CN1290501C

CN1290501C - 有药学活性的异吲哚啉衍生物

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Publication number: CN1290501C
Application number: CNB018187919A
Authority: CN
Inventors: 乔治·W·穆勒; 大卫·I·斯特林; 汉华·曼
Original assignee: Celgene Corp
Current assignee: Celgene Corp
Priority date: 2000-11-14
Filing date: 2001-11-14
Publication date: 2006-12-20
Anticipated expiration: 2021-11-14
Also published as: CA2427619A1; DE60126324D1; US20060069126A1; EP1341537B1; KR100881797B1; CY1106453T1; WO2002094180A3; IL155758A0; JP4328536B2; EP1341537A4; PT1341537E; DE60126324T2; US6458810B1; MXPA03004219A; KR20030063383A; NZ526319A; DK1341537T3; ATE432704T1; KR20080107480A; EP1733726A1

Abstract

在2-位取代为2，6-二氧-3-羟基哌啶-5-烷基团的异吲哚啉-1-酮和异吲哚啉-1，3-二酮，可以进一步在5-位取代为烷基或卤代基，4-位取代为烷基或含氮基团，它们都是抑制剂，因而可以用于治疗TNFα介导的疾病。一个典型的实例是2-(2，6-二氧-3-羟基-5-氟哌啶-5-烷)-4-氨基异吲哚啉-1-酮。

Description

有药学活性的异吲哚啉衍生物

技术领域

本发明涉及能够降低肿瘤坏死因子α(TNFα)的水平的非多肽异吲哚啉(isoindoline)衍生物及其引起的疾病的治疗。阻碍血管生成的化合物在癌症、炎症、自体免疫疾病等的治疗方面很有用。例如，选择性抑制TNFα的化合物在炎症的治疗以及气管平滑肌的放松方面很有用，并且具有最小的副作用，如心血管效应或抗血小板效应。本发明也涉及使用该化合物的药物组合物和治疗方法。

背景技术

肿瘤坏死因子α(TNFα)最初是单核巨噬细胞在免疫刺激原的作用下产生的一种细胞因子。把它施用到动物或人体时，会导致发炎、发热、心血管效应、出血、凝结以及与急性感染和休克状态相似的急性反应。在一些病理条件下会过量或无节制地表达TNFα，这包括内部血毒症和/或中毒性休克症状{Tracey et al.，Nature 330，662-664(1987)，and Hinshaw et a1.，Circ.Shock 30，279-292(1990)}，风湿性关节炎、克劳氏病(Crohn’s disease)、IBD、恶质病{Dezube et al.，Lancet，335(8690)，662(1990)}，从病人肺部测得TNFα浓度超过12000pg/mL的成人呼吸困难综合症ARDS{Millar et al.，Lancet 2(8665)，712-714(1989)}。全身灌输重组TNFα也会导致ARDS的典型变化{Ferral-Ballviera et al.，Arch.Surg.124(12)，1400-1405(1989)}。

TNFα看起来与骨质吸收疾病相关，包括关节炎。白细胞在激活以后会产生骨质吸收，实验数据表明TNFα在其中起作用{Bertoliniet al.，Nature 319，516-518(1986)，and Johnson et al.，Endocrinology124(3)，1424-1427(1989)}。还发现TNFα刺激骨质吸收，并在体外和体内通过刺激造骨细胞的形成和活化并结合造骨功能来抑制骨骼形成。虽然TNFα可能与骨质吸收疾病相关，包括关节炎，一个最引人注目的联系是肿瘤或宿主组织产生的TNFα与恶性血钙过多之间的联系{Calci.Tissue Int.(US)46(Suppl.)，S3-10(1990)}。在移植与宿主反应中，提高的血清TNFα水平已经与急性同种骨髓移植并发症联系起来{Holler et al.，Blood，75(4)，1011-1016(1990)}。

脑型疟疾是一种与高血水平TNFα相联系的致命过急神经综合症，也是疟疾病人最常发生的严重并发症。血清TNFα水平直接与疾病的严重程度和急性疟疾发作病人的预后相关{Grau et al.，N.Engl.J.Med.320(24)，1586-1591(1989)}。

无节制的血管生成是病态的，并且维持多种新型和非新型疾病的发展，比如固态肿瘤生长和转移、关节炎、一些眼科疾病、牛皮癣等。参见：Moses et al.，1991，Biotech.9：630-634；Folkman et al.，1995，N.Engl.J.Med.，333：1757-1763；Auer-bach et al.，1985，J.Microvasc.Res.29：401-411；Folkman，1985，Advances in Cancer Research，eds.Kleinand Weinhouse，Academic Press，New York，pp.175-203；Patz，1982，Am.J.Opthalmol.94：715-743；Folkman et al，1983，Science 221：719-725；and Folkman and Klagsbrun，1987，Science 235：442-447。而且，维持角膜、晶状体、有隔片的网络(trabecular meshwork)的无血状态对于视力以及眼科生理学都是至关重要的，参见：Waltman etal.，1978，Am.J.Ophthal.85：704-710 and Gartner et al.，1978，Surv.Ophthal.22：291-312。

这样，血管生成就会出现在不同的疾病状态、肿瘤转移、内皮细胞的异常生长。无节制的血管生成病态已经划分为与血管生成依赖型或血管生成关联型疾病。血管生成过程的控制可以导致这些条件的缓解。

研究表明，与血管内皮细胞增殖、迁移、入侵相关的血管生成组分部分地受多肽生长因子的调节。暴露于含有合适的生长因子的培养基中的内皮细胞可以诱导引起一些或者所有的血管生成反应。多肽以及体外内皮生长促进活性核酸的(nclude acidic)和基本的纤维原细胞生长因子，转化生长因子α和β，血小板衍生内皮细胞生长因子，粒细胞集落刺激因子，IL-8，肝细胞生长因子，多育曲菌素(proliferin)，血管内皮生长因子和胎盘生长因子。Folkman et al.，1995，N.Engl.J.Med.，333：1757-1763。

抑制影响了自然发生的血管生成内生刺激因子和抑制剂之间的平衡的主导地位。Rastinejad et al，1989，Cell 56：345-355。在这些例子中，在通常的生理条件下发生了新血管化，比如在伤口愈合、器官再生、胚胎发展和妇女生产过程中，血管生成受到严格的调节和时间、空间上的界定。在病态血管生成条件下，比如固体肿瘤生长，这些控制失效了。

已经发现巨噬细胞诱导的血管生成是由TNFα介导。Leibo-vichet al.{Nature，329，630-632(1987)}的研究表明，很低剂量的TNFα在体内诱导鼠角膜毛细血管的生成和鸡尿囊绒膜的生成，TNFα也可能诱导炎症、伤口愈合、肿瘤生长过程中的血管生成。

TNFα产生也独立地与癌症条件相关联，尤其是诱导细胞{Chinget al.，BRIT.J.Cancer，(1955)72，339-343，and Koch，Progress inMedicinal Chemistry，22，166-242(1985)}。无论是否与TNFα产生相关，血管生成在固体肿瘤形成和转移中占显著地位，并且发现血管生成因子与一些固体肿瘤相关，比如横纹肌肉瘤、眼癌、母羊恶质瘤、成神经细胞瘤、骨肉瘤。血管生成在其中起重要作用的肿瘤包括固体肿瘤和良性肿瘤，比如听觉神经瘤、纤维神经瘤、沙眼、化脓肉芽瘤。不依赖于它与TNFα产生的作用，阻止血管生成可以抑制这些肿瘤的生长和这些肿瘤存在所导致的动物损伤。血管生成已经与血生肿瘤相联系，比如白血病和一些急性或慢性新骨髓疾病。在这些情况下，发生无节制的白血细胞的扩增，通常伴随着贫血、削弱的血液凝结、以及淋巴结、肝、脾的增大。

