下将描述本发明的其它目的和优点。
具体实施方式
上述含血清的细胞保存液存在导致保存期间细胞变性，未知病毒污染和由于保存液组成不确定而引起的难以稳定其品质的多种缺点。为了消除含血清的细胞保存液的这些问题，根据本发明，开发出成分明确并具有极好的细胞保存性能的不含血清和培养基的细胞保存液，以及使用此细胞保存液的细胞保存方法。使用本发明的细胞保存液，反复进行试验。
在这些试验中，通过以下方法制作本发明的不含血清且不含培养基的细胞保存液：配制含有迄今用作含血清保存液的添加剂的二甲基亚砜和通常用于保存生殖细胞的磷酸盐缓冲盐水中所含的白蛋白的主要试剂，将辅助试剂如磷酸根离子、二价金属离子或单糖加入主要试剂中。试验结果是，令人惊奇地发现，本发明的不含血清且不含培养基的细胞保存液表现出不仅能有效保存哺乳动物细胞，还能有效保存微生物细胞和生殖细胞的极好性能。因此，这种细胞保存液和使用这种细胞保存液的细胞保存方法可以通过本发明实现。
以下将对本发明进行更为具体的描述。本发明的细胞保存液的特征在于含有精制白蛋白和二甲基亚砜。作为本发明所用的二甲基亚砜，可以使用常用的市售产品。关于为了期望目的而应用的二甲亚砜的量，二甲基亚砜浓度低于0.1％(w/w)导致细胞保存能力降低。相反，如果浓度超过保存液总量的50％(w/w)，则作用不再改变。因此，从性价比的角度考虑，二甲基亚砜的浓度可以确定为0.1％-50％(w/w)，优选为1％-20％(w/w)。
作为加入二甲基亚砜中的白蛋白，可以根据要保存的细胞的类型而任意选择白蛋白的类型，但适宜地使用人白蛋白用于保存人细胞以治疗人类。但是，白蛋白的种类并不总是限于此，可以使用来自牛或任何其它物种的白蛋白。可以使用任何种类的白蛋白而不考虑其精制方法。可以使用纯度相当于片段V的精制白蛋白。
关于保存液中白蛋白的浓度，低于0.001％(w/w)的白蛋白无效，而且如果白蛋白浓度超过25％(w/w)，其作用不再改变。因此，考虑经济效率和操作性质，0.01％-25％(w/w)，优选0.1％-5％(w/w)的白蛋白是可行的。
将金属离子加入保存液中在使保存的细胞复原时提高活细胞率(有效细胞率)。作为本发明所用的金属离子，可以使用各种金属离子如二价或三价金属离子，而二价金属离子优选使用。例如，除了金属离子之外，发现钙离子、镁离子、铁离子、锌离子、铜离子和铝离子是可以考虑的。可以适宜地使用低浓度的金属离子，但浓度低于0.0000001％(w/w)的金属离子无效，相反，超过1％(w/w)的金属离子浓度保持其作用不变。因此，从经济效率方面考虑，0.0000001％-5％(w/w)，优选0.1％-5％(w/w)的金属离子是可行的。
而且，加入保存液中的糖具有在使保存的细胞复原时提高活细胞率(有效细胞率)的功能。作为本发明所用的糖，为各种单糖、二糖和三糖如葡萄糖、半乳糖、果糖、核糖、海藻糖，推荐使用葡萄糖。这些成分中，从经济效率考虑推荐使用葡萄糖。
关于保存液中的糖浓度，浓度低于0.1％(w/w)的糖无效，相反，超过10％(w/w)的糖保持其作用不变。因此，0.1％-10％(w/w)，优选1％-5％(w/w)的糖是可行的。
磷酸根离子可以用作磷酸盐缓冲盐水。磷酸盐缓冲盐水包括Dulbecco氏磷酸盐缓冲盐水和磷酸盐缓冲盐水。可以使用多种培养基代替上述二价或三价金属离子和磷酸盐缓冲盐水。通过以下方法进行细胞保存：将细胞悬浮在用于深低温保藏的试管中使其浓度为1×103-1×108细胞/ml以深低温保藏，并将试管置于-80℃下或液氮中(举例)。在这种情况下，设定在-40℃至-20℃等级的温度满足短期保存。可以以以下状态深低温保藏细胞：将悬浮在上述保存液中的细胞分散到细胞保存容器中而不预冷冻。
在保存中，可以使用程序冷冻机将悬浮在细胞保存液中的细胞逐渐降温，或可以通过快速冷冻保存。本文以下将描述解冻深低温保藏细胞的方法。通过在室温或37℃下在恒温室中解冻而将深低温保藏的细胞复原，并使用离心分离器将其离心分离成细胞和保存液。用适宜的培养液清洗分离的细胞，然后以常规培养方式培养。
接着，解释用于评价本发明的细胞保存性能的方法。可以以下方式评价细胞保存性能：将悬浮在细胞保存液中并冷冻的细胞根据环境深低温保藏数小时或数天，或保存数年，然后使深低温保藏的细胞回到室温以解冻和培养，接着计数活细胞的数目。[实施例]
本文以下将详细描述本发明的实际实施的实施例。[1.细胞保存液的制备]
使用电子称重仪(416-65-81-01，东京硝子器株式会社制造)，称出1.8g碳酸氢钠(高级试剂191-01305，由和光纯药工业株式会社制造)、300g D(+)葡萄糖(高级试剂041-00595，由和光纯药工业株式会社制造)、3.6g HEPES(高级试剂324-01375，由株式会社同仁化学研究所制造)和96g PBS(-)粉末(05913，由日水制药株式会社制造)，并将它们置于10升烧杯(1000BK10000，由Asahi Techno GlassCorporation制造)中。
