CN1271411C - 空气阻断剂和稳定地贮存含水试剂和含水样品的方法 - Google Patents
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Abstract
用于含水试剂或含水样品的空气阻断剂(下文中称作“含水试剂等”)包含作为有效组分的链烃(直链或支链)和硅油的混合物,该混合物与含水试剂等不能混溶并且比重低于含水试剂等的比重;和稳定地贮存含水试剂等的方法,该方法包括将混合物堆放在含水试剂等的表面上。将用于含水试剂等的空气阻断剂堆放在含水试剂或含水样品的表面上导致含水分析试剂中的有效组分和在含水样品中的待测定组分的稳定贮存,该空气阻断剂具有在阻断剂流入自动分析仪的反应容器中时不会弄脏反应容器的优点。
Description
技术领域
本发明涉及用于通过防止含水试剂或含水样品与空气相接触稳定地贮存待分析的试剂组分或物质的空气阻断剂(空气阻隔剂)。更具体地说,本发明涉及用于通过将空气阻断剂分层堆积在含水试剂或含水样品的表面上稳定地贮存待分析的试剂组分或物质的空气阻断剂,该空气阻断剂在重复使用过程中不会弄脏自动分析仪的测量部分。本发明也涉及使用空气阻断剂稳定地贮存含水试剂或含水样品的方法。
背景技术
目前,用于临床检查的试剂通常是以液体或冷冻干燥的形式提供的。当用于测试时,液体试剂可直接使用而冷冻干燥的试剂需要溶解。通常,在用自动分析仪分析或保存期间准许这些试剂开口放置于凉快的地方。
未密封状态下的试剂会表现出稳定性不足。更具体地说,根据试剂组分的性质随时间增长测量值或敏感性会下降。此外,试剂着色或空白值的上升会经常发生。因此,随时间的增长诊断试剂的最重要的性质准确度和精密度会下降。例如,适用于OCPC(邻甲酚酞络合酮)方法的试剂被用来测定活体体液中的钙。由于用作试剂的碱性缓冲溶液的单乙醇胺吸收空气中的CO2,因此溶液的pH向酸性一侧移动,从而影响测量值。
取决于样品的种类,待分析的组分可能很容易被空气中的氧气氧化。这种样品在取样后必须马上防止与空气相接触,以防止氧化反应发生。
作为解决上述有关试剂和样品问题的技术,本发明者提出了通过将空气阻断剂分层堆积使试剂等稳定化的方法,空气阻断剂与试剂是不可混溶的并且与试剂等相比较其比重低于试剂的比重(日本专利申请公开第185927/1998号)。
该方法可用于不同的试剂和样品。但是,将此方法应用于自动分析仪中所用的试剂时可能发生问题。更具体地说,分层堆积在试剂上的空气阻断剂粘着在自动分析仪的试剂抽吸/倒流喷嘴上。这会引起在向反应容器中排出试剂时少量空气阻断剂与试剂一起流入反应容器中。对于最近使用的由塑料制成的反应容器来说,空气阻断剂粘着在反应容器壁上,因此弄脏器壁表面,另外,空气阻断剂与其它物质相互作用,也会弄脏器壁表面。
因此,一直需要这样一种空气阻断物质,它不会弄脏自动分析仪的由任何材料制成的反应容器,甚至于在向反应容器中排出覆盖有空气阻断剂的试剂时空气阻断剂进入反应容器中也不会弄脏反应容器。
本发明的公开
本发明者为解决这些问题已进行了广泛的研究。结果,本发明者发现含有链(直链或支链)烃和硅油的空气阻断剂由于它们较小的亲合力不会弄脏反应容器,和能够广泛地用于由任何材料制成的反应容器。这一发现导致了本发明的完成。
更具体地说,本发明提供了用于分析试剂或样品的空气阻断剂,它含有链烃和硅油的混合物,与含水的试剂或含水的样品不能混溶和具有比试剂或样品更低的比重。