血管生成也与肿瘤迁移有关。这样在肿瘤血管化过程中发生血管刺激，允许肿瘤细胞进入血液并循环到全身各处。当肿瘤细胞离开初始位置并定位于第二迁移位点以后，必须在新肿瘤能够生长和扩增以前进行血管生成。

人体内所有类型的细胞都可以转化成良性或恶性肿瘤细胞。最经常发生肿瘤的位置是肺，然后是结肠直肠、乳腺、前列腺、膀胱、胰腺和卵巢。其他主要的癌症类型包括白血病，中枢神经系统癌症、包括脑癌，黑素瘤，红白血病，子宫癌，和头、颈癌。

TNFα在慢性肺炎病中也起一定的作用。硅尘的积累导致硅肺病，它是一种因纤维化反应导致的呼吸功能衰竭病。在鼠实验中，TNFα的抗体可以完全阻止硅肺病。{Pignet，et al.，Nature，344：245-247(1990)}。在硅和石棉导致的纤维化动物模型中，已经表明高水平的TNFα表达(在血清和分离的巨噬细胞中){Bis-sonnette et al.，Inflammation 13(3)，329-339[(1989)]。已经发现，与来自普通供给者相比，肺肉瘤病人的肺泡巨噬细胞可以自发产生大量的TNFα{Baughman et al.，J.Lab.Clin.Med.[115(1)，]36-42(1990)}。

TNFα在再灌注(称作再灌注损伤)引起的炎症反应中也有所表现，也是导致失血后的组织损伤的主要原因{Vedder et al.，PNAS}87，2643-2646(1990)}。TNFα也转变内皮细胞的属性并具有不同的前凝血剂活性，比如提高组织因子前凝血剂活性、抑制抗凝血剂蛋白C途径以及减少血栓调节素的表达{Sherry et al.，J.Cell Biol.107，1269-1277(1988)}。TNFα在产生早期就有前炎症活性(在炎症反应的初始阶段)，这使它成为一些重要的紊乱中的组织损伤的中介者，包括但是不限于心肌梗塞、中风、周期性休克。TNFα介导的分子吸附可能具有某种重要性，比如细胞间的分子吸附(ICAM)或者内皮白细胞在内皮细胞上的分子吸附(ELAM){Munro et al.，Am.J Path.135(I)，121-132(1989)}。

已经发现TNFα的单克隆抗体对TNFα的阻遏对风湿性关节炎{Elliot et al.，Int.J.Pharmac.1995 17(2)，141-145}和克劳氏病{VonDullemen et al.，GASTROENTEROLOGY，1995 109(I)，129-135}的益处。

而且，现在已经发现TNFα是逆转录病毒复制的潜在启动子，包括HIV-1的启动{Duh et al.，Proc.Nat.Acad.SCI.86，5974-5978(1989)；}；Poll et al.，Proc.Nat.Acad.Sci.87，782-785(1990)；Monto etal.，Blood 79，2670(1990)；Clouse et al.，J.IMMUNOL.142，431-438(1989)；Poll et al.，AIDS Res.Hum.Retrovirus，191-197(1992)}。T淋巴细胞受到人免疫缺陷病毒(HIV)的感染以后导致AIDS，已经发现了至少3种HIV，即HIV-1、HIV-2和HIV-3。HIV感染的结果是，T细胞介导的免疫受到破坏和感染，人显示出严重的随机感染和/或不寻常的肿瘤。HIV进入T淋巴细胞需要T淋巴细胞的作用。其他病毒，比如HIV-1、HIV-2在T淋巴细胞作用以后感染T淋巴细胞，并且这些病毒蛋白的表达和/或复制是由这些T淋巴细胞活性来介导或控制的。一旦一个活化的T淋巴细胞受到HIV的感染，该T淋巴细胞必须继续保持活性状态以允许HIV基因的表达和/或HIV复制。研究表明，在活化的T细胞介导的HIV蛋白表达和/或病毒复制中有细胞因子，尤其是TNFα，通过维持T淋巴细胞的活性来起作用。所以，对细胞因子活性的影响，比如防止或抑制细胞因子的产生，尤其是TNFα，对HIV感染的病人有助于限制HIV感染引起的T淋巴细胞的维持。

HIV感染引起的淋巴细胞的维持还暗示有单核细胞、巨噬细胞及其相关细胞，比如柯弗氏(kupffer)细胞和胶质细胞。这些细胞，比如T细胞，是病毒复制的靶细胞，病毒复制的水平依赖于这些细胞的活性状态{ROSENBERG et al.，THE Immunopathogenesis of HIVInfection，Advances in Immunology，57(1989)}。研究表明，细胞因子，比如TNFα，能够活化HIV在单核细胞和/或巨噬细胞中的复制{Poliet al.，PROC.NATL.ACAD.SCI.，87，782-784(1990)；所以，防止或抑制细胞因子的产生或活性，有助于限制HIV在T细胞的发展。其他研究表明，TNFα作为HIV体外活性的一个普通因素，已经通过在细胞质中发现的核控蛋白(nuclear regulatory protein)提供了一个清楚的作用机理{Osbom，et al，PNAS 86 2336-2340}。这个事实表明，减少TNFα的合成可能对HIV感染具有抗病毒效果，通过减少转录从而控制病毒。

AIDS病人体内T细胞和巨噬细胞系的潜伏HIV病毒的复制可以通过TNFα来减少{Folks et al.，PNAS 86，2365-2368(1989)}。通过TNFα活化细胞质中基因调节蛋白(NFκB)的能力发现了一个病毒减少活性的分子模型，它能通过结合到病毒调节基因序列(LTR)来促进HIV的复制{OSBORN et al.，PNAS 86，2336-2340(1989)}。通过病人外周血单核细胞中提高的血清TNFα和高水平的自然产生的TNFα，可以发现在AIDS相联的恶病质中的TNFα{Wright et al.，J.Immunol.141(1)，99-104(1988)}。TNFα在其他病毒的感染中起不同的作用，比如上述相似原因的巨细胞病毒(cytomegalia virus，CMV)、流感病毒、腺病毒、疱疹病毒家族。

