CN1306961C - 四价轮状病毒灭活疫苗的制备及应用 - Google Patents

四价轮状病毒灭活疫苗的制备及应用 Download PDF

Info

Publication number
CN1306961C
CN1306961C CNB2005100418583A CN200510041858A CN1306961C CN 1306961 C CN1306961 C CN 1306961C CN B2005100418583 A CNB2005100418583 A CN B2005100418583A CN 200510041858 A CN200510041858 A CN 200510041858A CN 1306961 C CN1306961 C CN 1306961C
Authority
CN
China
Prior art keywords
virus
type
tetravalent
cell
preparation
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CNB2005100418583A
Other languages
English (en)
Other versions
CN1686540A (zh
Inventor
周旭
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Lanzhou Institute of Biological Products Co., Ltd.
Original Assignee
LANZHOU INST OF BIOLOGICAL PRODUCTS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by LANZHOU INST OF BIOLOGICAL PRODUCTS filed Critical LANZHOU INST OF BIOLOGICAL PRODUCTS
Priority to CNB2005100418583A priority Critical patent/CN1306961C/zh
Publication of CN1686540A publication Critical patent/CN1686540A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN1306961C publication Critical patent/CN1306961C/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Landscapes

  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

本发明涉及一种四价轮状病毒灭活疫苗的制备方法，该方法将胰酶消化分散的小牛肾细胞或Vero细胞培养成片后以不同的感染复数分别接种G1、G2、G3、G4型轮状病毒，用无血清D-MEM培养液至细胞出现明显病变后收获病毒液并经浓缩、纯化、灭活、混合后加入适量的氢氧化铝制备而成。本发明制备的四价轮状病毒灭活疫苗经动物实验证明具有良好的免疫原性；经无菌试验、病毒滴定、灭活试验、总蛋白含量、硫柳汞含量、氢氧化铝含量、效力测定、热稳定性试验、异常毒性检查、细菌内毒素检查等检定完全合格，主要用于预防婴幼儿轮状病毒感染性疾病。