本发明也提供了用于稳定地贮存含水的分析试剂或含水的样品的方法,包括将上述混合物分层堆积在含水的分析试剂或含水样品的表面上。
附图的简要说明
图1是在使用本发明产品1和参比产品1的情况下弄脏状况的比较性视图。
图2是其中加入本发明的空气阻断剂的含有显色剂的甘油三酯化合物测量试剂的试剂1和不含空气阻断剂的试剂1随时间增长的着色的比较性视图。
实施本发明的最佳方式
在本发明中,将链烃和硅油的混合物用作空气阻断剂。该混合物必须是与目标含水试剂或含水样品(下文中叫做“试剂或样品”)不能混溶的和具有比试剂等更低的比重。通常,如用于临床检查的试剂的试剂比重大约是1。因此,混合物的比重优选是约0.7~0.95,和更优选的是约0.86或更小。优选地混合物在室温是液体和具有与试剂的比重相差约0.05至0.3的比重。
作为混合物组分中的链烃,使用具有粘度小于37cSt和闪点是46℃或更高的链烃。具体的实例包括辛烷、壬烷、癸烷、十一烷、十二烷、十三烷、十四烷等。在这些实例中,具有80℃或更高的闪点的链烃从在实际应用中易于处理的观点来看是优选的。
作为混合物中另一种组分的硅油,可以使用聚烷基硅氧烷、聚烷基苯基硅氧烷、聚烷基氢硅氧烷等。优选使用线性二甲基聚硅氧烷,作为硅油它是可商购的,它是具有不同分子量的线性二甲基聚硅氧烷的混合物和用下式来表示其中n是不同值。
作为线性二甲基聚硅氧烷,具有不同运动粘度的线性二甲基聚硅氧烷是已知的。线性二甲基聚硅氧烷的运动粘度优选地是约1.5~100cSt,和更优选的是3-50cSt。
混合物可用链烃和硅油来制得以使硅油在混合物中的含量是1~99%,优选大约10-90%和更优选是30~50%。
当使用如此制得的链烃和硅油的混合物用作空气阻断剂时,混合物可以被分层堆积在含水试剂或含水样品的表面上,含水试剂或含水样品是以液体形式或通过将冷冻干燥的产品溶解获得的溶液形式存在的。对使用的空气阻断剂的量没有特定的限制。优选地空气阻断剂的使用量是从0.03毫升至1.0毫升每平方厘米试剂表面(无空气阻断剂层形成时与空气相接触的表面)。
稳定的试剂单元可以用常规的方法通过向容器中装入液体试剂和在试剂上层表面上形成链烃和硅油混合物层来制得。可选择地,稳定的试剂单元可以通过向容器中加入链烃和硅油混合物和通过向容器中注射液体试剂来形成混合物层来制得。作为用于试剂单元的容器的材料,可以使用玻璃、金属、塑料等,优选使用不会使空气渗透和具有狭窄开口的容器。
在本发明中,通过使用自动分析仪的试剂抽吸喷嘴、吸管、针头等从容器中只除去试剂等而不使试剂或样品与空气阻断剂相混合来使用该试剂进行试验或检查是很重要的。
如果在试剂中存在有表面活性剂或能使空气阻断剂乳化的其它材料,本发明的效果会变得不充分。如果在测量中具有一定功能的试剂中的任何组分对空气阻断剂具有极高的亲合性,这些组分如果向空气阻断剂层移动可能损害试剂的效果。应小心防止这些情况发生。
工业实用性
本发明的空气阻断剂通过在试剂等的表面分层堆积空气阻断剂来防止试剂等与空气相接触。因此,空气阻断剂能对试剂等提供优异的贮存稳定性,由此使测量能在长时间内进行。
本发明的空气阻断剂不会弄脏可以在自动分析仪的反应容器中使用的材料,如玻璃、石英、塑料(聚丙烯、聚苯乙烯、甲基丙烯酸酯、聚甲基戊烯等)。因此,空气阻断剂可以在自动分析仪中重复使用。