核因子κB(NFκB)是多向转录活化子{Lenardo，et al.，CELL1989，58，227-29}。已经发现，NFκB是一些疾病和炎症反应的转录活化子，并调节细胞因子水平，包括但不限于TNFα，也是HIV转录的活化子{Dbaibo，et al.，J BIOL.Chem.1993，17762-66；Duh et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.1989，86，5974-78；Bachelerie et al.，Nature 1991，350，709-12；Boswas et al.，J Acquired Immune Deficiency Syndrome1993，6，778-786；Suzuki et al.，Biochem.And Biophys.Res.Comm.1993，193，277-83；Suzuki et al.，Biochem.And Biophys.Res.Comm.1992，189，1709-15；Suzuki et al.，Biochem.Mol.Bio.Int.1993，31(4)，693-700；Shakhov et al.，PROC.NATL.ACAD.SCI.USA 1990，171，35-47；and Staal et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 1990，87，9943-47}。这样，抑制NFκB结合能够调节细胞因子基因的转录，并且通过这种调控和其他机理对于抑制多种疾病状态都是有用的。这里描述的化合物可以抑制核区NFκB的活性，从而有益于治疗不同的疾病，包括但不限于风湿性关节炎、风湿性脊椎炎、骨关节炎、其他关节炎、癌症、脓毒性休克、脓毒病、内毒性休克、移植宿主疾病、消瘦、克劳氏病、肠炎病、溃疡性结肠炎、多硬化症、系统性红斑狼疮、麻风病ENL、HIV、AIDS和AIDS随机感染。TNFα和NFκB的水平受反馈抑制。如上所述，本发明的化合物影响TNFα和NFκB的水平。

这样减少TNFα水平可以形成许多炎症、感染、免疫的或恶性病的有效治疗方案。这包括但不限于脓毒性休克、脓毒病、内毒性休克、血液动力学休克、脓毒病综合症、后缺血再灌注损伤、疟疾、分枝杆菌感染、脑膜炎、牛皮藓、充血性心衰竭、纤维化病、恶病质、移植排斥、癌症、自动免疫疾病、AIDS随机感染、风湿性关节炎、风湿性脊椎炎、骨关节炎、其他关节炎、克劳氏病、溃疡性结肠炎、多硬化症、系统性红斑狼疮、麻风病ENL、放射损伤、富氧肺泡损伤。

发明内容

本发明涉及式I化合物其中标“*”的碳原子是手性中心：

在式I中，

X是-C(O)-或-CH₂-；

R¹是1～8个碳原子的烷基或-NHR³；

R²是氢原子，1～8个碳原子的烷基或卤素；

R³是氢原子，1～8个碳原子的烷基，3～18个碳原子的环烷基，未被卤代基(halo)、氨基、或1～4个碳原子的烷氨基取代的苯基或已经被卤代基、氨基或1～4个碳原子的烷氨基取代的苯基，未被卤代基、氨基、或1～4个碳原子的烷氨基取代的苯甲基或已经被卤代基、氨基或1～4个碳原子的烷氨基取代的苯甲基，或-COR⁴，其中：

R⁴是氢原子，未被卤代基、氨基、或1～4个碳原子的烷氨基取代的或已经被他们取代的1～8个碳原子的烷基，3～18个碳原子的环烷基，未被卤代基、氨基、或1～4个碳原子的烷氨基取代的苯基或已经被卤代基、氨基或1～4个碳原子的烷氨基取代的苯基，未被卤代基、氨基、或1～4个碳原子的烷氨基取代的苯甲基或已经被卤代基、氨基或1～4个碳原子的烷氨基取代的苯甲基。

本发明还涉及这些异吲哚啉的酸性盐，它们能够质子化。这些盐包括有机盐和无机盐，比如但不限于，盐酸盐、溴酸盐、磷酸盐、硫酸盐、甲硫酸盐、乙酸盐、酒石酸盐、乳酸盐、琥珀酸盐、柠檬酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、山梨酸盐、乌头酸盐、水杨酸盐、邻苯二甲酸盐、embonic酸盐、庚酸盐等。

该化合物可以通过不同的方法制得。比如，式II所示的适当保护的3，5-二代哌啶-2，6-二酮可以与式III所示的4-代1，3-二氢异苯基呋喃-1，3-二酮反应，生成式IA所示的保护化合物。

在前述反应中，R¹的定义如上所述，X是-CH₂-，R²是氢原子或烷基，Z和Y是保护基团，比如苄氧羰基和链烷氧基。

当X是-CH₂-时，式II的哌啶-2，6-二酮与式IIIA的二代烷基安息香酸盐反应：

式II和式IIIA所示的化合物已知。在式II的化合物中，R^2‘是氢原子，它的制备方法可以是，通过使用甲醇中的氨处理氨基保护的式IIA的2-氨基-4-羟基戊二酸内酯，生成相应的式IIB的保护的2-氨基-4-羟基-4-羰基丁胺，它然后在乙酸中发生环化作用：

当R^2‘是烷基时，可以通过使用一种二价强碱，比如n-丁基锂，处理式IIA的内酯来引入，以形成二价阴离子，然后烷基化，比如使用甲基碘。可选择地，没有保护的内酯IIC转化成t-丁基酯，它然后用苯甲醛处理以得到脒IID。用碱和卤代烷处理脒使化合物IIE的α碳原子烷化，后继的酸处理分开了t-丁基酯和脒，该脒产生中间体IIF，它可以作为苄氧羰基衍生物再保护。

当R²是卤代基时，比如氟代基，可以通过使用二(三甲基硅烷基化)胺钠和N-氟苯磺酰胺处理式IA或式IB化合物来引入。

去除保护基团Y可以通过适当的水解反应来达到，比如，用p-甲苯磺酸来分开alkanoyloxy基团。

从前面所述可以看出，使用保护基团是有好处的，包括但不限于可以转换为目的基团的功能基团。这里使用的保护基团通常不会出现在最终的药用化合物中，但是在某些合成阶段被特意引入以保护那些在化学处理过程中不予保护则会发生改变的基团。这些保护基团在随后的合成步骤中被去除或者转变成目的基团，这样带有这些保护基团的化合物基本上就与化学中间体具有相同的重要性(虽然一些衍生物也显示出了生物活性)。相应的，保护基团的精确结构并不关键。生成和去除这些保护基团的一些反应在许多标准实验中都有所描述，包括，例如，″Protective Groups in Organic Chemistry″，Plenum Press，London and New York，1973；Greene，Th.W.″Protec-tive Groups inOrganic Synthesis″，Wiley，New York，1981；″The Peptides″，Vol.I，Schrder and Lubke，Academic Press，London and New York，1965；″Methoden der organischen Chemie″，Houben-Weyl，4th Edition，Vol.15/l，Georg Thieme Verlag，Stuttgart 1974。这些文献所披露的信息在这里引用。

这样，氨基可以通过使用能够在温和条件下去除的酰基来保护成胺基，特别是甲酸基，在羰基的1-或α-位分出的低位酰基(alkanoylgroup)，尤其是三酰基比如新戊酰基，或在其α-位被替换为羰基的低位酰基比如三氟乙酰基。

如果羰基需要保护，可以把它转变成能够在充分温和的条件下选择性去除的内酯，而不打断分子的目标结构，特别是1-12个碳原子的低烷酯，比如甲基或乙基，特别是在1-或α-位有分支，比如t-丁基；这些低烷酯在1-或2-位取代为：(i)低烷氧基，比如甲氧甲基、1-甲氧乙基、乙氧甲基，(ii)低烷硫，比如甲硫甲基、1-乙硫乙基，(iii)卤素，比如2，2，2-三氯乙基、2-溴乙基、2-碘乙氧羰基，(iv)一或两个苯基，它们每一个都可以未发生替换，也可以进行单-、二-、三-替换，比如，低烷如t-丁基，烷氧基如甲氧基或羟基，环如环氯或环氮，以及苯甲基、4-硝基苯甲基、二苯甲基、二-(4-甲氧基苯甲基)甲基，(v)芳酰基，如苯甲酰甲基。羰基也可以以有机甲硅烷基的形式得到保护，比如三甲基甲硅烷基乙基或三烷甲硅烷基，如三甲基甲硅烷基氧羰基。