Description

四价轮状病毒灭活疫苗的制备及应用
技术领域
本发明属于一种生物制品，涉及一种病毒灭活疫苗的制备和应用检定，具体涉及的是四价轮状病毒灭活疫苗的制备及其应用。
背景技术
轮状病毒属于肠病毒科的双链RNA病毒，其外壳蛋白是型特异性抗原，根据其抗原性的不同，将轮状病毒分A、B两群，其中引起人类腹泻的主要是A群。A群轮状病毒又依据外壳蛋白VP7的不同分为14个血清型，即G1-G14型，而引起婴幼儿腹泻的主要是G1、G2、G3、G4型轮状病毒。目前有关四价轮状病毒灭活疫苗的制备未见报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种四价轮状病毒灭活疫苗的制备。
本发明的另一目的是提供一种四价轮状病毒灭活疫苗的应用。
本发明的目的可以通过以下措施实现：
一种四价轮状病毒灭活疫苗的制备方法，包括以下工艺步骤：
①细胞的制备：将小牛肾细胞或Vero细胞用胰酶消化分散，加入D-MEM完全培养液在37℃培养至细胞成片，再用无血清D-MEM培养液清洗细胞，用于接种轮状病毒。
②病毒接种和培养：将G1型、G2型、G3型、G4型轮状病毒毒种加入10～15ug/ml胰酶，37℃消化45分钟，以感染复数为5～10将G1型、G2型、G3型、G4型轮状病毒分别接种到步骤①制备的细胞，并在36.5-37.5℃吸附40～60分钟后吸弃病毒液，再用含1～1.5ug/ml胰酶的无血清D-MEM培养液于33～35℃培养至细胞出现明显病变时终止；
③病毒收集、浓缩和纯化：将上述接种的各病变细胞冻融，高速离心后收集上清液得各病毒原液；通过超滤浓缩上述病毒原液，并以蔗糖密度梯度离心或柱层析纯化病毒后即为各单价病毒原液。
④病毒灭活：采用0.05％福尔马林或1∶4000β-丙内酯灭活上述各单价病毒，除菌过滤后即为单价疫苗原液；
⑤混合上述各单价疫苗原液；
⑥成品的配制：将经混合的单价疫苗原液加入适量的氢氧化铝，即为成品。
本发明制备的四价轮状病毒灭活疫苗经动物(检定用动物小鼠、豚鼠应符合清洁级标准)实验已证明具有良好的免疫原性。
本发明制备的四价轮状病毒灭活疫苗，用于预防婴幼儿轮状病毒感染性疾病。
具体实施方式
实施例一：一种四价轮状病毒灭活疫苗的制备方法，包括以下工艺步骤：
1、细胞的制备
将小牛肾细胞(新生小牛肾细胞的牛肾来源为健康的初生小牛。牛群应符合《中华人民共和国动物防疫法》的要求。原代牛肾细胞应符合《生物制品生产用动物细胞制备及检定规程》)用胰酶消化分散，加入D-MEM完全培养液在37℃培养至细胞成片后，再用无血清D-MEM培养液清洗细胞3次，用于轮状病毒接种。
2、病毒接种和培养：将G1型、G2型、G3型、G4型轮状病毒毒种(病毒经轮状病毒G血清型检定、轮状病毒基因组核酸电泳试验、轮状病毒VP7基因核苷酸序列测定、病毒滴定、无菌检查、病毒外源因子检查、免疫原性检查，各相检定应符合要求。)加入10～15ug/ml胰酶，37℃消化45分钟，以感染复数为5～10将G1型、G2型、G3型、G4型轮状病毒分别接种到步骤①制备的细胞，并在36.5-37.5℃吸附40～60分钟后吸弃病毒液，再用含1～1.5ug/ml胰酶的无血清D-MEM培养液于33～3 5℃培养(一般感染复数为5～10，培养3～5天)至细胞出现明显病变时终至。
3、病毒收集
将终至培养的病变细胞冻融3次，于10000rpm，4℃高速离心，30分钟后收集上清液。
4、病毒的浓缩及纯化
通过超滤浓缩上述病毒原液，并以蔗糖密度梯度离心或柱层析纯化病毒后即为各单价病毒原液。
5、病毒灭活：采用0.05％福尔马林或1∶4000β-丙内酯灭活病毒。用福尔马林灭活病毒应在病毒纯化前进行；采用β-丙内酯灭活病毒可在病毒纯化后进行。灭活后立即进行灭活试验，结果应为阴性。灭活后可加入适量人白蛋白作稳定剂及一定量硫柳汞作防腐剂，除菌过滤后即为单价疫苗原液。无菌试验合格后即可配制疫苗原液。
6、G1型、G2型、G3型、G4型疫苗混合
将无菌试验、病毒灭活试验合格的G1型、G2型、G3型、G4型单价疫苗原液等量混合即为四价疫苗原液。
7、半成品配制
合并后的四价疫苗原液加入适量的氢氧化铝，即为半成品。分装后制成成品疫苗。
实施例二、一种四价轮状病毒灭活疫苗的制备方法，包括以下工艺步骤：
1、细胞的制备
将Vero细胞用胰酶消化分散，加入D-MEM完全培养液在37℃培养至细胞成片后，再用无血清D-MEM培养液清洗细胞3次，用于轮状病毒接种。
其余工艺步骤与实施例一完全相同。
疫苗的检定
1、原液检定
本发明的各单价疫苗原液经无菌试验、病毒滴定、灭活试验、牛血清蛋白残留量、总蛋白含量检定均为合格。
2、成品检定
本发明四价轮状病毒灭活疫苗的成品经鉴别试验、外观、pH值、硫柳汞含量、氢氧化铝含量、效力测定、热稳定性试验、异常毒性检查、细菌内毒素检查等检定完全合格。
实施例三、免疫原性实验：BALB/C小鼠，14～16克，免疫接种前尾静脉采血，分离血清冻存于-20℃。小鼠肌肉注射接种四价轮状病毒灭活疫苗，4周后采血，分离血清，用中和试验测定免疫前后小鼠血清中和抗体滴度。小鼠1免疫后抗体阳转率为96～100％(以免疫后抗体4倍以上增长为抗体阳转。)