然后，用10升刻度测量量杯(1079，由Sauplatec Sanplatec Corp.制造)量出8升注射溶剂(光制药株式会社)，将其加入上述10升烧杯中，并用磁力搅拌器(BS-38，由Asahi Techno Glass Corporation制造)搅拌至溶解。进一步，用2升刻度测量量杯(3022CYL2000S，由AsahiTechno Glass Corporation制造)量出1升DMSO(134-07，由NacalaiTesque Inc.制造)，将其加到上述10升刻度测量量杯中，并用磁力搅拌器搅拌。
溶解后，称出1g氯化钙(039-00475，由和光纯药工业株式会社制造)和1g六水合氯化镁(135-00165，由和光纯药工业株式会社制造)，将其置于上述10升烧杯中，然后用磁搅拌器(BS-38，由AsahiTechno Glass Corporation制造)搅拌至溶解。接着，量出100g BSA(A-2934，由Sigma-Aldrich Japan Inc.制造)，并置于上述10升烧杯中，接着，在溶解以后，用注射溶剂稀释至10升。在溶液完全溶解后，通过螺旋盖PF(spiral cap PF)(12981，由日本的Genetics Inc.制造)过滤，从而得到细胞保存液。[2.使用P3U1细胞确认细胞保存液性能]
预先在含有培养基的培养瓶(MS-2080R，由Sumitomo BakeliteCo.，Ltd.制造)中培养来自小鼠骨髓瘤的P3U1细胞，所述培养基通过以下方法制备：在二氧化碳培养箱(CPD-300A，由Hirasawa WorksInc.制造)中，将450ml RPMI1640+7S(GM1104，由Nikken SeibutsuIgaku Kenkytisho制造)和50ml来自牛胚胎的血清(26140-079，由LifeTechnologies Oriental Inc.制造)混合。
然后，用吸量管(NPX-20，由Nichiryo Co.，Ltd.制造)从中移出10μl P3U1细胞悬浮液，并倾入预先含有20μl台盼蓝溶液(12301MTB0.5，由Asahi Techno Glass Corporation制造)的500μl试管中。轻微搅拌如此得到的溶液，将部分溶液置于细胞计数器(03-202-2，由Erma Inc.制造)上以使用倒置显微镜(CK-2，由OlympusOptical Co.，Ltd.制造)计数细胞数目。
计数发现7.0×105活细胞/ml得到确认。将细胞悬浮液分别分配50ml至两个离心管(2070，由Nippon Becton Dickinson Co.，Ltd.制造)，并在200℃，1500rpm下用离心分离器离心10分钟(11700FR，由Kokusan制造)以沉淀P3U1细胞。
在用滗析器撇去上清液后，使用试管混合器(MS-1，由AsahiTechno Glass Corporation制造)使悬浮在溶液中的细胞均匀释放，并均匀地悬浮在由上述方法[1]制备的细胞保存液中，以得到4.4×106细胞/ml的浓度。然后，将含有悬浮在细胞保存液中的细胞的溶液分配到血清试管中，以得到4.4×106细胞/试管的总细胞数目。然后，将含有溶液的试管置于试管架(9791-081，由Asahi Techno GlassCorporation制造)，并在-80℃冷冻机(三洋电机株式会社)中保存。[3.来自深低温保藏的细胞的P3U1细胞的复活]
在上述步骤[2]中冷冻保存一年后，从-80℃冷冻机中取出P3U1细胞，然后，在加热块(TAL-1G，由Taitec Co.制造)上放置4分钟，保持内部37℃进行解冻。利用滴管(SM251-1S，由Asahi Techno GlassCorporation制造)，将在加热块中如此解冻的P3U1细胞倾至在净化台(MCV-131BNF，由三洋电机株式会社制造)内的含有10ml无菌冲洗培养基(CM1101，由株式会社日研生物医学研究所制造)的15ml离心管(2095，由Nippon Becton Dickinson Company，Ltd.制造)，然后在20℃的大气下，以1200rpm将细胞离心5分钟。
离心后，用滗析器撇去上清液，然后使用试管混合器均匀释放停留在溶液中的细胞，将其悬浮在2ml培养基中，并倾入培养皿(1820-024N，由Asahi Techno Glass Corporation制造)，然后将10mlP3U1细胞悬浮液转至含有20ml台盼蓝溶液的500ml试管中，并在轻微搅拌溶液后，将部分溶液置于细胞计数器上以使用倒置显微镜计数细胞的数目。