如上所述,本发明能有效地防止试剂等与空气相接触和不会弄脏自动分析仪的反应容器。因此,本发明能被有利地应用于使用自动分析仪进行分析所用的试剂,如碱性磷酸酶测量试剂,钙测量试剂,胆汁酸测量试剂、肌酸酐测量试剂和甘油三酯测量试剂或样品。
实施例
本发明通过下列实施例进行详细叙述,这些实施例不能看作是对本发明的限制。
实施例1
应用于钙测量试剂
将异链烷烃和聚硅氧烷(聚二甲基硅氧烷,200R FLUID,运动粘度:5cSt,Aldrich制造)以6比4的比率混合制备空气阻断剂(本发明产品1)。
根据下面给定的组成将该空气阻断剂分层堆积在钙测量试剂的试剂1上。使用日立7170自动分析仪,将150微升的试剂1加入到4微升的样品中,将混合物搅拌,然后在37℃温育5分钟。加入试剂2后,将混合物在37℃温育5分钟。然后测量混合物在600纳米处的吸收度。
使用同一个反应容器(由聚甲基戊烯塑料制成)连续重复四次测量。测量后,用肉眼观察反应容器的弄脏程度并根据下面给出的标准评价。图1显示了弄脏状况。
作为参比,使用只含有异链烷烃替代6∶4的异链烷烃和聚硅氧烷混合物的本发明产品的试剂1制备的参比产品1。
(本发明产品1的试剂组成)
试剂1
单乙醇胺:0.5摩尔
异链烷烃和聚硅氧烷的混合物(比率=6∶4):3毫升(每70毫升瓶)
试剂2
邻-甲酚酞配位酮:0.13毫摩尔
8-羟基-5-磺酸:10毫摩尔
乙酸缓冲溶液:0.24摩尔(pH6.0)
(参比产品1的试剂1)
单乙醇胺:0.5摩尔
异链烷烃:3毫升
(每70毫升瓶)
(反应容器弄脏的评价标准)
评价 状况
- 未弄脏
± 很轻微弄脏
+ 轻微弄脏
++ 弄脏
+++ 明显弄脏
(结果)
反应容器弄脏状况的评价结果列于表1。
表1
试剂 | 弄脏程度 |
本发明产品1参比产品1 | -+++ |
从这些结果可清楚地看到,使用本发明产品1连续四次测量后反应容器未被弄脏。相反,使用参比产品1时反应容器的内壁被弄脏。
如图1所示,使用本发明产品1测量后未发现反应容器被弄脏(图1右)。相反,使用参比产品时发现反应容器的中心被弄脏(图1左)。
如上所述,使用链烃和聚硅氧烷混合物的本发明的空气阻断剂在重复使用期间不会导致反应容器被弄脏。
实施例2
应用于碱性磷酸酶测量试剂
将链烃与硅油的每种混合物(空气阻断剂)分层堆放在具有下面给定组成的碱性磷酸酶测量试剂的试剂1上。准许混合物开口置于凉快的地方(8℃)。根据下面给定的方法用该碱性磷酸酶测量试剂连续地测定人血清中的碱性磷酸酶活性。比较和检查测量值的变化,结果列于表2。
(试剂组成)
试剂1
乙基氨基乙醇缓冲溶液:1.0摩尔(pH9.9)
氯化镁:0.5毫摩尔
空气阻断剂*(见表2):0.2毫升/厘米2
试剂2
对硝基苯基磷酸酯:15毫摩尔
*每1厘米2的试剂容器的开口面积加入量(下文中相同)
(测量方法)
将260微升试剂1加入到4微升样品中。将混合物搅拌,然后在37℃温育5分钟。加入130微升的试剂2后,搅拌混合物。用试剂空白作参比,使用日立7150自动分析仪在37℃下测定混合物从2分钟至5分钟在450纳米波长处吸收度的变化。用生理盐水溶液作为试剂空白。根据从对硝基苯基磷酸酯(它是反应产物)的分子消光系数,和吸收度的变化导出的换算因子计算碱性磷酸酶(ALP)活性。
(结果)
表2
空气阻断剂 | ALP测量值(U/1) | |||