当R¹是氨基时，这里描述的反应可以通过中间体来实现，其中R¹是硝基，该硝基然后被催化还原(氢化)为胺。相似地，当R¹是氨基衍生物时，比如N-酰氨基或N-烷氨基，可以通过相应的未取代氨基化合物形成。

这些化合物含有两个手性中心(在式I中以“*”表示)，就可以形成对映异构体和非对映异构体。这些化合物可以以充分手性纯的(S，S)-、(S，R)-、(R，R)-、(R，S)-异构体或者它们中的两种或多种的混合物来施用，这都在本发明的范围内。混合物可以这样使用，也可以使用手性吸附层析的物理方法分离成它们各自的异构体。同时，各自的异构体也可以制备成手性形式，或使用手性酸性盐的化学方法从混合物分离，或含有各自的对映异构体10-二莰酮磺酸(10-camphorsulfonicacid)、二莰酮酸(camphoric acid)、溴二莰酮酸(bromocamphoric acid)、甲氧乙酸、酒石酸、二乙酰-2，3-二羟基丁二酸(diacetyltartaric acid)、苹果酸、吡咯烷酮-5-羧酸等，然后释放一种或两种溶解碱，可选的重复步骤，以获得一种或两种的充分纯度，即其光学纯度＞95％。

式I化合物中优选的R²是氢原子、甲基、氟，较佳是氢原子。

式I化合物中优选的R¹是氨基。

式I化合物中优选的R¹是甲基。

式I化合物中优选的X是-C(O)-。

式I化合物中优选的X是-CH₂-。

式I化合物中优选的R²是氢原子、甲基、氟，较佳是氢原子，R¹是甲基、氨基、烷氨、酰氨，X是-C(O)-或-CH₂-。

可以使用本领域公知的方法方便地分析这些化合物对TNFα和NFκB的抑制，比如酶联免疫分析、放射免疫分析、免疫电泳、亲和标记等，其中以下面的方法比较典型。

代表性的化合物包括2-(2，6-二氧-3-羟基-5-氟哌啶-5-烷)-4-(N-苯甲基氨)异吲哚啉-1，3-二酮；2-(2，6-二氧-3-羟基-5-氟哌啶-5-烷)-4-(N-苯甲基氨)异吲哚啉-1-酮；2-(2，6-二氧-3-羟基-5-氟哌啶-5-烷)-4-乙酰氨异吲哚啉-1，3-二酮；2-(2，6-二氧-3-羟基-5-氟哌啶-5-烷)-4-乙酰氨异吲哚啉-1-酮；2-(2，6-二氧-3-羟基-5-氟哌啶-5-烷)-4-氨基异吲哚啉-1-酮；2-(2，6-二氧-3-羟基-5-氟哌啶-5-烷)-4-氨基异吲哚啉-1，3-二酮；2-(2，6-二氧-3-羟基-5-氟哌啶-5-烷)-4-甲基氨异吲哚啉-1，3-二酮；2-(2，6-二氧-3-羟基-5-氟哌啶-5-烷)-4-甲基氨异吲哚啉-1-酮；2-(2，6-二氧-3-羟基-5-氟哌啶-5-烷)-4-甲基异吲哚啉-1，3-二酮；2-(2，6-二氧-3-羟基-5-氟哌啶-5-烷)-4-甲基氨异吲哚啉-1-酮；2-(2，6-二氧-3-羟基-5-甲基哌啶-5-烷)-4-(N-苯甲基氨)异吲哚啉-1，3-二酮；2-(2，6-二氧-3-羟基-5-甲基哌啶-5-烷)-4-(N-苯甲基氨)异吲哚啉-1-酮；2-(2，6-二氧-3-羟基-5-甲基哌啶-5-烷)-4-乙酰氨异吲哚啉-1，3-二酮；2-(2，6-二氧-3-羟基-5-甲基哌啶-5-烷)-4-乙酰氨异吲哚啉-1-酮；2-(2，6-二氧-3-羟基-5-甲基哌啶-5-烷)-4-氨基异吲哚啉-1-酮；2-(2，6-二氧-3-羟基-5-甲基哌啶-5-烷)-4-氨基异吲哚啉-1，3-二酮；2-(2，6-二氧-3-羟基-5-甲基哌啶-5-烷)-4-甲基氨异吲哚啉-1，3-二酮；2-(2，6-二氧-3-羟基-5-甲基哌啶-5-烷)-4-甲基氨异吲哚啉-1-酮；2-(2，6-二氧-3-羟基-5-甲基哌啶-5-烷)-4-甲基异吲哚啉-1，3-二酮；2-(2，6-二氧-3-羟基-5-甲基哌啶-5-烷)-4-甲基异吲哚啉-1-酮；2-(2，6-二氧-3-羟基哌啶-5-烷)-4-(N-苯甲基氨)异吲哚啉-1，3-二酮；2-(2，6-二氧-3-羟基哌啶-5-烷)-4-(N-苯甲基氨)异吲哚啉-1-酮；2-(2，6-二氧-3-羟基哌啶-5-烷)-4-乙酰氨异吲哚啉-1-酮；2-(2，6-二氧-3-羟基哌啶-5-烷)-4-乙酰氨异吲哚啉-1，3-二酮；2-(2，6-二氧-3-羟基哌啶-5-烷)-4-氨基异吲哚啉-1-酮；2-(2，6-二氧-3-羟基哌啶-5-烷)-4-氨基异吲哚啉-1，3-二酮；2-(2，6-二氧-3-羟基哌啶-5-烷)-4-甲基氨异吲哚啉-1-酮；2-(2，6-二氧-3-羟基哌啶-5-烷)-4-甲基氨异吲哚啉-1，3-二酮；2-(2，6-二氧-3-羟基哌啶-5-烷)-4-甲基异吲哚啉-1-酮；2-(2，6-二氧-3-羟基哌啶-5-烷)-4-甲基异吲哚啉-1，3-二酮。

使用Ficoll-Hypaque密度离心方法从普通原料得到PBMC。用RPMI补充培养基培养细胞，补充成分为：10％AB+血清，2mM L-谷氨酸，100U/ml青霉素，100mg/ml链霉素。

实验化合物溶解到二甲基亚砜(Sigma产)中，然后在RPMI补充培养基中进行稀释。在PBMC溶液中有或没有药物时，二甲基亚砜的最终浓度都是0.25wt％。实验化合物以半对数稀释进行分析，起始浓度是50mg/ml。在加入LPS以前1小时，把实验化合物加入到96孔平板的PBMC(10⁶细胞/ml)中。

在有或者没有实验化合物的条件下，用来自Salmonella MinnesotaR595(List Biological Labs，Campbell，CA)的1mg/ml浓度的LPS刺激PBMC(10⁶细胞/ml)。随后细胞在37℃培养18-20小时。收集上清液后马上分析其TNFα水平，或者在-70℃低温保存(不超过4天)以备分析。

TNFα在上清液中的浓度通过人TNFαELISA测试包(ENDOGEN，Boston，MA)测定，具体操作参照使用说明书。

在合格的专业人员的监督下，该化合物可以用于抑制TNFα和NFκB的不良反应。该化合物的给药方式可以是口服、直肠、注射，可以单独或者与其他治疗试剂相结合以有效剂量使用，包括抗生素、类固醇等。口服方式包括片剂、胶囊、糖衣丸和其他形状、药学的压缩剂型。含有20-100mg/ml量的等渗盐溶液可以用于注射，它包括肌肉、内腔、静脉、动脉等途径。直肠方式可以使用合适载体(如可可油)制成的栓剂。

