MXPA99009328A - Métodos y composiciones para la síntesis deácidos grasos poli-insaturados de cadena larga en plantas - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere a composiciones y métodos para prepararácidos grasos poli-insaturados de cadena larga en plantas, partes de plantas y células vegetales, tales como hojas, raíces, frutos y semillas. Las secuencias y construcciones deácido nucleico que codifican desaturasas deácido nucleico, incluyendo:delta5-desaturasas, delta6-desaturasas y delta12-desaturasas, se usan para generar plantas, partes de plantas y células vegetales transgénicas que contienen y expresan uno o más transgenes que codifican una o más desaturasas. La expresión de las desaturasas con diferentes especificidades de sustrato en el sistema vegetal permiten la producción a gran escala deácidos grasos poli-insaturados tales como elácido docosahexanoico,ácido eicosapentaenoico,ácido alfa-linolénico,ácido gama-linolénico,ácido araquidónico y similares para la modificación del perfil deácidos grasos de vegetales partes de la planta y tejidos vegetales. La manipulación de los perfiles deácidos grasos permite la producción de cantidades comerciales de aceites y productos vegetales novedosos.

Description

MÉTODOS Y COMPOSICIONES PARA LA SÍNTESIS DE ÁCIDOS GRASOS POLI-INSATURADOS DE CADENA LARGA EN PLANTAS INTRODUCCIÓN Campo de la Invención Esta invención se relaciona con niveles modulantes de enzimas y/o componentes de enzimas capaces de alterar la producción de ácidos grasos poli-insaturados de cadena larga (AGPI) en una planta huésped. La invención se ejemplifica mediante la producción de ácidos grasos poli- insaturados en plantas . Antecedentes Dos familias principales de ácidos grasos poli-insaturados son los ácidos grasos ?3, ejemplificados por el ácido araquidónico, y los ácidos grasos ?ß , ejemplificados por el ácido eicosapentaenoico. Los ácidos grasos poli-insaturados son componentes importantes de la membrana de plasma de la célula, en donde se pueden encontrar en formas tales como fosfolipidos . Los ácidos grasos insaturados también sirven como precursores para otras moléculas de importancia en seres humanos y animales, incluyendo las prostaciclinas, leucotrienos y prostaglandinas. Los ácidos grasos poli-insaturados son necesarios para el desarrollo adecuado, particularmente en el desarrollo del cerebro del lactante, y para la formación y reparación de tejidos.

Cuatro grandes ácidos grasos poli-insaturados de cadena larga de importancia incluyen el ácido docosahexaenoico (ADH) y el ácido eicosapentaenoico (AEP) , los cuales principalmente se encuentran en diferentes tipos de aceite de pescado, el ácido gamalinolénico (AGL) , el cual se encuentra en las semillas de varias plantas, incluyendo prímula ( Oenothera biennis) , borraja (Borago officinalis) y grosella negra (Ribes ni rum) , y el ácido estearidónico (AED) , el cual se encuentra en aceites marinos y semillas de plantas . Tanto el ácido gamalinolénico como otro ácido graso poli-'insaturado de cadena larga importante, el ácido araquidónico, se encuentran en hongos filamentosos . El ácido araquidónico se puede purificar a partir de tejidos animales que incluyen el hígado y la glándula adrenal . Para el ácido docosahexaenoico, existen varias fuentes para la producción comercial que incluyen una variedad de organismos marinos, aceites obtenidos de peces de agua marina fría, y fracciones de yema de huevo. Para el ácido araquidónico, los micro-organismos que incluyen los géneros Mortierella, Entomophthora, Phytium y Porphyridium se pueden usar para la producción comercial . Fuentes comerciales del ácido estearidónico incluyen los géneros Trichodesma y Echium . Fuentes comerciales del ácido gamalinolénico incluyen prímula, grosella negra y borraja. Sin embargo, hay varias desventajas asociadas" con la producción comercial de ácidos grasos poli- insaturados a partir de fuentes naturales. Las fuentes naturales de los ácidos grasos poli-insaturados , tales como animales y plantas, tienden a tener composiciones grasas muy heterogéneas. Las grasas obtenidas de estas fuentes por lo tanto pueden requerir mucha purificación para separar uno o más ácidos grasos poli-insaturados deseados o para producir un aceite que esté enriquecido en uno o más ácidos grasos poliinsaturados. Las fuentes naturales también se someten a fluctuaciones incontrolables en disponibilidad. Las existencias de peces pueden sufrir variación natural o se pueden agotar por sobrepesca. Las grasas de pescado tienen sabores y olores desagradables, los cuales puede ser imposible separarlos económicamente del producto deseado, y pueden volver estos productos inaceptables como complementos de alimentos. Las grasas animales, y particularmente las grasas de pescado, pueden acumular contaminantes ambientales. El clima y las enfermedades pueden causar fluctuación en el rendimiento tanto de las fuentes de peces como de plantas. La tierra de cultivo disponible para la producción de cultivos alternos que producen aceites se somete a competición de la expansión estable de las poblaciones humanas y de la necesidad creciente asociada para la producción de alimentos en el resto de la tierra cultivable. Los cultivos que producen ácidos grasos poli-insaturados, tales somo la borraja, no se han adaptado al cultivo comercial y pueden no tener buen rendimiento en monocultivo. El crecimiento de estos cultivos no es económicamente competitivo cuando se pueden cultivar otros cultivos más rentables y mejor establecidos. La fermentación a gran escala de organismos tales como Mortierella también es cara. Los tejidos animales naturales contienen bajas cantidades de ácido araquidónico y son difíciles de procesar. Micro-organismos tales como Porphyridium y Mortierella son difíciles de cultivar a escala comercial. Los complementos dietéticos y las formulaciones farmacéuticas que contienen ácidos grasos poli-insaturados pueden retener las desventajas de la fuente del ácido graso poli-insaturado. Los complementos tales como las cápsulas de aceite de pescado pueden contener bajos niveles del componente particular deseado y requerir así grandes dosis. Las altas dosis dan como resultado la ingestión de altos niveles de componentes no deseados, incluyendo contaminantes. Se debe tener cuidado al proporcionar complementos con ácidos grasos, ya que la sobre adición puede dar como resultado una supresión de rutas biosintéticas endógenas y conducir a la competición con otros ácidos grasos necesarios en varias fracciones lípidas in vivo, conduciendo a resultados indeseables. Por ejemplo, los esquimales que tienen una dieta alta en ácidos grasos ?3 tienen una tendencia creciente a sangrar (Patente de los Estados Unidos de Norteamérica número 4,874,603). Los sabores y olores desagradables de los complementos pueden hacer estos regímenes indeseables, y pueden inhibir la cooperación del paciente. Varias enzimas están involucradas en la biosíntesis de los ácidos grasos poli-insaturados. El ácido linoleico (AL, 18:2 ?9, 12) se produce a partir de ácido oleico (18:1 ?9) mediante una ?l2-desaturasa. El ácido gamalinolénico (18:3 ?6, 9, 12) se produce a partir de ácido linoleico (AL, 18:2 ?9, 12) mediante una ?6-desaturasa. La producción de ácido araquidónico (20:4 ?5, 8, 11, 14) se produce a partir de ácido dihomo-gama-linolénico (ADGL, 20:3 ?8, 11, 14) es catalizada por una ?5-desaturasa. Sin embargo, los animales no pueden desaturar más allá de la posición ?9 y por lo tanto no pueden convertir ácido oleico (18:1 ?9) en ácido linoleico (18:2 ?9, 12). De la misma forma, el ácido a-linolénico (AAL, 18:3 ?9, 12, 15) no puede ser sintetizado por los mamíferos. Otros eucariotes, incluyendo hongos y plantas, tienen enzimas que desaturan en las posiciones ?l2 y ?15. Los ácidos grasos poliinsaturados mayores de animales por lo tanto se derivan ya sea de la dieta y/o de la desaturación y alargamiento del ácido linoleico (18:2 ?9, 12) o del ácido a-linolénico (18:3 ?9, 12, 15) . Los ácidos grasos poli-insaturados se considera que son útiles para fines nutrimentales, farmacéuticos, industriales, y otros. Un suministro expansivo de ácidos grasos poli-insaturados a partir de fuentes naturales y de síntesis química no es suficiente para las necesidades comerciales. Por lo tanto es interesante obtener material genético involucrado en la biosíntesis de ácidos grasos poliinsaturados a partir de especies que producen naturalmente estos ácidos grasos y expresar el material aislado solo o en combinación en un sistema heterólogo el cual se pueda manipular para permitir la producción de cantidades comerciales de los ácidos grasos poli-insaturados.

La producción de ácido gama-linolénico mediante una ?6-desaturasa se describe en la Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número: 5,552,306 y la Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número: 5,614,393. La producción de ácido 8, ll-eicosadienoico usando Mortierella alpina se describe en la Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número: 5,376,541. La producción de ácido docosahexaenoico mediante dinoflagelados se describe en la Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número: 5,407,957. La clonación de una ?6-desaturasa a partir de borraja se describe en la publicación del TCP WO 96/21022. La clonación de ?9-desaturasas se describe en las solicitudes de Patentes publicadas del TCP WO 91/13972, EP 0 550 162 Al, EP 0 561 569 A2 , EP 0 644 263 A2 , y EP 0 736 598 Al, y en la Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número: 5,057,419. La clonación de ?12-desaturasas a partir de varios organismos se describe en la publicación del TCP WO 94/11516 y la Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número: 5,443,974. La clonación de ?l5-desaturasas a partir de varios organismos se describe en la publicación del TCP WO 93/11245. Una desaturasa de proteína portadora ?6-palmitoil-acilo de Thuitiberqia alata y su expresión en E. coli se describe en la Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número: 5,614,400. La expresión de una desaturasa estearilo-ACP de frijol de soya en embriones transgénicos de frijol de soya usando un promotor 35S se describe en la Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número: 5,443,974. Sumario de la Invención Se proporcionan novedosas composiciones y métodos para la preparación de ácidos grasos de cadena larga poli-insaturados y desaturasas en plantas y en células de plantas. Los métodos involucran cultivar una célula vegetal huésped de interés transformada con una cinta de expresión funcional en una célula vegetal huésped, comprendiendo la cinta de expresión una región reguladora de iniciación de transcripción y traducción, unida en la estructura de lectura 5' a una secuencia de ADN que codifica un polipéptido desaturasa capaz de modular la producción de ácidos grasos poli-insaturados. La expresión del polipéptido desaturasa proporciona una alteración en el perfil de los ácidos grasos poli-insaturados de las células de la planta huésped como resultado de concentraciones alteradas de enzimas involucradas en la biosíntesis de los ácidos grasos poli-insaturados. De particular interés es el control selectivo de la producción de ácidos grasos poliinsaturados en los tejidos de las plantas y/o partes de las plantas tales como hojas, raíces, frutas y semillas. La invención se puede usar por ejemplo en la producción a gran escala de ácido docosahexaenoico, ácido eicosapentaenoico, ácido araquidónico y ácido gama-linolénico y para la modificación del perfil de los ácidos grasos de los tejidos y/o partes de plantas comestibles. La presente invención además incluye una secuencia de nucleótidos purificada o secuencia de polipéptidos que se relaciona sustancialmente o es homologa a las secuencias de nucleótidos y péptidos presentadas en la SEQ ID NO:l - SEQ ID NO: 52. La presente invención se dirige además a métodos para usar las secuencias presentadas en SEQ ID NO:l hasta SEQ ID NO: 40 como sondas para identificar secuencias relacionadas, como componentes de los sistemas de expresión y como componentes de los sistemas útiles para producir aceite transgénico. La presente invención se dirige además a fórmulas, complementos dietéticos o sustitutos dietéticos en forma de un líquido o un sólido que contienen los ácidos grasos de cadena larga de la invención. Estas fórmulas y suplementos se pueden administrar a un humano o a un animal.

Las fórmulas y suplementos de la invención también pueden comprender cuando menos un macronutriente seleccionado del grupo que consiste en aceite de coco, aceite de soya, aceite de cañóla, mono y diglicéridos, glucosa, lactosa comestible, suero electrodializado, leche descremada electrodializada, suero de leche, proteína de soya, y otros hidrolizados de proteína. Las fórmulas de la presente invención pueden incluir además cuando menos una vitamina seleccionada del grupo que consiste en Vitaminas A, C, D, E, y complejo B; y cuando menos un mineral seleccionado del grupo que consiste en calcio, magnesio, zinc, manganeso, sodio, potasio, fósforo, cobre, cloro, yodo, selenio y hierro. La presente invención se dirige además a un método para tratar un paciente que tiene un problema causado por consumo o producción insuficiente de ácidos grasos poliinsaturados que comprende administrar al paciente un sustituto dietético de la invención en una cantidad suficiente para efectuar el tratamiento del paciente. La presente invención se dirige además a composiciones cosméticas y farmacéuticas del material de la invención. La presente invención se dirige además a aceites transgénicos en portadores farmacéuticamente aceptables. La presente invención se dirige además a suplementos nutritivos, sustancias cosméticas y fórmulas para lactantes que contienen aceites transgénicos. La presente invención se dirige además a un método para obtener biosíntesis de ácidos grasos poli-insaturados de cadena larga alterados que comprende los pasos de: cultivar un microbio que tenga células que contengan un transgén que codifica un producto de expresión del transgén el cual desatura una molécula de ácido graso en el carbono 5, 6 ó 12 del extremo carboxilo de la molécula de ácido graso, en donde el transgén se asocia operablemente con una secuencia de control de expresión, bajo condiciones mediante las cuales se expresa el transgén, mediante lo cual se altera la biosíntesis de los ácidos grasos poli-insaturados de cadena larga en las células. La presente invención se dirige además hacia las composiciones farmacéuticas que comprenden cuando menos un nutriente seleccionado del grupo que consiste en una vitamina, un mineral, un carbohidrato, una azúcar, un aminoácido, un ácido graso libre, un fosfolípido, un antioxidante, y un compuesto fenólico. Breve descripción de los Dibujos La Figura 1 muestra las rutas posibles para la síntesis de ácido araquidónico (20:4 ?5, 8, 11, 14) y ácido estearidónico (18:4 ?6, 9, 12, 15) a partir de ácido palmítico (C16) a partir de una variedad de organismos, que incluyen algas, Mortierella y humanos. Estos ácidos grasos poli- insaturados pueden servir como precursores a otras moléculas importantes para humanos y otros animales, incluyendo prostaciclinas, leucotrienos, y prostaglandinas, algunas de las cuales se muestran. La Figura 2 muestra rutas posibles para la producción de ácidos grasos poli-insaturados además de ácido araquidónico, que incluyen ácido eicosapentaenoico y ácido docosahexaenoico, de nuevo compilado a partir de una variedad de organismos. La Figura 3A-E muestra la secuencia de ADN (SEQ ID NO:l) de la ?6-desaturasa de Mortierella alpina y la secuencia de aminoácidos deducida (SEQ ID NO:2). La Figura 4 muestra una alineación de la secuencia de aminoácidos de la ?6-desaturasa de Mortierella alpina con otras ?6-desaturasas y secuencias relacionadas (SEQ ID NOS: 7, 8, 9, , 11, 12 y 13) . La Figura 5A-D muestra la secuencia de ADN (SEQ ID NO: 3) de la ?12-desaturasa de Mortierella alpina y la secuencia de aminoácidos deducida (SEQ ID NO: 4) . La Figura 6 muestra la secuencia de aminoácidos deducida (SEQ ID NO: 14) del fragmento de reacción de cadena de polimerasa (ver Ejemplo 1) . La Figura 7A-D muestra la secuencia de ADN (SEQ ID NO: 5) de la ?5-desaturasa de Mortierella alpina. La Figura 8 muestra alineaciones de la secuencia de proteínas de la ?5-desaturasa de Mortierella alpina (SEQ ID NO: 6) con otras ?6-desaturasas y secuencias relacionadas (SEQ ID N0S:15, 16, 17, 18) . La Figura 9 muestra alineación de la secuencia de proteínas de Ma29 y contig 253538a. La Figura 10 muestra alineación de la secuencia de proteínas de Ma524 y contig 253538a. Breve descripción de los listados de secuencias SEQ ID N0:1 muestra una secuencia de ADN de la ?6-desaturasa de Mortierella alpina. SEQ ID NO: 2 muestra una secuencia de aminoácidos de la ?6-desaturasa de Mortierella alpina. SEQ ID NO: 3 muestra una secuencia de ADN de la ?12-desaturasa de Mortierella alpina. SEQ ID NO: 4 muestra una secuencia de aminoácidos de la ?l2-desaturasa de Mortierella alpina. SEQ ID NO: 5 muestra una secuencia de ADN de la ?5-desaturasa de Mortierella alpina. SEQ ID NO: 6 muestra una secuencia de aminoácidos de la ?5-desaturasa de Mortierella alpina. SEQ ID NO: 7 - SEQ ID NO: 13 muestran las secuencias de aminoácidos que se relacionan con ?6-desaturasa de Mortierella alpina. SEQ ID NO: 14 muestra una secuencia de aminoácidos deducida del fragmento de reacción de cadena de polimerasa del Ejemplo 1. SEQ ID NO: 15 - SEQ ID NO: 18 muestran las secuencias de aminoácidos que se relacionan con ?5- y ?6-desaturasas de Mortierella alpina. SEQ ID NO: 19 y SEQ ID NO: 30 muestran secuencias de cebador de reacción de cadena de polimerasa. SEQ ID NO:31-SEQ ID NO: 37 muestra secuencias de nucleótidos humanas. SEQ ID NO:38-SEQ ID NO: 44 muestra secuencias de péptidos humanas. SEQ ID NO: 45 y SEQ ID NO: 46 muestran la secuencia de nucleótidos y la secuencia de aminoácidos de una desaturasa de Dictyostelium discoideum. SEQ ID NO: 47-50 muestran la secuencia de nucleótidos y aminoácidos deducidas de una clona de ADNc de Schizochytrium. Descripción detallada de la invención Con el fin de asegurar un entendimiento completo de la invención, se proporcionan las siguientes definiciones: ?5-Desaturasa: ?5 desaturasa es una enzima que introduce un enlace doble entre los carbonos 5 y 6 del extremo carboxilo de una molécula de ácido graso. ?6-Desaturasa: ?6-desaturasa es una enzima que introduce un enlace doble entre los carbonos 6 y 7 del extremo carboxilo de una molécula de ácido graso. ?9-Desaturasa: ?9-desaturasa es una enzima que introduce un enlace doble entre los carbonos 9 y 10 del extremo carboxilo de una molécula de ácido graso. ?l2-Desaturasa: ?l2-desaturasa es una enzima que introduce un enlace doble entre los carbonos 12 y 13 del extremo carboxilo de una molécula de ácido graso. Ácidos Grasos: Los ácidos grasos son una clase de compuestos que contienen una cadena de hidrocarburos larga y un grupo carboxilato terminal. Los ácidos grasos incluyen los siguientes: Tomando en cuenta estas definiciones, la presente invención se dirige a novedosas secuencias de ADN, construcciones de ADN, métodos y composiciones que se proporcionan para permitir la modificación del contenido de ácido graso de cadena larga poli-insaturado de células de plantas. Las células de plantas se transforman con una cinta de expresión que comprende un ADN que codifica un polipéptido capaz de aumentar la cantidad de uno o más ácidos grasos poliinsaturados en una célula vegetal. Deseablemente, las construcciones de integración se pueden preparar para que proporcionen la integración de la cinta de expresión en el genoma de una célula huésped. Las células huéspedes se manipulan para expresar una transcripción sentido o antisentido de un ADN que codifica un polipéptido (s) que tiene actividad desaturasa. Por "desaturasa" se entiende un polipéptido que puede desaturar uno o más ácidos grasos para producir ácido graso mono o poli-insaturado o precursor de los mismos de interés. Por "polipéptido" se entiende cualquier cadena de aminoácidos, independiente de la longitud o modificación posttraducción, por ejemplo, glicosilación o fosforilación. El (los) sustrato (s) para la enzima expresada se pueden producir por la célula huésped o se pueden suministrar exógenamente. Para lograr la expresión en una célula huésped, el ADN transformado se asocia operablemente con regiones de iniciación y de terminación reguladora de transcripción y traducción que son funcionales en la célula huésped. Las construcciones que comprenden el gen que se va a expresar pueden proporcionar integración en el genoma de la célula huésped o pueden replicarse autónomamente en la célula huésped. Para la producción de ácido linoleico, las cintas de expresión generalmente usados incluyen una cinta que proporciona actividad ?12-desaturasa, particularmente en una célula huésped que produce o que puede recoger ácido oleico. Para la producción de ácido alfa-linolénico, las cintas de expresión generalmente usados incluyen una cinta que proporciona actividad ?l5- o ?3-desaturasa, particularmente en una célula huésped la cual produce o puede recoger ácido linoleico. Para la producción de ácido gamalinolénico o ácido estearidónico, las cintas de expresión generalmente usados incluyen una cinta que proporciona actividad ?6-desaturasa, particularmente en una célula huésped que produce o puede recoger ácido linoleico o ácido alfa-linolénico, respectivamente. La producción de ácidos grasos insaturados tipo ?6, tales como ácido linoleico o ácido gamalinolénico, se favorece en una planta capaz de producir ácido alfa-linolénico inhibiendo la actividad de una desaturas ?l5 o tipo ?3; esto se lleva a cabo proporcionando una cinta de expresión para una transcripción ?l5 o ?3 antisentido, o interrumpiendo un gen ?15 o ?3-desaturasa. De manera similar, la producción de ácido linoleico o ácido alfa-linolénico se favorece en una planta que tiene actividad ?6-desaturasa proporcionando una cinta de expresión para un transcrito ?6 antisentido, o interrumpiendo un gen ?6-desaturasa . La producción de ácido oleico igualmente se favorece en una planta que tiene ?l2 desaturasa proporcionando una cinta de expresión para un transcrito ?l2 antisentido, o interrumpiendo un gen ?12-desaturasa. Para la producción de ácido araquidónico, la cinta de expresión generalmente usado proporciona actividad ?5-desaturasa, particularmente en una célula huésped que produce o que puede incorporar ácido dihomo-gama-linolénico. La producción de ácidos grasos insaturados tipo ?6, tales como ácido araquidónico, se favorece en una planta capaz de producir ácido alfa-linolénico inhibiendo la actividad de una desaturasa ?l5 o de tipo ?3 ; esto se lleva proporcionando una cinta de expresión para una transcripción antisentido ?l5 o ?3 , o interrumpiendo un gen desaturasa ?l5 o 6)3. PRODUCCIÓN DE ÁCIDOS GRASOS EN PLANTA TRANSGENICA La producción de ácidos grasos poli-insaturados en plantas transgénicas ofrece varias ventajas sobre la purificación de fuentes naturales tales como peces o plantas. La producción de ácidos grasos de plantas recombinantes proporciona la capacidad de alterar el perfil de ácidos grasos que se presentan naturalmente proporcionando nuevas rutas sintéticas en el huésped o suprimiendo rutas no deseadas, aumentando de este modo los niveles de ácidos grasos poliinsaturados deseados, o formas conjugadas de los mismos, y disminuyendo los niveles de ácidos grasos poli-insaturados no deseados. La producción de ácidos grasos en plantas transgénicas también ofrece la ventaja de que la expresión de genes desaturasa en tejidos particulares y/o partes de plantas significa que niveles muy aumentados de ácidos grasos poliinsaturados deseados en esos tejidos y/o partes se pueden lograr, haciendo la recuperación de estos tejidos más económica. Por ejemplo, los ácidos grasos poli-insaturados se pueden expresar en semilla; los métodos de purificación de los ácidos grasos poli-insaturados, los componentes de aceite de semilla se pueden manipular a través de la expresión de genes desaturasa, ya sea solos o en combinación con otros genes tales como elongasas, para proporcionar aceites de semillas que tienen un perfil de ácidos grasos poliinsaturados en forma concentrada. Los aceites de semilla concentrados se pueden añadir a leches animales y/o a leches sintéticas o semi-sintéticas para servir como fórmulas para lactantes cuando es imposible el amamantamiento humano o no deseado, o en casos de desnutrición o enfermedad tanto de niños como de adultos. Para la producción de ácidos grasos poli-insaturados, dependiendo de la célula huésped, la disponibilidad del sustrato, y el (los) producto(s) final(es) deseado (s) , son interesantes varios polipéptidos, particularmente desaturasas, incluyendo los polipéptidos que catalizan la conversión del ácido esteárico en ácido oleico, ácido linoleico en ácido gamalinolénico, o ácido alfa-linolénico en ácido estearidónico, de ácido oleico en ácido linoleico, o de ácido linoleico en ácido alfa-linoleico, que incluye enzimas que desaturan en las posiciones ?6, ?9, ?12 ?l5, o ?3. Las consideraciones para elegir un polipéptido específico que tenga actividad desaturasa incluye el pH óptimo del polipéptido, ya sea que el polipéptido es una enzima que limita el régimen o un componente de la misma, o si la desaturasa usada es esencial para la síntesis de un ácido graso poli-insaturado deseado, y/o cofactores requeridos por el polipéptido. El polipéptido expresado preferiblemente tiene parámetros compatibles con el ambiente bioquímico de su ubicación en la célula huésped. Por ejemplo, el polipéptido puede tener que competir por sustrato con otras enzimas en la célula huésped. Por lo tanto, se consideran los análisis de K^. y la actividad específica del polipéptido en cuestión para determinar la conveniencia de un polipéptido dado para modificar la producción de ácidos grasos poli-insaturados en una célula huésped dada. El polipéptido usado en una situación particular es el que pueda funcionar en las condiciones presentes en la célula huésped pretendida pero de otro modo puede ser cualquier polipéptido que tenga actividad desaturasa la cual tenga la característica deseada de ser capaz de modificar la producción relativa de un ácido graso poliinsaturado deseado. Un esquema para la síntesis del ásido araquidónico (20: 4?5, 8 , 11, 14) a partir de ácido palmítico (C16) se muestra en la Figura 1. Una enzima clave en esta ruta es la ?5-desaturasa que convierte el ácido dihomo-?-linolénico (DGLA, ácido eicosatrienoico) en ácido araquidónico. La conversión de ácido a-linolénico (ALA) en ácido estearidónico mediante una ?6-desaturasa también se muestra. La producción de ácidos grasos poli-insaturados además de ácido araquidónico, incluyendo ácido eicosapentaenoico y ácido docosahexaenoico se muestra en la Figura 2. Una enzima clave en la síntesis del ácido araquidónico (20:4?5, 8, 11, 14) a partir de ácido esteárico (C18) es la ?6-desaturasa que convierte el ácido linoleico en ácido ?-linolénico. La conversión de ácido a-linolénico (AAL) en ácido estearidónico mediante una ?6-desaturasa también se muestra. Para la producción de ácido araquidónico, la secuencia de ADN usada codifica un polipéptido que tiene actividad ?5-desaturasa. En casos particulares, esto se puede acoplar con una cinta de expresión que proporciona la producción de un polipéptido que tiene actividad ?6-desaturasa y, opcionalmente, una cinta de transcripción para la producción de secuencias antisentido al producto de transcripción de la ?l5-desaturasa. La elección de la combinación de cintas usadas puede depender en parte en el perfil del ácido graso poli-insaturado de la célula huésped. Cuando la actividad ?5-desaturasa de la célula huésped es limitante, la sobre-expresión de ?5-desaturasa sola, generalmente será suficiente para proporcionar la producción de ácido araquidónico aumentada. PUENTES DE POLIPEPTIDOS QUE TIENEN ACTIVIDAD DESATURASA Una fuente de polipéptidos que tienen actividad desaturasa y oligonucleótidos que codifican estos polipéptidos son organismos que producen un ácido graso poli-insaturado deseado. Como ejemplo, los micro-organismos que tienen una capacidad para producir ácido araquidónico se pueden usar como una fuente de actividad ?5-desaturasa; micro-organismos que tienen una capacidad para producir ácido gamalinolénico o ácido estearidónico se pueden usar como una fuente de actividad ?6-y/o ?12-desaturasa. Estos micro-organismos incluyen, por ejemplo, los que pertenecen a 'los géneros Mortierella.

