CN108684653A - 一种胎盘保存液及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种用于组织保存的组合物，更具体地说，是涉及一种胎盘保存液及其制备方法。其组成及配比为，1000ml水溶液中，磷酸二氢钾204mg～340mg，磷酸氢二钠1.40g～1.50g,氯化钠7.6g～8.2g，氯化钾149mg～261mg，青霉素100000U～1000000U，链霉素60mg～100mg，葡萄糖12.5g，右旋糖酐‑40 5g，柠檬酸三钠7.35g，维生素C352mg～528mg，溶液pH值为7.33～7.83。本发明胎盘保存液成分简单、稳定、安全、无任何毒副作用，成本低廉。本发明胎盘保存液的制备步骤简便，能在短时间内大量配制。

Description

一种胎盘保存液及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种用于组织保存的组合物，更具体地说，是涉及一种胎盘保存液及其制备方法。
背景技术：
人类胎盘由羊膜、绒毛膜和基蜕膜构成。羊膜和绒毛膜来源于胎儿，不同区域的蜕膜则起源于母体。胎盘除在胎儿发育、营养支持和维持耐受中发挥重要作用外，同样也是一个干细胞储备库。胎盘组织容易得到，易于处理，不需要侵入性操作，对其研究不会涉及伦理道德问题，因此目前已成为寻找人类干细胞新来源的研究热点。
因为胎盘在离体情况下,活力在短时间内迅速下降，这直接影响了胎盘的质量。如何维持离体胎盘的活性成为了首要解决的问题。在此之前，人们在DMEM/F12等基础培养基的基础上添加青霉素、链霉素、人血白蛋白等物质用于保存离体胎盘。但是由于营养成分单一、抗生素种类过多且浓度大等原因，导致种子细胞在长期保存或运输中出现活力低下、甚至死亡等现象。随后，人们进一步改善保存液的组成体系，在无机离子构成的缓冲液的基础上添加数种氨基酸和抗生素以维持离体胎盘细胞活性、降低染菌率。但保存液的成分复杂，配制过程繁琐，不能便捷的应用。
发明内容：
本发明正是针对上述问题，提供了一种胎盘保存液及其制备方法。
为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案，其组成及配比为，1000ml水溶液中，磷酸二氢钾204mg～340mg，氯化钠7.6g～8.2g，氯化钾149mg～261mg，青霉素100000U～1000000U，链霉素60mg～100mg，葡萄糖12.5g，右旋糖酐-40 5g，柠檬酸三钠7.35g，维生素C352mg～528mg，溶液pH值为7.33～7.83。
制备步骤为，称取12.5g葡萄糖粉末、7.35g柠檬酸三钠、352mg～528mg维生素C，溶解于1LPBS缓冲溶液中，搅拌均匀形成混合溶液，再用0.22μm过滤筛过滤，即得最终溶液。
PBS缓冲溶液的制备方法为，将氯化钠7.6g～8.2g，氯化钾149mg～261mg，磷酸氢二钠(Na2HPO4)1.42g，磷酸二氢钾204mg～340mg溶于水中，调pH至7.2～7.4，定容1L；然后高压蒸汽灭菌，室温保存。
本发明的有益效果：
本发明以磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、氯化钠和氯化钾相组合共同作用，作为缓冲剂，有效防止细胞酸化或碱化。在现有技术的基础上进一步改进了保存液的离子缓冲体系和营养体系，同时优化制剂中的成分组成及其含量，起溶解保护试剂的作用。它是生物化学研究中使用最为广泛的一种缓冲液。葡糖糖可为胎盘提供了可直接利用的营养物质，低分子右旋糖酐-40代血浆组分，可维持溶液的渗透压，有助于提高胎盘中间充质干细胞的活率，使胎盘在长时间保存中可获取各种所需的营养。柠檬酸三钠主要用于止血学检验及血沉的测定。因其毒性小，也用于输血保养液中。其抗凝机制是柠檬酸三钠根离子与血中钙离子生成难解离的可溶性络合物枸橼酸钙，此络合物易溶于水但不易解离，凝血过程受到抑制，从而阻止血液凝固，用于体外抗凝血。缓冲剂的作用是维持血浆恒定pH值，防止易变因子失活。维生素C作为一种还原剂和抗氧化剂，大大的提高了胎盘间充质干细胞的抵抗能力。在24h内仍能很好的维持胎盘间充质干细胞的活力。
本发明胎盘保存液成分简单、稳定、安全、无任何毒副作用，成本低廉。本发明胎盘保存液的制备步骤简便，能在短时间内大量配制。
本胎盘保存液也同样适用于脐带保存和胎盘及脐带的低温冻存.在脐带保存实施过程中,需要在1L的保存液中添加别嘌呤醇0.204g/L,别嘌呤醇通过抑制黄嘌呤氧化酶的活性(后者能使次黄嘌呤转为黄嘌呤，再使黄嘌呤转变成尿酸，使尿酸生成减少，血中及尿中的尿酸含量降低到溶解度以下的水平。在低温冻存的实施过程中,需要在1L的保存液中添加5g/L的醋酸脂淀粉和1g/L的乙烯乙二醇,低取代度的淀粉醋酸酯含乙酰0.5％～2.5％，黏度高，澄明度高，凝沉性弱，储存稳定。常将其进行复合变性，交联淀粉醋酸酯对于高温、强剪切力和低pH影响具有更高黏度稳定性，低温储存和冻融稳定性也高.乙烯乙二醇是防冻液的主要成分,具有降低冰点的作用。
附图说明：
图1为实施例1制得的胎盘保存液保存的胎盘分离的原代胎盘间充质干细胞形态图(40倍)。
具体实施方式：
实施例1
首先制备PBS缓冲溶液，将氯化钠8g，氯化钾0.2g，磷酸氢二钠(Na2HPO4)1.42g，磷酸二氢钾0.272g溶于水中，调pH至7.2～7.4，定容1L,然后高压蒸汽灭菌，室温保存。
接着，称取12.5g葡萄糖粉末、7.35g柠檬酸三钠、0.5g维生素C，溶解于1L PBS缓冲溶液中，搅拌均匀形成混合溶液，再用0.22μm过滤筛过滤，即得最终溶液。
从图1为在本保存液保存2周的胎盘组织仍能较好的分离培养出间充质干细胞，通常使用的保护液配方保护时间1周左右，本保存液有明显提高。

Claims (3)

1.一种胎盘保存液，其特征在于，其组成及配比为，1000ml水溶液中，磷酸二氢钾204mg～340mg，氯化钠7.6g～8.2g，氯化钾149mg～261mg，青霉素100000U～1000000U，链霉素60mg～100mg，葡萄糖12.5g，右旋糖酐-40 5g，柠檬酸三钠7.35g，维生素C352mg～528mg，溶液pH值为7.33～7.83。
2.一种权利要求1所述的胎盘保存液的制备方法，其特征在于，制备步骤为，称取12.5g葡萄糖粉末、7.35g柠檬酸三钠、352mg～528mg维生素C，溶解于1LPBS缓冲溶液中，搅拌均匀形成混合溶液，再用0.22μm过滤筛过滤，即得最终溶液。
3.根据权利要求2所述的胎盘保存液的制备方法，其特征在于，PBS缓冲溶液的制备方法为，将氯化钠7.6g～8.2g，氯化钾149mg～261mg，磷酸氢二钠1.42g，磷酸二氢钾204mg～340mg溶于水中，调pH至7.2～7.4，定容1L；然后高压蒸汽灭菌，室温保存。
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