CN109497043A - 无血清纳米材料冻存剂及其制备方法、使用方法，冻存液 - Google Patents

无血清纳米材料冻存剂及其制备方法、使用方法，冻存液 Download PDF

Info

Publication number
CN109497043A
CN109497043A CN201811618902.6A CN201811618902A CN109497043A CN 109497043 A CN109497043 A CN 109497043A CN 201811618902 A CN201811618902 A CN 201811618902A CN 109497043 A CN109497043 A CN 109497043A
Authority
CN
China
Prior art keywords
serum
cell
agent
graphene oxide
dmso
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201811618902.6A
Other languages
English (en)
Inventor
李梓菲
栾杰
王黔
穆大力
刘春军
辛敏强
付苏
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Plastic Surgery Hospital of CAMS and PUMC
Original Assignee
Plastic Surgery Hospital of CAMS and PUMC
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Plastic Surgery Hospital of CAMS and PUMC filed Critical Plastic Surgery Hospital of CAMS and PUMC
Priority to CN201811618902.6A priority Critical patent/CN109497043A/zh
Publication of CN109497043A publication Critical patent/CN109497043A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
    • A01N1/02—Preservation of living parts
    • A01N1/0205—Chemical aspects
    • A01N1/021—Preservation or perfusion media, liquids, solids or gases used in the preservation of cells, tissue, organs or bodily fluids
    • A01N1/0221—Freeze-process protecting agents, i.e. substances protecting cells from effects of the physical process, e.g. cryoprotectants, osmolarity regulators like oncotic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
    • A01N1/02—Preservation of living parts
    • A01N1/0205—Chemical aspects
    • A01N1/021—Preservation or perfusion media, liquids, solids or gases used in the preservation of cells, tissue, organs or bodily fluids
    • A01N1/0226—Physiologically active agents, i.e. substances affecting physiological processes of cells and tissue to be preserved, e.g. anti-oxidants or nutrients

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physiology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)

Abstract

本发明提供了一种无血清纳米材料冻存剂及其制备方法、使用方法，冻存剂包括DMSO、血清替代物以及氧化石墨烯组成。本发明的冻存剂不含有任何血清成分，并同时复配了氧化石墨烯来调整溶液的性状，使其更利于细胞的保存，冻存效果也更为优异，与传统冻存剂相比，复苏后的细胞在存活率上有明显的提高，因此值得广泛推广进行应用。