剂量必须精确到病人的特定症状、年龄、体重、生理条件和要引起的反应，但是剂量一般在1～1000mg/day，视需要施药一天或几天。一般地，使用本发明的化合物的最初治疗量，可以完全参考已知的通过干扰TNFα活性来治疗TNFα介导的疾病。治疗的病人要检查其T细胞数和T4/T8比和/或病毒血症测量如反转录酶或病毒蛋白，和/或细胞因子介导的疾病相关问题的发展情况，比如恶病质或肌肉恶化。如果在通常剂量的情况下没有观察到效果，则增加施用的细胞因子干扰剂的用量，如每周50％。

本发明的化合物还可以用于TNFα过量表达所引起的或加剧的典型疾病的治疗或预防，比如病毒感染，疱疹病毒引起的疾病，或病毒性结膜炎、牛皮癣、其他皮肤紊乱和疾病等。

本发明的化合物液可以用于人类以外的其他动物的兽药，以预防或抑制TNFα的产生。治疗性的或预防性的TNFα介导的动物疾病包括上面所提到的，尤其是病毒感染。例子包括猫免疫缺陷病毒、马感染贫血症病毒、羊关节炎病毒、绵羊脱髓鞘性脑白质炎(visna)病毒、麦地(Maedi)病毒和其他慢病毒(lentivirus)。

本发明包括不同的治疗方法，包括减少或抑制不需要的TNFα水平的方法，减少或抑制不需要的细胞间金属蛋白酶水平的方法，治疗不需要的血管生成的方法，治疗癌症的方法，治疗炎症疾病的方法，治疗自动免疫疾病的方法，治疗关节炎的方法，治疗风湿性关节炎的方法，治疗肠炎的方法，治疗克劳氏疾病的方法，治疗复发性口疮(aphthous ulcer)的方法，治疗恶病质的方法，治疗移植宿主疾病的方法，治疗哮喘的方法，治疗成人呼吸衰竭综合症的方法，治疗AIDS的方法，它们通过给哺乳动物施用有效剂量的式I化合物的充分纯的手性(R)-或(S)-异构体或者这些异构体的混合物来实现。当这些方法有重叠时，它们会在施用方法、剂量、给药量(比如一次或多次给药)以及同时施用的其他治疗剂等方面有所区别。

本发明还包括药物组合物，其中，(i)取决于一次或者多次给药的量的式I化合物的充分纯的手性(R)-或(S)-异构体或者这些异构体的混合物是有药效的成分，它与(ii)药学可接受的载体结合使用。

药物组合物以口腔给药方式为代表，包括每个剂量单位含有1～100mg药的片剂、胶囊、糖衣剂、相似的形状、压缩剂型。含有20～100mg/ml量的混合物可以配制成注射液，给药方式包括肌肉、内腔、静脉、动脉等途径。直肠给药方式可以使用合适载体制成的栓剂，比如可可油。

药物组合物含有本发明的一种或多种化合物，以及至少一种药学可接受的载体、稀释剂或赋形剂。在制备这样的组合物时，活性成分通常用赋形剂进行混合或稀释，或者包在胶囊或小袋等形式的载体中。当赋形剂作为稀释剂使用时，它可以是固态、半固态或者液态，它们作为活性成分的运输物、载体、介质。这样，组合物可以制成片剂、药丸、粉末、药酒、悬浮液、乳化液、溶液、糖浆、软或硬凝胶胶囊、栓剂、无菌注射溶液和无菌包粉末。合适的载体例子包括乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、淀粉、阿拉伯树胶、硅酸钙、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、水、糖浆、甲基纤维素，配方中还可以包括润滑剂如滑石、硬脂酸镁和矿物油、润湿剂、乳化和悬浮剂，防腐剂如甲基-和丙基羟基安息香酸盐，甜味剂或芳香剂。

混合物优选的制成单位剂量形式，即每一个物理单位作为一个单位剂量，或者一个预先确定的单位剂量可以通过一次或多次给药来达到，每个单位含有预先确定量的活性成分和合适的药学载体以达到理想的治疗效果。该混合物可以使用本领域已知的方法速释、控释、缓释活性成分。

具体实施方式

下面的实施例将进一步解释本发明，但是不能限制本发明的范围，发明范围以权利要求书为准。

实施例1 2-(5-羟基-2，6-二氧哌啶-3-烷)-4-甲基异吲哚啉-1，3-二酮；

A.3-(4-甲基-1，3-二氧异吲哚啉-2-烷)-2，6-二氧-5-乙酸基哌啶

2，6-二氧-3-苄氧基羰基氨-5-乙酸基哌啶(9g，28.2mmol)(U.Teubert et al，Arch.Pharm.Med.Chem.(1998)7-12)和Pd/C(10％，0.9g)在乙酸(90ml)中的混合物氢环境(50-60psi)振动3小时。悬浮液通过Celite垫过滤并用乙酸冲洗。向滤液中加入3-甲基邻苯二甲酸酐(3-Methylphthalic anhydride)(4.56g，28.2mmol)，将混合物回流加热18小时。真空除去溶剂得到3-(4-甲基-1，3-二氧异吲哚啉-2-烷)-2，6-二氧-5-乙酸基哌啶，它可以通过柱层析进一步纯化。

B.2-(5-羟基-2，6-二氧哌啶-3-烷)-4-甲基异吲哚啉-1，3-二酮；

3-(4-甲基-1，3-二氧异吲哚啉-2-烷)-2，6-二氧-5-乙酸基哌啶(1g，3.5mmol)和p-甲苯磺酸(0.33g，1.8mmol)在甲醇(10ml)中的溶液回流加热5小时。真空除去溶剂得到2-(5-羟基-2，6-二氧哌啶-3-烷)-4-甲基异吲哚啉-1，3-二酮，它可以通过柱层析进一步纯化。

实施例2 4-氨基-2-(5-羟基-2，6-二氧哌啶-3-烷)异吲哚啉-1，3-二酮

A.5-(1，3-二氧-4-硝基-1，3-二氢-异吲哚-2-烷)-2，6-二氧-哌啶-3-烷醋酸盐

室温下，向2-(2，6-二氧-哌啶-3-烷)-4-硝基-异吲哚-1，3-二酮(10.0g，33mmol)和乙酸(200ml)的混合物中加入溴(3ml，59mmol)。混合物回流加热2天。反应混合物冷却至室温，过滤得到的黄色固体。固体在丙酮/正己烷(1∶1500ml)溶液中搅拌30min。过滤悬浮液得到灰白色固体(6.8g，产率54％)状的2-(5-溴-2，6-二氧-哌啶-3-烷)-4-硝基-异吲哚-1，3-二酮。2-(5-溴-2，6-二氧-哌啶-3-烷)-4-硝基-异吲哚-1，3-二酮(6.0g，16mmol)和醋酸钠(2.1g，26mmol)在DMF(60ml)中的混合物在室温下搅拌2天。真空除去溶剂得到固体。该固体在pH6的缓冲液(60ml)和重亚硫酸钠(1.5g)中成浆6小时，过滤后用水(100ml)冲洗，然后在丙酮/正己烷(1∶1100ml)成浆。悬浮液过滤后用正己烷(50ml)冲洗得到灰白色固体(3.7g，产率65％)状的5-(1，3-二氧-4-硝基-1，3-二氢-异吲哚-2-烷)-2，6-二氧-哌啶-3-烷醋酸盐。