0天 | 7天 | 14天 | 22天 | |
十一烷+聚硅氧烷十二烷+聚硅氧烷十三烷+聚硅氧烷十四烷+聚硅氧烷异链烷烃+聚硅氧烷未加(参比) | 444442442443443443 | 442444441441444385 | 443441443442442329 | 442443442444442237 |
从这些结果可清楚地看到,在未加入空气阻断剂(参比)的情况下测量值随时间增长显著下降。相反,在使用本发明的空气阻断剂情况下22天以后测量值没有表现出降低。更具体地说,通过使用本发明的空气阻断剂碱性磷酸酶活性能在长时间内被精确地测量。
实施例3
应用于胆汁酸测量试剂
根据下面给定的组成将十一烷和聚硅氧烷的混合物(比率=6∶4)加入到胆汁酸测量试剂的试剂2中作为空气阻断剂(本发明产品2)。准许混合物开口放置在凉处。用胆汁酸测量试剂的试剂2连续地测量胆汁酸标准化溶液(50微摩尔)。比较和检查测量敏感性的变化,结果列于表3。作为参比,使用了不包括上述十一烷/聚硅氧烷混合物的试剂2(参比产品2)。
(试剂组成)
试剂1
氧化的β-硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸:0.99毫克/毫升
甘氨酸缓冲溶液:0.03摩尔(pH4.0)
试剂2
还原的β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸:5.04毫克/毫升
3α-羟甾类脱氢酶:9.5U/毫升
十一烷和聚硅氧烷的混合物:0.3毫升/厘米2
二乙醇胺缓冲溶液:0.2摩尔(pH9.2)
(测量方法)
将260微升的试剂1加入到3微升的样品中。将混合物在37℃温育5分钟。加入130微升的试剂2后,将混合物搅拌。用试剂空白作参比,使用日立7150自动分析仪在37℃下测量混合物从1分钟至3分钟在405纳米波长处吸收度的变化。用生理盐水溶液作为试剂空白。
(结果)
表3
保存 | 胆汁酸测量敏感性(mAbs/分钟) | |
本发明产品2 | 参比产品2 | |
0天8天16天24天 | 34333332 | 34242219 |
从这些结果可清楚地看到,在未加入空气阻断剂(参比产品2)的情况下测量的敏感度随时间增长显著降低。相反,在使用本发明的空气阻断剂情况下测量敏感度未降低。更具体地说,通过使用本发明的空气阻断剂的方法胆汁酸能在长时间内被精确地测量。
实施例4
应用于肌酸酐测量试剂
根据下面给定的组成将十三烷和聚硅氧烷的混合物(比率=6∶4)加入到肌酸酐测量试剂的试剂1中作为空气阻断剂(本发明产品3)。准许混合物开口放置在凉处。用肌酸酐测量试剂的试剂1连续测量肌酸酐标准化溶液(10.0毫克/分升)。比较和检查测量敏感度的变化,结果列于表4。作为参比,使用了不包括上述十三烷和聚硅氧烷混合物的试剂1(参比产品3)。
(试剂组成)
试剂1
氢氧化钠:0.2摩尔
十三烷和聚硅氧烷的混合物:0.2毫升/厘米2
试剂2
2,4,6-三硝基苯酚:28.4毫摩尔
(测量方法)
将300微升的试剂1加入到15微升的样品中。将混合物搅拌,然后在37℃温育5分钟。加入75微升的试剂2后,将混合物搅拌,然后在37℃温育5分钟。用试剂空白作参比,使用日立7150自动分析仪测量在505纳米波长处的吸收度。用生理盐水溶液作为试剂空白。
(结果)
表4
