CN1253588A - 在植物中合成长链多不饱和脂肪酸的方法和组合物 - Google Patents
在植物中合成长链多不饱和脂肪酸的方法和组合物 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1253588A CN1253588A CN98804091A CN98804091A CN1253588A CN 1253588 A CN1253588 A CN 1253588A CN 98804091 A CN98804091 A CN 98804091A CN 98804091 A CN98804091 A CN 98804091A CN 1253588 A CN1253588 A CN 1253588A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- seq
- acid
- desaturases
- fatty acid
- nucleotide sequence
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 148
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 71
- 235000020978 long-chain polyunsaturated fatty acids Nutrition 0.000 title claims description 12
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 title description 5
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 title description 4
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims abstract description 86
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 claims abstract description 56
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 claims abstract description 55
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 claims abstract description 55
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 claims abstract description 55
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 claims abstract description 18
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 claims abstract description 8
- 235000020777 polyunsaturated fatty acids Nutrition 0.000 claims description 108
- 241000907999 Mortierella alpina Species 0.000 claims description 92
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 90
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims description 87
- 239000003921 oil Substances 0.000 claims description 81
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 claims description 81
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims description 68
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 claims description 67
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 64
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 63
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims description 57
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 57
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 56
- 235000013350 formula milk Nutrition 0.000 claims description 47
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 46
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 46
- 230000008859 change Effects 0.000 claims description 45
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 43
- HOBAELRKJCKHQD-UHFFFAOYSA-N (8Z,11Z,14Z)-8,11,14-eicosatrienoic acid Natural products CCCCCC=CCC=CCC=CCCCCCCC(O)=O HOBAELRKJCKHQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 38
- HOBAELRKJCKHQD-QNEBEIHSSA-N dihomo-γ-linolenic acid Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCCCC(O)=O HOBAELRKJCKHQD-QNEBEIHSSA-N 0.000 claims description 38
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 36
- 239000008101 lactose Substances 0.000 claims description 35
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 claims description 35
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 claims description 34
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 34
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 claims description 34
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 claims description 34
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 claims description 34
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 claims description 34
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 claims description 32
- 239000011707 mineral Substances 0.000 claims description 32
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 claims description 32
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 31
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 30
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 claims description 30
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 claims description 28
- 108010073771 Soybean Proteins Proteins 0.000 claims description 28
- 235000019710 soybean protein Nutrition 0.000 claims description 28
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 27
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Natural products OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 claims description 26
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 25
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 25
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 claims description 24
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 claims description 24
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 claims description 24
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 24
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims description 21
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 claims description 21
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 claims description 21
- 235000019166 vitamin D Nutrition 0.000 claims description 20
- 239000011710 vitamin D Substances 0.000 claims description 20
- 230000000050 nutritive effect Effects 0.000 claims description 19
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 19
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 claims description 19
- 241000235575 Mortierella Species 0.000 claims description 18
- 235000019484 Rapeseed oil Nutrition 0.000 claims description 17
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 17
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 17
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 claims description 17
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical group [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 239000011575 calcium Substances 0.000 claims description 16
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 claims description 16
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 claims description 15
- 239000008267 milk Substances 0.000 claims description 15
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 claims description 15
- 239000005862 Whey Substances 0.000 claims description 13
- 102000007544 Whey Proteins Human genes 0.000 claims description 13
- 108010046377 Whey Proteins Proteins 0.000 claims description 13
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 13
- GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N d-alpha-tocopherol Natural products OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 claims description 13
- LDVVTQMJQSCDMK-UHFFFAOYSA-N 1,3-dihydroxypropan-2-yl formate Chemical compound OCC(CO)OC=O LDVVTQMJQSCDMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 claims description 11
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 claims description 11
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 11
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 10
- UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N triformin Chemical compound O=COCC(OC=O)COC=O UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 9
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 9
- 230000003050 macronutrient Effects 0.000 claims description 9
- 235000021073 macronutrients Nutrition 0.000 claims description 9
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 241000233866 Fungi Species 0.000 claims description 8
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 claims description 8
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 claims description 8
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 claims description 8
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 8
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 claims description 7
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 239000010949 copper Substances 0.000 claims description 7
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 claims description 7
- 239000011734 sodium Substances 0.000 claims description 7
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 claims description 7
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 claims description 7
- 239000011701 zinc Substances 0.000 claims description 7
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 claims description 7
- 235000016804 zinc Nutrition 0.000 claims description 7
- FPIPGXGPPPQFEQ-UHFFFAOYSA-N 13-cis retinol Natural products OCC=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- FPIPGXGPPPQFEQ-BOOMUCAASA-N Vitamin A Natural products OC/C=C(/C)\C=C\C=C(\C)/C=C/C1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-BOOMUCAASA-N 0.000 claims description 6
- 229930003316 Vitamin D Natural products 0.000 claims description 6
- QYSXJUFSXHHAJI-XFEUOLMDSA-N Vitamin D3 Natural products C1(/[C@@H]2CC[C@@H]([C@]2(CCC1)C)[C@H](C)CCCC(C)C)=C/C=C1\C[C@@H](O)CCC1=C QYSXJUFSXHHAJI-XFEUOLMDSA-N 0.000 claims description 6
- 229930003427 Vitamin E Natural products 0.000 claims description 6
- FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N all-trans-retinol Chemical compound OC\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N 0.000 claims description 6
- 230000001851 biosynthetic effect Effects 0.000 claims description 6
- 239000002775 capsule Substances 0.000 claims description 6
- 238000000909 electrodialysis Methods 0.000 claims description 6
- WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N gamma-tocopherol Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC1CCC2C(C)C(O)C(C)C(C)C2O1 WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 claims description 6
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 235000019155 vitamin A Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000011719 vitamin A Substances 0.000 claims description 6
- 150000003710 vitamin D derivatives Chemical class 0.000 claims description 6
- 235000019165 vitamin E Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000011709 vitamin E Substances 0.000 claims description 6
- 229940045997 vitamin a Drugs 0.000 claims description 6
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N D-erythro-ascorbic acid Natural products OCC1OC(=O)C(O)=C1O ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- BUGBHKTXTAQXES-UHFFFAOYSA-N Selenium Chemical compound [Se] BUGBHKTXTAQXES-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 229930003270 Vitamin B Natural products 0.000 claims description 5
- 229930003268 Vitamin C Natural products 0.000 claims description 5
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 claims description 5
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 235000021588 free fatty acids Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 claims description 5
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 claims description 5
- WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L manganese(2+);methyl n-[[2-(methoxycarbonylcarbamothioylamino)phenyl]carbamothioyl]carbamate;n-[2-(sulfidocarbothioylamino)ethyl]carbamodithioate Chemical compound [Mn+2].[S-]C(=S)NCCNC([S-])=S.COC(=O)NC(=S)NC1=CC=CC=C1NC(=S)NC(=O)OC WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 5
- 239000011591 potassium Substances 0.000 claims description 5
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 239000011669 selenium Substances 0.000 claims description 5
- 229910052711 selenium Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 235000011649 selenium Nutrition 0.000 claims description 5
- 235000019156 vitamin B Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000011720 vitamin B Substances 0.000 claims description 5
- 235000019154 vitamin C Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000011718 vitamin C Substances 0.000 claims description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 claims description 4
- 230000003570 biosynthesizing effect Effects 0.000 claims description 4
- PNDPGZBMCMUPRI-UHFFFAOYSA-N iodine Chemical compound II PNDPGZBMCMUPRI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000003531 protein hydrolysate Substances 0.000 claims description 4
- 241000195493 Cryptophyta Species 0.000 claims description 3
- 235000003222 Helianthus annuus Nutrition 0.000 claims description 3
- 244000020551 Helianthus annuus Species 0.000 claims description 3
- 235000003255 Carthamus tinctorius Nutrition 0.000 claims description 2
- 244000020518 Carthamus tinctorius Species 0.000 claims description 2
- 235000004431 Linum usitatissimum Nutrition 0.000 claims description 2
- 240000006240 Linum usitatissimum Species 0.000 claims description 2
- 150000002989 phenols Chemical class 0.000 claims description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 2
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 claims description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 claims 5
- OKTJSMMVPCPJKN-IGMARMGPSA-N Carbon-12 Chemical compound [12C] OKTJSMMVPCPJKN-IGMARMGPSA-N 0.000 claims 2
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 claims 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 claims 1
- YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N arachidonic acid Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCC(O)=O YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N 0.000 abstract description 111
- 229960002733 gamolenic acid Drugs 0.000 abstract description 80
- 235000020664 gamma-linolenic acid Nutrition 0.000 abstract description 79
- VZCCETWTMQHEPK-UHFFFAOYSA-N gamma-Linolensaeure Natural products CCCCCC=CCC=CCC=CCCCCC(O)=O VZCCETWTMQHEPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 78
- VZCCETWTMQHEPK-QNEBEIHSSA-N gamma-linolenic acid Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC(O)=O VZCCETWTMQHEPK-QNEBEIHSSA-N 0.000 abstract description 77
- 102100034544 Acyl-CoA 6-desaturase Human genes 0.000 abstract description 59
- 108010037138 Linoleoyl-CoA Desaturase Proteins 0.000 abstract description 59
- 235000021342 arachidonic acid Nutrition 0.000 abstract description 56
- 229940114079 arachidonic acid Drugs 0.000 abstract description 56
- 102100034542 Acyl-CoA (8-3)-desaturase Human genes 0.000 abstract description 31
- 239000000758 substrate Substances 0.000 abstract description 29
- 108010073542 Delta-5 Fatty Acid Desaturase Proteins 0.000 abstract description 28
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 abstract description 23
- 235000020673 eicosapentaenoic acid Nutrition 0.000 abstract description 18
- MBMBGCFOFBJSGT-KUBAVDMBSA-N all-cis-docosa-4,7,10,13,16,19-hexaenoic acid Chemical compound CC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCC(O)=O MBMBGCFOFBJSGT-KUBAVDMBSA-N 0.000 abstract description 17
- DTOSIQBPPRVQHS-PDBXOOCHSA-N alpha-linolenic acid Chemical compound CC\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCCCCC(O)=O DTOSIQBPPRVQHS-PDBXOOCHSA-N 0.000 abstract description 13
- 235000020661 alpha-linolenic acid Nutrition 0.000 abstract description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 7
- 229960004488 linolenic acid Drugs 0.000 abstract description 6
- 150000004668 long chain fatty acids Chemical class 0.000 abstract description 5
- 108010087894 Fatty acid desaturases Proteins 0.000 abstract description 4
- JAZBEHYOTPTENJ-JLNKQSITSA-N all-cis-5,8,11,14,17-icosapentaenoic acid Chemical compound CC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCC(O)=O JAZBEHYOTPTENJ-JLNKQSITSA-N 0.000 abstract description 4
- 229960005135 eicosapentaenoic acid Drugs 0.000 abstract description 4
- 230000004048 modification Effects 0.000 abstract description 4
- 238000012986 modification Methods 0.000 abstract description 4
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 abstract description 3
- 235000020669 docosahexaenoic acid Nutrition 0.000 abstract description 2
- 229940090949 docosahexaenoic acid Drugs 0.000 abstract description 2
- 102000009114 Fatty acid desaturases Human genes 0.000 abstract 1
- JAZBEHYOTPTENJ-UHFFFAOYSA-N eicosapentaenoic acid Natural products CCC=CCC=CCC=CCC=CCC=CCCCC(O)=O JAZBEHYOTPTENJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 abstract 1
- 239000010773 plant oil Substances 0.000 abstract 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 68
- 239000000047 product Substances 0.000 description 55
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 51
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 47
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 40
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 39
- OYHQOLUKZRVURQ-HZJYTTRNSA-N Linoleic acid Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/CCCCCCCC(O)=O OYHQOLUKZRVURQ-HZJYTTRNSA-N 0.000 description 38
- 229960004232 linoleic acid Drugs 0.000 description 36
- NLKNQRATVPKPDG-UHFFFAOYSA-M potassium iodide Chemical compound [K+].[I-] NLKNQRATVPKPDG-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 36
- 235000019197 fats Nutrition 0.000 description 35
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 34
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 34
- OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N folic acid Chemical compound C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 34
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 34
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 34
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 32
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 32
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 32
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 31
- AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N Riboflavin Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N 0.000 description 30
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 30
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 29
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 29
- VYGQUTWHTHXGQB-FFHKNEKCSA-N Retinol Palmitate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C VYGQUTWHTHXGQB-FFHKNEKCSA-N 0.000 description 28
- RMRCNWBMXRMIRW-BYFNXCQMSA-M cyanocobalamin Chemical compound N#C[Co+]N([C@]1([H])[C@H](CC(N)=O)[C@]\2(CCC(=O)NC[C@H](C)OP(O)(=O)OC3[C@H]([C@H](O[C@@H]3CO)N3C4=CC(C)=C(C)C=C4N=C3)O)C)C/2=C(C)\C([C@H](C/2(C)C)CCC(N)=O)=N\C\2=C\C([C@H]([C@@]/2(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=N\C\2=C(C)/C2=N[C@]1(C)[C@@](C)(CC(N)=O)[C@@H]2CCC(N)=O RMRCNWBMXRMIRW-BYFNXCQMSA-M 0.000 description 28
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 28
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 28
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 27
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 26
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 26
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 24
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 23
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 23
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 23
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 22
- 241000020428 Colea Species 0.000 description 21
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 21
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 20
- 238000004817 gas chromatography Methods 0.000 description 20
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 18
- 229960001781 ferrous sulfate Drugs 0.000 description 18
- 239000011790 ferrous sulphate Substances 0.000 description 18
- 235000003891 ferrous sulphate Nutrition 0.000 description 18
- BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate (anhydrous) Chemical compound [Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 18
- 229910000359 iron(II) sulfate Inorganic materials 0.000 description 18
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N taurine Chemical compound NCCS(O)(=O)=O XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 18
- LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 20:1omega9c fatty acid Natural products CCCCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N N-Pteroyl-L-glutaminsaeure Natural products C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 17
- 229960000304 folic acid Drugs 0.000 description 17
- 235000019152 folic acid Nutrition 0.000 description 17
- 239000011724 folic acid Substances 0.000 description 17
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 17
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 17
- WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N (E)-8-Octadecenoic acid Natural products CCCCCCCCCC=CCCCCCCC(O)=O WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- JLPULHDHAOZNQI-ZTIMHPMXSA-N 1-hexadecanoyl-2-(9Z,12Z-octadecadienoyl)-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCC\C=C/C\C=C/CCCCC JLPULHDHAOZNQI-ZTIMHPMXSA-N 0.000 description 16
- QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 9-Heptadecensaeure Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- ZAKOWWREFLAJOT-CEFNRUSXSA-N D-alpha-tocopherylacetate Chemical compound CC(=O)OC1=C(C)C(C)=C2O[C@@](CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C ZAKOWWREFLAJOT-CEFNRUSXSA-N 0.000 description 16
- DFPAKSUCGFBDDF-UHFFFAOYSA-N Nicotinamide Chemical compound NC(=O)C1=CC=CN=C1 DFPAKSUCGFBDDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 239000005642 Oleic acid Substances 0.000 description 16
- ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N Oleic acid Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- ZAKOWWREFLAJOT-UHFFFAOYSA-N d-alpha-Tocopheryl acetate Natural products CC(=O)OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C ZAKOWWREFLAJOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 230000006870 function Effects 0.000 description 16
- QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N isooleic acid Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCCC(O)=O QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 16
- 229940083466 soybean lecithin Drugs 0.000 description 16
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 description 16
- 239000003549 soybean oil Substances 0.000 description 16
- 229940042585 tocopherol acetate Drugs 0.000 description 16
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 15
- 239000001763 2-hydroxyethyl(trimethyl)azanium Substances 0.000 description 15
- 235000019743 Choline chloride Nutrition 0.000 description 15
- AUNGANRZJHBGPY-UHFFFAOYSA-N D-Lyxoflavin Natural products OCC(O)C(O)C(O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O AUNGANRZJHBGPY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 229930003756 Vitamin B7 Natural products 0.000 description 15
- FAPWYRCQGJNNSJ-UBKPKTQASA-L calcium D-pantothenic acid Chemical compound [Ca+2].OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC([O-])=O.OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC([O-])=O FAPWYRCQGJNNSJ-UBKPKTQASA-L 0.000 description 15
- 229960002079 calcium pantothenate Drugs 0.000 description 15
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 15
- SGMZJAMFUVOLNK-UHFFFAOYSA-M choline chloride Chemical compound [Cl-].C[N+](C)(C)CCO SGMZJAMFUVOLNK-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 15
- 229960003178 choline chloride Drugs 0.000 description 15
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 15
- SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L manganese(II) sulfate Chemical compound [Mn+2].[O-]S([O-])(=O)=O SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 15
- 229960003966 nicotinamide Drugs 0.000 description 15
- 235000005152 nicotinamide Nutrition 0.000 description 15
- 239000011570 nicotinamide Substances 0.000 description 15
- ZUFQODAHGAHPFQ-UHFFFAOYSA-N pyridoxine hydrochloride Chemical compound Cl.CC1=NC=C(CO)C(CO)=C1O ZUFQODAHGAHPFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 229960004172 pyridoxine hydrochloride Drugs 0.000 description 15
- 235000019171 pyridoxine hydrochloride Nutrition 0.000 description 15
- 239000011764 pyridoxine hydrochloride Substances 0.000 description 15
- 235000019192 riboflavin Nutrition 0.000 description 15
- 229960002477 riboflavin Drugs 0.000 description 15
- 239000002151 riboflavin Substances 0.000 description 15
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 15
- 235000011912 vitamin B7 Nutrition 0.000 description 15
- 239000011735 vitamin B7 Substances 0.000 description 15
- NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L zinc sulfate Chemical compound [Zn+2].[O-]S([O-])(=O)=O NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 15
- 229960001763 zinc sulfate Drugs 0.000 description 15
- 229910000368 zinc sulfate Inorganic materials 0.000 description 15
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- OPGOLNDOMSBSCW-CLNHMMGSSA-N Fursultiamine hydrochloride Chemical compound Cl.C1CCOC1CSSC(\CCO)=C(/C)N(C=O)CC1=CN=C(C)N=C1N OPGOLNDOMSBSCW-CLNHMMGSSA-N 0.000 description 14
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- ABSPRNADVQNDOU-UHFFFAOYSA-N Menaquinone 1 Natural products C1=CC=C2C(=O)C(CC=C(C)C)=C(C)C(=O)C2=C1 ABSPRNADVQNDOU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 101710202365 Napin Proteins 0.000 description 14
- VYGQUTWHTHXGQB-UHFFFAOYSA-N Retinol hexadecanoate Natural products CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)CCCC1(C)C VYGQUTWHTHXGQB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 235000009499 Vanilla fragrans Nutrition 0.000 description 14
- 235000012036 Vanilla tahitensis Nutrition 0.000 description 14
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 14
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 14
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 14
- 238000005660 chlorination reaction Methods 0.000 description 14
- 229960002104 cyanocobalamin Drugs 0.000 description 14
- 235000000639 cyanocobalamin Nutrition 0.000 description 14
- 239000011666 cyanocobalamin Substances 0.000 description 14
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 14
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 14
- 235000019175 phylloquinone Nutrition 0.000 description 14
- 239000011772 phylloquinone Substances 0.000 description 14
- SHUZOJHMOBOZST-UHFFFAOYSA-N phylloquinone Natural products CC(C)CCCCC(C)CCC(C)CCCC(=CCC1=C(C)C(=O)c2ccccc2C1=O)C SHUZOJHMOBOZST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- MBWXNTAXLNYFJB-NKFFZRIASA-N phylloquinone Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(C/C=C(C)/CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)=C(C)C(=O)C2=C1 MBWXNTAXLNYFJB-NKFFZRIASA-N 0.000 description 14
- 229960001898 phytomenadione Drugs 0.000 description 14
- 239000001508 potassium citrate Substances 0.000 description 14
- QEEAPRPFLLJWCF-UHFFFAOYSA-K potassium citrate (anhydrous) Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O QEEAPRPFLLJWCF-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 14
- 239000011769 retinyl palmitate Substances 0.000 description 14
- 229940108325 retinyl palmitate Drugs 0.000 description 14
- 235000019172 retinyl palmitate Nutrition 0.000 description 14
- 210000000582 semen Anatomy 0.000 description 14
- JIWBIWFOSCKQMA-UHFFFAOYSA-N stearidonic acid Natural products CCC=CCC=CCC=CCC=CCCCCC(O)=O JIWBIWFOSCKQMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 14
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 14
- 235000015870 tripotassium citrate Nutrition 0.000 description 14
- 244000299461 Theobroma cacao Species 0.000 description 13
- 235000016383 Zea mays subsp huehuetenangensis Nutrition 0.000 description 13
- 229910000365 copper sulfate Inorganic materials 0.000 description 13
- ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L copper(II) sulfate Chemical compound [Cu+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 13
- DVSZKTAMJJTWFG-UHFFFAOYSA-N docosa-2,4,6,8,10,12-hexaenoic acid Chemical compound CCCCCCCCCC=CC=CC=CC=CC=CC=CC(O)=O DVSZKTAMJJTWFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 235000020256 human milk Nutrition 0.000 description 13
- 210000004251 human milk Anatomy 0.000 description 13
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 13
- 235000011147 magnesium chloride Nutrition 0.000 description 13
- 235000009973 maize Nutrition 0.000 description 13
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 13
- 108010068370 Glutens Proteins 0.000 description 12
- 235000019485 Safflower oil Nutrition 0.000 description 12
- 235000010418 carrageenan Nutrition 0.000 description 12
- 239000000679 carrageenan Substances 0.000 description 12
- 229940113118 carrageenan Drugs 0.000 description 12
- 229920001525 carrageenan Polymers 0.000 description 12
- 235000019219 chocolate Nutrition 0.000 description 12
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 12
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 12
- 235000021312 gluten Nutrition 0.000 description 12
- 235000007715 potassium iodide Nutrition 0.000 description 12
- 229960004839 potassium iodide Drugs 0.000 description 12
- 235000005713 safflower oil Nutrition 0.000 description 12
- 239000003813 safflower oil Substances 0.000 description 12
- UHVMMEOXYDMDKI-JKYCWFKZSA-L zinc;1-(5-cyanopyridin-2-yl)-3-[(1s,2s)-2-(6-fluoro-2-hydroxy-3-propanoylphenyl)cyclopropyl]urea;diacetate Chemical compound [Zn+2].CC([O-])=O.CC([O-])=O.CCC(=O)C1=CC=C(F)C([C@H]2[C@H](C2)NC(=O)NC=2N=CC(=CC=2)C#N)=C1O UHVMMEOXYDMDKI-JKYCWFKZSA-L 0.000 description 12
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 11
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 11
- DPDMMXDBJGCCQC-UHFFFAOYSA-N [Na].[Cl] Chemical compound [Na].[Cl] DPDMMXDBJGCCQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 11
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 11
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 11
- -1 methane amide Chemical class 0.000 description 11
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 11
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 10
- 235000007689 Borago officinalis Nutrition 0.000 description 10
- 240000004355 Borago officinalis Species 0.000 description 10
- 108010076119 Caseins Proteins 0.000 description 10
- 102000011632 Caseins Human genes 0.000 description 10
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 10
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 10
- HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K trisodium citrate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 10
- 229940038773 trisodium citrate Drugs 0.000 description 10
- 235000019263 trisodium citrate Nutrition 0.000 description 10
- PHIQHXFUZVPYII-ZCFIWIBFSA-N (R)-carnitine Chemical compound C[N+](C)(C)C[C@H](O)CC([O-])=O PHIQHXFUZVPYII-ZCFIWIBFSA-N 0.000 description 9
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 9
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 9
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 9
- BVTBRVFYZUCAKH-UHFFFAOYSA-L disodium selenite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-][Se]([O-])=O BVTBRVFYZUCAKH-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 9
- 239000000686 essence Substances 0.000 description 9
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 9
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 9
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 9
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 9
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 9
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 9
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 9
- 229940093916 potassium phosphate Drugs 0.000 description 9
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 9
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 9
- 235000015921 sodium selenite Nutrition 0.000 description 9
- 239000011781 sodium selenite Substances 0.000 description 9
- 229960001471 sodium selenite Drugs 0.000 description 9
- 229960003080 taurine Drugs 0.000 description 9
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 244000290333 Vanilla fragrans Species 0.000 description 8
- RYYVLZVUVIJVGH-UHFFFAOYSA-N caffeine Chemical compound CN1C(=O)N(C)C(=O)C2=C1N=CN2C RYYVLZVUVIJVGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 8
- 150000005690 diesters Chemical class 0.000 description 8
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 8
- 239000000463 material Substances 0.000 description 8
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 8
- 229910021555 Chromium Chloride Inorganic materials 0.000 description 7
- 102000015781 Dietary Proteins Human genes 0.000 description 7
- 108010010256 Dietary Proteins Proteins 0.000 description 7
- 235000016623 Fragaria vesca Nutrition 0.000 description 7
- 240000009088 Fragaria x ananassa Species 0.000 description 7
- 235000011363 Fragaria x ananassa Nutrition 0.000 description 7
- 102000014171 Milk Proteins Human genes 0.000 description 7
- 108010011756 Milk Proteins Proteins 0.000 description 7
- 101710095856 Napin-3 Proteins 0.000 description 7
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 7
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 7
- QSWDMMVNRMROPK-UHFFFAOYSA-K chromium(3+) trichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Cl-].[Cr+3] QSWDMMVNRMROPK-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 7
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 7
- 235000021245 dietary protein Nutrition 0.000 description 7
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 7
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 7
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 7
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 7
- 230000008676 import Effects 0.000 description 7
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 description 7
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 7
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 7
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 7
- 235000021239 milk protein Nutrition 0.000 description 7
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 7
- 229940080237 sodium caseinate Drugs 0.000 description 7
- TVXXNOYZHKPKGW-UHFFFAOYSA-N sodium molybdate (anhydrous) Chemical compound [Na+].[Na+].[O-][Mo]([O-])(=O)=O TVXXNOYZHKPKGW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 6
- 241000219198 Brassica Species 0.000 description 6
- 235000009025 Carya illinoensis Nutrition 0.000 description 6
- 244000068645 Carya illinoensis Species 0.000 description 6
- 102000007605 Cytochromes b5 Human genes 0.000 description 6
- 108010007167 Cytochromes b5 Proteins 0.000 description 6
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 244000263375 Vanilla tahitensis Species 0.000 description 6
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 6
- 108010033929 calcium caseinate Proteins 0.000 description 6
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 6
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 6
- 238000009795 derivation Methods 0.000 description 6
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 6
- 125000005908 glyceryl ester group Chemical group 0.000 description 6
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N hexadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 6
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 6
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 6
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 6
- PMYDPQQPEAYXKD-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxy-n-naphthalen-2-ylnaphthalene-2-carboxamide Chemical compound C1=CC=CC2=CC(NC(=O)C3=CC4=CC=CC=C4C=C3O)=CC=C21 PMYDPQQPEAYXKD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 5