Description

无血清纳米材料冻存剂及其制备方法、使用方法，冻存液
技术领域
本发明涉及细胞冻存领域，具体而言，涉及一种无血清纳米材料冻存剂及其制备方法、使用方法，冻存液。
背景技术
细胞冻存是将细胞放在低温环境，减少细胞代谢，以便长期储存的一种技术。细胞冻存是细胞保存的主要方法之一，起到了细胞保种的作用。
细胞冻存是细胞保存的主要方法之一，利用冻存技术可以使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特性保存起来，这样在需要的时候再复苏细胞用于实验。
目前现有技术中，细胞冻存液中的主要成分有10％二甲基亚砜(DMSO)、20％～90％胎牛血清(FBS)、剩余组分为不完全培养基。培养基以及FBS可为细胞提供必要的营养物质。DMSO是一种渗透性保护剂，能够降低细胞冰点，减少冰晶的形成，从而达到降低细胞损伤的保护效果。但FBS属于动物源性物质，成分比较复杂，在临床应用上存在潜在的风险，也增加了污染的几率，并且由于冻存液中含有动物血清，会导致冻存液的成分存在不稳定的因素，此外细胞冻存后的复温过程多为水浴复温，复温效能低下，复温过程中细胞损伤大。
有鉴于此，特提出本发明。
发明内容
本发明的第一目的在于提供一种无血清纳米材料冻存剂，该冻存剂不含有任何血清成分，避免了冻存液会被污染的潜在弊端的存在，成分也更加稳定，并同时复配了氧化石墨烯来调整溶液的性状，使其更利于细胞的保存，冻存效果也更为优异，本身氧化石墨烯具有吸附性强、导热性佳、抑制冰晶形成等多种作用，有利于减少细胞降温过程中的损伤，该新兴的石墨烯材料可通过改性，易于产生光热效应或携带药物，易于通过加快复温速度减少复苏过程中的细胞损伤，将其引入冻存剂中提高了冻存剂本身的应用性，与传统冻存剂相比，复苏后的细胞在存活率上有明显的提高，因此值得广泛推广进行应用。
本发明的第二目的在于提供上述冻存剂的制备方法，制备方法本身操作简便，前后步骤衔接紧密，操作条件温和，无三废产生，整个操作过程绿色环保。
本发明的第三目的在于提供上述冻存剂的使用方法，使用方法简单，易操作，对环境要求低，适于更为广泛的进行应用。
本发明的第四目的在于提供包含上述冻存剂的冻存液，该冻存液中还包含了用于混悬细胞的细胞混悬剂，这样细胞可以形成均一的分散液，更利于冻存操作的顺利进行。
为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：
本发明提供了一种无血清纳米材料冻存剂，包括DMSO、血清替代物以及氧化石墨烯组成。
目前现有技术中，细胞冻存液中的主要成分有10％二甲基亚砜(DMSO)、20％～90％胎牛血清(FBS)、剩余组分为不完全培养基。培养基以及FBS可为细胞提供必要的营养物质。DMSO是一种渗透性保护剂，能够降低细胞冰点，减少冰晶的形成，从而达到降低细胞损伤的保护效果。但FBS属于动物源性物质，成分比较复杂，在临床应用上存在潜在的风险，也增加了污染的几率，并且由于冻存液中含有动物血清，会导致冻存液的成分存在不稳定的因素，此外细胞冻存后的复温过程多为水浴复温，复温效能低下，复温过程中细胞损伤大。
本发明为了解决上述技术问题，提供了一种不含有血清的细胞冻存液，该细胞冻存液的成分比较简单，除了常规使用的二甲基亚砜(DMSO)，还含有血清替代物和氧化石墨烯，氧化石墨烯具有吸附性强、导热性佳、抑制冰晶形成等多种作用，有利于减少细胞降温过程中的损伤，该新兴的石墨烯材料可通过改性，易于产生光热效应或携带药物，易于通过加快复温速度减少复苏过程中的细胞损伤，将其引入冻存剂中提高了冻存剂本身的应用性，与传统冻存剂相比，复苏后的细胞在存活率上有明显的提高，因此值得广泛推广进行应用。
可见，通过采用本发明的冻存剂不仅可使溶液冰点降低，加之在缓慢冻结条件下，细胞内水分透出，减少了冰晶形成，从而避免细胞损伤，此外还能避免存在潜在污染的弊端问题的出现，后续复温的效能得到了提高，因此值得广泛推广进行应用。
优选地，作为进一步可实施的方案，所述DMSO与所述血清替代物的体积比为1：(9-15)之间，DMSO与血清替代物控制在比较适宜的比例范围内，才能保证冻存操作的顺利进行。
优选地，所述DMSO与所述血清替代物的体积比为1:10。
优选地，作为进一步可实施的方案，所述氧化石墨烯配制成浓度为1-5ug/ml的氧化石墨烯水溶液。