Claims (2)

1、一种四价轮状病毒灭活疫苗的制备方法，包括以下工艺步骤：
①细胞的制备：将小牛肾细胞或Vero细胞用胰酶消化分散，加入D-MEM完全培养液在37℃培养至细胞成片，再用无血清D-MEM培养液清洗细胞，用于接种轮状病毒；
②病毒接种和培养：将G1型、G2型、G3型、G4型轮状病毒毒种加入10～15ug/ml胰酶，于37℃消化45分钟，以感染复数为5～10将G1型、G2型、G3型、G4型轮状病毒分别接种到步骤①制备的细胞，并在36.5-37.5℃吸附40～60分钟后吸弃病毒液，再用含1～1.5ug/ml胰酶的无血清D-MEM培养液于33～35℃培养至细胞出现明显病变时终止；
③病毒收集、浓缩和纯化：将上述接种的各病变细胞冻融，高速离心后收集上清液得各病毒原液；通过超滤浓缩上述病毒原液，并以蔗糖密度梯度离心或柱层析纯化病毒后即为各单价病毒原液；
④病毒灭活：采用0.05％福尔马林或1∶4000β-丙内酯灭活上述各单价病毒，除菌过滤后即为单价疫苗原液；
⑤混合上述各单价疫苗原液；
⑥成品的配制：将经混合的单价疫苗原液加入适量的氢氧化铝，即为成品。
2、如权利要求1所述的方法制备的四价轮状病毒灭活疫苗。
CNB2005100418583A 2005-03-19 2005-03-19 四价轮状病毒灭活疫苗的制备及应用 Active CN1306961C (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CNB2005100418583A CN1306961C (zh) 2005-03-19 2005-03-19 四价轮状病毒灭活疫苗的制备及应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CNB2005100418583A CN1306961C (zh) 2005-03-19 2005-03-19 四价轮状病毒灭活疫苗的制备及应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN1686540A CN1686540A (zh) 2005-10-26
CN1306961C true CN1306961C (zh) 2007-03-28

Family

ID=35304582

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CNB2005100418583A Active CN1306961C (zh) 2005-03-19 2005-03-19 四价轮状病毒灭活疫苗的制备及应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN1306961C (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101380467B (zh) * 2007-09-04 2012-01-25 邵卫星 多联灭活疫苗病毒(抗原)液浓缩工艺

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101020053B (zh) * 2007-03-13 2010-12-29 中国医学科学院医学生物学研究所 一种轮状病毒灭活疫苗的制备方法
CN104524562A (zh) * 2014-12-08 2015-04-22 武汉生物制品研究所有限责任公司 口服六价重配轮状病毒活疫苗
CN106676076A (zh) * 2017-01-20 2017-05-17 江苏中慧元通生物科技有限公司 一种无血清Vero细胞制备轮状病毒疫苗原液的方法以及无血清轮状病毒疫苗制品
CN107174658B (zh) * 2017-04-29 2020-11-27 安徽智飞龙科马生物制药有限公司 人用水痘病毒灭活疫苗及其制备方法
CN110055225A (zh) * 2018-01-18 2019-07-26 北京依生兴业科技有限公司 一种提高轮状病毒产量的方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1980002505A1 (en) * 1979-05-22 1980-11-27 Gist Brocades Nv Combined in activated vaccine,ready for administration and process for the preparation of such vaccine,active against egg production drop caused by adeno like viruses and against diseases caused by reo viruses
US5626851A (en) * 1987-11-30 1997-05-06 The Wistar Institute Of Anatomy And Biology Rotavirus reassortant vaccine
KR100337383B1 (ko) * 2000-12-26 2002-05-22 김정완 로타바이러스에 대한 난황항체