计数的结果是，确定4.2×106活细胞(有效细胞数)/ml。也就是说，确定相对于细胞保存前的细胞数目，即4.4×106而言，复活的有效细胞率为96％。
培养三天后在显微镜下确认P3UI细胞的增殖。从这些结果发现，本发明的细胞保存液具有极好的保存细胞的功能。[4.使用K562细胞确定细胞保存液的细胞保存性能]
以与上述方法[2]相同的方式培养来自人白血病的K562细胞，并计数细胞数目。活细胞数为7.0×105细胞/ml。将50ml细胞悬浮液转移至两个离心管(2027，由Nippon Becton Dickinson Co.，Ltd.制造)，并在1500rpm，200℃下，用离心分离器(H700FR，由Kokusan制造)离心10分钟，以沉淀K562细胞。
在用滗析器撇去上清液后，使用试管混合器(MS-1，由AsahiTechno Glass Corporation制造)将悬浮在溶液中的细胞均匀释放，并均匀地悬浮在细胞保存液中，以得到3.0×106细胞/ml的浓度。然后，将含有悬浮在细胞保存液中的细胞的溶液分配到血清试管(2722-002，由Asahi Techno Glass Corporation制造)，以得到3.0×106细胞/试管的总细胞数。然后，将含有溶液的试管置于试管架(9791-081，由Asahi Techno Glass Corporation制造)上，并在-80℃冷冻机(三洋电机株式会社)上保存。[5.深低温保藏的细胞的K562细胞的复活]
在上述方法[3]中冷冻保存一年后取出K562细胞以复活。结果是，确定K562细胞含有2.9×106活细胞/ml。也就是说，相对于细胞保存前的细胞数目即3.0×106细胞/试管而言，复活的有效细胞率为95％。培养三天后，在显微镜下确认K562细胞的增殖。实验结果发现，本发明的细胞保存液具有极好的保存细胞的功能。
如以上所详述，本发明的细胞保存液含有精制白蛋白和二甲基亚砜，根据需要还含有辅助试剂如磷酸根离子、二价金属离子和单糖。因此，不要求向保存液中加入血清或培养基。结果，本发明的细胞保存液可以自己制备，并代替其它细胞保存液使用。而且，本发明消除了使用细胞因子、生长因子、激素等作为含血清成分，还消除了使用含有保存细胞根本不需要的非必要成分的宿主的培养基的需要。因此，本发明的细胞保存液的优点是有利地不存在由于对每种要培养的细胞使用不同的培养基而导致的细胞变性和被未知病毒污染的危险，并可以消除为每种细胞使用大量不同血清的需要。
而且，本发明可以提供包含确定成分，具有高稳定品质并表现出极好的细胞保存性能的细胞保存液，以及使用此细胞保存液保存细胞的非常有用的方法。本发明的细胞保存液特别适于保存哺乳动物细胞，还用于保存原生质体、植物细胞和生殖细胞。而且，通过使用本发明的细胞保存液，本发明有利于形成各种类型的有效细胞库。

Claims (18)

1.用于保存细胞的保存液，所述保存液包含精制白蛋白和二甲基亚砜。
2.如权利要求1所述的用于保存细胞的保存液，其中所述精制白蛋白来自牛。
3.如权利要求1或2所述的用于保存细胞的保存液，除了所述精制白蛋白和二甲基亚砜以外，所述保存液还含有糖。
4.如权利要求1-3之任一项所述的用于保存细胞的保存液，其中所述糖为单糖。
5.如权利要求1-3之任一项所述的用于保存细胞的保存液，其中所述糖为葡萄糖。
6.如权利要求1-5之任一项所述的用于保存细胞的保存液，除了所述精制白蛋白和二甲基亚砜以外，所述保存液还含有磷酸根离子。
7.如权利要求1-5之任一项所述的用于保存细胞的保存液，除了所述精制白蛋白和二甲基亚砜以外，所述保存液还含有金属离子。
8.如权利要求7所述的用于保存细胞的保存液，其中所述金属离子为二价金属离子。
9.如权利要求1-8之任一项所述的用于保存细胞的保存液，其中所述白蛋白的含量范围为0.01％-25％(w/w)。
10.如权利要求1-8之任一项所述的用于保存细胞的保存液，其中所述白蛋白的含量范围为0.1％-5％(w/w)。
11.如权利要求1-10之任一项所述的用于保存细胞的保存液，其中所述二甲基亚砜的浓度为0.1％-50％(w/w)。
12.如权利要求1-10之任一项所述的用于保存细胞的保存液，其中所述二甲基亚砜的浓度为1％-20％(w/w)。
13.如权利要求1-12之任一项所述的用于保存细胞的保存液，其中所述金属离子的浓度为0.0000001％-5％(w/w)。
14.如权利要求1-12之任一项所述的用于保存细胞的保存液，其中所述金属离子的浓度为0.1％-5％(w/w)。