- FFEARJCKVFRZRR-UHFFFAOYSA-N L-Methionine Natural products CSCCC(N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229930195722 L-methionine Natural products 0.000 description 5
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 5
- 229920000881 Modified starch Polymers 0.000 description 5
- 241001494715 Porphyridium purpureum Species 0.000 description 5
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 5
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 5
- 239000002585 base Substances 0.000 description 5
- 108010011713 delta-15 desaturase Proteins 0.000 description 5
- 238000013461 design Methods 0.000 description 5
- 235000019387 fatty acid methyl ester Nutrition 0.000 description 5
- 235000019688 fish Nutrition 0.000 description 5
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 5
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 5
- 230000036541 health Effects 0.000 description 5
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 5
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 5
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 5
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 5
- 229960004452 methionine Drugs 0.000 description 5
- 231100000862 numbness Toxicity 0.000 description 5
- 235000008935 nutritious Nutrition 0.000 description 5
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 5
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 5
- 238000011160 research Methods 0.000 description 5
- 150000004671 saturated fatty acids Chemical class 0.000 description 5
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 5
- 235000018716 sodium selenate Nutrition 0.000 description 5
- 229960001881 sodium selenate Drugs 0.000 description 5
- 239000011655 sodium selenate Substances 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 241000894007 species Species 0.000 description 5
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 5
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 5
- RJWUMFHQJJBBOD-UHFFFAOYSA-N 2-methylheptadecane Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(C)C RJWUMFHQJJBBOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- IGUZJYCAXLYZEE-UHFFFAOYSA-N 3,4,5-trihydroxypentan-2-one Chemical compound CC(=O)C(O)C(O)CO IGUZJYCAXLYZEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 4
- 108020005544 Antisense RNA Proteins 0.000 description 4
- 241000167854 Bourreria succulenta Species 0.000 description 4
- 235000005979 Citrus limon Nutrition 0.000 description 4
- 244000131522 Citrus pyriformis Species 0.000 description 4
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 4
- 241000168726 Dictyostelium discoideum Species 0.000 description 4
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 4
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 4
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 4
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 235000021355 Stearic acid Nutrition 0.000 description 4
- 108020005038 Terminator Codon Proteins 0.000 description 4
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 4
- 235000014121 butter Nutrition 0.000 description 4
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 4
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 4
- 235000019693 cherries Nutrition 0.000 description 4
- 239000008370 chocolate flavor Substances 0.000 description 4
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 4
- POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-N dodecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCC(O)=O POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 4
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 4
- 235000021323 fish oil Nutrition 0.000 description 4
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 4
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 4
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- VKOBVWXKNCXXDE-UHFFFAOYSA-N icosanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O VKOBVWXKNCXXDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 4
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 4
- XIXADJRWDQXREU-UHFFFAOYSA-M lithium acetate Chemical compound [Li+].CC([O-])=O XIXADJRWDQXREU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 4
- GVALZJMUIHGIMD-UHFFFAOYSA-H magnesium phosphate Chemical compound [Mg+2].[Mg+2].[Mg+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O GVALZJMUIHGIMD-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 4
- 229910000400 magnesium phosphate tribasic Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 4
- OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Natural products CCCCCCCC(C)CCCCCCCCC(O)=O OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000002028 premature Effects 0.000 description 4
- 235000011962 puddings Nutrition 0.000 description 4
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 4
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 4
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 4
- 239000008117 stearic acid Substances 0.000 description 4
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 4
- 230000014621 translational initiation Effects 0.000 description 4
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 4
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 235000008733 Citrus aurantifolia Nutrition 0.000 description 3
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 3
- 241000192700 Cyanobacteria Species 0.000 description 3
- 108020005199 Dehydrogenases Proteins 0.000 description 3
- 201000004624 Dermatitis Diseases 0.000 description 3
- QSJXEFYPDANLFS-UHFFFAOYSA-N Diacetyl Chemical group CC(=O)C(C)=O QSJXEFYPDANLFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102100034543 Fatty acid desaturase 3 Human genes 0.000 description 3
- 206010022971 Iron Deficiencies Diseases 0.000 description 3
- LPHGQDQBBGAPDZ-UHFFFAOYSA-N Isocaffeine Natural products CN1C(=O)N(C)C(=O)C2=C1N(C)C=N2 LPHGQDQBBGAPDZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101100288095 Klebsiella pneumoniae neo gene Proteins 0.000 description 3
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 description 3
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 description 3
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 description 3
- 241000235395 Mucor Species 0.000 description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 3
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 3
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 3
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 3
- 235000011941 Tilia x europaea Nutrition 0.000 description 3
- HXWJFEZDFPRLBG-UHFFFAOYSA-N Timnodonic acid Natural products CCCC=CC=CCC=CCC=CCC=CCCCC(O)=O HXWJFEZDFPRLBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000000218 acetic acid group Chemical group C(C)(=O)* 0.000 description 3
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 3
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 3
- 235000013361 beverage Nutrition 0.000 description 3
- 229960001948 caffeine Drugs 0.000 description 3
- VJEONQKOZGKCAK-UHFFFAOYSA-N caffeine Natural products CN1C(=O)N(C)C(=O)C2=C1C=CN2C VJEONQKOZGKCAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000004422 calculation algorithm Methods 0.000 description 3
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 3
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 3
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 3
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 3
- 239000008373 coffee flavor Substances 0.000 description 3
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 description 3
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 3
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 3
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 3
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 3
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 3
- 230000002354 daily effect Effects 0.000 description 3
- 238000006356 dehydrogenation reaction Methods 0.000 description 3
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 3
- UKMSUNONTOPOIO-UHFFFAOYSA-N docosanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O UKMSUNONTOPOIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 3
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 3
- 235000013861 fat-free Nutrition 0.000 description 3
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 3
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 3
- 235000012907 honey Nutrition 0.000 description 3
- 239000008173 hydrogenated soybean oil Substances 0.000 description 3
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 3
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 3
- 235000012204 lemonade/lime carbonate Nutrition 0.000 description 3
- 239000004571 lime Substances 0.000 description 3
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 description 3
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 3
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 3
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 3
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 3
- 230000000474 nursing effect Effects 0.000 description 3
- 229940038580 oat bran Drugs 0.000 description 3
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 3
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 3
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 3
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 3
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 3
- 150000004804 polysaccharides Chemical class 0.000 description 3
- 108010078347 pregnancy-associated murine protein 1 Proteins 0.000 description 3
- 150000003180 prostaglandins Chemical class 0.000 description 3
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 3
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 3
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 3
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 3
- 235000021003 saturated fats Nutrition 0.000 description 3
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 3
- DCXXMTOCNZCJGO-UHFFFAOYSA-N tristearoylglycerol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC)COC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC DCXXMTOCNZCJGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 3
- GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N α-tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2O[C@@](CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N 0.000 description 3
- DNISEZBAYYIQFB-PHDIDXHHSA-N (2r,3r)-2,3-diacetyloxybutanedioic acid Chemical compound CC(=O)O[C@@H](C(O)=O)[C@H](C(O)=O)OC(C)=O DNISEZBAYYIQFB-PHDIDXHHSA-N 0.000 description 2
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 2
- 241000219195 Arabidopsis thaliana Species 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 235000017166 Bambusa arundinacea Nutrition 0.000 description 2
- 235000017491 Bambusa tulda Nutrition 0.000 description 2
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 2
- PTHCMJGKKRQCBF-UHFFFAOYSA-N Cellulose, microcrystalline Chemical compound OC1C(O)C(OC)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(OC)C(CO)O1 PTHCMJGKKRQCBF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100033149 Cytochrome b5 reductase 4 Human genes 0.000 description 2
- 108030005700 Cytochrome-b5 reductases Proteins 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 2
- 101100532034 Drosophila melanogaster RTase gene Proteins 0.000 description 2
- LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N Elaidinsaeure-aethylester Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001480508 Entomophthora Species 0.000 description 2
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 2
- 239000001828 Gelatine Substances 0.000 description 2
- 241000206672 Gelidium Species 0.000 description 2
- 229920002148 Gellan gum Polymers 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010020100 Hip fracture Diseases 0.000 description 2
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 2
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 2
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- 208000002720 Malnutrition Diseases 0.000 description 2
- 229920000168 Microcrystalline cellulose Polymers 0.000 description 2
- 241000498617 Mucor javanicus Species 0.000 description 2
- IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N N-Heptane Chemical compound CCCCCCC IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 244000196929 Oenothera glazioviana Species 0.000 description 2
- 108020005187 Oligonucleotide Probes Proteins 0.000 description 2
- 241000237502 Ostreidae Species 0.000 description 2
- 241000206744 Phaeodactylum tricornutum Species 0.000 description 2
- 244000082204 Phyllostachys viridis Species 0.000 description 2
- 235000015334 Phyllostachys viridis Nutrition 0.000 description 2
- DLRVVLDZNNYCBX-UHFFFAOYSA-N Polydextrose Polymers OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(O)O1 DLRVVLDZNNYCBX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000233639 Pythium Species 0.000 description 2
- 230000018199 S phase Effects 0.000 description 2
- 241000233671 Schizochytrium Species 0.000 description 2
- XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N Silicon Chemical compound [Si] XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- 244000269722 Thea sinensis Species 0.000 description 2
- 235000006468 Thea sinensis Nutrition 0.000 description 2
- 229920001615 Tragacanth Polymers 0.000 description 2
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 2
- 241000134363 Umbelopsis ramanniana Species 0.000 description 2
- XLOMVQKBTHCTTD-UHFFFAOYSA-N Zinc monoxide Chemical compound [Zn]=O XLOMVQKBTHCTTD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 2
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 2
- 235000010419 agar Nutrition 0.000 description 2
- OENHQHLEOONYIE-UKMVMLAPSA-N all-trans beta-carotene Natural products CC=1CCCC(C)(C)C=1/C=C/C(/C)=C/C=C/C(/C)=C/C=C/C=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)CCCC1(C)C OENHQHLEOONYIE-UKMVMLAPSA-N 0.000 description 2
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 229910021502 aluminium hydroxide Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 235000020244 animal milk Nutrition 0.000 description 2
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 2
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 2
- 239000000305 astragalus gummifer gum Substances 0.000 description 2
- 239000011425 bamboo Substances 0.000 description 2
- SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N bentoquatam Chemical compound O.O=[Si]=O.O=[Al]O[Al]=O SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 2
- 235000013734 beta-carotene Nutrition 0.000 description 2
- 239000011648 beta-carotene Substances 0.000 description 2
- TUPZEYHYWIEDIH-WAIFQNFQSA-N beta-carotene Natural products CC(=C/C=C/C=C(C)/C=C/C=C(C)/C=C/C1=C(C)CCCC1(C)C)C=CC=C(/C)C=CC2=CCCCC2(C)C TUPZEYHYWIEDIH-WAIFQNFQSA-N 0.000 description 2
- 229960002747 betacarotene Drugs 0.000 description 2
- 235000020279 black tea Nutrition 0.000 description 2
- 229910052796 boron Inorganic materials 0.000 description 2
- WTEOIRVLGSZEPR-UHFFFAOYSA-N boron trifluoride Chemical compound FB(F)F WTEOIRVLGSZEPR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 2
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 2
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 2
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 2
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 2
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 238000001311 chemical methods and process Methods 0.000 description 2
- 230000004087 circulation Effects 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- 229960000355 copper sulfate Drugs 0.000 description 2
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 2
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 2
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 229910001873 dinitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 2
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 2
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 2
- KAQKFAOMNZTLHT-VVUHWYTRSA-N epoprostenol Chemical compound O1C(=CCCCC(O)=O)C[C@@H]2[C@@H](/C=C/[C@@H](O)CCCCC)[C@H](O)C[C@@H]21 KAQKFAOMNZTLHT-VVUHWYTRSA-N 0.000 description 2
- 229960001123 epoprostenol Drugs 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- 238000007046 ethoxylation reaction Methods 0.000 description 2
- LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N ethyl oleate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N 0.000 description 2
- 229940093471 ethyl oleate Drugs 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 2
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 2
- 238000004508 fractional distillation Methods 0.000 description 2
- 239000003205 fragrance Substances 0.000 description 2
- 238000002290 gas chromatography-mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 235000010492 gellan gum Nutrition 0.000 description 2
- 239000000216 gellan gum Substances 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000005456 glyceride group Chemical group 0.000 description 2
- 235000019534 high fructose corn syrup Nutrition 0.000 description 2
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 2
- 239000003701 inert diluent Substances 0.000 description 2
- 235000021125 infant nutrition Nutrition 0.000 description 2
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 2
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 2
- 150000002617 leukotrienes Chemical class 0.000 description 2
- 229910003002 lithium salt Inorganic materials 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 230000001071 malnutrition Effects 0.000 description 2
- 235000000824 malnutrition Nutrition 0.000 description 2
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 2
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 2
- VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N methane Natural products C VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000004702 methyl esters Chemical class 0.000 description 2
- 235000019813 microcrystalline cellulose Nutrition 0.000 description 2
- 239000008108 microcrystalline cellulose Substances 0.000 description 2
- 229940016286 microcrystalline cellulose Drugs 0.000 description 2
- 239000004570 mortar (masonry) Substances 0.000 description 2
- 239000005445 natural material Substances 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 208000015380 nutritional deficiency disease Diseases 0.000 description 2
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 2
- 239000002751 oligonucleotide probe Substances 0.000 description 2
- 150000002895 organic esters Chemical class 0.000 description 2
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 2
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 2
- 235000020636 oyster Nutrition 0.000 description 2
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 2
- 239000002304 perfume Substances 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 235000011007 phosphoric acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 2
- 230000002980 postoperative effect Effects 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 210000000664 rectum Anatomy 0.000 description 2
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 2
- 229940091258 selenium supplement Drugs 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 229910052710 silicon Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000010703 silicon Substances 0.000 description 2
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 2
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 2
- 235000013599 spices Nutrition 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 2
- 230000001360 synchronised effect Effects 0.000 description 2
- 229920002994 synthetic fiber Polymers 0.000 description 2
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 2
- QZZGJDVWLFXDLK-UHFFFAOYSA-N tetracosanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QZZGJDVWLFXDLK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 2
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 2
- 230000010474 transient expression Effects 0.000 description 2
- UNXRWKVEANCORM-UHFFFAOYSA-N triphosphoric acid Chemical compound OP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O UNXRWKVEANCORM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940048102 triphosphoric acid Drugs 0.000 description 2
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 description 2
- 235000021122 unsaturated fatty acids Nutrition 0.000 description 2
- OENHQHLEOONYIE-JLTXGRSLSA-N β-Carotene Chemical compound CC=1CCCC(C)(C)C=1\C=C\C(\C)=C\C=C\C(\C)=C\C=C\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C OENHQHLEOONYIE-JLTXGRSLSA-N 0.000 description 2
- BITHHVVYSMSWAG-KTKRTIGZSA-N (11Z)-icos-11-enoic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCCCC(O)=O BITHHVVYSMSWAG-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- MPPODKLDCLFLKT-UHFFFAOYSA-N (3-acetyloxy-2-hydroxypropyl) acetate Chemical compound CC(=O)OCC(O)COC(C)=O MPPODKLDCLFLKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DFJAXEWDHVOILU-UHFFFAOYSA-N (5Z,9E)-5,9-Octadecadienoic acid Natural products CCCCCCCCC=CCCC=CCCCC(O)=O DFJAXEWDHVOILU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PXFBZOLANLWPMH-UHFFFAOYSA-N 16-Epiaffinine Natural products C1C(C2=CC=CC=C2N2)=C2C(=O)CC2C(=CC)CN(C)C1C2CO PXFBZOLANLWPMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CODAYFPFZXWNLD-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxypropanoyl octadecanoate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC(=O)C(C)O CODAYFPFZXWNLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HVCOBJNICQPDBP-UHFFFAOYSA-N 3-[3-[3,5-dihydroxy-6-methyl-4-(3,4,5-trihydroxy-6-methyloxan-2-yl)oxyoxan-2-yl]oxydecanoyloxy]decanoic acid;hydrate Chemical compound O.OC1C(OC(CC(=O)OC(CCCCCCC)CC(O)=O)CCCCCCC)OC(C)C(O)C1OC1C(O)C(O)C(O)C(C)O1 HVCOBJNICQPDBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PIFPCDRPHCQLSJ-WYIJOVFWSA-N 4,8,12,15,19-Docosapentaenoic acid Chemical compound CC\C=C\CC\C=C\C\C=C\CC\C=C\CC\C=C\CCC(O)=O PIFPCDRPHCQLSJ-WYIJOVFWSA-N 0.000 description 1
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OPIFSICVWOWJMJ-AEOCFKNESA-N 5-bromo-4-chloro-3-indolyl beta-D-galactoside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CNC2=CC=C(Br)C(Cl)=C12 OPIFSICVWOWJMJ-AEOCFKNESA-N 0.000 description 1
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 1
- 244000215068 Acacia senegal Species 0.000 description 1
- 241000242764 Aequorea victoria Species 0.000 description 1
- 241000589158 Agrobacterium Species 0.000 description 1
- 241001156002 Anthonomus pomorum Species 0.000 description 1
- 108020004491 Antisense DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000219194 Arabidopsis Species 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 235000016425 Arthrospira platensis Nutrition 0.000 description 1
- 240000002900 Arthrospira platensis Species 0.000 description 1
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 1
- BHELIUBJHYAEDK-OAIUPTLZSA-N Aspoxicillin Chemical compound C1([C@H](C(=O)N[C@@H]2C(N3[C@H](C(C)(C)S[C@@H]32)C(O)=O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC(=O)NC)=CC=C(O)C=C1 BHELIUBJHYAEDK-OAIUPTLZSA-N 0.000 description 1
- 241000003595 Aurantiochytrium limacinum Species 0.000 description 1
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 1
- 229910015900 BF3 Inorganic materials 0.000 description 1
- 102100026189 Beta-galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 240000002791 Brassica napus Species 0.000 description 1
- 235000011293 Brassica napus Nutrition 0.000 description 1
- 206010006895 Cachexia Diseases 0.000 description 1
- 102000000905 Cadherin Human genes 0.000 description 1
- 108050007957 Cadherin Proteins 0.000 description 1
- 241000244203 Caenorhabditis elegans Species 0.000 description 1
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 206010008874 Chronic Fatigue Syndrome Diseases 0.000 description 1
- PIFPCDRPHCQLSJ-UHFFFAOYSA-N Clupanodonic acid Natural products CCC=CCCC=CCC=CCCC=CCCC=CCCC(O)=O PIFPCDRPHCQLSJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700010070 Codon Usage Proteins 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- 241001480517 Conidiobolus Species 0.000 description 1
- OCUCCJIRFHNWBP-IYEMJOQQSA-L Copper gluconate Chemical compound [Cu+2].OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O.OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O OCUCCJIRFHNWBP-IYEMJOQQSA-L 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-GSVOUGTGSA-N D-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 1
- YAHZABJORDUQGO-NQXXGFSBSA-N D-ribulose 1,5-bisphosphate Chemical compound OP(=O)(O)OC[C@@H](O)[C@@H](O)C(=O)COP(O)(O)=O YAHZABJORDUQGO-NQXXGFSBSA-N 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 206010048768 Dermatosis Diseases 0.000 description 1
- 241000199914 Dinophyceae Species 0.000 description 1
- 241001071905 Echium Species 0.000 description 1
- 201000009273 Endometriosis Diseases 0.000 description 1
- KGWDUNBJIMUFAP-KVVVOXFISA-N Ethanolamine Oleate Chemical compound NCCO.CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O KGWDUNBJIMUFAP-KVVVOXFISA-N 0.000 description 1
- 108060002716 Exonuclease Proteins 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 208000027472 Galactosemias Diseases 0.000 description 1
- 208000012671 Gastrointestinal haemorrhages Diseases 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- UXDDRFCJKNROTO-UHFFFAOYSA-N Glycerol 1,2-diacetate Chemical compound CC(=O)OCC(CO)OC(C)=O UXDDRFCJKNROTO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 229930186217 Glycolipid Natural products 0.000 description 1
- 239000005562 Glyphosate Substances 0.000 description 1
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000004144 Green Fluorescent Proteins Human genes 0.000 description 1
- 229920000084 Gum arabic Polymers 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- AVXURJPOCDRRFD-UHFFFAOYSA-N Hydroxylamine Chemical class ON AVXURJPOCDRRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 108090000723 Insulin-Like Growth Factor I Proteins 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- QAQJMLQRFWZOBN-LAUBAEHRSA-N L-ascorbyl-6-palmitate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O QAQJMLQRFWZOBN-LAUBAEHRSA-N 0.000 description 1
- 235000000072 L-ascorbyl-6-palmitate Nutrition 0.000 description 1
- 239000011786 L-ascorbyl-6-palmitate Substances 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 102000004407 Lactalbumin Human genes 0.000 description 1
- 108090000942 Lactalbumin Proteins 0.000 description 1
- 108010059881 Lactase Proteins 0.000 description 1
- 240000008415 Lactuca sativa Species 0.000 description 1
- 239000005639 Lauric acid Substances 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021353 Lignoceric acid Nutrition 0.000 description 1
- CQXMAMUUWHYSIY-UHFFFAOYSA-N Lignoceric acid Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCCC1=CC=C(O)C=C1 CQXMAMUUWHYSIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 1
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 1
- 206010025476 Malabsorption Diseases 0.000 description 1
- 208000004155 Malabsorption Syndromes Diseases 0.000 description 1
- 102100027329 Malonyl-CoA-acyl carrier protein transacylase, mitochondrial Human genes 0.000 description 1
- 101710137760 Malonyl-CoA-acyl carrier protein transacylase, mitochondrial Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 240000003183 Manihot esculenta Species 0.000 description 1
- 235000016735 Manihot esculenta subsp esculenta Nutrition 0.000 description 1
- 208000009793 Milk Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 201000010859 Milk allergy Diseases 0.000 description 1
- 241001219224 Mortierella elongata Species 0.000 description 1
- 241000048020 Mortierella exigua Species 0.000 description 1
- 241000133355 Mortierella hygrophila Species 0.000 description 1
- 241000306281 Mucor ambiguus Species 0.000 description 1
- 240000005561 Musa balbisiana Species 0.000 description 1
- 235000018290 Musa x paradisiaca Nutrition 0.000 description 1
- XUYPXLNMDZIRQH-LURJTMIESA-N N-acetyl-L-methionine Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(C)=O XUYPXLNMDZIRQH-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- 208000028389 Nerve injury Diseases 0.000 description 1
- 108091005461 Nucleic proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000219925 Oenothera Species 0.000 description 1
- 235000004496 Oenothera biennis Nutrition 0.000 description 1
- 240000008916 Oenothera biennis Species 0.000 description 1
- 208000001132 Osteoporosis Diseases 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241000228143 Penicillium Species 0.000 description 1
- 241000199919 Phaeophyceae Species 0.000 description 1
- 241000233614 Phytophthora Species 0.000 description 1
- 241000206618 Porphyridium Species 0.000 description 1
- 206010057244 Post viral fatigue syndrome Diseases 0.000 description 1
- 206010036618 Premenstrual syndrome Diseases 0.000 description 1
- 108010009736 Protein Hydrolysates Proteins 0.000 description 1
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 description 1
- 208000017442 Retinal disease Diseases 0.000 description 1
- 206010038923 Retinopathy Diseases 0.000 description 1
- 241000235527 Rhizopus Species 0.000 description 1
- 241000223252 Rhodotorula Species 0.000 description 1
- 235000001466 Ribes nigrum Nutrition 0.000 description 1
- 241001312569 Ribes nigrum Species 0.000 description 1
- 235000004443 Ricinus communis Nutrition 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 1
- 102000013275 Somatomedins Human genes 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000192584 Synechocystis Species 0.000 description 1
- DFJAXEWDHVOILU-KWUOUXIESA-N Taxoleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CC\C=C/CCCC(O)=O DFJAXEWDHVOILU-KWUOUXIESA-N 0.000 description 1
- 235000009470 Theobroma cacao Nutrition 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 241001180933 Trichodesma <angiosperm> Species 0.000 description 1
- UDXANBFMQUOKTQ-UHFFFAOYSA-N Tritridecanoin Chemical compound CCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(OC(=O)CCCCCCCCCCCC)COC(=O)CCCCCCCCCCCC UDXANBFMQUOKTQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 1
- 208000009911 Urinary Calculi Diseases 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 235000010489 acacia gum Nutrition 0.000 description 1
- 239000000205 acacia gum Substances 0.000 description 1
- 238000010306 acid treatment Methods 0.000 description 1
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000000783 alginic acid Substances 0.000 description 1
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 1
- 229960001126 alginic acid Drugs 0.000 description 1
- 150000004781 alginic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000029936 alkylation Effects 0.000 description 1
- 238000005804 alkylation reaction Methods 0.000 description 1
- AHANXAKGNAKFSK-PDBXOOCHSA-N all-cis-icosa-11,14,17-trienoic acid Chemical compound CC\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCCCCCCC(O)=O AHANXAKGNAKFSK-PDBXOOCHSA-N 0.000 description 1
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 1
- 229940087168 alpha tocopherol Drugs 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 229940126575 aminoglycoside Drugs 0.000 description 1
- 238000002399 angioplasty Methods 0.000 description 1
- 239000010775 animal oil Substances 0.000 description 1
- 208000022531 anorexia Diseases 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000003627 anti-cholesterol Effects 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003816 antisense DNA Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000149 argon plasma sintering Methods 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 1
- 235000021028 berry Nutrition 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 230000006696 biosynthetic metabolic pathway Effects 0.000 description 1
- VQLYBLABXAHUDN-UHFFFAOYSA-N bis(4-fluorophenyl)-methyl-(1,2,4-triazol-1-ylmethyl)silane;methyl n-(1h-benzimidazol-2-yl)carbamate Chemical compound C1=CC=C2NC(NC(=O)OC)=NC2=C1.C=1C=C(F)C=CC=1[Si](C=1C=CC(F)=CC=1)(C)CN1C=NC=N1 VQLYBLABXAHUDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 230000036772 blood pressure Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 150000001721 carbon Chemical group 0.000 description 1
- 235000011089 carbon dioxide Nutrition 0.000 description 1
- 229960004203 carnitine Drugs 0.000 description 1
- 239000012159 carrier gas Substances 0.000 description 1
- 238000012219 cassette mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 235000015111 chews Nutrition 0.000 description 1
- 229940099352 cholate Drugs 0.000 description 1
- BHQCQFFYRZLCQQ-OELDTZBJSA-N cholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 BHQCQFFYRZLCQQ-OELDTZBJSA-N 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 239000004927 clay Substances 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 235000008504 concentrate Nutrition 0.000 description 1
- 108091036078 conserved sequence Proteins 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 229940108925 copper gluconate Drugs 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- HAAZLUGHYHWQIW-KVQBGUIXSA-N dGTP Chemical class C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 HAAZLUGHYHWQIW-KVQBGUIXSA-N 0.000 description 1
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000013016 damping Methods 0.000 description 1
- GHVNFZFCNZKVNT-UHFFFAOYSA-N decanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCC(O)=O GHVNFZFCNZKVNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 206010061428 decreased appetite Diseases 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000002939 deleterious effect Effects 0.000 description 1
- 108010005155 delta-12 fatty acid desaturase Proteins 0.000 description 1
- CYQFCXCEBYINGO-IAGOWNOFSA-N delta1-THC Chemical compound C1=C(C)CC[C@H]2C(C)(C)OC3=CC(CCCCC)=CC(O)=C3[C@@H]21 CYQFCXCEBYINGO-IAGOWNOFSA-N 0.000 description 1
- 230000000994 depressogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000645 desinfectant Substances 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 230000000378 dietary effect Effects 0.000 description 1
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 1
- 239000012154 double-distilled water Substances 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 235000018927 edible plant Nutrition 0.000 description 1
- 210000002969 egg yolk Anatomy 0.000 description 1
- PRHHYVQTPBEDFE-UHFFFAOYSA-N eicosatrienoic acid Natural products CCCCCC=CCC=CCCCCC=CCCCC(O)=O PRHHYVQTPBEDFE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940108623 eicosenoic acid Drugs 0.000 description 1
- BITHHVVYSMSWAG-UHFFFAOYSA-N eicosenoic acid Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCCCC(O)=O BITHHVVYSMSWAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000026500 emaciation Diseases 0.000 description 1
- 239000003344 environmental pollutant Substances 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- FARYTWBWLZAXNK-WAYWQWQTSA-N ethyl (z)-3-(methylamino)but-2-enoate Chemical compound CCOC(=O)\C=C(\C)NC FARYTWBWLZAXNK-WAYWQWQTSA-N 0.000 description 1