B.顺式5-(4-氨-1，3-二氧-1，3-二羟基-异吲哚-2-烷)-2，6-二氧-哌啶-3-烷醋酸盐

醋酸5-(4-氨-1，3-二氧-1，3-二羟基-异吲哚-2-烷)-2，6-二氧-哌啶-3-烷内酯(3.4g，9.4mmol)和Pd/C(340mg，10％)甲醇(340ml)的混合物在Parr振动器中的氢环境下振动21小时。悬浮液用CELITE过滤，并用甲醇(100ml)和丙酮(250ml)冲洗。合并的滤液真空蒸发得到固体。该固体在甲醇(30ml)中成浆2小时，过滤，甲醇冲洗固体得到顺式5-(4-氨-1，3-二氧-1，3-二羟基-异吲哚-2-烷)-2，6-二氧-哌啶-3-烷醋酸盐的黄色固体(2.0g，产率64％)：mp，220-223℃。

C.4-氨基-2-(5-羟基-2，6-二氧-哌啶-3-烷)-异吲哚-1，3-二酮

醋酸5-(4-氨-1，3-二氧-1，3-二羟基-异吲哚-2-烷)-2，6-二氧-哌啶-3-烷内酯(1.5g，4.5mmol)和p-甲苯磺酸(0.46g，2.4mmol)甲醇(50ml)的混合物回流加热22小时。悬浮液过滤后，用甲醇(2×30ml)冲洗得到4-氨基-2-(5-羟基-2，6-二氧-哌啶-3-烷)-异吲哚-1，3-二酮的黄色固体(1.0g，产率79％)：mp，285-287℃。

实施例3 4-硝基-2-(5-羟基-2，6-二氧哌啶-3-烷)异吲哚啉-1-酮

A.3-(4-硝基-1-氧异吲哚啉-2-烷)-2，6-二氧-5-乙酸哌啶

2，6-二氧-3-苄氧基羰基氨-5-乙酸哌啶(9g，28.2mmol)和Pd/C(10％，0.9g)的乙酸(90ml)溶液在氢环境(50-60psi)振动3小时。悬浮液经过Celite垫过滤，乙酸冲洗，真空去除溶剂。将残留物三乙基氨(2.9g，28mmol)和甲基2-溴甲基-3-硝基安息香酸盐(7.7g，28.2mmol)在二甲基甲酰氨(100ml)中80℃加热18小时。真空去除溶剂得到3-(4-硝基-1-氧异吲哚啉-2-烷)-2，6-二氧-5-乙酸基哌啶，它可以通过柱层析进一步纯化。

B.4-硝基-2-(5-羟基-2，6-二氧哌啶-3-烷)异吲哚啉-1-酮

3-(4-硝基-1-氧异吲哚啉-2-烷)-2，6-二氧-5-乙酸基哌啶(0.96g，3.5mmol)和p-甲苯磺酸(0.33g，1.8mmol)的甲醇(10ml)溶液回流加热5小时。真空去除溶剂得到4-硝基-2-(5-羟基-2，6-二氧哌啶-3-烷)异吲哚啉-1-酮，它可以通过柱层析进一步纯化。

实施例4 4-氨基-2-(5-羟基-2，6-二氧哌啶-3-烷)异吲哚啉-1-酮

A.3-(4-氨基-1-氧异吲哚啉-2-烷)-2，6-二氧-5-乙酸哌啶

3-(4-硝基-1-氧异吲哚啉-2-烷)-2，6-二氧-5-乙酸哌啶(0.9g，3.1mmol)和Pd/C(10％，0.1g)的甲醇(100ml)溶液在氢环境(50-60psi)振动3小时。悬浮液经过Celite垫过滤，甲醇冲洗，得到3-(4-氨基-1-氧异吲哚啉-2-烷)-2，6-二氧-5-乙酸哌啶，它可以通过柱层析进一步纯化。

B.4-氨基-2-(5-羟基-2，6-二氧哌啶-3-烷)异吲哚啉-1-酮

3-(4-氨基-1-氧异吲哚啉-2-烷)-2，6-二氧-5-乙酸基哌啶(0.96g，3.5mmol)和p-甲苯磺酸(0.33g，1.8mmol)的甲醇(10ml)溶液回流加热5小时。真空去除溶剂得到4-氨基-2-(5-羟基-2，6-二氧哌啶-3-烷)异吲哚啉-1-酮，它可以通过柱层析进一步纯化。

实施例5 3-[1，3-二氧-4-苯酰氨异吲哚啉-2-烷]-2，6-二氧-5-羟基哌啶

A.3-[1，3-二氧-4-苯酰氨异吲哚啉-2-烷]-2，6-二氧-5-乙酸哌啶

3-(4-氨基-1，3-二氧异吲哚啉-2-烷)-2，6-二氧-5-乙酸哌啶(1g，3.5mmol)和苯甲酰氯(0.5g，3.5mmol)的四羟基呋喃(15ml)溶液回流加热1小时。真空去除溶剂，得到3-(1，3-二氧-4-苯酰氨异吲哚啉-2-烷)-2，6-二氧-5-乙酸哌啶，它可以通过柱层析进一步纯化。

B.3-(1，3-二氧-4-苯酰氨异吲哚啉-2-烷)-2，6-二氧-5-羟基哌啶

3-(1，3-二氧-4-苯酰氨异吲哚啉-2-烷)-2，6-二氧-5-乙酸哌啶(1.36g，3.5mmol)和p-甲苯磺酸(0.33g，1.8mmol)的甲醇(20ml)溶液回流加热5小时。真空去除溶剂得到3-(1，3-二氧-4-苯酰氨异吲哚啉-2-烷)-2，6-二氧-5-羟基哌啶，它可以通过柱层析进一步纯化。

实施例6 3-[4-(2-呋喃羰基氨)-1，3-二氧异吲哚啉-2-烷]-2，6-二氧-5-羟基哌啶

A.3-[4-(2-呋喃羰基氨)-1，3-二氧异吲哚啉-2-烷]-2，6-二氧-5-乙酸哌啶

3-(4-氨基-1，3-二氧异吲哚啉-2-烷)-2，6-二氧-5-乙酸哌啶(1g，3.5mmol)和2-呋喃氯(0.46g，3.5mmol)的四羟基呋喃(20ml)溶液回流加热1小时。真空去除溶剂，得到3-[4-(2-呋喃羰基氨)-1，3-二氧异吲哚啉-2-烷]-2，6-二氧-5-乙酸哌啶，它可以通过柱层析进一步纯化。

B.3-[4-(2-呋喃羰基氨)-1，3-二氧异吲哚啉-2-烷]-26-二氧-5-羟基哌啶

3-[4-(2-呋喃羰基氨)-1，3-二氧异吲哚啉-2-烷]-2，6-二氧-5-乙酸哌啶(1.33g，3.5mmol)和p-甲苯磺酸(0.33g，1.8mmol)的甲醇(20ml)溶液回流加热5小时。真空去除溶剂得到3-[4-(2-呋喃羰基氨)-1，3-二氧异吲哚啉-2-烷]-2，6-二氧-5-羟基哌啶，它可以通过柱层析进一步纯化。