15.如权利要求1-14之任一项所述的用于保存细胞的保存液，其中所述糖的浓度为0.1％-10％(w/w)。
16.如权利要求1-14之任一项所述的用于保存细胞的保存液，其中所述糖的浓度为0.1％-5％(w/w)。
17.细胞保存方法，所述方法包括以下步骤：将细胞悬浮在权利要求1-16之任一项所述的保存液中，将其中悬浮有所述细胞的所述保存液分配到多个保存容器中，在各所述保存容器中将所述保存液冷冻，以深低温保藏悬浮在所述保存液中的细胞。
18.如权利要求17所述的细胞保存方法，其中将所述细胞悬浮在所述保存液中，使其浓度为1×103-1×108，以深低温保藏。
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Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN100425693C (zh) * 2004-02-16 2008-10-15 瑞德肝脏疾病研究(上海)有限公司 一种保存体外肝细胞系统的方法
CN101672853B (zh) * 2009-09-28 2014-11-05 江西特康科技有限公司 血细胞分析仪校准品及其制备工艺
CN105121629A (zh) * 2013-03-15 2015-12-02 特拉基应用基因组学有限责任公司 用于保持已手术去除的组织中的癌细胞活力的方法和试剂
CN107779432A (zh) * 2016-08-29 2018-03-09 灏灵赛奥（天津）生物科技有限公司 一种car‑t细胞制剂及低温保存介质
CN109497043A (zh) * 2018-12-28 2019-03-22 中国医学科学院整形外科医院 无血清纳米材料冻存剂及其制备方法、使用方法，冻存液

Families Citing this family (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2003064634A1 (fr) * 2002-01-31 2003-08-07 Asahi Techno Glass Corporation Liquide permettant le stockage a l'etat congele de cellules souches embryonnaires de primates et procede de stockage par congelation
EP1820847B1 (en) 2004-09-24 2014-06-11 Seiren Kabushiki Kaisha Composition for cell frozen-storage
US20060078872A1 (en) * 2004-10-12 2006-04-13 Atsushi Taguchi Cell-preservation liquid
US20090081785A1 (en) 2007-09-24 2009-03-26 Hememics Biotechnologies, Inc. Desiccated Biologics And Methods Of Preparing The Same
US9943075B2 (en) 2010-02-17 2018-04-17 Hememics Biotechnologies, Inc. Preservation solutions for biologics and methods related thereto
JP6142142B2 (ja) * 2012-04-10 2017-06-07 株式会社リンフォテック メモリーｔ細胞を主成分とするリンパ球細胞群の製造方法
CN108235981B (zh) * 2016-12-23 2021-07-23 西比曼生物科技（香港）有限公司 一种可临床使用的细胞冻存液
CN106993606A (zh) * 2017-04-20 2017-08-01 苏州新赛美生物科技有限公司 一种不含蛋白和血清的细胞冻存液及其制备方法
CN107646831A (zh) * 2017-11-13 2018-02-02 重庆斯德姆生物技术有限公司 一种用于mcf‑7乳腺癌细胞的冻存液
CN107926930A (zh) * 2017-11-22 2018-04-20 瑞柏生物（中国）股份有限公司 一种精子冷冻液及其制备方法
CN107996558A (zh) * 2017-12-21 2018-05-08 湖南丰晖生物科技有限公司 细胞冻存液及其应用