- 125000004494 ethyl ester group Chemical group 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000000105 evaporative light scattering detection Methods 0.000 description 1
- 229940045761 evening primrose extract Drugs 0.000 description 1
- 235000008524 evening primrose extract Nutrition 0.000 description 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 1
- 102000013165 exonuclease Human genes 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 235000013410 fast food Nutrition 0.000 description 1
- 230000004129 fatty acid metabolism Effects 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 1
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000001640 fractional crystallisation Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 238000010230 functional analysis Methods 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 125000002791 glucosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 1
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 description 1
- 108010083391 glycinin Proteins 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- XDDAORKBJWWYJS-UHFFFAOYSA-N glyphosate Chemical compound OC(=O)CNCP(O)(O)=O XDDAORKBJWWYJS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940097068 glyphosate Drugs 0.000 description 1
- 239000005090 green fluorescent protein Substances 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 235000013402 health food Nutrition 0.000 description 1
- 230000037219 healthy weight Effects 0.000 description 1
- FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N hexanoic acid Chemical compound CCCCCC(O)=O FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000703 high-speed centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 1
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 1
- 230000036571 hydration Effects 0.000 description 1
- 238000006703 hydration reaction Methods 0.000 description 1
- 150000002430 hydrocarbons Chemical group 0.000 description 1
- 239000000413 hydrolysate Substances 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000003999 initiator Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000009413 insulation Methods 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 1
- ICIWUVCWSCSTAQ-UHFFFAOYSA-M iodate Chemical compound [O-]I(=O)=O ICIWUVCWSCSTAQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 1
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000013675 iodine Nutrition 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 229940116108 lactase Drugs 0.000 description 1
- 230000006651 lactation Effects 0.000 description 1
- 210000000088 lip Anatomy 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 159000000002 lithium salts Chemical class 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 239000006210 lotion Substances 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 239000000395 magnesium oxide Substances 0.000 description 1
- CPLXHLVBOLITMK-UHFFFAOYSA-N magnesium oxide Inorganic materials [Mg]=O CPLXHLVBOLITMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- AXZKOIWUVFPNLO-UHFFFAOYSA-N magnesium;oxygen(2-) Chemical compound [O-2].[Mg+2] AXZKOIWUVFPNLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010025482 malaise Diseases 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000007726 management method Methods 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000007102 metabolic function Effects 0.000 description 1
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 230000001035 methylating effect Effects 0.000 description 1
- 238000010258 microfractionation Methods 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 150000002759 monoacylglycerols Chemical class 0.000 description 1
- 238000009343 monoculture Methods 0.000 description 1
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 210000002464 muscle smooth vascular Anatomy 0.000 description 1
- 208000029766 myalgic encephalomeyelitis/chronic fatigue syndrome Diseases 0.000 description 1
- 235000021290 n-3 DPA Nutrition 0.000 description 1
- 230000008764 nerve damage Effects 0.000 description 1
- 201000001119 neuropathy Diseases 0.000 description 1
- 230000007823 neuropathy Effects 0.000 description 1
- 239000000041 non-steroidal anti-inflammatory agent Substances 0.000 description 1
- 229940021182 non-steroidal anti-inflammatory drug Drugs 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000031787 nutrient reservoir activity Effects 0.000 description 1
- 235000006180 nutrition needs Nutrition 0.000 description 1
- 235000003715 nutritional status Nutrition 0.000 description 1
- 235000019895 oat fiber Nutrition 0.000 description 1
- 150000002889 oleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 1
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 235000020660 omega-3 fatty acid Nutrition 0.000 description 1
- 229940012843 omega-3 fatty acid Drugs 0.000 description 1
- 239000006186 oral dosage form Substances 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 201000009868 osmotic diarrhea Diseases 0.000 description 1
- 208000028719 osmotic diarrheal disease Diseases 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- SECPZKHBENQXJG-FPLPWBNLSA-N palmitoleic acid Chemical compound CCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O SECPZKHBENQXJG-FPLPWBNLSA-N 0.000 description 1
- 125000000913 palmityl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000003182 parenteral nutrition solution Substances 0.000 description 1
- 208000033808 peripheral neuropathy Diseases 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003351 photoxidation Effects 0.000 description 1
- 238000000053 physical method Methods 0.000 description 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 1
- 235000013856 polydextrose Nutrition 0.000 description 1
- 239000001259 polydextrose Substances 0.000 description 1
- 229940035035 polydextrose Drugs 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 1
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 description 1
- 229940002612 prodrug Drugs 0.000 description 1
- 239000003380 propellant Substances 0.000 description 1
- 230000012743 protein tagging Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000008521 reorganization Effects 0.000 description 1
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 1
- 210000004994 reproductive system Anatomy 0.000 description 1
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 208000037803 restenosis Diseases 0.000 description 1
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 235000012045 salad Nutrition 0.000 description 1
- 238000001073 sample cooling Methods 0.000 description 1
- 230000036186 satiety Effects 0.000 description 1
- 235000019627 satiety Nutrition 0.000 description 1
- 238000007790 scraping Methods 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 description 1
- PCMORTLOPMLEFB-ONEGZZNKSA-N sinapic acid Chemical compound COC1=CC(\C=C\C(O)=O)=CC(OC)=C1O PCMORTLOPMLEFB-ONEGZZNKSA-N 0.000 description 1
- PCMORTLOPMLEFB-UHFFFAOYSA-N sinapinic acid Natural products COC1=CC(C=CC(O)=O)=CC(OC)=C1O PCMORTLOPMLEFB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000017520 skin disease Diseases 0.000 description 1
- 235000011888 snacks Nutrition 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 235000021262 sour milk Nutrition 0.000 description 1
- 235000000053 special nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 229940082787 spirulina Drugs 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 238000000547 structure data Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 235000011149 sulphuric acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000009469 supplementation Effects 0.000 description 1
- 230000001502 supplementing effect Effects 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- UIERGBJEBXXIGO-UHFFFAOYSA-N thiamine mononitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O.CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N UIERGBJEBXXIGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004860 thiamine mononitrate Drugs 0.000 description 1
- 235000019191 thiamine mononitrate Nutrition 0.000 description 1
- 239000011748 thiamine mononitrate Substances 0.000 description 1
- 125000002769 thiazolinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 150000007970 thio esters Chemical class 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 229960000984 tocofersolan Drugs 0.000 description 1
- 229930003799 tocopherol Natural products 0.000 description 1
- 239000011732 tocopherol Substances 0.000 description 1
- 229960001295 tocopherol Drugs 0.000 description 1
- 235000010384 tocopherol Nutrition 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 230000005068 transpiration Effects 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002525 ultrasonication Methods 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 210000001215 vagina Anatomy 0.000 description 1
- 239000008371 vanilla flavor Substances 0.000 description 1
- 230000001196 vasorelaxation Effects 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 229940046009 vitamin E Drugs 0.000 description 1
- 229940046008 vitamin d Drugs 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
- 238000009736 wetting Methods 0.000 description 1
- 239000011787 zinc oxide Substances 0.000 description 1
- 229960001296 zinc oxide Drugs 0.000 description 1
- 239000002076 α-tocopherol Substances 0.000 description 1
- 235000004835 α-tocopherol Nutrition 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
- C12P7/6409—Fatty acids
- C12P7/6427—Polyunsaturated fatty acids [PUFA], i.e. having two or more double bonds in their backbone
- C12P7/6431—Linoleic acids [18:2[n-6]]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
- C12N9/0071—Oxidoreductases (1.) acting on paired donors with incorporation of molecular oxygen (1.14)
- C12N9/0083—Miscellaneous (1.14.99)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23D—EDIBLE OILS OR FATS, e.g. MARGARINES, SHORTENINGS, COOKING OILS
- A23D9/00—Other edible oils or fats, e.g. shortenings, cooking oils
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
- A23K20/10—Organic substances
- A23K20/158—Fatty acids; Fats; Products containing oils or fats
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/115—Fatty acids or derivatives thereof; Fats or oils
- A23L33/12—Fatty acids or derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/20—Reducing nutritive value; Dietetic products with reduced nutritive value
- A23L33/21—Addition of substantially indigestible substances, e.g. dietary fibres
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/40—Complete food formulations for specific consumer groups or specific purposes, e.g. infant formula
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/02—Nutrients, e.g. vitamins, minerals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/80—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi
- C12N15/81—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi for yeasts
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
- C12N15/8242—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits
- C12N15/8243—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits involving biosynthetic or metabolic pathways, i.e. metabolic engineering, e.g. nicotine, caffeine
- C12N15/8247—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits involving biosynthetic or metabolic pathways, i.e. metabolic engineering, e.g. nicotine, caffeine involving modified lipid metabolism, e.g. seed oil composition
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
- C12P7/6409—Fatty acids
- C12P7/6427—Polyunsaturated fatty acids [PUFA], i.e. having two or more double bonds in their backbone
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
- C12P7/6409—Fatty acids
- C12P7/6427—Polyunsaturated fatty acids [PUFA], i.e. having two or more double bonds in their backbone
- C12P7/6432—Eicosapentaenoic acids [EPA]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
- C12P7/6409—Fatty acids
- C12P7/6427—Polyunsaturated fatty acids [PUFA], i.e. having two or more double bonds in their backbone
- C12P7/6434—Docosahexenoic acids [DHA]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
- C12P7/6436—Fatty acid esters
- C12P7/6445—Glycerides
- C12P7/6472—Glycerides containing polyunsaturated fatty acid [PUFA] residues, i.e. having two or more double bonds in their backbone
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; CARE OF BIRDS, FISHES, INSECTS; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2217/00—Genetically modified animals
- A01K2217/05—Animals comprising random inserted nucleic acids (transgenic)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Abstract
本发明涉及在植物、植物部位和植物细胞例如叶、根、果实和种子中制备不饱和的长链脂肪酸的组合物和方法。编码脂肪酸脱氢酶包括△5-脱氢酶、△6-脱氢酶和△12-脱氢酶的核酸序列和结构被用于制备含有和表达一种或更多的编码一种或更多脱氢酶的转基因的转基因植物、植物部位和细胞。在植物系统中表达具有不同底物特异性的脱氢酶,能够使多不饱和长链脂肪酸如二十二碳六烯酸、二十碳五烯酸、α-亚麻酸、γ-亚麻酸、花生四烯酸等大量产生,从而改变植物、植物部分和组织的脂肪酸谱。对脂肪酸谱的操作能够生产具有商业规模的新型植物油和产品。
Description
相关申请的相互参考
本申请是1997年4月11日提交的USSN08/834,655的部分继续申请,并是1997年4月11日提交的USSN08/833,610、1997年4月11日提交的USSN08/834,033和1997年10月24日提交的USSN08/956,985的部分继续申请。这些公开文本在此引入作为参考。
引言发明领域
本发明涉及调节能改变一种宿主植物中长链多不饱和脂肪酸(PUFAS)的产生的酶和/或酶成分的水平。本发明用植物中PUFAS的产生举例说明。背景
多不饱和脂肪酸(PUFAs)的两个主要家族为ω3脂肪酸如花生四烯酸和ω6脂肪酸如二十碳五烯酸。PUFAs是细胞原生质膜的重要成分,在那里,它们以磷脂的形式存在。PUFAs还是人和动物体内其他重要分子包括前列环素、白三烯和前列腺素的前体。PUFAs对于正常发育特别是婴儿脑部发育以及组织的形成和修复来说是必需的。
四种主要的重要长链PUFAs包括二十二碳六烯酸(DHA)、二十碳五烯酸(EPA)、γ-亚麻酸(GLA)和Stearidonic acid(SDA),DHA和EPA主要见于不同种类的鱼油,GLA见于多种植物包括月见草(Oenothera biennis)、琉璃苣(Borago officinalis)和黑茶簏子(Ribes nigrum)的种子,SDA见于海产油和植物种子。GLA和另一种重要的长链PUFA---花生四烯酸(ARA)都见于丝状真菌。ARA可从动物组织包括肝脏和肾上腺中纯化。
对于DHA来说,存在多种商业生产来源,包括多种海洋生物、获自冷水海鱼的油和蛋黄部分。对于ARA来说,微生物包括被孢霉属、虫霉属、腐霉属和紫球藻属可用于商业生产。SDA的商业来源包括毛束草属和蓝蓟属。GLA的商业来源包括月见草、黑茶簏子和琉璃苣。但是,从天然原料商业生产PUFAs伴随有几个不利之处。PUFAs的天然原料例如动物和植物趋向于具有高异质的油成分,因此由这些原料获得的油需要充分地纯化来分离一种或多种所需的PUFAs或来生产一种富集了一种或多种PUFA的油。天然原料的获得还受制于不能控制的波动。鱼资源可能天然改变或可能由于过度捕捞而缺乏。鱼油有着令人讨厌的味道和气味,这种味道和气味几乎不可能从所需的产品中用商业化的方法去除,从而使这种产品不能作为保健食品。动物油特别是鱼油能积累环境污染物。气候和疾病可导致鱼和植物原料产量的波动。可用来生产替代油的作物的耕地受到人口持续增长以及伴随而来的、不断增加的、在剩余的耕地上进行食品生产的需求的竞争。能够产生PUFAs的作物如琉璃苣并没有进行商业种植,而且在单种栽培时可能不理想。因此在更有价值和技术更成熟的作物能够生长的地方种植这种作物是没有商业竞争力的。有机体如被孢霉的大规模发酵也非常昂贵。天然动物组织含有较低数量的ARA,并且难以加工。微生物如Porphyridium和被孢霉从商业尺度来说难以培养。
含有PUFAs的保健食品和药物制剂能保留PUFA来源的缺陷。保健品如鱼油胶囊可能只含有低水平的特定所需成分,因而需要较大的剂量。高剂量会导致高水平的有害成分包括污染物的摄入。在提供脂肪酸保健品时必需小心,因为过分添加可能导致内源生物合成途径的抑制,并导致与体内其他不同脂成分的必需脂肪酸竞争,从而产生有害的结果。例如食物中含高水平的ω-3脂肪酸的爱斯基摩人容易流血(U.S.Pat.No.4,874,603)。保健品中令人讨厌的味道和气味使这种食谱难以接受,从而阻碍病人的顺应性。
多种酶参与PUFA的生物合成。亚油酸(LA,18:2Δ9,12)由一种Δ12脱氢酶从油酸(18:1Δ9)产生。GLA(18:3Δ6,9,12)由一种Δ6脱氢酶从亚油酸(LA,18:2Δ9,12)产生。ARA(20:4Δ5,8,11,14)从DGLA(20:3Δ8,11,14)产生由一种Δ5脱氢酶催化。但是,动物不能在Δ9位置以外去饱和,因此不能将油酸(18:1Δ9)转变为亚油酸(18:2Δ9,12)。同样,哺乳动物不能合成α-亚麻酸(ALA,18:3Δ9,12,15)。其他的真核细胞包括真菌和植物含有能在位置Δ21和Δ15去饱和的酶。因此,动物的主要多不饱和脂肪酸来源于食物和/或由亚油酸(18:2Δ9,12)或∝-亚麻酸(18:3Δ9,12,15)去饱和和延长来衍生。
多不饱和脂肪酸被认为适用于营养、药物、工业和其他目的。由天然原料和化学合成提供的多不饱和脂肪酸非常昂贵,难以满足商业化的要求。因此,从天然产生这些脂肪酸的物种中获取参与PUFA生物合成的遗传物质,并将分离到的遗传物质单独或组合在一种能进行操作来允许商业规模的PUFAS产生的异源系统中进行表达,将十分有意义。
本发明进一步涉及含有本发明的长链脂肪酸的配方食品、保健食品或液体或固体形式的保健食品。这些配方食品和保健品可用于人或动物。
本发明的配方食品和保健品可进一步包含至少一种选自椰子油、豆油、菜籽油、甘油单酯和甘油二酯、葡萄糖、食用乳糖、电渗析乳清、电渗析脱脂乳、乳清、豆蛋白和其他蛋白水解物的常量营养物。
本发明的配方食品可进一步包含至少一种选自维生素A、C、D、E和B复合物的维生素,和至少一种选自钙、镁、锌、锰、钠、钾、磷、铜、氯、碘、硒和铁的矿物质。
本发明进一步涉及一种治疗患有摄取或产生多不饱和脂肪酸不足的病人的方法,该方法包括给予病人一种足以有效治疗病人的剂量的本发明的代用食品。
本发明进一步涉及本发明的物质的化妆品和药物组合物。
本发明进一步涉及药用载体中的转基因油。本发明进一步涉及含有转基因油的营养保健品、化妆品和婴儿配方食品。
本发明进一步涉及一种获得改变的长链多不饱和脂肪酸生物合成的方法,该方法包含以下步骤:在转基因能够表达和细胞中长链多不饱和脂肪酸生物合成能够改变的条件下,培养一种细胞中含有一种转基因的微生物,该转基因编码一种转基因产物,这种转基因产物使一种脂肪酸分子在自所说脂肪酸分子的羧端的碳5,5或12处去饱和,其中该转基因与一种表达控制序列操纵连接。
本发明进一步涉及含有至少一种选自维生素、矿物质、碳水化合物、糖、氨基酸、游离脂肪酸、磷脂、抗氧化剂和酚类化合物的营养物质的药物组合物。相关文献
用一种Δ6-脱氢酶产生γ-亚麻酸在USJPN5,552,306和USPN5,614,393中介绍。用高山被孢霉(Mortierella alpina)产生8,11-二十碳二烯酸在USPN5,376,541中公开。用沟鞭藻产生二十二碳六烯酸在USPN 5,407,957中介绍。从琉璃苣克隆一种Δ6-脱氢酶在PCT公开文本WO96/21022中介绍。克隆Δ9-脱氢酶在公开的专利申请PCT WO91/13972、EP 0 550 162 A1、EP 0 561 569 A2、EP 0644 263 A2和EP 0736 598A1以及USPN 5,057,419中介绍。从不同的有机体中克隆Δ12脱氢酶在PCT公开文本WO94/11516和USPN5,443,974中介绍。从不同的有机体中克隆Δ15脱氢酶在PCT公开文本WO93/11245中介绍。一种来自Thumbergia alata的Δ6棕榈酰-酰基载体蛋白脱氢酶及其在大肠杆菌中的表达在USPN 5,614,400中介绍。使用一种35S启动子在转基因大豆胚中表达一种大豆硬脂酰-ACP脱氢酶在USPN 5,443,974中公开。
发明简述
本发明提供了在植物和植物细胞中制备多不饱和长链脂肪酸和脱氢酶的新型组合物和方法。这些方法涉及培养一种感兴趣的转化了一种在宿主植物细胞中有功能的表达盒的宿主植物细胞,该表达盒含有一个转录和翻译起始区域,该区域与编码一种能调节PUFAs产生的脱氢酶多肽的DNA序列的5’端框内连接。脱氢酶多肽的表达使参与PUFA生物合成的酶的浓度改变,结果使宿主植物细胞的PUFA谱改变。最感兴趣的是对植物组织和/或植物部位如叶、根、果实和种子中PUFA产生的选择控制。本发明适用于例如DHA、EPA、ARA和GLA的大规模生产,和适用于食用植物组织和/或植物部位的脂肪酸谱的改变。
本发明进一步包括一种纯化的、与SEQ ID NO:1-SEQ ID NO:52所示的核苷酸和多肽序列基本上相关或同源的核苷酸序列或多肽序列。本发明进一步涉及使用SEQ ID NO:1到SEQ ID NO:40所示的序列作为鉴定相关序列的探针、作为表达系统的成分、作为用于生产转基因油的系统的成分的方法。
附图简述
图1显示了多种有机体包括藻类、被孢霉和人中从棕榈酸(C16)合成花生四烯酸(20:4Δ5,8,11,14)和stearidonic acid(18:4Δ6,9,12,15)的可能途径。这些PUFAs可作为人和其他动物的其他重要分子包括前列环素、白三烯和前列腺素的前体,一些这样的重要分子在图中示出。
图2显示了同样从多种有机体中编辑的除ARA外的PUFAs包括EPA和DHA产生的可能途径。
图3A-E显示了高山被孢霉Δ6脱氢酶的DNA序列(SEQ ID NO:1)和推导的氨基酸序列(SEQ ID NO:2)。
图4显示了高山被孢霉Δ6脱氢酶氨基酸序列与其他的脱氢酶和相关序列(SEQ ID NO:7、8、9、10、11、12和13)的并列比较。
图5A-D显示了高山被孢霉Δ12脱氢酶的DNA序列(SEQ ID NO:3)和推导的氨基酸序列(SEQ ID NO:4)。
图6显示了PCR片段(见实施例1)的推导的氨基酸序列(SEQ IDNO:14)。
图7A-D显示了高山被孢霉Δ5脱氢酶的DNA序列(SEQ ID NO:5)。
图8显示了Δ5脱氢酶的蛋白序列(SEQ ID NO:6)与Δ6脱氢酶和相关序列(SEQ ID NO:15、16、17和18)的并列比较。
图9显示了Ma29的蛋白序列与重叠群253538a的并列比较。
图10显示了Ma524的蛋白序列与重叠群253538a的并列比较。
序列表简述
SEQ ID NO:1显示了高山被孢霉Δ6脱氢酶的DNA序列。
SEQ ID NO:2显示了高山被孢霉Δ6脱氢酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:3显示了高山被孢霉Δ12脱氢酶的DNA序列。
SEQ ID NO:4显示了高山被孢霉Δ12脱氢酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:5显示了高山被孢霉Δ5脱氢酶的DNA序列。
SEQ ID NO:6显示了高山被孢霉Δ6脱氢酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:7-SEQ ID NO:13显示了与高山被孢霉Δ6脱氢酶相关的氨基酸序列。
SEQ ID NO:14显示了实施例1的一个PCR片段的氨基酸序列。
SEQ ID NO:15-SEQ ID NO:18显示了与高山被孢霉Δ5和Δ6脱氢酶相关的氨基酸序列。
SEQ ID NO:19-SEQ ID NO:30显示PCR引物序列。
SEQ ID NO:31-SEQ ID NO:37显示人核苷酸序列。
SEQ ID NO:38-SEQ ID NO:44显示人多肽序列。
SEQ ID NO:45-SEQ ID NO:46显示一种盘基网柄菌(Dictyostelium discoideum)脱氢酶的核苷酸和氨基酸序列。
SEQ ID NO:47-SEQ ID NO:50显示一种裂殖壶菌cDNA克隆的核苷酸和氨基酸序列。
优选实施方案的描述
为保证对本发明的完全理解,提供如下定义:
Δ5脱氢酶:Δ5脱氢酶是一种在脂肪酸羧基端的5和6碳原子之间引入一个双键的酶。
Δ6脱氢酶:Δ6脱氢酶是一种在脂肪酸羧基端的6和7碳原子之间引入一个双键的酶。
Δ9脱氢酶:Δ9脱氢酶是一种在脂肪酸羧基端的9和10碳原子之间引入一个双键的酶。
Δ12脱氢酶:Δ12脱氢酶是一种在脂肪酸羧基端的12和13碳原子之间引入一个双键的酶。
脂肪酸:脂肪酸是一组含有一个长烃链和一个末端羧基基团的化合物。脂肪酸包括如下:
脂肪酸 | ||
12:0 | 月桂酸 | |
16:0 | 棕榈酸 | |
16:1 | 棕榈油酸 | |
18:0 | 硬脂酸 | |
18:1 | 油酸 | Δ9-18:1 |
18:2Δ5,9 | taxoleic acid | Δ5,9-18:2 |
18:2Δ6,9 | 6,9-十八碳二烯酸 | Δ6,9-18:2 |
18:2 | 亚油酸 | Δ9,12-18:2(LA) |
18:3Δ6,9,12 | γ亚麻酸 | Δ6,9,12-18:3(GLA) |
18:3Δ5,9,12 | pinolenic acid | Δ5,9,12-18:3 |
18:3 | α-亚麻酸 | Δ9,12,15-18:3(ALA) |
18:4 | stearidonic acid | Δ6,9,12,15-18:4(SDA) |
20:0 | 花生酸 |
20:1 | 二十碳烯酸 | |
22:0 | 二十二烷酸 | |
22:1 | 芥子酸 | |
22:2 | docasadienonicacid | |
20:4ω6 | 花生四烯酸 | Δ5,8,11,14-20:0(ARA) |
20:3ω6 | ω6-二十碳三烯二同-γ亚麻酸 | Δ8,11,14-20:3(DGLA) |
20:5ω3 | 二十碳五烯酸 | Δ5,8,11,14,17-20:5(EPA) |
20:3ω3 | ω3-二十碳三烯酸 | Δ11,16,17-20:3 |
20:4ω3 | ω4-二十碳四烯酸 | Δ8,11,14,17-20:4 |
22:5ω3 | 二十二碳五烯酸 | Δ7,10,13,16,19-22:6(ω3DPA) |
22:6ω3 | 二十二碳六烯酸(cervonic acid) | Δ4,7,10,13,16,19-22:6(DHA) |
24:0 | 木蜡酸 |
考虑到这些定义,本发明涉及提供新型DNA序列、DNA结构、方法和组合物来改变植物细胞中多不饱和长链脂肪酸的含量。植物细胞用含有一种编码能在植物细胞中增加一种或多种PFUA数量的多肽的DNA的表达盒转化。更符合需要的是,可以制备能将表达盒整合到一种宿主细胞的基因组中的整合结构。宿主细胞经过操作来表达一种编码一种(多种)具有去饱和活性的多肽的有义或反义DNA。“脱氢酶”是一种多肽,它能使一种或多种脂肪酸去饱和,来产生一种所需的单价的或多不饱和脂肪酸或其前体。“多肽”是指任何一种氨基酸链,而不考虑其长度或翻译后修饰如糖基化或磷酸化。所表达的酶的底物可以由宿主细胞产生或可以外源提供。
为在一种宿主细胞中成功表达,转化DNA与在宿主细胞中有功能的转录和翻译起始和终止调节区域操纵连接。含有要表达基因的结构可以以整合到宿主细胞的基因组中或以能在宿主细胞中自主复制的形式提供。为制备亚油酸(LA),使用的表达盒一般包括一个能提供Δ12脱氢酶活性的表达盒,优选在一种能产生或摄取油酸的宿主细胞中。为制备ALA,使用的表达盒一般包括一个能提供Δ15或ω3脱氢酶活性的表达盒,优选在一种能产生或摄取LA的宿主细胞中。为制备GLA或SDA,使用的表达盒一般包括一个能提供Δ6脱氢酶活性的表达盒,尤其是在一种能分别产生或摄取LA或ALA的宿主细胞中。ω6型不饱和脂肪酸例如LA或GLA的制备优选在一种能产生ALA的植物中通过抑制Δ15或ω3型脱氢酶的活性来进行,这可通过提供一种Δ15或ω3的反义转录本的表达盒或通过破坏Δ15或ω3脱氢酶基因来完成。类似地,LA或ALA的制备优选在一种含有Δ6脱氢酶活性的植物中通过提供一种Δ6的反义转录本的表达盒或通过破坏Δ6脱氢酶基因来完成。油酸类似物的制备优选在一种含有Δ12脱氢酶活性的植物中通过提供一种Δ12的反义转录本的表达盒或通过破坏Δ12脱氢酶基因来完成。为制备ARA,一般使用一个表达盒来提供Δ5脱氢酶活性,尤其是在一种能产生或摄取DGLA的宿主细胞中。ω6型不饱和脂肪酸例如ARA的制备优选在一种能产生ALA的植物中通过抑制Δ15或ω3型脱氢酶的活性来进行,这可通过提供一种Δ15或ω3的反义转录本的表达盒或通过破坏Δ15或ω3脱氢酶基因来完成。
脂肪酸的转基因植物制备
PUFAs的转基因植物制备与从天然原料如鱼或植物中纯化相比具有多种优点。从重组植物中制备脂肪酸能通过在宿主中提供新的合成途径或抑制不需要的途径来使天然产生的植物脂肪酸谱改变,从而提高所需PUFAs或其接合形式的水平,并降低不需要的PUFAs的水平。在转基因植物中制备脂肪酸还有一个优点,即可以在特定的组织和/或植物部位表达脱氢酶基因来使这些组织或部位的所需PUFAs的水平大大提高,从而使从这些组织进行回收具有更大的商业意义。例如,所需PUFAs可在种子中表达,而分离种子油的技术已经较为成熟。除了能为所需PUFAs的纯化提供原料外,种子油成分还可通过单独或与其他基因如延伸酶组合表达脱氢酶基因来使种子油具有一种浓缩形式的特定PUFA谱。然后就可将浓缩的种子油加入到动物乳和/或合成或半合成乳中来作为不可能或不需要哺乳时的婴儿配方食品,或用于成人或婴儿营养不良或疾病时。
为制备PUFAs,根据宿主细胞、可用的底物和所需的末端产物,有几种多肽特别是脱氢酶引起了人们的注意,它们包括那些能催化硬脂酸至油酸、LA至GLA、ALA至SDA、油酸至LA、LA至ALA的转变的多肽,其中包括能在Δ6、Δ9、Δ12、Δ15或ω3位置去饱和的酶。选择一种特定的具有去饱和活性的多肽,需要考虑的内容包括多肽的最适pH、该多肽是否是一种限速酶或其成分、所用的脱氢酶是否是合成所需的多不饱和脂肪酸所必需、和/或该多肽所需的辅因子。表达的多肽优选具有与其在宿主细胞中位置的生物化学环境相匹配的参数。例如,多肽可能在宿主细胞中与其他酶竞争底物。因此,在决定一种给定的多肽是否适合在一种给定的宿主细胞中改变PUFA的产生时,需要分析多肽的Km和比活。因此在一种特定情况下使用的多肽是能够在所考虑的宿主细胞中所具有的环境中有功能的多肽,而不是任何一种具有脱氢酶活性并具有所需的能改变一种所需PUFA的相应产生的特征的多肽。由棕榈酸(C16)合成花生四烯酸(20:4Δ5、8、11、14)的示意图在图1中显示。该途径的一个关键酶是一种能将DH-γ-亚麻酸(DGLA,二十碳三烯酸)转变为ARA的Δ5脱氢酶。图中还显示了由一种Δ6脱氢酶催化的α-亚麻酸(ALA)向stearidonicacid的转变。除ARA外的PUFAs包括EPA和DHA的产生示于图2。由硬脂酸(C18)合成花生四烯酸(20:4Δ5、8、11、14)中的一个关键酶是一种Δ6脱氢酶,该酶将亚油酸转变为γ-亚麻酸。图中还显示了由一种Δ6脱氢酶催化的α-亚麻酸(ALA)向stearidonic acid的转变。为制备ARA,所用的DNA序列编码一种具有Δ5脱氢酶活性的多肽。在具体情况下,它可与一种能产生具有Δ6脱氢酶活性的多肽的表达盒偶联,并任选与一种能产生Δ15转录产物反义序列的表达盒操纵连接。所用表达盒的组合的选择部分依赖于宿主细胞的PUFA谱。当宿主细胞Δ5脱氢酶活性受到限制时,Δ5脱氢酶的超表达一般单独就足以提供增强的ARA产生。
具有脱氢酶活性的多肽的来源
具有脱氢酶活性的多肽和编码这种多肽的寡核苷酸的来源是能产生一种所需多不饱和脂肪酸的有机体。作为一个例子,能够产生ARA的微生物可用作Δ5脱氢酶基因的一种来源;能够产生GLA或SDA的微生物可用作Δ6脱氢酶和/或Δ12脱氢酶基因的一种来源;这种微生物包括,例如,属于被孢霉属、耳霉属、腐霉属、疫霉属、青霉属、紫球藻属、Coidosporium、毛霉属、链孢属、曲霉属、红酵母属、和虫霉属的微生物。在紫球藻属中,特别感兴趣的是血色紫球藻(Porphyridium cruentum)。在被孢霉属中,特别感兴趣的是长孢被孢霉(Mortierella elongata),微小被孢霉(Mortierellaexigua),喜湿被孢霉(Mortierella hygrophila),拉曼被孢霉(Mortierella ramanniana)angulispora变种,和高山被孢霉。在毛霉属中,特别感兴趣的是卷枝毛霉(Mucor circinelloides)和爪哇毛霉(Mucorjavanicus)。
编码所需脱氢酶的DNA可用多种方法进行鉴定。例如,一种所需脱氢酶的来源如来自被孢霉的基因组或cDNA文库可用能用酶或化学方法进行检测的合成探针进行筛选,探针可由DNA、RNA、或非天然产生的寡核苷酸或其混合物制备。探针可由已知的脱氢酶的DNA用酶学方法合成来用于正常或降低严格条件的杂交方法。寡核苷酸探针也可用来对来源进行筛选,并且可以以已知脱氢酶的序列包括已知脱氢酶中的保守序列或获自所需纯化蛋白的肽序列为基础。以氨基酸序列为基础的寡核苷酸探针可进行简并来包容遗传密码的简并性,或可改变为来源有机体的优选密码子。寡核苷酸还可用作引物来对一种已知或可疑的来源的反转录mRNA进行PCR。PCR产物可以是全长的cDNA,或可以制备成一种用来获得全长cDNA的探针。另外,一种所需蛋白可全序列测定,并且编码该多肽的DNA可进行全合成。
一旦分离到所需的基因组或cDNA,可用已知的方法对其测序。本领域的技术人员都知道,这些方法会产生错误,因此对同一区域进行多次测序是常规,并且还可用来测量所获得的序列中的错误频率,特别是具有重复序列、大的二级结构或异常碱基组成的区域,例如含有高GC碱基含量的区域。当出现不一致时,可进行重新测序并可使用特殊的方法。特殊方法可包括用以下手段来改变测序条件:不同的温度、不同的酶、能使寡核苷酸形成更高级结构的蛋白、改变的核苷酸如ITP或甲基化的dGTP、不同的凝胶组成如加入甲酰胺、不同的引物或处于问题区域不同距离的引物或不同的模板如单链DNA。也可进行mRNA测序。
就大多数而言,编码具有脱氢酶活性的多肽的序列中,一些或全部都来自一种天然原料。但在某些场合,例如,需要用宿主优选的密码子来对全部或部分密码子进行修饰以增强表达。宿主优选的密码子可用特定的感兴趣的宿主中表达量最大的蛋白中频率最高的密码子来确定。这样就可全部或部分合成具有脱氢酶活性的多肽的编码序列。全部或部分DNA也可合成来去除任何不稳定的序列或转录的mRNA中存在的二级结构区域。全部或部分DNA还可合成来将碱基组成改变成一种在所需宿主中更优选的碱基组成。合成序列及将序列连接的方法已在文献中详细介绍。体外诱变和选择、定点诱变或其他方法可用来获得天然产生的脱氢酶基因的突变,从而制备一种具有体内脱氢酶活性并具有更理想的在宿主细胞中功能所需的物理和动力学参数的多肽,例如长半衰期或一种所需多不饱和脂肪酸的较高产生率。
所需的cDNA具有少于60%A+T组成,优选少于50%A+T组成。在以20个碱基对的滑动窗口定域尺度进行衡量时,优选在cDNA中没有大于75%A+T组成的定域,在以60个碱基对的窗口进行衡量时,优选cDNA中没有大于60%A+T的定域,更优选没有大于55%A+T组成的定域。
高山被孢霉脱氢酶
最引起人们注意的是高山被孢霉Δ5脱氢酶、Δ6脱氢酶和Δ12脱氢酶。Δ5脱氢酶含有446个氨基酸,其氨基酸序列示于图7。编码高山被孢霉Δ5脱氢酶的基因可在转基因微生物中表达来增加ARA从DGLA合成。其他与高山被孢霉Δ5脱氢酶DNA在序列上基本上相同或编码与高山被孢霉Δ5脱氢酶多肽在序列上基本上相同的多肽的DNA也可以使用。高山被孢霉Δ6脱氢酶含有457个氨基酸,其预期的分子量为51.8kD,其氨基酸序列示于图3。编码高山被孢霉Δ6脱氢酶的基因可在转基因植物或动物中表达来增加GLA从油酸或stearidonic acid(SDA)从ALA合成。其他与高山被孢霉Δ6脱氢酶DNA在序列上基本上相同或编码与高山被孢霉Δ6脱氢酶多肽在序列上基本上相同的多肽的DNA也可以使用。
高山被孢霉Δ12脱氢酶含有示于图5。编码高山被孢霉Δ12脱氢酶的基因可在转基因植物中表达来增加LA从油酸合成。其他与高山被孢霉Δ12脱氢酶DNA在序列上基本上相同或编码与高山被孢霉Δ12脱氢酶多肽在序列基本上相同的多肽的DNA也可以使用。
在序列上基本相同是指这样一种氨基酸序列或核酸序列,该氨基酸序列或核酸序列能显示与高山被孢霉Δ5脱氢酶氨基酸序列或编码该氨基酸序列的核酸序列具有优选为至少60%、80%、90%或95%的同源性。就多肽来说,比较序列的长度一般为至少16个氨基酸,优选为至少20个氨基酸,更优选为35个氨基酸。就核酸来说,比较序列的长度一般为至少50个核苷酸,优选为至少60个核苷酸,更优选为至少75个核苷酸,最优选为110个核苷酸。典型的同源性用序列分析软件来测定,例如Genetics Computer Group,University ofWisconsin Biotechnology Center,1710 University Avenue,Madison,Wisconsin 53705的序列分析软件包、MEGAlign(DNAStar,Inc.,1228 S.Park St.,Madison,Wisconsin 53715)、和MacVector(Oxford Molecular Group,2105 S.Bascom Avenue,Suite200,Campbell,California 95008)。这些软件通过确定各种取代、删除和其他修饰的同源程度来使相似序列匹配。保守取代通常包括下列各组取代:甘氨酸和丙氨酸;缬氨酸、异亮氨酸和亮氨酸;天冬氨酸、谷氨酸、天冬酰胺和谷氨酰胺;丝氨酸和苏氨酸;赖氨酸和精氨酸;以及苯丙氨酸和酪氨酸。取代也可以以保守的疏水性或亲水性(Kyte和Doolittle,J.Mol.Biol.157:105-132,1982)或以保证相似的多肽二级结构(Chou和Fasman,Adv.Enzyomol.47:45-148,1978)的能力为基础来进行。
其他脱氢酶
本发明的范围还涉及来自相同或其他有机体的相关脱氢酶。这种相关的脱氢酶包括在相同或不同被孢霉中天然产生的已公开Δ5、Δ6和Δ12脱氢酶的突变体以及来自其他物种的已公开Δ5脱氢酶的同源物和具有脱氢酶活性的进化上相关的蛋白。还包括虽然不与高山被孢霉Δ5脱氢酶基本上相同但能分别在一种脂肪酸分子的羧基端的5、6或12碳原子处催化脂肪酸的去饱和的脱氢酶。相关脱氢酶可用其基本上与已公开的脱氢酶相同的功能来鉴定,即也能够有效将DGLA转变为ARA、LA转变为GLA、ALA转变为SDA或油酸转变为LA。相关脱氢酶还可通过在序列数据库中筛选与已公开脱氢酶同源的序列、用一种以已公开脱氢酶为基础的探针与一种由来源有机体构建的文库杂交、或使用来自来源有机体的mRNA和以已公开脱氢酶为基础的引物进行RT-PCR来进行鉴定。这种脱氢酶包括来自人、盘基网柄菌和三角褐指藻的脱氢酶。
一个脱氢酶中对于脱氢酶活性来说重要的区域可通过常规诱变、表达所获得的突变多肽、确定其活性来确定。突变可包括删除、插入和点突变或它们的组合。一个典型的功能分析从删除突变开始,以确定对功能必需的蛋白N-和C-末端极限,然后进行内部删除、插入或点突变来进一步确定对功能来说是必需的区域。其他技术如盒式诱变或全合成也可以使用。删除突变可用例如外切核酸酶以顺序移去5’或3’编码区来完成。这些技术可使用试剂盒。删除后,可将含有起始或终止密码子的寡核苷酸分别与5’或3’删除后的删除编码区连接来使编码区完整。另外,可通过多种方法包括定点诱变、诱变PCR或与在存在的限制酶切位点上消化的DNA连接来将编码起始或终止密码子的寡核苷酸插入编码区。内部删除可用类似的方法来完成,这些方法包括,使用DNA中存在的限制内切酶位点、使用突变引物进行定点诱变或诱变PCR。插入可通过如接头扫描诱变、定点诱变或PCR诱变的方法来进行。点突变可用如定点诱变或诱变PCR的技术来完成。
化学诱变也可用来确定对一种脱氢酶多肽的活性来说是重要的区域。表达一种突变结构,并分析所获得的改变蛋白的脱氢酶功能。这种结构功能分析可确定哪个区域可被删除,哪个区域能忍受插入、以及哪种点突变能使突变蛋白的功能与天然脱氢酶的功能基本上相似。所有这样的突变蛋白和编码它们的核苷酸序列都在本发明的范围内。
脱氢酶基因的表达
当获得了编码一种脱氢酶多肽的DNA后,将其置于一个能在一种宿主中复制的载体中,或在体外用技术如PCR或长链PCR进行增殖。复制型载体包括质粒、噬菌体、病毒、粘粒等。理想的载体包括那些用于对所感兴趣基因进行诱变或用于所感兴趣基因在宿主细胞中表达的载体。长链PCR技术使大结构的体外增殖成为可能,因此,对所感兴趣的基因进行修饰如诱变或加入表达信号以及对所产生的结构进行扩增可完全在体外进行,而不需要使用一种复制载体或一种宿主。
为表达一种脱氢酶多肽,有功能的转录和翻译起始和终止区域被操纵连接到编码脱氢酶多肽的DNA上。转录和翻译起始和终止区域来自多种非限制性的来源,包括要表达的DNA、已知或怀疑能在所需系统中表达的基因、表达载体、化学合成、或来自一种宿主细胞的内源基因座。在一种植物组织和/或植物部位中表达具有特定的优势,特别是当组织或部位容易收获时,例如种子、叶、果实、花、根等。可通过使用特殊的调节序列如USPN5,463,174、USPN4,943,674、USPN5,106,739、USPN5,175,095、USPN5,420,034、USPN5,188,958和USPN 5,589,379中的调节序列来使表达定向于植物的特定位置。另外,表达的蛋白可以是一种酶,这种酶产生一种能直接或经过进一步修饰后掺入到宿主植物的液体部分中。在本文中,脱氢酶基因或反义脱氢酶转录物的表达能改变植物部分和/或植物组织中发现的特殊PUFAs或其衍生物的水平。Δ5脱氢酶多肽编码区单独或与其他基因一起表达,来产生含有高含量的所需PUFAs的组织和/或植物部位,或PUFA组成与人乳非常相似的组织和/或植物部位(Prieto et al.,PCT公开文本WO 95/24494)。终止区可来自获得起始区的基因的3’区或来自一个不同的基因。大量的终止区已知和被发现适用于来自相同和不同属和种的各种宿主。终止区一般按方便而不是因为任何具体的特性进行选择。
宿主细胞的选择部分受转基因细胞的所需PUFA谱和宿主细胞的天然谱的影响。例如,为由油酸制备亚油酸,所用的DNA序列编码一个具有Δ12脱氢酶活性的多肽,为由亚油酸制备GLA,所用的DNA序列编码一个具有Δ6脱氢酶活性的多肽。一种表达Δ12脱氢酶活性并且缺乏或被删除了Δ5脱氢酶活性的宿主细胞的使用,可与一种能单独提供Δ6脱氢酶超表达的表达盒联合使用,这一般足以在转基因细胞中提供提高的GLA产生。当宿主细胞表达Δ9脱氢酶活性时,同时表达一种Δ12和Δ6脱氢酶能提供提高的GLA产生。在Δ6脱氢酶活性的表达与Δ12脱氢酶活性的表达偶联的具体场合,需要宿主细胞天然具有或被突变为具有低Δ5脱氢酶活性。另外,一种用于Δ6脱氢酶表达的宿主细胞可以具有或被突变为具有高的Δ12脱氢酶活性。
在宿主细胞中的表达可以以一种瞬时或稳定的方式完成。瞬时表达可由导入的含有在宿主细胞中有功能的表达信号的结构来产生,但这种结构在宿主细胞中不能复制,并且很少整合,或者宿主细胞不能增殖。瞬时表达也可通过诱导一种与感兴趣基因操纵连接的调节启动子的活性来完成,虽然这种诱导系统通常显示一种低的基础表达水平。稳定表达可通过导入一种能整合到宿主基因组中或能在宿主细胞中自主复制的结构来完成。感兴趣基因的稳定表达可使用位于表达结构上或与表达结构一起转染的选择标记,接着选择表达该标记的细胞来进行选择。当稳定表达是整合产生时,结构的整合可随机发生在宿主基因组中,或可通过使用含有与宿主基因组同源性足以与宿主基因座进行靶向重组的区域的结构来进行定向。当结构被定向于一个内源基因座时,所有或一些转录和翻译调节区域可由内源基因座提供。
当需要在来源植物中脱氢酶多肽的表达提高时,可以使用多种方法。编码脱氢酶多肽的额外基因可被引入到宿主有机体中。天然脱氢酶基因座的表达也可通过同源重组的方法来提高,例如通过将一个强启动子插入到宿主基因组中来提高表达,通过从宿主基因组中删除信号来从mRNA或编码蛋白中去除不稳定的序列,或通过在mRNA中加入稳定序列(见USPN4,910,141和USPN5,500,365)。
当需要表达一种以上的不同基因时,可使用合适的调节区域和表达方法,导入的基因可在宿主细胞中通过使用复制载体或通过整合到宿主基因组中进行扩增。当两个或更多的基因在分开的复制载体上表达时,每个复制载体都需要不同的复制方式。每种导入的结构,不管是整合的还是非整合的,都应具有不同的选择方式,并应与另一个结构缺乏同源性,来维持稳定表达并防止结构之间的元件重排。导入结构的调节区域、选择方法和增殖方法的明智选择可用实验来确定,这样所有的导入基因都以所需的水平表达来提供所需产物的合成。
含有感兴趣基因的结构可用标准技术导入一种宿主细胞中。这些技术包括转染、感染、粒子轰击、电转化、显微注射、刮擦、或其他将感兴趣基因导入宿主的方法(见USPN 4,743,548、USPN4,953,855、USPN 5,068,193、USPN 5,188,958、USPN 5,463,174、USPN 5,565,346和USPN 5,563,347)。为方便起见,一种用任何方法进行操作后摄取了一个DNA序列或结构的宿主细胞在这里将被称为“转化的”或“重组子”。所获得的宿主将至少有一个拷贝的表达结构,并根据该基因是否被整合到基因组中、是否被扩增或是否存在于一种具有多拷贝数的染色体外元件上,宿主可以具有两个或更多的表达结构拷贝。
转化的宿主细胞可通过选择导入结构上含有的一种标记进行鉴定。另外,一个独立的标记结构可与所需的结构一起导入,如同许多转化技术将许多DNA分子导入宿主细胞一样。通常,转化宿主根据其在选择培养基上生长的能力来选择。选择培养基可掺入一种抗生素或缺少一种未转化的宿主细胞生长所必需的因子,例如一种营养或生长因子。因此一种导入的标记基因可提供抗生素抗性,或编码一种必需生长因子或酶,并在转化的宿主细胞中表达时允许其在选择培养基上生长。理想的情况是,感兴趣的是针对卡那霉素和氨基糖苷G418的抗性(见USPN 5,034,322)。当表达的标记蛋白可被直接或间接检测时,也可对转化宿主进行选择。标记蛋白可单独表达或与其他蛋白融合表达。标记蛋白可用其酶活性进行检测,例如β-半乳糖苷酶能将底物X-gal转变为一种生色产物,荧光素酶可将荧光素转变为一种发光产物。标记蛋白可通过其光产生或改变的特性进行检测,例如,Aequorea victoria的绿色荧光蛋白在用蓝光照射时发荧光。抗体可用于检测标记蛋白或感兴趣蛋白上的一种,例如,分子标记物。表达标记蛋白或标记物的细胞可通过,诸如目测或通过技术如FACS或用抗体淘筛来进行选择。
使用上述方法制备的PUFAs和组合物在宿主植物组织和/或植物部分中可以以游离脂肪酸或接合物形式如酰基甘油、磷脂、硫脂或糖脂的形式被发现,并可用本领域熟知的多种方法从宿主细胞中抽提。这些方法可包括用有机溶剂抽提、超声波、使用如二氧化碳的超临界流体抽提、和物理方法如压榨、或者它们的组合。特别感兴趣的是用己烷或甲醇和氯仿进行抽提。在需要时,可使水层酸化来使带负电荷的部分质子化,从而促进所需产物分配到有机层中。抽提后,有机溶剂可在氮气流的环境中蒸发去除。在以接合物形式抽提时,产物可用酶或化学方法切割以释放游离脂肪酸或较低复杂程度的感兴趣接合物,然后进行进一步的操作来制备所需的终产物。在需要时,脂肪酸接合形式用氢氧化钾切割。
脂肪酸的纯化
当需要进一步纯化时,可以使用标准的方法。这样的方法包括抽提、用尿素处理、分级结晶、HPLC、分级蒸馏、硅胶层析、高速离心或蒸馏,或这些技术的组合。反应基团如酸或烯基团的保护可在任何步骤用已知的技术例如烷基化或碘化来进行。使用的方法包括脂肪酸的甲基化以产生甲酯。类似地,保护性基团可在任何步骤移去。在需要时,含有ARA、DHA和EPA的级份的纯化可用尿素和/或分级蒸馏来完成。
脂肪酸的用途
本发明的脂肪酸的用途有几种。以本发明的DNAs为基础的探针在分离相关分子的方法中或检测表达脱氢酶的有机体的方法中使用。当用作探针时,DNAs或寡核苷酸必须是可以检测的。这一般通过在一个内部位点如通过整合一个修饰的残基或在5’或3’末端加上一个标记来完成。这样的标记可被直接检测、可与一个被检测标记的第二分子结合、或可与一个未标记的第二分子和一个检测标记的第三分子结合。这个方法可扩大到只要在实践中能获得一个可信的检测信号而没有不能被接受水平的背景信号。第二、第三或桥连系统可包括针对其他任何分子包括标记或其他抗体的抗体的使用,并可使用任何能相互结合的分子,例如一种生物素-链亲和素/亲和素系统。检测标记一般包括放射性同位素、能够化学或酶学发光或改变光的分子、能够产生可检测的反应产物的酶、磁性分子、发荧光的分子或在结合后荧光或光发射特征改变的分子。标记方法的例子见于USPN5,011,770。另外,靶分子的结合可通过用等温滴定热量计测量探针与靶结合的溶液的热量变化来直接检测,或将探针或靶包被在一个表面并分别检测靶或探针结合而产生的从表面散射的光的改变来进行检测,如同用BIAcore系统所进行的。
用重组方法制备的本发明的PUFAs可应用于广泛的领域。用不同形式的PUFAs对人或动物进行补充不仅能导致加入的PUFAs的水平提高,而且也使其代谢衍生物的水平提高。例如,当固有的Δ6脱氢酶途径在一个个体中功能异常时,用GLA处理不仅导致GLA水平提高,也使下游产物如ARA和前列腺素的水平提高(见图1)。复杂的调节机制需要将多种PUFAs组合起来或加入不同的PUFAs的接合物来防止、控制或克服这种机制,以在一个个体中获得特定PUFAs的所需水平。
用本公开的方法制备的PUFAs或其衍生物可以用作膳食补充,特别是在婴儿配方食品中,用于正在进行静脉喂养的病人或用于防止或治疗营养不良。特殊的脂肪酸如EPA可用于改变婴儿配方食品中的组成来较好地模仿人乳中的PUFA组成。据报道人乳中占优势的三酰甘油是1、3-二-油酰基-2-棕榈酰,并且据报道2-棕榈酰甘油酯的吸收比2-油酰或2-lineoly甘油酯好(USPN 4,876,107)。通常,人乳具有的脂肪酸谱包含约0.15%至约0.36%的DHA、约0.03%至约0.13%的EPA、约0.30%至约0.88%的ARA、约0.22%至0.67%的DGLA和约0.27%至约1.04%的GLA。婴儿配方食品中GLA∶DGLA∶ARA的一个优选比例分别为约1∶1∶4至1∶1∶1。本领域的技术人员可以不经过多实验确定能提供这些PUFA比例的油的数量。PUFAs或含有它们的宿主细胞还可用作动物饲料添加剂来使一种动物的组织或乳脂肪酸组成改变为更适用于人或动物消费。
营养组合物
本发明还包括营养组合物。本发明的组合物包括用于人体吸收的一切食品或制剂,包括用于肠胃吸收或肠胃外吸收,所述组合物在摄入身体以后(a)起到营养或组建组织或补充能量的作用和/或(b)维持、恢复或支持适当的营养状态或代谢功能。
本发明的营养组合物至少包括一种按照本发明方法生产的油或酸,并可以是固体或液体形式。另外,所述组合物可以包括可食用的常量营养物、维生素和矿物质,其含量适用特定用途的需要。所述成分的含量可根据以下条件而变化:所述组合物是用于正常、健康的婴儿、儿童还是用于具有特殊要求的成年人,如伴随有某种代谢症状(例如,代谢障碍)的成年人。
可添加到所述组合物中的常量营养物的例子包括,但不限于食用脂肪、碳水化合物和蛋白。所述食用脂肪的例子包括,但不限于椰子油、大豆油、和甘油一酯和二酯。所述碳水化合物的例子包括,但不限于葡萄糖、食用乳糖和水解淀粉。另外,可用于本发明营养组合物中的蛋白的例子包括,但不限于大豆蛋白、电渗析乳清、电渗析脱脂奶、乳清、或上述蛋白的水解产物。
就维生素和矿物质而言,可将下列成分添加到本发明的营养组合物中:钙、磷、钾、钠、氯、镁、锰、铁、铜、锌、硒、碘和维生素A、E、D、C和B复合物。也可以添加诸如此类的其它维生素和矿物质。
用于本发明的营养组合物中的成分为半纯化或纯化来源。半纯化或纯化是指通过纯化天然材料或通过合成而制备的材料。
本发明的营养组合物的例子包括,但不限于婴儿配方食品、保健食品、和再水合组合物。特别感兴趣的营养组合物包括,但不限于用于为婴儿肠道和肠胃外补充营养的组合物,特殊的婴儿配方食品,老年人保健品,和供具有胃肠道疾病和/或吸收障碍的患者食用的保健品。
营养组合物
本发明的典型的营养组合物含有食用常量营养物、维生素和矿物质,其用量符合特定用途的需要。所述成分的用量可根据下列条件而变化:该制剂是用于临时受到胁迫的正常的、健康的个体,或用于由于某种慢性或急性疾病状态(例如,代谢障碍)而具有特殊要求的患者。本领域技术人员可以理解用于本发明营养制剂中的成分是半纯化的或纯化的。半纯化或纯化是指通过纯化天然材料或通过合成而制备的材料。以上技术在本领域中是众所周知的(例如,参见联邦食品成分和食品加工管理条例;推荐的饮食许可,第10版,国家学术出版社,华盛顿特区,1989)。
在一种优选实施方案中,本发明的营养制剂是一种肠道营养制品,更优选是一种成年人或儿童肠道营养制品。因此,在本发明的另一方面,提供了一种营养制剂,这种制剂适于喂养已经历胁迫的成年人。该配方食品除了本发明PUFAs之外,还包括常量营养物、维生素和矿物质,其用量被设计成能提供成年人的日常营养需要。
所述主要营养成分包括食用脂肪、碳水化合物和蛋白。代表性食用脂肪有椰子油、大豆油和甘油一酯和二酯,以及本发明的PUFAs油。典型的碳水化合物是葡萄糖、食用乳糖和水解玉米淀粉。典型的蛋白来源是大豆蛋白、电渗析乳清或电渗析脱脂奶或乳清、或上述蛋白的水解产物,不过也可以得到和使用其它蛋白来源。所述常量营养物以常见的营养化合物形式加入,其添加量相当于人乳汁中的含量或能量基础,即以每卡路里为基础。
用于制备液体和肠道营养配方食品的方法在本领域中众所周知,并在实施例中详细说明。
可以对肠道配方食品进行消毒,并随后用作随时食用(RTF)的基础或储存在浓缩液体或粉末中。所述粉末可以通过按对上述方法制备的肠道配方食品进行喷雾干燥制备,而且,通过使该浓缩物重新水合可以重构所述配方食品。成年人和婴儿营养配方食品在本领域中是众所周知的,并可以由商业渠道购买(由Abbott实验室的Ross产品部出售的Similac,Ensure,Jevity和Alimentum)。可将本发明的油或酸以下文所述的用量添加到上述任一种配方食品中。
在液体形式下,所述营养组合物的能量密度通常可以在大约0.6-3.0Kcals/ml范围内。在固体或粉末形式下,所述营养保健品可以含有大约1.2-9Kcals/g,优选3-7 Kcals/g。一般,液体制品的渗透压应当低于700mOsm,更优选低于660mOsm。
所述营养配方食品除了本发明的PUFAs之外通常还包括维生素和矿物质,以便帮助个体摄入所述物质的最低日常需求。除了上面列举的PUFAs之外,还需要为所述营养组合物补充锌、铜、和叶酸以及抗氧化剂。据信,上述物质也能加强受到胁迫的免疫系统,因此为所述个体带来进一步的好处。锌、铜或叶酸的存在是选择性的,而不是必需的,以便对免疫抑制产生有益影响。类似地,药物组合物中也已补充上述物质。
在一种更优选的实施方案中,所述营养组合物除了所述抗氧化剂系统和PUFAs成分之外还含有一种碳水化合物来源,其中,占所述碳水化合物至少5%的是一种可摄入的寡聚糖。在一种更优选的实施方案中,所述营养组合物另外含有蛋白、牛黄酸和肉碱。
通过公开方法制备的PUFAs或其衍生物可被用作食用替代品或保健品,特别是婴儿配方食品,用于对患者进行静脉输液或用于预防或治疗营养不良。通常,人类乳汁的脂肪酸分布为,包括大约0.15%至大约0.36%的DHA,大约0.03%至大约0.13%的EPA,大约0.30%至大约0.88%的ARA,大约0.22%至大约0.67%的DGLA和0.27%至大约1.04%的GLA。另外,有报导称人乳汁中的主要甘油三酯是1,3-二-油酰-2-棕榈酰,还报导说2-棕榈酰甘油酯的吸收好于2-油酰或2-亚油酰甘油酯的吸收(USPN4,876,107)。因此,本发明生产的诸如ARA、DGLA、GLA和/或EPA的脂肪酸可被用于改变婴儿配方食品的组成,以便更好地重现人乳汁的PUFA组成。具体地讲,用于药物和保健食品,特别是母乳替代品或添加物中的油类组合物优选包括ARA、DGLA和GLA中的一种或几种。更优选,所述油包括大约0.3-30%的ARA,大约0.2-30%的DGLA,和大约0.2-30%的GLA。
除了其浓度之外,可以调整ARA、DGLA和GLA的比例,以适应特定的最终用途。在制备母乳添加物或代用品时,油类组合物含有ARA、DGLA和GLA中的两种或两种以上,其比例大约为1∶19∶30至6∶1∶0.2。例如,动物乳汁的ARA∶DGLA∶DGL的比例为1∶19∶30至6∶1∶0.2,其中,包括中间比例,该中间比例优选为大约1∶1∶1,1∶2∶1,1∶1∶4。当与一种宿主细胞一起生产时,调整诸如ARA和DGLA的前体底物向ARA转化率和百分比可以精确控制PUFA的比例。例如,5-10%的DGLA向ARA转化的比例,可被用于产生约1∶19的ARA与DGLA的比例,而大约75-80%的转化率可被用于产生大约6∶1的ARA与DGLA的比例。因此,无论是在细胞培养系统还是在宿主动物中,按所述方法调节脱氢酶表达的时间、程度和特异性,可被用于调节PUFA的含量和比例。根据所使用的表达系统,例如,细胞培养物或能在其乳汁中表达油类的动物,还可以提取所述油类并以需要的浓度和比例重新混合。具有所述PUFA比例的油类可以通过以下标准方法确定。还可将PUFAs或含有它的宿主细胞用作动物保健食品,以便改变动物组织或乳汁脂肪酸的组成,使其更有利于人或动物吸收。
对于保健食品来说,可将纯化的PUFAs或其衍生物添加到烹饪油、脂肪或配制的人造黄油中,以便在正常使用时受体即可获得需要的量。还可将PUFAs掺入婴儿配方食品、营养保健品或其它食品中,还可将其用作消炎或胆甾醇降低剂。
药物组合物
本发明还包括含有按照本文所披露的本发明的方法生产的一种或几种酸和/或所生成的油的药物组合物。更具体地讲,所述药物组合物可以包括一种或几种所述酸和/或油,以及一种标准的、众所周知的、无毒的、可以药用的载体、佐剂或载体,如磷酸缓冲的盐溶液、水、乙醇、多元醇、植物油、湿润剂或诸如水/油乳液的乳液。所述组合物可以是液体或固体形式。例如,所述组合物可以是片剂、胶囊、可摄取的液体或粉末、可注射的、或外用软膏或霜剂形式。
例如,服用的可行途径包括,口服、直肠使用和肠胃外使用。当然,服用的途径取决于需要的效果。例如,如果该组合物被用于治疗粗糙、干燥、或老化的皮肤,用于治疗受伤或烧伤的皮肤,或用于治疗受疾病或病症影响的皮肤或毛发,就可以涂在表皮上。
患者服用所述组合物的剂量可以由本领域普通技术人员根据诸如患者体重、患者年龄、患者的免疫状态等的各种因素确定。
例如,就剂型而言,所述组合物可以是溶液、分散剂、悬浮液、乳液或消毒的粉末,这种粉末可在以后重建。
另外,本发明的组合物还可用于美容目的。可将其添加到现有的化妆品组合物中,以便制成一种混合物,或者用作单一的组合物。
药物组合物还可被用于给个体服用PUFA成分。合适的药物组合物可以包括生理上可以接受的无菌水或非水溶液,分散剂,悬浮液或乳液,以及用于重建成用于摄入的无菌溶液或分散剂的无菌粉末。合适的含水和无水载体、稀释剂、溶剂或载体的例子包括水、乙醇、多元醇(丙二醇、聚乙二醇、和甘油等),其合适的混合物,植物油(如橄榄油)和诸如油酸乙酯的可注射的有机酯。例如,对于分散剂来说,通过维持需要的粒度和通过使用表面活性剂可以维持合适的流动性。可能还需要增加等渗剂,例如,糖和氯化钠等。除了上述惰性稀释剂之外,所述组合物还可以包括诸如湿润剂、乳化剂和悬浮剂、增甜剂、香味剂和芳香剂的佐剂。
对悬浮液来说,除了所述活性化合物之外,还可以包含悬浮剂,例如,乙氧基化异十八烷醇,聚氧乙烯山梨醇和山梨聚糖酯,微晶纤维素,偏氢氧化铝、膨润土、琼脂-琼脂和黄蓍胶或上述物质的混合物等。
诸如片剂和胶囊的固体剂型可以用本领域众所周知的技术制备。例如,本发明的PUFAs可以用诸如乳糖、蔗糖和玉米淀粉的常规片剂基材制成片剂,所述片剂与诸如阿拉伯胶、玉米淀粉或明胶的粘结剂,诸如马铃薯淀粉或藻酸之类的崩解剂和诸如硬脂酸或硬脂酸镁的润滑剂组合。通过将所述赋形剂连同所述抗氧化剂和PUFA成分一起掺入明胶胶囊制备胶囊。掺入药用制剂中的抗氧化剂和PUFA成分的量应当落入上述规定的范围。
在本申请中,“治疗”一词是指预防或降低不需要的症状的发病率。例如,治疗免疫抑制是指预防这种抑制的发生或减弱这种抑制的量。术语“患者”和“个体”可以互换使用,这两个词都是指动物。本申请中所说的“动物”一词是指所有温血动物,包括,但不限于狗、人、猴子、和猿。在本申请中,“大约”一词是指根据具体应用在标明的范围或数量的基础上波动合理的量。在本说明书中所规定的所有数量或范围都应当被视为由术语“大约”修饰。
“剂量”和“用量”可以互换使用,并且是指在单一的方案中由患者摄取的营养或药物组合物的量,所述方案被设计用于输送有效量的抗氧化剂和结构甘油三酯。本领域技术人员容易理解的是,液体营养粉的单一剂量或用量应当提供上文所述量的抗氧化剂和PUFAs。所述剂量或用量应当是一个典型的成年人在一次用药时能够消耗的体积。所述量可以根据患者的年龄、体重、性别或医学症状而有很大的变化。不过,作为一般的原则,液体营养药物的单一用量或剂量应当被视为包括100-600ml的体积,更优选125-500ml,最优选125-300ml。
即使不需要对其饮食进行补充,也可将本发明的PUFAs添加到食品中。例如,可将所述组合物添加到任何类型的食品中,包括,但不限于人造黄油、改性黄油、奶酪、奶、酸奶、巧克力、糖果、小吃、沙拉油、烹饪油、烹饪脂肪、肉、鱼和饮料。
药用用途
就药用用途(人用或兽用)而言,所述组合物通常通过口服服用,不过,可以通过能成功地吸收它的任何途径服用,例如,肠胃外(即皮下、肌内或静脉),直肠或阴道或表皮使用,例如,作为皮肤软膏或洗液。本发明的PUFAs可以单独使用或与可以药用的载体或赋形剂组合使用。在可能的情况下,明胶胶囊是优选的口服剂型。上文所提出的保健食品也可以提供一种口服途径。本发明的不饱和酸可以缀合形式、或作为盐、酯、酰胺或所述脂肪酸的药物前体服用。本发明包括所有可以药用的盐;特别优选的是钠盐、钾盐或锂盐。还包括诸如N-烷基多羟胺盐,参见PCT公开文件WO96/33155。优选地酯是乙酯。作为固体盐,所述PUFAs还可以片剂形式服用。为了静脉内服用,可将所述PUFAs或其衍生物掺入诸如Intralipids的市售制剂中。典型的正常成年人血浆脂肪酸组成为,包括6.64-9.46%的ARA,1.45-3.11%的DGLA和0.02-0.08%的GLA。所述PUFAs或其代谢前体可以单独服用或用于与其它PUFAs组成的混合物一起使用。以便在患者体内达到正常的脂肪酸分布。如果需要,制剂的每一种成分可以分别以试剂盒形式提供,以便单独使用或多次使用。特定脂肪酸的典型剂量为每天0.1毫克至20克,或者甚至100克,而且,如果需要优选为每天10毫克至1、2、5或10克,或者它的摩尔当量的衍生物形式。肠胃外营养复合物包括以本发明所包括的甘油三酯为参数计算的重量百分比大约为2-30%的脂肪酸;优选为含有重量百分比大约占总PUFA组合物重量1-25%的GLA(USPN5,196,198)。可以选择性地添加其它维生素,特别是脂溶性维生素,如维生素A、D、E和L-肉碱。如果需要,可以添加诸如α生育酚的防腐剂,通常大约占其重量的0.1%。
合适的药物组合物可以包括生理学上能接受的无菌水溶液或非水溶液,分散剂,悬浮液或乳液,以及用于重建成无菌注射液或分散剂的无菌粉末。合适的水和非水载体、稀释剂、溶剂或载体的例子包括水、乙醇、多元醇(丙二醇、聚乙二醇和甘油等),它们的合适的混合物,植物油(如橄榄油)和诸如油酸乙酯的可注射的有机酯。例如,对于分散剂来说,通过维持需要的粒度和通过使用表面活性剂可以维持合适的流动性。可能还需要增加等渗剂,例如糖和氯化钠等。除了上述惰性稀释剂之外,所述组合物还可以包括诸如湿润剂、乳化剂和悬浮剂、增甜剂、香味剂和芳香剂的佐剂。
对悬浮液来说,除了所述活性化合物之外,还可以包含悬浮剂,例如,乙氧基化异十八烷醇,聚氧乙烯山梨醇和山梨聚糖酯,微晶纤维素,偏氢氧化铝、膨润土、琼脂-琼脂和黄蓍胶或上述物质的混合物等。
一种特别优选的药物组合物含有溶解在水基质或溶剂中的二乙酰酒石酸单-和二甘油酯。二乙酰酒石酸单-和二甘油酯的HLB值大约为9-12,并且比现有的、HLB值为2-4的抗菌脂类明显更加亲水。所述现有的疏水脂类不能制成含水组合物。如本文所披露的,现在可将这种脂类与二乙酰酒石酸的单-和二甘油酯一起溶解到含水介质中。按照本实施方案,将二乙酰酒石酸的单-和二甘油酯(例如,DATEM-C12:0)与其它活性抗菌脂类(例如,18:2和12:0单甘油酯)一起熔化,并混合,以得到均匀的混合物。均匀性可以提高抗菌活性。该混合物可以完全分散在水中。在不添加二乙酰酒石酸的单-和二甘油酯、并且在导入水中之前与其它单甘油酯预混合的情况下这是不可能的。然后,可以在无菌条件下将所述含水组合物与生理上可以接受的稀释剂、防腐剂、缓冲液或制备喷雾剂或吸入剂所需要的推进剂混合。