Conidiobolus . Pythium, Phvtophathora . Penicillium.

Porphyridium. Coidosporiu . Mucor, Fusarium. Asperqillus. Rhodotorula, y Entomophthora. Dentro del género Porphyridium. de interés particular es Porphyridium cruentum. Dentro del género Mortierella. de particular interés son Mortierella elonqata, Mortierella exigua, Mortierella hyarophila. Mortierella ramanniana. var. angulispora, y Mortierella alpina. Dentro del género Mucor, de particular interés son Mucor circinelloides y Mucor iavanicus. Los ADN que codifican desaturasas deseadas se pueden identificar de varias maneras. Como ejemplo, una fuente de la desaturasa deseada, por ejemplo bibliotecas genómicas o bibliotecas de ADNc para Mortierella. se seleccionan con sondas detectables enzimáticamente o químicamente sintetizadas, que se pueden hacer de ADN, ARN, o nucleótidos que no se presentan naturalmente o mezclas de los mismos. Las sondas se pueden sintetizar enzimáticamente a partir de ADN de desaturasas conocidas para métodos de hibridización normales o de rigor reducido. Las sondas de oligonucleótidss también se pueden usar para analizar fuentes y se pueden basar en secuencias de desaturasas conocidas, incluyendo las secuencias conservadas entre desaturasas conocidas, o en secuencias de péptidos contenidas a partir de la proteína purificada deseada. Las sondas de oligonucleótidos basadas en secuencias de aminoácidos pueden degenerar para abarcar la degeneración del código genético, o pueden inclinarse a favor de los codones preferidos del organismo fuente. Los oligonucleótidos también se pueden usar como cebadores para reacción de cadena de polimerasa a partir de ARNm transcrito inverso a partir de una fuente conocida o presunta; el producto de la reacción de cadena de polimerasa puede ser ADNc de longitud completa o se puede usar para generar una sonda para obtener el ADNc de longitud completa deseado. De manera alternativa, una proteína deseada se puede secuenciar completamente y se puede llevar a cabo la síntesis total del ADN que codifica ese polipéptido. En cuanto se ha aislado el ADNc o genómico deseado, se puede secuenciar por métodos conocidos. Se reconoce en la técnica que estos métodos están sujetos a errores, tales como el secuenciamiento múltiple de la misma región como rutina y se espera todavía conducir a regímenes medibles de errores en la secuencia deducida resultante, particularmente en regiones que tienen dominios repetidos, estructura secundaria extensa, o composiciones de bases inusuales, tales como regiones con alto contenido de base GC. Cuando surgen discrepancias, se puede hacer el resecuenciamiento y se pueden emplear métodos especiales. Los métodos especiales pueden incluir alterar las condiciones del secuenciamiento usando: diferentes temperaturas; diferentes enzimas; proteínas que alteran la capacidad de los oligonucleótidos para formar estructuras de orden superior; nucleótidos alterados tales como ITP o dGTP metilado; diferentes composiciones de gel, por ejemplo formamida añadida; diferentes cebadores o cebadores localizados a diferentes distancias de la región problema; o diferentes patrones tales como ADN de una sola cadena. El secuenciamiento de ARNm también se puede emplear. Para la mayor parte, alguna o toda la secuencia de codificación para el polipéptido que tiene actividad desaturasa es de una fuente natural. En algunas situaciones, sin embargo, es deseable modificar toda o una porción de los codones, por ejemplo, para aumentar la expresión, empleando los codones preferidos huéspedes. Los codones preferidos huéspedes se pueden determinar a partir de los codones de mayor frecuencia en las proteínas expresadas en la cantidad más grande en una especie de huésped particular de interés. De este modo, la secuencia de codificación para un polipéptido que tiene actividad desaturasa se puede sintetizar en todo o en parte. Todo o porciones del ADN también se pueden sintetizar para remover cualquier secuencia desestabilizante o regiones de estructura secundaria que estarían presentes en el ARNm transcrito. Todo o porciones del ADN también se pueden sintetizar para alterar la composición de la base a una o más preferibles en la célula huésped deseada. Los métodos para sintetizar secuencias y poner las secuencias juntas están muy bien establecidos en la literatura. La mutagénesis y la selección in vitro, la mutagénésis dirigida al sitio, u otros -elementos se pueden emplear para obtener mutaciones de genes desaturasa que se presentan naturalmente para producir un polipéptido que tenga actividad desaturasa in vivo con parámetros físicos y cinéticos más deseables para funcionar en la célula huésped, tales como vida media más larga o un régimen mayor de producción de un ácido graso poli-insaturado deseado. Los ADNc deseables tienen menos del 60 por ciento de composición de A+T, preferiblemente menos del 50 por ciento de composición de A+T. En una escala localizada de ventana de deslizamiento de 20 pares de bases, es preferible que no haya regiones localizadas de ADNc con más del 75 por ciento de composición de A+T; con una ventana de 60 pares de bases, es preferible que no haya regiones localizadas con ADNc mayor del 60 por ciento, más preferiblemente ninguna región localizada con más de 55 por ciento de composición de A+T. Desaturasas de Mortierella alpina De particular interés son la ?5-desaturasa , la ?6- desaturasa y la ?l2-desaturasa de Mortierella alpina. La ?5- desaturasa tiene 446 aminoácidos; la secuencia de aminoácidos se muestra en la Figura 7. El gen gue codifica la ?5- desaturasa de Mortierella alpina se puede expresar en microorganismos transgénicos para efectuar mayor síntesis de ácido araquidónico a partir de ácido dihomo-gama-linolénico. También se pueden usar otros ADN que son sustancialmente idénticos en secuencia al ADN de ?5-desaturasa de Mortierella alpina, o que codifican polipéptido que son sustancial ente idénticos al polipéptido de 45-desaturasa de Mortierella alpina. La ?6-desaturasa de Mortierella alpina, la cual tiene 457 aminoácidos y un peso molecular predicho de 51.8 kD; la secuencia de aminoácidos se muestra en la Figura 3. El gen que codifica la ?6-dosaturasa de Mortiorella alpina se puede expresar en plantas o animales transgénicos para efectuar una mayor síntesis de ácido gama-1 inolénico a partir de ácido linoleico o de ácido estearidón i co a partir de ácido al a-linolénico. También se pueden usar otros ADN que son sustancialmente idénticos al ADN de ?d-deoaturasa de Mortierella alpina, o que codifican polipéptidos que son sustancial ente idénticos al polipéptido de ?d-desaturasa de Mortierella alpina. La ?l2-desaturasa de Mortierella alpina tiene la secuencia de aminoácidos mostrada en la Figura 5. El gen que codifica la ?l2-desaturasa de Mortierella alpina se puede expresar en plantas transgénicas para efectuar una mayor síntesis de ácido linoleico a partir de ácido oleico. También se pueden usar otros ADN que son sustancialmente idénticos al ADN de ?l2-desaturasa de Mortierella alpina, o que codifican polipéptidos que son sustancial ente idénticos al polipéptido de ?l2-desaturasa de Mortierella alpina. Por sustancialmente idéntica en secuencia se entiende una secuencia de aminoácidos o una secuencia de ácidos nucleicos que exhibe en orden de preferencia creciente cuando menos 60 por ciento, 80 por ciento, 90 por ciento o 95 por ciento de homología a la secuencia de aminoácidos de ?5 desaturasa de Mortierella alpina o secuencia de ácido nucleico que codifica la secuencia de aminoácidos. Para polipéptidos, la longitud de las secuencias de comparación es cuando menos 16 aminoácidos, preferiblemente cuando menos 20 aminoácidos, o más preferiblemente 35 aminoácidos. Para ácido nucleico, la longitud de secuencias de comparación generalmente es de cuando menos 50 nucleótidos, preferiblemente cuando menos 60 nucleótidos, y más preferiblemente cuando menos 75 nucleótidos, y más preferiblemente 110 nucleótidos. La homología típicamente se mide usando software de análisis de .secuencia, por ejemplo el paquete de software de análisis de secuencia del Genetics Computer Group, University of isconsin Biotechnology Center, 1710 University Avenue, Madison, Wisconsin 53705, MEGAlign (DNAStar, Inc., 1228 S. Park St., Madison, Wisconsin 53715), y MacVector (Oxford Molecular Group, 2105 S. Bascom Avenue, Suite 200, Campbell, California 95008). Este software compara secuencias similares mediante asignar grados de homología a varias sustituciones, supresiones, y otras modificaciones. Las sustituciones conservativas típicamente incluyen sustituciones dentro de los siguientes grupos: glicina y alanina; valina, isoleucina y leucina; ácido aspártico, ácido glutámico, asparagina, y glutamina; serina y treonina; lisina y arginina; y fenilalanina y tirosina. Las sustituciones también se pueden hacer con base en la hidrofobicidad o hidrofilicidad conservada (Kyte y Doolittle, J. Mol. Biol. 157: 105-132, 1982), o con base en la capacidad para asumir estructura secundaria de polipéptido similar (Chou y Pasman, Adv. Enzv ol . 47:45-148, 1978). Otras desaturasas Incluidas en la presente invención están las desaturasas relacionadas del mismo o de otros organismos. Estas desaturasas relacionadas incluyen variantes de las ?5-, ?6 y -Al2-desaturasas descritas que se presentan naturalmente dentro de la misma o diferentes especies de Mortierella así como homólogos de la ?5-desaturasa descrita a partir de otras especies y de proteínas evolucionariamente relacionadas que tienen actividad desaturasa. También se incluyen desaturasas las cuales, aunque no son sustancialmente idénticas a la ?5-desaturasa de Mortierella alpina, desaturan una molécula de ácido graso en el carbono 5, 6 ó 12, respectivamente, del extremo carboxilo de la molécula de ácido graso. Las desaturasas relacionadas se pueden identificar por su capacidad para funcionar sustancialmente igual que las desaturasas descritas; esto es, todavía son capaces de convertir de manera efectiva ácido dihomo-ga a-linclénico en ácido araquidónico, ácido linoleico en ácido gama-linolénico, ácido alfa-linolénico en ácido estearidónico o ácido oleico en ácido linoleico. Las desaturasas relacionadas también se pueden identificar analizando bases de datos de secuencias para determinar secuencias homologas a la desaturasa descrita, mediante la hibridización de una sonda basada en la desaturasa descrita a una biblioteca construida a partir del organismo fuente, o mediante RT-PCR usando ARNm del organismo fuente y cebadores basados en la desaturasa descrita. Estas desaturasas incluyen las de humanos, Dictyostelium discoideum y Phaeodactylum tricornum. Las regiones de un polipéptido desaturasa importantes para la actividad desaturasa se pueden determinar a través de mutagénesis de rutina, expresión de los polipéptidos mutantes resultantes y determinación de sus actividades. Los mutantes pueden incluir supresiones, inserciones y mutaciones puntuales, o una combinación de los mismos. Un análisis funcional típico comienza con la mutagénesis de supresión para determinar los límites terminales N y C de la proteína necesaria para la función, y luego supresiones internas, inserciones o mutantes puntuales se hacen para determinar además las regiones necesarias para la función. También se pueden usar otras técnicas tales como mutaqénesis de cinta o síntesis total. La mutagénesis de supresión se lleva a cabo, por ejemplo, usando exonucleasas para remover secuencialmente las regiones de codificación d ' ó 3'. Hay juegos o kits disponibles para estas técnicas. Después de la supresión, la región de codificación se completa ligando oligonucleótidos que contienen codones de inicio o de detención a la región de codificación suprimida después de la supresión 5 ó 3', respectivamente. De manera alternativa, los oligonucleótidos que codifican codones de inicio o de detención se insertan en la región de codificación mediante una variedad de métodos que incluyen mutagénesis dirigida al sitio, reacción de cadena de polimerasa mutagénica o mediante ligación sobre el ADN digerido en sitios de restricción existentes. Las supresiones internas se pueden hacer similarmente a través de una variedad de métodos que incluyen el uso de sitios de restricción existentes en el ADN, mediante el uso de cebadores mutagénicos vía mutagénesis dirigida al sitio o reacción de cadena de polimerasa mutagénica. Las inserciones se hacen a través de métodos tales como mutagénesis de rastreo-enlazador, mutagénesis dirigida al sitio o reacción de cadena de polimerasa mutagénica. Las mutaciones puntuales se hacen a través de técnicas tales como mutagénesis dirigida al sitio o reacción de cadena de poli erasa mutagénica. Las mutagénesis químicas también se pueden usar para identificar regiones de un polipéptido de desaturasa importante para actividad. Se expresa una construcción mutada, y se prueba la capacidad de la proteína alterada resultante para funcionar como una desaturasa. Este análisis de estructura-función puede determinar cuáles regiones se pueden suprimir, cuáles regiones toleran inserciones, y cuáles mutaciones puntuales permiten que la proteina mutante funcione sustancialmente de la misma manera que la desaturasa nativa. Todas estas proteínas mutantes y secuencias de nucleótidos que los codifican están dentro del alcance de la presente invención. EXPRESIÓN DE GENES DESATURASA En cuanto se ha obtenido el ADN que codifica un polipéptido desaturasa, se coloca en un vector capaz de réplica en una célula huésped, o se propaga in vitro por medio de técnicas tales como reacción de cadena de polimerasa o reacción de cadena de polimerasa larga. Los vectores replicantes pueden incluir plás idos, fagos, virus, cósmidos y similares. Los vectores deseables incluyen aquellos útiles para mutagénesis del gen de interés o para la expresión del gen de interés en las células huéspedes. La técnica de reacción de cadena de polimerasa larga ha hecho posible la propagación in vitro de construcciones grandes, de manera que las modificaciones del gen de interés, tales como la mutagénesis o adición de las señales de expresión, y la propagación de las construcciones resultantes se puede presentar enteramente in vitro sin el uso de un vector replicante o en una célula huésped. Para la expresión de un polipéptido desaturasa, las regiones de iniciación y terminación de transcripción y traducción funcional están operablemente enlazadas al ADN que codifica el polipéptido desaturasa. Las regiones de iniciación y terminación de transcripción y traducción se derivan de una variedad de fuentes no exclusivas, incluyendo el ADN que se va a expresar, genes conocidos o sospechosos de ser capaces de expresión en el sistema deseado, vectores de expresión, síntesis química, o de un lugar endógeno en una célula huésped. La expresión en un tejido vegetal y/o parte de planta presenta ciertas eficiencias, particularmente cuando el tejido o la parte es uno que fácilmente se cosecha, tal como semilla, hojas, frutos, flores, raíces, etcétera. La expresión se puede dirigir a la localización dentro de la planta usando secuencias reguladoras específicas, tales como las de la Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número: 5,463,174, Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número: 4,943,674, Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número: 5,106,739, Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número: 5,175,095, Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número: 5,420,034, Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número: 5,188,958, y Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número: 5,589,379. Alternativamente, la proteína expresada puede ser una enzima que produce un producto el cual se puede incorporar, ya sea directamente o después de modificaciones adicionales, en una fracción de fluido de la planta huésped. En el presente caso, la expresión de genes desaturasa, o transcritos desaturasa antisentido pueden alterar los niveles de ácidos grasos poli-insaturados específicos, o derivados de los mismos, encontrados en partes de plantas y/o tejidos vegetales. La región de codificación de polipéptido ?5-desaturasa se expresa ya sea por sí misma o con otros genes, con el fin de producir tejidos y/o partes de plantas que contienen proporciones más altas de ácidos grasos poli-insaturados deseados o en los cuales la composición de ácidos grasos pol i-insaturados se parecen más estrechamente a la leche materna humana (Prieto y colaboradores, TCP publicación WO 95/24494). La región de terminación se puede derivar de la región 3' del gen a partir del cual se obtuvo la región de iniciación o de un gen diferente. Se conoce un gran número de regiones de terminación y se ha encontrado que son satisfactorias en una variedad de huéspedes del mismo y de diferentes géneros y especies. La región de terminación usualmente se selecciona más como asunto de conveniencia en vez de debido a cualquier propiedad particular. La elección de una célula huésped está influenciada en parte por el perfil del ácido graso poli-insaturado deseado de la célula transgénica, y del perfil original de la célula huésped. Como ejemplo, para la producción de ácido linoleico a partir de ácido oleico, la secuencia de ADN usada codifica un polipéptido que tiene una actividad ?l2-desaturasa, y para la producción de ácido gama-linolénico a partir de ácido linoleico, la secuencia de ADN usada codifica un polipéptido que tiene actividad ?d-desaturasa . El uso de una célula huésped que expresa actividad ?l2-desaturasa y carece o se agota de actividad ?l5-desaturasa, se puede usar con una cinta de expresión que proporciona la sobreexpresión de ?6 desaturasa sola generalmente es suficiente para proporcionar la producción aumentada de ácido gama-1 inolénico en la célula transgénica. Cuando la célula huésped expresa actividad ?9 desaturasa, la expresión de tanto una ?l2- como una ?6-desaturasa puede proporcionar producción aumentada de ácido gama-1 inolénico. en casos particulares cuando la expresión de la actividad ?6-desaturasa se acopla con la expresión de una actividad ?l2-desaturasa, es deseable que la célula huésped naturalmente tenga, o sea mutada para tener, baja actividad ?l5-desaturasa. De manera alternativa, una célula huésped para la expresión de ?6-desaturasa puede tener, o ser mutada para tener, alta actividad ?l2-desaturasa . La expresión en una célula huésped se puede llevar a cabo de una manera transitoria o estable. La expresión transitoria se puede presentar a partir de construcciones introducidas las cuales contienen señales de expresión funcionales en la célula huésped, pero las construcciones no se replican y raramente se integran en la célula huésped, o en donde la célula huésped no prolifera. La expresión transitoria también se puede llevar a cabo induciendo la actividad de un promotor regulable operablemente enlazado al gen de interés, aunque estos sistemas inducibles frecuentemente exhiben un nivel basal bajo de expresión. La expresión estable se puede lograr mediante la introducción de una construcción que puede integrarse en el genoma huésped o que se replica autónomamente en la célula huésped. La expresión estable del gen de interés se puede seleccionar a través del uso de un marcador seleccionable localizado o transfectado con la construcción de expresión, seguido por la selección de células que expresan el marcador. Cuando la expresión es resultado de la integración, puede presentarse la integración de construcciones aleatoriamente dentro del genoma huésped o se puede dirigir a través del uso de construcciones gue contienen regiones de homología con el genoma huésped suficientes para dirigir la recombinación con el lugar huésped. Cuando se dirigen las construcciones a un lugar endógeno, el lugar endógeno puede proporcionar todas o algunas de las regiones de transcripción y de traducción reguladoras. Cuando se desea la expresión aumentada del polipéptido desaturasa en el organismo fuente, se pueden emplear varios métodos. Los genes adicionales que codifican el polipéptido desaturasa se pueden introducir en el organismo huésped. La expresión del lugar de desaturasa nativa también se puede aumentar a través de la recombinación homologa, por ejemplo insertando un promotor más fuerte en el genoma huésped para causar expresión aumentada, removiendo secuencias desestabilizantes ya sea del ARNm o de la proteina codificada suprimiendo esa información del genoma huésped, o añadiendo secuencias estabilizantes al ARNm (Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número: 4,910,141, y Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número: 5,500,365). Cuando se desea expresar más de un gen diferente, regiones reguladoras adecuadas y métodos de expresión, se pueden propagar genes introducidos en la célula huésped a través del uso de vectores replicantes o mediante la integración en el genoma huésped. Cuando se expresan dos o más genes de vectores de réplica separados, es deseable que cada vector tenga un medio diferente de réplica. Cada construcción introducida, ya sea integrada o no, deberá tener un medio diferente de selección y deberá carecer de homología con las otras construcciones para mantener la expresión estable y evitar la reclasificación de elementos entre las construcciones. Se pueden determinar experimentalmente elecciones juiciosas de regiones reguladoras, medios de selección y métodos de propagación de la construcción introducida de manera gue todos los genes introducidos se expresen en los niveles necesarios para proporcionar la síntesis de los productos deseados. Las construcciones que comprenden el gen de interés se pueden introducir en una célula huésped mediante técnicas estándares. Estas técnicas incluyen transfección, conjugación, infección, impacto bolíst ico, electroporación, micro-inyección, raspado, o cualquier otro método que introduce el gen de interés en la célula huésped (Ver Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número: 4,743,548, Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número: 4,795,855, Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número: 5,068,193, Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número: 5,188,958, Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número: 5,463,174, Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número: 5,565,346 y Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número: 5,565,347). Por conveniencia, una célula huésped que ha sido manipulada por cualquier método para recoger una secuencia de ADN o construcción se llamará en la presente "transformada" o "recombinante". El huésped sujeto tendrá cuando menos una copia de la construcción de expresión y puede tener dos o más, dependiendo de si el gen se integra en el genoma, es amplificado, o está presente en un elemento extracromosomal que tiene múltiples números de copias. La célula huésped transformada se puede identificar por selección para un marcador contenido en la construcción introducida. Alternativamente, se puede introducir una construcción de marcador por separado con la construcción deseada ya que muchas técnicas de transformación introducen muchas moléculas de ADN en células huéspedes. Típicamente, los huéspedes transformados se seleccionan por su capacidad para crecer en medios selectivos. Los medios selectivos pueden incorporar un antibiótico o carecer de un factor necesario para el crecimiento del huésped no transformado, tal como un nutriente o factor de crecimiento. Un gen marcador introducido para el mismo puede conferir resistencia a antibiótico, o codificar un factor de crecimiento esencial o enzima, y permitir el crecimiento en medios selectivos cuando se expresan en el huésped transformado. Deseablemente, la resistencia a la kanamicina y la aminogl icosida G418 son de interés (ver la USP No. 5,034,322). La selección de un huésped transformado también puede ocurrir cuando la proteína del marcador expresada se puede detectar, ya sea directamente o indirectamente. La proteína de marcador se puede expresar sola o como una fusión a otra proteína. La proteína de marcador también se puede detectar por su actividad enzimática; por ejemplo la ß galactosidasa puede convertir el sustrato X-gal en un producto coloreado, y la luciferasa puede convertir la luciferina en un producto que emite luz. La proteína marcadora se puede detectar por sus características de producir luz o modificar luz; por ejemplo, la proteína verde fluorescente de Aequorea victoria fluoresce cuando se ilumina con luz azul. Se pueden usar anticuerpos para detectar la proteina marcadora o una etiqueta molecular en, por ejemplo, una proteína de interés. Las células que expresan la proteína marcadora o la etiqueta se puede seleccionar, por ejemplo, visualmente, o por técnicas tales como FACS o lavado usando anticuerpos.

Los ácidos grasos producidos usando los presentes métodos y composiciones se pueden encontrar en el tejido vegetal y/o parte de planta como ácidos grasos libres o en formas conjugadas tales como acilgliceroles, fosfolípídos, sulfolípidos o glicolípidos, y se pueden extraer de la célula huésped a través de una variedad de medios muy conocidos en la técnica. Estos medios pueden incluir extracción con solventes orgánicos, sonicación, extracción de fluido supercrítico usando por ejemplo dióxido de carbono, y medios físicos tales como prensas, o combinaciones de los mismos. De interés particular es la extracción con hexano, metanol y cloroformo. Cuando se desea, la capa acuosa se puede acidificar para protonar fracciones cargadas negativamente y mediante esto aumentar la partición de los productos deseados en la capa orgánica. Después de la extracción, se pueden remover los solventes orgánicos mediante evaporación bajo una corriente de nitrógeno. Cuando se aisla en formas conjugadas, los productos se pueden disociar enzimática o guímicamente para liberar el ácido graso libre o un conjugado menos complejo de interés, y entonces se puede someter a otras manipulaciones para producir un producto final deseado. Deseablemente se disocian formas conjugadas de ácidos grasos con hidróxido de potasio. PURIFICACIÓN DE ÁCIDOS GRASOS Si es necesaria mayor purificación, se pueden emplear métodos estándares. Estos métodos pueden incluir extracción, tratamiento con urea, cristalización fraccionada, cromatografía líquida de alto rendimiento, destilación fraccionada, cromatografía en sílica gel, centrifugación o destilación de alta velocidad, o combinaciones de estas técnicas. La protección de grupos reactivos, tales como grupos ácidos o alquenilos, se puede hacer en cualquier paso a través de técnicas conocidas, por ejemplo alquilación o yodación. Los métodos usados incluyen metilación de los ácidos grasos para producir esteres metílicos. De manera similar, se pueden remover los grupos de protección en cualquier paso. Deseablemente, se puede llevar a cabo la purificación de fracciones que contienen ácido araquidónico, ácido docosahexaenoico y ácido eicosapentaenoico mediante tra'tamiento con urea y/o destilación fraccionada. USOS DE LOS ÁCIDOS GRASOS Hay varios usos para los ácidos grasos de la presente invención. Se pueden encontrar sondas basadas en ADN de la presente invención en métodos para aislar moléculas relacionadas o en métodos para detectar organismos que expresen desaturasas. Cuando se usan como sondas, los ADN o los ol igonucleótidos deben ser detectables. Esto usualmente se lleva a cabo uniendo una etiqueta ya sea en un sitio interno, por ejemplo vía la incorporación de un residuo modificado, o en el término 5' o 3'. Estas etiquetas pueden ser directamente detectables, pueden unirse a una molécula secundaria que se etiquete detectablemente, o pueden unirse a una molécula secundaria no etiquetada y a una molécula terciaria detectablemente etiquetada; este proceso se puede extender en tanto sea práctico para lograr una señal satisfactoriamente detectable sin niveles inaceptables de señal de fondo. Los sistemas secundarios, terciarios o de puente pueden incluir el uso de anticuerpos dirigidos contra cualquier otra molécula, incluyendo etiquetas u otros anticuerpos, o pueden involucrar moléculas que estén unidas entre sí, por ejemplo un sistema de biotina-estreptavidina/avidina. Las etiquetas detectables típicamente incluyen isótopos radioactivos, moléculas que producen químicamente o enzimáticamente o alteran luz, enzimas que producen productos de reacción detectables, moléculas magnéticas, moléculas fluorescentes o moléculas cuya fluorescencia o características emisoras de luz cambian después de la unión. Ejemplos de métodos de etiquetamiento se pueden encontrar en Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número: 5,011,770. De manera alternativa, la unión de moléculas objetivo se puede detectar directamente midiendo el cambio en calor de la solución en la unión de una sonda al objetivo vía calorimetría de titulación isotérmica, o recubriendo la sonda o el objetivo en una superficie y detectando el cambio en dispersión de luz de la superficie producida por unir un objetivo o sonda, respectivamente, como se puede hacer con el sistema BIAcore.

Los ácidos grasos poli-insaturados producidos por elementos recombinantes encuentran aplicaciones en una gran variedad de áreas. La suplementación de humanos o animales con cidos grasos poli-insaturados en varias formas pueden dar como resultado niveles crecientes no sólo en ácidos grasos poli-insaturados, sino también en su progenie metabólica. Por ejemplo, cuando la ruta ?6-desaturasa inherente no funciona en' un individuo, el tratamiento con ácido araquidónico puede no dar como resultado solamente en aumentar los niveles de ácido araquidónico, sino también de productos corriente abajo del ácido araquidónico tales como prostaglandinas (véase la Figura 1) . Los mecanismos reguladores complejos pueden hacer deseable combinar varios ácidos grasos poli-insaturados, o añadir diferentes conjugados de ácidos grasos pol i-insaturados , con el fin de evitar, controlar o superar estos mecanismos para lograr los niveles deseados de ácidos grasos poli-insaturados específicos en un individuo. Los ácidos grasos poli-insaturados, o derivados de los mismos, hechos por el método descrito se pueden usar como suplementos dietéticos, particularmente en fórmulas para lactantes, para pacientes que sufren alimentación intravenosa o para evitar o tratar la desnutrición. El triglicérido predominante en la leche humana se ha reportado que es 1,3-di-oleoilo-2-palmitoilo, con 2-palmitoiloglicéridos reportados como mejor absorbidos que 2-oleoilo o 2-lineoiloglicéridos (Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número: 4,876,107). Típicamente, la leche materna humana tiene un perfil de ácidos grasos que comprende desde aproximadamente 0.15 por ciento hasta aproximadamente 0.36 por ciento como ácido docosahexaenoico, desde aproximadamente 0.03 por ciento hasta aproximadamente 0.13 por ciento como ácido eicosapentaenoico, desde aproximadamente 0.30 por ciento hasta aproximadamente 0.88 por ciento como ácido araquidónico, desde aproximadamente 0.22 por ciento hasta aproximadamente 0.67 por ciento como ácido dihomo-gama-linolénico, y desde aproximadamente 0.27 por ciento hasta aproximadamente 1.04 por ciento como ácido gamalinolénico. Una proporción de ácido gama-linolénico : ácido dihomo-gama-linolénico : ácido araquidónico en fórmulas para lactantes es de aproximadamente 1:1:4 a 1:1:1, respectivamente. Las cantidades de grasas que proporcionan estas proporciones de ácidos grasos poliinsaturados las pueden determinar sin indebida experimentación los expertos en la técnica. Los ácidos grasos poliinsaturados, o las células huéspedes que los contienen, también se pueden usar como suplementos alimenticios para animales para alterar un tejido animal o composición de ácido graso de leche a uno más deseable para el consumo humano o animal . COMPOSICIONES NUTRIMENTALES La presente invención también incluye composiciones nutrimentales. Estas composiciones, para propósitos de la presente invención, incluyen cualquier alimento o preparación para consumo humano que se incluye para consumo enteral o parenteral, el cual cuando se toma en el cuerpo (a) sirve para nutrir o construir tejidos o suministran energía y/o (b) mantener, restaurar o soportar el estado nutrimental adecuado o la función metabólica. La composición nutrimental de la presente invención comprende cuando menos una grasa o ácido producido de acuerdo con la presente invención y puede estar ya sea en forma sólida o líquida. Adicionalmente, la composición puede incluir macronutrientes comestibles, vitaminas y minerales en cantidades deseadas para un uso particular. La cantidad de estos ingredientes variará dependiendo de si la composición se pretende para uso con lactantes normales, sanos, niños o adultos que tengan necesidades especializadas tales como las que acompañan ciertas condiciones metabólicas (por ejemplo, desórdenes metabólicos). Los ejemplos de macronutrientes que se pueden añadir a la composición incluyen pero no se limitan a grasas comestibles, carbohidratos y proteínas. Ejemplos de estas grasas comestibles incluyen pero no se limitan a aceite de coco, aceite de soya, y mono y diglicéridos. Ejemplos de estos carbohidratos incluyen pero no se limitan a glucosa, lactosa comestible y almidón de maíz hidrolizado. Adicionalmente, ejemplos de proteinas que se pueden utilizar en la composición nutrimental de la invención incluyen pero no se limitan a proteínas de soya, suero electrodializado, leche descremada electrodializada, suero de leche, o hidrolizados de estas proteínas . Con respecto a las vitaminas y minerales, se pueden añadir los siguientes a las composiciones nutrimentales de la presente invención: calcio, fósforo, potasio, sodio, cloro, magnesio, manganeso, hierro, cobre, zinc, selenio, yodo, y vitaminas A, E, D, C y el complejo B. También se pueden añadir otras vitaminas y minerales . Los componentes utilizados en las composiciones nutrimentales de la presente invención serán de origen semipurificado o purificado. Por semipurificado o purificado se entiende un material que ha sido preparado mediante la purificación de un material natural o por síntesis. Ejemplos de composiciones nutrimentales de la presente invención incluyen pero no se limitan a fórmulas para lactantes, suplementos dietéticos, y composiciones rehidratantes . Las composiciones nutrimentales de interés particular incluyen pero no se limitan a las utilizadas para la suplementación enteral o parenteral para lactantes, fórmulas especializadas en lactantes, suplementos para geriatría, y suplementos para aquellos con dificultades gastrointestinales y/o mala absorción.

Composiciones nutrimentales Una composición nutrimental típica de la presente invención contendrá macronutrientes comestibles, vitaminas y minerales en cantidades deseadas para un uso particular. Las cantidades de estos ingredientes variarán dependiendo de si la formulación se pretende para su uso con individuos normales, sanos, temporalmente expuestos a estrés, o a sujetos que tienen necesidades especializadas debidas a ciertos estados de enfermedad crónicos o agudos (por ejemplo, desórdenes metabólicos). Una persona experta en la técnica entenderá que los componentes utilizados en una formulación nutrimental de la presente invención son de origen semipurificado o purificado. Por semipurificado o purificado se entiende un material que ha sido preparado por purificación de un material natural o por síntesis. Estas técnicas son muy conocidas en la técnica (véase, por ejemplo, Code of Federal Regulations for Food Ingredients and Food Processing; Recommended Dietary Allowances (Código de Reglamentos Federales para Ingredientes de Alimentos y Procesamiento de Alimentos; cantidades dietéticas recomendadas) , décima edición, National Academy Press, Washington, D.C., 1989). En una modalidad preferida, una formulación nutrimental de la presente invención es un producto nutrimental enteral, más preferiblemente un producto nutrimental enteral para adulto o niño. De conformidad con lo anterior en otro aspecto de la invención, se proporciona una formulación nutrimental que es conveniente para alimentar adultos, que están experimentando estrés. La fórmula comprende, además de los ácidos grasos poli-insaturados de la invención, macronutrientes, vitaminas y minerales en cantidades diseñadas para proporcionar los requerimientos nutrimentales diarios de adultos . Los componentes macronutrimentales incluyen grasas comestibles, carbohidratos y proteínas. Las grasas comestibles ejemplares incluyen aceite de coco, aceite de soya, mono y diglicéridos y aceites grasos poli-insaturados de esta invención. Ejemplos de carbohidratos son glucosa, lactosa comestible y almidón de maíz hidrolizado. Una fuente de proteína típica sería proteína de soya, suero electrodializado ó leche descremada electrodializada o suero de leche, o los hidrolizados de estas proteínas, aunque también están disponibles otras fuentes de proteínas y se pueden usar. Estos macronutrientes se añadirían en la forma de compuestos nutrimentales comúnmente aceptados en cantidad equivalente a los de la leche humana o una base de energía, es decir, con base por caloría. Los métodos para fórmulas nutritivas líquidas y entérales son muy conocidas en la técnica y se describen en detalle en los ejemplos. La fórmula enteral se puede esterilizar y posteriormente utilizar en una base lista para alimentar o almacenar en un líquido o polvo concentrado. El polvo se puede preparar por rocío secando la fórmula enteral preparada como se indica anteriormente, y la fórmula se puede reconstituir rehidratando el concentrado. Las fórmulas nutrimentales para adultos y lactantes son muy conocidas en la técnica y están comercialmente disponibles (v.gr., Similac®, Ensure®, Jevity® y Alimentum® de Ross Products División, Abbott Laboratories) . Un aceite o ácido de la presente invención se puede añadir a cualquiera de estas fórmulas en las cantidades descritas más adelante . La densidad de la energía de la composición nutrimental cuando está en forma líquida, típicamente puede variar desde aproximadamente 0.6 ilocaloríae a 3.0 kilocalorías por mililitro. Cuando está en forma sólida o en polvo, el suplemento nutrimental puede contener desde aproximadamente 1.2 hasta más de 9 kilocalorías por gramo, preferiblemente de 3 a 7 kilocalorías por gramo. En general, la osmolalidad de un producto líquido deberá ser menor de 700 Osm y más preferiblemente menor de 660 mOsm. La fórmula nutrimental típicamente incluiría vitaminas y minerales, además de los aceites grasos poliinsaturados de la invención, con el fin de ayudar la ingestión individual de los requerimientos diarios mínimos de estas sustancias. Además de los ácidos grasos poli-insaturados enlistados anteriormente, puede ser también deseable suplementar la composición nutrimental con zinc, cobre, y ácido fólico además de antioxidantes. Se cree que estas sustancias también proporcionarán una elevación al sistema inmunológico estresado y así proporcionará otros beneficios al individuo. La presencia de zinc, cobre o ácido fólico es opcional y no se requiere con el fin de ganar los efectos benéficos de la supresión inmunológica. Igualmente una composición farmacéutica se puede suplementar con estas mismas sustancias. En una modalidad más preferida, la fórmula nutrimental contiene, además del sistema antioxidante y del componente de ácido graso poli-insaturado, una fuente de carbohidrato en donde cuando menos el 5 por ciento en peso del carbohidrato es un oligosacárido indigerible. En todavía otra modalidad preferida, la composición nutrimental adicionalmente contiene proteína, taurina y carnitina. Los ácidos grasos poli-insaturados, o derivados de los mismos, hechos por el método descrito se pueden usar como suplementos dietéticos, particularmente en fórmulas para lactantes, para pacientes que sufren alimentación intravenosa o para evitar o tratar la desnutrición. Típicamente, la leche materna humana tiene un perfil de ácidos grasos que comprende desde aproximadamente 0.15 por ciento hasta aproximadamente 0.36 por ciento como ácido docosahexaenoico, desde aproximadamente 0.03 por ciento hasta aproximadamente 0.13 por ciento como ácido eicosapentaenoico, desde aproximadamente 0.30 por ciento hasta aproximadamente 0.88 por ciento como ácido araquidónico, desde aproximadamente 0.22 por ciento hasta aproximadamente 0.67 por ciento como ácido dihomo-gama-linolénico, y desde aproximadamente 0.27 por ciento hasta aproximadamente 1.04 por ciento como ácido gamalinolénico. Adicionalmente, el triglicérido predominante en la leche humana se ha reportado que es 1, 3-di-oleoil-2-palmitoilo, con 2-palmitoiloglicéridos reportados como mejor absorbidos que 2-oleoilo o 2-lineoiloglicéridos (Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número: 4,876,107) . De este modo, los ácidos grasos tales como ácido araquidónico, ácido dihomo-gama-linolénico, ácido gamalinolénico y/o ácido eicosapentaenoico producidos por la invención se pueden usar para alterar la composición de fórmulas para lactantes para replicar mejor la composición de ácidos grasos poli-insaturados de la leche materna humana. En particular, una composición grasa para su uso en suplemento farmacológico o alimenticio, particularmente un sustituto o suplemento de leche materna, preferiblemente comprenderá uno o más de ácido araquidónico, ácido dihomo-gama-linolénico y ácido gamalinolénico. Más preferiblemente, el aceite comprenderá desde aproximadamente 0.3 hasta 30 por ciento ácido araquidónico, desde aproximadamente 0.2 hasta 30 por ciento ácido dihomo-gama-linolénico, y desde aproximadamente 0.2 hasta aproximadamente 30 por ciento de ácido gamalinolénico. Además de la concentración, las proporciones de ácido araquidónico, ácido dihomo-gama-linolénico y ácido gamalinolénico se pueden adaptar para un uso final particularmente dado. Cuando se formula como suplemento de leche materna, o sustituto, se proporcionará una composición grasa que contenga dos o más de ácido araquidónico, ácido dihomo-gama-linolénico y ácido gamalinolénico en una proporción de aproximadamente 1:19:30 hasta aproximadamente 6:1:0.2, respectivamente. Por ejemplo la leche materna de animales puede variar en proporciones de ácido araquidónico : ácido dihomo-gama-linolénico: ácido gamalinolénico variando de 1:19:30 hasta 6:1:0.2, lo cual incluye proporciones intermedias que preferiblemente son de aproximadamente 1:1:1, 1:2:1, 1:1:4. Cuando se producen juntos en una célula huésped, el ajuste de la tasa y el porcentaje de conversión del sustrato precursor tal como ácido gamalinolénico y ácido dihomo-gama-linolénico en ácido araquidónico se puede usar para controlar con precisión las proporciones de ácidos grasos poli-insaturados. Por ejemplo, se puede usar una tasa de conversión del 5 por ciento al 10 por ciento de ácido dihomo-gama-linolénico en ácido araquidónico para producir una proporción de ácido araquidónico para ácido dihomo-gama-linolénico de aproximadamente 1:19, mientras que una tasa de conversión de aproximadamente el 75 por ciento al 80 por ciento se puede usar para producir una proporción de ácido araquidónico contra ácido dihomo-gama-linolénico de aproximadamente 6:1. Por lo tanto, ya sea en un sistema de cultivo celular o en un animal huésped, la regulación del tiempo, la extensión y la especificidad de expresión de desaturasa como se describe se puede usar para modular los niveles y proporciones de ácidos grasos poliinsaturados. Dependiendo del sistema de expresión usado, v.gr., cultivo celular o un animal que expresa grasas en su leche, las grasas también se pueden aislar y recombinar en las concentraciones y proporciones deseadas . Las cantidades de grasas que proporcionan estas proporciones de ácidos grasos poli-insaturados se pueden determinar siguiendo protocolos estándares. Los ácidos grasos poli-insaturados, o las células huéspedes que los contienen, también se pueden usar como suplementos alimenticios para animales para alterar un tejido animal o composición de ácido graso de leche a uno más deseable para el consumo humano o animal . Para complemento dietético, los ácidos grasos poliinsaturados o los derivados de los mismos, se pueden incorporar en grasas para cocinar, aceites o margarinas formuladas de manera que en el uso normal el receptor reciba la cantidad deseada. Los ácidos grasos poli-insaturados se pueden también incorporar en fórmulas para lactantes, suplementos nutrimentales u otros productos alimenticios, y pueden encontrar uso como sustancias anti-inflamatorias o que rebajan el colesterol . Composiciones farmacéuticas La presente invención también abarca una composición farmacéutica que comprende uno o más de los ácidos y/o grasas resultantes producidos de acuerdo con los métodos descritos en la misma. Más específicamente, esta composición farmacéutica puede comprender uno o más de los ácidos y/o grasas así como un portador estándar, muy conocido, no tóxico farmacéuticamente aceptable, adyuvante o vehículo tal como, por ejemplo, solución salina regulada de fosfato, agua, etanol, polioles, aceites vegetales, una sustancia humectante o una emulsión tal como emulsión de agua/aceite. La composiciones pueden estar ya sea en forma líquida o sólida. Por ejemplo, la composición puede estar en forma de una tableta, cápsula, líquido o polvo ingerible, inyectable, o ungüento o crema tópico. Las rutas posibles de administración incluyen, por ejemplo, oral, rectal y parenteral. La ruta de administración, desde luego, dependerá del efecto deseado. Por ejemplo, si la composición se utiliza para tratar piel áspera, seca, o vieja, para tratar piel lastimada o quemada, o para tratar piel o cabello afectado por una enfermedad o condición, tal vez se pueda aplicar tópicamente. La dosis de la composición que se va a administrar al paciente la puede determinar alguien con experiencia ordinaria en la técnica y depende de varios factores tales como el peso del paciente, edad del paciente, estado inmunológico del paciente, etc. Con respecto a la forma, la composición puede ser, por ejemplo, una solución, una dispersión, una suspensión, una emulsión o un polvo estéril que se reconstituye. Adicionalmente, la composición de la presente invención se puede utilizar para propósitos cosméticos. Se puede añadir a composiciones cosméticas pre-existentes de manera que se forme una mezcla o que se puede usar como una composición sola. Las composiciones farmacéuticas se pueden utilizar para administrar el componente de ácido graso poli-insaturado a un individuo. Las composiciones farmacéuticas convenientes pueden comprender soluciones acuosas o no acuosas estériles fisiológicamente aceptables, dispersiones, suspensiones o emulsiones y polvos estériles para su reconstitución en soluciones estériles o dispersiones para ingestión. Ejemplos de portadores, diluyentes, solventes o vehículos acuosos y no acuosos convenientes incluyen agua, etanol, polioles (propilenglicol, polietilenglicol, glicsrol, y similares), mezclas convenientes de los mismos, aceites vegetales (tales como aceite de oliva) y esteres orgánicos inyectables tales como oleato de etilo. Se puede mantener la fluidez apropiada, por ejemplo, por el mantenimiento del tamaño de partícula requerido en el caso de dispersiones y por el uso de tenso- activos. Puede ser deseable incluir sustancias isotónicas, por ejemplo azúcares, cloruro de sodio y similares. Además de estos diluyentes inertes, la composición puede incluir también adyuvantes, tales como sustancias humectantes, emulsificantes y sustancias suspensoras, edulcorantes, sustancias saborizantes y perfumantes . Las suspensiones, además de los compuestos activos, pueden contener sustancias suspensoras, por ejemplo, alcoholes isoestearílicos etoxilados, polioxietilensorbitol y esteres de sorbitán, celulosa microcristalina, metahidróxido de aluminio, bentonita, agar-agar y tragacanto o mezclas de estas sustancias, y similares. Las formas de dosis sólidas tales como tabletas y cápsulas se pueden preparar usando técnicas muy conocidas en el campo. Por ejemplo, los ácidos grasos poli-insaturados de la invención se pueden hacer en tabletas con bases de tabletas convencionales tales como lactosa, sacarosa, y almidón de maíz en combinación con aglutinantes tales como acacia, almidón de maíz o gelatina, sustancias desintegrantes tales como almidón de papa o ácido algínico y un lubricante tal como ácido esteárico o estearato de magnesio. Las cápsulas se pueden preparar incorporando estos excipientes en una cápsula de gelatina junto con antioxidantes y el componente de ácido graso poli-insaturado. La cantidad de los antioxidantes y el componente de ácido graso poli-insaturado que deberá incorporarse en la formulación farmacéutica deberá ajustarse dentro de los lineamentos discutidos anteriormente. Como se usa en esta solicitud el término "tratar" se refiere ya sea a prevenir, o reducir la incidencia de, la ocurrencia no deseada. Por ejemplo, tratar la supresión inmunológica se refiere ya sea a evitar la ocurrencia de esta supresión o a reducir la cantidad de esta supresión. Los términos "paciente" e "individuo" se están usando intercambiablemente y ambos se refieren a un animal. El término "animal" como se usa en esta solicitud se refiere a cualquier mamífero de sangre caliente incluyendo, pero sin limitarse a perros, humanos, monos, y simios. Como se usa en la solicitud el término "aproximadamente" se refiere a una cantidad que varia desde el rango o número establecido en una cantidad razonable dependiente del contexto de uso. Cualquier número o rango numérico especificado en la memoria descriptiva deberá considerarse que está modificada por el término aproximadamente . "Dosis" y "ración" se usan intercambiablemente y se refieren a la cantidad de la composición nutrimental o farmacéutica ingerida por el paciente en una sola toma y diseñada para administrar cantidades efectivas de antioxidantes y triglicérido estructurado. Como será fácilmente aparente a los expertos en la técnica, una sola dosis o ración del polvo nutrimental líquido deberá suministrar la cantidad de anti- oxidantes y ácidos grasos poli-insaturados mencionados anteriormente. La cantidad de la dosis o ración deberá ser un volumen que un adulto típico pueda consumir en una sentada. Esta cantidad puede variar ampliamente dependiendo de la edad, peso, sexo o estado médico del paciente. Sin embargo como un lineamento general, una sola ración o dosis del producto nutrimental líquido deberá considerarse que abarque un volumen de 100 a 600 mililitros, más preferiblemente de 125 a 500 mililitros y más preferiblemente de 125 a 300 mililitros. Los ácidos grasos poli-insaturados de la presente invención también se pueden añadir a los alimentos aún cuando no se requiera la suplementación de la dieta. Por ejemplo, la composición se puede añadir a comida de cualquier tipo incluyendo pero sin limitarse a margarinas, mantequillas modificadas, quesos, leche, yogurt, chocolate, dulces, botanas, aceites para ensaladas, aceites para cocinar, grasas para cocinar, carnes, pescado y bebidas. Aplicaciones f rmacéuticas Para uso farmacéutico (humano o veterinario) , las composiciones generalmente se administran oralmente pero se pueden administrar por cualguier ruta por la cual se puedan absorber con éxito, por ejemplo, parenteralmente (es decir subcutáneamente, intramuscularmente o intravenosamente), rectalmente o vaginal ente o tópicamente, por ejemplo, como ungüento o loción para la piel. Los ácidos grasos poli- insaturados de la presente invención se pueden administrar solos o en combinación con un portador o excipiente farmacéuticamente aceptable. Cuando están disponibles, las cápsulas de gelatina son la forma preferida de la administración oral . La suplementación dietética como se presenta anteriormente también puede proporcionar una ruta oral de administración. Los ácidos insaturados de la presente invención se pueden administrar en formas conjugadas, o como sales, esteres, amidas o profármacos de los ácidos grasos. Cualquier sal farmacéuticamente aceptable está comprendida por la presente invención; especialmente preferidas son las sales de sodio, potasio o litio. También incluidas están las sales N-alquilpolihidroxamina, tales como N-metil glucamina, encontrada en la publicación del TCP WO 96/33155. Los esteres preferidos son los esteres etílicos. Como sales sólidas, los ácidos grasos poli-insaturados también se pueden administrar en forma de tableta. Para administración intravenosa, los ácidos grasos poli-insaturados o derivados de los mismos se pueden incorporar en formulaciones comerciales tales como intralípidos . El perfil de ácido grasos del plasma de adulto típico normal comprende 6.64 a 9.46 por ciento de ácido araquidónico, 1.45 a 3.11 por ciento de ácido dihomo-gama-linolénico, y 0.02 a 0.08 por ciento de ácido gamalinolénico. Estos ácidoe grasos poli-insaturados o sus precursores metabólicos se pueden administrar, ya sea solos o en mezclas con otros ácidos grasos poli-insaturados, para alcanzar un perfil de ácido graso normal en un paciente. Cuando se desea, los componentes individuales de las formulaciones se pueden proporcionar individualmente en forma de juego, para uso único o múltiple. Una dosis típica de un ácido graso particular es de 0.1 miligramos a 20 gramos, o hasta 100 gramos diariamente, y es preferiblemente de 10 miligramos a l, 2, 5 ó 10 gramos diariamente conforme se requiera, o cantidades molares equivalentes de las formas derivadas de los mismos. Las composiciones de nutrición parenteral que comprenden desde aproximadamente 2 hasta aproximadamente 30 por ciento en peso de ácidos grasos calculados como trigl icéridos están incluidos por la presente invención; se prefiere una composición que tenga desde aproximadamente 1 hasta aproximadamente 25 por ciento en peso de la composición de ácido graso poli-insaturado total como ácido gamalinolénico (Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número: 5,196,198). Otras vitaminas, y particularmente vitaminas solubles en grasa tales como las vitaminas A, D, E y L-carnitina opcionalmente se pueden incluir. Cuando se desea, se puede añadir un conservador tal como a tocoferol, típicamente a aproximadamente 0.1 por ciento en peso. Las composiciones farmacéuticas convenientes pueden comprender soluciones, dispersiones, suspensiones o emulsiones acuosas o no acuosas estériles fisiológicamente aceptables y polvos estériles para su reconstitución en soluciones o dispersiones inyectables estériles. Ejemplos de portadores, diluyentes, solventes o vehículos acuosos y no acuosos convenientes incluyen agua, etanol, polioles (propilenglicol, polietilenglicol, glicerol, y similares), mezclas convenientes de los mismos, aceites vegetales (tales como aceite de oliva) y esteres orgánicos inyectables tales como oleato de etilo. Se puede mantener la fluidez adecuada, por ejemplo, manteniendo el tamaño de partícula requerido en casos de dispersiones y mediante el uso de tensoactivos . También puede ser deseable incluir sustancias isotónicas, por ejemplo azúcares, cloruro de sodio y similares. Además de estos diluyentes inertes, la composición puede también incluir adyuvantes, tales como sustancias humectadoras, emulsi ficantes y suspensores, edulcorantes, saborizantes y perfumantes. Las suspensiones además de los compuestos activos, pueden contener sustancias suspensoras, como por ejemplo, alcoholes isoestearílieos etoxilados, polioxietileno sorbitol y esteres de sorbitán, celulosa microcristalina, metahidróxido de aluminio, bentonita, agar-agar y tragacanto, o mezclas de estas sustancias y similares. Una composición farmacéutica especialmente preferida contiene esteres de ácido diacetiltartárico de mono y diglicéridos disueltos en un medio o solvente acuoso. Los esteres de ácidos diacetiltartáricos de mono y diglicéridos tienen un valor de HLB de aproximadamente 9-12 y son significativamente más hidrofílicos que los lípidos antimicrobianos existentes que tienen valores de HLB de 2-4. Estos lípidos hidrofóbicos existentes no se pueden formular en composiciones acuosas. Como se describe en la presente, los lípidos ahora se pueden solubilizar en medio acuoso en combinación con esteres ácidos diacetiltartáricos de mono y diglicéridos. De acuerdo con esta modalidad, los esteres ácidos diacetiltartáricos de mono y diglicéridos (v.gr., DATEM-C12:0) se combinan con otros lípidos antimicrobianos activos (v.gr., 18:2 y 12:0 onogl icéridos) y se mezclan para obtener una mezcla homogénea. La homogeneidad permite una actividad antimicrobiana aumentada. La mezcla se puede dispersar completamente en agua. Esto no es posible sin la adición de esteres de ácidos diacetiltartáricos de mono y diglicéridos y el premezclado con otros monoglicéridos antes de la introducción en agua. La composición acuosa se puede mezclar bajo condiciones estériles con diluyentes, conservadores, reguladores o propulsores fisiológicamente aceptables como puede requerirse para formar un rocío o un inhalante. La presente invención también abarca el tratamiento de numerosos desórdenes con ácidos grasos. La suplementación con los ácidos grasos poli-insaturados de la presente invención se puede usar para tratar restenosis después de angioplastia. Síntomas de inflamación, artritis reumatoide, y asma y ' psoriasis se pueden tratar con los ácidos grasos poliinsaturados de la presente invención. La evidencia indica que los ácidos grasos poli-insaturados pueden estar involucrados en el metabolismo del calcio, sugiriendo que los ácidos grasos poli-insaturados de la presente invención se pueden usar en el tratamiento o prevención de osteoporosis y de cálculos en el riñon o en vías urinarias . Los ácidos grasos poli-insaturados de la presente invención se pueden usar en el tratamiento del cáncer. Se ha mostrado que las células malignas tienen composiciones de ácidos grasos alteradas; la adición de ácidos grasos ha demostrado disminuir su crecimiento y causar muerte celular, e incrementar su susceptibilidad a las sustancias quimioterapéuticas. El ácido gamalinolénico se ha mostrado que causa re-expresión en las células de cáncer de las moléculas de adhesión celular E-cadherina, la pérdida de la cual se asocia con metástasis agresiva. Las pruebas clínicas en la administración intravenosa de sal de litio soluble en agua de ácido gamalinolénico a pacientes de cáncer en páncreas produjo aumentos estadísticamente significativos en su supervivencia. La suplementación con ácidos grasos poli-insaturados también puede ser útil para tratar caquexia asociada con cáncer. Los ácidos grasos poli-insaturados de la presente invención también se pueden usar para tratar diabetes (Patente de los Estados Unidos ^ Norteamérica Número: 4,826,877; Horrobin y colaboradores, Am . J. Clin . Nutr. Vol. 57 (Supl.), 732S-737S) . Se ha demostrado metabolismo y composición de ácidos grasos alterados en animales diabéticos. Estas alteraciones han sugerido que están involucradas en algunas de las complicaciones a largo plazo resultantes de diabetes, incluyendo retinopatía, neuropatía, nefropatía y daño al sistema reproductor. El aceite de prímula, que contiene ácido gamalinolénico, ha mostrado prevenir e invertir el daño nervioso en el diabético. Los ácidos grasos poli-insaturados de la presente invención se pueden usar para tratar eczema, reducir la presión sanguínea y mejorar las calificaciones en matemáticas. La deficiencia en ácidos grasos esenciales se ha sugerido que está involucrada en eczema, y algunos estudios han mostrado efectos benéficos sobre el eczema a partir del tratamiento con ácido gamalinolénico. El ácido gamalinolénico también ha mostrado reducir aumentos en la presión sanguínea asociados con estrés, y mejorar el desempeño en pruebas aritméticas. El ácido gamalinolénico y el ácido dihomo-gama-linolénico han mostrado inhibir la agregación de plaquetas, causar vasodilatación, niveles más bajos de colesterol e inhibir la proliferación de el músculo liso de la pared de los vasos y del tejido fibroso (Brenner y colaboradores, Adv. Exp . Med. Biol . Vol. 83, p. 85-101, 1976) . La administración de ácido gamalinolénico o ácido dihomo-gama-linolénico, solo o en combinación con ácido eicosapentaenoico, ha mostrado reducir o evitar sangrado gastro-intestinal y otros efectos secundarios causados por fármacos anti-inflamatorios no esteroides (Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número: 4,666,701). El ácido gamalinolénico y el ácido dihomo-gama-linolénico también se ha mostrado que evitan o tratan la endometriosis y el síndrome premenstrual (Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número: 4,758,592) y tratar encefalomielitis miálgica y fatiga crónica después de infecciones virales (Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número: 5,116,871) . Otros usos de los ácidos grasos poli-insaturados de esta invención incluyen el uso en tratamiento- de SIDA, esclerosis múltiple, síndrome respiratorio agudo, hipertensión y desórdenes inflamatorios de la piel. Los ácidos grasos poli-insaturados de la invención también se pueden usar para fórmulas para la salud general así como para tratamientos geriátricos . Aplicaciones veterinarias Deberá notarse que las composiciones farmacéuticas y nutrimentales descritas anteriormente se pueden utilizar en conexión con animales, así como humanos, ya que los animales experimentan muchas de las mismas necesidades y condiciones que el humano. Por ejemplo, el aceite o ácidos de la presente invención se pueden utilizar en suplementos alimenticios para animales .

Los siguientes ejemplos se presentan a manera de ilustración, no de limitación. EJEMPLOS Ejemplo 1. Aislamiento de una secuencia de nucleótidos de ?5-desaturasa de Mortierella alpina Ejemplo 2. Aislamiento de una secuencia de nucleótidos de ?6-desaturasa de Mortierella alpina Ejemplo 3. Identificación de homólogos de ?6 desaturasa a la Aß-desaturasa de M. alpina Ejemplo 4. Aislamiento de una secuencia de nucleótidos de ?l2-desaturasa de Mortierella alpina Ejemplo 5. Aislamiento de la Secuencia de Nucleótidos reductasa de citocromo b5 a partir de Mortierella alpina Ejemplo 6. Expresión de clonas ?5-desaturasa de M. alpina en levadura de panificación Ejemplo 7. Análisis de ácidos grasos de hojas de plantas transgénicas Ma29 de Brassica Ejemplo 8. Expresión de ?6 desaturasa de M. alpina en Brassica napus Ejemplo 9. Expresión de ?l2 desaturasa de M. alpina en Brassica napus Ejemplo 10. Expresión simultánea de ?6 y ?l2 desaturasas de M. alpina en Brassica napus Ejemplo 11. Expresión simultánea de ?5 y ?6 desaturasas de M. alpina en Brassica napus Ejemplo 12. Expresión simultánea de ?5 , ?6 y ?12 desaturasas de M. alpina en Brassica napus Ejemplo 13. Distribución estereoespecífica de aceites ?6-desaturados Ejemplo 14. Composiciones de ácidos grasos de plantas transgénicas Ejemplo 15. Expresión combinada de ?6 y ?12-desaturasas en B . napus lograda mediante cruza. Ejemplo 16. Expresión de desaturasas de M. alpina en frijol de soya Ejemplo 17. Secuencias de genes de desaturasa humana Ejemplo 1 Aislamiento de una secuencia de nucleótidos de ?5-desaturasa a partir de Mortierella alpina La Mortierella alpina produce ácido araquinódico (AAR, 20:4) a partir del precursor 20:3 mediante una ?5-desaturasa. Una secuencia de nucleótidos que codifica la ?5 desaturasa de Mortierella alpina (ver la Figura 7) fue obtenida a través de amplificación de reacción de cadena de polimerasa usando la primera cadena del ADNc de M. alpina y cebadores de oligonucleótidos degenerados correspondientes a secuencias de aminoácidos conservadas entre ?6 -desaturasas de Synechocystis y Spirulina . El procedimiento usado fue el siguiente: Se aisló el ARN total desde un cultivo que produce ácidos grasos poli-insaturados de tres días de edad de Mortierella alpina usando el protocolo de Hoge y colaboradores (1982), Experimental Mycolo y 6:225-232. Se usó el ARN para preparar ADNc de cadena doble usando el sistema La bda-ZipLox de BRL, siguiendo las instrucciones del fabricante. Fracciones de varios tamaños del ADNc de M. alpina se empacaron por separado para producir bibliotecas con insertos de diferente tamaño promedio. La biblioteca de "longitud completa" contiene aproximadamente 3 x 106 clonas con un tamaño de inserto promedio de 1.77 kb. La biblioteca de "grado de secuenciamiento" contiene aproximadamente 6 x 105 clonas con un tamaño de inserto promedio de 1.1 kb. Se transcribieron a la inversa 5 microgramos del ARN total usando el SuperscriptRTasa de BRL y el cebador TSyn 5-CCAAGCTTCTGCAGGAGCTCTTTTTTTTTTTTTTT-3 ' (SEQ ID NO: 19). Se designaron ol igonucleótidos degenerados a regiones conservadas entre las dos secuencias de ?6-desaturasa cianobacterianas. Los cebadores específicos usados fueron: D6DESAT-F3 (SEQ ID NO: 20) 5-CUACUACUACUACAYCAYACOTAYACOAAYAT-3 ' D6DESAT-R3 (SEQ ID NO: 21) 5-CAUCAUCAUCAUOGGRAAOARRTGRTG-3 ' , en donde Y=C+T, R=A+G, y 0=I+C. Se llevó a cabo la amplificación por reac ; ón de -adena de polimerasa en un volumen de 25 microlitros que contenía: templado derivado de 40 nanogramos del ARN total, 2 pM de cada cebador, 200 µM de cada trifosfato desoxirribonucleótido, 60 mM Tris-Cl, pH 8.5, 15mM (NH4)2S?4, 2 mM MgC^. Las muestras se sometieron a un paso de desnaturalización inicial de 95 grados (todas las temperaturas son Celsius) durante 5 minutos, luego se mantuvieron a 72 grados mientras se añadieron 0.2 U de Taq polimerasa. Las condiciones de te-rmociclado de reacción de cadena de polimerasa fueron las siguientes: 94 grados durante 1 minuto, 45 grados durante 1.5 minutos, 72 grados durante 2 minutos. La reacción de cadena de polimerasa continuó durante 35 ciclos. La reacción de cadena de polimerasa usando estos cebadores en la primera cadena del ADNc de M. alpina produjo un producto de reacción de 550 pares de bases. La comparación de la secuencia de aminoácidos deducida del fragmento de reacción de cadena de polimerasa de M. alpina reveló regiones de homología con ?6-desaturasas (véase la Figura 4) . Sin embargo, sólo hubo aproximadamente 28 por ciento de identidad sobre la región comparada. La secuencia de aminoácidos deducida se presenta en SEQ ID NO: 14. El producto de la reacción de cadena de polimerasa se usó como una sonda para aislar las clonas de ADNc correspondientes de una biblioteca de M. alpina . La clona de ADNc más larga, Ma29, se designó pCGN5521 y se secuenció completamente en ambas c: lenas . Fl ADNc está contenido como un inserto de 1481 pares de bases en el vector pZLl (Bethesda Research Laboratories) y, comenzando con el primer ATG, contiene un marco de lectura abierto gue codifica 446 aminoácidos. El marco de lectura contiene la secuencia deducida del fragmento de reacción de cadena de polimerasa. Se encontró que la secuencia del inserto de ADNc contenía regiones de homología para 46-desaturasas (véase la Figura 8). Por ejemplo, se encontró que estaban presentes tres "cajas de histidina" conservadas (que habían sido observadas en desaturasas unidas a la membrana (Okuley y colaboradores, (1994) The Plant Cell 6:147-158)) en la secuencia de Mortierel la en las posiciones de los aminoácidos 171-175, 207-212, y 387-391 (véase la Figura 5A-5D) . Sin embargo, el motivo del aminoácido típico "HXXHH" para la tercera caja de histidina de la desaturasa de Mortierella se encontró gue era QXXHH . El término amino de la proteína codificada, mostró homología significativa con las proteínas citocromo b5. De este modo, la clona de ADNc de Mortierella parece representar una fusión entre un citocromo b5 y la desaturasa de ácido graso. Ya que se cree que el citocromo b5 funciona como donador de electrones para las enzimas desaturasas unidas a la membrana, es posible que el dominio de citocromo b5 de terminal N de esta proteína desaturasa esté involucrada en su función. Esto puede ser ventajoso cuando se expresa la desaturasa en sistemas heterólogos para la producción de icidos grasos poli- insaturados . Ejemplo 2 Aislamiento de una secuencia de nucleótidos de A6-desaturasa a partir de Mortierelia alpina Una secuencia de ácido nucleico de una clona de ADNc parcial, Ma524, que codifica una desaturasa de ácido graso ?6 de Mortierel la alpina se obtuvo mediante secuenciamiento aleatorio de clonas a partir de la biblioteca de grado de secuenciamiento de ADNc de M. alpina descrita en el Ejemplo 1. Los plás idos gue contenían ADNc se separaron como sigue: Se combinaron cinco µl de fago con 100 µl de E. coli DHIOB(ZIP) cultivados en ECLB más 10 µg/ml de canamicina, 0.2 por ciento de maltosa, y 10 mM MgSO y se incubaron a 37 grados durante 15 minutos. Se añadieron 0.9 ml SOC y 100 µl de la bacteria inmediatamente plateada en cada una de las placas de 10 ECLB + 50 µg de Pen. No fue necesario un tiempo de recuperación de 45 minutos. Las placas se incubaron durante la noche a 37°C. Las colonias se recogieron en medio ECLB + 50 µg Pen para cultivos durante la noche para sor usados para hacer suministros de glicerol y ADN miniprep. Se almacenó una alícuota del cultivo usado para la miniprep como un suministro de glicerol. El plaqueo sobre ECLB + 50 µg Pen/ l dio como resultado más colonias y mayor proporción de colonias que contenían insertos que el plaqueo en 100 µg/ml pen. Colonias aleatorias se recogieron y se purificó el ADN de plásmido usando juegos o kits de miniprep Qiagen. Se obtuvo la secuencia de ADN del extremo 5 ' del inserto de ADNc y se comparó con las bases de datos usando el algoritmo BLAST. Se identificó el Ma524 como una desaturasa presunta basada en la homología de secuencia de ADN con las desaturasas identificadas previamente. Se aisló una clona de ADNc de longitud completa de la biblioteca de M. alpina de longitud completa. La abundancia de esta clona parece ser ligeramente (2X) menor gue Ma29. La secuencia de aminoácidos de Ma524 se encontró que presenta homología significativa con una porción de un cósmido de Caenorhabditis eleqans, W06D2.4, una proteína de fusión de citocromo b5/desaturasa de girasol, y las 2 ?6-desaturasas en los bancos de datos públicos de Svnechocystis y Spirulina. Además, se mostró que Ma524 tenía homología con la secuencia de ?6-desaturasa de borraja (TCP publicación WO96/21022). De este modo parece que Ma524 codifica una ?6-desaturasa que está relacionada con las ?d-desaturasas de la borraja y de algas. Deberá notarse que, aunque las secuencias de aminoácidos de Ma524 y de la ?6 de borraja son similares, la composición de base de ADNc mostraron ser significativamente diferentes. Por ejemplo, se mostró que el ADNc de borraja tiene una composición de base global de 60 por ciento A/T, con algunas regiones que exceden el 70 por ciento, mientras que Ma524 se mostró que tenía un promedio de 44 por ciento A+T de composición de base, sin regiones que excedieran el 60 por ciento. Esto puede tener implicaciones para expresar el ADNc en microorganismos o animales que favorecen diferentes composiciones de base. Se sabe que la mala expresión de genes recombinantes puede ocurrir cuando el huésped tiene una composición de base muy diferente de la del gen introducido. Los mecanismos especulados para esta mala expresión incluyen estabilidad disminuida o posibilidad de traducción del ARNm. Ejemplo 3 Identificación de las ?ß-desaturasas homologas a la Aß-desaturasa de Mortierella alpina Las secuencias de ácidos nucleicos gue codifican una 46-desaturasa presunta se identificaron mediante una búsqueda BLASTX de las bases de datos de EST a través de NCBI usando la secuencia de aminoácidos de Ma524. Varias secuencias mostraron homología significativa. En particular, la secuencia de aminoácidos deducida de dos secuencias de Arabidopsis thaliana, (números de acceso F13728 y T42806) mostraron homología a dos regiones diferentes de la secuencia de aminoácidos deducida de ma524. Los siguientes cebadores de reacción de cadena de polimerasa se designaron: ATTS4723-FOR (complementario a F13728) SEQ ID NO: 22: 5 ' CUACUACUACUAGGAGTCCTCTACGGTGTTTTG y T42806-REV (complementaria a T42806) SEQ ID NO:23: 5 ' CAUCAUCAUCAUATGATGCTCAAGCTGAAACTG . Cinco µg del ARN aislado total de los siliques en desarrollo de Arabidopsis thaliana se transcribieron a la inversa usando Supercript RTase de BRL y el cebador TSyn 5 ' -CCAAGCTTCTGCAGGAGCTCTTTTTTTTTTTTTTT-3 • (SEQ ID NO: 24) . Se llevó a cabo reacción de cadena de polimerasa en un volumen de 50 ul que contenía: templado derivado de 25 ng de ARN total, 2 pM de cada cebador, 200 µM de cada trifosfato desoxirribonucleótido, 60 mM Tris-Cl, pH 8.5, 15 M (NH4)2S04, 2 mM de MgCl2, 0.2 U Taq Polimerasa. Las condiciones de ciclado fueron las siguientes 94 grados durante 30 segundos, 50 grados durante 30 segundos, 72 grados durante 30 segundos. Se continuó la reacción de cadena de polimerasa durante 35 ciclos seguido de una extensión adicional a 72 grados durante 7 minutos. La reacción de cadena de polimerasa dio como resultado un fragmento de -750 el cual se subclonó, se nombró 12-5, y se secuenció. Cada extremo de este fragmento corresponde a los EST de Arabidopsis de la cual se derivaron cebadores de reacción de cadena de polimerasa. Esta es la secuencia denominada 12-5. La secuencia de aminoácidos presunta de 12-5 se comparó con la de Ma524, y los EST de humano (W28140), ratón (W53753) , y C. eleqans (R05219) en la Figura 4. Basándose en homologia, estas secuencias representan polipéptidos desaturasas. Los genes de longitud completa se pueden clonar usando sondas basadas en las secuencias EST. Los genes se pueden entonces colocar en vectores de expresión y ser expresados en células huéspedes, y su actividad específica de ?6- u otra desaturasa se puede determinar como se describe más adelante.

Ejemplo 4 Aislamiento de una secuencia de nucleótidos ?l2-desaturasa a partir de Mortierella alpina Basándose en los ácidos grasos que acumula, parece probable que la Mortierella alpina tiene una desaturasa tipo 6)6. La ?d-desaturasa es responsable de la producción de ácido linoleico (18:2) a partir de ácido oleico (18:1). El ácido linoleico (18:2) es un sustrato para una ?6-desaturasa. Este experimento se diseñó para determinar si Mortierella alpina tiene un polipéptido ?l2-desaturasa , y si es así, identificar la secuencia de nucleótidos correspondiente. Una colonia aleatoria de la biblioteca de grado de secuenciamiento de M. alpina, Ma648, fue secuenciada e identificada como una desaturasa presunta basada en una secuencia de ADN de homología a desaturasas previamente identificadas, como se describe para Ma524 (ver el Ejemplo 2) . La secuencia de aminoácidos deducida del extremo 5' del ADNc de Ma648 presenta homología significativa con la desaturasa microsomal de ?d (?l2) desaturasa de frijol de soya (número de acceso L43921) así como un oleato 12-hidroxilasa de semilla de ricino (número de acceso U22378) . Además, se observó homología cuando se comparó con una variedad de otras secuencias de desaturasas de ácidos grasos ?6 (?l2) y ?3 (?l5) . Ejemplo 5 Aislamiento de Secuencia de Nucleótidos de reductasa de citocromo b5 a partir de Mortierella al ina Una secuencia de ácido nucleico que codifica una reductasa de citocromo b5 de Mortierella alpina se obtuvo como sigue. Se construyó una biblioteca de ADNc basada en el ARN total aislado de Mortierella alpina como se describe en el ejemplo 1. La secuencia de ADN se obtuvo de los extremos 5' y 3' de una de las clonas, M12-27. Una búsqueda en bancos de datos públicos con la secuencia de aminoácidos deducida del extremo 3' de M12-27 (ver Figura 5) reveló homología significativa con secuencias de reductasa de citocromo b5 conocidas. Específicamente, sobre una región de 49 aminoácidos, la clona de Mortierella comparte 55 por ciento de identidad (73 por ciento de homología) con una reductasa citocromo b5 de cerdo (ver (Figura 4). Ejemplo 6 Expresión de clonas de desaturasa de M. alpina en levadura de panificación Transformación de levadura La transformación de acetato de litio de la levadura se realizó de acuerdo con protocolos estándares (Methods in Enzy ology, Vol. 194, p. 186-187, 1991). En resumen, la levadura se cultivó en YPD a 30°C. Las células se centrifugaron, se resuspendieron en TE, se centrifugaron de nuevo, se resuspendieron en TE gue contenía 100 mM de acetato de litio, se centrifugaron de nuevo, y se resuspendieron en TE/acetato de litio. La levadura resuspendida se incubó a 30SC durante 60 minutos con agitación. Se añadió el ADN portador y la levadura se dividió en tubos. Se añadió ADN transformante y los tubos se incubaron durante 30 minutos a 309C. Se añadió solución PEG (35 por ciento (peso sobre volumen) PEG 4000, 100 mM acetato de litio, TE pH 7.5) seguido por 50 minutos de incubación a 309C. Se llevó a cabo un choque de calor de 5 minutos a 42 C las célula se aglomeraron, se lavaron con TE, se aglomeraron de nuevo y se resuspendieron en TE. Las células resuspendidas se plaquearon sobre medios selectivos. Expresión de desaturasas en la levadura transformada Las clonas de ADNc de Mortierella alpina se seleccionaron para determinar la actividad desaturasa en la levadura de panificación. Se usó una ?l5-desaturasa de cañóla (obtenida mediante reacción de cadena de polimerasa usando la primera cadena de ADNc de semillas de cultivo 212/86 de Brassica napus usando cebadores basados en la secuencia publicada (Arondel y colaboradores Science 258:1353-1355)) se usó como control positivo. El gen ?l5-desaturasa y el gen de la clona de ADNc Ma29 se insertó en el vector de expresión pYES2 (Invitrogen) , dando como resultado los plásmidos pCGR-2 y pCGR-4 , respectivamente. Estos plásmidos se transíectaron en la cepa 334 de levadura S. cerevisiae y se expresaron después de la inducción con galactosa y en la presencia de sustratos que permitieron la detección de actividad desaturasa específica. La cepa de control fue la cepa 334 de S. cerevisiae que contenía al vector pYES2 sin alterar. Los sustratos usados, los productos producidos y la actividad desaturasa indicada fueron: ácido dihomo-gama-linolénico (la conversión en ácido araquidónico indicaría actividad ?5-desaturasa) , ácido linoleico (conversión en ácido gamalinolénico indicaría actividad ?6-desaturasa; la conversión en ácido alfalinolénico indicaría actividad ?15-desaturasa) , ácido oleico (un sustrato endógeno hecho por S. cerevisiae, la conversión en ácido linoleico indicaría actividad ?12 -desaturasa, de la cual carece la S. cerevisiae) , o ácido araquidónico (la conversión en ácido eicosapentaenoico indicaría actividad ?l7-desaturasa) . Los resultados se proporcionan en la Tabla 1 más adelante. Las fracciones de lípidos se extrajeron como sigue: Se cultivaron cultivos durante 48-52 horas a 15 °C. Las células se aglomeraron mediante centrifugación, se lavaron una vez con agua bidestilada estéril, y se volvieron a aglomerar. El aglomerado se agitó con metanol; se añadió cloroformo junto con tritridecanoína (como un estándar interno) . Las mezclas se incubaron durante cuando menos 1 hora a temperatura ambiente o a 4°C durante la noche. La capa de cloroformo se extrajo y se filtró a través de un filtro Whatman con un gramo de sulfato de sodio anhidroso para remover partículas del agua residual. Se evaporaron los solventes orgánicos a 40 °C bajo una corriente de nitrógeno. Los lípidos extraídos se derivaron en esteres metílicos de ácidos grasos (EMAG) para el análisis de cromatografía en gas (CG) añadiendo 2 mililitros de hidróxido de potasio 0.5 N en metanol a un tubo cerrado. Las muestras se calentaron a 95 °C hasta 100 °C durante 30 minutos y se enfriaron a temperatura ambiente . Aproximadamente se añadieron 2 mililitros de 14 por ciento de trifluoruro de boro en metanol y se repitió el calentamiento. Después de que se enfrió la mezcla de lípidos extraída, se añadieron 2 mililitros de agua y 1 mililitro de hexano para extraer los esteres metílicos de ácidos grasos para analizarlos mediante cromatografía en gas . Se calculó la conversión porcentual dividiendo el producto producido entre la suma de (el producto producido y el sustrato añadido) y luego se multiplicó por 100. Para calcular la conversión porcentual de ácido oleico, como no se añadió sustrato, el ácido linolénico total producido se dividió entre la suma de (ácido oleico y el ácido linoleico producido) , y luego se multiplicó por 100.

Tabla 1 Expresión de Desaturasa de M. alpina en Levadura de Panadero La clona de control ?l5-desaturasa exhibió 16.3 por ciento de conversión del sustrato. La clona pCGR-4 que expresa el ADNc Ma29 convirtió el 15.3 por ciento del sustrato de 20:3 a 20:4?6, lo que indica que el gen codifica una ?5-desaturasa. El fondo (conversión no específica del sustrato) fue entre 0 y 3 por ciento en estos casos. La clona pCGR-5 que expresa el ADNc Ma524 mostró el 6 por ciento de conversión del sustrato en ácido gama-linolénico, lo que indica que el gen codifica una ?6 desaturasa. La clona pCGR-7 que expresa el ADNc Ma648 mostró el 63.4 por ciento de conversión del sustrato en ácido linoleico, lo que indica que el gen codifica una ?l2-desaturasa. Encontramos también inhibición de sustrato de la actividad usando diferentes concentraciones del sustrato. Cuando se añadió sustrato a 100 µM, la conversión porcentual en producto bajó en comparación a cuando el sustrato se añadió a 25 µM (véase más adelante) . Estos datos muestran que desaturasas con diferentes especificidades de sustrato se pueden expresar en un sistema heterólogo y usar para producir ácidos grasos poli-insaturados. La Tabla 2 representa los ácidos grasos de interés como un porcentaje de los lípidos totales extraídos de la levadura huésped S. cerevisiae 334 con el plásmido indicado. No hubo glucosa presente en el medio de crecimiento. Se usó cromatografía de afinidad en gas para separar los lípidos respectivos. Se empleó cromatografía en gas/espectrografía de masa para verificar la identidad de los productos. El producto esperado para la ?15-desaturasa de B . napus, ácido a-linolénico se detectó cuando su sustrato, ácido linoleico, se añadió exógenamente al cultivo de levadura inducido. Este hallazgo demuestra que la expresión de levadura de un gen desaturasa puede producir enzima funcional y cantidades detectables de producto bajo las condiciones de cultivo ordinarias. Ambos sustratos añadidos exógenamente fueron recogidos por la levadura, aunque ligeramente menos del ácido graso poli-insaturado de cadena más larga, el ácido dihomo-7-linolénico (20:3), se incorporó en la levadura que el ácido linoleico (18:2) cuando cualquiera de los dos se añadió en forma libre a los cultivos de levadura inducidos. Se detectó ácido gamalinolénico cuando estaba presente ácido linoleico durante la inducción y expresión de S. cerevisiae 334 (pCGR-5) . La presencia de este ácido graso poli-insaturado demuestra actividad de ?6-desaturasa a partir del pCGR-5 (Ma524) . El ácido linoleico, identificado en los lípidos extraídos de la expresión del S. cerevisiae 334 (pCGR-7) , clasifica el Ma648 del ADNc de M. alpina como la ?l2-desaturasa .

Tabla 2 Acido Graso como Porcentaje de Lípido Total Extraído de Levadura 100 µM sustrato añadido * 18:1 es un ácido graso endógeno en levadura Clave de las Tablas 18:1 = ácido oleico 18:2 = ácido linoleico Q¡-18:3 = ácido a-linolénico ?-18:3 = ácido ?-linolénico 18:4 = ácido estearidónico 20:3 = ácido dihomo-?- linolénico 20:4 = ácido araquidónico Ejemplo 7 Expresión de ?5-desaturasa en plantas Expresión en ho as Este experimento se diseñó para determinar si las hojas que expresan Ma29 (determinado mediante Northern) eran capaces de convertir ácido dihomo-gama-linolénico (20:3) exógeramente en ácido araguidónico (20:4). El ADNc desaturasa de Ma29 se modificó mediante reacción de cadena de polimerasa para introducir sitios de restricción convenientes para clonación. La región de codificación desaturasa se insertó en una cinta d35 bajo el control del promotor doble 35S para la expresión en hojas de Brassi ca (pCGN5525) siguiendo protocolos estándares (véase Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número: 5,424,200 y Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número: 5,106,739) . Las plantas de Brassica transgénicas que contienen pCGN5525 se generaron siguiendo protocolos estándares (véase Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número: 5,188,958 y Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número: 5,463,174) . En el primer experimento, se usaron tres plantas: un control, LP004-1, y dos transgénicas, 5525-23 y 5525-29. LP004 es una variedad de Brassíca con bajo contenido de linolénico. Se eligieron hojas de cada una para uno de tres tratamientos: agua, ácido ga a-linolénico o ácido dihomo-gama-linolénico. El ácido gama-linolénico y el ácido dihomo-gama-linolénico se compraron como sales de sodio en NuChek Prep y se disolvieron en agua a 1 miligramo/mililitro. Se cubrieron alícuotas bajo N2 y se almacenaron a -70 °C. Las hojas se trataron aplicando una gota de 50 microlitros a la superficie superior y extendiendo suavemente con un guante enguantado para cubrir la superficie entera. Las aplicaciones se hicieron aproximadamente 30 minutos antes del término del ciclo de luz para minimizar cualquier foto-oxidación de los ácidos grasos aplicados. Después de 6 días de tratamiento una hoja de cada tratamiento se cosechó y se cortó a la mitad a través de la vena central. Una mitad se lavó con agua para intentar remover el ácido graso no incorporado. Las muestras de hojas se liofilizaron durante la noche, y se determinó la composición de ácidos grasos mediante cromatografía en gas (CG) . Los resultados se muestran en la Tabla 3.

Tabla 3 Análisis de Ácidos Grasos de Hojas de Plantas de Brassica Transgénicas Ma29 Tabla 3 -Continuación Análisis de Ácidos Grasos de Hojas de Plantas de Brassica Transgénicas Ma29 Las hojas tratadas con ácido gama-linolénico contenían de 1.56 a 2.4 por ciento en peso de ácido gamalinolénico. El análisis de ácidos grasos mostró que la composición de lípidos de las hojas de control y transgénicas fue esencialmente la misma. Las hojas de las plantas de control tratadas con ácido dihomo-gama-linolénico contenían 1.2-1.9 por ciento en peso de ácido dihomo-gama-linolénico y cantidades de fondo de ácido araquidónico (0.26-0.27 por ciento en peso) . Las hojas transgénicas contenían solamente 0.2-0.7 por ciento en peso de ácido dihomo-gama-iinolénico, pero los niveles de ácido araquidónico aumentaron (0.74-1.1 por ciento en peso) indicando que el ácido dihomo-gama-linolénico se convirtió en ácido araquidónico en estas hojas. Expresión en semilla El propósito de este experimento fue determinar si una construcción con el promotor napín específico de semilla habilitaría la expresión en la semilla. El ADNc de Ma29 fue modificado mediante reacción de cadena de polimerasa para introducir sitios de clonación Xhol corriente arriba y corriente abajo de los codones de inicio y de detención, respectivamente, usando los siguientes cebadores: Madxho-hacia adelante: 5'-CUACUACUACUACTCGAGCAAGATGGGAACGGACCAAGG (SEQ ID NO: 25) Madxho-hacia atrás: ' -CAUCAUCAUCAUCTCGAGCTACTCTTCCTTGGGACGGAG (SEQ ID NO: 26) . El producto de reacción de cadena de poli erasa se subclonó en pAMPl (GIBCOBRL) usando el sistema CloneA p (GIBCO-BRL) para crear pCGN5522 y la secuencia de ?5 desaturasa se verificó secuenciando ambas cadenas. Para la expresión específica de semilla, la región de codificación de Ma29 se separó de pCGN5522 como un fragmento Xhol y se insertó en el sitio Salí de la cinta de expresión napín, pCGN3223, para crear pCGN5528. El fragmento HindIII del pCGN5528 que contiene la región reguladora 5' napín, la región de codificación Ma29, y la región reguladora de 3' napín se insertó en el sitio HindIII de pCGN1557 para crear pCGN5531. Dos copias de la unidad de transcripción napin se insertaron en hilera. Esta construcción en hilera puede permitir mayor expresión de las desaturasas por lugares genéticos. Se introdujo pCGN5531 en Brassica napus CV.LP004 vía la transformación mediada por Agrobacterium. La composición de ácidos grasos de criaderos de 20 semillas de las semillas T2 maduras se analizó mediante cromatografía en gas. La Tabla 4 muestra los resultados obtenidos con líneas transformadas independientes en comparación con la semilla LP004 no transformada. Las semillas transgénicas que contenían pCGN5531 contienen dos ácidos grasos que no están presentes en las semillas de control, tentativamente identificados como ácido taxoleico (5,9-18:2) y ácido pinolénico (5,9,12-18:3), basándose en su elución relativa al ácido oleico y al ácido linoleico. Estos serían los productos esperados de la ?5 desaturación de los ácidos oleico y linoleico. No se observaron otras diferencias en la composición de ácidos grasos en las semillas transgénicas. Se realizó análisis Northern en plantas para identificar las que expresan Ma29. Se aislaron embriones en desarrollo aproximadamente 25 días después de la antesis o cuando se indujo el promotor napín, y se pusieron a flotar en una solución que contenía ácido gama-linolénico o ácido dihomo-gama-linolénico como se describe en el Ejemplo 7. El análisis de ácidos grasos de los embriones se realizó entonces mediante cromatografía en gas para determinar la cantidad de conversión de ácido dihomo-gama-linolénico en ácido araquidónico, siguiendo el protocolo adaptado para las hojas en el Ejemplo 7. La cantidad de ácido araquidónico incorporada en triglicéridos mediante las acilotransferasas de Brassi ca endógenas se evaluó entonces mediante análisis de cromatografía en gas como en el Ejemplo 7.

Tabla 4 Composición de Semilla Combinada T2 Ejemplo 8 Expresión de ?6 Desaturasa de M. alpina en Brassica napus El ADNc de Ma524 se modificó mediante reacción de cadena de polimerasa para introducir sitios de clonación usando los siguientes cebadores: Ma524PCR-l (SEQ ID NO: 27) 5 ' -CUACUACUACUATCTAGACTCGAGACCATGGCTGCTGCTCCAGTGTG Ma524PCR-2 (SEQ ID NO:28) 5 ' -CAUCAUCAUCAUAGGCCTCGAGTTACTGCGCCTTACCCAT Estos cebadores permitieron la amplificación de la región de codificación entera y añadieron los sitios Xbal y Xhol en el extremo ' y los sitios Xhol y Stul en el extremo 3. El producto de reacción de cadena de polimerasa se subclonó en pAMPl (GIBCO-BRL) usando el sistema CloneAmp (GIBCO-BRL) para crear pCGN5535 y la secuencia de ?d desaturasa se verificó secuenciando ambas cadenas. Para la expresión específica de semilla, la región de codificación de Ma524 se separó de pCGN5535 como un fragmento Xhol y se insertó en el sitio Salí de la cinta de expresión napín, pCGN3223, para crear pCGN5536. El fragmento Notl del pCGN5536 gue contiene la región reguladora 5', la región de codificación Ma524, y la región reguladora de 3' napín se insertó en el sitio Notl de pCGN1557 para crear pCGN5538. Se introdujo pCGN5538 en Brassica napus cv.LP004 vía la transformación mediada por Aqrobacteriu .

Se recolectaron semillas maduras T2 de 6 eventos de transformación independientes en el invernadero. La composición de ácidos grasos de semillas únicas se analizó mediante cromatografía en gas. La Tabla 5 muestra los resultados de las semillas de control LP004 y 6 líneas 5538. Todas las líneas 5538 excepto la número 8 produjeron semillas que contenían ácido gama-linolénico . La presencia de ácido gama-linolénico segregado en estas semillas es como se esperaba para la población de semillas T2 coloreada. Además al ácido gama-linolénico, la ?6 desaturasa de M. ' alpina es capaz de producir ácido 18:4 (estearidónico) y otro ácido graso que se cree que es el 6,9-18:2. Los resultados anteriores muestran que las desaturasas con tres diferentes especificidades de sustratos se pueden expresar en un sistema heterólogo y usar para producir ácidos grasos poli-insaturados de cadena larga. Se ejemplificó la producción de ácido araquidónico (20:4) a partir del precursor 20:3 (ácido dihomo-gama-linolénico), y la producción de ácido gama-linolénico (18:3) a partir de sustrato 18:2, y la conversión de 18:1 sustrato en 18:2, el cual es el precursor para ácido gama-linolénico.

M >í f • m ro t o •o •o • O' »í -n >_, Í -O ?ltni? tM O O- *— • . CO O eo A fd *? ? ?n j- r co «— o 00 '- '— - CO N- f\j t?n '-eo ,? • u-. - Í ^ _n -í st cvj co ip -j- rj M r r M OJ-J- r? J - • • Í\J OJ sí>í t- S- O L OCO tr so o. P) L? —-~4 —U? ?n cd ? id Ejemplo 9 Expresión de ?l2 Desaturasa de M. alpina en Brassica napus El ADNc de Ma648 se modificó por reacción de cadena de polimerasa para introducir sitios de clonación usando los siguientes cebadores: Ma648PCR-hacia adelante (SEQ ID NO: 29) 5 ' -CUACUACUACU?GGATCCATGGCACCTCCCAACAACT Ma648PCR-hacia atrás (SEQ ID NO: 30) 5 ' -CAUCAUCAUCAUGGTACCTCGAGTTACTTCTTGAAAAAGAC Estos cebadores permitieron la amplificación de la región de codificación entera y añadieron un sitio BamHl en el extremo d ' y los sitios Kpnl y Xhol al extremo 3'. El producto de la reacción de cadena de polimerasa ee subclonó en pAMPl (GIBCO-BRL) usando el sistema CloneA p (GIBCO-BRL) para crear pCGN5540 y la secuencia de ?l2 desaturasa se verificó secuenciando ambas cadenas. Para la expresión específica de semilla, la región de codificación de Ma648 se separó de ?CGN5540 como un fragmento BamHI/XhoI y se insertó en el sitio B lII y Xhol de la cinta de expresión napín, pCGN3223, para crear pCGN5542. El fragmento Asp718 del pCGN5541 que contiene la región reguladora 5', la región de codificación Ma648, y la región reguladora de 3' napín se insertó en el sitio Asp718 de pCGN5138 para crear pCGN5542. Se introdujo pCGN5542 en Brassica napus cv.LP004 vía la transformación mediada por Aqrobacterium. Se usaron la variedad comercial de cañóla, SP30021, y la línea con bajo contenido de linolénico, LP30108. Las semillas T2 coloreadas maduras se recolectaron de 19 eventos independientes de transformación de LP30108 y un control no transformado cultivado en el invernadero. Estas semillas se esperaba que se segregaran para el trasgén ?12 desaturasa. La composición de ácidos grasos de criaderos de semillas se analizó mediante cromatografía en gas. Los resultados se muestran en la Tabla 6. Todas las líneas transformadas contenían niveles aumentados de 18:2, el producto de la ?12 desaturasa. Los niveles de 18:3 no se aumentaron significativamente en estas plantas . Los eventos número 11 y 16 mostraron la acumulación mayor de 18:2 en las semillas criadas. Para investigar la segregación de los niveles de 18:2 en las semillas T2 y para identificar las plantas individuales que se tomaran en las generaciones posteriores, se realizó análisis de mitad de semilla. Las semillas se germinaron durante la noche en la obscuridad a 30 grados sobre papel filtro remojado en agua. El cotiledón externo se separó para análisis por cromatografía en gas y el resto del cultivo se plantó en tierra. Los resultados de algunos de estos análisis se muestran en la Tabla 7. Las semillas T2 individuales que contenían la ?12 desaturasa de M. alpina acumularon hasta el 60 por ciento de 18:2 en las semillas. La muestra 97xxlll6 #59 es un ejemplo de un segregante nulo. Aún en los acumuladores más altos de 18:2, los niveles de 18:3 se aumentaron sólo ligeramente. Estas y otras plantas T2 seleccionadas individualmente se cultivaron en el invernadero y en el campo para producir la semilla T3. Se recolectaron semillas T2 coloreadas maduras a partir de 20 eventos independientes de transformación SP30021 y un control no transformado cultivado en el invernadero. Estas semillas se esperaba que se segregaran para el transgén ?12 desaturasa. La composición de ácidos grasos de criaderos de 20 semillas se analizó mediante cromatografía en gas. Los datos se presentaron en la Tabla 8. Todas las líneas transformadas contenían niveles aumentados de 18:2, el producto de la ?l2 desaturasa. Como en la línea LP30108 de bajo contenido de linolénico, los niveles de 18:3 no aumentaron significativamente. Los eventos número 4 y 12 mostraron la acumulación mayor de 18:2 en la semillas criadas. Para investigar la segregación de los niveles de 18:2 en las semillas T2 y para identificar plantas individuales para ser tomadas para generaciones posteriores, se realizó análisis alf-semilla. Las semillas se germinaron durante la noche en la obscuridad a 30 grados en papel filtro remojado en agua. El cotiledón externo se separó para análisis por cromatografía en gas y el resto de las semillas se plantaron en tierra. Los resultados de estos análisis se muestran en la Tabla 9. Las muestras 97xxll57 # 88 y #18 son ejemplos de segregantes nulos para 5542-SSP30021-4 y 5542-SP30021-12 respectivamente. Estas y otras plantas T2 seleccionadas individualmente se cultivaron en el invernadero y en el campo para producir la semilla T3.

Tabla 6 CICLO ID MST CEPA ID 16:0 16:1 1. 1:0 18:1 18:2 18:3 20:0 20:1 20:2 22:0 NO 97XX1098 45 5542-LP30108--16 7.04 0.43 1. .12 18.01 66.36 4.76 0.5 0.84 0.3 0.44 97XX1098 22 5542-LP30108--16 5.17 0.29 2. 11 22.01 65.18 3.15 0.63 0.75 0.21 0.36 97XX1098 40 5542-LP30108--16 4.99 0.2 2. .05 23.91 63.13 3.3 0.73 0.85 0.23 0.49 97XX1098 28 5542-LP30108--16 4.47 0.19 1. .75 26.7 62.39 2.46 0.58 0.85 0.2 0.32 97XX1098 2 5542-LP30108--16 4.54 0.21 1. .66 26.83 61.89 2.9 0.55 0.82 0.18 0.33 97XX1098 58 5542-LP30108--16 6.05 0.31 1. .36 24.11 61.36 3.8 0.72 1.13 0.26 0.58 97XX1098 83 5542-LP30108--16 5.13 0.17 2. .03 27.05 60.93 2.62 0.7 0.71 0.14 0.4 97XX1098 34 5542-LP30108--16 4.12 0.19 1. .44 29.35 60.54 2.53 0.43 0.89 0.17 0.25 97XX1116 37 5542-LP30108--11 4 0.14 2, .43 23.29 63.99 2.6 0.58 0.69 0.71 1.11 97XX1116 88 5542-LP30108--11 3.8 0.18 2. .04 23.59 63.93 2.95 0.54 0.81 0.99 0.82 97XX1116 36 5542-LP30108--11 4.15 0.2 1. .51 25.94 62.14 2.74 0.47 0.87 0.79 0.81 97XX1116 31 5542-LP30108--11 6.29 0.35 1. .04 24.14 60.91 4.02 0.55 0.91 0.75 0.72 97XX1116 10 5542-LP30108--11 6.97 0.4 3, .36 18.9 60.66 4.68 1.2 0.7 0.53 1.71 97XX1116 32 5542-LP30108--11 3.96 0.16 2 .61 26.73 60.54 3.38 0.66 0.87 0.2 0.62 97XX1116 55 5542-LP30108--11 4.26 0.22 0. .98 28.57 59.94 3.24 0.4 0.68 0.71 0.75 97XX1116 12 5542-LP30108--11 4.17 0.23 1 .42 28.61 59.52 3.26 0.51 0.95 0.29 0.67 Tabla 6 CICLO ID MST CEPA ID 16:0 16:1 18:0 18:1 18:2 18:3 20:0 20:1 20:2 22:0 NO 97XX1116 86 5542-LP30108 - 11 4. .23 0.3 1.09 28.34 59.2 3. .95 0. .48 0. .91 0. .55 0 .71 97XX1116 61 5542-LP30108 - 11 4 .13 0.16 1.92 30.18 58.67 2 .65 0, .56 0. .88 0. .25 0. .41 97XX1116 60 5542 -LP30108 - 11 4. .42 0.26 1.61 28.77 58.6 3. .26 0. .53 0. .85 0. .68 0. .75 97XX1116 91 5542-LP30108 - 11 7 .82 0.67 2.37 17.97 58.43 4 .85 0 .94 0. .86 3. .87 1. .71 97XX1116 59 5542-LP30108 - 11 3 .56 0.2 1.6 65.5 23.03 2 .23 0. .52 1. .54 0 .49 0 .69 Tabla 7 16 : 0 16 : 1 18 : 0 18 : 1 18 : 2 18 : 3 20 : 0 20 : 1 20 : 2 22 : 0 5542-LP30108-1 4.6 0. .15 1. .93 50.44 38.54 2. ,06 0. 65 1. 11 0.09 0.37 5542-LP30108-2 4.63 0. .17 1. .78 41.11 47.53 2. .46 0. .62 1. 02 0.14 0.38 5542-LP30108-3 4.96 0. .18 2. .07 48.16 40.01 2. .17 0. .73 1. .13 0.1 0.39 5542-LP30108-4 4.36 0. .15 1. .94 46.51 42.57 1. .95 0. .64 1. .06 0.11 0.35 5542-LP30108-5 4.45 0. .14 2. .19 49.54 39.13 2. .14 0. .72 1. 14 0.11 0.38 5542-LP30108-6 4.97 0. .16 1. .86 49.23 39.2 2. .17 0.7 1. .12 0.11 0.41 5542-LP30108-7 4.46 0. .13 2. .72 39.6 48.65 2. .02 0. .81 0. .96 0.13 0.4 5542-LP30108-8 4.63 0. .18 1. .78 47.86 41 2. .31 0. .62 1. .09 0.11 0.36 5542-LP30108-9 4.64 0 .16 1. .75 42.5 46.57 2.2 0, .61 1 0.13 0.35 5542-LP30108-10 4.46 0 .15 2, .37 43.61 45.29 1 .77 0. .71 1. .02 0.12 0.36 5542-LP30108-11 4.58 0 .25 1 .88 37.08 50.95 2 .94 0. .64 0, .96 0.16 0.42 5542-LP30108-12 4.46 0 .18 1 .69 43.62 45.36 2 .44 0 .59 1 .09 0.14 0.34 5542-LP30108-13 4.45 0 .15 2 .33 51 37.71 1 .91 0 .75 1 .12 0.09 0.4 5542-LP30108-14 4.3 0 .16 2 .04 45.93 42.78 2 .46 0 .66 1 .07 0.14 0.37 5542-LP30108-15 4.18 0 .16 2 .17 43.79 45.2 2 .14 0 .68 1 .04 0.15 0.36 5542-LP30108-16 5.04 0 .18 1 .89 32.32 55.78 2 .68 0 .63 0 .84 0.2 0.36 Tabla 7 16:0 16:1 18:0 18:1 18:2 18:3 20:0 20:1 20:2 22:0 5542-LP30108-18 4.2 0.14 2.23 50.63 38.51 1. .79 0, .72 1.15 0.1 0.37 5542-LP30108-19 4.63 0.18 1.81 52.51 36.26 2. .12 0. .68 1.19 0.1 0.4 5542-LP30108-20 4.77 0.15 2.78 39.76 48.06 2. .25 0. .75 0.91 0.13 0.36 LP30108 control 4.31 0.22 2.05 66.15 22.59 1.87 0.77 1.3 0.07 0.44 Tabla 8 CEPA ID 16:0 16:1 18:0 18:1 18:2 18:3 20:0 2C ):1 20:2 22 :0 5542--SP30021--1 4.37 0. ,17 2.17 40726 39.43 11.06 0.74 1. ,14 0. .14 0.42 5542--SP30021--2 4.33 0. .18 1.51 43.07 36.03 12.57 0.57 1. .21 0. .14 0.33 5542--SP30021--3 5.2 0. .22 3.1 43.7 37.04 8.03 0.92 1. .06 0. .13 0.48 5542--SP30021--4 4.37 0. .15 1.94 34.26 45.12 12.04 0.6 0. .96 0, .17 0.3 5542--SP30021--5 4.15 0. .17 1.73 48.98 31.13 11.41 0.63 1. .26 0. .13 0.35 5542--SP30021--6 4.52 0. .17 1.92 38.1 42.39 10.53 0.67 1. .04 0. .18 0.39 5542--SP30021--7 4.58 0. .18 1.66 41.87 37.52 11.8 0.62 1. .14 0. .15 0.36 5542--SP30021--8 4.46 0. .17 1.59 42.69 36.93 11.88 0.59 1. .14 0. .14 0.35 5542--SP30021--9 4.63 0. .19 1.69 39.89 39.75 11.48 0.62 1, .09 0, .15 0.38 5542--SP30021--10 4.74 0. .16 1.79 39.19 40.51 11.42 0.63 0, .99 0 .13 0.34 5542--SP30021--11 4.57 0. .16 1.71 38.13 42 11.15 0.62 1 .04 0 .18 0.36 5542--SP30021--12 4.05 0 .16 2.04 35.44 43.47 12.45 0.62 1 .07 0 .21 0.33 5542--SP30021--13 4.37 0. .15 1.79 38.74 41.28 11.36 0.62 1 .04 0 .16 0.35 5542--SP30021--14 4.32 0 .16 1.47 42.32 37.17 12.3 0.54 1 .16 0 .16 0.32 5542--SP30021--15 4.25 0 .18 1.65 44.96 34.28 12.39 0.59 1 .13 0 .14 0.32 Tabla 8 CEPA ID 16:0 16:1 18:0 18:1 18:2 18:3 20:0 20:1 20:2 22:0 5542-SP30021-16 4.53 0.17 1.91 42.13 38.32 10.51 0.67 1.12 0.14 0.38 5542-SP30021-17 4.16 0.19 1.7 50.65 29.3 11.4 0.61 1.29 0.11 0.36 5542-SP30021-18 4.24 0.17 1.68 44.47 35.46 11.52 0.6 1.19 0.14 0.34 5542-SP30021-19 4.1 0.18 1.8 46.67 33.87 10.86 0.63 1.24 0.13 0.37 5542-SP30021-20 4.3 0.17 1.64 39.6 40.39 11.53 0.57 1.12 0.16 0.32 SP30021 4.38 0.21 1.47 56.51 22.59 12.04 0.62 1.45 0.11 0.39 Tabla 9 CICLO ID MST CEPA ID 16:0 16:1 18:0 18:1 18:2 18:3 20:0 20:1 20:2 22:0 NO 97XX1156 96 5542--SP30021--4 3.71 0.13 1.36 29.29 51.74 11.57 0.41 0.85 0.1. 0.46 97XX1156 50 5542--SP30021--4 2.95 0.11 1.33 28.78 50.97 13.83 0.3 0.99 0.28 0.32 97XX1158 10 5542--SP30021--4 4.05 0.16 2.47 31.18 50.88 .77 0.67 0.89 0.22 0.33 97XX1158 32 5542--SP30021--4 3.56 0.15 1.44 30.73 50.1 11.86 0.47 0.91 0.21 0.22 97XX1158 56 5542--SP30021--4 4.44 0.19 3.09 30.64 49.71 9.39 0.83 0.79 0.2 0.4 97XX1157 80 5542--SP30021--4 4.05 0.18 1.32 27.41 49.59 14.81 0.53 1.19 0.29 0.4 97XX1158 39 5542--SP30021--4 4.04 0.15 2.98 28.62 49.52 12.28 0.69 0.86 0.31 0.27 97XX1156 17 5542--SP30021--4 3.65 0.15 2.43 29.38 49.42 12.3 0.52 0.92 0.67 0.35 97XX1156 60 5542--SP30021--4 3.75 0.17 1.7 30.03 49.13 12.87 0.51 1.01 0.27 0.35 97XX1157 83 5542--SP30021--4 4.15 0.2 1.77 29.72 49.08 12.22 0.66 1.21 0.16 0.52 97XX1157 86 5542--SP30021--4 3.6 0.14 1.12 27.65 49.01 16.05 0.48 1.21 0.33 0.08 97XX1158 77 5542 -SP30021--4 4.14 0.17 1.58 31.98 48.82 10.72 0.65 1 0.28 0.44 97XX1157 88 5542 -SP30021 -4 3.36 0.15 1.22 56.42 21.63 13.78 0.58 1.85 0.06 0.65 Tabla 9 CICLO ID MST CEPA ID 16:0 16:1 18:0 18:1 18:2 18:3 20:0 20:1 20:2 22:0 NO 97XX1157 39 5542-SP30021- 12 2.84 0.04 1.84 29.6 53.16 9.52 0.57 1.32 0.35 0.48 97XX1157 55 5542-SP30021 -12 3.28 0.1 2.18 30.36 52.27 9.26 0.63 1.15 0.22 0.41 97XX1157 10 5542 -SP30021- 12 3.5 0.06 1.51 29.78 50.98 11.13 0.64 1.45 0.4 0.26 97XX1157 41 5542 -SP30021- 12 3.31 0.08 1.64 30.18 50.51 11.59 0.57 1.27 0.24 0.41 97XX1157 35 5542-SP30021-12 3.31 0.09 1.57 30.36 50.1 12.17 0.5 1.15 0.23 0.35 97XX1157 1 5542-SP30021-12 3.45 0.11 2.88 32.11 49.45 8.69 0.82 1.22 0.27 0.63 97XX1157 16 5542 -SP30021- 12 2.91 0.09 1.52 29.35 48.88 14.26 0.58 1.39 0.15 0.3 97XX1157 50 5542-SP30021-12 3.29 0.09 2.13 33.23 48.78 9.87 0.67 1.06 0.18 0.47 97XX1157 25 5542-SP30021-12 2.83 0.05 1.4 33.22 48.52 11.22 0.5 1.33 0.26 0.42 97XX1157 57 5542 -SP30021-12 2.94 0.13 1.46 32.85 47.58 12.21 0.57 1.31 0.27 0.47 97XX1157 56 5542-SP30021-12 3.01 0.07 1.63 31.53 47 14.02 0.59 1.31 0.28 0.23 97XX1157 6 5542-SP30021-12 3.9 0.13 1.5 32.43 46.98 12.45 0.52 1.11 0.21 0.49 97XX1157 18 5542-SP30021-12 3.88 0.16 1.73 57.94 22.33 10.51 0.74 1.68 0.11 0.64 Ejemplo 10 Expresión simultánea de ?6 y ?12 desaturasas de M. alpina en Brassica napus Con el fin de expresar la ?6 y ?l2 desaturasas de M. alpina a partir del mismo ADN-T, se realizó la siguiente construcción para la expresión específica de semilla. El fragmento Notl de pCG?5536 contenido en la región reguladora 5' napín, la región de codificación a524 y la región reguladora 3 ' napín se insertó en el sitio Noül de pCG?5542 para crear pCG?5544. Los modelos de expresión se orientaron de manera que la dirección de transcripción de a524 y Ma648 y el marcador nptll es el mismo. Se introdujo el pCG?5544 en Brassica napus cv.LP30108 vía transformación mediada por Agrobacteri um . Se recolectaron semillas T2 coloreadas maduras de 16 eventos de transformación LP30108 independientes y un control no transformado que se cultivó en el invernadero. Estas semillas se esperaba que segregaran para el transgén desaturasas ?6+?12. La composición de ácidos grasos de criaderos de 20 semillas se analizó mediante cromatografía en gas. Los resultados se presentan en la Tabla 10. Todas menos una de las líneas (5544-LP30108-3) muestra una composición de aceite alterada en comparación con los controles. Se produjo ácido gama-linolénico en todas menos 3 de las líneas (-3, -4, -11) ,- dos de las tres sin ácido gama-linolénico (-4, -11) mostraron 18:2 aumentado indicador de la expresión de la ?12 desaturasa. Como un grupo, los niveles de ácido gama-linolénico observados en plantas contenían la construcción doble ?6 + ?12 (pCGN5544) fueron mayores que las de las plantas que contenían pCGN5538 (?6 solo) . Además, los niveles del ?6,9 18:2 son muy reducidos en las plantas que contienen la ?12 + ?ß en comparación con ?6 sola. De este modo, la combinación de ?6 y ?12 desaturasas en un ADN-T conduce a la acumulación de más ácido gama-linolénico y menos productos secundarios que la expresión de ?6 desaturasa sola. Para investigar la segregación de niveles de ácido gamalinolénico en las semillas T2 y para identificar plantas individuales que se tomarán en las generaciones posteriores, se realizó análisis de media semilla. Las semillas se germinaron durante la noche en la obscuridad a 30 grados en papel filtro remojado en agua. El cotiledón externo se separó para análisis por cromatografía en gas y el resto de las semillas se plantaron en tierra. Los resultados de algunos de estos análisis se muestran en la Tabla 11. Como se esperaba para la población T2 , los niveles de ácido gama-linolénico y 18:2 son segregantes en las semillas individuales. El contenido de ácido gama-linolénico de hasta el 60 por ciento de ácidos grasos se observó en semillas individuales. Los eventos individuales se seleccionaron para cultivarse en el invernadero y en el campo para la producción de semilla T3. Las plantas transgénicas que incluyen Brassica, frijol de soya, cártamo, maíz, linaza y girasol que expresan las construcciones de esta invención pueden ser una buena fuente de ácido gama-linolénico. Las fuentes típicas de ácido gama-linolénico tales como borraja producen a lo mucho 25 por ciento de ácido gamalinolénico. En cambio las plantas en la Tabla 10 contienen hasta 30 por ciento de ácido gama-linolénico. Además, las semillas individuales mostradas en la Tabla 11 contienen hasta 60 por ciento de ácido gama-linolénico.

Tabla 10 16:0 16:1 18:0 18:1 18:2 18:2 18:3 18:3 18:4 20:0 20:1 22:0 ?6,9 ?9,12 ?6,9,12 ?9,12,15 5544-LP30108-1 4.54 0.17 1.91 49. .96 0 30.98 7.97 1.85 0.11 0.68 1.17 0.41 5544-LP30108-2 4.69 0.19 2.15 38. .49 0 33.94 16.21 1.73 0.25 0.72 0.96 0.41 5544-LP30108-3 4.26 0.2 1.97 66. .68 0 22.13 0.08 1.96 o.oi 0.73 1.33 0.42 5544-LP30108-4 4.59 0.24 1.76 44. .21 0 44.54 0.02 2.19 0.01 0.62 1.08 0.4 5544-LP30108-5 4.5 0.18 2.28 47. .57 0 26.41 14.42 1.71 0.22 0.78 1.1 0.43 5544-LP30108-6 4.51 0.16 2.12 31. .95 0. .01 26.94 29.8 1.41 0.5 0.81 1.02 0.51 5544-LP30108-7 4.84 0.21 1.68 38, .24 0 32.27 18.21 1.87 0.33 0.66 1.04 0.43 5544-LP30108-10 5 0.28 1.86 41, .17 0 46.54 0.36 2.58 0.02 0.6 0.91 0.37 5544-LP30108-11 4.57 0.2 1.74 47, .29 0 41.49 0.03 2.22 0.01 0.64 1.17 0.4 5544-LP30108-12 4.87 0.18 2.65 34, .53 0 30.37 23.12 1.46 0.36 0.83 0.95 0.45 5544-LP30108-13 4.41 0.16 2.32 40 .82 0, .11 26.8 21.05 1.53 Q.37 0.77 1.06 0.42 5544-LP30108-14 4.38 0.2 2.21 29 .91 0, .16 28.01 30.62 1.46 0.59 0.76 0.97 0.47 5544-LP30108-15 4.79 0.22 2.23 23 .42 0, .02 28.73 35.68 1.51 0.77 0.87 0.89 0.56 5544-LP30108-16 4.54 0.18 1.78 40 .81 0 35.24 12.83 1.95 0.27 0.68 1.02 0.43 5544-LP30108-17 4.63 0.18 2.28 46 .96 0 31.06 10.6 1.7 0.14 0.76 1.06 0.42 5544-LP30108-20 4.87 0.29 1.44 31 .81 0 .15 23.51 32.85 1.64 0.69 0.89 0.96 0.67 LP30108 -CONTROL 3.89 0.25 1.19 67 .73 0 22.46 0.1 1.97 0 0.54 1.32 0.44 H H o s o o o o i? in _n i? i? in ?/. ?n oooooooo x x x xxxx x ff ^ff0*ff0ff^ff0,-ff-1ff0,,'ff0' Ejemplo 11 Expresión simultánea de ?5 y ?6 dßsaturasas de M. alpina en Brassica napus Con el fin de producir ácido araquidónico (AAR) en aceite de cañóla transgénico fue necesario introducir tanto la ?5 como la ?6 actividades desaturasas. Con el fin de facilitar la caracterización corriente abajo y su cruce, puede ser ventajoso hacer que varias actividades se codifiquen por un solo ADN-T. El siguiente ejemplo ilustra la expresión simultánea de ?5 y ?6 desaturasas. El fragmento Asp718 de pCGN5528 que contenía la región reguladora 5' napín, la región de codificación Ma29, y la región reguladora 3 ' napín se insertó en el sitio Asp718 de pCGN5138 para crear el pCGN5545. El fragmento Notl de pCG?5536 que contenía la región reguladora 5' napín, la región de codificación Ma524 y la región reguladora 3 ' napín se insertó en el sitio Notl de pCG?5545 para crear el pCG?5546. Los módulos de expresión se orientaron de manera que la dirección de la transcripción de Ma524 y Ma29 y el marcador nptll es la misma. Se introdujo el pCG?5546 se introdujo en Brassica napus cv.LP30108 vía transformación mediada por Agrobacterium . Se recolectaron semillas T2 coloreadas maduras a partir de 30 eventos de transformación LP30108 independientes que se cultivaron en el invernadero. La composición de ácidos grasos de criaderos de 20 semillas se analizó mediante cromatografía en gas. Los resultados se muestran en la Tabla 12. Todas las líneas muestran la expresión para ambas desaturasas como se hace evidente por la presencia de ?5'9 18:2 (como se ve en plantas pCGN5531) y ?6'9 18:2 y ácido gama-linolénico (como se ve en plantas de pCGN5538) .

Tabla 12 análisis de ácidos grasos de criaderos de 20 semillas de semillas T2 maduras de eventos 5546-LP30108 CEPA ID 16 0 16 1 18 0 18 1 18:2_?5,9 1S.2 ?6.9 18 2_?9,12 1S.3_?6.9, 12 18 3_?9,12,15 18 4 20 0 20 1 5546-LP30108 17 4 06 0 13 2 85 65 76 2.09 1.92 9 6S 9.1 1 23 0 45 0 92 1 22 5546 P30108 18 4 16 0 2> 2 14 60 68 1.43 0.02 24 02 2.62 2 1 1 0 09 0 69 l 26 5546-LP .0108 19 . 77 0 37 2 15 56 1 1 1.6 0.33 19 34 9 16 2 37 0 46 0 73 1 0^ S546-LP30103 20 03 0 36 2 34 61 05 1.55 0.35 17 21 6 96 2 24 0 39 0 77 l 22 5546 P30108 21 4 52 0 3 2 71 62 14 1.33 0.23 17 62 6 44 1 88 0 28 0 88 1 15 5546-LP30108-22 5 91 0 44 2 15 60 12 1.41 0.36 17 04 7.75 1 97 0 36 0 78 1 07 5546-LP30108 23 4 28 0 22 2 44 66 19 0.93 0.11 17 03 4.37 1 67 0 17 0 82 1 25 5546-LP30108-24 4 92 0 33 2 68 62 6 1.32 0.36 16 89 5.82 2 05 0 3 0 95 1 19 5546-LP30108-25 5 42 0 72 3 15 47 47 2.66 4.21 13 51 16.31 2 14 0 99 1 18 1 37 5546- P30108-26 3 85 0 22 2 78 65 02 1.05 0.05 18 35 4.36 1 67 0 12 0 82 1 18 5546 LP30108-27 3 86 0 15 2 76 65 17 1.11 0.78 16 24 5.21 1 53 0 25 0 93 1 3 5546-LP30108-28 5 29 0 42 1 81 49 12 1.07 0.09 30 52 5.21 3 57 0 44 0 67 1 23 5546 LP30108 29 4 4 0 2 2 38 65 95 1.05 0.2S 16 31 4.S5 1 64 0 19 0 85 1 26 5546-LP30108-30 3 99 0 19 2 55 67 47 0.S3 O.U 17 02 3.18 1 68 0 13 0 83 1 23 Ejemplo 12 Expresión simultánea de ?5, ?6 v ?12 desaturasas de M. alpina en Brassica napus Con el fin de lograr la producción óptima de ácido araquidónico en aceite de cañóla transgénico pueden ser necesarias tanto la actividad de ?6 como de ?12 desaturasas para estar presentes además de la actividad ?5. Con el fin de facilitar la caracterización y la cruza corriente abajo puede ser ventajoso tener todas estas actividades codificadas por un solo ADN-T. El siguiente ejemplo ilustra la expresión simultánea de ?5 , ?6 y ?12 desaturasas. El fragmento HindIII de pCGN5528 que contenía la región reguladora 5' napín, la región de codificación Ma29, y la región reguladora 3 ' se insertó en el sitio HindlII de pCGN5544 para crear el pCGN5547. Los módulos de expresión se orientaron de manera que la orientación de la transcripción de Ma29, Ma524 y Ma648 y el marcador nptll es la misma. Se introdujo el pCGN5547 se introdujo en Brassica napus cv.LP30108 vía transformación mediada por Agrobacterium . Se recolectaron semillas T2 coloreadas maduras a partir de 30 eventos de transformación LP30108 independientes que se cultivaron en el invernadero. La composición de ácidos grasos de criaderos de 20 semillas se analizó mediante cromatografía en gas. Los resultados se muestran en la Tabla 13. Veintisiete de las líneas muestran acumulación significativa de ácido gama-linolénico y en general los niveles de ácido gamalinolénico observados son mayores que los vistos en las plantas 5546 que no contenían la ?12 desaturasa. La ?12 desaturasa parece ser activa en la mayoría de las líneas como se hace evidente por la falta de ?ß,9 18:2 detectable y niveles elevados de 18:2 en la mayoría de las plantas. Cantidades pequeñas de ?5 , 9 18:2 se ven en las plantas 5547, aunque los niveles generalmente son menores que los observados en las plantas 5546. Esto puede deberse a la presencia de ?12 desaturasa la cual eficientemente convierte el 18:1 en 18:2 antes de que se pueda desaturar en la posición ?5.

Tabla 13 anál i sis de ácidos grasos de criaderos de 20 semi l las de semi l las T2 maduras de eventos 5547-LP30108 CEPA ID 12: 16:0 16: 1 18:0 18: 1 18:2_?5,9 18:2_?6,9 18:2_?9, 12 18:3_?6,9, 18:3_49, 12, 18:4 20:0 20 : 1 22: 1 22:2 0 12 15 5547-LP30108-1 0.0 5.38 0.3 2.23 64.12 0.01 0 22.67 0.44 2.17 0.07 0.82 1.11 0.03 0 5547-LP30108-2 0.1 4.45 0.13 2.29 51.57 0.16 0 33.85 3.18 1.74 0.03 0.78 1.02 0.03 0.02 5547-LP30108-3 0.0 4.18 0.12 2.03 59.61 0.03 0 29.44 0.44 1.64 0 0.75 1.15 0.03 0.01 5547-LP30108-4 0.0 4.35 0.15 2.29 50.59 0.12 0.01 37.31 0.85 1.86 0.02 0.78 1.02 0.02 0.01 5547-LP30108-5 0.0 4.59 0.14 1.83 49 0.25 0.01 31.65 8.16 1.86 0.13 0.68 1.04 0.02 0 5547-LP30108-6 0.0 4.11 0.15 2.53 44.3 0.13 0 28.12 15.89 1.94 0.28 0.82 1.13 0 0 5547-LP30108-7 0.0 4.27 0.15 2.55 39.18 0.12 0.02 27 21.72 1.87 0.45 0.89 1.08 0 0 5547-LP30108-8 0.0 4.3 0.14 2.92 42.83 0.26 0 30.81 14.51 1.49 0.22 0.89 1.06 0 0 5547-LP30108-9 0.0 4.46 0.17 3.13 44.51 0 0 30.12 12.87 1.76 0.22 0.98 1.12 0.01 0 5547-LP30108-10 0.0 4.28 0.11 2.62 41.44 0.28 0 30.89 16.28 1.45 0.21 0.82 1.06 0 0 5547-LP30108-11 0.0 4.47 0.17 2.43 26.96 0.48 0 34.44 25.01 2.14 0.63 0.84 0.99 0 0 5547-LP30108-12 0.0 4.36 0.16 2.68 42.2 0.17 0 29.78 15.93 1.83 0.27 0.88 1.06 0 0 5547-LP30108-13 0.0 4.87 0.19 2.81 21.7 0.53 0 32.83 30.54 2.04 0.8 1 0.89 0.02 0.01 5547-LP30108-14 0.0 4.61 0.25 2.6 54 0 0 32.98 0.5 2.46 0.03 0.86 1.14 0 0 5547-LP30108-15 0.0 4.07 0.14 2.98 37.09 O.K 0.01 29.01 21.55 1.66 0.38 1.06 1.11 0 0 Tabla 13 análisis de ácidos grasos de criaderos de 20 semillas de semillas T2 maduras de eventos 5547-LP30108 CEPA ID 12:0 16:0 16:1 18:0 18:1 18:2_?5, 18:2_?6,9 18:2_?9,12 18:3_?6, 18:3_?9, 18:4 20:0 20:1 22:1 22:2 9 9,12 12,15 5547-LP30108-16 0.0 3.63 0.13 2.12 64.69 0 0 24.21 0.15 2.04 0 0.82 1.56 0.02 0 5547-LP30108-17 0.0 3.85 0.18 2.22 67.22 0.01 0 21.25 0 2.27 0 0.83 1.53 0 0 5547-LP30108-18 0.0 5.46 0.19 2.87 41.83 0.1 0.04 22.76 21.45 1.72 0.48 1.06 1.23 0 0 5547-LP30108-19 0.0 4.33 0.12 2.73 50.31 0.07 0 24.77 12.72 1.62 0.21 1.04 1.29 0 0.01 5547-LP30108-20 0.0 4.22 0.12 2.91 46.33 0.25 0 26.87 14.65 1.61 0.22 0.98 1.18 0 0 5547-LP30108-21 0.0 4.38 0.17 2.37 55.37 0 0 32.59 0.53 1.85 0.03 0.83 1.23 0 0 5547-LP30108-22 0.0 5.5 0.18 2.71 41.93 0.1 0.19 24.19 20.14 1.76 0.45 0.94 1.21 0 0 5547-LP30108-23 0.0 4.03 0.16 2.17 68.44 0 0 20.09 0 2.19 0.02 0.83 1.46 0 0 5547-LP30108-24 0.0 4.19 0.17 2.72 49.31 0 0 30.38 8.64 1.85 0.13 0.86 1.16 0 0 5547-LP30108-25 0.0 4.04 0.17 2.1 70.48 0 0 18.04 0.05 2.09 0 0.86 1.54 0 0 5547-LP30108-26 0.0 4.74 0.22 3.2 26.74 0.33 0 30.05 28.95 2.02 0.78 1.08 0.99 0 0 5547-LP30108-27 0.0 4.29 0.18 2.23 52.49 0 0 28.48 7.36 1.91 0.13 0.87 1.37 0 0 5547-LP30108-28 0.0 4.36 0.17 3 44.35 0.2 0 29.59 13.39 1.91 0.23 0.96 1.17 0 0 5547-LP30108-29 0.0 4.32 0.17 2.94 52.53 0.05 0 33.88 0.91 2.34 0.01 0.97 1.23 0 0 5547-LP30108-30 0.0 4.07 0.14 2.89 45.13 0.01 0 29.06 13.96 1.71 0.2 0.94 1.2 0.01 0 Ejemplo 13 Distribución estereoespecífica de aceites ?6-desaturados Este experimento se diseñó para investigar la distribución estereoespecífica de los aceites ?6 desaturados en semillas que expresan pCGN5538 (Ma524 ADNc) . Se usaron tres muestras de semillas: 1) Semillas cv. LP004 de B . napus no transformadas (control) 2) Semillas T2 segregantes de pCGN5538-LP004-19 3) Semillas T2 segregantes de pCGN5538-LP004-29 El siguiente protocolo se usó para el análisis: 1. Extracción de aceite de semilla Se colocaron 50 semillas en un frasco de 12 x 32 milímetros y se trituraron con una varilla de vidrio. Se añadió 1.25 mililitros de hexano y la mezcla se licuó. Las semillas se extrajeron durante la noche en un sacudidor. El extracto se filtró entonces a través de un filtro de 0.2 mieras unido a una jeringa de 1 centímetro cúbico. El extracto se secó bajo nitrógeno. El aceite resultante se usó para la digestión y la derivación de la muestra de aceite entera. 2. Digestión A. Digestión de aceite líquido La lipasa fuente (a partir de Rhizopus arrhizus, Sigma, L4384) se diluyó a aproximadamente 600,000 unidades/mililitro con el objeto de obtener la digestión al 50 por ciento de TAG. La lipasa fuente se mantuvo a 4°C y se colocó sobre hielo. La cantidad de reactivos se puede ajustar de acuerdo con la cantidad de aceite que se va a digerir. Las siguientes cantidades se basaron en una muestra de aceite extraido de 2.0 miligramos. En un frasco de tapa roscable de 12 x 32 milímetros se añadió lo siguiente: 2.0 miligramos de aceite, 200 µL O.lM tris HCl pH 7, 40 µL 2.2 por ciento .peso/volumen CaCl2 2H20, y 100 µL 0.05 por ciento peso/volumen de sales biliares. El material se centrifugó y se sonificó para dispersar el aceite. Veinte µL de lipasa diluida se añadió y la mezcla se centrifugó continuamente durante 1.0 minuto a temperatura ambiente. Se formó un precipitado blanco. La reacción se detuvo con 100 uL 6M HCl y se licuó. Quinientos uL de CHCl3:CH3OH (2:1) se añadió y la mezcla se licuó y se mantuvo sobre hielo al mismo tiempo que se llevaron a cabo las digestiones restantes. Las muestras se centrifugaron de nuevo y brevemente para afinar las capas. La capa inferior que contenía productos de la digestión se removió con una pipeta pasteur y se colocó en un frasco de tapa ajustable de 12 x 32 milímetros. El material se volvió a extraer con 300 µL de CHC13, se agitó, se centrifugó, y se combinó con las capas inferiores. Los productos de digestión se mantuvieron en hielo tanto como fue posible. La separación de cromatografía líquida de alto rendimiento se realizó tan pronto como fue posible después de la digestión para minimizar la migración de acilo. B. Digestión de grasa sólida Se siguió el procedimiento para la digestión de aceite líquido descrito anteriormente excepto que se añadieron µL 11:0 de áster metílico a 2.0 miligramos de grasa sólida. 3. Separación por cromatografía líquida de alto rendimiento Los productos de la digestión se secaron en cloroformo hasta aproximadamente 200 µL. Cada muestra se transfirió entonces a un inserto en un frasco de concha de 8 x 40 milímetros y 30 µL se inyectaron para análisis por cromatografía líquida de alto rendimiento. El sistema cromatográfico líquido de alto rendimiento se equipó con un detector de dispersión de luz evaporativo Varex ELSD IIA con temperatura del tubo a 105eC y flujo de gas nitrógeno a 40 mL/minuto; un automuestrador Waters 712 Wisp, tres módulos de administración de solvente Beckman 114M; un controlador Beckman 421A, un separador de corriente activado neumáticamente Rheodyne ; y un microfraccionador Gilson. La columna de cromatogra ía es un cartucho de fase de sílica normal de 5 mieras de 220 x 4.6 milímetros hecho por Brownlee. Los tres solventes usados fueron: A= hexano: tolueno 1:1 B= tolueno: acetato de etilo 3:1 C= 5 por ciento de ácido fórmico en. acetato de etilo El perfil gradiente fue como sigue: Una mezcla cromatográfica estándar se prepara en hexano: tolueno 1:1 conteniendo lo siguiente: 0.2 mg/mL triglicérido 16:0 2.0 mg/mL 16:0 ácido graso libre 0.2 mg/mL di 16:0 isómeros mezclados (1,2- d iacilglicerol y 1 , 3-diacilglicerol ) 0.2 mg/mL 3-mono acilglicerol 1 :0 0.2 mg/mL 2-mono acilglicerol 16:0 Para cada muestra la fracción que contenía el pico de 2-mag se recolectó automáticamente mediante el método de relevos de eventos de tiempo controlado. Se usa un retardo de tiempo para sincronizar el detector dentro del emisor del recolector. Los picos de 2-mag se recolectan y las fracciones se evaporan a temperatura ambiente durante la noche. La composición sn-2 da como resultado el relevo en la minimización de la migración de acilo. La aparición de picos de 1-monoacilglicerol y/o 3-monoacilglicerol en el cromatógrafo significan que se ha presentado la migración acilo. 4. Derivación Para derivar el aceite entero, se pesó 1.0 miligramo del aceite entero extraído en un frasco con tapa ajustada de 12 x 32 milímetros. Luego se añadió un mililitro de tolueno. La muestra se agitó y se removió una alícuota de 50 µL para su derivación. A las muestras secas de 2-mag, se añadieron 50 µL de tolueno. Tanto al aceite entero como a las fracciones 2-mag se añadieron 105 uL de H2SO4/CH3OH @ 8.76 por ciento en peso. La tapa se ajustó herméticamente y la muestra se puso en reflujo durante una hora a 95 °C. La muestra se dejó enfriar y se añadieron 500 uL 10 peso/volumen por ciento NaCl en agua y 60 uL de heptano. La capa orgánica se removió y se insertó en un frasco de tapa ajustable de 12 x 32 milímetros. 5. Análisis GLC Se preparó un cromatógrafo en gas Hewlett Packard modelo 6890 equipado con una entrada capilar de separador/sin separador, detector FID, automuestreador serie 6890 y un integrador Alfa Omega 3392A para la columna capilar como sigue: A. Supelco Omegawax 250, 30 metros de longitud, 0.25 milímetros diámetro interior, 0.25 um de espesor de película puerto de inyección 260 °C detector 270 °C temperatura inicial 170 SC tiempo inicial 1.5 minuto velocidad 30 grados por minuto temperatura final 245 SC tiempo final 6.5 minutos volumen de inyección 1.5 uL presión de cabeza 1.75 kg/cm2 velocidad de separación 30 gas vehículo He gas de reemplazo N, gas del FID H + aire Las composiciones porcentuales de esteres metílicos de ácidos grasos se calculan como porcentajes molares. Para las longitudes de cadena de carbono menores de 12, es deseable el uso de factores de respuesta teóricos o empíricos en el cálculo porcentual del área 6. Cálculos Se calculó la distribución media de cada grupo acilo en cada posición sn-1 y sn-3. composición media de sn-1 y sn-3 = (3 WO comp - MAG comp)/2 WO = aceite entero MAG = onoacilgl icerol Los resultados de este análisis se presentan en la Tabla 14. El ácido gama-linolénico y el ?6,9 18:2 se distribuye de manera uniforme entre las posiciones sn-2 y sn-1,3. Este análisis no puede discriminar entre ácidos grasos en las posiciones de sn-l contra sn-3.

Tabla 14 Ejemplo 14 Composiciones de ácidos grasos de plantas transgénicas Se analizaron plantas transgénicas ?5 y ?6 para determinar su contenido de ácidos grasos Se usó el siguiente protocolo para la extracción de aceite: 1. Aproximadamente 400 miligramos de semillas se pesaron por duplicado para cada muestra. 2. Las semillas se trituraron en un mortero y su mano. El mortero y la mano se enjuagaron dos veces con 3 mililitros (2:1) (volumen: volumen) de CHC13 : CH3OH/MeOH . 6 mililitros adicionales (2:1) se añadieron al frasco de vidrio de 20 mililitros (aceite extraído en 12 mililitros total 2:1) . 3. Las muestras se agitaron y se colocaron en un sacusidor orbital durante 2 horas con agitación ocasional. 4. Se añadieron 5 mililitros de ÍM NaCl a cada muestra. La muestra se revolvió después se centrifugó en centrífuga a 2000 rpm durante 5 minutos. La fase inferior se extrajo usando una pipeta pasteur. 5. La fase superior se volvió a extraer con 5 mililitros adicionales. La muestra se revolvió después se centrifugó en centrifuga a 2000 rpm durante 5 minutos. La fase superior se extrajo usando pipeta de pasteur y se añadió a la anterior fase inferior. 6. Se evaporó el CHC13 : CH3OH/MeOH bajo nitrógeno usando enfriamiento evaporativo. El frasco que contenía el aceite extraído se selló bajo nitrógeno. Se extrajeron entre 120 miligramos y 160 miligramos para cada muestra. Para el análisis de cromatografía en gas-espectro de masas, los esteres metílicos de ácidos grasos se disolvieron en un volumen adecuado de hexano y se analizaron usando un cromatógrafo en gas Hewlett Packard 5890 Serie II Plus (Hewlett Packard, Palo Alto, California) equipado con una columna capilar de silicio fundido Omegawax 320 y de 30 m x 0.32 milímetros de diámetro interno (Supelco, Bellefonte, PA) y un detector selectivo de masa Hewlett Packard serie- 5972. Se interpretó el espectro de masa mediante comparación con el espectro de masa de la base de datos de estructura química 'NIST/EPA/NIH usando la estación MS Chem (#G1036A) (Hewlett Packard) . Se analizó la línea transgénica 5531-6 por duplicado (A,B) y se comparó con la línea de control LP004-6. Los resultados del perfil de ácidos grasos se muestran en la Tabla 15. La línea transgénica 5538-19 se analizó por duplicado (A,B) y se comparó con la línea de control LP004-6. Los resultados del perfil de ácidos grasos se muestran en la Tabla 16.

Tabla 15 Perfil de Ácidos Grasos Tabla 15 Perfil de Ácidos Grasos Tabla 16 Perfil de cidos Grasos Tabla 16 Perfil de Ácidos Grasos Ejemplo 15 Expresión combinada de ?6 y ?l2 desaturasas en B. napus l grada por cruza Las plantas que contenían ya sea ?6 o ?l2 desaturasa se cruzaron y se analizaron medias semillas individuales Fl para determinar la composición de ácidos grasos mediante cromatografía en gas. Los datos de uno de estos cruces se dan en la Tabla 17. Los padres para la cruza fueron 5538-LP004-25-2-25 (?6 expresador) y 5542-SP30021-10-16 (?l2 expresador) . Se hicieron cruzas recíprocas y los resultados de 25 semillas Fl individuales de cada uno se muestran en la tabla. Las cruzas se describen de manera que el primer padre indicado es el femenino. Ambos conjuntos de cruzas dieron aproximadamente los mismos resultados. En comparación con los padres, el ?6,9 18:2 disminuyó, y el ácido gamalinolénico aumentó. Los niveles de ?9,1? 18:2 aumentaron en la mayoría de las Fl. Nótese que éstas eran semillas Fl y sólo contenían un conjunto de cada desaturasa. En generaciones futuras y selección de eventos homocigotes para desaturasa, los niveles de ácido gamalinolénico en F2 obtenidos pueden ser todavía mayores. Combinando rasgos mediante cruza puede ser preferible a combinar rasgos en un ADN-T en algunas situaciones. Particularmente si ambos genes se extraen del mismo promotor (en este caso napín) , surge el promotor de silencia iento que puede favorecer este enfoque al sobreponer múltiples ADNc en una construcción. De manera alternativa, en algunos casos, combinar múltiples ADNc en un ADN-T puede ser el método de elección. Los resultados se muestran en la Tabla 17.

Tabla 17 CEPA 10 16: 0 16: 1 18:0 18: 1 18:2_?6, 18:2_?9, 18:3_?6, 18:3_?9, 18:4 20:0 20: 1 9 12 9.12. 12 , 11 5538-LP004-25-2-25 4.23 0.13 2.4 61 .78 8.77 6.34 11.58 0.92 0 0 0 5542-SP30021 - 10- 16 4.09 0.1 2.03 38.4 0 41.88 0 11.06 0.02 0.75 1.03 (5538-LP004-25-2-25 X 5542-SP30021-10-16) 3.9 0.04 2.31 38.58 0 27.91 20.94 2.67 0.65 0.92 1.28 (5538-LP004-25-2-25 X 5542-SP30021 -10-16) 3.5 0.04 1.88 36.24 0 28.68 22.54 3.36 0.85 0.78 1.32 (5538-LP004-25-2-25 X 5542-SP30021 - 10- 16) 3.51 0.03 1.98 38.36 0 29.48 19.95 3.06 0.68 0.79 1.38 (5538- LP004-25-2-25 X 5542-SP30021 -10-16) 3.95 0.04 1.86 38.65 0 28.08 20.81 2.92 0.75 0.76 1.42 (5538-LP004-25-2-25 X 5542-SP30021 -10-16) 4.26 0.05 2.44 40.25 0.01 28.81 18.08 2.74 0.53 0.88 1.24 (5538-LP004-25-2-25 X 5542-SP30021 -10-16) 4.13 0.04 2.33 34.48 0 26.73 26.2 2.32 0.75 0.9 1.27 (5538-LP004-25-2-25 X 5542-SP30021 - 10- 16) 3.8 0.04 2.15 38.34 0 28.95 20.64 2.63 0.65 0.81 1 .3 (5538-LP004-25-2-25 X 5542-SP30021 - 10-16) 3.96 0.05 1.59 36.43 0 29.05 21.85 3.47 0.86 0.68 1.32 (5538-LP004-25-2-25 X 5542-SP30021 - 10- 16) 4.04 0.04 2.5 37.75 0 27.23 22.89 1.95 0.55 0.99 1.26 (5538-LP004-25-2-25 X 5542-SP30021 -10-16) 3.53 0.04 1.8 34.88 0 29.17 23.42 3.42 0.9 0.74 1.3 (5538-LP004-25-2-25 X 5542-SP30021 -10-16) 3.43 0.04 1.89 37.12 0 29.52 20.91 3.35 0.8 0.79 1.35 (5538-LP004-25-2-25 X 5542-SP30021 -10-16) 3.58 0.03 2.55 39.54 0 28.81 19.34 2.44 0.54 0.98 1.34 (5538-LP004-25-2-25 X 5542-SP30021-10-16) 3.53 0.03 2.33 39.26 0 29.07 19.5 2.61 0.59 0.91 1.37 (5538-LP004-25-2-25 X 5542-SP30021 - 10- 16) 3.4 0.02 2.41 45.53 0 28.94 13.71 2.51 0.37 0.91 1.44 Ejemplo 16 Expresión de desaturasas de M. a1 ina en frijol e_so a Las desaturaeas de M. alpina se pueden usar para conducir la producción de ácido gama-linolénico y otros ácidos grasos poli-insaturados en frijol de soya mediante el uso de las siguientes construcciones de expresión. Dos medios mediante los cuales el ?DN exógeno se puede insertar cn el genoma de frijol de soya son infección de Aqrobacterium o cañón de partículas. La transformación por cañón de partículas se describe en la Patente do los Estados Unidos de Norteamérica número 5,503,998. Las plantas se pueden seleccionar usando un marcador de resistencia glifosfnto (4,971,908). La transformación por Aqrob cterium del frijol de soya está bien establecida para una persona con experiencia ordinaria en la técnica. Para la expresión especifica de la semilla, las regiones de codificación del ADNc desaturasa se colocan bajo el control de la región reguladora 5' de el gen de proteína de almacenamiento beta tipo alfa Glycine max. La región específica que se puede usar son los nucleótidos 78-921 de gi 169928 (Doyle, J.J., Schuler, M.A., Godette, W.D., Zenger, V., Beachy, R.N., y Slighto J.L., 1986 J. Biol. Chem. 261 (20), 9228-9238) . La región reguladora 3 que se puede usar es del gen ribulosa 1,5 bisfosfato carboxi lasa/oxigenasa pequeña subunidad (rbcS) do chícharo. Las secuencias específicas que se van a usar son los nucleótidos 1-645 de gi 169145 (Hunt, A.G. 1998 ADN 7:329-336). Ya que las semillas de frijol de soya contienen más 18:2, y tal vez más actividad ?12 desaturasa endógena que Brassica, el efecto de la ?12 desaturasa de Mortierella en alcanzar niveles óptimos de ácido gama-linolénico se puede probar como sigue. La construcción que contiene el ADNc ?6 se puede usar para ver si ?"'" 18:2 se produce junto con ácido gama-linolénico. Una construcción que contiene la ?12 desaturasa se puede usar para ver si la cantidad de 18:2 se puede aumentar en frijol de soya. Una construcción que contiene tanto la ?6 como ?l2 desaturasas se puede usar para producir niveles óptimos de ácido gama-linolénico. De manera alternativa, las plantas que contienen cada una de las desaturasas solas se puede cruzar si es necesario para combinar los genes . Se pueden hacer construcciones similares para expresar la ?5 desaturasa sola, o en combinación con ?12 y/o ?6 desaturasas . E emplo 17 Secuencias de gen de desaturasa humana Las secuencias de genes desaturasa humanos potencialmente involucrados en la biosíntesis de ácidos grasos poli-insaturados de cadena larga se aislaron basándose en la homología entre las secuencias de ADNc humano y las secuencias de gen de desaturasa de Mortierella alpina. Se encontraron las rres '"cajas de histidina" conservadas que se sabe que se conservan entre las desaturasas unidas a la membrana. Como con otras desaturasas unidas a la membrana el motivo final de caja de histidina HXXHH se encontró que era QXXHH. La secuencia de aminoácidos de las desaturasas humanas presuntas exhibieron homología con las ?5, ?6, ?9, y ?l2 desaturasas de M. alpina. La secuencias de ADNc de ?5 desaturasa y ?6 desaturasa de M. alpina se usaron para consultar la base de datos LifeSeq de Incyto Pharmaceuticals, Inc., Palo Alto, California 94304. La secuencia de ?5 desaturasa se dividió en fragmentos: (1) aminoácidos números 1-150; (2) aminoácidos números 151-300; y (3) aminoácidos números 301-446. La secuencia de ?6 desaturasa se dividió en tres fragmentos: (1) aminoácidos números 1-150; (2) aminoácidos números 151-300; y (3) aminoácidos números 301-457. Estos fragmentos de polipéptido se investigaron contra la base de datos usando el algoritmo "tblastn". Este algoritmo compara una secuencia de consulta de proteína contra una base de datos de secuencias de nucleótidos dinámicamente traducida en los seis marcos de lectura (ambas cadenas) . Los fragmentos 2 y 3 del polipéptido de ?5 y ?6 de M. alpina tienen homologías con las secuencias de CloneID como se presenta en la Tabla 18. La CloneID representa una secuencia -individual a partir de la base de datos LifeSeq de Incyte. Después de que se revisaron los resultados de "tblastn", se buscó información de clona con los valores de referencia por omisión de rigor de =50, y Productscore =100 para diferentes números de ClonelD. Los resultados de información de clona desplegaron la información que incluye ClusterID, CloneID, Biblioteca, HitID, Descripción de Hit (golpe) . Cuando se seleccionaron, el número ClusterID desplegó la información de clona de todas las clonas que pertenecían a ese ClusterID . El comando de Assemble (ensamblar) ensambla todas las CloneID que comprenden el ClusterID . Los siguientes valores de referencia por omisión se usaron para el ensamble GCG (Genetics Computer Group, University of Wisconsin Biotechnology Center, Madison, Wisconsin 53705) : Tamaño de palabra: 7 Traslape mínimo : 14 Rigor: 0.8 Identidad mínima: 14 Hueco máximo : 10 Peso del hueco: 8 Peso de longitud: 2 Los resultados del ensamble GCG desplegaron los contigs generados con base en la información de secuencia dentro de la ClonelD. Un contig es una alineación de secuencia de ADN basada en áreas de homología entre estas secuencias. Se generó una nueva secuencia (secuencia de consenso) basándose en las secuencias de ADN alineadas en un contig. Se identificó el contig que contenía la CloneID, y los sitios ambiguos de la secuencia de consenso se editaron basándose en la alineación de las ClonelDs (véase SEQ ID NO: 31 - SEQ ID NO: 35) para generar la mejor secuencia posible. El procedimiento se repitió para las seis CloneID listadas en la Tabla 18. Esto produjo cinco contigs únicos . Las secuencias de consenso editadas de los 5 contigs se importaron al programa de software Sequencher (Gene Codes Corporation, Ann Arbor, Michigan 48 105) . Estas secuencias de consenso se ensamblaron. El contig 2511785 se traslapa con el contig 3506132, y este nuevo contig se denominó 2535 (SEQ ID NO: 37) . Los contigs del programa Sequencher se copiaron en el paquete de software de análisis de secuencias del GCG. Cada contig se tradujo en los seis marcos de lectura en secuencias de proteínas. Las secuencias ?5 (Ma29) y ?6 (Ma524) de M. alpina se compararon con cada uno de los contigs traducidos usando la búsqueda FastA (una búsqueda de Pearson y Lipman para determinar la similaridad entre una secuencia de consulta y un grupo de secuencias del mismo tipo (ácido nucleico o proteína) ) . La homología entre estas secuencias sugiere los marcos de lectura abiertos de cada contig. La homología entre la ?5 y ?6 de M. alpina con los contigs 2535 y 3854933 se utilizó para crear el contig final denominado 253538a. La Figura 9 es la selección por comparación FastA del contig final 253538a y Ma29, y la Figura 10 es la selección por comparación FastA del contig final 253538a y Ma524. Las secuencias de ADN para los distintos contigs se presentan en SEQ ID NO: 31 - SEQ ID NO: 37. Las distintas secuencias de péptidos se muestran en SEQ ID NO: 38 - SEQ ID NO: 44. Aunque el marco de lectura abierta se generó combinando los dos contigs, el contig 2535 muestra que hay una única secuencia en el inicio de este contig que no coincide con el contig 3854933. Por lo tanto, es posible que estos contigs se generaran a partir de desaturasa independiente como genes humanos . El contig 253538a contiene un marco de lectura abierta que codifica 432 aminoácidos. Comienza con Gln (CAG) y termina con el codón de detención (TGA) . El contig 253538a se alinea tanto con la secuencia ?5 como ?6 de M. alpina, sugiriendo que podría ser cualquiera de las dos desaturasas, así como otras desaturasas conocidas que comparten homología entre sí. Los contigs individuales enlistados en la Tabla 18, así como el contig intermedio 2535 y el contig final 253538a se pueden utilizar para aislar los genes completos para las desaturasas humanas . Usos de las desaturasas humanas Estas secuencias humanas se pueden expresar en levaduras y plantas que utilizan los procedimientos descritos en los ejemplos anteriores. Para la expresión en células de mamíferos y animales transgénicos, estos genes pueden proporcionar una desviación de codón superior. Además, estas secuencias se pueden usar para aislar genes desaturasa relacionadas de otros organismos. Tabla 18 Ejemplo 18 Identificación de Homólo os para ?5 y ? 6 desaturasas de M. alpina Se identificó una secuencia de ácido nucleico que codifica una ?5-desaturasa presunta a través de la búsqueda de TBLASTN de las bases de datos est a través de NCBI usando los aminoácidos 100-446 de Ma29 como una consulta. La porción truncada de la secuencia Ma29 se usó para evitar recoger homologías basadas en ln porción de citocromo b5 en el termino N de la desaturasa. La secuencia de aminoácidos deducida dc un est de Dictvostel ium discoideum (número de acceso C25549) muestra una homología muy significativa con Ma29 y una monor, pero todavía homología significativa, con Ma524. La secuencia de ADN se presenta como SEQ ID NO:45. La secuencia de aminoácidos se presenta como SEQ ID NO:46. Ejemplo 19 Identificación de Homólogos ?5 y ? 6 de M. alpina en otros orqanismos que producen ácidos grasos poli-insaturados Para buscar las desaturasas involucradas en la producción de ácidos grasos poli-insaturados, se construyó una biblioteca de ADNc a partir de ARN total aislado de Phaeodactylum tricornutum. Se construyó una biblioteca de ADNc basada en plásmido en pSPORTl (GIBCO-BRL) siguiendo las instrucciones del fabricante usando un juego comercialmente disponible (GIBCO-BRL) . Se secuenciaron clonas de ADNc 'aleatorias y se identificaron secuencias de ácido nucleico que codifican ?5 o ?6 desaturasas presuntas a través de la búsqueda BL?ST de las bases de datos y la comparación con las secuencias de Ma29 y Ma524. Se identificó una clona de la biblioteca del Phaeodactyl um con homología con Ma29 y Ma524; se denomina 144- 011-B12. La secuencia de ADN se presenta como SEQ ID NO: 47. La secuencia de aminoácidos se presenta como SEQ ID NO: 48. Ejemplo 20 Identificación de homólogos ?5 y ?6 de M. alpina en otros organismos que producen ácidos grasos po1i-insaturados Para buscar las desaturasas involucradas en la producción de ácidos grasos pol i-insaturados, se construyó una biblioteca de ADNc a partir de ARN aislado de la especie Schizochytrium. Se construyó una biblioteca de ADNc basada en plásmido en pSPORTl (GIBCO-BRL) siguiendo las instrucciones del fabricante usando un juego o kit comercialmente disponible (GIBCO-BRL) . Se secuenciaron clonas de ADNc aleatorias y se identificaron secuencias de ácido nucleico que codifica ?5 o ?6 desaturasas presuntas a través de la búsqueda BLAST de las bases de datos y la comparación con las secuencias de Ma29 y Ma524. Se identificó una clona de la biblioteca de Schizochytrium con homología con Ma29 y Ma524; se denominó 81- 23-C7. Esta clona contenia un inserto de aproximadamente una kb. Se obtuvo la secuencia parcial a partir de cada extremo de la clona usando los cebadores de secuenciamiento universales hacia adelante y hacia atrás. La secuencia de ADN a partir del cebador delantero se presenta como SEQ ID NO: 49. La secuencia de péptido se presenta como SEQ ID NO: 50. La secuencia de ADN a partir del cebador inverso se presenta como SEQ ID NO: 51. La secuencia de aminoácidos del cebador inverso se presenta como SEQ ID NO: 52. Ejemplo 21 Composiciones Nutrimentales Los ácidos grasos poli-insaturados de los ejemplos previos se pueden usar en varios suplementos nutrimentales, formulaciones para lactantes, sustitutos nutricionales y otras soluciones nutrimentales. I. FORMULACIONES PARA LACTANTES A. Isomil® Fórmula de Soya con Hierro. Uso: Como bebida para lactantes, niños y adultos con una alergia o sensibilidad a la leche de vaca. Una alimentación para pacientes con desórdenes para los cuales se debe evitar la lactosa: deficiencia de lactasa, intolerancia a la lactosa y galactosemia. Características : Aislado de proteína de soya para evitar síntomas de alergia o sensibilidad a la proteína de la leche de vaca Formulación sin lactosa para evitar diarrea asociada con lactosa Osmolalidad baja (240 mOsm/kilogramos de agua) para reducir el riesgo de diarrea osmótica. Carbohidratos duales (jarabe de maíz y sacarosa) designadas para aumentar la absorción de carbohidratos y reducir el riesgo de exceder la capacidad de absorción del intestino dañado. 1.8 miligramos de hierro (como sulfato ferroso) por 100 calorías para ayudar a prevenir la deficiencia de hierro. Niveles recomendados de vitaminas y minerales. Aceites vegetales para proporcionar los niveles recomendados de ácidos grasos esenciales. Color blanco de leche, consistencia parecida a la leche y aroma placentero. Ingredientes: (Pareve, ®) 85 por ciento agua, 4.9 por ciento jarabe de maíz, 2.6 por ciento azúcar (sacarosa), 2.1 por ciento aceite de soya, 1.9 por ciento de aislado de proteína de soya, 1.4 por ciento de aceite de coco, 0.15 por ciento de citrato de calcio, 0.11 por ciento de fosfato de calcio tribásico, citrato de potasio, fosfato de potasio monobásico, cloruro de potasio, mono y diglicéridos, lecitina de soya, carragenina, ácido ascórbico, L-metionina, cloruro de magnesio, fosfato de potasio dibásico, cloruro de sodio, cloruro de colina, taurina, sulfato ferroso, m-inositol, acetato de alfa-tocoferilo, sulfato de zinc, L-carnitina, niacinamida, pantotenato de calcio, sulfato cúprico, palmitato de vitamina A, clorhidrato de cloruro de tiamina, riboflavina, clorhidrato de piridoxina, ácido fólico, sulfato de manganeso, yoduro de potasio, filoqüinona, biotina, selenita de sodio, vitamina D3 y cianocobalamina. B. Isomil® DF Fórmula de Soya para Diarrea. Uso: Como alimentación a corto plazo para el manejo dietético de diarrea en lactantes y bebés . Características: Primera fórmula para lactantes en contener fibra dietética añadida a partir de fibra de soya específicamente para el manejo de la diarrea. Clínicamente muestra reducir la duración de producción de heces flojas, aguadas, durante diarrea de ligera a severa en lactantes. Nutrimentalmente completa para satisfacer las necesidades nutrimentales del lactante. Aislado de proteína de soya con L-metionina añadida que satisface o excede los requerimientos del lactante de todos los aminoácidos esenciales . Formulación sin lactosa para evitar diarrea asociada con lactosa. Osmolalidad baja (240 mOsm/kilogramo de agua) para reducir el riesgo de diarrea osmótica. Carbohidratos duales (jarabe de maíz y sacarosa) designadas para aumentar la absorción de carbohidrato y reducir el riesgo de exceder la capacidad de absorción del intestino dañado. Satisface o excede los niveles de vitaminas o minerales recomendados por el Comité sobre Nutrición de la Academia Norteamericana de Pediatría y los requeridos por la Ley de Fórmula para Lactantes. 1.8 miligramos de hierro (como sulfato ferroso) por 100 calorías para ayudar a prevenir la deficiencia de hierro. Aceites vegetales para proporcionar los niveles recomendados de ácidos grasos esenciales. Ingredientes: (Pareve,®) 86 por ciento agua, 4.8 por ciento jarabe de maíz, 2.5 por ciento azúcar (sacarosa), 2.1 por ciento aceite de soya, 2.0 por ciento de aislado de proteína de soya, 1.4 por ciento de aceite de coco, 0.77 por ciento de fibra de soya, 0.12 por ciento de citrato de calcio, 0.11 por ciento de fosfato de calcio tribásico, 0.10 por ciento de citrato de potasio, cloruro de potasio, fosfato de potasio monobásico, mono y diglicéridos, lecitina de soya, carragenina, cloruro- de magnesio, ácido ascórbico, L-metionina, fosfato de potasio dibásico, cloruro de sodio, cloruro de colina, taurina, sulfato ferroso, m-inositol, acetato de alfa-tocoferilo, sulfato de zinc, L-carnitina', niacinamida, pantotenato de calcio, sulfato cúprico, palmitato de vitamina A, clorhidrato de cloruro de tiamina, riboflavina, clorhidrato de piridoxina, ácido fólico, sulfato de manganeso, yoduro de potasio, filoquinona, biotina, selenita de sodio, vitamina D3 y cianocobalamina. C. Isomil® SF Fórmula de Soya sin Sacarosa con Hierro Uso: Como bebida para lactantes, niños y adultos con una alergia o sensibilidad a la proteína de la leche de vaca o una intolerancia a la sacarosa. Una alimentación para pacientes con desórdenes para los cuales deberá evitarse la lactosa y la sacarosa. Características : Aislado de proteína de soya para evitar síntomas de alergia o sensibilidad a la proteína de la leche de vaca Formulación sin lactosa para evitar diarrea asociada con lactosa. Libre de sacarosa para el paciente que no puede tolerar la sacarosa. Osmolalidad baja (180 mOsm/kilogramo de agua) para reducir el riesgo de diarrea osmótica. 1.8 miligramos de hierro (como sulfato ferroso) por 100 calorías para ayudar a prevenir la deficiencia de hierro. Niveles recomendados de vitaminas y minerales . Aceites vegetales para proporcionar los niveles recomendados de ácidos grasos esenciales. Color blanco de leche, consistencia parecida a la leche y aroma agradable. Ingredientes: (Pareve,®) 75 por ciento agua, 11.8 por ciento almidón de maíz hidrolizado, 4.1 por ciento aislado de aislado de proteína de soya, 2.8 por ciento de aceite de coco, 1.0 por ciento de almidón de maíz modificado, 0.38 por ciento de fosfato ele calcio tribásico, 0.17 por ciento de citrato de potasio, 0.13 por ciento cloruro de potasio, mono y digl icéridos, lecitina de soya, cloruro de magnesio, ácido ascórbico, L-metionina, carbonato de calcio, cloruro de sodio, cloruro de colina, carragenina, taurina, sulfato ferroso, m-inositol, acetato de alfa-tocoferilo, sulfato de zinc, L-carnitina, niacinamida, pantotenato de calcio, sulfato cúprico, palmitato de vitamina A, clorhidrato de cloruro de tiamina, riboflavina, clorhidrato de piridoxina, ácido fólico, eulfato de manganeso, yoduro de potasio, filoquinona, biotina, selenita de sodio, vitamina D3 y cianocobalamina. D. Isomil® 20 Fórmula de Soya con Hierro lista para alimento, 20 calorías/por 29.6 mililitros Uso: Cuando se desea una alimentación con soya. Ingredientes: (Pareve,®) 85 por ciento agua, 4.9 por ciento jarabe de maíz, 2.6 por ciento azúcar (sacarosa), 2.1 por ciento aceite de soya, 1.9 por ciento de aislado de proteína de soya, 1.4 por ciento de aceite de coco, 0.15 por ciento de citrato de calcio, 0.11 por ciento de fosfato de calcio tribásico, citrato de potasio, fosfato de potasio monobásico, cloruro de potasio, mono y diglicéridos , lecitina de soya, carragenina, ácido ascórbico, L-metionina, cloruro de magnesio, fosfato de potasio dibásico, cloruro de sodio, cloruro do colina, taurina, sulfato ferroso, m-inositol, acetato de alfa-tocoferilo, sulfato de zinc, L-carnitina, niacinamida, pantotenato de calcio, sulfato cúprico, palmitato de vitamina A, clorhidrato de cloruro de tiamina, riboflavina, clorhidrato de piridoxina, ácido fólico, sulfato de manganeso, yoduro de potasio, filoquinona, biotina, selenita de sodio, vitamina D3 y cianocobalamina. E. Similac® Fórmula para lactante Uso: Cuando se necesita una fórmula para lactante: si se toma la decisión de descontinuar la alimentación al pecho antes de la edad de un año, si se necesita un suplemento a la alimentación al pecho o como alimentación de rutina si no se adopta la alimentación al pecho. Características: Proteína de calidad y cantidad adecuada para el buen desarrollo; desnaturalizada por calor, lo que reduce el riesgo de pérdida de sangre entérica asociada con la leche. Grasa de una mezcla de aceites vegetales (doblemente homogeneizados), que proporciona ácido linoleico esencial que se absorbe fácilmente.

Carbohidrato como lactosa en proporción similar a la de la leche humana Carga de soluto renal bajo para minimizar la tensión en los órganos que se desarrollan. Formas en polvo, líquido concentrado y listo para to arse. Ingredientes: (®-D) agua, leche descremada, lactosa, aceite de soya, aceite de coco, mono y diglicéridos, lecitina de soya, ácido ascórbico, carragenina, cloruro de colina, taurina, m-inositol, acetato de alfa-tocoferilo, sulfato de zinc, niacinamida, sulfato ferroso, pantotenato de calcio, sulfato cúprico, palmitato de vitamina A, clorhidrato de cloruro de tiamina, riboflavina, clorhidrato de piridoxina, ácido fólico, sulfato de manganeso, filoquinona, biotina, selenita de sodio, vitamina D3 y cianocobalamina. F. Similac® NeoCare Fórmula con hierro para lactantes prematuros Uso: Para las necesidades nutrimentales especiales del lactante prematuro después de la salida del hospital. Similac NeoCare es una fórmula nutrimentalmente completa desarrollada para proporcionar a los lactantes prematuros calorías, proteínas, vitaminas y minerales extraordinarios necesarios para promover la ganancia de peso y apoyar su desarrollo. Características: Reduce la necesidad de suplementación calórica y de vitaminas. Más calorías (22 calorías/por 29.6 mililitros) que las fórmulas para el término estándar (20 calorías por 29.6 mililitros) . Mezcla de grasas altamente absorbidas, con triglicéridos de cadena media (aceite MCT) para ayudar a satisfacer las necesidades digestivas especiales de los lactantes prematuros . Altos niveles de proteínas, vitaminas y minerales por 100 calorías para extender el soporte nutrimental iniciado en el hospital . Más calcio y fósforo para mejorar la mineralización de los huesos . Ingredientes: ®-D sólidos de jarabe de maíz, leche desgrasada, lactosa, concentrado de proteína de suero de leche, aceite de soya, aceite de cártamo alto en contenido de oleico, aceite de coco fraccionado (triglicéridos de cadena media) , aceite de coco, citrato de potasio fosfato de calcio tribásico, carbonato de calcio, ácido ascórbico, cloruro de magnesio, cloruro de potasio, cloruro de sodio, taurina, sulfato ferroso, m-inositol, cloruro de colina, palmitato de ascorbilo, L-carnitina, acetato de alfa-tocoferilo, sulfato de zinc, niacinamida, tocoferoles mezclados, citrato de sodio, pantotenato de calcio, sulfato cúprico, clorhidrato de cloruro de tiamina, palmitato de ' vitamina A, beta caroteno, -riboflavina, clorhidrato de piridoxina, ácido fólico, sulfato de manganeso, filoquinona, biotina, selenita de sodio, vitamina D3 y cianocobalamina. G. Similas Natural Fortificador de leche humana baja en hierro de cuidado natural lista para su uso, 24 calorías/29.6 mililitros. Uso: Diseñada para mezclarse con leche humana o para alimentarse alternativamente con leche humana para lactantes de bajo peso al nacer. Ingredientes: ®-D agua, leche descremada, almidón de maíz hidrolizado, lactosa, aceite de coco fraccionado (triglicéridos de cadena media), concentrado de proteína de suero de leche, aceite de soya, aceite de coco, fosfato de calcio tribásico, citrato de potasio, cloruro de magnesio, citrato de sodio, ácido ascórbico, carbonato de calcio, mono y diglicéridos, lecitina de soya, carragenina, cloruro de colina, m-inositol, taurina, niacinamida, L-carnitina, acetato de alfa tocoferilo, sulfato de zinc, cloruro de potasio, pantotenato de calcio, sulfato ferroso, sulfato cúprico, riboflavina, palmitato de vitamina A, clorhidrato de cloruro de tiamina, clorhidrato de piridoxina, biotina, ácido fólico, sulfato de manganeso, filoquinona, vitamina D3, selenita de sodio y cianocobala ina . Varios ácidos grasos pol i-insaturados de esta invención se pueden sustituir y/o añadir a las fórmulas para lactantes descritas anteriormente y a otras fórmulas para lactantes conocidas para los expertos en la técnica. II. FORMULACIONES NUTRITIVAS A. ENSURE® Uso: ENSURE es un alimento líquido de bajo contenido en residuos diseñado principalmente como un suplemento nutrimental oral para ser usado con o entre comidas o, en cantidades adecuadas como reemplazo de una comida. ENSURE está libre de lactosa y de gluten, y es conveniente para su uso en dietas modificadas, incluyendo dietas bajas en colesterol. Aunque principalmente es un suplemento oral, se puede alimentar por tubo . Condiciones del Paciente: Para pacientes en dietas modificadas Para pacientes geriátricos con riesgo de nutrición Para pacientes con pérdida de peso involuntaria Para pacientes recuperándose de enfermedad o cirugía Para pacientes que necesitan una dieta de bajo contenido en residuos Ingredientes: ®-D Agua, azúcar (sacarosa), maltodextrina (maíz), caseinatos de calcio y de sodio, aceite de cártamo alto en contenido de oleico, aislado de proteína de soya, aceite de soya, aceite de cañóla, citrato de potasio, fosfato de calcio tribásico, citrato de sodio, cloruro de magnesio, fosfato de magnesio dibásico, sabor artificial, cloruro de sodio, lecitina de soya, cloruro de colina, ácido ascórbico, carragenina, sulfato de zinc, sulfato ferroso, acetato de alfa-tocoferilo, goma de gelan, niacinamida, pantotenato de calcio, sulfato de manganeso, sulfato cúprico, palmitato de vitamina A, clorhidrato de cloruro de tiamina, clorhidrato de piridoxina, riboflavina, ácido fólico, molibdato de sodio, cloruro de cromo, biotina, yoduro de potasio, selenato de sodio. B. ENSURE® BARRAS Uso: ENSURE BARRAS es una nutrición balanceada, completa para uso suplementario entre o con las comidas. Proporciona una alternativa deliciosa, rica en nutrientes a otras botanas. ENSURE BARS contiene menos de 1 gramo de lactosa/por barra, y sabor a Brownie de chocolate y libre de gluten. (El sabor Honey Graham Crunch contiene gluten). Condiciones del Paciente: Para pacientes que necesitan calorías extras, proteínas, vitaminas y minerales Especialmente útil para personas que no toman suficientes calorías y nutrientes Para personas que tienen la capacidad de masticar y deglutir No para ser usado por personas con alergia a los cacahuates o a cualquier tipo de alergia a las nueces.