CN113056556A (zh) * 2018-08-31 2021-06-29 学校法人同志社 用于对眼细胞进行保存或培养的组合物以及方法
CN109349270A (zh) * 2018-11-09 2019-02-19 合肥诺森医学检验有限公司 细胞保存液及使用细胞保存液保存细胞的方法
CN109907036A (zh) * 2019-02-27 2019-06-21 北京益华生物科技有限公司 细胞冻存液、细胞冻存液制备方法和细胞冻存方法
CN111718908B (zh) * 2020-08-11 2022-05-24 杭州博日科技股份有限公司 病毒样本保存液及其制备方法和应用

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4004975A (en) * 1975-12-30 1977-01-25 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy Method of isolating and cryopreserving human white cells from whole blood
CA2122140A1 (en) * 1991-10-23 1993-04-29 Dale R. Peterson Method for freezing engrafting cells
JPH0646840A (ja) * 1992-08-04 1994-02-22 Nippon Zenyaku Kogyo Kk 細胞凍結保存液
AU8078894A (en) * 1993-10-08 1995-05-04 Cellpro Ii Methods for collection and cryopreservation of human granulocytes
JPH07255469A (ja) * 1994-03-17 1995-10-09 Kurabo Ind Ltd 動物細胞の凍結保存液
AU4751697A (en) * 1996-10-10 1998-05-05 Douglas Danner Animal cell culture media comprising plant-derived nutrients
US6485959B1 (en) * 1998-10-07 2002-11-26 Cedars Sinai Medical Center Cell preconditioning and cryopresevation medium
JP2000201672A (ja) * 1999-01-11 2000-07-25 Asahi Medical Co Ltd 有核細胞の凍結保存用組成物
US6060252A (en) * 1999-04-12 2000-05-09 Becton Dickinson And Company Amplification and detection of shigella spp. and enteroinvasive strains of Escherichia coli
JP2001354575A (ja) * 2000-06-09 2001-12-25 Human Tekku:Kk 癌の再発予防法および癌の再発予防用活性化リンパ球を含む製剤、ならびにそれらの細胞の凍結および加工委・受託システム

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN100425693C (zh) * 2004-02-16 2008-10-15 瑞德肝脏疾病研究(上海)有限公司 一种保存体外肝细胞系统的方法
CN101672853B (zh) * 2009-09-28 2014-11-05 江西特康科技有限公司 血细胞分析仪校准品及其制备工艺
CN105121629A (zh) * 2013-03-15 2015-12-02 特拉基应用基因组学有限责任公司 用于保持已手术去除的组织中的癌细胞活力的方法和试剂
CN107779432A (zh) * 2016-08-29 2018-03-09 灏灵赛奥（天津）生物科技有限公司 一种car‑t细胞制剂及低温保存介质
CN109497043A (zh) * 2018-12-28 2019-03-22 中国医学科学院整形外科医院 无血清纳米材料冻存剂及其制备方法、使用方法，冻存液

Also Published As

Publication number Publication date
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