本发明还包括用脂肪酸治疗多种疾病。含有本发明PUFAs的保健品可用于治疗血管成型术之后的再狭窄。可以用本发明的PUFAs治疗炎症、类风湿关节炎和哮喘及牛皮癣。有证据表明PUFAs可能参与了钙的代谢,表明本发明的PUFAs可用于治疗或预防骨质疏松和肾结石或尿路结石。
本发明的PUFAs可用于治疗癌症。业已证实恶性细胞具有改变了的氨基酸组成;业已证实添加脂肪酸能延缓其生长,并导致细胞死亡,并能增强其对化疗剂的感受性。业已证实GLA能引起癌细胞再表达E-钙粘蛋白细胞粘着分子,这种分子的丧失与入侵性转移瘤相关。给胰腺癌患者临床试验静脉服用水溶性GLA锂盐,从统计学上看显著提高了其存活率。PUFA保健品还可用于治疗与癌症相关的恶病质。
本发明的PUFAs还可用于治疗糖尿病(USPN4,826,877;Horrobin等,美国临床营养学杂志,57卷(增刊),732S-737S)。在患糖尿病的动物体内业已证实了改变了的脂肪酸代谢和组成。这种改变业已表明与由糖尿病引起的某些长期并发症相关,包括视网膜病、神经病、肾病和生殖系统损伤。业已证实含有GLA的月见草油能预防并逆转糖尿病性神经损伤。
本发明的PUFAs可用于治疗湿疹,降低血压并提高数学得分。业已证实必需脂肪酸缺陷与湿疹相关,而且研究业已证实了用GLA治疗湿疹具有良好效果。还证实GLA能降低与紧张相关的血压升高。并能提高在计算测验中的表现。业已证实GLA和DGLA能抑制血小板聚集,引起血管舒张,降低胆甾醇含量,并抑制血管壁平滑肌和纤维组织的增殖(Brenner等,实验医学生物学进展,83卷,p.85-101,1976)。业已证实单独服用GLA或DGLA,或与EPA组合使用能降低或预防胃肠出血,以及其它由非类固醇抗炎药物引起的副作用(USPN4,666,701)。还证实GLA和DGLA能预防或治疗子宫内膜异位和经前综合症(USPN4,758,592),并能治疗肌痛性脑脊髓炎和在病毒感染之后出现的慢性疲劳(USPN5,116,871)。
本发明PUFAs的其它用途包括用于治疗AIDS、多发性硬化、急性呼吸道综合症、高血压和炎性皮肤病。本发明的PUFAs还可用于供一般健康个体使用的配方食品,以及用于老年病治疗。
兽医用途
应当指出的是,上述药物和营养组合物可用于动物和人类,因为动物存在着很多与人相同的需要和症状。例如,可将本发明的油或酸用于动物饲料添加剂。
提出以下实施例是为了说明目的,而不是为了限定。
实施例
实施例1从高山被孢霉中分离Δ5脱氢酶核苷酸序列
实施例2从高山被孢霉中分离Δ6脱氢酶核苷酸序列
实施例3鉴定高山被孢霉Δ脱氢酶的Δ6脱氢酶同源物
实施例4从高山被孢霉中分离Δ12脱氢酶核苷酸序列
实施例5从高山被孢霉中分离细胞色素b5还原酶的核苷酸序列
实施例6在面包酵母中表达高山被孢霉脱氢酶克隆
实施例7Ma29转基因芸苔属植物叶的脂肪酸分析
实施例8在欧洲油菜(Brassica napus)中表达高山被孢霉Δ6脱氢酶
实施例9在欧洲油菜中表达高山被孢霉Δ12脱氢酶
实施例10在欧洲油菜中同时表达高山被孢霉Δ6和Δ12脱氢酶
实施例11在欧洲油菜中同时表达高山被孢霉Δ5和Δ6脱氢酶
实施例12在欧洲油菜中同时表达高山被孢霉Δ5、Δ6和Δ12脱氢酶
实施例13Δ6去饱和油的立体专一性分布
实施例14转基因植物的脂肪酸组成
实施例15通过杂交完成Δ6和Δ12脱氢酶在欧洲油菜中的组合表达
实施例16在大豆中表达高山被孢霉脱氢酶
实施例17人脱氢酶基因序列
实施例1
从高山被孢霉中分离Δ5脱氢酶核苷酸序列
高山被孢霉通过一种Δ5脱氢酶从前体20:3产生花生四烯酸(ARA,20:4)。一个编码高山被孢霉的Δ5脱氢酶的核苷酸序列(见图7)通过PCR扩增用高山被孢霉1st链cDNA和简并寡核苷酸引物获得,简并寡核苷酸引物对应于Synechocystis和Spirulina的Δ6脱氢酶之间保守的氨基酸序列。所用的程序如下:
使用Hoge等(1982)Experimental Mycology 6:225-232的方法从一种高山被孢霉的3天的产PUFA的培养物中分离总RNA。使用BRL’s Lambda-ZipLox系统按照厂商的指导用此RNA制备双链cDNA。将几个大小的高山被孢霉cDNA分别包装来制备具有不同平均大小插入子的文库。“全长”文库含有大约3×106克隆,平均插入大小为1.77kb。“测序级”文库含有大约6×105克隆,平均插入大小为1.1kb。
使用BRL Superscript RTase和引物TSyn 5’-CAAGCTTCTGCAGGAGCTCTTTTTTTTTTTTTTT-3’(SEQ ID NO:19)将5ug的总RNA反转录。简并寡核苷酸被设计为两种蓝细菌的Δ6脱氢酶之间的保守区。使用的特异性引物为:
D6DESAT-F3(SEQ ID NO:20)
5’-CUACUACUACUACAYCAYACOTAYACOAAYAT-3’
D6DESAT-R3(SEQ ID NO:21)
5’-CAUCAUCAUCAUOGGRAAOARRTGRTG-3’
其中Y=C+T,R=A+G,O=I+C。PCR在一个含有下述物质的25ul体积中进行:由40ng总RNA衍生的模板、2pM的每种引物、200uM的每种脱氧核糖核酸三磷酸、60mM Tris-Cl、pH8.5、15mM(NH4)2SO4、2mM MgCl2。样品首先在95度(所有温度为摄氏)变性5分钟,然后在72度保温,加入0.2U的Taq聚合酶。PCR热循环条件如下:94度1分钟、45度1.5分钟、72度2分钟。PCR连续进行35个循环。使用这些引物在高山被孢霉第一链cDNA上进行的PCR产生一条550bp的反应产物。比较高山被孢霉PCR片段的推导氨基酸序列显示了与Δ6脱氢酶(见图4)同源的区域。但是在比较的区域中只有约28%的同源性。该推导的氨基酸序列示于SEQ ID NO:14。
该PCR产物被用作探针来从高山被孢霉文库分离相应的cDNA克隆。最长的cDNA克隆Ma29被命名为pCGN5521并对两条链进行完全测序。该cDNA以一个1481bp的插入子形式包含在载体pZL1中(Bethesda Research Laboratories),并从第一个ATG开始,它包含一个编码446个氨基酸的开放阅读框。该阅读框含有由PCR片段推导的序列。该cDNA插入子的序列被发现含有与Δ6脱氢酶同源的区域(见图8)。例如,三个保守的“组氨酸盒”(它们已在其他膜结合脱氢酶中被发现(Okuley等,(1994)The Plant Cell 6:147-158))被发现存在于被孢霉序列的氨基酸位置171-175、207-212和387-391(见图5A-5D)。但是,作为典型的被孢霉的第三组氨酸盒的“HXXHH”氨基酸基元被发现为QXXHH。编码蛋白的氨基端显示与细胞色素b5蛋白有明显的同源性。这样,该被孢霉cDNA克隆似乎代表一个细胞色素b5与一种脂肪酸脱氢酶的融合。因为细胞色素b5被认为作用为膜结合脱氢酶的电子供体,因此这种脱氢酶蛋白的N末端细胞色素b5区域可能参与其功能。这对于在异源系统中表达脱氢酶来生产PUFA是有优势的。
实施例2
从高山被孢霉中分离Δ6脱氢酶核苷酸序列
一个来自编码一种高山被孢霉的Δ6脱氢酶的部分cDNA克隆Ma524的核酸序通过对实施例1中介绍的来自高山被孢霉cDNA文库进行随机测序来获得。含有cDNA的质粒按下述方法进行酶切:
将5ul噬菌体与100ul培养于加有10ug/ml卡那霉素、0.2%麦芽糖和10mM MgSO4的ECLB中的DH10B(ZIP)混合,在37度温育15分钟。加入0.9ml的SOC,并立即将100μl细菌铺于10个含有ECLB+50ug青霉素的平板。不需要45分钟的复苏期。将平板在37度温育过夜。将克隆挑入ECLB+50ug青霉素培养基并过夜培养来制备甘油贮存物和小量制备DNA。将一份用作小量制备的培养物贮存为甘油贮存物。在ECLB+50ug青霉素/ml上铺板比在100ug/ml上铺板可产生更多的克隆和更高比例的含有插入子的克隆。
随机挑取克隆,使用Qiagen小量制备试剂盒纯化质粒DNA。从cDNA插入子的5’末端获得DNA序列,并使用BLAST算法与数据库比较。根据与以前鉴定的Δ6脱氢酶的DNA序列同源性,Ma524被鉴定为一个可能的Δ6脱氢酶。从高山被孢霉文库分离了一个全长的cDNA克隆。此克隆的丰度似乎略少于(2X)Ma29。Ma524与一种Caenorhabditis elegans粘粒---WO6D2.4以及公共数据库中来自集胞蓝细菌属和螺旋蓝细菌属的两种Δ6脱氢酶显示有明显的同源性,WO6D2.4是一种来自向日葵的细胞色素b5/脱氢酶融合蛋白。
此外,Ma524显示与琉璃苣Δ6脱氢酶序列(PCT公开文本WO96/21022)有明显的同源性。这样Ma524显示编码一种与琉璃苣和藻类Δ6脱氢酶相关的Δ6脱氢酶。应当注意,虽然Ma524的氨基酸序列和琉璃苣的Δ6相似,它们的碱基组成却很不相同:琉璃苣的cDNA具有60%A+T的全部碱基组成,其中某些区域超过70%,而Ma524具有平均为44%A+T组成,没有区域超过60%。这可为在具有不同偏好的碱基组成的微生物或动物中表达cDNAs提供指导。已知当宿主具有与导入基因非常不同的碱基组成时,重组基因的表达不好。这种表达不好的推测机制包括mRNA的稳定性或转录性降低。
实施例3
鉴定高山被孢霉Δ6脱氢酶的Δ6脱氢酶同源物
使用Ma524氨基酸序列在NCBI对est数据库进行BLASTX检索鉴定了编码可能的Δ6脱氢酶的核酸序列。几个序列显示明显的同源性。具体地说,两种拟南芥菜序列的推导氨基酸序列(登记号F13728和T42806)与Ma524的推导氨基酸序列两个不同区域显示同源。设计下面的PCR引物:ATTS4723-FOR(与F13728互补)5’-CUACUACUACUAGGAGTCCTCTACGGTGTTTTG,SEQ ID NO:22和T42806-REV(与T42806互补)5’-CAUCAUCAUCAUATGATGCTCAAGCTGAAACTG,SEQ ID NO:23。使用BRL Superscript RTase和引物TSyn 5’-CCAAGCTTCTGCAGGAGCTCTTTTTTTTTTTTTTT-3’,(SEQ ID NO:24)将5ug分离自拟南芥菜正在发育的长角果的总RNA反转录。PCR在一个含有下述物质的50ul体积中进行:由25ng总RNA衍生的模板、2pM的每种引物、200uM的每种脱氧核糖核酸三磷酸、60mM Tris-Cl、pH8.5、15mM(NH4)2SO4、2mM MgCl2、0.2U的Taq聚合酶。循环参数如下:94度30秒、50度30秒、72度30秒。PCR连续进行35个循环,接着再在72度延伸7分钟。PCR产生一个约750碱基对的片段,接着将此片段亚克隆,命名为12-5,并测序。该片段的每个末端对应于获得PCR引物的Arabidopsis est。这就是命名为12-5的序列。将12-5的推导氨基酸序列与Ma524和来自人(W28140)、鼠(W53753)和C.elegans(R05219)的序列在图4中进行比较。根据同源性,这些序列代表脱氢酶多肽。使用以est序列为基础的引物可以克隆全长的基因。然后这些基因可被置于表达载体中,并在宿主细胞中表达。它们的Δ6或其他脱氢酶活性可按下面的介绍进行确定。
实施例4
从高山被孢霉中分离Δ12脱氢酶核苷酸序列
基于其积累的脂肪酸,高山被孢霉具有一种ω6型的脱氢酶。该ω6脱氢酶负责从油酸(18:1)产生亚油酸(18:2)。亚油酸是Δ6脱氢酶的一种底物。本实验被设计来确定高山被孢霉是否具有一种Δ12脱氢酶多肽,如果有,鉴定相应的核苷酸序列。按照在Ma524时介绍的方法(见实施例2),根据DNA序列与以前鉴定的脱氢酶的同源性,一个来自高山被孢霉测序级文库的随机克隆---Ma648被测序并被鉴定为一种可能的脱氢酶。Ma648 cDNA的5’末端的推导氨基酸序列显示与大豆微粒体ω6(Δ12)脱氢酶(登记号#L43921)以及蓖麻籽油酸12-羟化酶(登记号#U22378)显示明显的同源性。此外,还观察到与多种其他的ω6(Δ12)和ω3(Δ15)脂肪酸脱氢酶序列的同源性。
实施例5
从高山被孢霉中分离细胞色素b5还原酶的核苷酸序列
一种编码高山被孢霉的细胞色素b5还原酶的核酸序列按下述方法获得。按实施例1的介绍以从高山被孢霉分离的总RNA为基础构建一个cDNA文库。从其中一个克隆M12-27的5’和3’末端获得DNA序列。用M12-27的3’末端推导的氨基酸序列对公共数据库进行检索显示了与已知的细胞色素b5还原酶序列具有明显的同源性。具体地说,在一个49个氨基酸的区域中,被孢霉克隆与猪的一种b5还原酶有55%的相同(77%同源性)(见图4)。
实施例6
在面包酵母中表达高山被孢霉脱氢酶克隆
酵母的乙酸锂转化按标准程序进行(Methods in Enzmology,Vol.194,p.186-187,1991)。简而言之,酵母在30℃培养于YPD中,离心细胞,重悬于TE,再离心,重悬于含有100mM乙酸锂的TE,再离心,并重悬于TE/乙酸锂。重悬酵母在30℃振荡温育60分钟。加入载体DNA,然后将酵母分装到试管中。加入转化DNA,并将试管在30℃温育30分钟。加入PEG溶液(35%(w/v)PEG4000,100mM乙酸锂,TE pH7.5),接着在30℃温育50分钟。42℃下进行5分钟的热休克,沉淀细胞,用TE洗涤,再沉淀,并重悬于TE。然后将重悬的细胞铺于选择培养基。脱氢酶在转化的酵母中的表达
来自高山被孢霉的cDNA克隆在面包酵母中筛选脱氢酶活性。使用一种油菜Δ15脱氢酶(使用来自欧洲油菜品种212/86的种子的1st链cDNA,使用以公开的序列(Arondel等,Science 258:1353-1355)为基础的引物,用PCR的方法获得)作为阳性对照。将Δ15脱氢酶基因和来自cDNA克隆Ma29的基因置于表达载体pYES2(Invitrogen)中分别产生质粒pCGR-2和pCGR-4。将这些质粒转入酿酒酵母菌株334,并用半乳糖诱导后在存在能检测特殊酶活性的底物时表达。对照菌株是含有未改变的pYES2载体的酿酒酵母菌株334。所用的底物、产生的产物和标明的脱氢酶活性为:DGLA(转变为ARA将表明Δ5脱氢酶活性)、亚油酸(转变为GLA将表明Δ6脱氢酶活性,转变为ALA将表明Δ15脱氢酶活性)、油酸(一种酿酒酵母产生的内源性底物,转变为亚油酸将表明Δ12脱氢酶活性,这种酶活性是酿酒酵母缺乏的)、或者ARA(转变为EPA将表明Δ17脱氢酶活性)。结果由下面的表1提供。脂部分按下述方法抽提:培养物在15℃生长48-52小时。离心沉淀细胞,用无菌双蒸水洗涤一次,再沉淀。沉淀用甲醇振荡摇匀,加入氯仿和tritridecanoin(作为一种内在标准)。混合物在室温下至少温育1小时或在4℃温育过夜。抽提氯仿层,并滤过一张Whatman滤纸,并加入1克无水硫酸钠来去除颗粒和残余的水。有机溶剂在40℃在氮气流下蒸发。然后将抽提的脂衍生为脂肪酸甲酯(FAME),并通过在一个封闭的试管中加入2ml的0.5N的氢氧化钾来进行气相色谱分析(GC)。将样品加热至95℃-100℃ 30分钟,并冷却至室温。加入大约2ml溶解在甲醇中的三氟化硼并重复加热。在抽提的脂混合物冷却后,加入2ml水和1ml己烷来抽提FAME进行GC分析。用产生的产物除以(产生的产物和加入的底物)总量然后乘以100来计算转化百分比。在计算油酸的转化百分比时,由于没有底物加入,产生的总亚油酸除以(产生的油酸和亚油酸)的总量,然后乘以100。
表1
在面包酵母中表达高山被孢霉脱氢酶
克隆 | 酶活性类型 | 底物转化% |
pCGR-2(油菜Δ15脱氢酶)pCGR-4(高山被孢霉Δ6样脱氢酶,Ma29)pCGR-4(高山被孢霉Δ12样脱氢酶,Ma29) | Δ6Δ15Δ5Δ17Δ12Δ6Δ15Δ5Δ17Δ12Δ6Δ15Δ5Δ17Δ12 | 0(18:2至18:3ω 6)16.3(18:2至18:3ω 3)2.0(20:3至20:4ω 6)2.8(20:4至20:5ω3)1.8(18:1至18:2ω 6)0015.30.33.303.82.2063.4 |
Δ15脱氢酶对照克隆显示了16.3%的底物转化。表达Ma29 cDNA的pCGR-4克隆将15.3%的20:3底物转变为20:4w6,这说明该基因编码一种Δ15脱氢酶。在这些场合背景(底物的非特异性转变)在0-3%之间。表达Ma524 cDNA的pCGR-5克隆显示将6%的底物转变为GLA,这说明该基因编码一种Δ6脱氢酶。表达Ma648 cDNA的pCGR-7克隆将63.4%的底物转变为LA,这说明该基因编码一种Δ12脱氢酶。使用不同浓度的底物观察到了活性的底物抑制。当底物增加至100uM时,与底物加至25uM时相比转变为产物的百分比下降(见下文)。这些数据表明具有不同底物特异性的脱氢酶能在一种异源系统中表达,并能用于产生PUFAs。
表2显示了用从携带了指示的质粒的酵母酿酒酵母菌株334抽提的总脂的百分数表示的感兴趣脂肪酸。在生长培养基中没有葡萄糖。亲和气相色谱被用来分离相应的脂。进行GC/MS来验证产物的均一性。向诱导的酵母培养物中加入外源的底物亚油酸时,检测到了欧洲油菜Δ15脱氢酶的预期产物α-亚麻酸。这个发现证明一种脱氢酶基因的酵母表达在当前的培养条件下能产生有功能的酶和具有可检测数量的产物。虽然长链PUFA---二同-γ-亚麻酸(20:3)与亚油酸(18:2)相比,在以游离形式加入诱导的酵母培养物时,掺入酵母的略少,两种外源加入的底物都能被酵母摄取。当酿酒酵母334(pCGR-5)的表达和诱导中存在亚油酸时,可检测到γ-亚麻酸。这种PUFA的存在证明了来自pCGR-5的Δ6脱氢酶活性。从酿酒酵母334(pCGR-7)表达物抽提的脂中鉴定的亚油酸将来高山被孢霉的cDNA MA648分类为Δ12脱氢酶。
表2.从酵母中提取的总脂类的脂肪酸百分比
酵母中的质粒(酶) | 18:2(掺入的) | α-18:3(产生的) | γ-18:3(产生的) | 20:3(掺入的) | 20:4(产生的) | 18:1*(存在的) | 18:2(产生的) |
pYES2(对照) | 66.9 | 0 | 0 | 58.4 | 0 | 4 | 0 |
pCGR-2(Δ15) | 60.1 | 5.7 | 0 | 50.4 | 0 | 0.7 | 0 |
pCGR-4(Δ5) | 67 | 0 | 0 | 32.3 | 5.8 | 0.8 | 0 |
pCGR-5(Δ6) | 62.4 | 0 | 4.0 | 49.9 | 0 | 2.4 | 0 |
pCGR-7(Δ12) | 65.6 | 0 | 0 | 45.7 | 0 | 7.1 | 12.2 |
添加100μl底物
*18:1是酵母中的内源脂肪酸
表的说明
18:1=油酸
18:2=亚油酸
α-18:3=α-亚麻酸
γ-18:3=γ-亚麻酸
18;4=stearidonic acid
20:3=二同-γ-亚麻酸
20:4=花生四烯酸
实施例7
在植物中表达Δ5脱氢酶在叶中表达
本实验被设计来确定叶表达的Ma29(用Northern测定)是否能将外源加入的DGLA(20:3)转变为ARA(20:4)。
Ma29脱氢酶cDNA用PCR修饰来引入便于克隆的限制内切酶位点。脱氢酶编码区已用标准的方法(见USPN5,424,200和USPN5,106,739)插入了一个d35盒,并置于用于在芸苔叶中表达的双35S启动子的控制之下(pCGN5525)。含有pCGN5525的转基因芸苔植物按照标准的方法(见USPN5,188,958和USPN5,463,174)制备。
在第一个实验中,使用三种植物:一个对照、LP004-1和两个转基因植物---5525-23和5525-29。LP004是一种低亚麻酸芸苔变种。选择每种植物的叶子进行三种处理中的一种:水、GLA或DGLA。GLA和DGLA均以钠盐的形式购自NuChek Prep并按1mg/ml溶解于水。在N2下分装密封,并贮存于-70℃。在上表面滴加50ul处理叶,用戴手套的手指温和地将其涂开以覆盖整个表面。在光周期结束前共处理大约30分钟以减少所加脂肪酸的任何光氧化。处理6天后,每个处理收集一片叶,沿中脉切成两半。一半用水洗涤以除去未掺入的脂肪酸。将叶样品冻干过夜,用气相色谱(GC)测定脂肪酸组成。结果示于表3。
表3
Ma29转基因芸苔属植株叶的脂肪酸分析
处理 | SPL | 16:00 | 16:01 | 18:00 | 18:01 | 18:1o | 18:1v | 18:02 | 18:3g | 18:03 | 18:04 | 20:00 | 20:01 |
# | % | % | % | % | % | % | % | % | % | % | % | % | |
水 | 33 | 12.95 | 0.08 | 2.63 | 2.51 | 1.54 | 0.98 | 16.76 | 0 | 45.52 | 0 | 0.09 | 0 |
34 | 13.00 | 0.09 | 2.67 | 2.56 | 1.55 | 1.00 | 16.86 | 0 | 44.59 | 0 | 0.15 | 0 | |
35 | 14.13 | 0.09 | 2.37 | 2.15 | 1.27 | 0.87 | 16.71 | 0 | 49.91 | 0 | 0.05 | 0.01 | |
36 | 13.92 | 0.08 | 2.32 | 2.07 | 1.21 | 0.86 | 16.16 | 0 | 50.25 | 0 | 0.05 | 0 | |
37 | 13.79 | 0.11 | 2.10 | 2.12 | 1.26 | 0.86 | 15.90 | 0.08 | 46.29 | 0 | 0.54 | 0.01 | |
38 | 12.80 | 0.09 | 1.94 | 2.08 | 1.35 | 0.73 | 14.54 | 0.11 | 45.61 | 0 | 0.49 | 0.01 | |
GLA | 39 | 12.10 | 0.09 | 2.37 | 2.10 | 1.29 | 0.82 | 14.85 | 1.63 | 43.66 | 0 | 0.53 | 0 |
40 | 12.78 | 0.10 | 2.34 | 2.22 | 1.36 | 0.86 | 15.29 | 1.72 | 47.22 | 0 | 0.50 | 0.02 | |
41 | 13.71 | 0.07 | 2.68 | 2.16 | 1.34 | 0.82 | 15.92 | 2.12 | 46.55 | 0 | 0.09 | 0 | |
42 | 14.10 | 0.07 | 2.75 | 2.35 | 1.51 | 0.84 | 16.66 | 1.56 | 46.41 | 0 | 0.09 | 0.01 | |
43 | 13.62 | 0.09 | 2.22 | 1.94 | 1.21 | 0.73 | 14.68 | 2.42 | 46.69 | 0 | 0.51 | 0.01 | |
44 | 13.92 | 0.09 | 2.20 | 2.17 | 1.32 | 0.85 | 15.22 | 2.30 | 46.05 | 0 | 0.53 | 0.02 | |
DGLA | 45 | 12.45 | 0.14 | 2.30 | 2.28 | 1.37 | 0.91 | 15.65 | 0.07 | 44.62 | 0 | 0.12 | 0.01 |
46 | 12.67 | 0.15 | 2.69 | 2.50 | 1.58 | 0.92 | 15.96 | 0.09 | 42.77 | 0 | 0.56 | 0.01 | |
47 | 12.56 | 0.23 | 3.40 | 1.98 | 1.13 | 0.86 | 13.57 | 0.03 | 45.52 | 0 | 0.51 | 0.01 | |
48 | 13.07 | 0.24 | 3.60 | 2.51 | 1.63 | 0.88 | 13.54 | 0.04 | 45.13 | 0 | 0.50 | 0.01 | |
49 | 13.26 | 0.07 | 2.81 | 2.34 | 1.67 | 0.67 | 16.04 | 0.04 | 43.89 | 0 | 0.59 | 0 | |
50 | 13.53 | 0.07 | 2.84 | 2.41 | 1.70 | 0.70 | 16.07 | 0.02 | 44.90 | 0 | 0.60 | 0.01 |
表3-续
Ma29转基因芸苔属植株叶的脂肪酸分析
处理 | SPL | 20:02 | 20:03 | 20:04 | 20:05 | 22:00 | 22:01 | 22:02 | 22:03 | 22:06 | 24:0 | 24:1 |
# | % | % | % | % | % | % | % | % | % | % | % | |
水 | 33 | 0 | 0 | 0.29 | 0 | 0.01 | 0.09 | 16.26 | 0 | 0 | 0.38 | 0.18 |
34 | 0.01 | 0 | 0.26 | 0 | 0.14 | 0.10 | 16.82 | 0.02 | 0.05 | 0.36 | 0.27 | |
35 | 0.01 | 0 | 0.25 | 0 | 0.12 | 0.06 | 11.29 | 0.04 | 0.05 | 0.29 | 0.25 | |
36 | 0 | 0.01 | 0.26 | 0 | 0.07 | 0.04 | 11.82 | 0.03 | 0.36 | 0.28 | 0.21 | |
37 | 0.02 | 0 | 0.21 | 0 | 0.18 | 0.08 | 15.87 | 0.06 | 0.20 | 0.30 | 0.17 | |
38 | 0.01 | 0 | 0.24 | 0 | 0.15 | 0.07 | 13.64 | 0.09 | 0.08 | 5.89 | 0.23 | |
GLA | 39 | 0.02 | 0.01 | 0.27 | 0 | 0.10 | 0.08 | 16.25 | 3.42 | 0.19 | 0.37 | 0.17 |
40 | 0.01 | 0 | 0.27 | 0 | 0.10 | 0.10 | 14.74 | 0.05 | 0.10 | 0.36 | 0.14 | |
41 | 0 | 0 | 0.27 | 0 | 0.20 | 0.10 | 13.15 | 0.13 | 0.29 | 0.33 | 0.20 | |
42 | 0 | 0 | 0.28 | 0 | 0.11 | 0.11 | 12.60 | 0.02 | 0.24 | 0.38 | 0.13 | |
43 | 0.01 | 0 | 0.28 | 0 | 0.10 | 0.03 | 14.73 | 0.01 | 0.24 | 0.34 | 0.14 | |
44 | 0.02 | 0 | 0.26 | 0 | 0.13 | 0.07 | 14.43 | 0.05 | 0.16 | 0.33 | 0.17 | |
DGLA | 45 | 0.06 | 1.21 | 0.26 | 0 | 0.07 | 0.07 | 18.67 | 0.02 | 0.21 | 0.36 | 0.13 |
46 | 0 | 1.94 | 0.27 | 0 | 0.11 | 0.09 | 17.97 | 0.09 | 0.39 | 0.41 | 0.11 | |
47 | 0.01 | 0.69 | 0.96 | 0 | 0.11 | 0.07 | 17.96 | 0 | 0.22 | 0.49 | 0.20 | |
48 | 0.01 | 0.70 | 0.74 | 0 | 0.14 | 0.09 | 17.14 | 0.05 | 0.32 | 0.52 | 0.10 | |
49 | 0 | 0.35 | 1.11 | 0 | 0.10 | 0.07 | 17.26 | 0.07 | 0.23 | 0.39 | 0.18 | |
50 | 0 | 0.20 | 0.87 | 0 | 0.21 | 0.07 | 15.73 | 0.04 | 0.15 | 0.37 | 0.18 |
用GLA处理的叶含有1.56至2.4wt%的GLA。脂肪酸分析显示,对照和转基因叶的脂肪酸组成基本上相同。用DGLA处理的对照植物的叶含有1.2-1.9w%的DGLA和背景数量的ARA(.26-.27wt%)。转基因植物叶仅含有.2-.7wt%的DGLA,但ARA的水平提高(.74-1.1wt%),这表明在这些叶中DGLA转变为ARA。在种子中表达
本实验的目的是确定一种带有种子特异性napin启动子的结构是否能在种子中表达。
使用下面的引物,用PCR对Ma29 cDNA进行修饰,来分别在起始和终止密码子的上游和下游引入一个Xho I克隆位点。
Madxho-正向:
5’-CUACUACUACUACTCGAGCAAGATGGGAACGGACCAAGG (SEQ IDNO:25)
Madxho-反向:
5’-CAUCAUCAUCAUCTCGAGCTACTCTTCCTTGGGACGGAG (SEQ ID NO:26)
使用CloneAmp系统(GIBCOBRL)将PCR产物亚克隆到pAMP1(GIBCOBRL),产生pCGN5522,Δ5脱氢酶序列用两条链测序进行验证。
为进行种子特异性表达,将Ma29编码区以一个Xho I片段的形式从pCGN5522中切出,并插入到napin表达盒---pCGN3223的Sal I位点,产生pCGN5528。将含有napin 5’调节序列、Ma29编码区和napin3’调节序列的pCGN5528 Hind III片段插入到pCGN1557的Hind III位点,产生pCGN5531。将两个拷贝的napin转录单位顺序插入。此顺序结构能允许每个遗传位点的脱氢酶高表达。通过农杆菌介导的转化将pCGN5531导入欧洲油菜cv.LP004。
成熟T2种子的20个种子混合物的脂肪酸组成用GC进行分析。表4显示用独立的转化品系与非转化的LP004种子进行比较获得的结果。含有pCGN5531的转基因种子含有两种在对照种子中不存在的脂肪酸,根据它们相对于油酸和亚油酸的洗脱,实验鉴定为taxoleicacid(5,9-18:2)和pinoleic acid(5,9,12-18:3)。它们是油酸和亚油酸的Δ5去饱和的预期产物。在转基因植物中没有发现其他的脂肪酸组成不同。
表4
T2混合种子的组成
16:0% | 16:1% | 18:0% | 18:1% | (5,9)18:2% | 18:2% | (5,9,12)18:3% | 18:3% | 20:0% | 20:1% | 20:2% | 22:0% | 22:1% | 24:0% | |
LP004对照 | 3.86 | 0.15 | 3.05 | 69.1 | 0 | 18.51 | 0.01 | 1.65 | 1.09 | 1.40 | 0.03 | 0.63 | 0.05 | 0.42 |
5531-1 | 4.26 | 0.15 | 3.23 | 62.33 | 4.07 | 21.44 | 0.33 | 1.38 | 0.91 | 1.04 | 0.05 | 0.41 | 0.03 | 0.27 |
5531-2 | 3.78 | 0.14 | 3.37 | 66.18 | 4.57 | 17.31 | 0.27 | 1.30 | 1.03 | 1.18 | 0 | 0.47 | 0.01 | 0.30 |
5531-6 | 3.78 | 0.13 | 3.47 | 63.61 | 6.21 | 17.97 | 0.38 | 1.34 | 1.04 | 1.14 | 0.05 | 0.49 | 0.02 | 0.26 |
5531-10 | 3.96 | 0.17 | 3.28 | 63.82 | 5.41 | 18.58 | 0.32 | 1.43 | 0.98 | 1.11 | 0.02 | 0.50 | 0 | 0.31 |
5531-16 | 3.91 | 0.17 | 3.33 | 64.31 | 5.03 | 18.98 | 0.33 | 1.39 | 0.96 | 1.11 | 0 | 0.44 | 0 | 0 |
5531-28 | 3.81 | 0.13 | 2.58 | 62.64 | 5.36 | 20.95 | 0.45 | 1.39 | 0.83 | 1.15 | 0.01 | 0.36 | 0.05 | 0.21 |
对植物进行Northern分析来鉴定表达Ma29的植物。在开花后大约25天或当napin启动子被诱导时分离正在发育的胚,并按实施例7中的介绍浸入含有GLA或DGLA的溶液。然后按照实施例7中用于叶的方法用GC对胚进行脂肪酸分析来确定DGLA转变为ARA的量。接着按实施例7用GC分析评价ARA被内源性芸苔属乙酰转移酶掺入三酰甘油的数量。
实施例8
在欧洲油菜中表达高山被孢霉Δ6脱氢酶
使用下列引物用PCR修饰Ma524 cDNA来导入克隆位点:
Ma524PCR-1(SEQ ID NO:27)
5’-CUACUACUACUATCTAGACTCGAGACCATGGCTGCTGCTCCAGTGTG
Ma524PCR-2(SEQ ID NO:28)
5’-CAUCAUCAUCAUAGGCCTCGAGTTACTGCGCCTTACCCAT
这些引物允许扩增整个编码区,并在5’末端加入Xba I和Xho I位点,在3’末端加入Xho I和Stu I位点。使用CloneAmp系统(GIBCOBRL)将PCR产物亚克隆到pAMP1(GIBCOBRL)中产生pCGN5535,Δ6脱氢酶序列用两条链测序验证。
为进行种子特异性表达,将Ma524编码区以一个Xho I片段的形式从pCGN5535中切出,并插入到napin表达盒---pCGN3223的Sal I位点,产生pCGN5536。将含有napin 5’调节序列、Ma524编码区和napin 3’调节序列的pCGN5536 Not I片段插入到pCGN1557的Not I位点,产生pCGN5538。通过农杆菌介导的转化将pCGN5538导入欧洲油菜cv.LP004。
从在温室中进行的6个独立转化事件收获成熟的T2种子。用GC分析单一种子的脂肪酸组成。表5显示了对照LP004种子和6个5538品系的结果。除了#8所有的5538品系都产生含有GLA的种子。GLA的存在在这些种子中分离,正如对T2自交种子群体所预期的。除了GLA,高山被孢霉Δ6脱氢酶还能产生18:4(stearidonic)和另一种据信为6,9-18:2的脂肪酸。
上述结果显示,具有三种不同底物特异性的脱氢酶能在一种异源系统中表达,并能用于产生多不饱和长链脂肪酸。其例子为从前体20:3(DGLA)产生ARA(20:4)、从18:2底物产生GLA(18:3)和将18:1底物转变为18:2,后者是GLA的前体。
表5
Ma524转基因Brassica植物种子的脂肪酸分析SPL 16:0 16:1 18:0 18:1 6,9 18:2 18:2 18:3ga 18:3 18:4 20:1 22:0 22:1 24:0 24:1# % % % % % % % % % % % % %
LP004-1 4.33 0.21 3.78 72.49 0 13.97 0 1.7 0 1.34 0.71 0.02 0.58 0.27
-2 4.01 0.16 3.09 73.59 0 14.36 0.01 1.4 0 1.43 0.66 0.02 0.5 0.2
-3 4.12 0.19 3.56 70.25 0 17.28 0 1.57 0 1.28 0.5 0.02 0.39 0.2
-4 4.22 0.2 2.7 70.25 0 17.86 0 1.61 0 1.31 0.53 0.02 0.4 0.24
-5 4.02 0.16 3.41 72.91 0 14.45 0.01 1.45 0 1.37 0.7 0.02 0.51 0.26
-6 4.22 0.18 3.23 71.47 0 15.92 0.01 1.52 0 1.32 0.69 0.02 0.51 0.27
-7 4.1 0.16 3.47 72.06 0 15.23 0 1.52 0 1.32 0.63 0.03 0.49 0.23
-9 4.01 0.17 3.71 72.98 0 13.97 0.01 1.41 0 1.45 0.74 0.03 0.58 0.23
-10 4.04 0.16 3.57 70.03 0 17.46 0 1.5 0 1.33 0.61 0.03 0.36 0.245538-1-1 4.61 0.2 3.48 68.12 1.37 10.68 7.48 1.04 0.33 1.19 0.49 0.02 0.33 0.13
-2 4.61 0.22 3.46 68.84 1.36 10.28 7.04 1.01 0.31 1.15 0.48 0.02 0.39 0
-3 4.78 0.24 3.24 65.86 0 21.36 0 1.49 0 1.08 0.46 0.02 0.38 0.22
-4 4.84 0.3 3.89 67.64 1.67 9.9 6.97 1.02 0.36 1.14 0.53 0.02 0.5 0.18
-5 4.64 0.2 3.58 64.5 3.61 8.85 10.14 0.95 0.48 1.19 0.47 0.01 0.33 0.12
-6 4.91 0.27 3.44 66.51 1.48 11.14 7.74 1.15 0.33 1.08 0.49 0.02 0.34 0.13
-7 4.87 0.22 3.24 65.78 1.27 11.92 8.38 1.2 0 1.12 0.47 0.02 0.37 0.16
表5
Ma524转基因Brassica植物种子的脂肪酸分析SPL 16:0 16:1 18:0 18:1 6,9 18:2 18:2 18:3ga 18:3 18:4 20:1 22:0 22:1 24:0 24:1# % % % % % % % % % % % % % %
-8 4.59 0.22 3.4 70.77 0 16.71 0 1.35 0 1.14 0.48 0.02 0.39 0.15
-9 4.63 0.23 3.51 69.66 2.01 8.77 7.24 0.97 0 1.18 0.52 0.02 0.3 0.11
-10 4.56 0.19 3.55 70.68 0 16.89 0 1.37 0 1.22 0.54 0.02 0.22 0.035538-3-1 4.74 0.21 3.43 67.52 1.29 10.91 7.77 1.03 0.28 1.11 0.5 0.02 0.35 0.14
-2 4.72 0.21 3.24 67.42 1.63 10.37 8.4 0.99 0 1.12 0.49 0.02 0.36 0.15
-3 4.24 0.21 3.52 71.31 0 16.53 0 1.33 0 1.12 0.45 0.02 0.4 0.14
-4 4.64 0.21 3.45 67.92 1.65 9.91 7.97 0.91 0.33 1.14 0.47 0.02 0.37 0.14
-5 4.91 0.25 3.31 67.19 0 19.92 0.01 1.39 0 1.05 0.48 0.02 0.37 0.14
-6 4.67 0.21 3.25 67.07 1.23 11.32 8.35 0.99 0 1.16 0.47 0.02 0.33 0.16
-7 4.53 0.19 2.94 64.8 4.94 8.45 9.95 0.93 0.44 1.13 0.37 0.01 0.27 0.12
-8 4.66 0.22 3.68 67.33 0.71 12 6.99 1.1 0.24 1.18 0.48 0.03 0.36 0.17
-9 4.65 0.24 3.11 67.42 0.64 12.71 6.93 1.16 0.25 1.08 0.45 0.02 0.32 0.17
-10 4.88 0.27 3.33 65.75 0.86 12.89 7.7 1.1 0.24 1.08 0.46 0.01 0.34 0.165538-4-1 4.65 0.24 3.8 62.41 0 24.68 0 1.6 0.01 0.99 0.45 0.02 0.33 0.13
-2 5.37 0.31 3 57.98 0.38 18.04 10.5 1.41 0 0.99 0.48 0.02 0.3 0.19
-3 4.61 0.22 3.07 63.62 0.3 16.46 7.67 1.2 0 1.18 0.45 0.02 0.29 0.14
表5
Ma524转基因Brassica植物种子的脂肪酸分析SPL 16:0 16:1 18:0 18:1 6,9 18:2 18:2 18:3ga 18:3 18:4 20:1 22:0 22:1 24:0 24:1# % % % % % % % % % % % % %
-4 4.39 0.19 2.93 65.97 0 22.36 0 1.45 0 1.17 0.41 0.03 0.32 0.15
-5 5.22 0.29 3.85 62.1 2.35 10.25 11.39 0.93 0.41 1.04 0.6 0.02 0.47 0.17
-6 4.66 0.18 2.85 66.79 0.5 13.03 7.66 0.97 0.22 1.28 0.42 0.02 0.31 0.14
-7 4.85 0.26 3.03 57.43 0.26 28.04 0.01 2.59 0.01 1.13 0.56 0.02 0.4 0.23
-8 5.43 0.28 2.94 54.8 1.84 13.79 15.67 1.36 0.53 1.1 0.55 0.02 0.35 0.19
-9 4.88 0.24 3.32 62.3 0.58 14.86 9.04 1.34 0.29 1.13 0.52 0.02 0.37 0.19
-10 4.53 0.2 2.73 64.2 0.07 24.15 0 1.52 0 1.09 0.39 0.02 0.27 0.175538-5-1 4.5 0.15 3.35 66.71 0.88 11.7 8.38 1.04 0.3 1.24 0.49 0.02 0.29 0.17
-2 4.77 0.23 3.06 62.67 0.68 15.2 8.8 1.31 0.28 1.15 0.46 0.02 0.3 0.19
-3 4.59 0.22 3.61 64.35 2.29 9.95 10.57 1.01 0.45 1.21 0.48 0.02 0.26 0.16
-4 4.86 0.26 3.4 67.69 0.65 12.24 6.61 1.09 0.23 1.07 0.45 0.02 0.32 0.14
-5 4.49 0.21 3.3 69.25 0.04 16.51 2.18 1.2 0 1.11 0.44 0.02 0.33 0.16
-6 4.5 0.21 3.47 70.48 0.08 14.9 2.19 1.22 0 1.13 0.49 0.02 0.33 0.16
-7 4.39 0.21 3.44 67.59 2.38 9.24 8.98 0.89 0 1.18 0.44 0.02 0.28 0.14
-8 4.52 0.22 3.17 68.33 0.01 18.91 0.73 1.32 0.01 1.08 0.45 0.02 0.29 0.17
-9 4.68 0.2 3.05 64.03 1.93 11.03 11.41 1.02 0.01 1.15 0.39 0.02 0.21 0.15
表5
Ma524转基因Brassica植物种子的脂肪酸分析SPL 16:0 16:1 18:0 18:1 6,9 18:2 18:2 18:3ga 18:3 18:4 20:1 22:0 22:1 24:0 24:1# % % % % % % % % % % % % %
-10 4.57 0.2 3.1 67.21 0.61 12.62 7.68 1.07 0.25 1.14 0.43 0.02 0.25 0.15
5538-8-1 4.95 0.26 3.14 64.04 0 23.38 0 1.54 0 0.99 0.42 0.02 0.38 0.17
-2 4.91 0.26 3.71 62.33 0 23.97 0 1.77 0 0.95 0.53 0.02 0.42 0.19
-3 4.73 0.25 4.04 63.83 0 22.36 0.01 1.73 0 1.05 0.55 0.02 0.45 0.16
-4 5.1 0.35 3.8 60.45 0 24.45 0.01 2.13 0 1.07 0.65 0.03 0.53 0.24
-5 4.98 0.3 3.91 62.48 0 23.44 0 1.77 0 1.01 0.51 0.01 0.43 0.21
-6 4.62 0.21 3.99 66.14 0 20.38 0 1.48 0 1.15 0.53 0.02 0.48 0.19
-7 4.64 0.22 3.55 64.6 0 22.65 0 1.38 0 1.09 0.45 0.02 0.41 0.19
-8 5.65 0.38 3.18 56.6 0 30.83 0.02 0.02 0 0.98 0.55 0.03 0.39 0.26
-9 8.53 0.63 6.9 51.76 0 26.01 0 0.01 0 1.41 1.21 0.07 0.96 0.33
-10 5.52 0.4 3.97 57.92 0 28.95 0 0.02 0 0.95 0.52 0.02 0.41 0.16
5538-10- 4.44 0.19 3.5 68.42 0 19.51 0 1.32 0 1.14 0.45 0.02 0.31 0.161
-2 4.57 0.21 3.07 66.08 0 21.99 0.01 1.36 0 1.12 0.41 0.02 0.31 0.16
-3 4.63 0.21 3.48 67.43 0 20.27 0.01 1.32 0 1.12 0.46 0.02 0.21 0.08
-4 4.69 0.19 3.22 64.62 0 23.16 0 1.35 0 1.08 0.46 0.02 0.33 0.2
-5 4.58 0.2 3.4 66.75 0 20.17 0.01 0.02 0 1.1 0.45 0.02 0.34 0.17
表5
Ma524转基因Brassica植物种子的脂肪酸分析SPL 16:0 16:1 18:0 18:1 6,9 18:2 18:2 18:3ga 18:3 18:4 20:1 22:0 22:1 24:0 24:1# % % % % % % % % % % % % %
-8 4.55 0.21 0 73.55 0.05 14.91 2.76 1.21 0.07 1.24 0.51 0.02 0.19 0
-9 4.58 0.21 3.28 66.19 0 21.55 0 1.35 0 1.12 0.43 0.02 0.33 0.16
-10 4.52 0.2 3.4 68.37 0 19.33 0.01 1.3 0 1.13 0.46 0.02 0.35 0.18
实施例9
在欧洲油菜中表达高山被孢霉Δ12脱氢酶
使用下列引物用PCR修饰Ma648 cDNA来导入克隆位点:
Ma648PCR-for(SEQ ID NO:29)
5’-CUACUACUACUAGGATCCATGGCACCTCCCAACACT
Ma648PCR-rev(SEQ ID NO:30)
5’-CAUCAUCAUCAUGGTACCTCGAGTTACTTCTTGAAAAAGAC
这些引物允许扩增整个编码区,并在5’末端加入BamH I位点,在3’末端加入Kpn I和Xho I位点。使用CloneAmp系统(GIBCOBRL)将PCR产物亚克隆到pAMP1(GIBCOBRL)中产生pCGN5540,Δ12脱氢酶序列用两条链测序验证。
为进行种子特异性表达,将Ma648编码区以一个BamHI/XhoI片段的形式从pCGN5540中切出,并插入到napin表达盒---pCGN3223的Bgl II和Xho I位点之间,产生pCGN5542。将含有napin 5’调节序列、Ma648编码区和napin 3’调节序列的pCGN5541 Asp718片段插入到pCGN5138的Asp718位点,产生pCGN5542。通过农杆菌介导的转化将pCGN5542导入两种欧洲油菜变种。使用商业化的油菜变种SP30021和一种低亚麻酸品系LP30108。
从在温室中生长的19个独立的LP30108转化事件和一种非转化对照中收获成熟的自交T2种子。预期这些种子将产生Δ12脱氢酶转基因的分离。用GC分析20-种子合并物的脂肪酸组成。结果示于表6。所有的转化品系都含有水平提高的18:2,后者是Δ12脱氢酶的产物。在这些植物中18:3的水平没有明显的提高。事件#11和16显示了18:2在合并的种子中的最大积累。为研究18:2水平在T2种子中的分离,并为确定将用于接着产生后代的单个植株,进行半种子分析。种子在暗处在30度在浸水滤纸上发芽过夜。切下外子叶进行GC分析,将其余的苗种入土壤。这些分析的一些结果示于表7。含有高山被孢霉Δ12脱氢酶的单个T2种子在种子中积累18:2至60%。样品97xx1116#59是一种无分离的例子。即使是在最高18:2积累的种子中,18:3的水平也仅略微提高。将这些和其他单个选择的T2植株在温室中和在大田中种植以产生T3种子。
从在温室中生长的20个独立的SP30021转化事件和一种非转化对照中收获成熟的自交T2种子。预期这些种子将产生Δ12脱氢酶转基因的分离。用GC分析20-种子合并物的脂肪酸组成。数据列于表8。所有的转化品系都含有水平提高的18:2,后者是Δ12脱氢酶的产物。与低亚麻酸的LP30108品系一样,18:3的水平没有明显的提高。事件#4和12显示了18:2在合并的种子中的最大积累。为研究18:2水平在T2种子中的分离,并为确定将用于接着产生后代的单个植株,进行半种子分析。种子在暗处在30度在浸水滤纸上发芽过夜。切下外子叶进行GC分析,将其余的苗种入土壤。这些分析的一些结果示于表9。样品97xx1157#88和#18分别是5542-SP30021-4和5542-SP30021-12的无分离例子。将这些和其他单个选择的T2植株在温室中和在大田中种植以产生T3种子。
表6循环号 SPL号 株号 16:0 16:1 18:0 18:1 18:2 18:3 20:0 20:1 20:2 22:097XX1098 45 5542-LP30108-16 7.04 0.43 1.12 18.01 66.36 4.76 0.5 0.84 0.3 0.4497XX1098 22 5542-LP30108-16 5.17 0.29 2.11 22.01 65.18 3.15 0.63 0.75 0.21 0.3697XX1098 40 5542-LP30108-16 4.99 0.2 2.05 23.91 63.13 3.3 0.73 0.85 0.23 0.4997XX1098 28 5542-LP30108-16 4.47 0.19 1.75 26.7 62.39 2.46 0.58 0.85 0.2 0.3297XX1098 2 5542-LP30108-16 4.54 0.21 1.66 26.83 61.89 2.9 0.55 0.82 0.18 0.3397XX1098 58 5542-LP30108-16 6.05 0.31 1.36 24.11 61.36 3.8 0.72 1.13 0.26 0.5897XX1098 83 5542-LP30108-16 5.13 0.17 2.03 27.05 60.93 2.62 0.7 0.71 0.14 0.497XX1098 34 5542-LP30108-16 4.12 0.19 1.44 29.35 60.54 2.53 0.43 0.89 0.17 0.2597XX1116 37 5542-LP30108-11 4 0.14 2.43 23.29 63.99 2.6 0.58 0.69 0.71 1.1197XX1116 88 5542-LP30108-11 3.8 0.18 2.04 23.59 63.93 2.95 0.54 0.81 0.99 0.8297XX1116 36 5542-LP30108-11 4.15 0.2 1.51 25.94 62.14 2.74 0.47 0.87 0.79 0.8197XX1116 31 5542-LP30108-11 6.29 0.35 1.04 24.14 60.91 4.02 0.55 0.91 0.75 0.7297XX1116 10 5542-LP30108-11 6.97 0.4 3.36 18.9 60.66 4.68 1.2 0.7 0.53 1.7197XX1116 32 5542-LP30108-11 3.96 0.16 2.61 26.73 60.54 3.38 0.66 0.87 0.2 0.6297XX1116 55 5542-LP30108-11 4.26 0.22 0.98 28.57 59.94 3.24 0.4 0.68 0.71 0.7597XX1116 12 5542-LP30108-11 4.17 0.23 1.42 28.61 59.52 3.26 0.51 0.95 0.29 0.67
表6循环号 SPL号 株号 16:0 16:1 18:0 18:1 18:2 18:3 20:0 20:1 20:2 22:097XX1116 86 5542-LP30108-11 4.23 0.3 1.09 28.34 59.2 3.95 0.48 0.91 0.55 0.7197XX1116 61 5542-LP30108-11 4.13 0.16 1.92 30.18 58.67 2.65 0.56 0.88 0.25 0.4197XX1116 60 5542-LP30108-11 4.42 0.26 1.61 28.77 58.6 3.26 0.53 0.85 0.68 0.7597XX1116 91 5542-LP30108-11 7.82 0.67 2.37 17.97 58.43 4.85 0.94 0.86 3.87 1.7197XX1116 59 5542-LP30108-11 3.56 0.2 1.6 65.5 23.03 2.23 0.52 1.54 0.49 0.69
表7
16:0 16:1 18:0 18:1 18:2 18:3 20:0 20:1 20:2 22:0
% % % % % % % % % %5542-LP30108-1 4.6 0.15 1.93 50.44 38.54 2.06 0.65 1.11 0.09 0.375542-LP30108-2 4.63 0.17 1.78 41.11 47.53 2.46 0.62 1.02 0.14 0.385542-LP30108-3 4.96 0.18 2.07 48.16 40.01 2.17 0.73 1.13 0.1 0.395542-LP30108-4 4.36 0.15 1.94 46.51 42.57 1.95 0.64 1.06 0.11 0.355542-LP30108-5 4.45 0.14 2.19 49.54 39.13 2.14 0.72 1.14 0.11 0.385542-LP30108-6 4.97 0.16 1.86 49.23 39.2 2.17 0.7 1.12 0.11 0.415542-LP30108-7 4.46 0.13 2.72 39.6 48.65 2.02 0.81 0.96 0.13 0.45542-LP30108-8 4.63 0.18 1.78 47.86 41 2.31 0.62 1.09 0.11 0.365542-LP30108-9 4.64 0.16 1.75 42.5 46.57 2.2 0.61 1 0.13 0.355542-LP30108-10 4.46 0.15 2.37 43.61 45.29 1.77 0.71 1.02 0.12 0.365542-LP30108-11 4.58 0.25 1.88 37.08 50.95 2.94 0.64 0.96 0.16 0.425542-LP30108-12 4.46 0.18 1.69 43.62 45.36 2.44 0.59 1.09 0.14 0.345542-LP30108-13 4.45 0.15 2.33 51 37.71 1.91 0.75 1.12 0.09 0.45542-LP30108-14 4.3 0.16 2.04 45.93 42.78 2.46 0.66 1.07 0.14 0.375542-LP30108-15 4.18 0.16 2.17 43.79 45.2 2.14 0.68 1.04 0.15 0.365542-LP30108-16 5.04 0.18 1.89 32.32 55.78 2.68 0.63 0.84 0.2 0.36
表7
16:0 16:1 18:0 18:1 18:2 18:3 20:0 20:1 20:2 22:0
% % % % % % % % % %5542-LP30108-18 4.2 0.14 2.23 50.63 38.51 1.79 0.72 1.15 0.1 0.375542-LP30108-19 4.63 0.18 1.81 52.51 36.26 2.12 0.68 1.19 0.1 0.45542-LP30108-20 4.77 0.15 2 78 39.76 48.06 2.25 0.75 0.91 0.13 0.36LP30108 contol 4.31 0.22 2.05 66.15 22.59 1.87 0.77 1.3 0.07 0.44
表8
株号 16:0 16:1 18:0 18:1 18:2 18:3 20:0 20:1 20:2 22:05542-SP30021-1 4.37 0.17 2.17 40.26 39.43 11.06 0.74 1.14 0.14 0.425542-SP30021-2 4.33 0.18 1.51 43.07 36.03 12.57 0.57 1.21 0.14 0.335542-SP30021-3 5.2 0.22 3.1 43.7 37.04 8.03 0.92 1.06 0.13 0.485542-SP30021-4 4.37 0.15 1.94 34.26 45.12 12.04 0.6 0.96 0.17 0.35542-SP30021-5 4.15 0.17 1.73 48.98 31.13 11.41 0.63 1.26 0.13 0.355542-SP30021-6 4.52 0.17 1.92 38.1 42.39 10.53 0.67 1.04 0.18 0.395542-SP30021-7 4.58 0.18 1.66 41.87 37.52 11.8 0.62 1.14 0.15 0.365542-SP30021-8 4.46 0.17 1.59 42.69 36.93 11.88 0.59 1.14 0.14 0.355542-SP30021-9 4.63 0.19 1.69 39.89 39.75 11.48 0.62 1.09 0.15 0.385542-SP30021-10 4.74 0.16 1.79 39.19 40.51 11.42 0.63 0.99 0.13 0.345542-SP30021-11 4.57 0.16 1.71 38.13 42 11.15 0.62 1.04 0.18 0.365542-SP30021-12 4.05 0.16 2.04 35.44 43.47 12.45 0.62 1.07 0.21 0.335542-SP30021-13 4.37 0.15 1.79 38.74 41.28 11.36 0.62 1.04 0.16 0.355542-SP30021-14 4.32 0.16 1.47 42.32 37.17 12.3 0.54 1.16 0.16 0.325542-SP30021-15 4.25 0.18 1.65 44.96 34.28 12.39 0.59 1.13 0.14 0.32
表8
株号 16:0 16:1 18:0 18:1 18:2 18:3 20:0 20:1 20:2 22:05542-SP30021-16 4.53 0.17 1.91 42.13 38.32 10.51 0.67 1.12 0.14 0.385542-SP30021-17 4.16 0.19 1.7 50.65 29.3 11.4 0.61 1.29 0.11 0.365542-SP30021-18 4.24 0.17 1.68 44.47 35.46 11.52 0.6 1.19 0.14 0.345542-SP30021-19 4.1 0.18 1.8 46.67 33.87 10.86 0.63 1.24 0.13 0.375542-SP30021-20 4.3 0.17 1.64 39.6 40.39 11.53 0.57 1.12 0.16 0.32SP30021 4.38 0.21 1.47 56.51 22.59 12.04 0.62 1.45 0.11 0.39
表9循环号 SPL号 株号 16:0 16:1 18:0 18:1 18:2 18:3 20:0 20:1 20:2 22:097XX1156 96 5542-SP30021-4 3.71 0.13 1.36 29.29 51.74 11.57 0.41 0.85 0.18 0.4697XX1156 50 5542-SP30021-4 2.95 0.11 1.33 28.78 50.97 13.83 0.3 0.99 0.28 0.3297XX1158 10 5542-SP30021-4 4.05 0.16 2.47 31.18 50.88 8.77 0.67 0.89 0.22 0.3397XX1158 32 5542-SP30021-4 3.56 0.15 1.44 30.73 50.1 11.86 0.47 0.91 0.21 0.2297XX1158 56 5542-SP30021-4 4.44 0.19 3.09 30.64 49.71 9.39 0.83 0.79 0.2 0.497XX1157 80 5542-SP30021-4 4.05 0.18 1.32 27.41 49.59 14.81 0.53 1.19 0.29 0.497XX1158 39 5542-SP30021-4 4.04 0.15 2.98 28.62 49.52 12.28 0.69 0.86 0.31 0.2797XX1156 17 5542-SP30021-4 3.65 0.15 2.43 29.38 49.42 12.3 0.52 0.92 0.67 0.3597XX1156 60 5542-SP30021-4 3.75 0.17 1.7 30.03 49.13 12.87 0.51 1.01 0.27 0.3597XX1157 83 5542-SP30021-4 4.15 0.2 1.77 29.72 49.08 12.22 0.66 1.21 0.16 0.5297XX1157 86 5542-SP30021-4 3.6 0.14 1.12 27.65 49.01 16.05 0.48 1.21 0.33 0.0897XX1158 77 5542-SP30021-4 4.14 0.17 1.58 31.98 48.82 10.72 0.65 1 0.28 0.4497XX1157 88 5542-SP30021-4 3.36 0.15 1.22 56.42 21.63 13.78 0.58 1.85 0.06 0.65
表9循环号 SPL号 株号 16:0 16:1 18:0 18:1 18:2 18:3 20:0 20:1 20:2 22:097XX1157 39 5542-SP30021-12 2.84 0.04 1.84 29.6 53.16 9.52 0.57 1.32 0.35 0.4897XX1157 55 5542-SP30021-12 3.28 0.1 2.18 30.36 52.27 9.26 0.63 1.15 0.22 0.4197XX1157 10 5542-SP30021-12 3.5 0.06 1.51 29.78 50.98 11.13 0.64 1.45 0.4 0.2697XX1157 41 5542-SP30021-12 3.31 0.08 1.64 30.18 50.51 11.59 0.57 1.27 0.24 0.4197XX1157 35 5542-SP30021-12 3.31 0.09 1.57 30.36 50.1 12.17 0.5 1.15 0.23 0.3597XX1157 1 5542-SP30021-12 3.45 0.11 2.88 32.11 49.45 8.69 0.82 1.22 0.27 0.6397XX1157 16 5542-SP30021-12 2.91 0.09 1.52 29.35 48.88 14.26 0.58 1.39 0.15 0.397XX1157 50 5542-SP30021-12 3.29 0.09 2.13 33.23 48.78 9.87 0.67 1.06 0.18 0.4797XX1157 25 5542-SP30021-12 2.83 0.05 1.4 33.22 48.52 11.22 0.5 1.33 0.26 0.4297XX1157 57 5542-SP30021-12 2.94 0.13 1.46 32.85 47.58 12.21 0.57 1.31 0.27 0.4797XX1157 56 5542-SP30021-12 3.01 0.07 1.63 31.53 47 14.02 0.59 1.31 0.28 0.2397XX1157 6 5542-SP30021-12 3.9 0.13 1.5 32.43 46.98 12.45 0.52 1.11 0.21 0.4997XX1157 18 5542-SP30021-12 3.88 0.16 1.73 57.94 22.33 10.51 0.74 1.68 0.11 0.64
实施例10
在欧洲油菜中同时表达高山被孢霉Δ6和Δ12脱氢酶
为表达来自同一T-DNA的高山被孢霉Δ6和Δ12脱氢酶,制备下列用于种子特异性表达的结构。
将含有napin 5’调节序列、Ma524编码区和napin 3’调节序列的pCGN5536 Not I片段插入到pCGN5542的Not I位点,产生pCGN5544。将表达组件正确定向,使Ma524和Ma648的转录和nptII标记的方向相同。
通过农杆菌介导的转化将pCGN5544导入欧洲油菜cv.LP30108。从在温室中生长的16个独立的LP30108转化事件和一种非转化对照中收获成熟的自交T2种子。预期这些种子将产生Δ6+Δ12脱氢酶转基因的分离。用GC分析20-种子合并物的脂肪酸组成。结果示于表10。除了一个(5544-LP30108-3)外所有的品系与对照相比都显示改变的油组成。除了三个品系外(-3、-4、-11)都产生GLA。三个没有GLA的品系中有两个(-4、-11)显示18:2增加,这表示Δ12脱氢酶的表达。从组来看,在含有双Δ6+Δ12结构(pCGN5544)的植物中观察到的GLA水平比含有pCGN5538(单独的Δ6)的植物的GLA水平高。此外,Δ6,918:2的水平在含有Δ12+Δ6的植物中比单独含有Δ6脱氢酶的植物中大大降低。因此,在一个T-DNA上组合Δ6和Δ12脱氢酶比单独表达Δ6脱氢酶能导致更多的GLA积累和较少的副产物。为研究GLA水平在T2种子中的分离,并为确定将用于接着产生后代的单个植株,进行半种子分析。种子在暗处在30度在浸水滤纸上发芽过夜。切下外子叶进行GC分析,将其余的苗种入土壤。这些分析的一些结果示于表11。如同对T2群体所预期的,GLA和18:2的水平在单个的种子中是分离的。在单个的种子中观察到GLA含量占到总脂肪酸的60%。选择单个的事件在温室和大田中种植来产生T3种子。
转基因植物包括表达本发明结构的芸苔、大豆、红花、玉米、亚麻和向日葵可以是GLA的优良原料。
GLA的典型原料例如琉璃苣最高产生25%的GLA。相比之下,表10中的植物含有高至30%的GLA。表11中显示的单个种子含有高至60%的GLA。
表10
16:0 16:1 18:0 18:1 18:2 18:2 18:3 18:3 18:4 20:0 20:1 22:0
Δ6,9 Δ9,12 Δ6,9,12 Δ9,12,
15
% % % % % % % % % % % %5544-LP30108-1 4.54 0.17 1.91 49.96 0 30.98 7.97 1.85 0.11 0.68 1.17 0.415544-LP30108-2 4.69 0.19 2.15 38.49 0 33.94 16.21 1.73 0.25 0.72 0.96 0.415544-LP30108-3 4.26 0.2 1.97 66.68 0 22.13 0.08 1.96 0.01 0.73 1.33 0.425544-LP30108-4 4.59 0.24 1.76 44.21 0 44.54 0.02 2.19 0.01 0.62 1.08 0.45544-LP30108-5 4.5 0.18 2.28 47.57 0 26.41 14.42 1.71 0.22 0.78 1.1 0.435544-LP30108-6 4.51 0.16 2.12 31.95 0.01 26.94 29.8 1.41 0.5 0.81 1.02 0.515544-LP30108-7 4.84 0.21 1.68 38.24 0 32.27 18.21 1.87 0.33 0.66 1.04 0.435544-LP30108-10 5 0.28 1.86 41.17 0 46.54 0.36 2.58 0.02 0.6 0.91 0.375544-LP30108-11 4.57 0.2 1.74 47.29 0 41.49 0.03 2.22 0.01 0.64 1.17 0.45544-LP30108-12 4.87 0.18 2.65 34.53 0 30.37 23.12 1.46 0.36 0.83 0.95 0.455544-LP30108-13 4.41 0.16 2.32 40.82 0.11 26.8 21.05 1.53 0.37 0.77 1.06 0.425544-LP30108-14 4.38 0.2 2.21 29.91 0.16 28.01 30.62 1.46 0.59 0.76 0.97 0.475544-LP30108-15 4.79 0.22 2.23 23.42 0.02 28.73 35.68 1.51 0.77 0.87 0.89 0.565544-LP30108-16 4.54 0.18 1.78 40.81 0 35.24 12.83 1.95 0.27 0.68 1.02 0.435544-LP30108-17 4.63 0.18 2.28 46.96 0 31.06 10.6 1.7 0.14 0.76 1.06 0.425544-LP30108-20 4.87 0.29 1.44 31.81 0.15 23.51 32.85 1.64 0.69 0.89 0.96 0.67
表10
16:0 16:1 18:0 18:1 18:2 18:2 18:3 18:3 18:4 20:0 20:1 22:0
Δ6,9 Δ9,12 Δ6,9,12 Δ9,12,
15
% % % % % % % % % % % %LP30108对照 3.89 0.25 1.19 67.73 0 22.46 0.1 1.97 0 0.54 1.32 0.44
表11循环号 SPL号 株号 16:0 16:1 18:0 18:1 18:2_Δ6,9 18:2_Δ9,12 18:3_Δ6,9,18:3_Δ9,12, 18:4 20:0 20:1
12 1597XX1333 64 5544-LP30108-20 6.53 0.15 0.98 23.33 0.01 21.1 43.3 1.34 0.84 0.52 0.9797XX1333 65 5544-LP30108-20 6.9 0.29 1.17 8.89 0.03 15.07 60.5 1.12 2.23 0.98 0.8697XX1333 66 5544-LP30108-20 8.15 0.2 3.6 16.87 0.11 16.05 48.23 1.1 1.18 1.71 0.6697XX1333 67 5544-LP30108-20 8.85 0.35 1.2 14.49 0.01 25.66 43.98 1.8 1.03 0.65 0.7697XX1333 68 5544-LP30108-20 6.05 0.16 1.27 17.85 0.16 16.13 53.16 1.14 1.25 0.71 0.8597XX1333 69 5544-LP30108-20 7.16 0.21 1.33 11.51 0.09 17.42 56.13 1.41 1.58 0.93 0.6897XX1333 70 5544-LP30108-20 3.46 0.04 1.76 18.38 0.03 22.55 48.55 1.22 1.04 0.83 0.9597XX1333 71 5544-LP30108-20 3.71 0.05 1.74 16.11 0.01 26.93 45.79 1.47 1.02 0.89 197XX1333 72 5544-LP30108-20 3.5 0.04 1.76 23.74 0.02 35.38 30.82 1.87 0.58 0.65 0.8597XX1333 73 5544-LP30108-20 4.67 0.11 1.87 17.98 0.04 22.47 47.89 1.17 0.89 0.93 0.8897XX1333 74 5544-LP30108-20 4.52 0.09 1.86 13.77 0.03 20.9 52.96 1.31 1.19 1.03 0.8897XX1333 75 5544-LP30108-20 5.26 0.13 1.64 16.46 0.05 21.75 49.42 1.25 1.08 0.83 0.8697XX1333 76 5544-LP30108-20 7.61 0.21 1.44 12.49 0.33 17 55.31 1.18 1.59 0.88 0.7497XX1333 77 5544-LP30108-20 6.42 0.15 1.51 10.79 0.09 15.96 58.77 1.12 1.53 0.98 0.8597XX1333 78 5544-LP30108-20 4.59 0.16 0.93 12.1 0.08 15.94 60.15 1.12 1.69 0.74 0.8897XX1333 79 5544-LP30108-20 5.24 0.09 1.94 14.08 0.21 19.79 53.58 1.05 1.03 0.96 0.84
表11循环号 SPL号 株号 16:0 16:1 18:0 18:1 18:2_Δ6,9 18:2_Δ9,12 18:3_Δ6,9, 18:3_Δ9,12, 18:4 20:0 20:1
12 1597XX1333 80 5544-LP30108-20 4.38 0.08 1.66 22.25 0 30.79 35.49 2.16 0.72 0.66 0.8497XX1333 81 5544-LP30108-20 4.05 0.05 1.44 24.16 0.04 24.86 40.89 1.42 0.79 0.63 0.8497XX1333 82 5544-LP30108-20 3.29 0.05 1.9 19.66 0 23.83 46.48 1.27 0.87 0.78 0.8197XX1333 83 5544-LP30108-20 4.82 0.08 1.99 17.27 0.1 20.69 49.73 1.22 1.06 0.98 0.8297XX1333 84 5544-LP30108-20 5.33 0.1 1.77 13.6 0.03 21.44 51.74 1.52 1.21 0.98 0.9397XX1333 85 5544-LP30108-20 3.3 0.05 1.2 68.23 0 22.09 0.01 2.27 0 0.57 1.5797XX1333 86 5544-LP30108-20 3.23 0.05 1.54 28.15 0.01 36.4 25.91 1.99 0.43 0.59 0.9797XX1333 87 5544-LP30108-20 4.38 0.1 1.16 60.94 2.85 8.35 17.61 1.26 0.69 0.54 1.3997XX1333 88 5544-LP30108-20 4.4 0.09 1.34 38.42 0.02 34.74 16.61 2.12 0.32 0.53 0.8297XX1278 16 5544-LP30108-15 3.62 0.11 1.22 27.23 0 30.9 32.87 1.41 0.48 0.46 0.9797XX1278 17 5544-LP30108-15 3.68 0.13 1.26 45.29 0 44.79 0.72 1.77 0.01 0.43 1.2497XX1278 18 5544-LP30108-15 4.08 0.15 1.49 22.34 0 28.37 39.37 1.22 0.64 0.55 0.8897XX1278 19 5544-LP30108-15 3.51 0.1 1.01 35.44 0 44.12 11.7 1.72 0.15 0.36 1.1497XX1278 20 5544-LP30108-15 3.66 0.12 1.21 27.44 0 30.2 32.37 1.49 0.53 0.49 1.1597XX1278 21 5544-LP30108-15 3.58 0.11 1.51 29.81 0 30.72 30.65 1.16 0.4 0.5 0.9697XX1278 23 5544-LP30108-15 3.69 0.11 1.42 30.05 0 32.28 27.41 1.65 0.38 0.54 1.1997XX1278 24 5544-LP30108-15 3.56 0.11 1.31 30.25 0 28.64 31.46 1.43 0.48 0.48 1.11
表11循环号 SPL号 株号 16:0 16:1 18:0 18:1 18:2_Δ6,9 18:2_Δ9,12 18:3_Δ6,9, 18:3_Δ9,12, 18:4 20:0 20:1
12 1597XX1278 25 5544-LP30108-15 4.41 0.22 2.08 15.05 0 23.77 49.51 1.18 0.96 0.87 0.8597XX1278 26 5544-LP30108-15 3.75 0.14 1.59 23.55 0 27.91 38.8 1.39 0.61 0.59 0.9797XX1278 27 5544-LP30108-15 3.67 0.11 1.9 26.07 0 31.1 33.16 1.08 0.49 0.65 0.9797XX1278 28 5544-LP30108-15 3.82 0.11 1.54 21.27 0 29.07 39.69 1.47 0.7 0.58 0.8697XX1278 29 5544-LP30108-15 3.65 0.14 1.27 45.38 0 43.38 1 2.33 0.02 0.42 1.2797XX1278 30 5544-LP30108-15 3.59 0.12 1.19 30.41 0 30.68 30.37 1.24 0.4 0.37 0.9997XX1278 31 5544-LP30108-15 3.74 0.12 1.26 38.98 0 50.53 0.98 2.12 0.02 0.39 1.1497XX1278 32 5544-LP30108-15 3.86 0.11 1.46 26.38 0 28.9 35.41 1.01 0.5 0.54 0.97
实施例11
在欧洲油菜中同时表达高山被孢霉Δ5和Δ6脱氢酶
为在转基因菜籽油中产生花生四烯酸(ARA),需要导入Δ5和Δ6两种脱氢酶活性。为便于下游分析和育种,优选在一个单一的T-DNA上编码两种活性。下面的实施例说明Δ5和Δ6脱氢酶的同时表达。
将含有napin 5’调节序列、Ma29编码区和napin 3’调节序列的pCGN5528 Asp718片段插入到pCGN5138的Asp718位点,产生pCGN5545。将含有napin 5’调节序列、Ma524编码区和napin 3’调节序列的pCGN5536 Not I片段插入到pCGN5545的Not I位点,产生pCGN5546。将表达组件正确定向,使Ma524和Ma29的转录和nptII标记的方向相同。
通过农杆菌介导的转化将pCGN5546导入欧洲油菜cv.LP30108。从在温室中生长的30个独立的LP30108转化事件中收获成熟的自交T2种子。用GC分析20-种子合并物的脂肪酸组成。结果示于表12。所有的品系显示两种脱氢酶的表达,其证据为存在Δ5,918:2(如在pCGN5531植物中所见)和Δ6,918:2及GLA(如在pCGN5538植物中所见)。
表12来自5546-LP30108事件的成熟T2种子的20种子合并物的脂肪酸分析
株号 16:0 16:1 18:0 18:1 18:2_Δ5,9 18:2_Δ6,9 18:2_Δ9,12 18:3_Δ6,9,18:3_Δ9,12, 18:4 20:0 20:1