优选地，所述氧化石墨烯水溶液添加后终浓度为1-5ug/ml之间，氧化石墨烯水溶液的添加量也不宜过大，如果添加量太大可能溶液的稳定性会受到破坏，也会影响到冻存的效果。
优选地，作为进一步可实施的方案，氧化石墨烯水溶液的氧化石墨烯粒径为20-200nm之间。
优选地，作为进一步可实施的方案，所述血清替代物的型号为Gibco KNOCKOUTTM血清替代物10828-028，这种血清替代物比较常见，容易获得。
本发明实施例还提供了无血清纳米材料冻存剂的制备方法，包括如下步骤：
将DMSO添加到血清替代物中混匀，再添加氧化石墨烯水溶液混合均匀，4℃保存即可。
具体操作时可以按照如下步骤进行：无菌条件下取血清替代物置于离心管，加入DMSO混合均匀，体积比为血清替代物：DMSO＝1：(9-15)。取出5μl混合物后，加入1-5ug/ml的氧化石墨烯水溶液，混合均匀，4℃保存。
氧化石墨烯水溶液的最优添加后终浓度为1-5ug/ml，保存温度为4℃。
本发明实施例还提供了包含上述无血清纳米材料冻存剂的冻存液；所述冻存液中优选地还包括无血清培养基构成的细胞混悬剂。
本发明实施例还提供了上述无血清纳米材料冻存剂的使用方法，包括如下步骤：
将细胞与细胞混悬剂混合均匀后，逐滴加入所述细胞冻存剂，-80℃以下冻存。
上述冻存的温度可以根据实际需要进行调整。
优选地，作为进一步可实施的方案，细胞冻存剂加入之前先在冰水混合物中预冷，通过预冷的操作可以加强后续冻存细胞的效果。
优选地，细胞与细胞混悬剂混合均匀后，细胞的终浓度为(4-6)×106个/ml。
优选地，作为进一步可实施的方案，细胞混悬剂与细胞冻存剂的体积比控制在1：(3-5)之间，优选地为1：4。
优选地，作为进一步可实施的方案，冻存采用程序性降温的方式，降温速率为0.5-2℃/min之间，优选地为1℃/min。
程序性降温仪控温速率更精确，原理为通过微电脑程序调节液氮泵入速率降温；降温盒内容物为异丙醇，置于-80℃以下的冰箱后该物质降温速率约为1℃/min左右。其实可以根据实际需要进行选择，如果要求精确科学研究，可采用程序性降温，如果为一般的科学研究可采用程序性降温盒，无论是程序性降温仪还是降温盒，都是市售的商品，降温盒为实验室常用物品。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
(1)本发明的无血清纳米材料冻存剂，不含有任何血清成分，避免了冻存液会被污染的潜在弊端的存在，成分也更加稳定，并同时复配了氧化石墨烯来调整溶液的性状，使其更利于细胞的保存，冻存效果也更为优异，因此值得广泛推广进行应用；
(2)本发明上述冻存剂的制备方法，本身操作简便，前后步骤衔接紧密，操作条件温和，无三废产生，整个操作过程绿色环保；
(3)本发明上述冻存剂的使用方法操作简单，对环境要求不高，适于更为广泛的进行应用。
(4)本发明还提供了包含上述冻存剂的冻存液，该冻存液中还包含了用于混悬细胞的细胞混悬剂，这样细胞可以形成均一的分散液，更利于冻存操作的顺利进行；
(5)本发明的冻存方法可以明显提高冻存后细胞复苏率，并减少不同批次细胞冻存复苏率不稳定、以及避免由血清中的支原体，病毒，朊病毒及其他病毒颗粒引发的污染。
附图说明
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为采用本发明实施例1的冻存方法冻存后的细胞复苏率以及比较例1的冻存方法冻存后的细胞复苏率的比较。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
实施例1
1、主要成分：细胞混悬剂及细胞冻存剂。
细胞混悬剂由无血清培养基100％构成。
细胞冻存剂由体积百分比为10％的DMSO、以及90％的血清替代物构成，添加5ug/ml的氧化石墨烯水溶液(水为溶剂，粒径为200nm，浓度为1ug/ml)
血清替代物的型号(Gibco KNOCKOUTTM血清替代物10828-028)。
2、制备方法：
无菌条件下取血清替代物置于离心管，加入DMSO混合均匀，体积比为血清替代物：DMSO＝9：1。取出5μl混合物后，加入5ug/ml的氧化石墨烯水溶液，混合均匀，4℃保存。
3、使用方法：
1)细胞超净台无菌环境，1.5mlEP管内加入细胞混悬剂均匀混悬细胞，细胞终浓度为1×106个/ml，混悬液体积为200μl。细胞冻存剂冰水混合物中预冷，逐滴加入细胞冻存剂800μl，细胞混悬剂与细胞冻存剂的体积比控制在1:4。