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1980002505A1 (en) * 1979-05-22 1980-11-27 Gist Brocades Nv Combined in activated vaccine,ready for administration and process for the preparation of such vaccine,active against egg production drop caused by adeno like viruses and against diseases caused by reo viruses
US5626851A (en) * 1987-11-30 1997-05-06 The Wistar Institute Of Anatomy And Biology Rotavirus reassortant vaccine
US5750109A (en) * 1987-11-30 1998-05-12 The Wistar Institute Of Anatomy & Biology Rotavirus reassortant vaccine
KR100337383B1 (ko) * 2000-12-26 2002-05-22 김정완 로타바이러스에 대한 난황항체

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101380467B (zh) * 2007-09-04 2012-01-25 邵卫星 多联灭活疫苗病毒(抗原)液浓缩工艺

Also Published As

Publication number Publication date
CN1686540A (zh) 2005-10-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101402944B (zh) 一种ev-71病毒毒种、人用灭活疫苗及其制备方法
CN102282253B (zh) 狂犬病病毒的纯化方法
CN1306961C (zh) 四价轮状病毒灭活疫苗的制备及应用
PT1427817E (pt) Multiplicação de vírus numa cultura celular
CN107267466A (zh) 一种大规模生产猪伪狂犬病灭活疫苗的方法
CN104099301B (zh) 柯萨奇病毒a16型病毒株、用途、疫苗及其制备方法
CN103394082B (zh) 多价免疫原性组合物
CN106999569A (zh) 肠道病毒灭活的改进的方法、佐剂吸附及其获得的剂量减少的疫苗组合物
CN107586759A (zh) 一种重组新城疫病毒的构建方法及应用
ES2560452T3 (es) Vacuna de IPV-DPT
CN104928260A (zh) 一种牛传染性鼻气管炎病毒ibrv-jn03分离株及其应用
Vonka et al. Some properties of the soluble (S) antigen of cultured lymphoblastoid cell lines
CN105396129A (zh) 一种利用脊髓灰质炎减毒株生产的灭活疫苗
CN102805862B (zh) 一种vero细胞培养新布尼亚病毒纯化灭活疫苗的制备方法
CN111729091A (zh) 一种用家兔检验猪塞内卡病毒病灭活疫苗效力的方法
CN106929480A (zh) 猪繁殖与呼吸综合征病毒株及其应用
CN105396128A (zh) 一种纯化脊髓灰质炎病毒液的方法
CN115998856A (zh) 一种新冠流感免疫原性组合物及其制备方法和应用
CN102343088B (zh) 一种犬传染性气管支气管炎二联活疫苗及其制备方法
CN112717128B (zh) 一种预防手足口病的联合疫苗及其制备方法和应用
CN101215552A (zh) F基因型腮腺炎减毒毒种及其用途
CN102988975A (zh) 甲型、乙型肝炎联合疫苗及其制备方法
CN102805863B (zh) 一种人二倍体细胞培养新布尼亚病毒纯化灭活疫苗的制备方法
Chang et al. The biological, immunological, and physicochemical characterization of a transmissible agent capable of inducing DNA and thymine degradation in cultured human cells
CN106635895A (zh) 一种绵羊肺炎支原体低血清高效培养基及其制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
C56 Change in the name or address of the patentee

Owner name: LANZHOU INSTITUTE OF BIOLOGICAL PRODUCTS CO., LTD.

Free format text: FORMER NAME: LANZHOU INST. OF BIOLOGICAL PRODUCTS

CP01 Change in the name or title of a patent holder

Address after: 730046 Gansu Province Chengguan District of Lanzhou City saltworks Road No. 178

Patentee after: Lanzhou Institute of Biological Products Co., Ltd.

Address before: 730046 Gansu Province Chengguan District of Lanzhou City saltworks Road No. 178

Patentee before: Lanzhou Inst. of Biological Products