12 155546-LP30108-1 4.88 0.33 2.28 57.2 4.68 6.08 7.36 12.29 1.38 0.85 0.84 1.225546-LP30108-2 4.01 0.14 2.22 66.04 2.73 1.33 12.6 6.45 1.41 0.32 0.75 1.25546-LP30108-3 4.29 0.15 2.55 68.89 0.44 0.58 16.97 1.66 1.6 0.11 0.88 1.225546-LP30108-4 4.24 0.14 2.6 70.48 0.73 0.52 14.28 2.61 1.42 0.14 0.96 1.265546-LP30108-5 3.52 0.15 2.01 60.3 1.72 0.95 16.92 9.88 1.66 0.39 0.68 1.265546-LP30108-6 4.05 0.17 2.24 61.29 1.98 0.4 18.87 6.28 2 0.34 0.7 1.245546-LP30108-7 4.74 0.21 2.49 64.5 2.25 1.18 10.03 9.73 1.35 0.52 0.97 1.285546-LP30108-8 4.24 0.14 2.82 63.92 1.9 1.5 11.67 9.29 1.44 0.43 0.89 1.195546-LP30108-9 3.8 0.13 2.15 65.75 2.3 0.16 14.92 6.32 1.57 0.24 0.75 1.355546-LP30108-10 4.28 0.17 1.55 58.8 1.1 0.12 22.95 5.97 2.24 0.22 0.6 1.355546-LP30108-11 4.25 0.15 1.82 63.68 1.01 0.22 19.42 4.96 1.81 0.2 0.67 1.235546-LP30108-12 3.95 0.14 2.36 66.9 1.12 0.01 19.42 1.59 1.77 0.04 0.8 1.215546-LP30108-13 4.18 0.16 2.17 66.91 1.36 0.02 18.84 1.99 1.74 0.05 0.77 1.155546-LP30108-14 4.74 0.26 1.82 65.29 1.25 0.27 16.77 5.3 1.59 0.25 0.71 1.325546-LP30108-15 4.3 0.23 2.54 65.65 1.67 0.59 13.15 7.22 1.54 0.36 0.88 1.35546-LP30108-16 4.05 0.17 2.75 64.13 2.56 2.8 9.56 9.31 1.34 0.53 0.92 1.28
表12来自5546-LP30108事件的成熟T2种子的20种子合并物的脂肪酸分析
株号 16:0 16:1 18:0 18:1 18:2_Δ6,9 18:3_Δ6,9 18:2_Δ9,12 18:3 Δ6,9,18:3_Δ9,12,18:4 20:0 20:1
12 155546-LP30108-17 4.06 0.13 2.85 65.76 2.09 1.92 9.65 9.1 1.23 0.45 0.92 1.225546-LP30108-18 4.16 0.25 2.14 60.68 1.43 0.02 24.02 2.62 2.11 0.09 0.69 1.265546-LP30108-19 5.77 0.37 2.15 56.11 1.6 0.33 19.34 9.16 2.37 0.46 0.73 1.055546-LP30108-20 5.03 0.36 2.34 61.05 1.55 0.35 17.21 6.96 2.24 0.39 0.77 1.225546-LP30108-23 4.28 0.22 2.44 66.19 0.93 0.11 17.03 4.37 1.67 0.17 0.82 1.255546-LP30108-24 4.92 0.33 2.68 62.6 1.32 0.36 16.89 5.82 2.05 0.3 0.95 1.195546-LP30108-25 5.42 0.72 3.15 47.47 2.66 4.21 13.51 16.31 2.14 0.99 1.18 1.375546-LP30108-26 3.85 0.22 2.78 65.02 1.05 0.05 18.35 4.36 1.67 0.12 0.82 1.185546-LP30108-27 3.86 0.15 2.76 65.17 1.11 0.78 16.24 5.21 1.53 0.25 0.93 1.35546-LP30108-28 5.29 0.42 1.81 49.12 1.07 0.09 30.52 5.21 3.57 0.44 0.67 1.235546-LP30108-29 4.4 0.2 2.38 65.95 1.05 0.28 16.31 4.85 1.64 0.19 0.85 1.265546-LP30108-30 3.99 0.19 2.55 67.47 0.83 0.11 17.02 3.18 1.68 0.13 0.83 1.23
实施例12
在欧洲油菜中同时表达高山被孢霉Δ5、Δ6和Δ12脱氢酶
为在转基因菜籽油中产生最多的花生四烯酸(ARA),除了Δ5活性外,还需要Δ6和Δ12两种脱氢酶活性的存在。为便于下游分析和育种,优选在一个单一的T-DNA上编码这些活性。下面的实施例说明Δ5、Δ6和Δ12脱氢酶的同时表达。
将含有napin 5’调节序列、Ma29编码区和napin 3’调节序列的pCGN5528 Hind III片段插入到pCGN5544的Hind III位点,产生pCGN5547。将表达组件正确定向,使Ma29、Ma524和Ma648的转录和nptII标记的方向相同。
通过农杆菌介导的转化将pCGN5547导入欧洲油菜cv.LP30108。从在温室中生长的30个独立的LP30108转化事件中收获成熟的自交T2种子。用GC分析20-种子合并物的脂肪酸组成。结果示于表13。27个品系显示明显的GLA积累,一般来说,观察到的GLA水平比在不含Δ12脱氢酶的5546植物中观察到的要高。Δ12脱氢酶在多数品系中似乎是有活性的,其证据是在多数植物中缺少可检测到的Δ6,9-18:2以及提高的18:2水平。在5547植物中观察到了少量的Δ5,9-18:2,虽然其水平一般比在5546植物中观察到的要少。这可能是因为Δ12脱氢酶的存在,Δ12脱氢酶能在Δ5位置去饱和之前有效地将18:1转变为18:2。
表13来自5547-LP30108事件的成熟T2种子的20种子合并物的脂肪酸分析
株号 12:0 16:0 16:1 18:0 18:1 18:2_Δ5,18:2_Δ6,9 18:2_Δ9,12 18:3_Δ6,9,18:3_Δ9,12,18:4 20:0 20:1 22:1 22:2
9 12 155547-LP30108-1 0.0 5.38 0.3 2.23 64.12 0.01 0 22.67 0.44 2.17 0.07 0.82 1.11 0.03 05547-LP30108-2 0.1 4.45 0.13 2.29 51.57 0.16 0 33.85 3.18 1.74 0.03 0.78 1.02 0.03 0.025547-LP30108-3 0.0 4.18 0.12 2.03 59.61 0.03 0 29.44 0.44 1.64 0 0.75 1.15 0.03 0.015547-LP30108-4 0.0 4.35 0.15 2.29 50.59 0.12 0.01 37.31 0.85 1.86 0.02 0.78 1.02 0.02 0.015547-LP30108-5 0.0 4.59 0.14 1.83 49 0.25 0.01 31.65 8.16 1.86 0.13 0.68 1.04 0.02 05547-LP30108-6 0.0 4.11 0.15 2.53 44.3 0.13 0 28.12 15.89 1.94 0.28 0.82 1.13 0 05547-LP30108-7 0.0 4.27 0.15 2.55 39.18 0.12 0.02 27 21.72 1.87 0.45 0.89 1.08 0 05547-LP30108-8 0.0 4.3 0.14 2.92 42.83 0.26 0 30.81 14.51 1.49 0.22 0.89 1.06 0 05547-LP30108-9 0.0 4.46 0.17 3.13 44.51 0 0 30.12 12.87 1.76 0.22 0.98 1.12 0.01 05547-LP30108-10 0.0 4.28 0.11 2.62 41.44 0.28 0 30.89 16.28 1.45 0.21 0.82 1.06 0 05547-LP30108-11 0.0 4.47 0.17 2.43 26.96 0.48 0 34.44 25.01 2.14 0.63 0.84 0.99 0 05547-LP30108-12 0.0 4.36 0.16 2.68 42.2 0.17 0 29.78 15.93 1.83 0.27 0.88 1.06 0 05547-LP30108-13 0.0 4.87 0.19 2.81 21.7 0.53 0 32.83 30.54 2.04 0.8 1 0.89 0.02 0.015547-LP30108-14 0.0 4.61 0.25 2.6 54 0 0 32.98 0.5 2.46 0.03 0.86 1.14 0 05547-LP30108-15 0.0 4.07 0.14 2.98 37.09 0.14 0.01 29.01 21.55 1.66 0.38 1.06 1.11 0 0
表13来自5547-LP30108事件的成熟T2种子的20种子合并物的脂肪酸分析
株号 12:0 16:0 16:1 18:0 18:1 18:2_Δ5, 18:2_Δ6,9 18:2_Δ9,12 18:3_Δ6,9, 18:3_Δ9,12, 18:4 20:0 20:1 22:1 22:2
9 12 155547-LP30108-16 0.0 3.63 0.13 2.12 64.69 0 0 24.21 0.15 2.04 0 0.82 1.56 0.02 05547-LP30108-17 0.0 3.85 0.18 2.22 67.22 0.01 0 21.25 0 2.27 0 0.83 1.53 0 05547-LP30108-18 0.0 5.46 0.19 2.87 41.83 0.1 0.04 22.76 21.45 1.72 0.48 1.06 1.23 0 05547-LP30108-19 0.0 4.33 0.12 2.73 50.31 0.07 0 24.77 12.72 1.62 0.21 1.04 1.29 0 0.015547-LP30108-20 0.0 4.22 0.12 2.91 46.33 0.25 0 26.87 14.65 1.61 0.22 0.98 1.18 0 05547-LP30108-21 0.0 4.38 0.17 2.37 55.37 0 0 32.59 0.53 1.85 0.03 0.83 1.23 0 05547-LP30108-22 0.0 5.5 0.18 2.71 41.93 0.1 0.19 24.19 20.14 1.76 0.45 0.94 1.21 0 05547-LP30108-23 0.0 4.03 0.16 2.17 68.44 0 0 20.09 0 2.19 0.02 0.83 1.46 0 05547-LP30108-24 0.0 4.19 0.17 2.72 49.31 0 0 30.38 8.64 1.85 0.13 0.86 1.16 0 05547-LP30108-25 0.0 4.04 0.17 2.1 70.48 0 0 18.04 0.05 2.09 0 0.86 1.54 0 05547-LP30108-26 0.0 4.74 0.22 3.2 26.74 0.33 0 30.05 28.95 2.02 0.78 1.08 0.99 0 05547-LP30108-27 0.0 4.29 0.18 2.23 52.49 0 0 28.48 7.36 1.91 0.13 0.87 1.37 0 05547-LP30108-28 0.0 4.36 0.17 3 44.35 0.2 0 29.59 13.39 1.91 0.23 0.96 1.17 0 05547-LP30108-29 0.0 4.32 0.17 2.94 52.53 0.05 0 33.88 0.91 2.34 0.01 0.97 1.23 0 05547-LP30108-30 0.0 4.07 0.14 2.89 45.13 0.01 0 29.06 13.96 1.71 0.2 0.94 1.2 0.01 0
实施例13
Δ6去饱和油的立体专一性分布
本实验被设计来研究Δ6去饱和油在表达pCGN5538(Ma524cDNA)的种子中的立体专一性分布。使用三种种子样品:
1)未转化的欧洲油菜cv.LP004种子(对照)
2)pCGN5538-LP004-19的分离T2种子
3)pCGN5538-LP004-29的分离T2种子
使用下面的程序进行分析:
1.种子油的抽提
将50个种子置于一个12×32mm的小瓶中,用一个玻璃棒磨碎。加入1.25ml己烷,并将混合物涡旋振荡。将种子在一个摇床上抽提过夜。然后将抽提物滤过一个粘附在一只1cc注射器上的0.2微米滤膜。然后在氮气下将抽提物干燥。所获得的油用于全油样品的消化和衍生。
2.消化
A.液体油消化
将贮存的脂酶(来自无根根霉,Sigma,L4384)稀释至约600,000单位/mL,来获得50%的TAG消化。将贮存的脂酶保持在4℃,并置于冰上。反应试剂的数量按照要消化的油的量进行调整。
下面的数量基于2.0mg的抽提的油样品。在一个12×32mm的带螺旋盖的小瓶中加入以下物质:2.0mg的油、200uL的0.1M trisHClpH7、40uL的2.2w/v%CaCl22H2O、和100uL的0.05w/v%胆盐。将上述物质涡旋振荡,并超声波处理使油分散。加入20uL稀释的脂酶,并将混合物继续在室温下涡旋振荡1.0分钟。形成一种白色沉淀。加入100uL的6M HCl并涡旋使反应终止。加入500uL的CHCl3∶CH3OH(2∶1),并将混合物涡旋振荡,在冰上放置进行剩余的消化。将样品再次涡旋振荡,并短暂离心使层分明。用一个巴斯德吸管取出含有消化产物的下层,并置于一个12×32mm的波形盖小瓶。然后用300uL CHCl3对上述物质进行再抽提,涡旋振荡,离心,并与下层合并。尽量在冰上保持消化产物。在消化至最少乙酰迁移后立即进行HPLC分离。
B.固体脂肪消化
按照上面介绍的液体油消化的程序,除了向2.0mg固体脂肪中加入20ul 11:0甲酯。
3.HPLC分离
将消化产物在氯仿中干燥至约200uL,然后将每个样品转入一个8×40mm壳形瓶的输入管中,注入30uL用于HPLC分析。
高效液相色谱系统装置有一个Varex ELSD IIA挥发光散射检测器(管的温度为105℃,氮气流速为40mL/min)、一个Waters 712Wi sp自动取样器、三个Beckman 114M Solvent Delivery Module、一个Beckman 421A控制器、一个Rheodyne气动气流分离器和一个Gilson微分馏器。色谱柱为220×4.6mm,填充有5微克Brownlee的正常相硅柱。
使用的三种溶剂为:
A=己烷∶甲苯1∶1
B=甲苯∶乙酸乙酯3∶1
C=乙酸乙酯中5%的甲酸
梯度图谱如下:
时间(分钟) | 功能 | 值 | 持续时间 |
0流速 | 2.0mL/分钟 | ||
0%B | 10 | ||
0%C | 2 | ||
2%C | 25 | 6分钟 | |
14.0%C | 2 | 1分钟 | |
15.0 | 结束程序 |
在己烷∶甲苯1∶1中制备了一个含有以下成分的色谱标准混合物:
0.2mg/mL三酰甘油16:0
2.0mg/mL 16:0游离脂肪酸
0.2mg/mL混合的二16:0异构体(1,2-二乙酰甘油和1,3-二乙酰甘油)
0.2mg/mL 3-单乙酰甘油16:0
0.2mg/mL 2-单乙酰甘油16:0
对于每一个样品,通过控制时间事件延迟的方法自动收集含有2-mag峰的部分。一个时间延迟用于使检测器与收集器的发射口同步。收集2-mag峰,并将该部分在室温下蒸发过夜。
sn-2组成结果依赖于减少乙酰迁移的减少。在色谱中出现1-单乙酰甘油和/或3-单乙酰甘油峰意味着乙酰迁移发生。
4.衍生化
为衍生全部的油,称量1.0mg抽提的全油加入一个12×32mm带螺旋盖的小瓶中,然后加入1mL的甲苯。然后将样品涡旋振荡,取50uL小份用于衍生化。在干燥的2-mag样品中加入50uL甲苯。在全油和2-mag部分两者中加入105uL H2SO4/CH3OH@8.76wt%。将盖紧紧盖上,将样品在95℃回流1 小时。使样品冷却,加入500uL的10w/v%溶于水的NaCl和60uL庚烷。取出有机层并插入一个12×32mm的螺旋盖小瓶。
5.GLC分析
按如下为毛细柱建立一套安装有一个分离/非分离的毛细入口、FID检测器、6890系列自动加样器和3392A Alpha Omega积分仪的Hewlett Packard model 6890 GC:
A.Supelco Omegawax 250,30m长,0.25mm id,0.25um胶片厚度
注射口: 260C
检测器: 270C
起始温度: 170C
起始时间: 1.5分钟
速率: 30deg/min
最后温度: 245C
最后时间: 6.5分钟
注射体积: 1.5uL
前部压力: 25psi
分离率: 30
载气: He
组成气: N2
FID气: H+空气
脂肪酸甲酯的百分比组成按摩尔百分数进行计算。对于长度少于12的碳链来说,在面积百分比计算时需要使用理论或经验的反应因子。
6.计算
计算每个sn-1和sn-3位置的每种酰基基团的平均分布。
平均sn-1和sn-3组成=(3 WO comp-MAG comp)/2
WO=全油
MAG=单酰基甘油
此分析的结果示于表14。GLA和Δ6,918:2均匀分布在sn-2和sn-1,3位置之间。此分析不能区分sn-1对sn-3位置的脂肪酸。
表14
16:0 | 16:1 | 18:0 | 18:1 | 18:2_Δ6,9 | 18:2 | 18:3_Δ6,9,12 | 8:3 | 18:4 | 20:0 | 20:1 | ||
对照 | ||||||||||||
sn2组成 | 1.23 | 0.15 | 0.37 | 64.77 | 0.00 | 29.45 | 0.06 | 2.01 | 0.00 | 0.21 | 0.57 | |
全油组成 | 4.33 | 0.20 | 3.32 | 69.29 | 0.18 | 18.51 | 0.00 | 1.35 | 0.06 | 0.91 | 1.17 | |
平均sn1,sn3组成* | 5.88 | 0.23 | 4.80 | 71.55 | 0.27 | 13.04 | -0.03 | 1.02 | 0.09 | 1.26 | 1.47 | |
5538-19 | sn2组成 | 1.65 | 0.27 | 4.12 | 57.21 | 5.61 | 14.55 | 12.45 | 1.38 | 0.32 | 0.43 | 1.00 |
全油组成 | 5.44 | 0.33 | 4.09 | 57.51 | 4.53 | 10.57 | 13.16 | 1.03 | 0.50 | 1.07 | 1.07 | |
平均sn1,sn3组成* | 7.34 | 0.36 | 4.08 | 57.66 | 3.99 | 8.58 | 13.52 | 0.86 | 0.59 | 1.39 | 1.11 | |
5538-29 | sn2组成 | 1.24 | 0.27 | 1.56 | 56.35 | 6.35 | 17.85 | 12.99 | 1.60 | 0.38 | 0.14 | 0.40 |
全油组成 | 4.96 | 0.32 | 3.73 | 54.92 | 4.99 | 12.11 | 13.66 | 1.10 | 0.50 | 0.99 | 1.11 | |
平均sn1,sn3组成* | 6.82 | 0.35 | 4.82 | 54.21 | 4.31 | 9.24 | 14.00 | 0.85 | 0.56 | 1.42 | 1.47 | |
*每次分析从mag和全油组成计算 |
实施例14
转基因植物的脂肪酸组成
分析Δ5和Δ6转基因植物的脂肪酸含量。
下面的程序用于油抽提:
1.对每个样品重复称取约400mg种子
2.将种子在一个臼和杵中磨碎。臼和杵用3ml(2∶1)(v∶v)的CHCl3∶CH3OH/MeOH漂洗两次。在20ml玻璃瓶中加入另外6ml(2∶1)(在12ml全2∶1中抽提的油)。
3.将样品涡旋振荡,在定轨摇床上放置2小时,并间或涡旋振荡。
4.在每个样品中加入5ml 1M的NaCl。将样品涡旋振荡,然后在2000rpm离心5分钟。使用巴斯德吸管将下层相吸出。
5.用另外5ml对上层相进行再抽提。将样品涡旋振荡,然后在2000rpm离心5分钟。使用巴斯德吸管将下层相吸出,并加入到前面的下层相中。
6.使用蒸发冷却在氮气下使CHCl3∶CH3OH/MeOH挥发。含有抽提的油的小瓶在氮气下密封。每个样品抽提到120mg-160mg的油。
为进行GC-MS分析,将脂肪酸甲酯溶解在合适体积的己烷中,并用装有一个30m×0.32mm i.d.Omegawax 320融合的硅毛细柱(Supelo,Bellefonte,PA)和一个Hewlett-Packard 5972系列质量选择检测器的Hewlett-Packard 5890 Series II Plus气相色谱仪(Hewlett-Packard,Palo Alto,CA)进行分析。质谱使用MS ChemStation(#G1036A)(Hewlett-Packard)通过与NIST/EPA/NIH化学结构数据库中的质谱进行比较来解读。
对转基因品系5531-6进行了重复(A,B)分析,并与对照品系LP004-6进行了比较。脂肪酸谱的结果示于表15。
对转基因品系5538-19进行了重复(A,B)分析,并与对照品系LP004-6进行了比较。脂肪酸谱的结果示于表16。
表15
脂肪酸谱
对照 | 对照 | 转基因 | 转基因 | |
LP004-6A | LP004-6B | 5531-6A | 5531-6B | |
LRL-2043 | LRL-2044 | LRL-2042 | LRL-2045 | |
001f0102.d | 001f0103.d | 001f0101.d | 001f0104.d | |
C12:0 | ||||
C13:0 | ||||
C14:0 | 0.053 | 0.061 | ||
C14:1 | ||||
C15:0 isomer | ||||
C15:0 | ||||
C16:0 | 4.107 | 4.034 | 4.257 | 4.224 |
C16:1 | 0.181 | 0.173 | 0.200 | 0.199 |
C16:2 | 0.061 | 0.065 | 0.081 | 0.060 |
C17:0 | ||||
C16:3 | 0.244 | 0.246 | 0.155 | 0.151 |
C16:4 | ||||
C18:0 | 2.608 | 2.714 | 3.368 | 3.417 |
C18:1w9 | 65.489 | 66.454 | 59.529 | 59.073 |
C18:1w7 | 2.297 | 2.185 | 2.388 | 2.393 |
C18:2 5,9 | 6.144 | 6.269 | ||
C18:2w6 | 19.828 | 18.667 | 18.872 | 19.059 |
C18:3 5,9,12 | 0.469 | 0.496 | ||
C18:3w6 | 0.060 | |||
C18:3w3 | 1.587 | 1.578 | 1.428 | 1.418 |
C18:4w6 | ||||
C18:4w3 | ||||
C20:0 | 0.962 | 0.998 | 1.009 | 1.022 |
C20:1w11 | 1.336 | 1.335 | 1.058 | 1.065 |
C20:1w9 | ||||
C20:1w7 | 0.076 | 0.080 | ||
C20:2w6 | 0.073 | 0.073 | 0.052 | |
C20:3w6 |
表15
脂肪酸谱
对照 | 对照 | 转基因 | 转基因 | |
LP004-6A | LP004-6B | 5531-6A | 5531-6B | |
LRL-2043 | LRL-2044 | LRL-2042 | LRL-2045 | |
001f0102.d | 001f0103.d | 001f0101.d | 001f0104.d | |
C20:4w6 | ||||
C20:3w3 | ||||
C20:4w3 | ||||
C20:5w3 | ||||
C22:0(1.000) | 0.542 | 0.558 | 0.463 | 0.467 |
C22:1w11 | 0.038 | |||
C22:1w9 | ||||
C22:1w7 | 0.034 | |||
C21:5 | ||||
C23:0 | 0.029 | |||
C22:4w6 | ||||
C22:5w6 | ||||
C22:5w3 | ||||
C24:0 | 0.373 | 0.391 | 0.280 | 0.283 |
C22:6w3 | 0.314 | 0.317 | 0.223 | 0.212 |
C24:1w9 | ||||
TOTAL | 100.00 | 100.00 | 100.00 | 100.00 |
表16
脂肪酸谱
5538-19A | 5538-19B | LP004-6A | LP004-6B | |
转基因 | 转基因 | 对照 | 对照 | |
LRL-2166 | LRL-2167 | LRL-2168 | LRL-2169 | |
C6:0 | 0.004 | 0.005 | ||
C8:0 | 0.007 | 0.007 | 0.004 | 0.005 |
C10:0 | 0.012 | 0.012 | 0.008 | 0.008 |
C12:0 | 0.020 | 0.020 | 0.011 | 0.012 |
C13:0 | ||||
C14:0 | 0.099 | 0.108 | 0.050 | 0.050 |
C14:1w5 | ||||
C15:0 | 0.059 | 0.068 | 0.017 | 0.019 |
C16:0 | 5.272 | 5.294 | 4.049 | 4.057 |
C16:1 | 0.350 | 0.417 | 0.197 | 0.208 |
C16:2 | 0.199 | 0.187 | 0.076 | 0.077 |
C17:0 | 0.092 | 0.089 | 0.078 | 0.077 |
C16:3 | 0.149 | 0.149 | 0.192 | 0.198 |
C16:4 | 0.010 | |||
C18:0 | 3.815 | 3.771 | 2.585 | 2.638 |
C18:1 | 57.562 | 57.051 | 68.506 | 68.352 |
C18:2(6,9) | 4.246 | 4.022 | ||
C18:2w6 | 10.900 | 11.589 | 19.098 | 19.122 |
C18:2w3 | 0.020 | 0.008 | 0.008 | 0.009 |
C18:3w6 | 12.565 | 12.595 | 0.013 | 0.015 |
C18:3w3 | 1.084 | 1.137 | 1.501 | 1.542 |
C18:4 | 0.017 | 0.013 | 0.011 | 0.008 |
C18:4 | 0.028 | 0.024 | ||
C20:0 | 1.138 | 1.104 | 0.937 | 0.943 |
C20:1 | 1.115 | 1.085 | 1.330 | 1.327 |
C20:2w6 | 0.150 | 0.143 | 0.068 | 0.071 |
C20:3w6 | 0.026 | 0.025 | 0.014 | 0.012 |
C20:4w6 | ||||
C20:3w3 |
表16
脂肪酸谱
5538-19A | 5538-19B | LP004-6A | LP004-6B | |
转基因 | 转基因 | 对照 | 对照 | |
LRL-2166 | LRL-2167 | LRL-2168 | LRL-2169 | |
C20:4w3 | ||||
C20:5w3 | ||||
C22:0 | 0.506 | 0.484 | 0.535 | 0.539 |
C22:1 | 0.017 | 0.020 | 0.032 | 0.032 |
C21:5 | 0.040 | 0.030 | 0.031 | |
C22:4w6 | 0.038 | 0.064 | 0.015 | 0.014 |
C22:5w6 | ||||
C22:5w3 | 0.023 | 0.018 | 0.021 | 0.017 |
C24:0 | 0.352 | 0.321 | 0.353 | 0.362 |
C22:6w3 | 0.009 | |||
C24:1w9 | 0.129 | 0.121 | 0.260 | 0.255 |
TOTAL | 100.00 | 100.00 | 100.00 | 100.00 |
实施例15
通过杂交完成Δ6和Δ12脱氢酶在欧洲油菜中的组合表达
将含有Δ6或Δ12脱氢酶的植物杂交,并用GC分析单个F1半种子的脂肪酸组成。来自这样一种杂交的数据示于表17。杂交的亲本为5538-LP004-25-2-25(Δ6表达者)和5542-SP30021-10-16(Δ12表达者)。进行回交,每次的25个单独种子的结果在表中示出。在介绍杂交时,第一个指出的亲本为雌性。两套杂交都给出了基本上相同的结果。与亲本相比较,Δ6,918:2降低,GLA增加。Δ9,1218:2水平在多数F1中也提高。应当注意,这些种子是F1种子,仅含有一套每种脱氢酶。通过将来的传代和选择对每种脱氢酶纯合的事件,所获得的F2的GLA水平可能会更高。
通过杂交来组合性状在某些场合可能比在一个T-DNA上组合性状要优选。特别是当两种基因由相同的启动子驱动时(在本发明中为napin),启动子静默的结果将使该过程优于将多个cDNA置于同一个结构。
此外,在某些场合,将多个cDNA组合在一个T-DNA上可能是一种选择方法。结果示于表17。
表17株号 16:0 16:1 18:0 18:1 18:2_Δ6,9 18:2_Δ9,12 18:3_Δ6,9,18:3_Δ9,12,18:4 20:0 20:1
12 115538-LP004-25-2-25 4.23 0.13 2.4 61.78 8.77 6.34 11.58 0.92 0 0 05542-SP30021-10-16 4.09 0.1 2.03 38.4 0 41.88 0 11.06 0.02 0.75 1.03(5538-LP004-25-2-25X5542-SP30021-10-16) 3.9 0.04 2.31 38.58 0 27.91 20.94 2.67 0.65 0.92 1.28(5538-LP004-25-2-25X5542-SP30021-10-16) 3.5 0.04 1.88 36.24 0 28.68 22.54 3.36 0.85 0.78 1.32(5538-LP004-25-2-25X5542-SP30021-10-16) 3.51 0.03 1.98 38.36 0 29.48 19.95 3.06 0.68 0.79 1.38(5538-LP004-25-2-25X5542-SP30021-10-16) 3.95 0.04 1.86 38.65 0 28.08 20.81 2.92 0.75 0.76 1.42(5538-LP004-25-2-25X5542-SP30021-10-16) 4.26 0.05 2.44 40.25 0.01 28.81 18.08 2.74 0.53 0.88 1.24(5538-LP004-25-2-25X5542-SP30021-10-16) 4.13 0.04 2.33 34.48 0 26.73 26.2 2.32 0.75 0.9 1.27(5538-LP004-25-2-25X5542-SP30021-10-16) 3.8 0.04 2.15 38.34 0 28.95 20.64 2.63 0.65 0.81 1.3(5538-LP004-25-2-25X5542-SP30021-10-16) 3.96 0.05 1.59 36.43 0 29.05 21.85 3.47 0.86 0.68 1.32(5538-LP004-25-2-25X5542-SP30021-10-16) 4.04 0.04 2.5 37.75 0 27.23 22.89 1.95 0.55 0.99 1.26(5538-LP004-25-2-25X5542-SP30021-10-16) 3.53 0.04 1.8 34.88 0 29.17 23.42 3.42 0.9 0.74 1.3(5538-LP004-25-2-25X5542-SP30021-10-16) 3.43 0.04 1.89 37.12 0 29.52 20.91 3.35 0.8 0.79 1.35(5538-LP004-25-2-25X5542-SP30021-10-16) 3.58 0.03 2.55 39.54 0 28.81 19.34 2.44 0.54 0.98 1.34(5538-LP004-25-2-25X5542-SP30021-10-16) 3.53 0.03 2.33 39.26 0 29.07 19.5 2.61 0.59 0.91 1.37(5538-LP004-25-2-25X5542-SP30021-10-16) 3.4 0.02 2.41 45.53 0 28.94 13.71 2.51 0.37 0.91 1.44
表17
株号 16:0 16:1 18:0 18:1 18:2_Δ6,9 18:2_Δ9,12 18:3_Δ6,9, 18:3_Δ9,12, 18:4 20:0 20:1
12 11(5538-LP004-25-2-25X5542-SP30021-10-16) 3.49 0.03 2.57 40.95 0 28.52 17.97 2.63 0.58 0.99 1.43(5538-LP004-25-2-25X5542-SP30021-10-16) 3.65 0.04 2.11 38.02 0 29.13 20.53 2.85 0.66 0.86 1.33(5538-LP004-25-2-25X5542-sP30021-10-16) 3.97 0.03 1.99 34.95 0.01 27.15 25.71 2.38 0.79 0.81 1.38(5538-LP004-25-2-25X5542-SP30021-10-16) 3.81 0.05 1.46 38.3 0 31.51 17.67 3.83 0.75 0.61 1.33(5538-LP004-25-2-25X5542-SP30021-10-16) 3.98 0.05 2.03 37.14 0 30.09 20.28 2.79 0.72 0.8 1.36(5538-LP004-25-2-25X5542-SP30021-10-16) 4.03 0.04 2.52 42.9 0 27.79 16.66 2.64 0.54 0.9 1.29(5538-LP004-25-2-25X5542-sP30021-10-16) 4.03 0.04 2.27 40.72 0 29.37 17.56 2.53 0.53 0.86 1.35(5538-LP004-25-2-25X5542-SP30021-1 0-16) 3.98 0.04 2.61 39.91 0 28.06 19.15 2.69 0.6 0.96 1.26(5538-LP004-25-2-25X5542-SP30021-10-16) 3.73 0.03 1.89 40.22 0 29.44 18.21 3 0.67 0.73 1.39(5538-LP004-25-2-25X5542-SP30021-10-16) 4.02 0.04 2.14 42.58 0 30.36 15.18 2.43 0.42 0.82 1.3(5542-SP30021-10-16X5538-LP004-25-2-25) 4.14 0.06 2.23 30.67 0 30.38 25.47 3.12 0.91 0.9 1.29(5542-SP30021-10-16X5538-LP004-25-2-25) 4.05 0.07 1.7 37.03 0.04 32.1 15.97 5.38 0.96 0.69 1.28(5542-SP30021-10-16X5538-LP004-25-2-25) 4.01 0.07 1.58 38.02 0.05 33.65 13.92 5.15 0.89 0.66 1.28(5542-sP30021-10-16X5538-LP004-25-2-25) 4.07 0.06 2.01 31.63 0.05 31.13 23.09 3.94 1.1 0.83 1.28(5542-SP30021-10-16X5538-LP004-25-2-25) 4.03 0.05 1.94 31.88 0 30.98 23.71 3.45 0.99 0.82 1.3(5542-SP30021-10-16X5538-LP004-25-2-25) 3.92 0.06 1.71 35.77 0.03 33.15 16.39 5.28 0.98 0.68 1.32(5542-SP30021-10-16X5538-LP004-25-2-25) 4.09 0.08 1.57 34.6 0.03 33.73 16.73 5.48 0.99 0.66 1.28
表17
株号 16:0 16:1 18:0 18:1 18:2_Δ6,9 18:2_Δ9,12 18:3_Δ6,9,18:3_Δ9,12,18:4 20:0 20:1
12 11(5542-SP30021-10-16X5538-LP004-25-2-25) 3.94 0.07 1.59 34.03 0.04 31.35 19.76 5.29 1.22 0.67 1.28(5542-SP30021-10-16X5538-LP004-25-2-25) 4.13 0.06 1.85 31.44 0.06 31.28 23.77 3.52 1.04 0.79 1.22(5542-SP30021-10-16X5538-LP004-25-2-25) 4.14 0.06 1.96 31.11 0.04 31.88 23.3 3.6 1.01 0.82 1.27(5542-SP30021-10-16X5538-LP004-25-2-25) 3.98 0.07 1.58 35.06 0 32.06 18.1 5.33 1.12 0.67 1.28(5542-SP30021-10-16X5538-LP004-25-2-25) 3.89 0.06 1.59 32.51 0.05 29.44 22.91 5.33 1.54 0.67 1.25(5542-SP30021-10-16X5538-LP004-25-2-25) 4 0.07 1.69 32.1 0.05 30.49 22.77 4.66 1.32 0.75 1.26(5542-SP30021-10-16X5538-LP004-25-2-25) 4.06 0.05 1.93 30.77 0.07 28.37 27.21 3.37 1.19 0.84 1.25(5542-SP30021-10-16X5538-LP004-25-2-25) 4.1 0.06 1.9 31.77 0.05 32.33 22.03 3.92 0.98 0.78 1.27(5542-SP30021-10-16X5538-LP004-25-2-25) 3.94 0.07 1.67 34.74 0.03 33.63 17.1 5.16 0.99 0.68 1.26(5542-SP30021-10-16X5538-LP004-25-2-25) 3.71 0.06 1.65 33.05 0 33.22 19.73 4.7 1.07 0.68 1.39(5542-SP30021-10-16X5538-LP004-25-2-25) 3.84 0.06 1.71 34.16 0.04 34.52 16.74 5.18 0.97 0.68 1.34(5542-SP30021-10-16X5538-LP004-25-2-25) 4 0.07 1.66 34.97 0.07 33.08 17.07 5.27 1.1 0.67 1.28(5542-SP30021-10-16X5538-LP004-25-2-25) 4.16 0.06 1.99 35.44 0.05 31.89 18.95 3.68 0.89 0.81 1.29(5542-SP30021-10-16X5538-LP004-25-2-25) 4.05 0.08 1.46 33.49 0 31.96 18.81 6.2 1.32 0.61 1.28(5542-SP30021-10-16X5538-LP004-25-2-25) 4.2 0.06 1.93 35.06 0.06 33.69 17.38 4 0.66 0.78 1.21(5542-SP30021-10-16X5538-LP004-25-2-25) 4.07 0.06 1.74 36 0.06 32.18 17.86 4.32 0.96 0.73 1.27(5542-SP30021-10-16X5538-LP004-25-2-25) 4.11 0.05 2.24 29.64 0.04 28.64 27.94 3.06 1.12 0.97 1.26
实施例16
在大豆中表达高山被孢霉脱氢酶
高山被孢霉可通过使用下面的表达结构在大豆中驱动GLA和其他PUFAs的产生。使用两种方法可将外源DNA插入到大豆基因组中,它们是农杆菌感染或微粒枪。微粒枪转化在U.S.专利5,503,998中公开。植物可用一种glyphosate抗性标记进行选择(4,971,908)。大豆的农杆菌转化对本领域的技术人员来说非常熟悉。
为进行种子特异性表达,将脱氢酶cDNA的编码区置于Glycine max的α型β伴大豆球蛋白贮藏蛋白基因的5’调节区的控制之下,可以使用的特殊区域是gi 169928的核苷酸78-921(Doyle,J.J.,Schuler,M.A.,Godette,W.D.,Zenger,V.,Beachy,R.N.,和Slightom,J.L.,1986,J.Biol.Chem.261(20),9228-9238)。可以使用的3’调节区来自豌豆核酮糖1,5二磷酸羧化酶/氧化酶小亚基(rbcS)基因,使用的特殊序列是gi 169145的核苷酸1-645(Hunt,A.G.1988,DNA 7:329-336)。
因为大豆种子比芸苔含有更多的18:2,并可能含有更多的Δ12脱氢酶活性。被孢霉Δ12脱氢酶对获得最高水平的GLA的影响可按下面的方法进行检测。可以使用一个含有Δ6 cDNA的结构来观察Δ5,918:2是否伴随GLA产生。可以使用一个含有Δ12 cDNA的结构来观察18:2的量在大豆中是否增加。可以使用含有Δ6和Δ12脱氢酶两者的结构来产生最高水平的GLA。此外,当需要将基因组合时,含有每种单一脱氢酶的植物可进行杂交。
可以制备相似的结构来单独或与Δ6和/或Δ12脱氢酶组合来表达Δ5脱氢酶。
实施例17
人脱氢酶基因序列
根据人cDNA序列与高山被孢霉脱氢酶基因序列的同源性,分离了可能参与长链多不饱和脂肪酸生物合成的人脱氢酶基因序列。发现了已知在膜结合脱氢酶中为保守的三个保守的“组氨酸盒”。与某些其他的膜结合脱氢酶一样,最后一个HXXHH组氨酸盒基元被发现为QXXHH。可能的人脱氢酶的氨基酸序列显示与高山被孢霉Δ5、Δ6、Δ9和Δ12脱氢酶同源。
使用高山被孢霉Δ5脱氢酶和Δ6脱氢酶cDNA序列来对IncytePharmaceuticls,Inc.,Palo Alto,California 94304的LifeSeq数据库进行检索。Δ5脱氢酶序列被分为以下片段:1)氨基酸no.1-150,2)氨基酸no.151-300,和3)氨基酸no.301-446。Δ6脱氢酶序列被分为三个片段:1)氨基酸no.1-150,2)氨基酸no.151-300,和3)氨基酸no.301-457。使用“tblastn”算法用这些多肽片段对数据库进行检索。这种算法将一个蛋白查询序列与一个在所有六种阅读框(两条链)动态翻译的核苷酸序列数据进行比较。
高山被孢霉Δ5和Δ6的多肽片段与列于表18的CloneID序列具有同源性。该CloneID表示一个来自Incyte LifeSeq数据库的单个序列。在回顾了“tblastn”结果后,用缺省的设置Strigency>=50和Productscore<=100来在Clone Information中检索不同的CloneID号码。显示信息的CloneID Information结果包括ClusterID、CloneID、Library、HitID、Hit Description。在选择时,ClusterID号显示属于该ClusterID的所有克隆的克隆信息。集合命令将集合所有包含该ClusterID的CloneID。下面的缺省设置用于GCG(Genetics Computer Croup,University of WisconsinBiotechnology Center,Madison,Wisconsin 53705)集合:
Word Size: 7
Minimum Overlap: 14
Stringency: 0.8
Minimum Identity: 14
Maximum Gap: 10
Gap Weight: 8
Length Weight 2
GCG集合结果显示了以CloneID中的信息为基础产生的重叠群。一种重叠群是以这些序列的同源区为基础进行的DNA序列列队。在一种重叠群中以排列的DNA序列为基础产生了一个新的序列(共有序列)。鉴定了含有CloneID的重叠群,并以CloneID的列队(SEQ IDNO:31-35)为基础对共有序列的两可性位点进行了编辑,以产生可能性最大的序列。对表18中列出的所有6个CloneID重复了这个过程。这产生了5个独特的重叠群。将5个重叠群的经过编辑的共有序列输入Sequencher软件程序(Gene Codes Corporation,Ann Arbor,Michigan 48 105)。将这些共有序列组合。重叠群2511785与重叠群3506132重叠,而这个新的重叠群被称为2535(SEQ ID NO:37)。将来自Sequencher程序的重叠群拷贝到GCG的序列分析软件包中。
将每个重叠群按所有6个阅读框翻译成蛋白序列。使用FastAsearch(一种用于在一个查询序列和一组相同类型(核酸或蛋白质)的序列中检索相似性的Pearson and Lipman检索)将高山被孢霉Δ5(MA9)和Δ6(MA524)序列与每个翻译的重叠群进行比较。这些序列之间的同源性揭示了每个重叠群的开放阅读框。高山被孢霉Δ5和Δ6与重叠群2535和3854933之间的同源性被用来产生一个最后的重叠群,它被称为253538a。图9是最后的重叠群253538a与MA29的FastA匹配,图10是最后的重叠群253538a与MA524的FastA匹配。各重叠群的DNA序列示于SEQ ID NO:31-SEQ ID NO:37。各多肽序列示于SEQ ID NO:38-SEQ ID NO:44。
虽然开放阅读框是通过两个重叠群融合而来,重叠群2535显示在其开始处有一个与重叠群3854933不匹配的独特序列。因此,可能这些重叠群是从独立的脱氢酶样人基因产生的。
重叠群253538a含有一个编码432个氨基酸的开放阅读框。它由谷氨酰胺(CAG)开始,由终止密码子(TGA)结束。重叠群253538与高山被孢霉Δ5和Δ6序列都对应,说明它可能是两种脱氢酶之一,或是其他已知的相互之间具有同源性的脱氢酶。表18中列出的单个重叠群以及中间重叠群2535和最终重叠群253538a可用于分离编码人脱氢酶的全基因。
人脱氢酶的用途
这些人序列可使用前面实施例中介绍的程序在酵母和植物中表达。对于在哺乳动物细胞和转基因动物中表达,这些基因可提供优越的密码子偏性。此外,这些序列可用于从其他有机体中分离相关的脱氢酶基因。
表18
脱氢酶的部分 | 来自LifeSeq数据库的CloneID | 关键词 |
151-300Δ5 | 3808675 | 脂肪酸脱氢酶 |
301-446Δ5 | 354535 | Δ6 |
151-300Δ6 | 3448789 | Δ6 |
151-300Δ6 | 1362863 | Δ6 |
151-300Δ6 | 2394760 | Δ6 |
301-457Δ6 | 3350263 | Δ6 |
实施例18
高山被孢霉Δ5和Δ6脱氢酶同源物的鉴定
使用Ma29的氨基酸100-446作为查询序列通过在NCBI用TBLASTN检索表达的序列标记数据鉴定了一个编码一种可能的Δ5脱氢酶的核苷酸序列。Ma29序列的剪短部分被用来避免挑选出基于脱氢酶N末端的细胞色素b5部分的同源序列。来自盘基网柄菌(登记号#C25549)的一个est的推导氨基酸序列显示与Ma29明显的同源性,并显示与Ma524较少但仍然明显的同源性。此DNA序列列于SEQID NO:45。氨基酸序列示于SEQ ID NO:46。
实施例19
其他产PUFA有机体中高山被孢霉Δ5和Δ6的同源物的鉴定
为寻找参与PUFA产生的脱氢酶,用分离自三角褐指藻的总RNA构建了一个cDNA文库。使用一种商业化的试剂盒(GIBCO-BRL)按照厂商的指示在pSPORT1(GIBCO-BRL)中构建了一个以质粒为基础的cDNA文库。对随机cDNA克隆进行测序,通过数据库的BLAST检索和与Ma29和Ma524序列比较,鉴定编码可能的Δ5或Δ6脱氢酶的核酸序列。
从褐指藻文库中鉴定了一个与Ma29和Ma524具有同源性的克隆,它被称为144-011-B12。此DNA序列示于SEQ ID NO:47。氨基酸序列示于SEQ ID NO:48。
实施例20
其他产PUFA有机体中高山被孢霉Δ5和Δ6同源物的鉴定
为寻找参与PUFA产生的脱氢酶,用分离自Schizochytrium种的总RNA构建了一个cDNA文库。使用一种商业化的试剂盒(GIBCO-BRL)按照厂商的指示在pSPORT1(GIBCO-BRL)中构建了一个以质粒为基础的cDNA文库。对随机cDNA克隆进行测序,通过数据库的BLAST检索和与Ma29和Ma524序列比较,鉴定编码可能的Δ5或Δ6脱氢酶的核酸序列。
从Schizochytrium文库中鉴定了一个与Ma29和Ma524具有同源性的克隆,它被称为81-23-C7。此克隆含有一个约1kb的插入子。使用通用的正向和反向测序引物从该克隆的每端获得了部分序列。来自正向引物的DNA序列示于SEQ ID NO:49,多肽序列示于SEQID NO:50。来自反向引物的DNA序列示于SEQ ID NO:51,来自反向引物的氨基酸序列示于SEQ ID NO:52。
实施例21
营养组合物
可将前面实施例中的PUFAs用于各种营养保健品、婴儿配方食品、营养替代品和其它营养液。
I.婴儿配方食品
A.含有铁的Isomil大豆配方食品
用途:作为供对牛奶过敏或敏感的婴儿、幼儿和成年人的饮料,供患有应避免使用乳糖的疾病的患者使用的食物,所述疾病为:乳糖酶缺陷型、不耐乳糖和半乳糖血症。
特征:
●大豆蛋白提取物,可以避免对牛奶蛋白过敏或敏感的症状。
●无乳糖制剂,可以避免与乳糖相关的腹泻。
●低渗透压(240mOsm/kg水),可以降低渗透压腹泻的危险。
●双重碳水化合物(玉米糖浆和蔗糖)设计,可以提高碳水化合物的吸收并降低超过受损伤肠道的吸收能力的危险。
●每100卡路里1.8mg铁(硫酸亚铁),有助于避免缺铁。
●推荐含量的维生素和矿物质。
●植物油,用于提供推荐含量的必需脂肪酸。
●乳白色,乳样稠度和宜人的芳香。
成分:(Pareve,)85%水、4.9%玉米糖浆、2.6%糖(蔗糖)、2.1%大豆油、1.9%大豆蛋白提取物、1.4%椰子油、0.15%柠檬酸钙、0.11%三碱价磷酸钙、柠檬酸钾、单碱价磷酸钾、氯化钾、甘油一酯和二酯、大豆卵磷酯、角叉菜聚糖、抗坏血酸、L-甲硫氨酸、氯化镁、二碱价磷酸钾、氯化钠、氯化胆碱、牛黄酸、硫酸亚铁、m-肌醇、α-生育酚乙酸酯、硫酸锌、L-肉碱、烟酰胺、泛酸钙、硫酸铜、维生素A棕榈酸酯、盐酸氯化硫胺素、核黄素、盐酸吡哆醇、叶酸、硫酸锰、碘化钾、叶绿醌、生物素、亚硒酸钠、维生素D3和氰钴胺素。
B.用于腹泻的IsomilDF大豆配方食品
用途:作为对婴儿和儿童进行腹泻饮食控制的短期食物。
特征:
●最初的婴儿配方食品,含有源于大豆纤维的、添加的食用纤维,特别适用于腹泻治疗。
●临床上证实,在婴儿中度至重度腹泻期间,能降低腹泻、水样大便的持续时间。
●营养能完全满足婴儿的营养需要。
●添加了L-甲硫氨酸的大豆蛋白提取物,能满足或超过婴儿对全部必需氨基酸的需要。
●无乳糖制剂,可以避免与乳糖相关的腹泻。
●低渗透压(240mOsm/kg水),可以降低渗透性腹泻的危险。
●双重碳水化合物(玉米糖浆和蔗糖)设计,可以提高碳水化合物的吸收并降低超过受损伤的肠道的吸收能力的危险。
●满足或超过由美国儿科学营养委员会推荐的维生素和矿物质水平,并满足婴儿配方食品条例的要求。
●每100卡路里1.8mg铁(硫酸亚铁),有助于避免缺铁。
●植物油,用于提供推荐含量的必需脂肪酸。
成分:(Pareve,)86%水、4.8%玉米糖浆、2.5%糖(蔗糖)、2.1%大豆油、2.0%大豆蛋白提取物、1.4%的椰子油、0.77%大豆纤维、0.12%柠檬酸钙、0.11三碱价磷酸钙、0.10%柠檬酸钾、氯化钾、单碱价磷酸钾、甘油一酯和二酯、大豆卵磷酯、角叉菜聚糖、氯化镁、抗坏血酸、L-甲硫氨酸、二碱价磷酸钾、氯化钠、氯化胆碱、牛黄酸、硫酸亚铁、m-肌醇、α-生育酚乙酸酯、硫酸锌、L-肉碱、烟酰胺、泛酸钙、硫酸铜、维生素A棕榈酸酯、盐酸氯化硫胺素、核黄素、盐酸吡哆醇、叶酸、硫酸锰、碘化钾、叶绿醌、生物素、亚硒酸钠、维生素D3和氰钴胺素。
C.含有铁的IsomilSF无蔗糖大豆配方食品。
用途:作为对牛奶蛋白过敏或敏感的或不耐受蔗糖的婴儿、幼儿和成年人的饮料。作为患有避免使用乳糖和蔗糖的疾病的患者的食物。
特征:
●大豆蛋白提取物,可以避免牛奶蛋白过敏或敏感的症状。
●无乳糖制剂,可以避免与乳糖相关的腹泻(碳水化合物源是Polycose葡萄糖聚合物)。
●不含蔗糖,用于不能耐蔗糖的患者。
●低渗透压(180mOsm/kg水),可以降低渗透压性腹泻的危险。
●每100卡路里1.8mg铁(硫酸亚铁),有助于避免缺铁。
●推荐含量的维生素和矿物质。
●植物油,用于提供推荐含量的必需脂肪酸。
●乳白色,乳样稠度和宜人的芳香。
成分:(Pareve,)75%水、11.8%水解玉米淀粉、4.1%大豆油、4.1%大豆蛋白提取物、2.8%椰子油、1.0%改性玉米淀粉、0.38%三碱价磷酸钙、0.17%柠檬酸钾、0.13%氯化钾、甘油一酯和二酯、大豆卵磷酯、氯化镁、抗坏血酸、L-甲硫氨酸、碳酸钙、氯化钠、氯化胆碱、角叉菜聚糖、牛黄酸、硫酸亚铁、m-肌醇、α-生育酚乙酸酯、硫酸锌、L-肉碱、烟酰胺、泛酸钙、硫酸铜、维生素A棕榈酸酯、盐酸氯化硫胺素、核黄素、盐酸吡哆醇、叶酸、硫酸锰、碘化钾、叶绿醌、生物素、亚硒酸钠、维生素D3和氰钴胺素。
D.含有即时可食用的铁的Isomil20大豆配方食品,20Cal/floz。
用途:在需要大豆喂养时使用。
成分:(Pareve,)85%水、4.9%玉米糖浆、2.6%糖(蔗糖)、2.1%大豆油、1.9%大豆蛋白提取物、1.4%椰子油、0.15%柠檬酸钙、0.11%三碱价磷酸钙、柠檬酸钾、单碱价磷酸钾、氯化钾、甘油一酯和二酯、大豆卵磷酯、角叉菜聚糖、抗坏血酸、L-甲硫氨酸、氯化镁、二碱价磷酸钾、氯化钠、氯化胆碱、牛黄酸、硫酸亚铁、m-肌醇、α-生育酚乙酸酯、硫酸锌、L-肉碱、烟酰胺、泛酸钙、硫酸铜、维生素A棕榈酸酯、盐酸氯化硫胺素、核黄素、盐酸吡哆醇、叶酸、硫酸锰、碘化钾、叶绿醌、生物素、亚硒酸钠、维生素D3和氰钴胺素。
E.Similac婴儿配方食品
用途:当需要婴儿配方食品时:当在1周岁之前决定终止母乳喂养时,当需要对母乳喂养进行补充时或当母乳喂养不合适时作为一种日常喂养。
特征:
●适于良好生长的适当质量和数量的蛋白;加热变性,这样可以降低与奶相关的肠失血的危险。
●来自混合植物油的脂肪(双重匀化),提供容易吸收的必需亚油酸。
●诸如乳糖的碳水化合物,其比例类似于人乳的比例。
●低的肾溶质负担,以降低对发育中的器官的压力。
●粉状、浓缩液体和可立即喂养形式。
成分:(-D)水、无脂奶粉、乳糖、大豆油、椰子油、甘油一酯和二酯、大豆卵磷酯、抗坏血酸、角叉菜聚糖、氯化胆碱、牛黄酸、m-肌醇、α-生育酚乙酸酯、硫酸锌、烟酰胺、硫酸亚铁、泛酸钙、硫酸铜、维生素A棕榈酸酯、盐酸氯化硫胺素、核黄素、盐酸吡哆醇、叶酸、硫酸锰、碘化钾、叶绿醌、生物素、亚硒酸钠、维生素D3和氰钴胺素。
F.SimilacNeocare含铁早产婴儿配方食品
用途:用于满足出院后早产婴儿的特殊营养需求。SimilacNeocare是生产的一种全营养的配方食品,用于为早产婴儿提供所需的额外的卡路里、蛋白、维生素和矿物质,以改善其同步生长并支持发育。
特征:
●降低对补充卡路里和维生素的需要。比标准配方食品(20Cal/fl oz)更多的卡路里(22 Cal/fl oz)。
●含有中等-链甘油三酯(MCT油)的高效吸收的脂肪混合物,有利于满足早产婴儿特殊的消化需要。
●每100卡路里具有更高含量的蛋白、维生素和矿物质,以便延长始于医院的营养支持。
●更多的钙和磷有利于骨骼矿物化。
成分:-D玉米糖浆固体、无脂奶粉、乳糖、乳蛋白浓缩物、大豆油、高油酸红花油、分离过的椰子油(中等链甘油三酯)、椰子油、柠檬酸钾、三碱价磷酸钙、碳酸钙、抗坏血酸、氯化镁、氯化钾、氯化钠、牛黄酸、硫酸亚铁、m-肌醇、氯化胆碱、抗坏血酸棕榈酸酯、L-肉碱、α-生育酚乙酸酯、硫酸锌、烟酰胺、混合生育酚、柠檬酸钠、泛酸钙、硫酸铜、盐酸氯化硫胺素、维生素A棕榈酸酯、β胡萝卜素、核黄素、盐酸吡哆醇、叶酸、硫酸锰、叶绿醌、生物素、亚硒酸钠、维生素D3和氰钴胺素。
G.即用型Similac天然保健低铁人乳强化剂,24Cal/fl oz。
用途:被设计用于与人乳混合或与人乳交替喂养低出生体重婴儿。
成分:-D水、无脂奶粉、水解玉米淀粉、乳糖、分离过的椰子油(中等链甘油三酯)、乳蛋白浓缩物、大豆油、椰子油、三碱价磷酸钙、柠檬酸钾、氯化镁、柠檬酸钠、抗坏血酸、碳酸钙、甘油一酯和二酯、大豆卵磷脂、角叉菜聚糖、氯化胆碱、m-肌醇、牛黄酸、烟酰胺、L-肉碱、α-生育酚乙酸酯、硫酸锌、氯化钾、泛酸钙、硫酸亚铁、硫酸铜、核黄素、维生素A棕榈酸酯、盐酸氯化硫胺素、盐酸吡哆醇、生物素、叶酸、硫酸锰、叶绿醌、亚硒酸钠、维生素D3和氰钴胺素。
可以用本发明的各种PUFAs取代和/或添加上述婴儿配方食品,以及本领域中公知的其它婴儿配方食品。
II.营养制剂
A.ENSURE
用途:ENSURE是一种被设计成主要用作口服营养保健品的低残留物液体食品,用于在就餐时服用或在两餐之间服用,或以适当的量取代食物。ENSURE是不含乳糖和谷蛋白的,并适用于改进的饮食,包括低胆甾醇饮食。不过它主要是作为一种口服保健品,可以通过饲管喂饲。
患者症状:
●用于改变了饮食的患者
●用于有营养危险的老年性患者
●用于不随意的体重减轻的患者
●用于病后或手术后恢复的患者
●用于需要低残留饮食的患者
成分:-D水、糖(蔗糖)、麦芽糖糊精(玉米)、酪蛋白酸钙和钠、高油酸红花油、大豆蛋白提取物、大豆油、菜籽油、柠檬酸钾、三碱价磷酸钙、柠檬酸钠、氯化镁、二碱价磷酸镁、人工香精、氯化钠、大豆卵磷脂、氯化胆碱、抗坏血酸、角叉菜聚糖、硫酸锌、硫酸亚铁、α-生育酚乙酸酯、吉兰胶、烟酰胺、泛酸钙、硫酸锰、硫酸铜、维生素A棕榈酸酯、盐酸氯化硫胺素、盐酸吡哆醇、核黄素、叶酸、钼酸钠、氯化铬、生物素、碘化钾、硒酸钠。
D.ENSURE棒
用途:ENSURE棒是全面、均衡营养的,用于作为两餐之间的补充或与食物一起使用。它可以作为替代其它快餐的美味、营养丰富的替代品。ENSURE棒的每一个棒含有低于1克的乳糖,并且巧克力FudgeBrownie香料不含谷蛋白。(Honey Graham Crunch香料含有谷蛋白)。
患者症状:
●用于需要额外卡路里、蛋白、维生素和矿物质的患者
●特别适用于为摄取足够卡路里和养分的人
●用于有咀嚼和吞咽能力的人
●任何对豌豆过敏或对坚果有任何类型过敏的人都不能食用
成分:Honey Graham Crunch--高果糖玉米糖浆、大豆蛋白提取物、红糖、蜜、麦芽糖糊精(玉米)、松脆大米(研磨过的大米),糖[蔗糖],盐[氯化钠]和麦芽、燕麦麸皮、部分氢化的棉籽油和大豆油、大豆多糖、甘油、乳清蛋白浓缩物、聚葡萄糖、果糖、酪蛋白酸钙、可可粉、人工香精、菜籽油、高油酸红花油、无脂奶粉、乳清粉、大豆卵磷脂和玉米油。在加工坚果的设备中生产。
维生素和矿物质:
三碱价磷酸钙、二碱价磷酸钾、氧化镁、盐(氯化钠)、氯化钾、抗坏血酸、正磷酸铁、α-生育酚乙酸酯、烟酰胺、氧化锌、泛酸钙、葡糖酸铜、硫酸锰、核黄素、β胡萝卜素、盐酸吡哆醇、一硝酸硫胺素、叶酸、生物素、氯化铬、碘化钾、硒酸钠、钼酸钠、叶绿醌、维生素D3和氰钴胺素。
蛋白:
Honey Graham Crunch-蛋白来源是大豆蛋白提取物和乳蛋白的混合物。
大豆蛋白提取物 74%
乳蛋白 26%
脂肪:
Honey Graham Crunch-脂肪来源是部分氢化的棉籽油和大豆油、菜籽油、高油酸红花油、和玉米油、以及大豆卵磷脂的混合物。
部分氢化的棉籽油和大豆油 76%
菜籽油 8%
高油酸红花油 8%
玉米油 4%
大豆卵磷脂 4%
碳水化合物:
Honey Graham Crunch-碳水化合物源是高果糖玉米糖浆、红糖、麦芽糖糊精、蜜、松脆大米、甘油、大豆多糖、和燕麦麸皮的混合物。
高果糖玉米糖浆 24%
红糖 21%
麦芽糖糊精 12%
蜜 11%
松脆大米 9%
甘油 9%
大豆多糖 7%
燕麦麸皮 7%
C.ENSURE高蛋白
用途:ENSURE高蛋白是一种为在其饮食中需要额外卡路里、蛋白、维生素和矿物质的人设计的浓缩的、高蛋白液体食品。可将其用作口服营养保健品,与食物一起食用或在两餐之间食用,或者以适当的量作为食物的替代品。ENSURE高蛋白是不含乳糖和谷蛋白的,并适合一般手术或髋关节骨折后恢复的人使用,并适于有压力型溃疡危险的患者使用。
患者症状:
●用于需要额外卡路里、蛋白、维生素和矿物质的患者,如一般手术或髋关节骨折后恢复的患者、有压力型溃疡危险的患者、和需要低胆甾醇饮食的患者。
特征-
●饱和脂肪含量低
●每1份含有6克总脂肪和低于5毫克的胆甾醇
●味道丰满、奶油味
●是蛋白、钙和其它必需维生素和矿物质的优良来源
●用于低胆甾醇饮食
●不含乳糖,容易消化
成分:Vanilla Suppreme:--D水、糖(蔗糖)、麦芽糖糊精(玉米)、酪蛋白酸钙和钠、高油酸红花油、大豆蛋白提取物、大豆油、菜籽油、柠檬酸钾、三碱价磷酸钙、柠檬酸钠、氯化镁、二碱价磷酸镁、人工香精、氯化钠、大豆卵磷脂、氯化胆碱、抗坏血酸、角叉菜聚糖、硫酸锌、硫酸亚铁、α-生育酚乙酸酯、吉兰胶、烟酰胺、泛酸钙、硫酸锰、硫酸铜、维生素A棕榈酸酯、盐酸氯化硫胺素、盐酸吡哆醇、核黄素、叶酸、钼酸钠、氯化铬、生物素、碘化钾、硒酸钠、叶绿醌、维生素D3和氰钴胺素。
蛋白:
蛋白来源是两种高生物学价值蛋白:酪蛋白和大豆蛋白的混合物。
酪蛋白酸钠和钙 85%
大豆蛋白提取物 15%
脂肪:
脂肪来源是三种油的混合物:高油酸红花油、菜籽油、和大豆油。
高油酸红花油 40%
菜籽油 30%
大豆油 30%
ENSURE高蛋白中的脂肪含量满足美国心脏协会(AHA)的规定。ENSURE高蛋白中的6克脂肪相当于24%的总卡路里,其中2.6%的脂肪来自饱和脂肪酸,7.9%的脂肪来自多不饱和脂肪酸。以上数字在AHA规定的范围之内:来自脂肪的总卡路里≤30%,<10%的卡路里来自饱和脂肪酸,≤10%的总卡路里来自多不饱和脂肪酸。
碳水化合物:
ENSURE高蛋白含有麦芽糖糊精和蔗糖的组合物。适中的甜度和各种风味(香草味、巧克力味、野浆果味、和香蕉味),加上大胡桃、樱桃、草莓、柠檬、和橙的VARI-FLAVORSOFlavor Pacs有助于避免产生对味道的麻木,并有助于患者接受。
香草和其它非巧克力风味
蔗糖 60%
麦芽糖糊精 40%
巧克力
蔗糖 70%
麦芽糖糊精 30%
D.ENSURELIGHT
用途:ENSURE LIGHT是一种被设计用作口服营养保健品的低脂肪液体食品,与食物一起使用或在两餐之间使用。ENSURE LIGHT不含乳糖和谷蛋白,适用于改变的饮食,包括低胆甾醇饮食。
患者症状:
●用于正常体重或肥胖患者,这种患者需要在一种保健品中有额外的营养,这种保健品所含脂肪比ENSURE低50%,所含的卡路里比ENSURE少20%。
●用于因为饮食不正常而需要额外营养的健康成年人
特征:
●脂肪和饱和脂肪含量低
●每1份含有3克总脂肪和低于5毫克的胆甾醇
●味道丰满、奶油味
●是钙和其它必需维生素和矿物质的优良来源
●用于低胆甾醇饮食
●不含乳糖,容易消化
成分:法国香草:-D水、麦芽糖糊精(玉米)、糖(蔗糖)、酪蛋白酸钙、高油酸红花油、菜籽油、氯化镁、柠檬酸钠、柠檬酸钾、二碱价磷酸钾、二碱价磷酸镁、天然和人工香精、三碱价磷酸钙、纤维素凝胶、氯化胆碱、大豆卵磷脂、角叉菜聚糖、盐(氯化钠)、抗坏血酸、纤维素胶、硫酸亚铁、α-生育酚乙酸酯、硫酸锌、烟酰胺、硫酸锰、泛酸钙、硫酸铜、盐酸氯化硫胺素、维生素A棕榈酸酯、盐酸吡哆醇、核黄素、氯化铬、叶酸、钼酸钠、生物素、碘化钾、硒酸钠、叶绿醌、维生素D3和氰钴胺素。
蛋白:
蛋白来源是酪蛋白酸钙。
酪蛋白酸钙 100%
脂肪
脂肪来源是两种油的混合物:高油酸红花油和菜籽油。
高油酸红花油 70%
菜籽油 30%
ENSURE LIGHT中的脂肪含量符合美国心脏协会(AHA)的规定。ENSURE LIGHT中的3克脂肪相当于13.5%的总卡路里,其中1.4%的脂肪来自饱和脂肪酸,2.6%的脂肪来自多不饱和脂肪酸。以上数字在AHA规定的范围之内:来自脂肪的总卡路里≤30%,<10%的卡路里来自饱和脂肪酸,≤10%的总卡路里来自多不饱和脂肪酸。
碳水化合物
ENSURE LIGHT含有麦芽糖糊精和蔗糖的组合物。巧克力风味的还含有玉米糖浆。适中的甜度和各种风味(法国香草味、巧克力王、草莓旋风),加上大胡桃、樱桃、草莓、柠檬、和橙的VARI-FLAVORSOFlavor Pacs有助于避免产生对味道的麻木,并有助于患者接受。
香草和其它非巧克力风味
蔗糖 51%
麦芽糖糊精 49%
巧克力
蔗糖 47.0%
玉米糖浆 26.5%
麦芽糖糊精 26.5%
维生素和矿物质
1份8-fl-oz的ENSURE LIGHT至少能提供24种重要的维生素和矿物质的25%的RDIs。
咖啡因
巧克力香味含有2.1毫克咖啡因/8fl oz
E.ENSURE PLUS
用途:ENSURE PLUS是一种高卡路里、低残留液体食品,用于在需要额外的卡路里和营养,但需要正常浓度的蛋白时使用。它主要被设计成一种口服营养保健品,用于在就餐时使用或在两餐之间使用,或者以合适的量作为食物的替代品。ENSURE PLUS不含乳糖和谷蛋白。不过,它主要是一种口服营养保健品,可以通过饲管喂饲。
患者症状
●用于在有限的体积中需要额外卡路里和营养,但需要正常浓度的蛋白的患者
●用于需要到达或维持健康体重的患者
特征
●味道丰满,奶油味
●是必需维生素和矿物质的良好来源
成分:香草:-D水、玉米糖浆、麦芽糖糊精(玉米)、玉米油、酪蛋白酸钠和钙、糖(蔗糖)、大豆蛋白提取物、氯化镁、柠檬酸钠、柠檬酸钾、三碱价磷酸钙、大豆卵磷脂、天然和人工香精、柠檬酸钠、氯化钾、氯化胆碱、抗坏血酸、角叉菜聚糖、硫酸锌、硫酸亚铁、α-生育酚乙酸酯、烟酰胺、泛酸钙、硫酸锰、硫酸铜、盐酸氯化硫胺素、盐酸吡哆醇、核黄素、维生素A棕榈酸酯、叶酸、生物素、氯化铬、钼酸钠、碘化钾、亚硒酸钠、叶绿醌、氰钴胺素和维生素D3。
蛋白
蛋白来源是两种高生物学价值蛋白的混合物:酪蛋白和大豆蛋白。
酪蛋白酸钠和钙 84%
大豆蛋白提取物 16%
脂肪
脂肪来源是玉米油。
玉米油 100%
碳水化合物
ENSURE PLUS含有麦芽糖糊精和蔗糖的组合物。适中的甜度和多种风味(香草味、巧克力味、草莓味、咖啡味、黄油大胡桃、和鸡蛋酒味),加上大胡桃、樱桃、草莓、柠檬、和橙的VARI-FLAVORSOFlavorPacs,有助于避免产生对味道的麻木,并有助于患者接受。
香草、草莓、黄油大胡桃、和咖啡味
玉米糖浆 39%
麦芽糖糊精 38%
蔗糖 23%
巧克力和鸡蛋酒味
玉米糖浆 36%
麦芽糖糊精 34%
蔗糖 30%
维生素和矿物质
1份8fl oz ENSURE PLUS至少可提供25种重要维生素和矿物质的15%的RDIs。
咖啡因
巧克力味含有3.1毫克咖啡因/8fl oz。咖啡味含有微量的咖啡因。
F.ENSURE PLUSHN
用途:ENSURE PLUS HN是一种全营养高卡路里、高氮液体食品,是为需要较多卡路里和蛋白或具有有限的体积承受能力的人设计的。可将其用于口服补充或通过饲管进行全营养支持。ENSURE PLUS HN不含乳糖和谷蛋白。
患者症状
●用于需要较多卡路里和蛋白的患者,如手术或受伤后的患者
●用于具有有限的体积承受能力和提前产生饱满感的患者
特征
●用于补充或全营养
●用于口服或饲管喂养
● 1.5CaVmL
●高氮
●卡路里稠密
成分
香草:-D水、麦芽糖糊精(玉米)、酪蛋白酸钠和钙、玉米油、糖(蔗糖)、大豆蛋白提取物、氯化镁、柠檬酸钾、三碱价磷酸钙、大豆卵磷脂、天然和人工香精、柠檬酸钠、氯化胆碱、抗坏血酸、牛黄酸、L-肉碱、硫酸锌、硫酸亚铁、α-生育酚乙酸酯、烟酰胺、角叉菜聚糖、泛酸钙、硫酸锰、硫酸铜、盐酸氯化硫胺素、盐酸吡哆醇、核黄素、维生素A棕榈酸酯、叶酸、生物素、氯化铬、钼酸钠、碘化钾、亚硒酸钠、叶绿醌、氰钴胺素和维生素D3。
G.ENSURE粉
用途:ENSURE粉(用水重配)是一种低残留液体食品,主要被设计用作口服营养保健品,用于就餐时使用或在两餐之间使用。ENSURE粉不含乳糖和谷蛋白,因此,适用于改变了的饮食,包括低胆甾醇饮食。
症状:
●用于饮食改变了的患者
●用于有营养危险的老年患者
●用于病后/手术后恢复的患者
●用于需要低残留饮食的患者
特征
●方便、容易混合
●饱和脂肪含量低
●每1份含有9克总脂肪和低于5毫克的胆甾醇
●维生素和矿物质含量高
●用于低胆甾醇饮食
●不含乳糖,容易消化
成分:
-D玉米糖浆、麦芽糖糊精(玉米)、糖(蔗糖)、玉米油、酪蛋白酸钠和钙、大豆蛋白提取物、人工香精、柠檬酸钾、氯化镁、柠檬酸钠、三碱价磷酸钙、氯化钾、大豆卵磷脂、抗坏血酸、氯化胆碱、硫酸锌、硫酸亚铁、α-生育酚乙酸酯、烟酰胺、泛酸钙、硫酸锰、盐酸氯化硫胺素、硫酸铜、盐酸吡哆醇、核黄素、维生素A棕榈酸酯、叶酸、生物素、钼酸钠、氯化铬、碘化钾、硒酸钠、叶绿醌、维生素D3和氰钴胺素。
蛋白
蛋白来源是两种高生物学价值蛋白的混合物:酪蛋白和大豆蛋白
酪蛋白酸钠和钙 84%
大豆蛋白提取物 16%
脂肪
脂肪来源是玉米油。
玉米油 100%
碳水化合物
ENSURE粉含有玉米糖浆、麦芽糖糊精和蔗糖的混合物。适中甜度的ENSURE粉加上大胡桃、樱桃、草莓、柠檬、和橙的VARI-FLAVORSOFlavor Pacs有助于避免产生对味道的麻木,并有助于患者接受。
香草
玉米糖浆 35%
麦芽糖糊精 35%
蔗糖 30%
H.ENSURE布丁
用途:ENSURE布丁是一种富含营养的保健品,以非液体形式提供均衡的营养,用于在就餐时使用或在两餐之间使用。它适用于稠度改变了的饮食(例如软的、果泥的、或全液体的饮食)或用于患有吞咽障碍的人。ENSURE布丁不含谷蛋白。
患者症状:
●适用于食用稠度改变了的饮食(例如软的、果泥的、或全液体的饮食)的患者
●用于有吞咽障碍的患者
特征:
●丰富和奶油味的良好味道
●必需维生素和矿物质的良好来源
●方便需要,无须冷藏
●不含谷蛋白
每5盎司的营养分布:卡路里250,蛋白10.9%、全脂肪34.9%,碳水化合物54.2%
成分:香草:-D无脂奶、水、糖(蔗糖)、部分氢化的大豆油、改性食用淀粉、硫酸镁、硬脂酰乳酸钠、二碱价磷酸钠、人工香精、抗坏血酸、硫酸锌、硫酸亚铁、α-生育酚乙酸酯、氯化胆碱、烟酰胺、硫酸锰、泛酸钙、FD&C Yellow#5、柠檬酸钾、维生素A棕榈酸酯、盐酸氯化硫胺素、盐酸吡哆醇、核黄素、FD&C Yellow#6、叶酸、生物素、叶绿醌、维生素D3和氰钴胺素。
蛋白
蛋白来源是无脂奶。
无脂奶 100%
脂肪
脂肪来源是氢化大豆油。
氢化大豆油 100%
碳水化合物
ENSURE布丁含有蔗糖和改性食用淀粉的混合物。适中的甜度和多种风味(香草味、巧克力味、奶油硬糖味、和木薯味)有助于防止对味道的麻木。每1份该产品含有9.2克乳糖。
香草和其它非巧克力味
蔗糖 56%
乳糖 27%
改性食用淀粉 17%
巧克力
蔗糖 58%
乳糖 26%
改性食用淀粉 16%
I.含纤维的ENSURE
用途:含纤维的ENSURE是一种含纤维的全营养的液体食品,这种食品被设计用于可以通过提高饮食的纤维和养分而受益的人。含纤维的ENSURE适用于不需要低残留饮食的人。可以口服或通过饲管喂饲,并可用作常规饮食的营养保健品,或以合适的量用作食物的替代品。含纤维的ENSURE不含乳糖和谷蛋白,因此,适用于改变了的饮食,包括低胆甾醇饮食。
患者症状
●用于能通过提高饮食的纤维和养分而受益的患者
特征
●新开发的配方食品饱和脂肪酸含量低,维生素和矿物质含量较高
●每1份含有6克总的脂肪和小于5毫克的胆甾醇
●丰富、奶油味的味道
●良好的纤维来源
●必需维生素和矿物质的优良来源
●用于低胆甾醇饮食
●不含乳糖和谷蛋白
成分
香草:-D水、麦芽糖糊精(玉米)、糖(蔗糖)、酪蛋白酸钠和钙、燕麦纤维、高油酸红花油、菜籽油、大豆蛋白提取物、玉米油、大豆纤维、三碱价磷酸钙、氯化镁、柠檬酸钾、纤维素凝胶、大豆卵磷脂、二碱价磷酸钾、柠檬酸钠、天然和人工香精、氯化胆碱、磷酸镁、抗坏血酸、纤维素胶、氯化钾、角叉菜聚糖、硫酸亚铁、α-生育酚乙酸酯、硫酸锌、烟酰胺、硫酸锰、泛酸钙、硫酸铜、维生素A棕榈酸酯、盐酸氯化硫胺素、盐酸吡哆醇、核黄素、叶酸、氯化铬、生物素、钼酸钠、碘化钾、硒酸钠、叶绿醌、维生素D3和氰钴胺素。
蛋白
蛋白来源是两种高生物学价值蛋白的混合物:酪蛋白和大豆蛋白
酪蛋白酸钠和钙 80%
大豆蛋白提取物 20%
脂肪
脂肪来源是三种油的混合物:高油酸红花油、菜籽油、和玉米油。
高油酸红花油 40%
菜籽油 40%
玉米油 20%
含纤维的ENSURE中的脂肪含量符合美国心脏协会(AHA)的规定。含纤维的ENSURE中的6克脂肪相当于22%的总的卡路里,其中2.01%的脂肪来自饱和脂肪酸,而6.7%的脂肪来自多不饱和脂肪酸。这些数字在AHA规定的范围之内:来自脂肪的总卡路里≤30%,<10%的卡路里来自饱和脂肪酸,≤10%的总卡路里来自多不饱和脂肪酸。
碳水化合物
含纤维的ENSURE含有麦芽糖糊精和蔗糖的组合物。适中的甜度和和多种风味(香草味、巧克力味、和黄油大胡桃味),加上大胡桃、樱桃、草莓、柠檬、和橙的VARI-FLAVORSFlavor Pacs有助于避免产生对味道的麻木,并有助于患者接受。
香草及其它非巧克力味
麦芽糖糊精 66%
蔗糖 25%
燕麦纤维 7%
大豆纤维 2%
巧克力
麦芽糖糊精 55%
蔗糖 36%
燕麦纤维 7%
大豆纤维 2%
纤维
用于含纤维的ENSURE的纤维混合物包括燕麦纤维和大豆多糖。该混合物能为每8-fl-oz的罐装食物提供大约4克的总的饮食纤维。不可溶性纤维和可溶性纤维的比例为95∶5。
上述各种营养保健品及本领域技术人员已知的其它保健品可以用本发明的PUFAs取代和/或补充。
J.OxepaTM营养制品
Oxepa是低碳水化合物、卡路里密集的肠道营养制品,是为了患有或处于ARDS危险期的患者的饮食管理而设计的。它具有特殊的成分组合,包括一种专利油混合物,该混合物含有二十碳五烯酸(源于鱼油的EPA),γ-亚麻酸(源于琉璃苣油的GLA),和较高的抗氧化剂含量。
卡路里分布:
●卡路里密度高达1.5Cal/mL(355Cal/8fl oz),以降低满足能量需求所需要的体积。
●Oxepa中的卡路里分布如表7所示
表7.Oxepa的卡路里分布 | |||
每8 fl oz | 每升 | Cal的% | |
卡路里 | 355 | 1,500 | --- |
脂肪(g) | 22.2 | 93.7 | 55.2 |
碳水化合物(g) | 25 | 105.5 | 28.1 |
蛋白(g) | 14.8 | 62.5 | 16.7 |
水(g) | 186 | 785 | --- |
脂肪:
●每1份8-fl oz的Oxepa含有22.2克脂肪(93.7g/L)。
●脂肪来源是一种油类混合物:31.8%的菜籽油,25%的中等链甘油三酯(MCTs),20%的琉璃苣油,20%的鱼油和3.2%的大豆卵磷脂。在表8中示出了Oxepa的典型脂肪酸特征。
●如表10所示,Oxepa能提供均衡量的多不饱和脂肪酸、单饱和脂肪酸和饱和脂肪酸。
●中等链甘油三酯(MCTs)--占脂肪混合物的25%--有助于肠道排空,因为它能被肠道吸收而不会被胆酸乳化。
●OxepaTM营养制品中的各种脂肪酸成分可以用本发明的PUFAs取代和/或补充。
表8.典型脂肪酸分布 | |||
总脂肪酸% | g/8 fl oz* | g/L* | |
己酸(6:0) | 0.2 | 0.04 | 0.18 |
辛酸(8:0) | 14.69 | 3.1 | 13.07 |
癸酸(10:0) | 11.06 | 2.33 | 9.87 |
棕榈酸(16:0) | 5.59 | 1.18 | 4.98 |
棕榈油酸(16:1n-7) | 1.82 | 0.38 | 1.62 |
硬脂酸(18:0) | 1.84 | 0.39 | 1.64 |
油酸(18:1n-9) | 24.44 | 5.16 | 21.75 |
亚油酸(18:2n-6) | 16.28 | 3.44 | 14.49 |
α-亚麻酸(18:3n-3) | 3.47 | 0.73 | 3.09 |
γ-亚麻酸(18:3n-6) | 4.82 | 1.02 | 4.29 |
二十碳五烯酸(20:5n-3) | 5.11 | 1.08 | 4.55 |
n-3-二十二碳五烯酸(22:5n-3) | 0.55 | 0.12 | 0.49 |
二十二碳六烯酸(22:6n-3) | 2.27 | 0.48 | 2.02 |
其他 | 7.55 | 1.52 | 6.72 |
*脂肪酸大约相当于总脂肪的95%
表9
表9.Oxepa的脂肪分布 | |
来自脂肪的总卡路里% | 55.2 |
多不饱和脂肪酸 | 31.44g/L |
单不饱和脂肪酸 | 25.53g/L |
饱和脂肪酸 | 32.38g/L |
n-6与n-3的比率 | 1.75∶1 |
胆甾醇 | 9.49mg/8 fl oz40.1mg/L |
碳水化合物
●每1份8-fl oz的服用量的碳水化合物的含量为25.0克(105.5g/L)。
●碳水化合物来源是45%的麦芽糖糊精(一种复合碳水化合物)和55.5%的蔗糖(单糖),这两种碳水化合物都容易消化和吸收。
●Oxepa的高脂肪和低碳水化合物含量是为了降低二氧化碳的产生而设计的。高二氧化碳含量会使通风机-依赖性患者的不良习惯戒断复杂化。低含量碳水化合物还可被用于出现了由紧张诱导的高血糖的患者。
●Oxepa不含乳糖。
饮食中的碳水化合物、来自蛋白的氨基酸、和脂肪的甘油组分在体内可转化成葡萄糖。通过这一过程,可以满足葡萄糖依赖型组织(如中枢神经系统和红血细胞)对碳水化合物的需要。不过,不含碳水化合物的饮食会导致酮病、组织蛋白的过度分解代谢和失去体液和电解质。如果卡路里摄取适度的话,通过每天摄取50-100克的可消化的碳水化合物可避免上述后果。如果满足了能量需求的话,Oxepa中的碳水化合物含量还足于降低葡糖异生作用。
蛋白
●每1份8-fl oz的Oxepa含有14.8克的蛋白(62.5g/L)。
●总的卡路里/氮的比例(150∶1)满足胁迫患者的需要。
●Oxepa能提供足够的蛋白,以促进合成代谢并维持苗条的体形,而不会产生呼吸问题。高蛋白摄取是呼吸不足患者所关心的问题。不过,蛋白对二氧化碳的产生具有很少的影响,高蛋白饮食可提高通风器的动力。
●Oxepa的蛋白来源是86.8%的酪蛋白酸钠和13.2%的酪蛋白酸钙。
●如表11所示,Oxepa中的蛋白系统的氨基酸谱满足或超过国家科学院制订的优质蛋白标准。
●Oxepa不含谷蛋白。
在本说明书中所提到的所有公开文献和专利申请是本发明领域技术人员技术水平的指标。所有公开文献和专利申请在本文中以相同的程度收作参考文献,就如同每一份公开文献或专利申请被专门和单独地指明为收作参考文献一样。
现在已对本发明作了全面说明,对本领域普通技术人员来说,显而易见的是,在不脱离所附权利要求书的实质或范围的前提下可以作出各种改变或改进。
序列表
(1)一般信息
(i)发明人:KNUTZON,DEBORAH
MURKERJI,PRADIP
HUANG,YUNG-SHENG
THURMOND,JENNIFFER
CHAUDHARY,SUNITA
LEONARD,AMANDA
(ii)发明题目:在植物中合成长链多不饱和脂肪酸的方法和组合物
(iii)序列数:52
(iv)联系地址:
(A)联系人:LIMBACH & LIMBACH L.L.P.