保存 | 肌酸酐测量敏感度(mAbs/100mg/dl) | |
本发明产品3 | 参比产品3 | |
0天8天16天 | 931930931 | 93037194 |
从这些结果清楚可见,在不加入空气阻断剂(参比产品3)的情况下测量敏感度随时间增长显著降低。相反,在使用本发明的空气阻断剂(本发明产品3)情况下测量敏感度未下降。更具体地说,通过使用本发明的空气阻断剂的方法肌酸酐可以在长时间内被精确地测量。
实施例5
应用于甘油三酯测量试剂
根据下列给定的组成将空气阻断剂(十四烷和聚硅氧烷的混合物(比率=6∶4))加入到含有甘油三酯测量试剂的显色剂的试剂1中(本发明产品4)。准许该产品开口放置于凉处。使用下面给出的测量方法比较试剂1随时间增长的着色度与不含上述十四烷/聚硅氧烷混合物的试剂1(参比产品4)随时间增长的着色度,结果列于图2。
(试剂组成)
试剂1
甘油激酶:900U/升
3-磷酸甘油酯氧化酶:3800U/升
过氧化物酶:1950U/升
钠3,5-二甲氧基-N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)苯胺:1.8毫摩尔
十四烷和聚硅氧烷的混合物:0.2毫升/厘米2
良好的缓冲溶液:0.2摩尔(pH6.5)
(测量方法)
将10毫升试剂1开口在凉处放置40天。用试剂空白作参比,使用Beckman DU640分光光度计测量试剂从400纳米至800纳米范围波长处的吸收光谱。用蒸馏水作为试剂空白。
(结果)
从图2清楚地看到,在不加入空气阻断剂(参比产品4)的情况下,试剂吸收了空气中的氧气,由此导致显色剂的氧化反应进行。如图2(a)所示,观察到在590纳米处表现出吸收峰的显著的蓝色。
相反,在使用空气阻断剂(本发明产品4)的情况下,如图2(b)所示,没有观察到试剂的氧化反应和着色反应。更具体地说,根据使用本发明的空气阻断剂的方法,能够预防甘油三酯测量试剂的着色反应,因此试剂能够稳定地贮存较长的时间。
Claims (11)
1.用于含水试剂或含水样品的空气阻断剂,包含链烃和运动粘度为100cSt或更低的硅油的混合物,它与含水试剂或含水样品不能混溶并且比重低于试剂或样品的比重。
2.根据权利要求1的空气阻断剂,其中链烃是液体石蜡、异链烷烃。
3.根据权利要求1的空气阻断剂,其中硅油是聚烷基硅氧烷、聚烷基苯基硅氧烷或聚烷基氢硅氧烷。
4.根据权利要求1的空气阻断剂,其中链烃和硅油的混合物的比重是0.7~0.95。
5.根据权利要求1、3和4中任一个的空气阻断剂,其中硅油的含量是1-99%。
6.根据权利要求1、3和4中任一个的空气阻断剂,其中硅油的含量是10-90%。
7.根据权利要求1、3和4中任一个的空气阻断剂,其中硅油的含量是30-50%。
8.根据权利要求1的空气阻断剂,其中含水试剂用于自动分析仪。
9.根据权利要求1的空气阻断剂,其中含水样品是用自动分析仪分析的。
10.根据权利要求1的空气阻断剂,其中链烃是癸烷、十一烷、十二烷或十三烷。
11.稳定贮存含水分析试剂或含水样品的方法,包括在含水试剂或含水样品的表面上分层堆积链烃和运动粘度为100cSt或更低的硅油的混合物,该混合物与含水试剂或含水样品不能混合并且比重低于试剂或样品的比重。
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