2)开启程序性降温，降温速率为1℃/min，最后降温至-80℃以下进行冻存。
实施例2
1、主要成分：细胞混悬剂及细胞冻存剂。
细胞混悬剂由无血清培养基100％构成。
细胞冻存剂由体积百分比为5％的DMSO、以及95％的血清替代物构成，添加1ug/ml的氧化石墨烯水溶液(水为溶剂，粒径为20nm，浓度为5ug/ml)
血清替代物的型号(Gibco KNOCKOUTTM血清替代物10828-028)。
2、制备方法：
无菌条件下取血清替代物置于离心管，加入DMSO混合均匀，体积比为血清替代物：DMSO＝15：1。取出5μl混合物后，加入1ug/ml的氧化石墨烯水溶液，混合均匀，4℃保存。
3、使用方法：
1)细胞超净台无菌环境，1.5mlEP管内加入细胞混悬剂均匀混悬细胞，细胞终浓度为6×106个/ml，混悬液体积为200μl。细胞冻存剂冰水混合物中预冷，逐滴加入细胞冻存剂1000μl，细胞混悬剂与细胞冻存剂的体积比控制在1:5。
2)开启程序性降温，降温速率为2℃/min，最后降温至-85℃以下进行冻存。
实施例3
1、主要成分：细胞混悬剂及细胞冻存剂。
细胞混悬剂由无血清培养基100％构成。
细胞冻存剂由体积百分比为9％的DMSO、以及91％的血清替代物构成，添加2ug/ml的氧化石墨烯水溶液(水为溶剂，粒径为100nm，浓度为3ug/ml)
血清替代物的型号(Gibco KNOCKOUTTM血清替代物10828-028)。
2、制备方法：
无菌条件下取血清替代物置于离心管，加入DMSO混合均匀，体积比为血清替代物：DMSO＝1：10。取出5μl混合物后，加入2ug/ml的氧化石墨烯水溶液，混合均匀，4℃保存。
3、使用方法：
1)细胞超净台无菌环境，1.5mlEP管内加入细胞混悬剂均匀混悬细胞，细胞终浓度为5×106个/ml，混悬液体积为200μl。细胞冻存剂冰水混合物中预冷，逐滴加入细胞冻存剂800μl，细胞混悬剂与细胞冻存剂的体积比控制在1:4。
2)开启程序性降温，降温速率为1℃/min，最后降温至-80℃以下进行冻存。
实施例4
1、主要成分：细胞混悬剂及细胞冻存剂。
细胞混悬剂由无血清培养基100％构成。
细胞冻存剂由体积百分比为10％的DMSO、以及90％的血清替代物构成，添加3ug/ml的氧化石墨烯水溶液(水为溶剂，粒径为150nm，浓度为1.5ug/ml)
血清替代物的型号(Gibco KNOCKOUTTM血清替代物10828-028)。
2、制备方法：
无菌条件下取血清替代物置于离心管，加入DMSO混合均匀，体积比为血清替代物：DMSO＝1：9。取出5μl混合物后，加入3ug/ml的氧化石墨烯水溶液，混合均匀，4℃保存。
3、使用方法：
1)细胞超净台无菌环境，1.5mlEP管内加入细胞混悬剂均匀混悬细胞，细胞终浓度为5.5×106个/ml，混悬液体积为200μl。细胞冻存剂冰水混合物中预冷，逐滴加入细胞冻存剂800μl，细胞混悬剂与细胞冻存剂的体积比控制在1:4。
2)开启程序性降温，降温速率为1.5℃/min，最后降温至-90℃以下进行冻存。
比较例1
1、主要成分：细胞混悬剂及细胞冻存剂。
细胞混悬剂由无血清培养基100％构成。
细胞冻存剂由体积百分比为10％的DMSO、以及体积百分比为90％的胎牛血清(FBS)。
2、使用方法：
1)细胞超净台无菌环境，1.5mlEP管内加入细胞混悬剂均匀混悬细胞，细胞终浓度为5×106个/ml，混悬液体积为200μl。细胞冻存剂冰水混合物中预冷，逐滴加入细胞冻存剂800μl，细胞混悬剂与细胞冻存剂的体积比控制在1:4。
2)开启程序性降温，降温速率为1℃/min，最后降温至-80℃以下进行冻存。
将比较例1冻存后细胞的复苏率与实施例1冻存后细胞的复苏率进行对比，具体结果如附图1所示，可见采用本发明的冻存方法能够显著提高细胞的复苏率。
本发明的冻存方法不仅可以明显提高冻存后细胞复苏率，同时还可减少不同批次细胞冻存复苏率不稳定、以及避免由血清中的支原体，病毒，朊病毒及其他病毒颗粒引发的污染。
尽管已用具体实施例来说明和描述了本发明，然而应意识到，在不背离本发明的精神和范围的情况下可以作出许多其它的更改和修改。因此，这意味着在所附权利要求中包括属于本发明范围内的所有这些变化和修改。