(B)街道:2001 FERRY BUILDING
(C)城市:SAN FRANCISCO
(D)州:CA
(E)国家:USA
(F)ZIP:94111
(v)计算机可读形式:
(A)介质类型:软盘
(B)计算机:IBM PC兼容
(C)操作系统:PC-DOS/MS-DOS
(D)软件:Microsoft Word
(vi)本申请数据:
(A)申请号:
(B)申请日:
(C)分类:
(vii)先前申请数据
(A)申请号:US08/834,033
(B)申请日:1997年4月11日
(vii)先前申请数据
(A)申请号:US08/833,610
(B)申请日:1997年4月11日
(viii)律师/代理人信息:
(A)姓名:MICHAEL R.WARD
(B)登记号:38,351
(C)参考/登记号:CGAB-320
(ix)电信信息:
(A)电话:(415)433-4150
(B)传真:(415)433-8716
(C)电传:N/A(2)SEQ ID NO:1的信息:
(i)序列特征:
(A)长度:1617碱基对
(B)类型:核酸
(C)线型:单链
(D)拓扑学:线形
(ii)分子类型:DNA(基因组)
(xi)序列描述:SEQ ID NO:1:CGACACTCCT TCCTTCTTCT CACCCGTCCT AGTCCCCTTC AACCCCCCTC TTTGACAAAG 60ACAACAAACC ATGGCTGCTG CTCCCAGTGT GAGGACGTTT ACTCGGGCCG AGGTTTTGAA 120TGCCGAGGCT CTGAATGAGG GCAAGAAGGA TGCCGAGGCA CCCTTCTTGA TGATCATCGA 180CAACAAGGTG TACGATGTCC GCGAGTTCGT CCCTGATCAT CCCGGTGGAA GTGTGATTCT 240CACGCACGTT GGCAAGGACG GCACTGACGT CTTTGACACT TTTCACCCCG AGGCTGCTTG 300GGAGACTCTT GCCAACTTTT ACGTTGGTGA TATTGACGAG AGCGACCGCG ATATCAAGAA 360TGATGACTTT GCGGCCGAGG TCCGCAAGCT GCGTACCTTG TTCCAGTCTC TTGGTTACTA 420CGATTCTTCC AAGGCATACT ACGCCTTCAA GGTCTCGTTC AACCTCTGCA TCTGGGGTTT 480GTCGACGGTC ATTGTGGCCA AGTGGGGCCA GACCTCGACC CTCGCCAACG TGCTCTCGGC 540TGCGCTTTTG GGTCTGTTCT GGCAGCAGTG CGGATGGTTG GCTCACGACT TTTTGCATCA 600CCAGGTCTTC CAGGACCGTT TCTGGGGTGA TCTTTTCGGC GCCTTCTTGG GAGGTGTCTG 660CCAGGGCTTC TCGTCCTCGT GGTGGAAGGA CAAGCACAAC ACTCACCACG CCGCCCCCAA 720CGTCCACGGC GAGGATCCCG ACATTGACAC CCACCCTCTG TTGACCTGGA GTGAGCATGC 780GTTGGAGATG TTCTCGGATG TCCCAGATGA GGAGCTGACC CGCATGTGGT CGCGTTTCAT 840GGTCCTGAAC CAGACCTGGT TTTACTTCCC CATTCTCTCG TTTGCCCGTC TCTCCTGGTG 900CCTCCAGTCC ATTCTCTTTG TGCTGCCTAA CGGTCAGGCC CACAAGCCCT CGGGCGCGCG 960TGTGCCCATC TCGTTGGTCG AGCAGCTGTC GCTTGCGATG CACTGGACCT GGTACCTCGC 1020CACCATGTTC CTGTTCATCA AGGATCCCGT CAACATGCTG GTGTACTTTT TGGTGTCGCA 1080GGCGGTGTGC GGAAACTTGT TGGCGATCGT GTTCTCGCTC AACCACAACG GTATGCCTGT 1140GATCTCGAAG GAGGAGGCGG TCGATATGGA TTTCTTCACG AAGCAGATCA TCACGGGTCG 1200TGATGTCCAC CCGGGTCTAT TTGCCAACTG GTTCACGGGT GGATTGAACT ATCAGATCGA 1260GCACCACTTG TTCCCTTCGA TGCCTCGCCA CAACTTTTCA AAGATCCAGC CTGCTGTCGA 1320GACCCTGTGC AAAAAGTACA ATGTCCGATA CCACACCACC GGTATGATCG AGGGAACTGC 1380AGAGGTCTTT AGCCGTCTGA ACGAGGTCTC CAAGGCTGCC TCCAAGATGG GTAAGGCGCA 1440GTAAAAAAAA AAACAAGGAC GTTTTTTTTC GCCAGTGCCT GTGCCTGTGC CTGCTTCCCT 1500TGTCAAGTCG AGCGTTTCTG GAAAGGATCG TTCAGTGCAG TATCATCATT CTCCTTTTAC 1560CCCCCGCTCA TATCTCATTC ATTTCTCTTA TTAAACAACT TGTTCCCCCC TTCACCG 1617(2)SEQ ID NO:2的信息:
(i)序列特征:
(A)长度:457氨基酸
(B)类型:氨基酸
(C)线型:不相关
(D)拓扑构型:线形
(ii)分子类型:肽
(xi)序列描述:SEQ ID NO:2:Met Ala Ala Ala Pro Ser Val Arg Thr Phe Thr Arg Ala Glu Val Leu1 5 10 15Asn Ala Glu Ala Leu Asn Glu Gly Lys Lys Asp Ala Glu Ala Pro Phe
20 25 30Leu Met Ile Ile Asp Asn Lys Val Tyr Asp Val Arg Glu Phe Val Pro
35 40 45Asp His Pro Gly Gly Ser Val Ile Leu Thr His Val Gly Lys Asp Gly
50 55 60Thr Asp Val Phe Asp Thr Phe His Pro Glu Ala Ala Trp Glu Thr Leu65 70 75 80Ala Asn Phe Tyr Val Gly Asp Ile Asp Glu Ser Asp Arg Asp Ile Lys
85 90 95Asn Asp Asp Phe Ala Ala Glu Val Arg Lys Leu Arg Thr Leu Phe Gln
100 105 110Ser Leu Gly Tyr Tyr Asp Ser Ser Lys Ala Tyr Tyr Ala Phe Lys Val
115 120 125Ser Phe Asn Leu Cys Ile Trp Gly Leu Ser Thr Val Ile Val Ala Lys
130 135 140Trp Gly Gln Thr Ser Thr Leu Ala Asn Val Leu Ser Ala Ala Leu Leu145 150 155 160Gly Leu Phe Trp Gln Gln Cys Gly Trp Leu Ala His Asp Phe Leu His
165 170 175His Gln Val Phe Gln Asp Arg Phe Trp Gly Asp Leu Phe Gly Ala Phe
180 185 190Leu Gly Gly Val Cys Gln Gly Phe Ser Ser Ser Trp Trp Lys Asp Lys
195 200 205His Asn Thr His His Ala Ala Pro Asn Val His Gly Glu Asp Pro Asp
210 215 220Ile Asp Thr His Pro Leu Leu Thr Trp Ser Glu His Ala Leu Glu Met225 230 235 240Phe Ser Asp Val Pro Asp Glu Glu Leu Thr Arg Met Trp Ser Arg Phe
245 250 255Met Val Leu Asn Gln Thr Trp Phe Tyr Phe Pro Ile Leu Ser Phe Ala
260 265 270Arg Leu Ser Trp Cys Leu Gln Ser Ile Leu Phe Val Leu Pro Asn Gly
275 280 285Gln Ala His Lys Pro Ser Gly Ala Arg Val Pro Ile Ser Leu Val Glu
290 295 300Gln Leu Ser Leu Ala Met His Trp Thr Trp Tyr Leu Ala Thr Met Phe305 310 315 320Leu Phe Ile Lys Asp Pro Val Asn Met Leu Val Tyr Phe Leu Val Ser
325 330 335Gln Ala Val Cys Gly Asn Leu Leu Ala Ile Val Phe Ser Leu Asn His
340 345 350Asn Gly Met Pro Val Ile Ser Lys Glu Glu Ala Val Asp Met Asp Phe
355 360 365Phe Thr Lys Gln Ile Ile Thr Gly Arg Asp Val His Pro Gly Leu Phe
370 375 380Ala Asn Trp Phe Thr Gly Gly Leu Asn Tyr Gln Ile Glu His His Leu385 390 395 400Phe Pro Ser Met Pro Arg His Asn Phe Ser Lys Ile Gln Pro Ala Val
405 410 415Glu Thr Leu Cys Lys Lys Tyr Asn Val Arg Tyr His Thr Thr Gly Met
420 425 430Ile Glu Gly Thr Ala Glu Val Phe Ser Arg Leu Asn Glu Val Ser Lys
435 440 445Ala Ala Ser Lys Met Gly Lys Ala Gln
450 455(2)SEQ ID NO:3的信息:
(i)序列特征:
(A)长度:1488碱基对
(B)类型:核酸
(C)线型:单链
(D)拓扑学:线形
(ii)分子类型:DNA(基因组)
(xi)序列描述:SEQ ID NO:3:GTCCCCTGTC GCTGTCGGCA CACCCCATCC TCCCTCGCTC CCTCTGCGTT TGTCCTTGGC 60CCACCGTCTC TCCTCCACCC TCCGAGACGA CTGCAACTGT AATCAGGAAC CGACAAATAC 120ACGATTTCTT TTTACTCAGC ACCAACTCAA AATCCTCAAC CGCAACCCTT TTTCAGGATG 180GCACCTCCCA ACACTATCGA TGCCGGTTTG ACCCAGCGTC ATATCAGCAC CTCGGCCCCA 240AACTCGGCCA AGCCTGCCTT CGAGCGCAAC TACCAGCTCC CCGAGTTCAC CATCAAGGAG 300ATCCGAGAGT GCATCCCTGC CCACTGCTTT GAGCGCTCCG GTCTCCGTGG TCTCTGCCAC 360GTTGCCATCG ATCTGACTTG GGCGTCGCTC TTGTTCCTGG CTGCGACCCA GATCGACAAG 420TTTGAGAATC CCTTGATCCG CTATTTGGCC TGGCCTGTTT ACTGGATCAT GCAGGGTATT 480GTCTGCACCG GTGTCTGGGT GCTGGCTCAC GAGTGTGGTC ATCAGTCCTT CTCGACCTCC 540AAGACCCTCA ACAACACAGT TGGTTGGATC TTGCACTCGA TGCTCTTGGT CCCCTACCAC 600TCCTGGAGAA TCTCGCACTC GAAGCACCAC AAGGCCACTG GCCATATGAC CAAGGACCAG 660GTCTTTGTGC CCAAGACCCG CTCCCAGGTT GGCTTGCCTC CCAAGGAGAA CGCTGCTGCT 720GCCGTTCAGG AGGAGGACAT GTCCGTGCAC CTGGATGAGG AGGCTCCCAT TGTGACTTTG 780TTCTGGATGG TGATCCAGTT CTTGTTCGGA TGGCCCGCGT ACCTGATTAT GAACGCCTCT 840GGCCAAGACT ACGGCCGCTG GACCTCGCAC TTCCACACGT ACTCGCCCAT CTTTGAGCCC 900CGCAACTTTT TCGACATTAT TATCTCGGAC CTCGGTGTGT TGGCTGCCCT CGGTGCCCTG 960ATCTATGCCT CCATGCAGTT GTCGCTCTTG ACCGTCACCA AGTACTATAT TGTCCCCTAC 1020CTCTTTGTCA ACTTTTGGTT GGTCCTGATC ACCTTCTTGC AGCACACCGA TCCCAAGCTG 1080CCCCATTACC GCGAGGGTGC CTGGAATTTC CAGCGTGGAG CTCTTTGCAC CGTTGACCGC 1140TCGTTTGGCA AGTTCTTGGA CCATATGTTC CACGGCATTG TCCACACCCA TGTGGCCCAT 1200CACTTGTTCT CGCAAATGCC GTTCTACCAT GCTGAGGAAG CTACCTATCA TCTCAAGAAA 1260CTGCTGGGAG AGTACTATGT GTACGACCCA TCCCCGATCG TCGTTGCGGT CTGGAGGTCG 1320TTCCGTGAGT GCCGATTCGT GGAGGATCAG GGAGACGTGG TCTTTTTCAA GAAGTAAAAA 1380AAAAGACAAT GGACCACACA CAACCTTGTC TCTACAGACC TACGTATCAT GTAGCCATAC 1440CACTTCATAA AAGAACATGA GCTCTAGAGG CGTGTCATTC GCGCCTCC 1488(2)SEQ ID NO:4的信息:
(i)序列特征:
(A)长度:399氨基酸
(B)类型:氨基酸
(C)线型:不相关
(D)拓扑构型:线形
(ii)分子类型:肽
(xi)序列描述:SEQ ID NO:4:Met Ala Pro Pro Asn Thr Ile Asp Ala Gly Leu Thr Gln Arg His Ile1 5 10 15Ser Thr Ser Ala Pro Asn Ser Ala Lys Pro Ala Phe Glu Arg Asn Tyr
20 25 30Gln Leu Pro Glu Phe Thr Ile Lys Glu Ile Arg Glu Cys Ile Pro Ala
35 40 45His Cys Phe Glu Arg Ser Gly Leu Arg Gly Leu Cys His Val Ala Ile
50 55 60Asp Leu Thr Trp Ala Ser Leu Leu Phe Leu Ala Ala Thr Gln Ile Asp65 70 75 80Lys Phe Glu Asn Pro Leu Ile Arg Tyr Leu Ala Trp Pro Val Tyr Trp
85 90 95Ile Met Gln Gly Ile Val Cys Thr Gly Val Trp Val Leu Ala His Glu
100 105 110Cys Gly His Gln Ser Phe Ser Thr Ser Lys Thr Leu Asn Asn Thr Val
115 120 125Gly Trp Ile Leu His Ser Met Leu Leu Val Pro Tyr His Ser Trp Arg
130 135 140Ile Ser His Ser Lys His His Lys Ala Thr Gly His Met Thr Lys Asp145 150 155 160Gln Val Phe Val Pro Lys Thr Arg Ser Gln Val Gly Leu Pro Pro Lys
165 170 175Glu Asn Ala Ala Ala Ala Val Gln Glu Glu Asp Met Ser Val His Leu
180 185 190Asp Glu Glu Ala Pro Ile Val Thr Leu Phe Trp Met Val Ile Gln Phe
195 200 205Leu Phe Gly Trp Pro Ala Tyr Leu Ile Met Asn Ala Ser Gly Gln Asp
210 215 220Tyr Gly Arg Trp Thr Ser His Phe His Thr Tyr Ser Pro Ile Phe Glu225 230 235 240Pro Arg Asn Phe Phe Asp Ile Ile Ile Ser Asp Leu Gly Val Leu Ala
245 250 255Ala Leu Gly Ala Leu Ile Tyr Ala Ser Met Gln Leu Ser Leu Leu Thr
260 265 270Val Thr Lys Tyr Tyr Ile Val Pro Tyr Leu Phe Val Asn Phe Trp Leu
275 280 285Val Leu Ile Thr Phe Leu Gln His Thr Asp Pro Lys Leu Pro His Tyr
290 295 300Arg Glu Gly Ala Trp Asn Phe Gln Arg Gly Ala Leu Cys Thr Val Asp305 310 315 320Arg Ser Phe Gly Lys Phe Leu Asp His Met Phe His Gly Ile Val His
325 330 335Thr His Val Ala His His Leu Phe Ser Gln Met Pro Phe Tyr His Ala
340 345 350Glu Glu Ala Thr Tyr His Leu Lys Lys Leu Leu Gly Glu Tyr Tyr Val
355 360 365Tyr Asp Pro Ser Pro Ile Val Val Ala Val Trp Arg Ser Phe Arg Glu
370 375 380Cys Arg Phe Val Glu Asp Gln Gly Asp Val Val Phe Phe Lys Lys385 390 395(2)SEQ ID NO:5的信息:
(i)序列特征:
(A)长度:1483碱基对
(B)类型:核酸
(C)线型:单链
(D)拓扑学:线形
(ii)分子类型:DNA(基因组)
(xi)序列描述:SEQ ID NO:5:GCTTCCTCCA GTTCATCCTC CATTTCGCCA CCTGCATTCT TTACGACCGT TAAGCAAGAT 60GGGAACGGAC CAAGGAAAAA CCTTCACCTG GGAAGAGCTG GCGGCCCATA ACACCAAGGA 120CGACCTACTC TTGGCCATCC GCGGCAGGGT GTACGATGTC ACAAAGTTCT TGAGCCGCCA 180TCCTGGTGGA GTGGACACTC TCCTGCTCGG AGCTGGCCGA GATGTTACTC CGGTCTTTGA 240GATGTATCAC GCGTTTGGGG CTGCAGATGC CATTATGAAG AAGTACTATG TCGGTACACT 300GGTCTCGAAT GAGCTGCCCA TCTTCCCGGA GCCAACGGTG TTCCACAAAA CCATCAAGAC 360GAGAGTCGAG GGCTACTTTA CGGATCGGAA CATTGATCCC AAGAATAGAC CAGAGATCTG 420GGGACGATAC GCTCTTATCT TTGGATCCTT GATCGCTTCC TACTACGCGC AGCTCTTTGT 480GCCTTTCGTT GTCGAACGCA CATGGCTTCA GGTGGTGTTT GCAATCATCA TGGGATTTGC 540GTGCGCACAA GTCGGACTCA ACCCTCTTCA TGATGCGTCT CACTTTTCAG TGACCCACAA 600CCCCACTGTC TGGAAGATTC TGGGAGCCAC GCACGACTTT TTCAACGGAG CATCGTACCT 660GGTGTGGATG TACCAACATA TGCTCGGCCA TCACCCCTAC ACCAACATTG CTGGAGCAGA 720TCCCGACGTG TCGACGTCTG AGCCCGATGT TCGTCGTATC AAGCCCAACC AAAAGTGGTT 780TGTCAACCAC ATCAACCAGC ACATGTTTGT TCCTTTCCTG TACGGACTGC TGGCGTTCAA 840GGTGCGCATT CAGGACATCA ACATTTTGTA CTTTGTCAAG ACCAATGACG CTATTCGTGT 900CAATCCCATC TCGACATGGC ACACTGTGAT GTTCTGGGGC GGCAAGGCTT TCTTTGTCTG 960GTATCGCCTG ATTGTTCCCC TGCAGTATCT GCCCCTGGGC AAGGTGCTGC TCTTGTTCAC 1020GGTCGCGGAC ATGGTGTCGT CTTACTGGCT GGCGCTGACC TTCCAGGCGA ACCACGTTGT 1080TGAGGAAGTT CAGTGGCCGT TGCCTGACGA GAACGGGATC ATCCAAAAGG ACTGGGCAGC 1140TATGCAGGTC GAGACTACGC AGGATTACGC ACACGATTCG CACCTCTGGA CCAGCATCAC 1200TGGCAGCTTG AACTACCAGG CTGTGCACCA TCTGTTCCCC AACGTGTCGC AGCACCATTA 1260TCCCGATATT CTGGCCATCA TCAAGAACAC CTGCAGCGAG TACAAGGTTC CATACCTTGT 1320CAAGGATACG TTTTGGCAAG CATTTGCTTC ACATTTGGAG CACTTGCGTG TTCTTGGACT 1380CCGTCCCAAG GAAGAGTAGA AGAAAAAAAG CGCCGAATGA AGTATTGCCC CCTTTTTCTC 1440CAAGAATGGC AAAAGGAGAT CAAGTGGACA TTCTCTATGA AGA 1483(2)SEQ ID NO:6的信息:
(i)序列特征:
(A)长度:446氨基酸
(B)类型:氨基酸
(C)线型:不相关
(D)拓扑构型:线形
(ii)分子类型:肽
(xi)序列描述:SEQ ID NO:6:Met Gly Thr Asp Gln Gly Lys Thr Phe Thr Trp Glu Glu Leu Ala Ala1 5 10 15His Asn Thr Lys Asp Asp Leu Leu Leu Ala Ile Arg Gly Arg Val Tyr
20 25 30Asp Val Thr Lys Phe Leu Ser Arg His Pro Gly Gly Val Asp Thr Leu
35 40 45Leu Leu Gly Ala Gly Arg Asp Val Thr Pro Val Phe Glu Met Tyr His
50 55 60Ala Phe Gly Ala Ala Asp Ala Ile Met Lys Lys Tyr Tyr Val Gly Thr65 70 75 80Leu Val Ser Asn Glu Leu Pro Ile Phe Pro Glu Pro Thr Val Phe His
85 90 95Lys Thr Ile Lys Thr Arg Val Glu Gly Tyr Phe Thr Asp Arg Asn Ile
100 105 110Asp Pro Lys Asn Arg Pro Glu Ile Trp Gly Arg Tyr Ala Leu Ile Phe
115 120 125Gly Ser Leu Ile Ala Ser Tyr Tyr Ala Gln Leu Phe Val Pro Phe Val
130 135 140Val Glu Arg Thr Trp Leu Gln Val Val Phe Ala Ile Ile Met Gly Phe145 150 155 160Ala Cys Ala Gln Val Gly Leu Asn Pro Leu His Asp Ala Ser His Phe
165 170 175Ser Val Thr His Asn Pro Thr Val Trp Lys Ile Leu Gly Ala Thr His
180 185 190Asp Phe Phe Asn Gly Ala Ser Tyr Leu Val Trp Met Tyr Gln His Met
195 200 205Leu Gly His His Pro Tyr Thr Asn Ile Ala Gly Ala Asp Pro Asp Val
210 215 220Ser Thr Ser Glu Pro Asp Val Arg Arg Ile Lys Pro Asn Gln Lys Trp225 230 235 240Phe Val Asn His Ile Asn Gln His Met Phe Val Pro Phe Leu Tyr Gly
245 250 255Leu Leu Ala Phe Lys Val Arg Ile Gln Asp Ile Asn Ile Leu Tyr Phe
260 265 270Val Lys Thr Asn Asp Ala Ile Arg Val Asn Pro Ile Ser Thr Trp His
275 280 285Thr Val Met Phe Trp Gly Gly Lys Ala Phe Phe Val Trp Tyr Arg Leu
290 295 300Ile Val Pro Leu Gln Tyr Leu Pro Leu Gly Lys Val Leu Leu Leu Phe305 310 315 320Thr Val Ala Asp Met Val Ser Ser Tyr Trp Leu Ala Leu Thr Phe Gln
325 330 335Ala Asn His Val Val Glu Glu Val Gln Trp Pro Leu Pro Asp Glu Asn
340 345 350Gly Ile Ile Gln Lys Asp Trp Ala Ala Met Gln Val Glu Thr Thr Gln
355 360 365Asp Tyr Ala His Asp Ser His Leu Trp Thr Ser Ile Thr Gly Ser Leu
370 375 380Asn Tyr Gln Ala Val His His Leu Phe Pro Asn Val Ser Gln His His385 390 395 400Tyr Pro Asp Ile Leu Ala Ile Ile Lys Asn Thr Cys Ser Glu Tyr Lys
405 410 415Val Pro Tyr Leu Val Lys Asp Thr Phe Trp Gln Ala Phe Ala Ser His
420 425 430Leu Glu His Leu Arg Val Leu Gly Leu Arg Pro Lys Glu Glu
435 440 445(2)SEQ ID NO:7的信息:
(i)序列特征:
(A)长度:355氨基酸
(B)类型:氨基酸
(C)线型:不相关
(D)拓扑构型:线形
(ii)分子类型:肽
(xi)序列描述:SEQ ID NO:7:Glu Val Arg Lys Leu Arg Thr Leu Phe Gln Ser Leu Gly Tyr Tyr Asp1 5 10 15Ser Ser Lys Ala Tyr Tyr Ala Phe Lys Val Ser Phe Asn Leu Cys Ile
20 25 30Trp Gly Leu Ser Thr Val Ile Val Ala Lys Trp Gly Gln Thr Ser Thr
35 40 45Leu Ala Asn Val Leu Ser Ala Ala Leu Leu Gly Leu Phe Trp Gln Gln
50 55 60Cys Gly Trp Leu Ala His Asp Phe Leu His His Gln Val Phe Gln Asp65 70 75 80Arg Phe Trp Gly Asp Leu Phe Gly Ala Phe Leu Gly Gly Val Cys Gln
85 90 95Gly Phe Ser Ser Ser Trp Trp Lys Asp Lys His Asn Thr His His Ala
100 105 110Ala Pro Asn Val His Gly Glu Asp Pro Asp Ile Asp Thr His Pro Leu
115 120 125Leu Thr Trp Ser Glu His Ala Leu Glu Met Phe Ser Asp Val Pro Asp
130 135 140Glu Glu Leu Thr Arg Met Trp Ser Arg Phe Met Val Leu Asn Gln Thr145 150 155 160Trp Phe Tyr Phe Pro Ile Leu Ser Phe Ala Arg Leu Ser Trp Cys Leu
165 170 175Gln Ser Ile Leu Phe Val Leu Pro Asn Gly Gln Ala His Lys Pro Ser
180 185 190Gly Ala Arg Val Pro Ile Ser Leu Val Glu Gln Leu Ser Leu Ala Met
195 200 205His Trp Thr Trp Tyr Leu Ala Thr Met Phe Leu Phe Ile Lys Asp Pro
210 215 220Val Asn Met Leu Val Tyr Phe Leu Val Ser Gln Ala Val Cys Gly Asn225 230 235 240Leu Leu Ala Ile Val Phe Ser Leu Asn His Asn Gly Met Pro Val Ile
245 250 255Ser Lys Glu Glu Ala Val Asp Met Asp Phe Phe Thr Lys Gln Ile Ile
260 265 270Thr Gly Arg Asp Val His Pro Gly Leu Phe Ala Asn Trp Phe Thr Gly
275 280 285Gly Leu Asn Tyr Gln Ile Glu His His Leu Phe Pro Ser Met Pro Arg
290 295 300His Asn Phe Ser Lys Ile Gln Pro Ala Val Glu Thr Leu Cys Lys Lys305 310 315 320Tyr Asn Val Arg Tyr His Thr Thr Gly Met Ile Glu Gly Thr Ala Glu
325 330 335Val Phe Ser Arg Leu Asn Glu Val Ser Lys Ala Ala Ser Lys Met Gly
340 345 350Lys Ala Gln
355(2)SEQ ID NO:8的信息:
(i)序列特征:
(A)长度:104氨基酸
(B)类型:氨基酸
(C)线型:不相关
(D)拓扑构型:线形
(ii)分子类型:肽
(xi)序列描述:SEQ ID NO:8:Val Thr Leu Tyr Thr Leu Ala Phe Val Ala Ala Asn Ser Leu Gly Val1 5 10 15Leu Tyr Gly Val Leu Ala Cys Pro Ser Val Xaa Pro His Gln Ile Ala
20 25 30Ala Gly Leu Leu Gly Leu Leu Trp Ile Gln Ser Ala Tyr Ile Gly Xaa
35 40 45Asp Ser Gly His Tyr Val Ile Met Ser Asn Lys Ser Asn Asn Xaa Phe
50 55 60Ala Gln Leu Leu Ser Gly Asn Cys Leu Thr Gly Ile Ile Ala Trp Trp65 70 75 80Lys Trp Thr His Asn Ala His His Leu Ala Cys Asn Ser Leu Asp Tyr
85 90 95Gly Pro Asn Leu Gln His Ile Pro
100(2)SEQ ID NO:9的信息:
(i)序列特征:
(A)长度:252氨基酸
(B)类型:氨基酸
(C)线型:不相关
(D)拓扑构型:线形
(ii)分子类型:肽
(xi)序列描述:SEQ ID NO:9:Gly Val Leu Tyr Gly Val Leu Ala Cys Thr Ser Val Phe Ala His Gln1 5 10 15Ile Ala Ala Ala Leu Leu Gly Leu Leu Trp Ile Gln Ser Ala Tyr Ile
20 25 30Gly His Asp Ser Gly His Tyr Val Ile Met Ser Asn Lys Ser Tyr Asn
35 40 45Arg Phe Ala Gln Leu Leu Ser Gly Asn Cys Leu Thr Gly Ile Ser Ile
50 55 60Ala Trp Trp Lys Trp Thr His Asn Ala His His Leu Ala Cys Asn Ser65 70 75 80Leu Asp Tyr Asp Pro Asp Leu Gln His Ile Pro Val Phe Ala Val Ser
85 90 95Thr Lys Phe Phe Ser Ser Leu Thr Ser Arg Phe Tyr Asp Arg Lys Leu
100 105 110Thr Phe Gly Pro Val Ala Arg Phe Leu Val Ser Tyr Gln His Phe Thr
115 120 125Tyr Tyr Pro Val Asn Cys Phe Gly Arg Ile Asn Leu Phe Ile Gln Thr
130 135 140Phe Leu Leu Leu Phe Ser Lys Arg Glu Val Pro Asp Arg Ala Leu Asn145 150 155 160Phe Ala Gly Ile Leu Val Phe Trp Thr Trp Phe Pro Leu Leu Val Ser
165 170 175Cys Leu Pro Asn Trp Pro Glu Arg Phe Phe Phe Val Phe Thr Ser Phe
180 185 190Thr Val Thr Ala Leu Gln His Ile Gln Phe Thr Leu Asn His Phe Ala
195 200 205Ala Asp Val Tyr Val Gly Pro Pro Thr Gly Ser Asp Trp Phe Glu Lys
210 215 220Gln Ala Ala Gly Thr Ile Asp Ile Ser Cys Arg Ser Tyr Met Asp Trp225 230 235 240Phe Phe Gly Gly Leu Gln Phe Gln Leu Glu His His
245 250(2)SEQ ID NO:10的信息:
(i)序列特征:
(A)长度:125氨基酸
(B)类型:氨基酸
(C)线型:不相关
(D)拓扑构型:线形
(ii)分子类型:肽
(xi)序列描述:SEQ ID NO:10:Gly Xaa Xaa Asn Phe Ala Gly Ile Leu Val Phe Trp Thr Trp Phe Pro1 5 10 15Leu Leu Val Ser Cys Leu Pro Asn Trp Pro Glu Arg Phe Xaa Phe Val
20 25 30Phe Thr Gly Phe Thr Val Thr Ala Leu Gln His Ile Gln Phe Thr Leu
35 40 45Asn His Phe Ala Ala Asp Val Tyr Val Gly Pro Pro Thr Gly Ser Asp
50 55 60Trp Phe Glu Lys Gln Ala Ala Gly Thr Ile Asp Ile Ser Cys Arg Ser65 70 75 80Tyr Met Asp Trp Phe Phe Cys Gly Leu Gln Phe Gln Leu Glu His His
85 90 95Leu Phe Pro Arg Leu Pro Arg Cys His Leu Arg Lys Val Ser Pro Val
100 105 110Gly Gln Arg Gly Phe Gln Arg Lys Xaa Asn Leu Ser Xaa
115 120 125(2)SEQ ID NO:11的信息:
(i)序列特征:
(A)长度:131氨基酸
(B)类型:氨基酸
(C)线型:不相关
(D)拓扑构型:线形
(ii)分子类型:肽
(xi)序列描述:SEQ ID NO:11:Pro Ala Thr Glu Val Gly Gly Leu Ala Trp Met Ile Thr Phe Tyr Val1 5 10 15Arg Phe Phe Leu Thr Tyr Val Pro Leu Leu Gly Leu Lys Ala Phe Leu
20 25 30Gly Leu Phe Phe Ile Val Arg Phe Leu Glu Ser Asn Trp Phe Val Trp
35 40 45Val Thr Gln Met Asn His Ile Pro Met His Ile Asp His Asp Arg Asn
50 55 60Met Asp Trp Val Ser Thr Gln Leu Gln Ala Thr Cys Asn Val His Lys65 70 75 80Ser Ala Phe Asn Asp Trp Phe Ser Gly His Leu Asn Phe Gln Ile Glu
85 90 95His His Leu Phe Pro Thr Met Pro Arg His Asn Tyr His Xaa Val Ala
100 105 110Pro Leu Val Gln Ser Leu Cys Ala Lys His Gly Ile Glu Tyr Gln Ser
115 120 125Lys Pro Leu
130(2)SEQ ID NO:12的信息:
(i)序列特征:
(A)长度:87氨基酸
(B)类型:氨基酸
(C)线型:不相关
(D)拓扑构型:线形
(ii)分子类型:肽
(xi)序列描述:SEQ ID NO:12:Cys Ser Pro Lys Ser Ser Pro Thr Arg Asn Met Thr Pro Ser Pro Phe1 5 10 15Ile Asp Trp Leu Trp Gly Gly Leu Asn Tyr Gln Ile Glu His His Leu
20 25 30Phe Pro Thr Met Pro Arg Cys Asn Leu Asn Arg Cys Met Lys Tyr Val
35 40 45Lys Glu Trp Cys Ala Glu Asn Asn Leu Pro Tyr Leu Val Asp Asp Tyr
50 55 60Phe Val Gly Tyr Asn Leu Asn Leu Gln Gln Leu Lys Asn Met Ala Glu65 70 75 80Leu Val Gln Ala Lys Ala Ala
85(2)SEQ ID NO:13的信息:
(i)序列特征:
(A)长度:143氨基酸
(B)类型:氨基酸
(C)线型:不相关
(D)拓扑构型:线形
(ii)分子类型:肽
(xi)序列描述:SEQ ID NO:13:Arg His Glu Ala Ala Arg Gly Gly Thr Arg Leu Ala Tyr Met Leu Val1 5 10 15Cys Met Gln Trp Thr Asp Leu Leu Trp Ala Ala Ser Phe Tyr Ser Arg
20 25 30Phe Phe Leu Ser Tyr Ser Pro Phe Tyr Gly Ala Thr Gly Thr Leu Leu
35 40 45Leu Phe Val Ala Val Arg Val Leu Glu Ser His Trp Phe Val Trp Ile
50 55 60Thr Gln Met Asn His Ile Pro Lys Glu Ile Gly His Glu Lys His Arg65 70 75 80Asp Trp Ala Ser Ser Gln Leu Ala Ala Thr Cys Asn Val Glu Pro Ser
85 90 95Leu Phe Ile Asp Trp Phe Ser Gly His Leu Asn Phe Gln Ile Glu His
100 105 110His Leu Phe Pro Thr Met Thr Arg His Asn Tyr Arg Xaa Val Ala Pro
115 120 125Leu Val Lys Ala Phe Cys Ala Lys His Gly Leu His Tyr Glu Val
130 135 140(2)SEQ ID NO:14的信息:
(i)序列特征:
(A)长度:186氨基酸
(B)类型:氨基酸
(C)线型:不相关
(D)拓扑构型:线形
(ii)分子类型:肽
(xi)序列描述:SEQ ID NO:14:Leu His His Thr Tyr Thr Asn Ile Ala Gly Ala Asp Pro Asp Val Ser1 5 10 15Thr Ser Glu Pro Asp Val Arg Arg Ile Lys Pro Asn Gln Lys Trp Phe
20 25 30Val Asn His Ile Asn Gln His Met Phe Val Pro Phe Leu Tyr Gly Leu
35 40 45Leu Ala Phe Lys Val Arg Ile Gln Asp Ile Asn Ile Leu Tyr Phe Val
50 55 60Lys Thr Asn Asp Ala Ile Arg Val Asn Pro Ile Ser Thr Trp His Thr65 70 75 80Val MetPhe Trp Gly Gly Lys Ala Phe Phe Val Trp Tyr Arg Leu Ile
85 90 95Val Pro Leu Gln Tyr Leu Pro Leu Gly Lys Val Leu Leu Leu Phe Thr
100 105 110Val Ala Asp Met Val Ser Ser Tyr Trp Leu Ala Leu Thr Phe Gln Ala
115 120 125Asn Tyr Val Val Glu Glu Val Gln Trp Pro Leu Pro Asp Glu Asn Gly
130 135 140Ile Ile Gln Lys Asp Trp Ala Ala Met Gln Val Glu Thr Thr Gln Asp145 150 155 160Tyr Ala His Asp Ser His Leu Trp Thr Ser Ile Thr Gly Ser Leu Asn
165 170 175Tyr Gln Xaa Val His His Leu Phe Pro His
180 185(2)SEQ ID NO:15的信息:
(i)序列特征:
(A)长度:5氨基酸
(B)类型:氨基酸
(C)线型:不相关
(D)拓扑构型:线形
(ii)分子类型:肽
(xi)序列描述:SEQ ID NO:15:His Xaa Xaa His His1 5(2)SEQ ID NO:16的信息:
(i)序列特征:
(A)长度:446氨基酸
(B)类型:氨基酸
(C)线型:不相关
(D)拓扑构型:线形
(ii)分子类型:肽
(xi)序列描述:SEQ ID NO:16:Met Ala Ala Gln Ile Lys Lys Tyr Ile Thr Ser Asp Glu Leu Lys Asn1 5 10 15His Asp Lys Pro Gly Asp Leu Trp Ile Ser Ile Gln Gly Lys Ala Tyr
20 25 30Asp Val Ser Asp Trp Val Lys Asp His Pro Gly Gly Ser Phe Pro Leu
35 40 45Lys Ser Leu Ala Gly Gln Glu Val Thr Asp Ala Phe Val Ala Phe His
50 55 60Pro Ala Ser Thr Trp Lys Asn Leu Asp Lys Phe Phe Thr Gly Tyr Tyr65 70 75 80Leu Lys Asp Tyr Ser Val Ser Glu Val Ser Lys Val Tyr Arg Lys Leu
85 90 95Val Phe Glu Phe Ser Lys Met Gly Leu Tyr Asp Lys Lys Gly His Ile
100 105 110Met Phe Ala Thr Leu Cys Phe Ile Ala Met Leu Phe Ala Met Ser Val
115 120 125Tyr Gly Val Leu Phe Cys Glu Gly Val Leu Val His Leu Phe Ser Gly
130 135 140Cys Leu Met Gly Phe Leu Trp Ile Gln Ser Gly Trp Ile Gly His Asp145 150 155 160Ala Gly His Tyr Met Val Val Ser Asp Ser Arg Leu Asn Lys Phe Met
165 170 175Gly Ile Phe Ala Ala Asn Cys Leu Ser Gly Ile Ser Ile Gly Trp Trp
180 185 190Lys Trp Asn His Asn Ala His His Ile Ala Cys Asn Ser Leu Glu Tyr
195 200 205Asp Pro Asp Leu Gln Tyr Ile Pro Phe Leu Val Val Ser Ser Lys Phe
210 215 220Phe Gly Ser Leu Thr Ser His Phe Tyr Glu Lys Arg Leu Thr Phe Asp225 230 235 240Ser Leu Ser Arg Phe Phe Val Ser Tyr Gln His Trp Thr Phe Tyr Pro
245 250 255Ile Met Cys Ala Ala Arg Leu Asn Met Tyr Val Gln Ser Leu Ile Met
260 265 270Leu Leu Thr Lys Arg Asn Val Ser Tyr Arg Ala Gln Glu Leu Leu Gly
275 280 285Cys Leu Val Phe Ser Ile Trp Tyr Pro Leu Leu Val Ser Cys Leu Pro
290 295 300Asn Trp Gly Glu Arg Ile Met Phe Val Ile Ala Ser Leu Ser Val Thr305 310 315 320Gly Met Gln Gln Val Gln Phe Ser Leu Asn His Phe Ser Ser Ser Val
325 330 335Tyr Val Gly Lys Pro Lys Gly Asn Asn Trp Phe Glu Lys Gln Thr Asp
340 345 350Gly Thr Leu Asp Ile Ser Cys Pro Pro Trp Met Asp Trp Phe His Gly
355 360 365Gly Leu Gln Phe Gln Ile Glu His His Leu Phe Pro Lys Met Pro Arg
370 375 380Cys Asn Leu Arg Lys Ile Ser Pro Tyr Val Ile Glu Leu Cys Lys Lys385 390 395 400His Asn Leu Pro Tyr Asn Tyr Ala Ser Phe Ser Lys Ala Asn Glu Met
405 410 415Thr Leu Arg Thr Leu Arg Asn Thr Ala Leu Gln Ala Arg Asp Ile Thr
420 425 430Lys Pro Leu Pro Lys Asn Leu Val Trp Glu Ala Leu His Thr
435 440 445(2)SEQ ID NO:17的信息:
(i)序列特征:
(A)长度:359氨基酸
(B)类型:氨基酸
(C)线型:不相关
(D)拓扑构型:线形
(ii)分子类型:肽
(xi)序列描述:SEQ ID NO:17:Met Leu Thr Ala Glu Arg Ile Lys Phe Thr Gln Lys Arg Gly Phe Arg1 5 10 15Arg Val Leu Asn Gln Arg Val Asp Ala Tyr Phe Ala Glu His Gly Leu
20 25 30Thr Gln Arg Asp Asn Pro Ser Met Tyr Leu Lys Thr Leu Ile Ile Val
35 40 45Leu Trp Leu Phe Ser Ala Trp Ala Phe Val Leu Phe Ala Pro Val Ile
50 55 60Phe Pro Val Arg Leu Leu Gly Cys Met Val Leu Ala Ile Ala Leu Ala65 70 75 80Ala Phe Ser Phe Asn Val Gly His Asp Ala Asn His Asn Ala Tyr Ser
85 90 95Ser Asn Pro His Ile Asn Arg Val Leu Gly Met Thr Tyr Asp Phe Val
100 105 110Gly Leu Ser Ser Phe Leu Trp Arg Tyr Arg His Asn Tyr Leu His His
115 120 125Thr Tyr Thr Asn Ile Leu Gly His Asp Val Glu Ile His Gly Asp Gly
130 135 140Ala Val Arg Met Ser Pro Glu Gln Glu His Val Gly Ile Tyr Arg Phe145 150 155 160Gln Gln Phe Tyr Ile Trp Gly Leu Tyr Leu Phe Ile Pro Phe Tyr Trp
165 170 175Phe Leu Tyr Asp Val Tyr Leu Val Leu Asn Lys Gly Lys Tyr His Asp
180 185 190His Lys Ile Pro Pro Phe Gln Pro Leu Glu Leu Ala Ser Leu Leu Gly
195 200 205Ile Lys Leu Leu Trp Leu Gly Tyr Val Phe Gly Leu Pro Leu Ala Leu
210 215 220Gly Phe Ser Ile Pro Glu Val Leu Ile Gly Ala Ser Val Thr Tyr Met225 230 235 240Thr Tyr Gly Ile Val Val Cys Thr Ile Phe Met Leu Ala His Val Leu
245 250 255Glu Ser Thr Glu Phe Leu Thr Pro Asp Gly Glu Ser Gly Ala Ile Asp
260 265 270Asp Glu Trp Ala Ile Cys Gln Ile Arg Thr Thr Ala Asn Phe Ala Thr
275 280 285Asn Asn Pro Phe Trp Asn Trp Phe Cys Gly Gly Leu Asn His Gln Val
290 295 300Thr His His Leu Phe Pro Asn Ile Cys His Ile His Tyr Pro Gln Leu305 310 315 320Glu Asn Ile Ile Lys Asp Val Cys Gln Glu Phe Gly Val Glu Tyr Lys
325 330 335Val Tyr Pro Thr Phe Lys Ala Ala Ile Ala Ser Asn Tyr Arg Trp Leu
340 345 350Glu Ala Met Gly Lys Ala Ser
355(2)SEQ ID NO:18的信息:
(i)序列特征:
(A)长度:365氨基酸
(B)类型:氨基酸
(C)线型:不相关
(D)拓扑构型:线形
(ii)分子类型:肽
(xi)序列描述:SEQ ID NO:18:Met Thr Ser Thr Thr Ser Lys Val Thr Phe Gly Lys Ser Ile Gly Phe1 5 10 15Arg Lys Glu Leu Asn Arg Arg Val Asn Ala Tyr Leu Glu Ala Glu Asn
20 25 30Ile Ser Pro Arg Asp Asn Pro Pro Met Tyr Leu Lys Thr Ala Ile Ile
35 40 45Leu Ala Trp Val Val Ser Ala Trp Thr Phe Val Val Phe Gly Pro Asp
50 55 60Val Leu Trp Met Lys Leu Leu Gly Cys Ile Val Leu Gly Phe Gly Val65 70 75 80Ser Ala Val Gly Phe Asn Ile Ser His Asp Gly Asn His Gly Gly Tyr
85 90 95Ser Lys Tyr Gln Trp Val Asn Tyr Leu Ser Gly Leu Thr His Asp Ala
100 105 110Ile Gly Val Ser Ser Tyr Leu Trp Lys Phe Arg His Asn Val Leu His
115 120 125His Thr Tyr Thr Asn Ile Leu Gly His Asp Val Glu Ile His Gly Asp
130 135 140Glu Leu Val Arg Met Ser Pro Ser Met Glu Tyr Arg Trp Tyr His Arg145 150 155 160Tyr Gln His Trp Phe Ile Trp Phe Val Tyr Pro Phe Ile Pro Tyr Tyr
165 170 175Trp Ser Ile Ala Asp Val Gln Thr Met Leu Phe Lys Arg Gln Tyr His
180 185 190Asp His Glu Ile Pro Ser Pro Thr Trp Val Asp Ile Ala Thr Leu Leu
195 200 205Ala Phe Lys Ala Phe Gly Val Ala Val Phe Leu Ile Ile Pro Ile Ala
210 215 220Val Gly Tyr Ser Pro Leu Glu Ala Val Ile Gly Ala Ser Ile Val Tyr225 230 235 240Met Thr His Gly Leu Val Ala Cys Val Val Phe Met Leu Ala His Val
245 250 255Ile Glu Pro Ala Glu Phe Leu Asp Pro Asp Asn Leu His Ile Asp Asp
260 265 270Glu Trp Ala Ile Ala Gln Val Lys Thr Thr Val Asp Phe Ala Pro Asn
275 280 285Asn Thr Ile Ile Asn Trp Tyr Val Gly Gly Leu Asn Tyr Gln Thr Val
290 295 300His His Leu Phe Pro His Ile Cys His Ile His Tyr Pro Lys Ile Ala305 310 315 320Pro Ile Leu Ala Glu Val Cys Glu Glu Phe Gly Val Asn Tyr Ala Val
325 330 335His Gln Thr Phe Phe Gly Ala Leu Ala Ala Asn Tyr Ser Trp Leu Lys
340 345 350Lys Met Ser Ile Asn Pro Glu Thr Lys Ala Ile Glu Gln
355 360 365(2)SEQ ID NO:19的信息:
(i)序列特征:
(A)长度:35碱基对
(B)类型:核酸
(C)线型:单链
(D)拓扑学:线形
(ii)分子类型:其他核酸
(xi)序列描述:SEQ ID NO:19:CCAAGCTTCT GCAGGAGCTC TTTTTTTTTT TTTTT 35(2)SEQ ID NO:20信息:
(i)序列特征:
(A)长度:32碱基对
(B)类型:核酸
(C)线型:单链
(D)拓扑学:线形
(ii)分子类型:其他核酸
(A)描述:/disc=“合成的寡核苷酸”
(ix)特征:
(A)名称/关键词:misc_feature
(B)位置:21
(D)其他信息:/数目=1/注释=“N=肌苷或胞苷”
(ix)特征:
(A)名称/关键词:misc_feature
(B)位置:27
(D)其他信息:/数目=2/注释=“N=肌苷或胞苷”
(xi)序列描述:SEQ ID NO:20:CUACUACUAC UACAYCAYAC NTAYACNAAY AT 32(2)SEQ ID NO:21信息:
(i)序列特征:
(A)长度:27碱基对
(B)类型:核酸
(C)线型:单链
(D)拓扑学:线形
(ii)分子类型:其他核酸
(A)描述:/disc=“合成的寡核苷酸”
(ix)特征:
(A)名称/关键词:misc_feature
(B)位置:13
(D)其他信息:/数目=1/注释=“N=肌苷或胞苷”
(ix)特征:
(A)名称/关键词:misc_feature
(B)位置:19
(D)其他信息:/数目=2/注释=“N=肌苷或胞苷”
(xi)序列描述:SEQ ID NO:21:CAUCAUCAUC AUNGGRAANA RRTGRTG 27(2)SEQ ID NO:22的信息:
(i)序列特征:
(A)长度:33碱基对
(B)类型:核酸
(C)线型:单链
(D)拓扑学:线形
(ii)分子类型:其他核酸
(xi)序列描述:SEQ ID NO:22:CUACUACUAC UAGGAGTCCT CTACGGTGTT TTG 33(2)SEQ ID NO:23的信息:
(i)序列特征:
(A)长度:33碱基对
(B)类型:核酸
(C)线型:单链
(D)拓扑学:线形
(ii)分子类型:其他核酸
(xi)序列描述:SEQ ID NO:23:CAUCAUCAUC AUATGATGCT CAAGCTGAAA CTG 33(2)SEQ ID NO:24的信息:
(i)序列特征:
(A)长度:5氨基酸
(B)类型:氨基酸
(C)线型:不相关
(D)拓扑构型:线形
(ii)分子类型:肽
(xi)序列描述:SEQ ID NO:24:Gln Xaa Xaa His His1 5(2)SEQ ID NO:25的信息:
(i)序列特征:
(A)长度:39碱基对
(B)类型:核酸
(C)线型:单链
(D)拓扑学:线形
(ii)分子类型:其他核酸
(xi)序列描述:SEQ ID NO:25:CUACUACUAC UACTCGAGCA AGATGGGAAC GGACCAAGG 39(2)SEQ ID NO:26的信息:
(i)序列特征:
(A)长度:39碱基对
(B)类型:核酸
(C)线型:单链
(D)拓扑学:线形
(ii)分子类型:其他核酸
(xi)序列描述:SEQ ID NO:26:CAUCAUCAUC AUCTCGAGCT ACTCTTCCTT GGGACGGAG 39(2)SEQ ID NO:27的信息:
(i)序列特征:
(A)长度:47碱基对
(B)类型:核酸
(C)线型:单链
(D)拓扑学:线形
(ii)分子类型:其他核酸
(xi)序列描述:SEQ ID NO:27:CUACUACUAC UATCTAGACT CGAGACCATG GCTGCTGCTC CAGTGTG 47(2)SEQ ID NO:28的信息:
(i)序列特征:
(A)长度:40碱基对
(B)类型:核酸
(C)线型:单链
(D)拓扑学:线形
(ii)分子类型:其他核酸
(xi)序列描述:SEQ ID NO:28:CAUCAUCAUC AUAGGCCTCG AGTTACTGCG CCTTACCCAT 40(2)SEQ ID NO:29的信息:
(i)序列特征:
(A)长度:37碱基对
(B)类型:核酸
(C)线型:单链
(D)拓扑学:线形
(ii)分子类型:其他核酸
(xi)序列描述:SEQ ID NO:29:CUACUACUA CUAGGATCCA TGGCACCTCC CAACACT 37(2)SEQ ID NO:30的信息:
(i)序列特征:
(A)长度:42碱基对
(B)类型:核酸
(C)线型:单链
(D)拓扑学:线形
(ii)分子类型:其他核酸
(xi)序列描述:SEQ ID NO:30:CAUCAUCAU CAUGGTACCT CGAGTTACTT CTTGAAAAAG AC 42(2)SEQ ID NO:31的信息:
(i)序列特征:
(A)长度:1219碱基对
(B)类型:核酸
(C)线型:单链
(D)拓扑学:线形
(ii)分子类型:其他核酸(编辑的重叠群2692004)