实施例7 3-[4-甲氧基乙酰基氨-1，3-二氧异吲哚啉-2-烷]-2，6-二氧-5-羟基哌啶

A.3-[4-甲氧基乙酰氨-1，3-二氧异吲哚啉-2-烷]-2，6-二氧-5-乙酸哌啶

3-[4-氨基-1，3-二氧异吲哚啉-2-烷]-2，6-二氧-5-乙酸哌啶(1g，3.5mmol)和甲氧基乙酰氯(0.38g，3.5mmol)的四羟基呋喃(20ml)溶液回流加热1小时。真空去除溶剂，得到3-[4-(2-甲氧基乙酰氨)-1，3-二氧异吲哚啉-2-烷]-2，6-二氧-5-乙酸哌啶，它可以通过柱层析进一步纯化。

B.3-[4-甲氧基乙酰氨-1，3-二氧异吲哚啉-2-烷]-2，6-二氧-5-羟基哌啶

3-[4-甲氧基乙酰氨-1，3-二氧异吲哚啉-2-烷]-2，6-二氧-5-乙酸哌啶(1.26g，3.5mmol)和p-甲苯磺酸(0.33g，1.8mmol)的甲醇(20ml)溶液回流加热5小时。真空去除溶剂得到3-[4-甲氧基乙酰氨-1，3-二氧异吲哚啉-2-烷]-2，6-二氧-5-羟基哌啶，它可以通过柱层析进一步纯化。

实施例8 3-(4-呋喃-2-甲基氨-1，3-二氧异吲哚啉-2-烷)-5-羟基哌啶-2，6-二酮

3-(4-氨基-1，3-二氧异吲哚啉-2-烷)-5-羟基哌啶-2，6-二酮(0.82g，3.0mmol)和2-糠醛(0.34g，3.5mmol)的乙酸(10ml)溶液回流加热4小时。室温下向混合物中加入硼氢化钠(130mg，3.5mmol)维持18小时。生成的3-(4-呋喃-2-甲基氨-1，3-二氧异吲哚啉-2-烷)-5-羟基哌啶-2，6-二酮可以通过柱层析进一步纯化。

实施例9 3-(4-呋喃-2-甲基氨-1-氧异吲哚啉-2-烷)-5-羟基哌啶-2，6-二酮

3-(4-氨基-1-氧异吲哚啉-2-烷)-5-羟基哌啶-2，6-二酮(0.82g，3.0mmol)和2-糠醛(0.34g，3.5mmol)的乙酸(10ml)溶液回流加热4小时。室温下向混合物中加入硼氢化钠(130mg，3.5mmol)维持18小时。生成的3-(4-呋喃-2-甲基氨-1-氧异吲哚啉-2-烷)-5-羟基哌啶-2，6-二酮可以通过柱层析进一步纯化。

实施例10 4-硝基-2-(3-氟-5-羟基-2，6-二氧哌啶-3-烷)-1，3-二酮

A.1-三-丁醇羰基-3-(4-硝基-1，3-二氧异吲哚啉-2-烷)-2，6-二氧-5-乙酸哌啶

室温下向3-(4-硝基-1，3-二氧异吲哚啉-2-烷)-2，6-二氧-5-乙酸哌啶(2.5g，7.75mmol)和二-四-丁基碳酸氢钠(1.86g，8.52mmol)的1，4-二恶烷(30ml)溶液中加入DMAP(100mg)。溶液在室温下搅拌18小时。真空去除溶剂，得到1-三-丁醇羰基-3-(4-硝基-1，3-二氧异吲哚啉-2-烷)-2，6-二氧-5-乙酸哌啶，它可以通过柱层析或重结晶进一步纯化。

A.3-氟-3-(4-硝基-1，3-二氧异吲哚啉-2-烷)-2，6-二氧-5-乙酸哌啶

在-78℃温度下，向1-三-丁醇羰基-3-(4-硝基-1，3-二氧异吲哚啉-2-烷)-2，6-二氧-5-乙酸哌啶(2.0g，4.3mmol)的四氢呋喃(20ml)溶液加入二(三甲基甲硅烷基)氨钠(4.3ml，4.3mmol，1.0M)的四氢呋喃溶液。10-30分钟后，向混合物中加入N-氟苯磺酸氨(1.1g，4.3mmol)。将混合物加热到室温，真空去除溶剂。残留物与乙基醋酸盐(10ml)和盐酸(10ml，1N)混合搅拌1小时，分离有机层，真空去除溶剂，得到3-氟-3-(4-硝基-1，3-二氧异吲哚啉-2-烷)-2，6-二氧-5-乙酸哌啶，它可以通过柱层析进一步纯化。

B.4-硝基-2-(3-氟-5-羟基-2，6-二氧哌啶-3-烷)异吲哚啉-1，3-二酮

3-(4-硝基-1，3-二氧异吲哚啉-2-烷)-3-氟-2，6-二氧-5-乙酸哌啶(1g，2.9mmol)和p-甲苯磺酸(0.28g，1.5mmol)的甲醇(10ml)溶液回流加热5小时，真空去除溶剂，得到4-硝基-2-(3-氟-5-羟基-2，6-二氧哌啶-3-烷)异吲哚啉-1，3-二酮，它可以通过柱层析进一步纯化。

实施例11 4-氨基-2-(3-氟-5-羟基-2，6-二氧哌啶-3-烷)异吲哚啉-1，3-二酮

A.3-(4-氨基-1，3-二氧异吲哚啉-2-烷)-3-氟-2，6-二氧-5-乙酸哌啶

3-氟-3-(4-硝基-1，3-二氧异吲哚啉-2-烷)-2，6-二氧-5-乙酸哌啶(1.0g，2.6mmol)和Pd/C(10％，0.1g)的甲醇(100ml)溶液在氢环境(50-60psi)振动3小时。悬浮液通过Celite垫过滤并用甲醇冲洗，得到3-(4-氨基-1，3-二氧异吲哚啉-2-烷)-3-氟-2，6-二氧-5-乙酸哌啶，它可以通过柱层析进一步纯化。

B.4-氨基-2-(3-氟-5-羟基-2，6-二氧哌啶-3-烷)异吲哚啉-1，3-二酮

3-(4-氨基-1，3-二氧异吲哚啉-2-烷)-3-氟-2，6-二氧-5-乙酸哌啶(1g，2.9mmol)和p-甲苯磺酸(0.28g，1.5mmol)的甲醇(10ml)溶液回流加热5小时。真空去除溶剂，得到4-氨基-2-(3-氟-5-羟基-2，6-二氧哌啶-3-烷)异吲哚啉-1，3-二酮，它可以通过柱层析进一步纯化。

实施例12

每一片含有50mg 2-(2，6-二氧-3-羟基哌啶-5-烷)-4-氨基异吲哚啉-1，3-二酮的片剂，可以通过下述的方法制备：

成分(1000片)