Claims (10)

1.一种无血清纳米材料冻存剂，其特征在于，包括DMSO、血清替代物以及氧化石墨烯组成。
2.根据权利要求1所述的无血清细胞冻存液，其特征在于，所述DMSO与所述血清替代物的体积比为1：(9-15)之间；
优选地，所述DMSO与所述血清替代物的体积比为1:10。
3.根据权利要求1所述的无血清纳米材料冻存剂，其特征在于，所述氧化石墨烯配制成浓度为1-5ug/ml的氧化石墨烯水溶液；
优选地，氧化石墨烯水溶液添加后终浓度为1-5ug/ml之间；
优选地，所述氧化石墨烯水溶液的氧化石墨烯粒径为20-200nm之间。
4.根据权利要求1所述的无血清纳米材料冻存剂，其特征在于，所述血清替代物的型号为Gibco KNOCKOUTTM血清替代物10828-028。
5.包含权利要求1-4任一项所述的无血清纳米材料冻存剂的冻存液；
优选地，所述冻存液中还包括无血清培养基构成的细胞混悬剂。
6.权利要求1-4任一项所述的无血清纳米材料冻存剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
将DMSO添加到血清替代物中混匀，再添加氧化石墨烯水溶液混合均匀，4℃保存即可。
7.权利要求1-4任一项所述的无血清纳米材料冻存剂的使用方法，其特征在于，包括如下步骤：
将细胞与细胞混悬剂混合均匀后，逐滴加入所述细胞冻存剂，-80℃以下冻存。
8.根据权利要求7所述的使用方法，其特征在于，细胞冻存剂加入之前先在冰水混合物中预冷；
优选地，细胞与细胞混悬剂混合均匀后，细胞的终浓度为(1-6)×106个/ml。
9.根据权利要求7所述的使用方法，其特征在于，细胞混悬剂与细胞冻存剂的体积比控制在1：(3-5)之间，优选地为1：4。
10.根据权利要求7所述的使用方法，其特征在于，冻存采用程序性降温的方式，降温速率为0.5-2℃/min之间，优选地为1℃/min。
CN201811618902.6A 2018-12-28 2018-12-28 无血清纳米材料冻存剂及其制备方法、使用方法，冻存液 Pending CN109497043A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811618902.6A CN109497043A (zh) 2018-12-28 2018-12-28 无血清纳米材料冻存剂及其制备方法、使用方法，冻存液

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811618902.6A CN109497043A (zh) 2018-12-28 2018-12-28 无血清纳米材料冻存剂及其制备方法、使用方法，冻存液

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN109497043A true CN109497043A (zh) 2019-03-22

Family

ID=65756571

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201811618902.6A Pending CN109497043A (zh) 2018-12-28 2018-12-28 无血清纳米材料冻存剂及其制备方法、使用方法，冻存液

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN109497043A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110476953A (zh) * 2019-09-09 2019-11-22 广州中鑫医学检验科技有限公司 一种细胞活性保存液以及疾病检测试剂盒