(xi)序列描述:SEQ ID NO:31:GCACGCCGAC CGGCGCCGGG AGATCCTGGC AAAGTATCCA GAGATAAAGT CCTTGATGAA 60ACCTGATCCC AATTTGATAT GGATTATAAT TATGATGGTT CTCACCCAGT TGGGTGCATT 120TTACATAGTA AAAGACTTGG ACTGGAAATG GGTCATATTT GGGGCCTATG CGTTTGGCAG 180TTGCATTAAC CACTCAATGA CTCTGGCTAT TCATGAGATT GCCCACAATG CTGCCTTTGG 240CAACTGCAAA GCAATGTGGA ATCGCTGGTT TGGAATGTTT GCTAATCTTC CTATTGGGAT 300TCCATATTCA ATTTCCTTTA AGAGGTATCA CATGGATCAT CATCGGTACC TTGGAGCTGA 360TGGCGTCGAT GTAGATATTC CTACCGATTT TGAGGGCTGG TTCTTCTGTA CCGCTTTCAG 420AAAGTTTATA TGGGTTATTC TTCAGCCTCT CTTTTATGCC TTTCGACCTC TGTTCATCAA 480CCCCAAACCA ATTACGTATC TGGAAGTTAT CAATACCGTG GCACAGGTCA CTTTTGACAT 540TTTAATTTAT TACTTTTTGG GAATTAAATC CTTAGTCTAC ATGTTGGCAG CATCTTTACT 600TGGCCTGGGT TTGCACCCAA TTTCTGGACA TTTTATAGCT GAGCATTACA TGTTCTTAAA 660GGGTCATGAA ACTTACTCAT ATTATGGGCC TCTGAATTTA CTTACCTTCA ATGTGGGTTA 720TCATAATGAA CATCATGATT TCCCCAACAT TCCTGGAAAA AGTCTTCCAC TGGTGAGGAA 780AATAGCAGCT GAATACTATG ACAACCTCCC TCACTACAAT TCCTGGATAA AAGTACTGTA 840TGATTTTGTG ATGGATGATA CAATAAGTCC CTACTCAAGA ATGAAGAGGC ACCAAAAAGG 900AGAGATGGTG CTGGAGTAAA TATCATTAGT GCCAAAGGGA TTCTTCTCCA AAACTTTAGA 960TGATAAAATG GAATTTTTGC ATTATTAAAC TTGAGACCAG TGATGCTCAG AAGCTCCCCT 1020GGCACAATTT CAGAGTAAGA GCTCGGTGAT ACCAAGAAGT GAATCTGGCT TTTAAACAGT 1080CAGCCTGACT CTGTACTGCT CAGTTTCACT CACAGGAAAC TTGTGACTTG TGTATTATCG 1140TCATTGAGGA TGTTTCACTC ATGTCTGTCA TTTTATAAGC ATATCATTTA AAAAGCTTCT 1200AAAAAGCTAT TTCGCCAGG 1219(2)SEQ ID NO:32的信息:
(i)序列特征:
(A)长度:655碱基对
(B)类型:核酸
(C)线型:单链
(D)拓扑学:线形
(ii)分子类型:其他核酸(编辑的重叠群2153526)
(xi)序列描述:SEQ ID NO:32:TTACCTTCTA CGTCCGCTTC TTCCTCACTT ATGTGCCACT ATTGGGGCTG AAAGCTTCCT 60GGGCCTTTTC TTCATAGTCA GGTTCCTGGA AAGCAACTGG TTTGTGTGGG TGACACAGAT 120GAACCATATT CCCATGCACA TTGATCATGA CCGGAACATG GACTGGGTTT CCACCCAGCT 180CCAGGCCACA TGCAATGTCC ACAAGTCTGC CTTCAATGAC TGGTTCAGTG GACACCTCAA 240CTTCCAGATT GAGCACCATC TTTTTCCCAC GATGCCTCGA CACAATTACC ACAAAGTGGC 300TCCCCTGGTG CAGTCCTTGT GTGCCAAGCA TGGCATAGAG TACCAGTCCA AGCCCCTGCT 360GTCAGCCTTC GCCGACATCA TCCACTCACT AAAGGAGTCA GGGCAGCTCT GGCTAGATGC 420CTATCTTCAC CAATAACAAC AGCCACCCTG CCCAGTCTGG AAGAAGAGGA GGAAGACTCT 480GGAGCCAAGG CAGAGGGGAG CTTGAGGGAC AATGCCACTA TAGTTTAATA CTCAGAGGGG 540GTTGGGTTTG GGGACATAAA GCCTCTGACT CAAACTCCTC CCTTTTATCT TCTAGCCACA 600GTTCTAAGAC CCAAAGTGGG GGGTGGACAC AGAAGTCCCT AGGAGGGAAG GAGCT 655(2)SEQ ID NO:33的信息:
(i)序列特征:
(A)长度:304碱基对
(B)类型:核酸
(C)线型:单链
(D)拓扑学:线形
(ii)分子类型:其他核酸(编辑的重叠群3506132)
(xi)序列描述:SEQ ID NO:33:GTCTTTTACT TTGGCAATGG CTGGATTCCT ACCCTCATCA CGGCCTTTGT CCTTGCTACC 60TCTCAGGCCC AAGCTGGATG GCTGCAACAT GATTATGGCC ACCTGTCTGT CTACAGAAAA 120CCCAAGTGGA ACCACCTTGT CCACAAATTC GTCATTGGCC ACTTAAAGGG TGCCTCTGCC 180AACTGGTGGA ATCATCGCCA CTTCCAGCAC CACGCCAAGC CTAACATCTT CCACAAGGAT 240CCCGATGTGA ACATGCTGCA CGTGTTTGTT CTGGGCGAAT GGCAGCCCAT CGAGTACGGC 300AAGA 304(2)SEQ ID NO:34的信息:
(i)序列特征:
(A)长度:918碱基对
(B)类型:核酸
(C)线型:单链
(D)拓扑学:线形
(ii)分子类型:其他核酸(编辑的重叠群3854933)
(xi)序列描述:SEQ ID NO:34:CAGGGACCTA CCCCGCGCTA CTTCACCTGG GACGAGGTGG CCCAGCGCTC AGGGTGCGAG 60GAGCGGTGGC TAGTGATCGA CCGTAAGGTG TACAACATCA GCGAGTTCAC CCGCCGGCAT 120CCAGGGGGCT CCCGGGTCAT CAGCCACTAC GCCGGGCAGG ATGCCACGGA TCCCTTTGTG 180GCCTTCCACA TCAACAAGGG CCTTGTGAAG AAGTATATGA ACTCTCTCCT GATTGGAGAA 240CTGTCTCCAG AGCAGCCCAG CTTTGAGCCC ACCAAGAATA AAGAGCTGAC AGATGAGTTC 300CGGGAGCTGC GGGCCACAGT GGAGCGGATG GGGCTCATGA AGGCCAACCA TGTCTTCTTC 360CTGCTGTACC TGCTGCACAT CTTGCTGCTG GATGGTGCAG CCTGGCTCAC CCTTTGGGTC 420TTTGGGACGT CCTTTTTGCC CTTCCTCCTC TGTGCGGTGC TGCTCAGTGC AGTTCAGGCC 480CAGGCTGGCT GGCTGCAGCA TGACTTTGGG CACCTGTCGG TCTTCAGCAC CTCAAAGTGG 540AACCATCTGC TACATCATTT TGTGATTGGC CACCTGAAGG GGGCCCCCGC CAGTTGGTGG 600AACCACATGC ACTTCCAGCA CCATGCCAAG CCCAACTGCT TCCGCAAAGA CCCAGACATC 660AACATGCATC CCTTCTTCTT TGCCTTGGGG AAGATCCTCT CTGTGGAGCT TGGGAAACAG 720AAGAAAAAAT ATATGCCGTA CAACCACCAG CACARATACT TCTTCCTAAT TGGGCCCCCA 780GCCTTGCTGC CTCTCTACTT CCAGTGGTAT ATTTTCTATT TTGTTATCCA GCGAAAGAAG 840TGGGTGGACT TGGCCTGGAT CAGCAAACAG GAATACGATG AAGCCGGGCT TCCATTGTCC 900ACCGCAAATG CTTCTAAA 918(2)SEQ ID NO:35的信息:
(i)序列特征:
(A)长度:1686碱基对
(B)类型:核酸
(C)线型:单链
(D)拓扑学:线形
(ii)分子类型:其他核酸(编辑的重叠群2511785)
(xi)序列描述:SEQ ID NO:35:GCCACTTAAA GGGTGCCTCT GCCAACTGGT GGAATCATCG CCACTTCCAG CACCACGCCA 60AGCCTAACAT CTTCCACAAG GATCCCGATG TGAACATGCT GCACGTGTTT GTTCTGGGCG 120AATGGCAGCC CATCGAGTAC GGCAAGAAGA AGCTGAAATA CCTGCCCTAC AATCACCAGC 180ACGAATACTT CTTCCTGATT GGGCCGCCGC TGCTCATCCC CATGTATTTC CAGTACCAGA 240TCATCATGAC CATGATCGTC CATAAGAACT GGGTGGACCT GGCCTGGGCC GTCAGCTACT 300ACATCCGGTT CTTCATCACC TACATCCCTT TCTACGGCAT CCTGGGAGCC CTCCTTTTCC 360TCAACTTCAT CAGGTTCCTG GAGAGCCACT GGTTTGTGTG GGTCACACAG ATGAATCACA 420TCGTCATGGA GATTGACCAG GAGGCCTACC GTGACTGGTT CAGTAGCCAG CTGACAGCCA 480CCTGCAACGT GGAGCAGTCC TTCTTCAACG ACTGGTTCAG TGGACACCTT AACTTCCAGA 540TTGAGCACCA CCTCTTCCCC ACCATGCCCC GGCACAACTT ACACAAGATC GCCCCGCTGG 600TGAAGTCTCT ATGTGCCAAG CATGGCATTG AATACCAGGA GAAGCCGCTA CTGAGGGCCC 660TGCTGGACAT CATCAGGTCC CTGAAGAAGT CTGGGAAGCT GTGGCTGGAC GCCTACCTTC 720ACAAATGAAG CCACAGCCCC CGGGACACCG TGGGGAAGGG GTGCAGGTGG GGTGATGGCC 780AGAGGAATGA TGGGCTTTTG TTCTGAGGGG TGTCCGAGAG GCTGGTGTAT GCACTGCTCA 840CGGACCCCAT GTTGGATCTT TCTCCCTTTC TCCTCTCCTT TTTCTCTTCA CATCTCCCCC 900ATAGCACCCT GCCCTCATGG GACCTGCCCT CCCTCAGCCG TCAGCCATCA GCCATGGCCC 960TCCCAGTGCC TCCTAGCCCC TTCTTCCAAG GAGCAGAGAG GTGGCCACCG GGGGTGGCTC 1020TGTCCTACCT CCACTCTCTG CCCCTAAAGA TGGGAGGAGA CCAGCGGTCC ATGGGTCTGG 1080CCTGTGAGTC TCCCCTTGCA GCCTGGTCAC TAGGCATCAC CCCCGCTTTG GTTCTTCAGA 1140TGCTCTTGGG GTTCATAGGG GCAGGTCCTA GTCGGGCAGG GCCCCTGACC CTCCCGGCCT 1200GGCTTCACTC TCCCTGACGG CTGCCATTGG TCCACCCTTT CATAGAGAGG CCTGCTTTGT 1260TACAAAGCTC GGGTCTCCCT CCTGCAGCTC GGTTAAGTAC CCGAGGCCTC TCTTAAGATG 1320TCCAGGGCCC CAGGCCCGCG GGCACAGCCA GCCCAAACCT TGGGCCCTGG AAGAGTCCTC 1380CACCCCATCA CTAGAGTGCT CTGACCCTGG GCTTTCACGG GCCCCATTCC ACCGCCTCCC 1440CAACTTGAGC CTGTGACCTT GGGACCAAAG GGGGAGTCCC TCGTCTCTTG TGACTCAGCA 1500GAGGCAGTGG CCACGTTCAG GGAGGGGCCG GCTGGCCTGG AGGCTCAGCC CACCCTCCAG 1560CTTTTCCTCA GGGTGTCCTG AGGTCCAAGA TTCTGGAGCA ATCTGACCCT TCTCCAAAGG 1620CTCTGTTATC AGCTGGGCAG TGCCAGCCAA TCCCTGGCCA TTTGGCCCCA GGGGACGTGG 1680GCCCTG 1686(2)SEQ ID NO:36的信息:
(i)序列特征:
(A)长度:1843碱基对
(B)类型:核酸
(C)线型:单链
(D)拓扑学:线形
(ii)分子类型:其他核酸(重叠群2535)
(xi)序列描述:SEQ ID NO:36:GTCTTTTACT TTGGCAATGG CTGGATTCCT ACCCTCATCA CGGCCTTTGT CCTTGCTACC 60TCTCAGGCCC AAGCTGGATG GCTGCAACAT GATTATGGCC ACCTGTCTGT CTACAGAAAA 120CCCAAGTGGA ACCACCTTGT CCACAAATTC GTCATTGGCC ACTTAAAGGG TGCCTCTGCC 180AACTGGTGGA ATCATCGCCA CTTCCAGCAC CACGCCAAGC CTAACATCTT CCACAAGGAT 240CCCGATGTGA ACATGCTGCA CGTGTTTGTT CTGGGCGAAT GGCAGCCCAT CGAGTACGGC 300AAGAAGAAGC TGAAATACCT GCCCTACAAT CACCAGCACG AATACTTCTT CCTGATTGGG 360CCGCCGCTGC TCATCCCCAT GTATTTCCAG TACCAGATCA TCATGACCAT GATCGTCCAT 420AAGAACTGGG TGGACCTGGC CTGGGCCGTC AGCTACTACA TCCGGTTCTT CATCACCTAC 480ATCCCTTTCT ACGGCATCCT GGGAGCCCTC CTTTTCCTCA ACTTCATCAG GTTCCTGGAG 540AGCCACTGGT TTGTGTGGGT CACACAGATG AATCACATCG TCATGGAGAT TGACCAGGAG 600GCCTACCGTG ACTGGTTCAG TAGCCAGCTG ACAGCCACCT GCAACGTGGA GCAGTCCTTC 660TTCAACGACT GGTTCAGTGG ACACCTTAAC TTCCAGATTG AGCACCACCT CTTCCCCACC 720ATGCCCCGGC ACAACTTACA CAAGATCGCC CCGCTGGTGA AGTCTCTATG TGCCAAGCAT 780GGCATTGAAT ACCAGGAGAA GCCGCTACTG AGGGCCCTGC TGGACATCAT CAGGTCCCTG 840AAGAAGTCTG GGAAGCTGTG GCTGGACGCC TACCTTCACA AATGAAGCCA CAGCCCCCGG 900GACACCGTGG GGAAGGGGTG CAGGTGGGGT GATGGCCAGA GGAATGATGG GCTTTTGTTC 960TGAGGGGTGT CCGAGAGGCT GGTGTATGCA CTGCTCACGG ACCCCATGTT GGATCTTTCT 1020CCCTTTCTCC TCTCCTTTTT CTCTTCACAT CTCCCCCATA GCACCCTGCC CTCATGGGAC 1080CTGCCCTCCC TCAGCCGTCA GCCATCAGCC ATGGCCCTCC CAGTGCCTCC TAGCCCCTTC 1140TTCCAAGGAG CAGAGAGGTG GCCACCGGGG GTGGCTCTGT CCTACCTCCA CTCTCTGCCC 1200CTAAAGATGG GAGGAGACCA GCGGTCCATG GGTCTGGCCT GTGAGTCTCC CCTTGCAGCC 1260TGGTCACTAG GCATCACCCC CGCTTTGGTT CTTCAGATGC TCTTGGGGTT CATAGGGGCA 1320GGTCCTAGTC GGGCAGGGCC CCTGACCCTC CCGGCCTGGC TTCACTCTCC CTGACGGCTG 1380CCATTGGTCC ACCCTTTCAT AGAGAGGCCT GCTTTGTTAC AAAGCTCGGG TCTCCCTCCT 1440GCAGCTCGGT TAAGTACCCG AGGCCTCTCT TAAGATGTCC AGGGCCCCAG GCCCGCGGGC 1500ACAGCCAGCC CAAACCTTGG GCCCTGGAAG AGTCCTCCAC CCCATCACTA GAGTGCTCTG 1560ACCCTGGGCT TTCACGGGCC CCATTCCACC GCCTCCCCAA CTTGAGCCTG TGACCTTGGG 1620ACCAAAGGGG GAGTCCCTCG TCTCTTGTGA CTCAGCAGAG GCAGTGGCCA CGTTCAGGGA 1680GGGGCCGGCT GGCCTGGAGG CTCAGCCCAC CCTCCAGCTT TTCCTCAGGG TGTCCTGAGG 1740TCCAAGATTC TGGAGCAATC TGACCCTTCT CCAAAGGCTC TGTTATCAGC TGGGCAGTGC 1800CAGCCAATCC CTGGCCATTT GGCCCCAGGG GACGTGGGCC CTG 1843(2)SEQ ID NO:37的信息:
(i)序列特征:
(A)长度:2257碱基对
(B)类型:核酸
(C)线型:单链
(D)拓扑学:线形
(ii)分子类型:其他核酸(编辑的重叠群253538a)
(xi)序列描述:SEQ ID NO:37:CAGGGACCTA CCCCGCGCTA CTTCACCTGG GACGAGGTGG CCCAGCGCTC AGGGTGCGAG 60GAGCGGTGGC TAGTGATCGA CCGTAAGGTG TACAACATCA GCGAGTTCAC CCGCCGGCAT 120CCAGGGGGCT CCCGGGTCAT CAGCCACTAC GCCGGGCAGG ATGCCACGGA TCCCTTTGTG 180GCCTTCCACA TCAACAAGGG CCTTGTGAAG AAGTATATGA ACTCTCTCCT GATTGGAGAA 240CTGTCTCCAG AGCAGCCCAG CTTTGAGCCC ACCAAGAATA AAGAGCTGAC AGATGAGTTC 300CGGGAGCTGC GGGCCACAGT GGAGCGGATG GGGCTCATGA AGGCCAACCA TGTCTTCTTC 360CTGCTGTACC TGCTGCACAT CTTGCTGCTG GATGGTGCAG CCTGGCTCAC CCTTTGGGTC 420TTTGGGACGT CCTTTTTGCC CTTCCTCCTC TGTGCGGTGC TGCTCAGTGC AGTTCAGCAG 480GCCCAAGCTG GATGGCTGCA ACATGATTAT GGCCACCTGT CTGTCTACAG AAAACCCAAG 540TGGAACCACC TTGTCCACAA ATTCGTCATT GGCCACTTAA AGGGTGCCTC TGCCAACTGG 600TGGAATCATC GCCACTTCCA GCACCACGCC AAGCCTAACA TCTTCCACAA GGATCCCGAT 660GTGAACATGC TGCACGTGTT TGTTCTGGGC GAATGGCAGC CCATCGAGTA CGGCAAGAAG 720AAGCTGAAAT ACCTGCCCTA CAATCACCAG CACGAATACT TCTTCCTGAT TGGGCCGCCG 780CTGCTCATCC CCATGTATTT CCAGTACCAG ATCATCATGA CCATGATCGT CCATAAGAAC 840TGGGTGGACC TGGCCTGGGC CGTCAGCTAC TACATCCGGT TCTTCATCAC CTACATCCCT 900TTCTACGGCA TCCTGGGAGC CCTCCTTTTC CTCAACTTCA TCAGGTTCCT GGAGAGCCAC 960TGGTTTGTGT GGGTCACACA GATGAATCAC ATCGTCATGG AGATTGACCA GGAGGCCTAC 1020CGTGACTGGT TCAGTAGCCA GCTGACAGCC ACCTGCAACG TGGAGCAGTC CTTCTTCAAC 1080GACTGGTTCA GTGGACACCT TAACTTCCAG ATTGAGCACC ACCTCTTCCC CACCATGCCC 1140CGGCACAACT TACACAAGAT CGCCCCGCTG GTGAAGTCTC TATGTGCCAA GCATGGCATT 1200GAATACCAGG AGAAGCCGCT ACTGAGGGCC CTGCTGGACA TCATCAGGTC CCTGAAGAAG 1260TCTGGGAAGC TGTGGCTGGA CGCCTACCTT CACAAATGAA GCCACAGCCC CCGGGACACC 1320GTGGGGAAGG GGTGCAGGTG GGGTGATGGC CAGAGGAATG ATGGGCTTTT GTTCTGAGGG 1380GTGTCCGAGA GGCTGGTGTA TGCACTGCTC ACGGACCCCA TGTTGGATCT TTCTCCCTTT 1440CTCCTCTCCT TTTTCTCTTC ACATCTCCCC CATAGCACCC TGCCCTCATG GGACCTGCCC 1500TCCCTCAGCC GTCAGCCATC AGCCATGGCC CTCCCAGTGC CTCCTAGCCC CTTCTTCCAA 1560GGAGCAGAGA GGTGGCCACC GGGGGTGGCT CTGTCCTACC TCCACTCTCT GCCCCTAAAG 1620ATGGGAGGAG ACCAGCGGTC CATGGGTCTG GCCTGTGAGT CTCCCCTTGC AGCCTGGTCA 1680CTAGGCATCA CCCCCGCTTT GGTTCTTCAG ATGCTCTTGG GGTTCATAGG GGCAGGTCCT 1740AGTCGGGCAG GGCCCCTGAC CCTCCCGGCC TGGCTTCACT CTCCCTGACG GCTGCCATTG 1800GTCCACCCTT TCATAGAGAG GCCTGCTTTG TTACAAAGCT CGGGTCTCCC TCCTGCAGCT 1860CGGTTAAGTA CCCGAGGCCT CTCTTAAGAT GTCCAGGGCC CCAGGCCCGC GGGCACAGCC 1920AGCCCAAACC TTGGGCCCTG GAAGAGTCCT CCACCCCATC ACTAGAGTGC TCTGACCCTG 1980GGCTTTCACG GGCCCCATTC CACCGCCTCC CCAACTTGAG CCTGTGACCT TGGGACCAAA 2040GGGGGAGTCC CTCGTCTCTT GTGACTCAGC AGAGGCAGTG GCCACGTTCA GGGAGGGGCC 2100GGCTGGCCTG GAGGCTCAGC CCACCCTCCA GCTTTTCCTC AGGGTGTCCT GAGGTCCAAG 2160ATTCTGGAGC AATCTGACCC TTCTCCAAAG GCTCTGTTAT CAGCTGGGCA GTGCCAGCCA 2220ATCCCTGGCC ATTTGGCCCC AGGGGACGTG GGCCCTG 2257(2)SEQ ID NO:38的信息:
(i)序列特征:
(A)长度:411氨基酸
(B)类型:氨基酸
(C)线型:单链
(D)拓扑构型:线形
(ii)分子类型:氨基酸(重叠群2692004的翻译)
(xi)序列描述:SEQ ID NO:38:His Ala Asp Arg Arg Arg Glu Ile Leu Ala Lys Tyr Pro Glu Ile1 5 10 15Lys Ser Leu Met Lys Pro Asp Pro Asn Leu Ile Trp Ile Ile Ile
20 25 30Met Met Val Leu Thr Gln Leu Gly Ala Phe Tyr Ile Val Lys Asp
35 40 45Leu Asp Trp Lys Trp Val Ile Phe Gly Ala Tyr Ala Phe Gly Ser
50 55 60Cys Ile Asn His Ser Met Thr Leu Ala Ile His Glu Ile Ala His
65 70 75Asn Ala Ala Phe Gly Asn Cys Lys Ala Met Trp Asn Arg Trp Phe
80 85 90Gly Met Phe Ala Asn Leu Pro Ile Gly Ile Pro Tyr Ser Ile Ser
95 100 105Phe Lys Arg Tyr His Met Asp His His Arg Tyr Leu Gly Ala Asp
110 115 120Gly Val Asp Val Asp Ile Pro Thr Asp Phe Glu Gly Trp Phe Phe
125 130 135Cys Thr Ala Phe Arg Lys Phe Ile Trp Val Ile Leu Gln Pro Leu
140 145 150Phe Tyr Ala Phe Arg Pro Leu Phe Ile Asn Pro Lys Pro Ile Thr
155 160 165Tyr Leu Glu Val Ile Asn Thr Val Ala Gln Val Thr Phe Asp Ile
170 175 180Leu Ile Tyr Tyr Phe Leu Gly Ile Lys Ser Leu Val Tyr Met Leu
185 190 195Ala Ala Ser Leu Leu Gly Leu Gly Leu His Pro Ile Ser Gly His
200 205 210Phe Ile Ala Glu His Tyr Met Phe Leu Lys Gly His Glu Thr Tyr
215 220 225Ser Tyr Tyr Gly Pro Leu Asn Leu Leu Thr Phe Asn Val Gly Tyr
230 235 240His Asn Glu His His Asp Phe Pro Asn Ile Pro Gly Lys Ser Leu
245 250 255Pro Leu Val Arg Lys Ile Ala Ala Glu Tyr Tyr Asp Asn Leu Pro
260 265 270His Tyr Asn Ser Trp Ile Lys Val Leu Tyr Asp Phe Val Met Asp
275 280 285Asp Thr Ile Ser Pro Tyr Ser Arg Met Lys Arg His Gln Lys Gly
290 295 300Glu Met Val Leu Glu *** Ile Ser Leu Val Pro Lys Gly Phe Phe
305 310 315Ser Lys Thr Leu Asp Asp Lys Met Glu Phe Leu His Tyr *** Thr
320 325 330*** Asp Gln *** Cys Ser Glu Ala Pro Leu Ala Gln Phe Gln Ser
335 340 345Lys Ser Ser Val Ile Pro Arg Ser Glu Ser Gly Phe *** Thr Val
350 355 360Ser Leu Thr Leu Tyr Cys Ser Val Ser Leu Thr Gly Asn Leu ***
365 370 375Leu Val Tyr Tyr Arg His *** Gly Cys Phe Thr His Val Cys His
380 385 390Phe Ile Ser Ile Ser Phe Lys Lys Leu Leu Lys Ser Tyr Phe Ala
400 405 410Arg(2)SEQID NO:39的信息:
(i)序列特征:
(A)长度:218氨基酸
(B)类型:氨基酸
(C)线型:单链
(D)拓扑构型:线形
(ii)分子类型:氨基酸(重叠群2153526的翻译)
(xi)序列描述:SEQ ID NO:39:Tyr Leu Leu Arg Pro Leu Leu Pro His Leu Cys Ala Thr Ile Gly1 5 10 15Ala Glu Ser Phe Leu Gly Leu Phe Phe Ile Val Arg Phe Leu Glu
20 25 30Ser Asn Trp Phe Val Trp Val Thr Gln Met Asn His Ile Pro Met
35 40 45His Ile Asp His Asp Arg Asn Met Asp Trp Val Ser Thr Gln Leu
50 55 60Gln Ala Thr Cys Asn Val His Lys Ser Ala Phe Asn Asp Trp Phe
65 70 75Ser Gly His Leu Asn Phe Gln Ile Glu His His Leu Phe Pro Thr
80 85 90Met Pro Arg His Asn Tyr His Lys Val Ala Pro Leu Val Gln Ser
95 100 105Leu Cys Ala Lys His Gly Ile Glu Tyr Gln Ser Lys Pro Leu Leu
110 115 120Ser Ala Phe Ala Asp Ile Ile His Ser Leu Lys Glu Ser Gly Gln
125 130 135Leu Trp Leu Asp Ala Tyr Leu His Gln *** Gln Gln Pro Pro Cys
140 145 150Pro Val Trp Lys Lys Arg Arg Lys Thr Leu Glu Pro Arg Gln Arg
155 160 165Gly Ala *** Gly Thr Met Pro Leu *** Phe Asn Thr Gln Arg Gly
170 175 180Leu Gly Leu Gly Thr *** Ser Leu *** Leu Lys Leu Leu Pro Phe
185 190 195Ile Phe *** Pro Gln Phe *** Asp Pro Lys Trp Gly Val Asp Thr
200 205 210Glu Val Pro Arg Arg Glu Gly Ala
215(2)SEQ ID NO:40的信息:
(i)序列特征:
(A)长度:71氨基酸
(B)类型:氨基酸
(C)线型:单链
(D)拓扑构型:线形
(ii)分子类型:氨基酸(重叠群3506132的翻译)
(xi)序列描述:SEQ ID NO:40:Val Phe Tyr Phe Gly Asn Gly Trp Ile Pro Thr Leu Ile Thr Ala1 5 10 15Phe Val Leu Ala Thr Ser Gln Ala Gln Ala Gly Trp Leu Gln His
20 25 30Asp Tyr Gly His Leu Ser Val Tyr Arg Lys Pro Lys Trp Asn His
35 40 45Leu Val His Lys Phe Val Ile Gly His Leu Lys Gly Ala Ser Ala
50 55 60Asn Trp Trp Asn His Arg His Phe Gln His His Ala Lys Pro Asn
65 70 75Leu Gly Glu Trp Gln Pro Ile Glu Tyr Gly Lys Xxx
80 85(2)SEQ ID NO:41的信息:
(i)序列特征:
(A)长度:306氨基酸
(B)类型:氨基酸
(C)线型:单链
(D)拓扑构型:线形
(ii)分子类型:氨基酸(重叠群3854933的翻译)
(xi)序列描述:SEQ ID NO:41:Gln Gly Pro Thr Pro Arg Tyr Phe Thr Trp Asp Glu Val Ala Gln1 5 10 15Arg Ser Gly Cys Glu Glu Arg Trp Leu Val Ile Asp Arg Lys Val
2 25 30Tyr Asn Ile Ser Glu Phe Thr Arg Arg His Pro Gly Gly Ser Arg
35 40 45Val Ile Ser His Tyr Ala Gly Gln Asp Ala Thr Asp Pro Phe Val
50 55 60Ala Phe His Ile Asn Lys Gly Leu Val Lys Lys Tyr Met Asn Ser
65 70 75Leu Leu Ile Gly Glu Leu Ser Pro Glu Gln Pro Ser Phe Glu Pro
80 85 90Thr Lys Asn Lys Glu Leu Thr Asp Glu Phe Arg Glu Leu Arg Ala
95 100 105Thr Val Glu Arg Met Gly Leu Met Lys Ala Asn His Val Phe Phe
110 115 120Leu Leu Tyr Leu Leu His Ile Leu Leu Leu Asp Gly Ala Ala Trp
125 130 135Leu Thr Leu Trp Val Phe Gly Thr Ser Phe Leu Pro Phe Leu Leu
140 145 150Cys Ala Val Leu Leu Ser Ala Val Gln Ala Gln Ala Gly Trp Leu
155 160 165Gln His Asp Phe Gly His Leu Ser Val Phe Ser Thr Ser Lys Trp
170 175 180Asn His Leu Leu His His Phe Val Ile Gly His Leu Lys Gly Ala
185 190 195Pro Ala Ser Trp Trp Asn His Met His Phe Gln His His Ala Lys
200 205 210Pro Asn Cys Phe Arg Lys Asp Pro Asp Ile Asn Met His Pro Phe
215 220 225Phe Phe Ala Leu Gly Lys Ile Leu Ser Val Glu Leu Gly Lys Gln
230 235 240Lys Lys Lys Tyr Met Pro Tyr Asn His Gln His Xxx Tyr Phe Phe
245 250 255Leu Ile Gly Pro Pro Ala Leu Leu Pro Leu Tyr Phe Gln Trp Tyr
260 265 270Ile Phe Tyr Phe Val Ile Gln Arg Lys Lys Trp Val Asp Leu Ala
275 280 285Trp Ile Ser Lys Gln Glu Tyr Asp Glu Ala Gly Leu Pro Leu Ser
290 295 300Thr Ala Asn Ala Ser Lys
305(2)SEQ ID NO:42的信息:
(i)序列特征:
(A)长度:566氨基酸
(B)类型:氨基酸
(C)线型:单链
(D)拓扑构型:线形
(ii)分子类型:氨基酸(重叠群2511785的翻译)
(xi)序列描述:SEQ ID NO:42:His Leu Lys Gly Ala Ser Ala Asn Trp Trp Asn His Arg His Phe1 5 10 15Gln His His Ala Lys Pro Asn Ile Phe His Lys Asp Pro Asp Val
20 25 30Asn Met Leu His Val Phe Val Leu Gly Glu Trp Gln Pro Ile Glu
35 40 45Tyr Gly Lys Lys Lys Leu Lys Tyr Leu Pro Tyr Asn His Gln His
50 55 60Glu Tyr Phe Phe Leu Ile Gly Pro Pro Leu Leu Ile Pro Met Tyr
65 70 75Phe Gln Tyr Gln Ile Ile Met Thr Met Ile Val His Lys Asn Trp
80 85 90Val Asp Leu Ala Trp Ala Val Ser Tyr Tyr Ile Arg Phe Phe Ile
95 100 105Thr Tyr Ile Pro Phe Tyr Gly Ile Leu Gly Ala Leu Leu Phe Leu
110 115 120Asn Phe Ile Arg Phe Leu Glu Ser His Trp Phe Val Trp Val Thr
125 130 135Gln Met Asn His Ile Val Met Glu Ile Asp Gln Glu Ala Tyr Arg
140 145 150Asp Trp Phe Ser Ser Gln Leu Thr Ala Thr Cys Asn Val Glu Gln
155 160 165Ser Phe Phe Asn Asp Trp Phe Ser Gly His Leu Asn Phe Gln Ile
170 175 180Glu His His Leu Phe Pro Thr Met Pro Arg His Asn Leu His Lys
185 190 195Ile Ala Pro Leu Val Lys Ser Leu Cys Ala Lys His Gly Ile Glu
200 205 210Tyr Gln Glu Lys Pro Leu Leu Arg Ala Leu Leu Asp Ile Ile Arg
215 220 225Ser Leu Lys Lys Ser Gly Lys Leu Trp Leu Asp Ala Tyr Leu His
230 235 240Lys *** Ser His Ser Pro Arg Asp Thr Val Gly Lys Gly Cys Arg
245 250 255Trp Gly Asp Gly Gln Arg Asn Asp Gly Leu Leu Phe *** Gly Val
260 265 270Ser Glu Arg Leu Val Tyr Ala Leu Leu Thr Asp Pro Met Leu Asp
275 280 285Leu Ser Pro Phe Leu Leu Ser Phe Phe Ser Ser His Leu Pro His
290 295 300Ser Thr Leu Pro Ser Trp Asp Leu Pro Ser Leu Ser Arg Gln Pro
305 310 315Ser Ala Met Ala Leu Pro Val Pro Pro Ser Pro Phe Phe Gln Gly
320 325 330Ala Glu Arg Trp Pro Pro Gly Val Ala Leu Ser Tyr Leu His Ser
335 340 345Leu Pro Leu Lys Met Gly Gly Asp Gln Arg Ser Met Gly Leu Ala
350 355 360Cys Glu Ser Pro Leu Ala Ala Trp Ser Leu Gly Ile Thr Pro Ala
365 370 375Leu Val Leu Gln Met Leu Leu Gly Phe Ile Gly Ala Gly Pro Ser
380 385 390Arg Ala Gly Pro Leu Thr Leu Pro Ala Trp Leu His Ser Pro ***
400 405 410Arg Leu Pro Leu Val His Pro Phe Ile Glu Arg Pro Ala Leu Leu
415 420 425Gln Ser Ser Gly Leu Pro Pro Ala Ala Arg Leu Ser Thr Arg Gly
430 435 440Leu Ser *** Asp Val Gln Gly Pro Arg Pro Ala Gly Thr Ala Ser
445 450 455Pro Asn Leu Gly Pro Trp Lys Ser Pro Pro Pro His His *** Ser
460 465 470Ala Leu Thr Leu Gly Phe His Gly Pro His Ser Thr Ala Ser Pro
475 480 485Thr *** Ala Cys Asp Leu Gly Thr Lys Gly Gly Val Pro Arg Leu
490 495 500Leu *** Leu Ser Arg Gly Ser Gly His Val Gln Gly Gly Ala Gly
505 510 515Trp Pro Gly Gly Ser Ala His Pro Pro Ala Phe Pro Gln Gly Val
520 525 530Leu Arg Ser Lys Ile Leu Glu Gln Ser Asp Pro Ser Pro Lys Ala
535 540 545Leu Leu Ser Ala Gly Gln Cys Gln Pro Ile Pro Gly His Leu Ala
550 555 560Pro Gly Asp Val Gly Pro Xxx
565(2)SEQ ID NO:43的信息:
(i)序列特征:
(A)长度:619氨基酸
(B)类型:氨基酸
(C)线型:单链
(D)拓扑构型:线形
(ii)分子类型:氨基酸(重叠群2535的翻译)
(xi)序列描述:SEQ ID NO:43:Val Phe Tyr Phe Gly Asn Gly Trp Ile Pro Thr Leu Ile Thr Ala1 5 10 15Phe Val Leu Ala Thr Ser Gln Ala Gln Ala Gly Trp Leu Gln His
20 25 30Asp Tyr Gly His Leu Ser Val Tyr Arg Lys Pro Lys Trp Asn His
35 40 45Leu Val His Lys Phe Val Ile Gly His Leu Lys Gly Ala Ser Ala
50 55 60Asn Trp Trp Asn His Arg His Phe Gln His His Ala Lys Pro Asn
65 70 75Ile Phe His Lys Asp Pro Asp Val Asn Met Leu His Val Phe Val
80 85 90Leu Gly Glu Trp Gln Pro Ile Glu Tyr Gly Lys Lys Lys Leu Lys
95 100 105Tyr Leu Pro Tyr Asn His Gln His Glu Tyr Phe Phe Leu Ile Gly
110 115 120Pro Pro Leu Leu Ile Pro Met Tyr Phe Gln Tyr Gln Ile Ile Met
125 130 135Thr Met Ile Val His Lys Asn Trp Val Asp Leu Ala Trp Ala Val
140 145 150Ser Tyr Tyr Ile Arg Phe Phe Ile Thr Tyr Ile Pro Phe Tyr Gly
155 160 165Ile Leu Gly Ala Leu Leu Phe Leu Asn Phe Ile Arg Phe Leu Glu
170 175 180Ser His Trp Phe Val Trp Val Thr Gln Met Asn His Ile Val Met
185 190 195Glu Ile Asp Gln Glu Ala Tyr Arg Asp Trp Phe Ser Ser Gln Leu
200 205 210Thr Ala Thr Cys Asn Val Glu Gln Ser Phe Phe Asn Asp Trp Phe
215 220 225Ser Gly His Leu Asn Phe Gln Ile Glu His His Leu Phe Pro Thr
230 235 240Met Pro Arg His Asn Leu His Lys Ile Ala Pro Leu Val Lys Ser
245 250 255Leu Cys Ala Lys His Gly Ile Glu Tyr Gln Glu Lys Pro Leu Leu
260 265 270Arg Ala Leu Leu Asp Ile Ile Arg Ser Leu Lys Lys Ser Gly Lys
275 280 285Leu Trp Leu Asp Ala Tyr Leu His Lys *** Ser His Ser Pro Arg
290 295 300Asp Thr Val Gly Lys Gly Cys Arg Trp Gly Asp Gly Gln Arg Asn
305 310 315Asp Gly Leu Leu Phe *** Gly Val Ser Glu Arg Leu Val Tyr Ala
320 325 330Leu Leu Thr Asp Pro Met Leu Asp Leu Ser Pro Phe Leu Leu Ser
335 340 345Phe Phe Ser Ser His Leu Pro His Ser Thr Leu Pro Ser Trp Asp
350 355 360Leu Pro Ser Leu Ser Arg Gln Pro Ser Ala Met Ala Leu Pro Val
365 370 375Pro Pro Ser Pro Phe Phe Gln Gly Ala Glu Arg Trp Pro Pro Gly
380 385 390Val Ala Leu Ser Tyr Leu His Ser Leu Pro Leu Lys Met Gly Gly
400 405 410Asp Gln Arg Ser Met Gly Leu Ala Cys Glu Ser Pro Leu Ala Ala
415 420 425Trp Ser Leu Gly Ile Thr Pro Ala Leu Val Leu Gln Met Leu Leu
430 435 440Gly Phe Ile Gly Ala Gly Pro Ser Arg Ala Gly Pro Leu Thr Leu
445 450 455Pro Ala Trp Leu His Ser Pro *** Arg Leu Pro Leu Val His Pro
460 465 470Phe Ile Glu Arg Pro Ala Leu Leu Gln Ser Ser Gly Leu Pro Pro
475 480 485Ala Ala Arg Leu Ser Thr Arg Gly Leu Ser *** Asp Val Gln Gly
490 495 500Pro Arg Pro Ala Gly Thr Ala Ser Pro Asn Leu Gly Pro Trp Lys
505 510 515Ser Pro Pro Pro His His *** Ser Ala Leu Thr Leu Gly Phe His
520 525 530Gly Pro His Ser Thr Ala Ser Pro Thr *** Ala Cys Asp Leu Gly
535 540 545Thr Lys Gly Gly Val Pro Arg Leu Leu *** Leu Ser Arg Gly Ser
550 555 560Gly His Val Gln Gly Gly Ala Gly Trp Pro Gly Gly Ser Ala His
565 570 575Pro Pro Ala Phe Pro Gln Gly Val Leu Arg Ser Lys Ile Leu Glu
580 585 590Gln Ser Asp Pro Ser Pro Lys Ala Leu Leu Ser Ala Gly Gln Cys
595 600 605Gln Pro Ile Pro Gly His Leu Ala Pro Gly Asp Val Gly Pro Xxx
610 615 620(2)SEQ ID NO:44的信息:
(i)序列特征:
(A)长度:757氨基酸
(B)类型:氨基酸
(C)线型:单链
(D)拓扑构型:线形
(ii)分子类型:氨基酸(重叠群的翻译)
(xi)序列描述:SEQ ID NO:44:Gln Gly Pro Thr Pro Arg Tyr Phe Thr Trp Asp Glu Val Ala Gln1 5 10 15Arg Ser Gly Cys Glu Glu Arg Trp Leu Val Ile Asp Arg Lys Val
20 25 30Tyr Asn Ile Ser Glu Phe Thr Arg Arg His Pro Gly Gly Ser Arg
35 40 45Val Ile Ser His Tyr Ala Gly Gln Asp Ala Thr Asp Pro Phe Val
50 55 60Ala Phe His Ile Asn Lys Gly Leu Val Lys Lys Tyr Met Asn Ser
65 70 75Leu Leu Ile Gly Glu Leu Ser Pro Glu Gln Pro Ser Phe Glu Pro
80 85 90Thr Lys Asn Lys Glu Leu Thr Asp Glu Phe Arg Glu Leu Arg Ala
95 100 105Thr Val Glu Arg Met Gly Leu Met Lys Ala Asn His Val Phe Phe
110 115 120Leu Leu Tyr Leu Leu His Ile Leu Leu Leu Asp Gly Ala Ala Trp
125 130 135Leu Thr Leu Trp Val Phe Gly Thr Ser Phe Leu Pro Phe Leu Leu
140 145 150Cys Ala Val Leu Leu Ser Ala Val Gln Gln Ala Gln Ala Gly Trp
155 160 165Leu Gln His Asp Tyr Gly His Leu Ser Val Tyr Arg Lys Pro Lys
170 175 180Trp Asn His Leu Val His Lys Phe Val Ile Gly His Leu Lys Gly
185 190 195Ala Ser Ala ASn Trp Trp Asn His Arg His Phe Gln His His Ala
200 205 210Lys Pro Asn Ile Phe His Lys Asp Pro Asp Val Asn Met Leu His
215 220 225Val Phe Val Leu Gly Glu Trp Gln Pro Ile Glu Tyr Giy Lys Lys
230 235 240Lys Leu Lys Tyr Leu Pro Tyr Asn His Gln His Glu Tyr Phe Phe
245 250 255Leu Ile Gly Pro Pro Leu Leu Ile Pro Met Tyr Phe Gln Tyr Gln
260 265 270Ile Ile Met Thr Met Ile Val His Lys Asn Trp Val Asp Leu Ala
275 280 285Trp Ala Val Ser Tyr Tyr Ile Arg Phe Phe Ile Thr Tyr Ile Pro
290 295 300Phe Tyr Gly Ile Leu Gly Ala Leu Leu Phe Leu Asn Phe Ile Arg
305 310 315Phe Leu Glu Ser His Trp Phe Val Trp Val Thr Gln Met Asn His
320 325 330Ile Val Met Glu Ile Asp Gln Glu Ala Tyr Arg Asp Trp Phe Ser
335 340 345Ser Gln Leu Thr Ala Thr Cys Asn Val Glu Gln Ser Phe Phe Asn
350 355 360Asp Trp Phe Ser Gly His Leu Asn Phe Gln Ile Glu His His Leu
365 370 375Phe Pro Thr Met Pro Arg His Asn Leu His Lys Ile Ala Pro Leu
380 385 390Val Lys Ser Leu Cys Ala Lys His Gly Ile Glu Tyr Gln Glu Lys
400 405 410Pro Leu Leu Arg Ala Leu Leu Asp Ile Ile Arg Ser Leu Lys Lys
415 420 425Ser Gly Lys Leu Trp Leu Asp Ala Tyr Leu His Lys *** Ser His
430 435 440Ser Pro Arg Asp Thr Val Gly Lys Gly Cys Arg Trp Gly Asp Gly
445 450 455Gln Arg Asn Asp Gly Leu Leu Phe *** Gly Val Ser Glu Arg Leu
460 465 470Val Tyr Ala Leu Leu Thr Asp Pro Met Leu Asp Leu Ser Pro Phe
475 480 485Leu Leu Ser Phe Phe Ser Ser His Leu Pro His Ser Thr Leu Pro
490 495 500Ser Trp Asp Leu Pro Ser Leu Ser Arg Gln Pro Ser Ala Met Ala
505 510 515Leu Pro Val Pro Pro Ser Pro Phe Phe Gln Gly Ala Glu Arg Trp
520 525 530Pro Pro Gly Val Ala Leu Ser Tyr Leu His Ser Leu Pro Leu Lys
535 540 545Met Gly Gly Asp Gln Arg Ser Met Gly Leu Ala Cys Glu Ser Pro
550 555 560Leu Ala Ala Trp Ser Leu Gly Ile Thr Pro Ala Leu Val Leu Gln
565 570 575Met Leu Leu Gly Phe Ile Gly Ala Gly Pro Ser Arg Ala Gly Pro
580 585 590Leu Thr Leu Pro Ala Trp Leu His Ser Pro *** Arg Leu Pro Leu
595 600 605Val His Pro Phe Ile Glu Arg Pro Ala Leu Leu Gln Ser Ser Gly
610 615 620Leu Pro Pro Ala Ala Arg Leu Ser Thr Arg Gly Leu Ser *** Asp
625 630 635Val Gln Gly Pro Arg Pro Ala Gly Thr Ala Ser Pro Asn Leu Gly
640 645 650Pro Trp Lys Ser Pro Pro Pro His His *** Ser Ala Leu Thr Leu
655 660 665Gly Phe His Gly Pro His Ser Thr Ala Ser Pro Thr *** Ala Cys
670 675 680Asp Leu Gly Thr Lys Gly Gly Val Pro Arg Leu Leu *** Leu Ser
685 690 695Arg Gly Ser Gly His Val Gln Gly Gly Ala Gly Trp Pro Gly Gly
700 705 710Ser Ala His Pro Pro Ala Phe Pro Gln Gly Val Leu Arg Ser Lys
715 720 725Ile Leu Glu Gln Ser Asp Pro Ser Pro Lys Ala Leu Leu Ser Ala
730 735 740Gly Gln Cys Gln Pro Ile Pro Gly His Leu Ala Pro Gly Asp Val
745 750 755Gly Pro Xxx(2)SEQ ID NO:45的信息:
(i)序列特征:
(A)长度:746核酸
(B)类型:核酸
(C)线型:不相关
(D)拓扑学:线形
(ii)分子类型:核酸
(xi)序列描述:SEQ ID NO:45:CGTATGTCAC TCCATTCCAA ACTCGTTCAT GGTATCATAA ATATCAACAC ATTTACGCTC 60CACTCCTCTA TGGTATTTAC ACACTCAAAT ATCGTACTCA AGATTGGGAA GCTTTTGTAA 120AGGATGGTAA AAATGGTGCA ATTCGTGTTA GTGTCGCCAC AAATTTCGAT AAGGCCGCTT 180ACGTCATTGG TAAATTGTCT TTTGTTTTCT TCCGTTTCAT CCTTCCACTC CGTTATCATA 240GCTTTACAGA TTTAATTTGT TATTTCCTCA TTGCTGAATT CGTCTTTGGT TGGTATCTCA 300CAATTAATTT CCAAGTTAGT CATGTCGCTG AAGATCTCAA ATTCTTTGCT ACCCCTGAAA 360GACCAGATGA ACCATCTCAA ATCAATGAAG ATTGGGCAAT CCTTCAACTT AAAACTACTC 420AAGATTATGG TCATGGTTCA CTCCTTTGTA CCTTTTTTAG TGGTTCTTTA AATCATCAAG 480TTGTTCATCA TTTATTCCCA TCAATTGCTC AAGATTTCTA CCCACAACTT GTACCAATTG 540TAAAAGAAGT TTGTAAAGAA CATAACATTA CTTACCACAT TAAACCAAAC TTCACTGAAG 600CTATTATGTC ACACATTAAT TACCTTTACA AAATGGGTAA TGATCCAGAT TATGTTAAAA 660AACCATTAGC CTCAAAAGAT GATTAAATGA AATAACTTAA AAACCAATTA TTTACTTTTG 720ACAAACAGTA ATATTAATAA ATACAA 746(2)SEQ ID NO:46的信息:
(i)序列特征:
(A)长度:227氨基酸
(B)类型:氨基酸
(C)线型:不相关
(D)拓扑构型:线形
(ii)分子类型:肽
(xi)序列描述:SEQ ID NO:46:Tyr Val Thr Pro Phe Gln Thr Arg Ser Trp Tyr His Lys Tyr Gln1 5 10 15His Ile Tyr Ala Pro Leu Leu Tyr Gly Ile Tyr Thr Leu Lys Tyr
20 25 30Arg Thr Gln Asp Trp Glu Ala Phe Val Lys Asp Gly Lys Asn Gly
35 40 45Ala Ile Arg Val Ser Val Ala Thr Asn Phe Asp Lys Ala Ala Tyr
50 55 60Val Ile Gly Lys Leu Ser Phe Val Phe Phe Arg Phe Ile Leu Pro
65 70 75Leu Arg Tyr His Ser Phe Thr Asp Leu Ile Cys Tyr Phe Leu Ile
80 85 90Ala Glu Phe Val Phe Gly Trp Tyr Leu Thr Ile Asn Phe Gln Val
95 100 105Ser His Val Ala Glu Asp Leu Lys Phe Phe Ala Thr Pro Glu Arg
110 115 120Pro Asp Glu Pro Ser Gln Ile Asn Glu Asp Trp Ala Ile Leu Gln
125 130 135Leu Lys Thr Thr Gln Asp Tyr Gly His Gly Ser Leu Leu Cys Thr
140 145 150Phe Phe Ser Gly Ser Leu Asn His Gln Val Val His His Leu Phe
155 160 165Pro Ser Ile Ala Gln Asp Phe Tyr Pro Gln Leu Val Pro Ile Val
170 175 180Lys Glu Val Cys Lys Glu His Asn Ile Thr Tyr His Ile Lys Pro
185 190 195Asn Phe Thr Glu Ala Ile Met Ser His Ile Asn Tyr Leu Tyr Lys
200 205 210Met Gly Asn Asp Pro Asp Tyr Val Lys Lys Pro Leu Ala Ser Lys
215 220 225Asp Asp ***(2)SEQ ID NO:47的信息:
(i)序列特征:
(A)长度:494核酸
(B)类型:核酸
(C)线型:不相关
(D)拓扑学:线形
(ii)分子类型:核酸
(xi)序列描述:SEQ ID NO:47:TTTTGGAAGG NTCCAAGTTN ACCACGGANT NGGCAAGTTN ACGGGGCGGA AANCGGTTTT 60CCCCCCAAGC CTTTTGTCGA CTGGTTCTGT GGTGGCTTCC AGTACCAAGT CGACCACCAC 120TTATTCCCCA GCCTGCCCCG ACACAATCTG GCCAAGACAC ACGCACTGGT CGAATCGTTC 180TGCAAGGAGT GGGGTGTCCA GTACCACGAA GCCGACCTCG TGGACGGGAC CATGGAAGTC 240TTGCACCATT TGGGCAGCGT GGCCGGCGAA TTCGTCGTGG ATTTTGTACG CGACGGACCC 300GCCATGTAAT CGTCGTTCGT GACGATGCAA GGGTTCACGC ACATCTACAC ACACTCACTC 360ACACAACTAG TGTAACTCGT ATAGAATTCG GTGTCGACCT GGACCTTGTT TGACTGGTTG 420GGGATAGGGT AGGTAGGCGG ACGCGTGGGT CGNCCCCGGG AATTCTGTGA CCGGTACCTG 480GCCCGCGTNA AAGT 494(2)SEQ ID NO:48的信息:
(i)序列特征:
(A)长度:87氨基酸
(B)类型:氨基酸
(C)线型:不相关
(D)拓扑构型:线形
(ii)分子类型:肽
(xi)序列描述:SEQ ID NO:48:Phe Trp Lys Xxx Pro Ser Xxx Pro Arg Xxx Xxx Gln Val Xxx Gly1 5 10 15Ala Glu Xxx Gly Phe Pro Pro Lys Pro Phe Val Asp Trp Phe Cys
20 25 30Gly Gly Phe Gln Tyr Gln Val Asp His His Leu Phe Pro Ser Leu
35 40 45Pro Arg His Asn Leu Ala Lys Thr His Ala Leu Val Glu Ser Phe
50 55 60Cys Lys Glu Trp Gly Val Gln Tyr His Glu Ala Asp Leu Val Asp
65 70 75Gly Thr Met Glu Val Leu His His Leu Gly Ser Vai Ala Gly Glu
65 70 75Phe Val Val Asp Phe Val Arg Asp Gly Pro Ala Met
80 85(2)SEQ ID NO:49的信息:
(i)序列特征:
(A)长度:520核酸
(B)类型:氨基酸
(C)线型:不相关