2-(2，6-二氧-3-羟基哌啶-5-烷)-4-氨基异吲哚啉-1，3-二酮 50.0g

乳糖 50.7g

小麦淀粉 7.5g

聚乙烯乙二醇6000 5.0g

滑石粉 5.0g

硬脂酸镁 1.8g

纯化水适量

固体成分先过0.6mm网孔的筛子，然后混合活性成分、乳糖、滑石、硬脂酸镁和一半淀粉。剩余的一半淀粉悬浮于40ml水中，将该悬浮液加入沸腾的100ml聚乙烯乙二醇的水溶液。得到的糊状物加入到粉状物中，混合物成粒，如果必要的化可以再加水。药粒在35℃过夜干燥后，过1.2mm网孔的筛子，压制成两侧凹陷的直径约6mm的片剂。

实施例13

每一片含有100mg 2-(2，6-二氧-3-羟基哌啶-5-烷)-4-甲基氨异吲哚啉-1-酮的片剂，可以通过下述的方法制备：

成分(1000片)

2-(2，6-二氧-3-羟基哌啶-5-烷)-4-甲基氨异吲哚啉-1-酮 100.0g

乳糖 100.0g

小麦淀粉 47g

硬脂酸镁 3g

固体成分先过0.6mm网孔的筛子，然后混合活性成分、乳糖、硬脂酸镁和一半淀粉。剩余的一半淀粉悬浮于40ml水中，将该悬浮液加入100ml沸水中。得到的糊状物加入到粉状物中，混合物成粒，如果必要的化可以再加水。药粒在35℃过夜干燥后，过1.2mm网孔的筛子，压制成两侧凹陷的直径约6mm的片剂。

实施例14

每一片含有75mg 2-(2，6-二氧-3-羟基-5-甲基哌啶-5-烷)-4-甲基异吲哚啉-1，3-二酮的咀嚼片，可以通过下述的方法制备：

成分(1000片)

2-(2，6-二氧-3-羟基-5-甲基哌啶-5-烷)-4-甲基异吲哚啉 75.0g

-1，3-二酮

甘露醇 230.0g

乳糖 150.0g

滑石粉 21.0g

糖胶 12.5g

硬脂酸 10.0g

糖精 1.5g

5％凝胶溶液适量

固体成分先过0.25mm网孔的筛子，然后混合甘露醇和乳糖，加入凝胶溶液后成粒，过2mm网孔的筛子，在50℃干燥，过1.7mm网孔的筛子。小心的混合3-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-N-羟基-3-苯二酰亚氨基丙酸氨、糖胶、糖精，加入甘露醇、乳糖粒、硬脂酸和滑石粉，将它们彻底混合后压制成两侧凹陷的直径约10mm的片剂，并在上侧有一条掰开切痕。

实施例15

每一片含有10mg 2-(2，6-二氧-3-羟基哌啶-5-烷)-4-氨基异吲哚啉-1-酮的片剂，可以通过下述的方法制备：

成分(1000片)

2-(2，6-二氧-3-羟基哌啶-5-烷)-4-氨基异吲哚啉-1-酮 10.0g

乳糖 328.5g

玉米淀粉 17.5g

聚乙烯乙二醇6000 5.0g

滑石粉 25.0g

硬脂酸镁 4.0g

纯化水适量

固体成分先过0.6mm网孔的筛子，然后混合活性成分、乳糖、滑石粉和一半淀粉。剩余的一半淀粉悬浮于65ml水中，将该悬浮液加入260ml沸腾的聚乙烯乙二醇的水溶液。得到的糊状物加入到粉状物中，混合物搅拌成粒，如果必要的化可以再加水。药粒在35℃过夜干燥后，过1.2mm网孔的筛子，压制成两侧凹陷的直径约10mm的片剂，并在上侧有一条掰开切痕。

实施例16

每一粒含有100mg 2-(2，6-二氧-3-羟基-5-氟哌啶-5-烷)-4-氨基异吲哚啉-1-酮的凝胶胶囊，可以通过下述的方法制备：

成分(1000粒)

2-(2，6-二氧-3-羟基-5-氟哌啶-5-烷)-4-氨基异吲哚啉-1-酮 100.0g

微晶纤维素 30.0g

十二烷基硫酸钠 2.0g

硬脂酸镁 8.0g

十二烷基硫酸钠过0.2mm网孔的筛子筛到2-(2，6-二氧-3-羟基-5-氟哌啶-5-烷)-4-氨基异吲哚啉-1-酮中，然后混合两种组分10分钟。微晶纤维素过0.9mm网孔的筛子后加入，然后将所以组分混合10分钟。最后，硬脂酸镁过0.8mm网孔的筛子后加入，进一步混合3分钟后，混合物分成每份140mg装入拉长的“0”形凝胶胶囊中。

实施例17

0.2％的注射液或输液可以按照下述的方法制备：

2-(2，6-二氧-3-羟基哌啶-5-烷)-4-氨基异吲哚 5.0g

氯化钠 22.5g

磷酸盐缓冲液pH7.4 300.0g

纯化水加到2500.0ml

2-(2，6-二氧-3-羟基哌啶-5-烷)-4-氨基异吲哚啉-1-酮盐酸溶于1000ml水中，微滤。加入缓冲液后，用水补加到2500ml。如果要制成剂量单位形式，则分成1.0或2.5ml的量装入玻璃安瓿(每一个分别装有2.0或5.0mg的药效成分)。

Claims

1.一种化合物，选自由(a)下述通式的异吲哚啉：

其中，

标有“*”的碳原子是手性中心；

X是-C(O)-或-CH₂-；

R¹是1～8个碳原子的烷基或-NHR³；

R²是氢原子，1～8个碳原子的烷基或卤素；

R³是氢原子，2-呋喃基甲基，2-噻吩基甲基，或-COR⁴，其中：

R⁴是1～8个碳原子的烷基，它未被或已被1～8个碳原子的烷氧基取代，苯基，呋喃基，噻吩基，吡咯基，

和(b)易于质子化的所述异吲哚啉的酸加成盐组成的集合。

2.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述异吲哚啉衍生物中的R²是氢原子、甲基或氟。

3.根据权利要求2所述的化合物，其特征在于，所述异吲哚啉衍生物中的R²是氢原子。

4.根据权利要求3所述的化合物，其特征在于，所述异吲哚啉衍生物中的R¹是氨基。

5.根据权利要求4所述的化合物，其特征在于，所述异吲哚啉衍生物中的X是-C(O)-。

6.根据权利要求4所述的化合物，其特征在于，所述异吲哚啉衍生物中的X是-CH₂-。

7.根据权利要求3所述的化合物，其特征在于，所述异吲哚啉衍生物中的R¹是甲基。

8.根据权利要求2所述的化合物，其特征在于，所述异吲哚啉衍生物中的X是-C(O)-。

9.根据权利要求2所述的化合物，其特征在于，所述异吲哚啉衍生物中的X是-CH₂-。

10.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，它是2-(2，6-二氧-3-羟基哌啶-5-基)-4-氨基异吲哚啉-1，3-二酮。

11.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，它是2-(2，6-二氧-3-羟基哌啶-5-基)-4-氨基异吲哚啉-1-酮。

12.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，它是2-(2，6-二氧-3-羟基哌啶-5-基)-4-甲基异吲哚啉-1，3-二酮。

13.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，它是2-(2，6-二氧-3-羟基哌啶-5-基)-4-甲基异吲哚啉-1-酮。

14.权利要求1所述的化合物在制备用于减少或抑制哺乳动物体内TNFα的非正常水平的药物方面的用途。

15.一种药物组合物，它含有(i)当以单剂量或多剂量方式给药时，药物有效量的权利要求1所述的化合物，和(ii)药学可接受的载体。