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1396951A (zh) * 2000-12-04 2003-02-12 胡曼泰克有限公司 细胞保存液和使用该保存液的细胞保存方法
CN102550542A (zh) * 2011-08-09 2012-07-11 臻景生物技术（上海）有限公司 用于脂肪干细胞的无血清冻存液及脂肪干细胞库的建立
CN102907416A (zh) * 2012-08-01 2013-02-06 臻景生物技术（上海）有限公司 一种可维持细胞活性的组织冻存液
CN104145943A (zh) * 2014-07-21 2014-11-19 重庆市红汇脐血干细胞中心有限公司 一种人脐带华通氏胶组织的冻存保护液及其制备与应用
CN104719282A (zh) * 2015-02-13 2015-06-24 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 一种外周血单个核细胞无血清冻存液及冻存方法
CN105230610A (zh) * 2015-11-13 2016-01-13 中国科学院化学研究所 一种冷冻保存液及其制备方法和应用

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1396951A (zh) * 2000-12-04 2003-02-12 胡曼泰克有限公司 细胞保存液和使用该保存液的细胞保存方法
CN102550542A (zh) * 2011-08-09 2012-07-11 臻景生物技术（上海）有限公司 用于脂肪干细胞的无血清冻存液及脂肪干细胞库的建立
CN102907416A (zh) * 2012-08-01 2013-02-06 臻景生物技术（上海）有限公司 一种可维持细胞活性的组织冻存液
CN104145943A (zh) * 2014-07-21 2014-11-19 重庆市红汇脐血干细胞中心有限公司 一种人脐带华通氏胶组织的冻存保护液及其制备与应用
CN104719282A (zh) * 2015-02-13 2015-06-24 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 一种外周血单个核细胞无血清冻存液及冻存方法
CN105230610A (zh) * 2015-11-13 2016-01-13 中国科学院化学研究所 一种冷冻保存液及其制备方法和应用

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110476953A (zh) * 2019-09-09 2019-11-22 广州中鑫医学检验科技有限公司 一种细胞活性保存液以及疾病检测试剂盒
CN110476953B (zh) * 2019-09-09 2021-11-12 广州中鑫基因医学科技有限公司 一种细胞活性保存液以及疾病检测试剂盒

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Wang et al. Magnetic induction heating of superparamagnetic nanoparticles during rewarming augments the recovery of hUCM-MSCs cryopreserved by vitrification
US20220272965A1 (en) Cell freezing medium for clinical use
Pasquinelli et al. Ultrastructural characteristics of human mesenchymal stromal (stem) cells derived from bone marrow and term placenta
CN104145943B (zh) 一种人脐带华通氏胶组织的冻存保护液及其制备与应用
US6596531B2 (en) Two stage method for thawing cryopreserved cells
CN102907416B (zh) 一种可维持细胞活性的组织冻存液
WO2011147118A1 (zh) 无蛋白非程序细胞冻存液
CN105660606A (zh) 一种细胞冻存液
CN108990964A (zh) 细胞冻存液
CN103667061A (zh) 一种菌种保藏方法
CN112772637A (zh) 一种无dmso人脐带间充质干细胞注射液冻存液
CN107027742B (zh) 一种用于白血病治疗的细胞冻存液
CN109497043A (zh) 无血清纳米材料冻存剂及其制备方法、使用方法，冻存液
CN109122670A (zh) 一种临床级别无血清细胞冻存液
Zeng et al. A supramolecular gel approach to minimize the neural cell damage during cryopreservation process
CN105454220A (zh) 一种胎盘保存方法、胎盘保存液及其制备方法
CN106900695A (zh) 一种人类诱导性多能干细胞专用冻存试剂及冻存方法
CN105441387A (zh) 亚全能干细胞专用培养基及其专用培养方法
CN109380214A (zh) 一种无血清细胞冻存剂及其制备方法、使用方法，冻存液
CN108552156A (zh) 一种无血清的诱导多功能干细胞冻存液及冻存方法
CN106417260A (zh) 一种脐带组织冻存液
WO2017101587A1 (zh) 巨核祖细胞冻存液及其应用
Guo et al. Effects of graphene oxide on the crystallization behavior of VS55 during cooling and warming
US20170020128A1 (en) No-spin cryopreservation technique and resulting products
Bauminger et al. Study of storage iron in cultured chick embryo fibroblasts and rat glioma cells, using Mössbauer spectroscopy

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20190322

RJ01 Rejection of invention patent application after publication