CN107646831A - 一种用于mcf‑7乳腺癌细胞的冻存液 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种用于MCF‑7乳腺癌细胞的冻存液，包括以下重量份的组分：二甲基亚砜6‑15份、羟甲基淀粉3‑6份、海藻糖5‑15份、卵磷脂2‑6份、聚乙二醇1‑5份、蔗糖1‑4份、转铁蛋白3‑8份、维生素C 1‑4份、卵磷脂3‑8份、低密度蛋白2‑5份、胰岛素生长因子2‑6份、白介素6 2‑5份、白介素10 2‑4份、GM‑CSF1‑4份等。该冻存液组分合理科学，营养丰富，在保证休眠细胞的营养的同时还可以显著减少对细胞的损伤，提高冻存细胞的存活率，并且在增殖方面也保持很好的状态，可以方便应用于软腺癌的原位生长，血管生成以及与其他乳腺癌高转移性细胞进行对比研究等的相关研究。
Description
技术领域
本发明属于细胞冻存液技术领域，具体涉及一种用于MCF-7乳腺癌细胞的冻存液。
背景技术
乳腺癌是女性最常见的癌症，主要包括导管癌和小叶癌。2016年美国CA(ACancerJournal for Clinicians)公布的最新统计数据显示，美国2016年预计将有420840例女性患乳腺癌，占女性新发恶性肿瘤的38％，居女性恶性肿瘤发病率第一位，并且死亡人数达52930例，更为严重的是全球的乳腺癌发病率正在逐年增长。
细胞培养基是生物与健康相关研究领域的一项重要技术，随着生命科学的迅速发展，目前细胞培养已成为细胞生物学、分子生物学、遗传学和免疫学等科学研究的重要基础。为了深入探讨细胞的生长活动规律，有关疾病的病理和药物的药理(毒理)机制，开发具有不同针对性的细胞培养方法具有重要意义。
其中，MCF-7乳腺癌细胞作为人源性低转移乳腺癌细胞，常用于乳腺癌原位生长、血管生成等乳腺癌的体内外研究。此外，MCF-7乳腺癌细胞还会同其他乳腺癌高转移性细胞进行对比研究。然而，随着研究过程中越来越多的运用组织细胞培养增殖技术，将MCF-7乳腺癌细胞采用低温度进行长期保存数月、数年甚至数十年，一旦需要，可随时对保存的细胞进行复苏，恢复其完整的形态结构与生物学特性，供生命科学研究实验。
发明内容
针对现有技术中的上述不足，本发明提供了一种用于MCF-7乳腺癌细胞的冻存液，可有效减少对细胞的损伤，提高冻存细胞的存活率。
为实现上述目的，本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：
一种用于MCF-7乳腺癌细胞的冻存液，包括以下重量份的组分：二甲基亚砜6-15份、羟甲基淀粉3-6份、海藻糖5-15份、卵磷脂2-6份、聚乙二醇1-5份、蔗糖1-4份、转铁蛋白3-8份、维生素C1-4份、低密度蛋白2-5份、胰岛素生长因子2-6份、白介素62-5份、白介素102-4份、GM-CSF1-4份、叶酸0.2-0.5份、亚麻油1-2份、氯化钠3-10份、葡萄糖酸钠2-8份、醋酸钠1-4份、氯化钾1-3份、氯化镁1-3份和DMEM基础培养基30-50份。
进一步地，一种用于MCF-7乳腺癌细胞的冻存液，包括以下重量份的组分：二甲基亚砜8-12份、羟甲基淀粉4-6份、海藻糖8-13份、卵磷脂3-5份、聚乙二醇2-4份、蔗糖1-3份、转铁蛋白4-6份、维生素C1-3份、低密度蛋白3-5份、胰岛素生长因子2-5份、白介素62-4份、白介素102-3份、GM-CSF1-3份、叶酸0.2-0.4份、亚麻油1.2-1.8份、氯化钠4-8份、葡萄糖酸钠3-5份、醋酸钠1-3份、氯化钾1-2份、氯化镁1-2份和DMEM基础培养基40-50份。
进一步地，一种用于MCF-7乳腺癌细胞的冻存液，包括以下重量份的组分：二甲基亚砜10份、羟甲基淀粉5份、海藻糖12份、卵磷脂4份、聚乙二醇3份、蔗糖2份、转铁蛋白5份、维生素C3份、低密度蛋白4份、胰岛素生长因子4份、白介素63份、白介素102份、GM-CSF2份、叶酸0.3份、亚麻油1.5份、氯化钠6份、葡萄糖酸钠4份、醋酸钠2份、氯化钾1份、氯化镁1份和DMEM基础培养基45份。
进一步地，以重量份计，上述冻存液还包括0.006-0.008份青霉素和0.02-0.03份的链霉素。
进一步地，以重量份计，上述冻存液还包括0.008份青霉素和0.025份的链霉素。
进一步地，青霉素活性为10000U/mL，链霉素浓度为10000μg/mL。
本发明提供的一种用于MCF-7乳腺癌细胞的冻存液，具有以下有益效果：
该冻存液组分合理科学，营养丰富，在保证休眠细胞的营养的同时还可以显著减少对细胞的损伤，提高冻存细胞的存活率，并且在增殖方面也保持很好的状态，可以方便应用于软腺癌的原位生长，血管生成以及与其他乳腺癌高转移性细胞进行对比研究等的相关研究。
具体实施方式
实施例1
一种用于MCF-7乳腺癌细胞的冻存液，包括以下重量份的组分：二甲基亚砜6份、羟甲基淀粉3份、海藻糖5份、卵磷脂2份、聚乙二醇1份、蔗糖1份、转铁蛋白3份、维生素C1份、低密度蛋白2份、胰岛素生长因子2份、白介素62份、白介素102份、GM-CSF1份、叶酸0.2份、亚麻油1份、氯化钠3份、葡萄糖酸钠2份、醋酸钠1份、氯化钾1份、氯化镁1份和DMEM基础培养基30份。
实施例2
一种用于MCF-7乳腺癌细胞的冻存液，包括以下重量份的组分：二甲基亚砜15份、羟甲基淀粉6份、海藻糖15份、卵磷脂6份、聚乙二醇5份、蔗糖4份、转铁蛋白8份、维生素C4份、低密度蛋白5份、胰岛素生长因子6份、白介素65份、白介素104份、GM-CSF4份、叶酸0.5份、亚麻油2份、氯化钠10份、葡萄糖酸钠8份、醋酸钠4份、氯化钾3份、氯化镁3份和DMEM基础培养基50份。
实施例3
一种用于MCF-7乳腺癌细胞的冻存液，包括以下重量份的组分：二甲基亚砜8份、羟甲基淀粉4份、海藻糖8份、卵磷脂3份、聚乙二醇2份、蔗糖1份、转铁蛋白4份、维生素C1份、低密度蛋白3份、胰岛素生长因子2份、白介素62份、白介素102份、GM-CSF1份、叶酸0.2份、亚麻油1.2份、氯化钠4份、葡萄糖酸钠3份、醋酸钠1份、氯化钾1份、氯化镁1份和DMEM基础培养基40份。
实施例4
一种用于MCF-7乳腺癌细胞的冻存液，包括以下重量份的组分：二甲基亚砜12份、羟甲基淀粉6份、海藻糖13份、卵磷脂5份、聚乙二醇4份、蔗糖3份、转铁蛋白6份、维生素C3份、低密度蛋白5份、胰岛素生长因子5份、白介素64份、白介素103份、GM-CSF3份、叶酸0.4份、亚麻油1.8份、氯化钠8份、葡萄糖酸钠5份、醋酸钠3份、氯化钾2份、氯化镁2份和DMEM基础培养基50份。
实施例5
一种用于MCF-7乳腺癌细胞的冻存液，包括以下重量份的组分：二甲基亚砜10份、羟甲基淀粉5份、海藻糖12份、卵磷脂4份、聚乙二醇3份、蔗糖2份、转铁蛋白5份、维生素C3份、低密度蛋白4份、胰岛素生长因子4份、白介素63份、白介素102份、GM-CSF2份、叶酸0.3份、亚麻油1.5份、氯化钠6份、葡萄糖酸钠4份、醋酸钠2份、氯化钾1份、氯化镁1份和DMEM基础培养基45份。
实施例6
一种用于MCF-7乳腺癌细胞的冻存液，包括以下重量份的组分：二甲基亚砜10份、羟甲基淀粉5份、海藻糖12份、卵磷脂4份、聚乙二醇3份、蔗糖2份、转铁蛋白5份、维生素C3份、低密度蛋白4份、胰岛素生长因子4份、白介素63份、白介素102份、GM-CSF2份、叶酸0.3份、亚麻油1.5份、氯化钠6份、葡萄糖酸钠4份、醋酸钠2份、氯化钾1份、氯化镁1份、DMEM基础培养基45份、0.006份青霉素和0.02份的链霉素；青霉素活性为10000U/mL，链霉素浓度为10000μg/mL。
实施例7
一种用于MCF-7乳腺癌细胞的冻存液，包括以下重量份的组分：二甲基亚砜10份、羟甲基淀粉5份、海藻糖12份、卵磷脂4份、聚乙二醇3份、蔗糖2份、转铁蛋白5份、维生素C3份、低密度蛋白4份、胰岛素生长因子4份、白介素63份、白介素102份、GM-CSF2份、叶酸0.3份、亚麻油1.5份、氯化钠6份、葡萄糖酸钠4份、醋酸钠2份、氯化钾1份、氯化镁1份、DMEM基础培养基45份、0.008份青霉素和0.03份的链霉素；青霉素活性为10000U/mL，链霉素浓度为10000μg/mL。
实施例8
一种用于MCF-7乳腺癌细胞的冻存液，包括以下重量份的组分：二甲基亚砜10份、羟甲基淀粉5份、海藻糖12份、卵磷脂4份、聚乙二醇3份、蔗糖2份、转铁蛋白5份、维生素C3份、低密度蛋白4份、胰岛素生长因子4份、白介素63份、白介素102份、GM-CSF2份、叶酸0.3份、亚麻油1.5份、氯化钠6份、葡萄糖酸钠4份、醋酸钠2份、氯化钾1份、氯化镁1份、DMEM基础培养基45份、0.008份青霉素和0.025份的链霉素；青霉素活性为10000U/mL，链霉素浓度为10000μg/mL。
对比例1
该对比例与实施例8相比，不同之处在于，缺少卵磷脂、转铁蛋白、低密度蛋白，其余与实施例8相同。
对比例2
该对比例与实施例8相比，不同之处在于，缺少胰岛素生长因子、白介素6、白介素10、GM-CSF，其余与实施例8相同。
对比例3
该对比例与实施例8相比，不同之处在于，缺少氯化钠、葡萄糖酸钠、醋酸钠、氯化钾、氯化镁，其余与实施例8相同。
采用实施例1-8及对比例1-3所述的冻存液分别冻存MCF-7乳腺癌细胞，分别取冻存后3个月、6个月、9个月、12个月、18个月以及24个月的冻存细胞进行复苏，并对复苏后的细胞进行观察，且计算其存活率。
根据观察可得，采用实施例1-8冻存液冻存的细胞复苏后，其细胞形态保持良好，不会对细胞造成损伤，而对比例1和对比例3对细胞的损伤比较大，而细胞存活率，实施例1-8的存活率均在90％以上，尤其是实施例8，存活率均在95％以上，但对比例1和2存活率均低于90％，虽然对比例3在冻存时间短的情况下可达到90％，但其细胞形态不佳，在冻存18个月和24个月时，存活率低于90％。由此可说明，本发明提供的冻存液组分合理科学，营养丰富，在保证休眠细胞的营养的同时还可以显著减少对细胞的损伤，提高冻存细胞的存活率，并且在增殖方面也保持很好的状态。
Claims (6)
1.一种用于MCF-7乳腺癌细胞的冻存液，其特征在于，包括以下重量份的组分：二甲基亚砜6-15份、羟甲基淀粉3-6份、海藻糖5-15份、卵磷脂2-6份、聚乙二醇1-5份、蔗糖1-4份、转铁蛋白3-8份、维生素C 1-4份、卵磷脂3-8份、低密度蛋白2-5份、胰岛素生长因子2-6份、白介素62-5份、白介素10 2-4份、GM-CSF1-4份、叶酸0.2-0.5份、亚麻油1-2份、氯化钠3-10份、葡萄糖酸钠2-8份、醋酸钠1-4份、氯化钾1-3份、氯化镁1-3份和DMEM基础培养基30-50份。
2.根据权利要求1所述的用于MCF-7乳腺癌细胞的冻存液，其特征在于，包括以下重量份的组分：二甲基亚砜8-12份、羟甲基淀粉4-6份、海藻糖8-13份、卵磷脂3-5份、聚乙二醇2-4份、蔗糖1-3份、转铁蛋白4-6份、维生素C 1-3份、卵磷脂4-6份、低密度蛋白3-5份、胰岛素生长因子2-5份、白介素6 2-4份、白介素10 2-3份、GM-CSF 1-3份、叶酸0.2-0.4份、亚麻油1.2-1.8份、氯化钠4-8份、葡萄糖酸钠3-5份、醋酸钠1-3份、氯化钾1-2份、氯化镁1-2份和DMEM基础培养基40-50份。
3.根据权利要求2所述的用于MCF-7乳腺癌细胞的冻存液，其特征在于，包括以下重量份的组分：二甲基亚砜10份、羟甲基淀粉5份、海藻糖12份、卵磷脂4份、聚乙二醇3份、蔗糖2份、转铁蛋白5份、维生素C 3份、卵磷脂5份、低密度蛋白4份、胰岛素生长因子4份、白介素63份、白介素102份、GM-CSF 2份、叶酸0.3份、亚麻油1.5份、氯化钠6份、葡萄糖酸钠4份、醋酸钠2份、氯化钾1份、氯化镁1份和DMEM基础培养基45份。
4.根据权利要求1-3任一项所述的用于MCF-7乳腺癌细胞的冻存液，其特征在于，以重量份计，所述冻存液还包括0.006-0.008份青霉素和0.02-0.03份的链霉素。
5.根据权利要求4任一项所述的用于MCF-7乳腺癌细胞的冻存液，其特征在于，以重量份计，所述冻存液还包括0.008份青霉素和0.025份的链霉素。
6.根据权利要求4任一项所述的用于MCF-7乳腺癌细胞的冻存液，其特征在于，青霉素活性为10000U/mL，链霉素浓度为10000μg/mL。
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