(D)拓扑学:线形
(ii)分子类型:核酸
(xi)序列描述:SEQ ID NO:49:GGATGGAGTT CGTCTGGATC GCTGTGCGCT ACGCGACGTG GTTTAAGCGT CATGGGTGCG 60CTTGGGTACA CGCCGGGGCA GTCGTTGGGC ATGTACTTGT GCGCCTTTGG TCTCGGCTGC 120ATTTACATTT TTCTGCAGTT CGCCGTAAGT CACACCCATT TGCCCGTGAG CAACCCGGAG 180GATCAGCTGC ATTGGCTCGA GTACGCGCGG ACCACACTGT GAACATCAGC ACCAAGTCGT 240GGTTTGTCAC ATGGTGGATG TCGAACCTCA ACTTTCAGAT CGAGCACCAC CTTTTCCCCA 300CGGCGCCCCA GTTCCGTTTC AAGGAGATCA GCCCGCGCGT CGAGGCCCTC TTCAAGCGCC 360ACGGTCTCCC TTACTACGAC ATGCCCTACA CGAGCGCCGT CTCCACCACC TTTGCCAACC 420TCTACTCCGT CGGCCATTCC GTCGGCGACG CCAAGCGCGA CTAGCCTCTT TTCCTAGACC 480TTAATTCCCC ACCCCACCCC ATGTTCTGTC TTCCTCCCGC 520(2)SEQ ID NO:50的信息:
(i)序列特征:
(A)长度:153氨基酸
(B)类型:氨基酸
(C)线型:不相关
(D)拓扑构型:线形
(ii)分子类型:肽
(xi)序列描述:SEQ ID NO:50:Met Glu Phe Val Trp Ile Ala Val Arg Tyr Ala Thr Trp Phe Lys1 5 10 15Arg His Gly Cys Ala Trp Val His Ala Gly Ala Val Val Gly His
20 25 30Val Leu Val Arg Leu Trp Ser Arg Leu His Leu His Phe Ser Ala
35 40 45Val Arg Arg Lys Ser His Pro Phe Ala Arg Glu Gln Pro Gly Gly
50 55 60Ser Ala Ala Leu Ala Arg Val Arg Ala Asp His Thr Val Asn Ile
65 70 75Ser Thr Lys Ser Trp Phe Val Thr Trp Trp Met Ser Asn Leu Asn
80 85 90Phe Gln Ile Glu His His Leu Phe Pro Thr Ala Pro Gln Phe Arg
95 100 105Phe Lys Glu Ile Ser Pro Arg Val Glu Ala Leu Phe Lys Arg His
110 115 120Gly Leu Pro Tyr Tyr Asp Met Pro Tyr Thr Ser Ala Val Ser Thr
125 130 135Thr Phe Ala Asn Leu Tyr Ser Val Gly His Ser Val Gly Asp Ala
140 145 150Lys Arg Asp(2)SEQ ID NO:51的信息:
(i)序列特征:
(A)长度:429核酸
(B)类型:核酸
(C)线型:不相关
(D)拓扑学:线形
(ii)分子类型:核酸
(xi)序列描述:SEQ ID NO:51:ACGCGTCCGC CCACGCGTCC GCCGCGAGCA ACTCATCAAG GAAGGCTACT TTGACCCCTC 60GCTCCCGCAC ATGACGTACC GCGTGGTCGA GATTGTTGTT CTCTTCGTGC TTTCCTTTTG 120GCTGATGGGT CAGTCTTCAC CCCTCGCGCT CGCTCTCGGC ATTGTCGTCA GCGGCATCTC 180TCAGGGTCGC TGCGGCTGGG TAATGCATGA GATGGGCCAT GGGTCGTTCA CTGGTGTCAT 240TTGGCTTGAC GACCGGTTGT GCGAGTTCTT TTACGGCGTT GGTTGTGGCA TGAGCGGTCA 300TTACTGGAAA AACCAGCACA GCAAACACCA CGCAGCGCCA AACCGGCTCG AGCACGATGT 360AGATCTCAAC ACCTTGCCAT TGGTGGCCTT CAACGAGCGC GTCGTGCGCA AGGTCCGACC 420(2)SEQ ID NO:52的信息:
(i)序列特征:
(A)长度:125氨基酸
(B)类型:氨基酸
(C)线型:不相关
(D)拓扑构型:线形
(ii)分子类型:肽
(xi)序列描述:SEQ ID NO:52:Arg Val Arg Pro Arg Val Arg Arg Glu Gln Leu Ile Lys Glu Gly1 5 10 15Tyr Phe Asp Pro Ser Leu Pro His Met Thr Tyr Arg Val Val Glu
20 25 30Ile Val Val Leu Phe Val Leu Ser Phe Trp Leu Met Gly Gln Ser
35 40 45Ser Pro Leu Ala Leu Ala Leu Gly Ile Val Val Ser Gly Ile Ser
50 55 60Gln Gly Arg Cys Gly Trp Val Met His Glu Met Gly His Gly Ser
65 70 75Phe Thr Gly Val Ile Trp Leu Asp Asp Arg Leu Cys Glu Phe Phe
65 70 75Tyr Gly Val Gly Cys Gly Met Ser Gly His Tyr Trp Lys Asn Gln
80 85 90His Ser Lys His His Ala Ala Pro Asn Arg Leu Glu His Asp Val
95 100 105Asp Leu Asn Thr Leu Pro Leu Val Ala Phe Asn Glu Arg Val Val
110 115 120Arg Lys Val Arg Pro
125
Claims (51)
1.一种核酸结构,它包含:
一个或多个选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:5的SEQ ID NO中描述的核苷酸序列,其中所说的一个或多个核苷酸序列与一个异源核苷酸序列连接。
2.一种核酸结构,它包含:
一个或多个选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:5的SEQ ID NO中描述的核苷酸序列,其中所说的一个或多个核苷酸序列与一个在一种植物细胞中有功能的表达控制序列操纵连接。
3.权利要求2的核酸结构,其中所说的核苷酸序列具有小于约60%的A+T平均含量。
4.权利要求2的核酸结构,其中所说的核苷酸序列来自一种真菌。
5.权利要求4的核酸结构,其中所说的真菌属于被孢霉属。
6.权利要求5的核酸结构,其中所说的真菌属于高山被孢霉。
7.一种核酸结构,它包含:
编码一个包含SEQ ID NO:2中所示氨基酸序列的多肽的核苷酸序列,其中所说的核苷酸序列与一个在一种植物细胞中有功能的转录或表达控制序列操纵连接,其中所说的核苷酸序列编码一种具有功能活性的多肽,该多肽能将一种脂肪酸分子在所说的脂肪酸分子的自羧基末端的碳6处去饱和。
8.一种核酸结构,它包含:
一种编码一个包含SEQ ID NO:4中所示氨基酸序列的多肽的核苷酸序列,其中所说的核苷酸序列与一个在一种植物细胞中有功能的转录或表达控制序列操纵连接,其中所说的核苷酸序列编码一种具有功能活性的多肽,该多肽能将一种脂肪酸分子在所说的脂肪酸分子的自羧基末端的碳12处去饱和。
9.一种核酸结构,它包含:
一种编码一个包含SEQ ID NO:6中所示氨基酸序列的多肽的核苷酸序列,其中所说的核苷酸序列与一个在一种植物细胞中有功能的转录或表达控制序列操纵连接,其中所说的核苷酸序列编码一种具有功能活性的多肽,该多肽能将一种脂肪酸分子在所说的脂肪酸分子的自羧基末端的碳5处去饱和。
10.一种核酸结构,它包含:
至少一种编码一种有功能活性的、具有选自SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:6的SEQ ID NO中所示氨基酸序列的脱氢酶的核苷酸序列,其中所说的核苷酸序列与一种在植物细胞中有功能的启动子操纵连接。
11.权利要求10的核酸结构,其中所说的植物细胞是一种种子细胞。
12.权利要求11的核酸结构,其中所说的种子细胞是一种胚细胞。
13.一种重组植物细胞,它包含
至少一个拷贝的编码至少一种有功能活性的高山被孢霉脂肪酸脱氢酶的DNA序列,该脱氢酶能导致一种多不饱和脂肪酸的产生,其中所说的脂肪酸脱氢酶含有选自SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:6的SEQ ID NO中所示的氨基酸序列,其中所说的细胞用一种含有所说的DNA序列的载体转化,并且其中所说的DNA序列与一种表达控制序列操纵连接。
14.权利要求13的重组植物细胞,其中所说的多不饱和脂肪酸选自LA、ARA、GLA、DGLA、SDA和EPA。
15.权利要求13的重组植物细胞,其中所说的重组植物细胞富含选自18:1、18:2、18:3和18:4的一种脂肪酸。
16.权利要求15的重组植物细胞,其中所说的植物细胞选自芸苔、大豆、红花、玉米、亚麻和向日葵。
17.权利要求16的重组植物细胞,其中所说的表达控制序列对所说的植物细胞来说是内源性的。
18.由权利要求16所说的重组植物细胞表达的一种或多种植物油。
19.一种获得改变的长链多不饱和脂肪酸生物合成的方法,它包括以下步骤:
培养一种在细胞中含有一种转基因的植物,该转基因编码一种转基因表达产物,这种表达产物能够将一种脂肪酸分子在所说的脂肪酸分子的自羧基末端的碳5处去饱和,其中所说的转基因与一种表达控制序列操纵连接,培养在所说的转基因能够表达的条件下进行,由此所说的细胞中的长链多不饱和脂肪酸生物合成被改变。
20.一种获得改变的长链多不饱和脂肪酸生物合成的方法,它包括以下步骤:
培养一种在细胞中含有一种或多种来自一种真菌或藻类的转基因的植物,该转基因编码一种转基因表达产物,这种表达产物能够将一种脂肪酸分子在所说的脂肪酸分子的自羧基末端的选自碳5、碳6和碳12的一个碳位置去饱和,其中所说的一个或多个转基因与一种表达控制序列操纵连接,培养在所说的一个或多个转基因能够表达条件下进行,由此所说的细胞中的长链多不饱和脂肪酸生物合成被改变。
21.权利要求19或20的方法,其中所说的长链多不饱和脂肪酸选自LA、ARA、GLA、DGLA、SDA和EPA。
22.根据权利要求19或20的方法制备的一种植物油或其部分。
23.一种治疗或预防营养不良的方法,包括将权利要求22所说的植物油给予一个需要所说的治疗或预防的病人,所给予的数量足够产生所说的治疗或预防效果。
24.一种药物组合物,它包含权利要求22所说的植物油或其部分以及一种可药用的载体。
25.权利要求24的药物组合物,其中所说的药物组合物为一种固体或液体形式。
26.权利要求25的药物组合物,其中所说的药物组合物是一种胶囊或片剂形式。
27.权利要求24的药物组合物,它进一步包含至少一种选自维生素、矿物质、碳水化合物、糖、氨基酸、游离脂肪酸、磷脂、抗氧化剂和酚化合物的营养物质。
28.一种含有权利要求22所说的植物油或其部分的营养配方食品。
29.权利要求28的营养配方食品,其中所说的营养配方食品选自婴儿配方食品、保健食品和代用食品。
30.权利要求29的营养配方食品,其中所说的婴儿配方食品、保健食品或代用食品为液体或固体形式。
31.一种含有权利要求22所说的植物油或其部分的婴儿配方食品。
32.权利要求31的婴儿配方食品,它进一步含有至少一种选自椰子油、豆油、菜籽油、甘油单酯和甘油二酯、葡萄糖、食用乳糖、电渗析乳清、电渗析脱脂乳、乳清、豆蛋白和其他蛋白水解物的常量营养物。
33.权利要求32的婴儿配方食品,它进一步含有至少一种选自维生素A、C、D、E和B复合物的维生素,和至少一种选自钙、镁、锌、锰、钠、钾、磷、铜、氯、碘、硒和铁的矿物质。
34.一种含有权利要求22所说的植物油或其部分的保健食品。
35.权利要求34的保健食品,它进一步含有至少一种选自椰子油、豆油、菜籽油、甘油单酯和甘油二酯、葡萄糖、食用乳糖、电渗析乳清、电渗析脱脂乳、乳清、豆蛋白和其他蛋白水解物的常量营养物。
36.权利要求35的保健食品,它进一步含有一种选自维生素A、C、D、E和B复合物的维生素,和至少一种选自钙、镁、锌、锰、钠、钾、磷、铜、氯、碘、硒和铁的矿物质。
37.权利要求34或权利要求36的保健食品,其中所说的保健食品给予人或动物。
38.一种含有权利要求22所说的植物油或部分的代用食品。
39.权利要求38的代用食品,它进一步含有至少一种选自椰子油、豆油、菜籽油、甘油单酯和甘油二酯、葡萄糖、食用乳糖、电渗析乳清、电渗析脱脂乳、乳清、豆蛋白和其他蛋白水解物的常量营养物。
40.权利要求39的代用食品,它进一步含有至少一种选自维生素A、C、D、E和B复合物的维生素,和至少一种选自钙、镁、锌、锰、钠、钾、磷、铜、氯、碘、硒和铁的矿物质。
41.权利要求38或权利要求40的代用食品,其中所说的代用食品给予人或动物。
42.一种治疗患有由多不饱和脂肪酸摄取或合成不足导致的疾病的病人的方法,它包括将权利要求38所说的代用食品或权利要求34所说的保健食品给予所说的病人,给予的量足以产生所说的治疗效果。
43.权利要求42的方法,其中所说的代用食品或保健食品经肠道或不肠道给药。
44.一种含有权利要求22所说的植物油或其部分的化妆品。
45.权利要求44的化妆品,其中所说的化妆品在表面使用。
46.权利要求24的药物组合物,其中所说的药物组合物给予人或动物。
47.一种含有权利要求22所说的植物油或其部分的动物饲料。
48.一种包含选自SEQ ID NO:38-SEQ ID NO:44的核苷酸序列的分离核苷酸序列,其中所说的核苷酸序列在一种植物细胞中表达。
49.权利要求20的方法,其中所说的真菌是被孢霉属的种。
50.权利要求49的方法,其中所说的真菌是高山被孢霉。
51.一种选自SEQ ID NO:49-SEQ ID NO:50的分离核苷酸序列,其中所说的序列在一种植物细胞中表达。
Applications Claiming Priority (8)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US08/833,610 | 1997-04-11 | ||
US08/834,655 US5968809A (en) | 1997-04-11 | 1997-04-11 | Methods and compositions for synthesis of long chain poly-unsaturated fatty acids |
US08/833,610 US5972664A (en) | 1997-04-11 | 1997-04-11 | Methods and compositions for synthesis of long chain poly-unsaturated fatty acids |
US08/834,655 | 1997-04-11 | ||
US08/834,033 US6075183A (en) | 1997-04-11 | 1997-04-11 | Methods and compositions for synthesis of long chain poly-unsaturated fatty acids in plants |
US08/834,033 | 1997-04-11 | ||
US08/956,985 | 1997-10-24 | ||
US08/956,985 US6051754A (en) | 1997-04-11 | 1997-10-24 | Methods and compositions for synthesis of long chain poly-unsaturated fatty acids in plants |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN1253588A true CN1253588A (zh) | 2000-05-17 |
Family
ID=49943076
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN98804091A Pending CN1253588A (zh) | 1997-04-11 | 1998-04-10 | 在植物中合成长链多不饱和脂肪酸的方法和组合物 |
Country Status (21)
Country | Link |
---|---|
EP (2) | EP0996732B1 (zh) |
JP (1) | JP4087460B2 (zh) |
CN (1) | CN1253588A (zh) |
AT (1) | ATE297994T1 (zh) |
AU (1) | AU720677B2 (zh) |
BG (1) | BG103798A (zh) |
BR (1) | BR9808506A (zh) |
CA (1) | CA2285939C (zh) |
DE (1) | DE69830587T2 (zh) |
DK (1) | DK0996732T3 (zh) |
ES (2) | ES2403154T3 (zh) |
HU (1) | HUP0001517A3 (zh) |
IL (1) | IL132148A0 (zh) |
IN (1) | IN1998KO00636A (zh) |
NO (1) | NO994926L (zh) |
NZ (1) | NZ337459A (zh) |
PL (1) | PL336077A1 (zh) |
PT (2) | PT996732E (zh) |
SK (1) | SK139999A3 (zh) |
TR (1) | TR199902474T2 (zh) |
WO (1) | WO1998046764A1 (zh) |
Cited By (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1302110C (zh) * | 2005-06-23 | 2007-02-28 | 复旦大学 | 水稻Osfad8编码序列及其应用 |
CN100339481C (zh) * | 2005-03-17 | 2007-09-26 | 东北师范大学 | 应用基因沉默技术提高大豆和花生的种子油酸含量的方法 |
US7893321B2 (en) | 2005-05-23 | 2011-02-22 | Arcadia Biosciences, Inc. | Safflower with elevated gamma-linolenic acid |
CN104839353A (zh) * | 2015-04-30 | 2015-08-19 | 安庆市顺民粮油贸易有限公司 | 一种幼儿保健食用油及其制作方法 |
CN105400838A (zh) * | 2015-12-30 | 2016-03-16 | 厦门金达威集团股份有限公司 | 一种生物酶催化制备磷脂型dha的方法 |
CN113957105A (zh) * | 2008-11-18 | 2022-01-21 | 联邦科学技术研究组织 | 产生ω-3脂肪酸的酶和方法 |
Families Citing this family (99)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5968809A (en) | 1997-04-11 | 1999-10-19 | Abbot Laboratories | Methods and compositions for synthesis of long chain poly-unsaturated fatty acids |
US6432684B1 (en) * | 1997-04-11 | 2002-08-13 | Abbott Laboratories | Human desaturase gene and uses thereof |
US6566583B1 (en) * | 1997-06-04 | 2003-05-20 | Daniel Facciotti | Schizochytrium PKS genes |
GB9724783D0 (en) | 1997-11-24 | 1998-01-21 | Inst Arable Crops Research | Novel polypeptides |
US6838594B1 (en) | 1998-03-20 | 2005-01-04 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Limnanthes oil genes |
EP2006385A3 (en) * | 1998-03-20 | 2008-12-31 | E.I. Du Pont De Nemours And Company | Limnanthes oil genes |
DE69937050T2 (de) | 1998-06-12 | 2008-05-29 | Calgene Llc, Davis | Polyungesättigte fettsäuren in pflanzen |
DE19836339B4 (de) | 1998-08-11 | 2011-12-22 | N.V. Nutricia | Kohlenhydratmischung |
AU1097900A (en) * | 1998-10-05 | 2000-04-26 | Abbott Laboratories | Delta 6 and delta 12 desaturases and modified fatty acid biosynthesis and products produced therefrom |
US6825017B1 (en) | 1998-12-07 | 2004-11-30 | Washington State University Research Foundation | Desaturases and methods of using them for synthesis of polyunsaturated fatty acids |
CA2791961A1 (en) * | 1998-12-07 | 2000-06-15 | Washington State University Research Foundation | Desaturases and methods of using them for synthesis of polyunsaturated fatty acids |
US8791327B2 (en) | 1998-12-07 | 2014-07-29 | Washington State University Research Foundation | Desaturases and methods of using them for synthesis of polyunsaturated fatty acids |
US7247461B2 (en) | 1999-01-14 | 2007-07-24 | Martek Biosciences Corporation | Nucleic acid molecule encoding ORFA of a PUFA polyketide synthase system and uses thereof |
US7271315B2 (en) | 1999-01-14 | 2007-09-18 | Martek Biosciences Corporation | PUFA polyketide synthase systems and uses thereof |
US7217856B2 (en) | 1999-01-14 | 2007-05-15 | Martek Biosciences Corporation | PUFA polyketide synthase systems and uses thereof |
US7211418B2 (en) | 1999-01-14 | 2007-05-01 | Martek Biosciences Corporation | PUFA polyketide synthase systems and uses thereof |
US8003772B2 (en) | 1999-01-14 | 2011-08-23 | Martek Biosciences Corporation | Chimeric PUFA polyketide synthase systems and uses thereof |
AU776447B2 (en) | 1999-06-07 | 2004-09-09 | Basf Plant Science Gmbh | Delta6-acetylenase and delta6-desaturase from ceratodon purpureus |
CA2378423A1 (en) * | 1999-07-06 | 2001-01-11 | Basf Plant Science Gmbh | Plants expressing .delta.6-desaturase genes and oils from these plants containing pufas and method for producing unsaturated fatty acids |
DE10030976A1 (de) | 2000-06-30 | 2002-01-10 | Basf Ag | DELTA6-Desaturasegene exprimierende Pflanzen und PUFAS enthaltende Öle aus diesen Pflanzen und ein Verfahren zur Herstellung ungesättigter Fettsäuren |
AU6091600A (en) * | 1999-07-12 | 2001-01-30 | Ohio University | Mammalian cells expressing desaturases and elongases |
DE60020738T2 (de) * | 1999-12-23 | 2006-03-16 | Adisseo France S.A.S. | Teilchenförmige vitaminzubereitung |
AU2001239244B2 (en) | 2000-02-09 | 2006-06-08 | Basf Aktiengesellschaft | Novel elongase gene and method for producing multiple-unsaturated fatty acids |
EP1911837B1 (en) | 2000-09-28 | 2011-05-25 | Bioriginal Food & Science Corp. | FAD5-2 fatty acid desaturase family member and uses thereof |
DE10102338A1 (de) * | 2001-01-19 | 2002-07-25 | Basf Plant Science Gmbh | Verfahren zur Expression von Biosynthesegenen in pflanzlichen Samen unter Verwendung von neuen multiplen Expressionskonstrukten |
US6635451B2 (en) * | 2001-01-25 | 2003-10-21 | Abbott Laboratories | Desaturase genes and uses thereof |
GB0107510D0 (en) | 2001-03-26 | 2001-05-16 | Univ Bristol | New elongase gene and a process for the production of -9-polyunsaturated fatty acids |
US7045683B2 (en) * | 2001-05-04 | 2006-05-16 | Abbott Laboratories | Δ4-desaturase genes and uses thereof |
US7211656B2 (en) † | 2002-01-30 | 2007-05-01 | Abbott Laboratories | Desaturase genes, enzymes encoded thereby, and uses thereof |
EP1472357B1 (de) | 2002-01-30 | 2009-12-16 | BASF Plant Science GmbH | Verfahren zur herstellung mehrfach ungesättigter fettsäuren mittels eines neuen elongase-gens |
GB2385852A (en) | 2002-02-27 | 2003-09-03 | Rothamsted Ex Station | Delta 6-desaturases from Primulaceae |
DE10219203A1 (de) | 2002-04-29 | 2003-11-13 | Basf Plant Science Gmbh | Verfahren zur Herstellung mehrfach ungesättigter Fettsäuren in Pflanzen |
FR2844142B1 (fr) | 2002-09-11 | 2007-08-17 | Bayer Cropscience Sa | Plantes transformees a biosynthese de prenylquinones amelioree |
FR2848570B1 (fr) | 2002-12-12 | 2005-04-01 | Bayer Cropscience Sa | Cassette d'expression codant pour une 5-enol pyruvylshikimate-3-phosphate synthase (epsps) et plantes tolerantes aux herbicides la contenant |
BR0317304A (pt) | 2002-12-19 | 2005-11-08 | Univ Bristol | Processo para a produção de compostos, sequência de ácido nucleico isolada, sequência de aminoácidos, construção gênica, vetor, e, organismo |
US20040172682A1 (en) * | 2003-02-12 | 2004-09-02 | Kinney Anthony J. | Production of very long chain polyunsaturated fatty acids in oilseed plants |
US8084074B2 (en) | 2003-02-12 | 2011-12-27 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Production of very long chain polyunsaturated fatty acids in oil seed plants |
US7537920B2 (en) | 2003-02-27 | 2009-05-26 | Basf Plant Science Gmbh | Method for the production of polyunsaturated fatty acids |
WO2004087902A2 (de) | 2003-03-31 | 2004-10-14 | University Of Bristol | Neue pflanzliche acyltransferasen spezifisch für langkettige mehrfach ungesättigte fettsäuren |
AU2004227075B8 (en) | 2003-04-08 | 2009-07-16 | Basf Plant Science Gmbh | Delta-4 Desaturases from Euglena gracilis, expressing plants, and oils containing PUFA |
EP2172536B1 (de) | 2003-08-01 | 2016-05-04 | BASF Plant Science GmbH | Verfahren zur Herstellung mehrfach ungesättigter Fettsäuren in transgenen Organismen |
US11952581B2 (en) | 2003-08-01 | 2024-04-09 | Basf Plant Science Gmbh | Process for the production of polyunsaturated fatty acids in transgenic organisms |
DE602004021001D1 (de) | 2003-08-21 | 2009-06-18 | Monsanto Technology Llc | Fettsäuredesaturasen aus primula |
WO2005047480A2 (en) | 2003-11-12 | 2005-05-26 | E.I. Dupont De Nemours And Company | Delta-15 desaturases suitable for altering levels of polyunsaturated fatty acids in oleaginous plants and yeast |
CA2549097C (en) | 2003-12-17 | 2013-03-26 | Suntory Limited | Method of producing arachidonic acid-containing plants |
CN1930277B (zh) | 2004-02-27 | 2011-02-02 | 巴斯福植物科学有限公司 | 在转基因植物中产生多不饱和脂肪酸的方法 |
US7777098B2 (en) | 2004-02-27 | 2010-08-17 | Basf Plant Science Gmbh | Method for producing unsaturated ω-3-fatty acids in transgenic organisms |
US8378186B2 (en) | 2004-04-16 | 2013-02-19 | Monsanto Technology Llc | Expression of fatty acid desaturases in corn |
CN103451246B (zh) | 2004-04-22 | 2018-02-16 | 联邦科学技术研究组织 | 用重组细胞合成长链多不饱和脂肪酸 |
BRPI0510132A (pt) | 2004-04-22 | 2007-10-02 | Commw Scient Ind Res Org | sìntese de ácidos graxos poliinsaturados de cadeia longa por células recombinantes |
EP1597978A1 (en) | 2004-05-17 | 2005-11-23 | Nutricia N.V. | Synergism of GOS and polyfructose |
US20050266051A1 (en) * | 2004-05-27 | 2005-12-01 | The Procter & Gamble Company | Pet food compositions and methods |
CA2568689A1 (en) | 2004-06-04 | 2005-12-15 | Fluxome Sciences A/S | Metabolically engineered cells for the production of polyunsaturated fatty acids |
US8252769B2 (en) | 2004-06-22 | 2012-08-28 | N. V. Nutricia | Intestinal barrier integrity |
WO2006012326A1 (en) | 2004-06-25 | 2006-02-02 | E.I. Dupont De Nemours And Company | Delta-8 desaturase and its use in making polyunsaturated fatty acids |
EP1634599A1 (en) | 2004-08-20 | 2006-03-15 | N.V. Nutricia | Iimmune stimulatory infant nutrition |
WO2006092449A2 (en) | 2005-03-02 | 2006-09-08 | Metanomics Gmbh | Process for the production of fine chemicals |
DE102005013779A1 (de) | 2005-03-22 | 2006-09-28 | Basf Plant Science Gmbh | Verfahren zur Herstellung von mehrfach ungesättigten C20- und C22-Fettsäuren mit mindestens vier Doppelbindungen in transgenen Pflanzen |
DE102005038036A1 (de) | 2005-08-09 | 2007-02-15 | Basf Plant Science Gmbh | Verfahren zur Herstellung von Arachidonsäure und/oder Eicosapentaensäure in transgenen Nutzpflanzen |
GB2431158A (en) | 2005-10-13 | 2007-04-18 | Rothamsted Res Ltd | Process for the production of arachidonic and/or eicosapentaenoic acid |
DE102005052551A1 (de) | 2005-11-02 | 2007-05-16 | Rothamsted Res Harpenden | Verfahren zur Herstellung von y-Linolensäure und/oder Stearidonsäure in transgenen Brassicaceae und Linaceae |
US20070118929A1 (en) | 2005-11-23 | 2007-05-24 | Damude Howard G | Delta-9 elongases and their use in making polyunsaturated fatty acids |
GB0603160D0 (en) | 2006-02-16 | 2006-03-29 | Rothamsted Res Ltd | Nucleic acid |
AR059376A1 (es) | 2006-02-21 | 2008-03-26 | Basf Plant Science Gmbh | Procedimiento para la produccion de acidos grasos poliinsaturados |
EP2004835A4 (en) | 2006-03-15 | 2011-02-23 | Martek Biosciences Corp | MERHFACH UNSATURATED FATTY ACIDS CONTAINING PLANT SEA OILS |
US8629195B2 (en) | 2006-04-08 | 2014-01-14 | Bayer Materialscience Ag | Production of polyurethane foams |
US7943823B2 (en) | 2006-04-28 | 2011-05-17 | E.I. Du Pont De Nemours And Company | Delta-8 desaturase and its use in making polyunsaturated fatty acids |
US7695950B2 (en) | 2006-05-17 | 2010-04-13 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Δ5 desaturase and its use in making polyunsaturated fatty acids |
US7678560B2 (en) | 2006-05-17 | 2010-03-16 | E.I. Du Pont De Nemours And Company | Δ 5 desaturase and its use in making polyunsaturated fatty acids |
US9029111B2 (en) | 2006-08-24 | 2015-05-12 | Basf Plant Science Gmbh | Isolation and characterization of a novel pythium omega 3 desaturase with specificity to all omega 6 fatty acids longer than 18 carbon chains |
BRPI0716075A2 (pt) | 2006-08-29 | 2013-08-06 | Commw Scient Ind Res Org | sÍntese de Ácidos graxos |
EP2177605B1 (de) | 2006-10-06 | 2014-12-10 | BASF Plant Science GmbH | Delta-5 Desaturasen und Verfahren zur Herstellung mehrfach ungesättigter Fettsäuren in transgenen nicht-humanen Organismen |
CA2663768A1 (en) | 2006-10-23 | 2008-05-29 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Delta-8 desaturases and their use in making polyunsaturated fatty acids |
US7790156B2 (en) | 2007-04-10 | 2010-09-07 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Δ-8 desaturases and their use in making polyunsaturated fatty acids |
US8119860B2 (en) | 2007-04-16 | 2012-02-21 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Delta-9 elongases and their use in making polyunsaturated fatty acids |
US8957280B2 (en) | 2007-05-03 | 2015-02-17 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Delta-5 desaturases and their use in making polyunsaturated fatty acids |
EP2176416B1 (de) | 2007-07-31 | 2016-03-16 | BASF Plant Science GmbH | Elongasen und verfahren zur herstellung mehrfach ungesättigter fettsäuren in transgenen organismen |
AU2008337600A1 (en) | 2007-12-14 | 2009-06-25 | Basf Plant Science Gmbh | Promoters from brassica napus for seed specific gene expression |
RU2489849C2 (ru) | 2007-12-20 | 2013-08-20 | ДАУ АГРОСАЙЕНСИЗ ЭлЭлСи | Подсолнечник с низким содержанием насыщенных жиров и соответствующие способы |
AU2009242130B2 (en) | 2008-04-30 | 2013-09-19 | Rothamsted Research Ltd. | Desaturase and method for the production of polyunsaturated fatty acids in transgenic organisms |
AU2009265795B2 (en) | 2008-07-01 | 2014-12-11 | Basf Plant Science Gmbh | Promoters from Brassica napus for seed specific gene expression |
DE112009002048T5 (de) | 2008-08-26 | 2012-01-26 | Basf Plant Science Gmbh | Nukleinsäure, die Desaturasen kodieren, und modifiziertes Planzenöl |
DE112009003708T5 (de) | 2008-12-12 | 2012-09-13 | Basf Plant Science Gmbh | Desaturasen und Verfahren zur Herstellung mehrfach ungesättigter Fettsäuren in transgenenOrganismen |
AR074941A1 (es) | 2009-01-07 | 2011-02-23 | Bayer Cropscience Sa | Plantas transplastomicas exentas de marcador de seleccion |
TWI600762B (zh) | 2009-03-19 | 2017-10-01 | Dsm智慧財產有限公司 | 多不飽和脂肪酸合成酶核酸分子及多肽,組成物,以及其製造方法與用途 |
AU2010247438B2 (en) | 2009-05-13 | 2015-01-29 | Basf Plant Science Company Gmbh | Acyltransferases and uses thereof in fatty acid production |
US11236351B2 (en) | 2010-05-17 | 2022-02-01 | Dow Agrosciences Llc | Production of DHA and other LC PUFAs in plants |
NO2585603T3 (zh) | 2010-06-25 | 2018-05-19 | ||
JP2013535988A (ja) | 2010-08-26 | 2013-09-19 | イー・アイ・デュポン・ドウ・ヌムール・アンド・カンパニー | 変異hpggモチーフおよびhdashモチーフδ5デサチュラーゼおよび多価不飽和脂肪酸の製造におけるそれらの使用 |
TW201307553A (zh) | 2011-07-26 | 2013-02-16 | Dow Agrosciences Llc | 在植物中生產二十二碳六烯酸(dha)及其他長鏈多元不飽和脂肪酸(lc-pufa)之技術 |
JP2015500639A (ja) * | 2011-11-29 | 2015-01-08 | ディグニティ サイエンシス リミテッド | 20−炭素脂肪酸を含む組成物ならびにその製造方法および使用方法 |
ES2769448T3 (es) | 2012-04-12 | 2020-06-25 | Rothamsted Res Limited | Producción de ácidos grasos poliinsaturados omega-3 de cadena larga |
ES2636487T3 (es) | 2012-06-15 | 2017-10-05 | Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation | Producción de ácidos grasos poliinsaturados de cadena larga en células vegetales |
DK2861727T3 (en) | 2012-06-19 | 2018-06-14 | Du Pont | MUTERED ACYL-COA: LYSOPHOSPHATIDYLCHOLINE ACYL TRANSFERASES |
GB201217524D0 (en) | 2012-10-01 | 2012-11-14 | Rothamsted Res Ltd | Recombinant organisms |
EA037817B1 (ru) | 2013-12-18 | 2021-05-25 | Коммонвелт Сайнтифик Энд Индастриэл Рисерч Организэйшн | Экстрагированный растительный липид, содержащий длинноцепочечные полиненасыщенные жирные кислоты |
EP3160482A4 (en) | 2014-06-27 | 2018-02-14 | Commonwealth Scientific and Industrial Research Organisation | Lipid comprising docosapentaenoic acid |
CN108410916A (zh) * | 2018-05-30 | 2018-08-17 | 湖北福星生物科技有限公司 | 花生四烯酸油脂的生产方法 |
CN111317068A (zh) * | 2020-01-15 | 2020-06-23 | 广州市优百特饲料科技有限公司 | 饲用opo母乳结构脂及其制备方法及其应用 |
Family Cites Families (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
PH31293A (en) * | 1991-10-10 | 1998-07-06 | Rhone Poulenc Agrochimie | Production of y-linolenic acid by a delta6-desaturage. |
US5614393A (en) * | 1991-10-10 | 1997-03-25 | Rhone-Poulenc Agrochimie | Production of γ-linolenic acid by a Δ6-desaturase |
JPH0614667A (ja) * | 1992-03-13 | 1994-01-25 | Lubrizol Corp:The | デサチュラーゼを使用しての植物油の改変 |
WO1994011516A1 (en) * | 1992-11-17 | 1994-05-26 | E.I. Du Pont De Nemours And Company | Genes for microsomal delta-12 fatty acid desaturases and related enzymes from plants |
WO1994018337A1 (en) * | 1993-02-05 | 1994-08-18 | Monsanto Company | Altered linolenic and linoleic acid content in plants |
US6310194B1 (en) * | 1994-09-26 | 2001-10-30 | Carnegie Institution Of Washington | Plant fatty acid hydroxylases |
-
1998
- 1998-04-10 TR TR1999/02474T patent/TR199902474T2/xx unknown
- 1998-04-10 IL IL13214898A patent/IL132148A0/xx unknown
- 1998-04-10 PT PT98918174T patent/PT996732E/pt unknown
- 1998-04-10 PT PT50123835T patent/PT1598422E/pt unknown
- 1998-04-10 BR BR9808506-9A patent/BR9808506A/pt not_active Application Discontinuation
- 1998-04-10 DK DK98918174T patent/DK0996732T3/da active
- 1998-04-10 CA CA2285939A patent/CA2285939C/en not_active Expired - Fee Related
- 1998-04-10 SK SK1399-99A patent/SK139999A3/sk unknown
- 1998-04-10 ES ES05012383T patent/ES2403154T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-04-10 PL PL98336077A patent/PL336077A1/xx unknown
- 1998-04-10 AT AT98918174T patent/ATE297994T1/de active
- 1998-04-10 ES ES98918174T patent/ES2245030T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-04-10 DE DE69830587T patent/DE69830587T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-04-10 EP EP98918174A patent/EP0996732B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-04-10 CN CN98804091A patent/CN1253588A/zh active Pending
- 1998-04-10 EP EP05012383A patent/EP1598422B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-04-10 HU HU0001517A patent/HUP0001517A3/hu unknown
- 1998-04-10 NZ NZ337459A patent/NZ337459A/xx unknown
- 1998-04-10 AU AU71147/98A patent/AU720677B2/en not_active Ceased
- 1998-04-10 WO PCT/US1998/007421 patent/WO1998046764A1/en active IP Right Grant
- 1998-04-10 JP JP54417598A patent/JP4087460B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1998-04-13 IN IN636KO1998 patent/IN1998KO00636A/en unknown
-
1999
- 1999-10-08 NO NO994926A patent/NO994926L/no not_active Application Discontinuation
- 1999-10-11 BG BG103798A patent/BG103798A/xx unknown
Cited By (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN100339481C (zh) * | 2005-03-17 | 2007-09-26 | 东北师范大学 | 应用基因沉默技术提高大豆和花生的种子油酸含量的方法 |
US7893321B2 (en) | 2005-05-23 | 2011-02-22 | Arcadia Biosciences, Inc. | Safflower with elevated gamma-linolenic acid |
US8192964B2 (en) | 2005-05-23 | 2012-06-05 | Arcadia Biosciences, Inc. | Safflower with elevated gamma-linolenic acid |
CN101321872B (zh) * | 2005-05-23 | 2012-09-05 | 阿凯迪亚生物科学公司 | 高γ-亚麻酸红花 |
CN1302110C (zh) * | 2005-06-23 | 2007-02-28 | 复旦大学 | 水稻Osfad8编码序列及其应用 |
CN113957105A (zh) * | 2008-11-18 | 2022-01-21 | 联邦科学技术研究组织 | 产生ω-3脂肪酸的酶和方法 |
CN104839353A (zh) * | 2015-04-30 | 2015-08-19 | 安庆市顺民粮油贸易有限公司 | 一种幼儿保健食用油及其制作方法 |
CN105400838A (zh) * | 2015-12-30 | 2016-03-16 | 厦门金达威集团股份有限公司 | 一种生物酶催化制备磷脂型dha的方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
DE69830587D1 (de) | 2005-07-21 |
EP1598422A3 (en) | 2005-12-28 |
HUP0001517A3 (en) | 2002-04-29 |
BG103798A (en) | 2000-05-31 |
AU7114798A (en) | 1998-11-11 |
EP1598422B1 (en) | 2013-01-02 |
HUP0001517A1 (hu) | 2000-08-28 |
WO1998046764A1 (en) | 1998-10-22 |
NO994926D0 (no) | 1999-10-08 |
PL336077A1 (en) | 2000-06-05 |
PT1598422E (pt) | 2013-04-03 |
TR199902474T2 (xx) | 2000-02-21 |
DE69830587T2 (de) | 2006-05-24 |
AU720677B2 (en) | 2000-06-08 |
ES2403154T3 (es) | 2013-05-14 |
CA2285939A1 (en) | 1998-10-22 |
JP4087460B2 (ja) | 2008-05-21 |
NZ337459A (en) | 2000-07-28 |
JP2001527395A (ja) | 2001-12-25 |
EP0996732A1 (en) | 2000-05-03 |
BR9808506A (pt) | 2000-05-23 |
SK139999A3 (en) | 2000-05-16 |
EP0996732B1 (en) | 2005-06-15 |
ATE297994T1 (de) | 2005-07-15 |
NO994926L (no) | 1999-11-30 |
MX9909328A (es) | 2000-04-30 |
IN1998KO00636A (zh) | 2005-03-18 |
EP1598422A2 (en) | 2005-11-23 |
CA2285939C (en) | 2010-06-15 |
IL132148A0 (en) | 2001-03-19 |
PT996732E (pt) | 2005-11-30 |
DK0996732T3 (da) | 2005-10-17 |
ES2245030T3 (es) | 2005-12-16 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN1253588A (zh) | 在植物中合成长链多不饱和脂肪酸的方法和组合物 | |
CN1253587A (zh) | 合成长链多不饱和脂肪酸的方法和组合物 | |
CN1252099A (zh) | 合成长链多不饱和脂肪酸的方法和组合物 | |
KR101138631B1 (ko) | 진균 기원의 지방산 데사투라제 | |
WO1998046764A9 (en) | Methods and compositions for synthesis of long chain polyunsaturated fatty acids in plants | |
US11034983B2 (en) | Expression of fatty acid desaturases in corn | |
WO1998046765A9 (en) | Methods and compositions for synthesis of long chain polyunsaturated fatty acids | |
MXPA99009329A (en) | Methods and compositions for synthesis of long chain polyunsaturated fatty acids | |
CN103756972B (zh) | 来自半片藻属的脂肪酸脱饱和酶的利用 | |
WO1998046763A9 (en) | Methods and compositions for synthesis of long chain polyunsaturated fatty acids | |
CN1551914A (zh) | 脂肪酸去饱和酶家族成员fad4、fad5、fad5-2和fad6及它们的应用 | |
CN1871353A (zh) | 来自报春的脂肪酸去饱和酶 | |
US7745694B1 (en) | Methods and compositions for synthesis of long chain polyunsaturated fatty acids in plants | |
MXPA99009328A (es) | Métodos y composiciones para la síntesis deácidos grasos poli-insaturados de cadena larga en plantas | |
MXPA99009327A (es) | Metodos y composiciones para la sintesis de acidos grasos poli-insaturados de cadena larga | |
CN1703144A (zh) | 来源于真菌的脂肪酸脱氢酶 | |
CZ358299A3 (cs) | Izolovaná nukleová kyselina |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |