CN104839146A

CN104839146A - 组合物及其用途、胎盘保存制剂及其制备方法

Info

Publication number: CN104839146A
Application number: CN201510289535.XA
Authority: CN
Inventors: 王一飞; 陈海佳; 葛啸虎; 卢瑞珊; 王小燕; 李平; 马岩岩
Original assignee: Guangzhou Saliai StemCell Science and Technology Co Ltd
Current assignee: Guangzhou Saliai StemCell Science and Technology Co Ltd
Priority date: 2015-05-29
Filing date: 2015-05-29
Publication date: 2015-08-19
Anticipated expiration: 2035-05-29
Also published as: CN104839146B

Abstract

本发明涉及医学领域，特别涉及组合物及其用途、胎盘保存制剂及其制备方法。本发明首次采用了脐血浆作为胎盘间充质干细胞保存液的营养成分，不仅为种子细胞提供多元的营养物质，维持细胞活力，还能很好的胎盘间充质干细胞原有细胞形态及生物特性。添加了N-乙酰半胱氨酸、维生素C等还原剂和抗氧化剂，大大的提高了胎盘间充质干细胞的抵抗能力。在24h内仍能很好的维持胎盘间充质干细胞的活力。

Description

组合物及其用途、胎盘保存制剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及医学领域，特别涉及组合物及其用途、胎盘保存制剂及其制备方法。

背景技术

间充质干细胞是干细胞的一个研究分支，干细胞是一类具有自我复制和多向分化能力的细胞，它们可以不断地自我更新，并在特定条件下转变成为一种或多种构成人体组织或器官的细胞。随着间充质干细胞及其相关技术的日益成熟，临床研究已经在许多国家开展。其作为种子细胞,临床上主要用于治疗机体无法自然修复的组织细胞和器官损伤的多种难治性疾病；作为免疫调节细胞，治疗免疫排斥和自身免疫性疾病。研究发现，间充质干细胞主要来源于骨髓、脐带血和脐带组织、胎盘组织、脂肪组织等。相较于其他干细胞，胎盘是目前证实干细胞的最佳来源。

但是，胎盘在离体情况下活力在短时间内迅速下降，这直接影响了分离后的细胞质量。种子细胞的活力如何维持离体胎盘间充质干细胞的活性成为了首要解决的问题。在此之前，人们在DMEM/F12等基础培养基的基础上添加青霉素、链霉素、人血白蛋白等物质用于保存离体胎盘。但是由于营养成分单一、抗生素种类过多且浓度大等原因，导致种子细胞在长期保存或运输中出现活力低下、甚至死亡等现象。

随后，人们进一步改善保存液的组成体系，以无机离子构成的缓冲液的基础上添加数种氨基酸和抗生素以维持离体胎盘细胞活性、降低染菌率。这些措施虽然在较长时间内很好的维持了种子细胞的活性。但保存液的成分复杂，配制过程繁琐，不能便捷的应用。为了进一步的适应临床应用需要，开发一种营养成分多元且方便配制的胎盘保存液成为了当务之急。

现有保存液中添加多种抗生素，虽然能降低染菌几率，但对胎盘干细胞存在一定的毒性。且往往添加一定量的氨基酸、人血白蛋白为离体胎盘提供营养，但是营养成分单一且成本较高。同时，现有保存液在配制时需要经过称量成分，灭菌等步骤，操作繁琐。

发明内容

有鉴于此，本发明提供一种组合物及其用途、胎盘保存制剂及其制备方法。本发明提供的胎盘保存液显著(P＜0.05)提高了胎盘间充质干细胞的抵抗能力。在24h内仍能很好的维持胎盘间充质干细胞的活力。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种组合物，包括缓冲液、抗血凝剂、血浆、双抗、氨基酸和维生素。

在本发明的一些具体实施方案中，组合物包括PBS、枸橼酸钠、血浆、双抗、N-乙酰半胱氨酸和维生素C。

在本发明的一些具体实施方案中，所述PBS中含有1x～2x枸橼酸钠缓冲液、5％～10％(v/v)的脐血浆、1x～2x双抗、终浓度为0.01～0.1mg/mL的罂粟碱、终浓度为1～5mmol/L的N-乙酰半胱氨酸溶液、终浓度为0.5～5mg/mL的维生素C溶液。

在本发明的一些具体实施方案中，组合物中所述枸橼酸钠缓冲液的制备方法为：取枸橼酸钠26.3质量份、枸橼酸粉末3.27质量份、葡萄糖12.7质量份、磷酸二氢钠4.44质量份、腺嘌呤0.55质量份，溶于400质量份的水中，混合，获得5倍枸橼酸盐缓冲溶液。

枸橼酸盐主要用于止血学检验及血沉的测定。因其毒性小，也用于输血保养液中。其抗凝机制是枸橼酸钠根离子与血中钙离子生成难解离的可溶性络合物枸橼酸钙，此络合物易溶于水但不易解离，凝血过程受到抑制，从而阻止血液凝固，用于体外抗凝血。其反应式为Na₃C₆H₅O₇+Ca₂ ⁺→CaC₆H₅+3Na⁺。其盐类主要是钠盐。枸缘酸钠有Na₃C₆H₅O₇·2H2O和Na₃C₆H₅O₇·5.5H₂O种晶体，通常用前者配制0.129mol/L(3.8％)或0.109mol/L(3.2％)的血溶液，与血液按1:9使用。对于用于监测口服华法令等抗凝剂治疗的患者，测定PT、APTT所用的枸缘酸钠浓度(3.2％或3.8％)不应随意改变，因为可能影响到国际标准化比值(INR)。一般用浓度0.129mol/L的枸缘酸钠比用0.109mol/L浓度时INP值要高些，另外对不同来源的凝血活酶试剂，对同一正常人或患者血浆的凝固时间可以相差很大。因此每个实验室所使用的凝血活酶试剂的来源应尽可能恒定，配制操作方法应规范化，否则会使凝固时间延长或缩短，或使正常值无规律性。有条件的实验室可采用缓冲抗凝剂，这种试剂对标本经冷冻保存后再进行分析更为适宜。缓冲剂的作用是维持血浆恒定pH值，防止易变因子失活。

在本发明的一些具体实施方案中，组合物中所述脐血浆的制备方法为：取脐血，于2500rpm离心15min，吸取上层淡黄色血浆，4℃保存备用。

在本发明的一些具体实施方案中，组合物中所述N-乙酰半胱氨酸溶液的制备方法为：取N-乙酰半胱氨酸，溶于水中，形成5mmol/L的维生素C溶液。

PBS是磷酸缓冲盐溶液(phosphate buffer saline)一般作为溶剂，起溶解保护试剂的作用。它是生物化学研究中使用最为广泛的一种缓冲液，主要成分为Na2HPO4、KH2PO4、NaCl和KCl，由于Na2HPO4和KH2PO4它们有二级解离，缓冲的pH值范围很广；而NaCl和KCl主要作用为增加盐离子浓度。如有需要PBS还可以补加1mmol/L CaCl2和0.5mmol/L MgCl2，以提供双价阳离子。

PBS缓冲液(pH7.2～7.4)：NaCl 137mmol/L，KCl 2.7mmol/L，Na2HPO410mmol/L，KH2PO42mmol/L

PBS 1L配方:

氯化钠(NaCl)，8g

氯化钾(KCl)，0.2g

磷酸氢二钠(Na2HPO4)，1.42～1.44g

磷酸二氢钾(KH2PO4)，0.24～0.27g

调pH 7.2～7.4,定容1L

然后高压蒸汽灭菌，室温保存。

在本发明的一些具体实施方案中，组合物中所述维生素C溶液的制备方法为：取维生素C，溶于水中，获得0.5mg/mL的维生素C溶液。

本发明还提供了所述组合物在制备胎盘保存制剂中的应用。

本发明还提供了一种胎盘保存制剂，包括所述组合物。

在本发明的一些具体实施方案中，胎盘保存制剂为保存液。

本发明还提供了一种所述的胎盘保存制剂的制备方法，取所述抗血凝剂、所述血浆、所述双抗、所述氨基酸和所述维生素溶于所述缓冲液。

在本发明的一些具体实施方案中，所述的胎盘保存制剂的制备方法为取枸橼酸钠、血浆、双抗、N-乙酰半胱氨酸和维生素C溶于PBS中。

在本发明的一些具体实施方案中，所述的胎盘保存制剂的制备方法为：PBS中含有1x～2x枸橼酸钠缓冲液、5％～10％(v/v)的脐血浆、1x～2x双抗、终浓度为0.01～0.1mg/mL的罂粟碱、终浓度为1～5mmol/L的N-乙酰半胱氨酸溶液、终浓度为0.5～5mg/mL的维生素C溶液。

本发明还提供了一种胎盘的保存方法，采用所述的胎盘保存制剂保存所述胎盘。

在本发明的一些具体实施方案中，胎盘的保存方法具体为取胎盘与所述胎盘保存制剂混合，4℃保存。

本发明通过研究发现：该保存液用于维持胎盘间充质干细胞活率的关键是提供合适的保存环境及营养供给，保证离体胎盘在保存液中长时间的维持活率。因此保存液中的成分和运输过程中各条件成为提高种子细胞活率至关重要的因素。本发明改进了保存液的离子缓冲体系和营养体系，同时优化制剂中的成分组成和改良运输条件，尽可能的维持细胞存活率，维持其生物特性。

1.本发明所制备的保存液能很好的维持胎盘间充质细胞活力，不引起细胞的功能性的变异。

2.用于离体胎盘的长时间保存。

3.保存液制备步骤简便，能在短时间内配制大量。

4.保存液成本低廉，成分稳定、安全、无任何毒副作用。

本发明首次采用了脐血浆作为胎盘间充质干细胞保存液的营养成分，不仅为种子细胞提供多元的营养物质，维持细胞活力，还能很好的胎盘间充质干细胞原有细胞形态及生物特性。保存液制备方法简单。添加了N-乙酰半胱氨酸、维生素C等还原剂和抗氧化剂，大大的提高了胎盘间充质干细胞的抵抗能力。在24h内仍能很好的维持胎盘间充质干细胞的活力。

与现有技术相比，本发明选用了脐血浆作为胎盘的基础营养成分，添加N-乙酰半胱氨酸和维生素C等两种种成分，从而形成了成分稳定，营养物质多元的的保存液。脐血浆作为天然的成分，其全面的营养成分是其他添加物质不能比拟的。

1.胎盘保存液中选用PBS作为基础的缓冲溶液，可从试剂公司购置，这样保证了保存液缓冲体系的稳定性，避免了人为配置所引起的质量差异。另外，保存液中的维生素C和N-乙酰半胱氨酸，能直接提高胎盘干细胞的抵抗能力，维持了细胞的活性。

2.低温保存胎盘，一方面可避免营养成分变性，另一方面则很好的保持了种子细胞的生物活性。

3.保存液能在96h内维持胎盘间充质干细胞原有的生物学特性。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。

图1示胎盘保存后，分离的间充质干细胞的体积；其中，图1(A)示胎盘保存24h后，分离的间充质干细胞的体积；图1(B)示胎盘保存48h后，分离的间充质干细胞的体积；图1(C)示胎盘保存96h后，分离的间充质干细胞的体积；

图2示胎盘保存后，分离的间充质干细胞接种48h贴壁情况；其中图2(A)示胎盘保存24h后，分离的间充质干细胞接种48h贴壁情况；图2(B)示胎盘保存48h后，分离的间充质干细胞接种48h的贴壁情况；图2(C)示胎盘保存96h后，分离的间充质干细胞接种48h的贴壁情况；

图3示空白对照组(不加抗体)的保存液胎盘保存24h后，分离的间充质干细胞的流式检测结果；

图4示本发明实施例1提供的保存液(样品组)胎盘保存24h后，分离的间充质干细胞的流式检测结果；

图5示空白对照组(不加抗体)的保存液胎盘保存24h后，分离的间充质干细胞的流式检测结果；

图6示本发明实施例1提供的保存液(样品组)胎盘保存24h后，分离的间充质干细胞的流式检测结果；

图7示空白对照组(不加抗体)的保存液胎盘保存24h后，分离的间充质干细胞的流式检测结果；

图8示本发明实施例1提供的保存液(样品组)胎盘保存24h后，分离的间充质干细胞的流式检测结果。

具体实施方式

本发明公开了一种组合物及其用途、胎盘保存制剂及其制备方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。

本发明提供的组合物及其用途、胎盘保存制剂及其制备方法中所用原料及试剂均可由市场购得。其中，1x青-链霉素(双抗)购自Gibco公司，每毫升包含10000单位青霉素(碱)和10000μg链霉素(碱)，利用0.85％盐液形式的青霉素G(钠盐)和硫酸链霉素。

下面结合实施例，进一步阐述本发明：

实施例1保存液的制备：

枸橼酸钠缓冲溶液配制：称取枸橼酸钠粉末26.3g、枸橼酸粉末3.27g、葡萄糖12.7g、磷酸二氢钠4.44g、腺嘌呤0.55g，把上述各组分溶于400mL的去离子水中，充分搅拌混匀后形成5倍枸橼酸盐缓冲溶液，0.22μm过滤，分装。

维生素C溶液配制：称取维生素C粉末，溶解于Ⅰ级水中，形成0.5mg/mL的维生素C溶液，0.22μm过滤，分装。

N-乙酰半胱氨酸：称取N-乙酰半胱氨酸粉末，溶解于Ⅰ级水中，形成5mmol/L的维生素C溶液，0.22μm过滤，分装。

脐血浆：把脐血转移至50mL离心管中，封口后2500rpm离心15min，吸取上层淡黄色血浆至新的离心管中，4℃保存备用。

制备保存液：100mLPBS中含有1x枸橼酸钠、8％脐血浆、2x青-链霉素(双抗)、0.1mg/mL的罂粟碱、5mmol/L N-乙酰半胱氨酸、0.5mg/mL维生素C。

实施例2保存液的制备：

制备保存液：PBS中含有2x枸橼酸钠、5％脐血浆、1x青-链霉素(双抗)、0.05mg/mL的罂粟碱、1mmol/L N-乙酰半胱氨酸、5mg/mL维生素C。

实施例3保存液的制备：

制备保存液：PBS中含有1×枸橼酸钠、10％脐血浆、2×青-链霉素(双抗)、0.01mg/mL的罂粟碱、3mmol/L N-乙酰半胱氨酸、3mg/mL维生素C。

实施例4胎盘保存

胎盘运输：把实施例1配制好的胎盘保存液在中保存，与胎盘采集盒一并运送至医院中。由医护人员把新鲜采集的胎盘放置在胎盘采集盒中，并把4℃胎盘保存液转移至胎盘中(胎盘保存液应浸没胎盘)；封好采集盒盖子后置于4℃中保存。

实施例5胎盘运输：

实施例4保存后的离体胎盘分别在24h、48h、96h小时内进入实验程序(运输过程应保持4℃)。

实施例6对实施例5获得的保存、运输后的胎盘提取间充质干细胞的质量评价

①细胞质量评价(活力与体积、贴壁率、形态、增殖速度、表面抗原)

a.活力与体积检测：

常规方法获得胎盘间充质干细胞。(胎盘干细胞的原代分离方法可以按照《不同消化分离方法分离人羊膜间充质干细胞效果比较》中最优的酶解方案进行原代分离)

取刚分离出来的胎盘干细胞，调整细胞密度为1×10⁶cell/mL。按细胞悬液：0.4％台盼蓝＝3:1(v:v)充分混匀，取20uL细胞混匀液加入细胞计数板中，用Countstar细胞计数器进行细胞活率及体积检测。

b.贴壁率：

胎盘间充质干细胞在分离培养(用Lonza完全培养基进行培养。Lonza完全培养的组分为：无血清培养基(Lonza UltraCULTURETM)+血清替代物(PALL Ultroser G)+1×谷氨酰胺+1×NEAA)后，调整密度为5×10⁵cell/mL，接种8mL至直径为9cm的平皿中，待其自然贴壁生长48小时后，去除未贴壁的细胞后，用0.25％胰蛋白酶进行酶解，计算出贴壁细胞的数量，从得出贴壁率。

c.形态检测：取处于对数生长期的胎盘干细胞，置倒置显微镜下观察细胞的形态。

d.增殖速度

细胞接种后48h后，进行换液处理；每隔48h取一皿细胞进行酶解，直至该批批细胞融合度达100％，统计细胞数量，得出细胞增殖速度。

e.流式结果检测

取处于对数生长期的胎盘干细胞，调整细胞密度为1×10⁶的细胞悬液，分别取抗人CD105、、CD90、CD73、CD45、CD34、HLA-DR的单克隆抗体各2.5μL,加入细胞悬液500μL，室温下避光孵育20min，同时设立空白同型对照，1500r/min离心5min，弃上清，用含10％FBS的PBS洗涤2遍，用500μL 1640重悬后上机检测。

细胞的质量检测：

①胎盘保存24h、48h、96h后，分离细胞的活力和体积，见图1(A)、图1(B)、图1(C)和表1：

表1 分离细胞的活力

胎盘保存时间	24h	48h	96h
				胎盘间充质干细胞	98.65％	95.24％	92.81％

采用本发明的胎盘保存液进行不同时间的胎盘保存后，从数据可知，胎盘保存24h后，细胞活力为98.65％；保存48h后细胞活力为95.24％、保存96h后，细胞活力为92.81％。细胞活力随着保存时间的延长出现了小幅度下降，但细胞活力总体仍在90％。这些数据说明了本发明的胎盘保存液具有良好的保存效果。

②细胞贴壁率，见图2(A)、图2(B)、图2(C)和表2。

表2 细胞贴壁率

从表2可知，胎盘间充质干细胞的贴壁率随着胎盘保存时间的增长而减低。胎盘保存24h时，细胞贴壁率为85.24％；保存48h时，细胞贴壁率为82.19％；保存96时，细胞贴壁率为80.77％。从24h到96h，细胞贴壁率下降了4.47％。

③间充质干细胞细胞的流式检测：

样品组：本发明实施例1提供的胎盘保存液；

a.胎盘保存24h后，分离的间充质干细胞的流式检测：空白对照组(不加抗体)见图3(A)～图3(G)；样品组见图4(A)～图4(G)。

数据分析：胎盘干细胞是一种典型的间充质干细胞，其能表一般间充质干细胞所表达的表面抗原CD73、CD90、CD105，低表达HLA-DR、CD45、CD34。

在图3(A)～图3(G)中设定空白对照组(不加抗体)中各抗体的门，经检测得出样品组图4(A)～图4(G)的检测结果。胎盘干细胞在保存液中保存24h后，仍高表达CD73、CD90、CD105三种表面抗原，表达率分别为99.2％、99.1％和99.1％；而CD34、HLA-DR和CD45三种表面抗原的表达率只有0.2％、0.2％、0.2％，仍维持低较低的表达率。从流式检测结果可知，胎盘干细胞在保存液中保存24h后，细胞维持原有间充质干细胞的特性，并未出现分化现象。

b.胎盘保存48h后，分离的间充质干细胞的流式检测：空白对照组(不加抗体)见图5(A)～图5(G)；样品组见图6(A)～图6(G)。

数据分析：在图5(A)～图5(G)中设定空白对照组(不加抗体)中各抗体的门，经检测得出样品组图6(A)～图6(G)的检测结果。胎盘干细胞在保存液中保存48h后，仍高表达CD73、CD90、CD105三种表面抗原，表达率分别为99.3％、99.1％和99.5％；而CD34、HLA-DR和CD45三种表面抗原的表达率只有0.3％、0.4％、0.2％，仍维持低较低的表达率。从流式检测结果可知，胎盘干细胞在保存液中保存48h后，细胞维持原有间充质干细胞的特性，并未出现分化现象。

c.胎盘保存96h后，分离的间充质干细胞的流式检测：空白对照组(不加抗体)见图7(A)～图7(G)；样品组见图8(A)～图8(G)。

数据分析：在图7(A)～图7(G)中设定空白对照组(不加抗体)中各抗体的门，经检测得出样品组图8(A)～图8(G)的检测结果胎盘干细胞在保存液中保存96h后，仍高表达CD73、CD90、CD105三种表面抗原，表达率分别为99.3％、99.8％和99.8％；而CD34、HLA-DR和CD45三种表面抗原的表达率只有0.0％、0.2％、0.2％，仍维持低较低的表达率。从流式检测结果可知，胎盘干细胞在保存液中保存48h后，细胞维持原有间充质干细胞的特性，并未出现分化现象。

取实施例2、实施例3制备获得的胎盘保存液进行上述检测试验，试验结果与实施例1制备获得的胎盘保存液的结果相同或相近，无显著差异(P＞0.05)。

综合上述结果表明，本发明提供的胎盘保存液能够有效保存胎盘，大大的提高了胎盘间充质干细胞的抵抗能力。在24h内仍能很好的维持胎盘间充质干细胞的活力。

实施例6

保存液A，PBS中含有1x枸橼酸钠、1x青-链霉素(双抗)。

保存液B，PBS中含有1x枸橼酸钠、1x青-链霉素(双抗)、5％脐血浆。

保存液C，PBS中含有1x枸橼酸钠、1x青-链霉素(双抗)、10％脐血浆。

保存液D，PBS中含有1x枸橼酸钠、1x青-链霉素(双抗)、5％脐血浆、1mmol/L N-乙酰半胱氨酸、0.5mg/mL维生素C。

保存液E，PBS中含有1x枸橼酸钠、1x青-链霉素(双抗)、10％脐血浆、1mmol/L N-乙酰半胱氨酸、0.5mg/mL维生素C。

表3 不同保存液胎盘保存时间的细胞活力

胎盘保存时间	24h	48h	96h
				保存液A	88.34％	83.69％	78.33％
保存液B	90.91％	88.54％	81.86％
				保存液C	95.86％	92.63％	88.97％
保存液D	97.78％	94.85％	89.53％
				保存液E	98.65％	95.24％	92.81％

从表3中可知，保存液A的细胞活力随着保存时间的延长，细胞活力从88.34％下降至78.33％；保存液B的细胞活力则从90.91％下降至81.76％。从两组数据可知，脐血浆可起到一定的细胞活力维持作用。

保存液B和保存液C两组分差异在于脐血浆含量不一致，从数据可知，保存液C在每个时间检测点的活力均高于保存液B，说明了脐血浆含量越高，细胞活力下降的越慢。

从保存液B、D和保存液C、E的数据可知；保存液D各时间检测点的细胞活率高于保存液B，保存液E各时间检测点也高于保存液C。两组数据呈现一致性，说明了添加的N-乙酰半胱氨酸、维生素C提高细胞的抵抗能力，维持高活性。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims

1.一种组合物，其特征在于，包括缓冲液、抗血凝剂、血浆、双抗、氨基酸和维生素。

2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，包括PBS、枸橼酸钠、血浆、双抗、N-乙酰半胱氨酸和维生素C。

3.根据权利要求1或2所述的组合物，其特征在于，所述PBS中含有1x～2x枸橼酸钠缓冲液、5％～10％(v/v)的脐血浆、1x～2x双抗、终浓度为0.01～0.1mg/mL的罂粟碱、终浓度为1～5mmol/L的N-乙酰半胱氨酸溶液、终浓度为0.5～5mg/mL的维生素C溶液。

4.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，所述枸橼酸钠缓冲液的制备方法为：取枸橼酸钠26.3质量份、枸橼酸粉末3.27质量份、葡萄糖12.7质量份、磷酸二氢钠4.44质量份、腺嘌呤0.55质量份，溶于400质量份的水中，混合，获得5倍枸橼酸盐缓冲溶液。

5.根据权利要求3或4所述的组合物，其特征在于，所述脐血浆的制备方法为：取脐血，于2500rpm离心15min，吸取上层淡黄色血浆，4℃保存备用。

6.根据权利要求3至5任一项所述的组合物，其特征在于，所述N-乙酰半胱氨酸溶液的制备方法为：取N-乙酰半胱氨酸，溶于水中，形成5mmol/L的维生素C溶液。

7.根据权利要求1至6任一项所述的组合物在制备胎盘保存制剂中的应用。

8.一种胎盘保存制剂，其特征在于，包括如权利要求1至6任一项所述的组合物。

9.一种如权利要求8所述的胎盘保存制剂的制备方法，其特征在于，取所述抗血凝剂、所述血浆、所述双抗、所述氨基酸和所述维生素溶于所述缓冲液。

10.一种胎盘的保存方法，其特征在于，采用如权利要求8所述的胎盘保存制剂保存所述胎盘。