Ingredientes : Honey Graham Crunch - Jarabe de maíz alto en contenido de fructuosa, aislado de proteína de soya, azúcar morena, miel, maltodextrina (maíz) , arroz inflado (arroz molido, azúcar [sacarosa] , sal [cloruro de sodio] y malta) , salvado de avena, aceites de semilla de algodón y de soya parcialmente hidrogenados, polisacárido de soya, glicerina, concentrado de proteína de suero de leche, polidextrosa, fructuosa, caseinato de calcio, polvo de cocoa, sabores artificiales, aceite de cañóla, aceite de cártamo alto en contenido de oleico, leche seca desgrasada, polvo de suero de leche, lecitina de soya y aceite de maíz. Fabricado en unas instalaciones que procesan nueces. Vitaminas y minerales: Fosfato de calcio tribásico, fosfato de potasio dibásico, óxido de magnesio, sal (cloruro de sodio) , cloruro de potasio, ácido ascórbico, ortofosfato férrico, acetato de alfa-tocoferilo, niacinamida, óxido de zinc, pantotenato de calcio, gluconato de cobre, sulfato de manganeso, riboflavina, beta-caroteno, clorhidrato de piridoxina, mononitrato de tiamina, ácido fólico, biotina, cloruro de cromo, yoduro de potasio, selenato de sodio, molibdato de sodio, filoquinona, vitamina D3 y cianocobalamina. Proteína: Honey Graham Crunch - La fuente de proteína es una mezcla de aislado de proteína de soya y proteínas de leche. Aislado de proteína de soya 74 por ciento proteínas de leche 26 por ciento Grasas : Honey Graham Crunch - La fuente de grasa es una mezcla de aceites parcialmente hidrogenados de semilla de algodón y frijol de soya, aceites de cañóla (semilla de colza) , cártamo alto en contenido de oleico, y de maíz y lecitina de soya. Aceites semilla de maíz hidrogenada parcialmente y de frijol de soya. 76 por ciento Aceite de cañóla 8 por ciento Aceite de cártamo alto en oleico 8 por ciento Aceite de maíz 4 por ciento Lecitina de soya 4 por ciento Carbohidratos : Honey Graham Crunch - La fuente de carbohidratos es una combinación de jarabe de maíz alta en fructuosa, azúcar morena, maltodextrina, miel, arroz inflado, glicerina, polisacárido de soya, y salvado de avena. Jarabe de maíz alto en fructuosa 24 por ciento Azúcar morena 21 por ciento Maltodextrina 12 por ciento Miel 11 por ciento Arroz inflado 9 por ciento Glicerina 9 por ciento Polisacárido de soya 7 por ciento Salvado de avena 7 por ciento C. ENSURE® ALTA PROTEINA Uso: ENSURE ALTA PROTEINA es un concentrado de alimento líquido de alta proteína diseñado para personas que requieren calorías, proteínas y vitaminas adicionales y minerales en sus dietas . Se puede usar como un suplemento nutrimental oral o entre comidas o en cantidades adecuadas como reemplazo de una comida. ENSURE ALTA PROTEINA está libre de lactosa y de gluten, y es conveniente para su uso por personas que se recuperan de cirugía general o fracturas de cadera y por pacientes con riesgo de úlceras por presión. Condición del Paciente Para pacientes que requieren calorías, proteínas vitaminas y minerales adicionales, tales como los pacientes que se recuperan de cirugía general o de fracturas de cadera, pacientes con riesgo de úlceras por presión, y pacientes en dietas de bajo colesterol. Características Bajo en grasas saturadas Contiene 6 gramos de grasa total y menos de 5 miligramos de colesterol por ración Sabor rico cremoso Excelente fuente de proteína, calcio, y otras vitaminas y minerales esenciales Para dietas bajas en colesterol Libre de lactosa, fácilmente digerido Ingredientes: Supremo de Vainilla: Agua ®-D, azúcar (sacarosa) , maltodextrina (maíz) , caseinatos de calcio y de sodio, aceite de cártamo alto en contenido de oleico, aislado de proteína de soya, aceite de soya, aceite de cañóla, citrato de potasio, fosfato de calcio tribásico, citrato de sodio, cloruro de magnesio, fosfato de magnesio dibásico, sabor artificial, cloruro de sodio, lecitina de soya, cloruro de colina, ácido ascórbico, carragenina, sulfato de zinc, sulfato ferroso, acetato de alfa-tocoferilo, goma de Gellan, niacinamida, pantotenato de calcio, sul ato do manganeso, sulfato de cobre, palmitato de vitamina A, clorhidrato de cloruro de tiamina, clorhidrato de piridoxina, riboflavina, ácido fólico, molibdato de sodio, cloruro de cromo, biotina, yoduro de potasio, selenato de sodio, filoquinona, vitamina D3 y cianocobalamina. Proteína La fuente de proteína es una mezcla de dos proteínas de alto valor biológico: caseína y soya. Caseinatos de sodio y calcio 85 por ciento Aislado de proteina de soya 15 por ciento Grasas: La fuente de grasa es una mezcla de tres aceites: cártamo alto en contenido de oleico, cañóla, y soya Aceite de cártamo alto en oleico 40 por ciento Aceite de cañóla 30 por ciento Aceite de soya 30 por ciento El nivel de grasa en ENSURE ALTA PROTEINA satisface los lineamentos de la American Heart Association (AHA) . Los 6 gramos de grasa en ENSURE ALTA PROTEINA representan el 24 por ciento de las calorías totales, con 2.6 por ciento de grasa proveniente de ácidos grasos saturados y 7.9 por ciento de ácidos grasos poli-insaturados. Estos valores están dentro de los lineamentos de la American Heart Association de =30 por ciento de calorías totales de grasa, <10 por ciento de calorías de ácidos grasos saturados, y =IO por ciento de calorías totales de ácidos grasos poli-insaturados. Carbohidrato : ENSURE ALTA PROTEINA contiene una combinación de maltodextrina y sacarosa. La dulzura suave y la variedad de sabores (supremo de vainilla, chocolate royal , mora silvestre y plátano) , más VARI-FLAVORS0® Flavor Pacs en pacana, cereza, fresa, limón y naranja ayudan a evitar la fatiga de sabor y ayudan a satisfacer el gusto del paciente. Sabores vainilla y otros sin chocolate Sacarosa 60 por ciento Maltodextrina 40 por ciento Chocolate Sacarosa 70 por ciento Maltodextrina 30 por ciento D. ENSURE® LIGHT Uso: ENSURE LIGHT es un alimento líquido bajo en grasas diseñado para usarse como suplemento nutrimental oral con o entre comidas. ENSURE LIGHT está libre de lactosa y de gluten, y es conveniente para su uso en dietas modificadas, que incluyen dietas bajas en colesterol. Condiciones del Paciente: Para pacientes de peso normal o pasados de peso que necesitan nutrición extra en un suplemento que contienen 50 por ciento menos grasa y 20 por ciento menos calorías que ENSURE. Para adultos sanos que no comen correctamente y necesitan nutrición extra. Características : Bajo en grasas y grasas saturadas Contiene 3 gramos de grasa total por ración y <5 miligramos de colesterol Sabor rico, cremoso Excelente fuente de calcio y otras vitaminas y minerales esenciales Para dietas bajas en colesterol Sin lactosa, fácilmente digerido Ingredientes : Vainilla a la francesa: Agua ®-D, maltodextrina (maíz), azúcar (sacarosa), caseinato de calcio, aceite de cártamo alto en contenido de oleico, aceite de cañóla, cloruro de magnesio, citrato de sodio, citrato de potasio, fosfato de potasio dibásico, fosfato de magnesio dibásico, sabor natural y artificial, fosfato de calcio tribásico, gel de celulosa, cloruro de colina, lecitina de soya, carragenina, sal (cloruro de sodio), ácido ascórbico, goma de celulosa, sulfato ferroso, acetato de alfa-tocoferilo, sulfato de zinc, niacinamida, sulfato de manganeso, pantotenato de calcio, sulfato cúprico, clorhidrato de cloruro de tiamina, palmitato de vitamina A, clorhidrato de piridoxina, riboflavina, cloruro de cromo, ácido fólico, molibdato de sodio, biotina, yoduro de potasio, selenato de sodio, filoquinona, vitamina D3 y cianocobalamina. Proteínas : La fuente de proteína es el caseinato de calcio Caseinato de calcio 100 por ciento Grasas La fuente de grasa es una mezcla de dos aceites: cártamo alto en contenido de oleico y ca óla. Aceite de cártamo alto en oleico 70 por ciento Aceite de cañóla 30 por ciento El nivel de grasa en ENSURE LIGHT satisface los lineamentos de la American Heart Association (AHA) . Los 3 gramos de grasa en ENSURE LIGHT representan el 13.5 por ciento del total de calorías, siendo el 1.4 por ciento de la grasa de ácidos grasos saturados y 2.6 por ciento de ácidos grasos poliinsaturados. Estos valores están dentro de los lineamentos de la American Heart Association de =30 por ciento de calorías totales de grasa. <10 por ciento de calorías de ácidos grasos saturados, y =IO por ciento de calorías totales de ácidos grasos poli-insaturados. Carbohidrato ENSURE LIGHT contiene una combinación de maltodextrina y sacarosa. El sabor chocolate contiene también jarabe de maíz. La dulzura suave y la variedad de sabores (vainilla a la francesa, chocolate supremo, batido de fresa) , más VARI-FLAVORS® Flavor Pacs de pacana, cereza, fresa, limón y naranja, ayudan a evitar la fatiga de sabor y favorecen la cooperación del paciente. Vainilla y otros sabores que no son chocolate Sacarosa 51 por ciento Maltodextrina 49 por ciento Chocolate Sacarosa 47.0 por ciento Jarabe de maíz 26.5 por ciento Maltodextrina 26.5 por ciento Vitaminas y Minerales Una ración de 236780 mililitros de ENSURE LIGHT proporciona cuando menos 25 por ciento de los RDI de 24 vitaminas y minerales claves. Cafeína El sabor chocolate contiene 2.1 miligramos de cafeína por 236.80 mililitros. E. ENSURE PLUS® Uso: ENSURE PLUS es un alimento líquido de bajo contenido en residuos y alto contenido en calorías para su uso cuando se necesitan nutrientes y calorías extras pero una concentración normal de proteína. Se diseña principalmente como suplemento nutrimental oral para ser usado con .o entre alimentos o, en cantidades adecuadas, como un reemplazo de comida. ENSURE PLUS no tiene lactosa ni gluten. • Aunque principalmente es un suplemento nutrimental oral, se puede alimentar por tubo. Condiciones del Paciente: Para pacientes que requieren calorías y nutrientes extras, pero una concentración normal de proteína, en un volumen limitado Para pacientes que necesitan ganar o mantener peso sano Características Sabor rico, cremoso Buena fuente de vitaminas y minerales esenciales Ingredientes Vainilla: Agua ®-D, jarabe de maíz, maltodextrina (maíz), aceite de maíz, caseinatos de sodio y calcio, azúcar (sacarosa), aislado de proteína de soya, cloruro de magnesio, citrato de potasio, fosfato de calcio tribásico, lecitina de soya, sabor natural y artificial, citrato de sodio, cloruro de potasio, cloruro de colina, ácido ascórbico, carragenina, sulfato de zinc, sulfato ferroso, acetato de alfa-tocoferilo, niacinamida, pantotenato de calcio, sulfato de manganeso, sulfato cúprico, clorhidrato de cloruro de tiamina, clorhidrato de piridoxina, riboflavina, palmitato de vitamina A, ácido fólico, biotina, cloruro de cromo, molibdato de sodio, yoduro de potasio, selenita de sodio, filoquinona, cianocobalamina y vitamina D3. Proteína La fuente de proteína es una mezcla de dos proteínas de alto valor biológico: caseína y soya. Caseinatos de sodio y de calcio 84 por ciento Aislado de proteína de soya 16 por ciento Grasa La fuente de grasa es aceite de maíz. Aceite de maíz 100 por ciento Carbohidrato ENSURE PLUS contiene una combinación de maltodextrina y sacarosa. La dulzura suave y la variedad de sabores (vainilla, chocolate, fresa, café, crema de pacana y batido de huevo), más VARI-FLAVORS"0 Flavor Pacs de pacana, cereza, fresa, limón y naranja, ayudan a evitar la fatiga de sabor y ayudan a la cooperación del paciente. Sabores de vainilla, fresa, crema de pacana, y café Miel de maíz 39 por ciento Maltodextrina 38 por ciento Sacarosa 23 por ciento Sabores chocolate y batido de huevo Jarabe de maíz 36 por ciento Maltodextrina 34 por ciento Sacarosa 30 por ciento itaminas y minerales Una ración de 236.80 mililitros fluidas de ENSURE PLUS proporciona cuando menos 15 por ciento de los RDI de 25 vitaminas y minerales claves Cafeína Por chocolate contiene 3.1 miligramos de cafeína por 236.80 mililitros. El sabor café contiene una cantidad rasa de ca eína . F. ENSURE PLUS® HN Uso: ENSURE PLUS HN es un alimento líquido nutrimentalmente completo de altas calorías, alto contenido de nitrógeno diseñado para personas con necesidades de calorías y proteínas altas o tolerancia de volumen limitado. Se puede usar para suplemento oral o para soporte nutrimental total por tubo. ENSURE PLUS HN carece de lactosa y de gluten. Condiciones del Paciente: Para pacientes con necesidades crecientes de calorías y proteínas, como después de cirugía o lesiones Para pacientes con tolerancia de volumen limitado y saciedad pronta Características Para nutrición suplementaria o total Para alimentación oral o por tubo 1.5 CaVmL Alto nitrógeno Calóricamente denso Ingredientes : Vainilla: Agua ®-D, maltodoxtrina (maíz), casoinatos de sodio y calcio, aceite de maiz, azúcar (sacarosa), aislado de proteína de soya, cloruro de magnesio, citrato de potasio, fosfato de calcio tribásico, lecitina de soya, sabor natural y artificial, citrato de sodio, cloruro de colina, ácido ascórbico, taurina, L-carnitina, sulfato de zinc, sulfato ferroso, acetato de alfa-tocoferilo, niacinamida, carragenina, pantotenato de calcio, sulfato de manganeso, sulfato cúprico, clorhidrato de cloruro de tiamina, clorhidrato de piridoxina, riboflavina, palmitato de vitamina A, ácido fólico, biotina, cloruro de cromo, molibdato de sodio, yoduro de potasio, selenita de sodio, filoquinona, cianocobalamina y vitamina D3. G ENSURE® POLVO Uso: ENSURE POLVO (reconstituido con agua) es un alimento líquido de bajo contenido en residuos diseñado principalmente como un suplemento nutrimental oral para ser usado con o entre comidas . ENSURE POLVO carece de lactosa y de gluten, y es conveniente para su uso en dietas modificadas, incluyendo dietas bajas en colesterol. Condiciones del paciente: Para pacientes en dietas modificadas Para pacientes geriátricos con riesgo de nutrición Para pacientes que se recuperan de enfermedad/cirugía Para pacientes que necesitan una dieta de bajo contenido en residuos Características Conveniente, fácil de mezclar Bajo en grasa saturada Contiene 9 gramos de grasa total y <5 miligramos de colesterol por ración Alto contenido de vitaminas y minerales Para dietas de bajo contenido de colesterol Sin lactosa, fácilmente digerido Ingredientes : Vainilla: ®-D jarabe de maíz, maltodextrina (maíz) , -azúcar (sacarosa), aceite de maíz, caseinatos de sodio y calcio, aislado de proteína de soya, sabor artificial, citrato de potasio, cloruro de magnesio, citrato de sodio, fosfato de calcio tribásico, cloruro de potasio, lecitina de soya, ácido ascórbico, cloruro de colina, sulfato de zinc, sulfato ferroso, acetato de alfa-tocoferilo, niacinamida, pantotenato de calcio, sulfato de manganeso, clorhidrato de cloruro de tiamina, sulfato cúprico, clorhidrato de piridoxina, riboflavina, palmitato de vitamina A, ácido fólico, biotina, molibdato de sodio, cloruro de cromo, yoduro de potasio, selenita de sodio, filoquinona, y vitamina D3 y cianocobalamina. Proteína La fuente de proteína es una mezcla de dos proteínas de alto valor biológico: caseína y soya. Caseinatos de sodio y calcio 84 por ciento Aislado de proteína de soya 16 por ciento Grasa La fuente de grasa es aceite de maíz . Aceite de maíz 100 por ciento Carbohidrato ENSURE POLVO contiene una combinación de jarabe de maíz, maltodextrina, y sacarosa. La dulzura suave de ENSURE POLVO, más VARI-FLAVORS® Flavor Pacs en pacana, cereza, fresa, limón, y naranja, ayuda a evitar la fatiga de sabor y favorece la cooperación del paciente.

Vainilla Jarabe de maíz 35 por ciento Maltodextrina 35 por ciento Sacarosa 30 por ciento H. ENSURE® BUDÍN Uso: ENSURE BUDÍN es un suplemento denso nutriente que proporciona nutrición balanceada en forma no líquida para ser usada con o -entre comidas. Es adecuado para dietas con consistencia modificada (v.gr., suave, en puré, o completamente líquida) o para personas con problemas para deglutir. ENSURE BUDÍN no tiene gluten. Condiciones del Paciente: Para pacientes con dietas de consistencia modificada (por ejemplo, suave, en puré, o completamente líguidas) Para pacientes con problemas para deglutir Características Sabor rico y cremoso, bueno Buena fuente de vitaminas y minerales esenciales. Conveniente: no necesita refrigeración Sin gluten Perfil de nutrientes por 148.00 mililitros: Calorías 250, proteína 10.9 por ciento, grasa total 34.9 por ciento, carbohidratos 54.2 por ciento Ingredientes : Vainilla: Leche descremada ®-D, agua, azúcar (sacarosa) , aceite de frijol de soya parcialmente hidrogenado, almidón alimenticio modificado, sulfato de magnesio, estearoilo lactilato de sodio, fosfato de sodio dibásico, sabor artificial, ácido ascórbico, sulfato de zinc, sulfato ferroso, acetato de alfa-tocoferilo, cloruro de colina, niacinamida, sulfato de manganeso, pantotenato de calcio, amarillo número 5 FD&C, citrato de potasio, sulfato cúprico, palmitato de vitamina A, clorhidrato de cloruro de tiamina, clorhidrato de piridoxina, riboflavina, amarillo número 6 FD&C, ácido fólico, biotina, filoquinona, vitamina D3 y cianocobalamina. Proteína La fuente de proteína es leche descremada. Leche descremada 100 por ciento Grasa La fuente de grasa es aceite de frijol de soya hidrogenado Aceite de soya hidrogenado 100 por ciento Carbohidrato ENSURE BUDÍN contiene una combinación de sacarosa y de almidón alimenticio modificado. La dulzura suave y la variedad de sabor (vainilla, chocolate, mantequilla, y tapioca) ayuda a evitar la fatiga por sabor. El producto contiene 9.2 gramos de lactosa por ración. Vainilla y otros sabores que no son de chocolate Sacarosa 56 por ciento Lactosa 27 por ciento Almidón alimenticio modificado 17 por ciento Chocolate Sacarosa 58 por ciento Lactosa 26 por ciento Almidón alimenticio modificado 16 por ciento I. ENSURE® CON FIBRA Uso: ENSURE CON FIBRA es un alimento líquido nutrimentalmente completo que contiene fibra diseñado para personas que se pueden beneficiar de fibras y nutrientes dietéticos aumentados . ENSURE CON FIBRA es conveniente para personas que no requieren una dieta de bajo contenido en residuos. Se puede administrar oralmente o por tubo, y se puede usar como suplemento nutrimental a una dieta regular o, en cantidades adecuadas, como reemplazo de una comida. ENSURE CON FIBRA no tiene lactosa ni gluten, y es conveniente para su uso en dietas modificadas, incluyendo dietas bajas en colesterol . Condiciones del Paciente Para pacientes que se pueden beneficiar de fibra y nutrientes dietéticos aumentados Características Nueva fórmula avanzada baja en grasas saturadas, y más alta en vitaminas y minerales Contiene 6 gramos de grasa total y <5 miligramos de cslesterol por ración Sabor rico, cremoso Buena fuente de fibra Excelente fuente de vitaminas y minerales esenciales Para dietas bajas en colesterol Sin lactosa ni gluten Ingredientes Vainilla: ®-D Agua, maltodextrina (maíz), azúcar (sacarosa) , caseinatos de sodio y de calcio, fibra de avena, aceite de cártamo alto en contenido de oleico, aceite de cañóla, aislado de proteina de soya, aceite de maíz, fibra de soya, fosfato de calcio tribásico, cloruro de magnesio, citrato de potasio, gel de celulosa, lecitina de soya, fosfato de potasio dibásico, citrato de sodio, sabores naturales y artificiales, cloruro de colina, fosfato de magnesio, ácido ascórbico, goma de celulosa, cloruro de potasio, carragenina, sulfato ferroso, acetato de alfa-tocoferilo, sulfato de zinc, niacinamida, sulfato de manganeso, pantotenato de calcio, sulfato cúprico, palmitato de vitamina A, clorhidrato de cloruro de tiamina, clorhidrato de piridoxina, riboflavina, ácido fólico, cloruro de cromo, biotina, molibdato de sodio, yoduro de potasio, selenato de sodio, filoquinona, vitamina D3 y cianocobalamina. Proteína La fuente de proteína es una mezcla de dos proteínas de alto valor biológico caseína y soya. Caseinatos de sodio y calcio 80 por ciento Aislado de proteína de soya 20 por ciento Grasa La fuente de grasa es una mezcla de tres aceites: de cártamo alto en contenido de oleico, cañóla y maíz. Aceite de cártamo alto en oleico 40 por ciento Aceite de cañóla 40 por ciento Aceite de maíz 20 por ciento El nivel de grasa en ENSURE CON FIBRA satisface los lineamentos de la American Heart Association (AHA) . Los 6 gramos de grasa en ENSURE CON FIBRA representan el 22 por ciento del total de calorías, con 2.01 por ciento de la grasa de los ácidos grasos saturados y 6.7 por ciento de ácidos grasos poli-insaturados. Estos valores están dentro de los lineamentos de la American Heart Association de =30 por ciento del total de calorías de grasa, <10 por ciento de calorías de ácidos grasos saturados, y =IO por ciento de calorías totales a partir de ácidos grasos poli-insaturados. Carbohidrato ENSURE CON FIBRA contiene una combinación de maltodextrina y sacarosa. La dulzura suave y la variedad de sabor (vainilla, chocolate, y crema de pacana) , más VARI-FLAVORS® Flavor Pacs en pacana, cereza, fresa, limón y naranja, ayudan a evitar la fatiga de sabor y favorecen la cooperación del paciente. Sabor vainilla y otros que no sean de chocolate Maltodextrina 66 por ciento Sacarosa 25 por ciento Fibra de avena 7 por ciento Fibra de soya 2 por ciento Chocolate Maltodextrina 55 por ciento Sacarosa 36 por ciento Fibra de avena 7 por ciento Fibra de soya 2 por ciento Fibra La mezcla de fibras usada en ENSURE CON FIBRA consiste en fibras de avena y polisacárido de soya. Esta mezcla da como resultado aproximadamente 4 gramos de la fibra dietética total por lata de 236.80 mililitros. La proporción de fibra insoluble a soluble es 95:5. Los suplementos nutrimentales distintos descritos anteriormente y conocidos para otros con experiencia en la técnica se pueden sustituir y/o suplementar con los ácidos grasos poli-insaturados de esta invención. J. Oxepa® Producto Nutritivo Oxepa es un producto nutrimental enteral calóricamente denso, bajo en carbohidratos, diseñado para el manejo dietético de pacientes con ARDS o con riesgo de ARDS . Tiene una combinación exclusiva de ingredientes, que incluyen una mezcla de aceites patentados que contienen ácido eicosapentaenoico (AEP a partir de aceite de pescado) , ácido gama-linolénico (AGL de aceite de borraja), y niveles elevados de anti-oxidantes . Distribución calórica: La densidad calórica es alta a 1.5 Cal/mL (355 Cal/236.80 mililitros), para minimizar el volumen requerido para satisfacer las necesidades de energía. La distribución de calorías en Oxepa se muestra en la Tabla 7.

Grasa: Oxepa contiene 22.2 gramos de grasa por ración de 236.80 mililitros (93.7 gramos por litro) . La fuente de grasa es una mezcla de aceites de 31.8 por ciento de aceite de cañóla, 25 por ciento de triglicéridos de cadena media (MCTs) , 20 por ciento de aceite de borraja, 20 por ciento de aceite de pescado, y 3.2 por ciento de lecitina de soya. El perfil típico de ácido graso de Oxepa se muestra en la Tabla 8. Oxepa proporciona una cantidad balanceada de ácidos grasos mono insaturados y saturados, como se muestra en la Tabla 10. Los triglicéridos de cadena media (MCTs) - 25 por ciento de la mezcla de grasas - ayuda al vaciamiento gástrico debido a que se absorben en el tracto intestinal sin emulsificación por los ácidos biliares. Los distintos componentes de ácidos grasos de Oxepa® producto nutrimental se pueden sustituir y/o suplementar por los ácidos grasos poli-insaturados de esta invención.

* Los ácidos grasos igualan aproximadamente el 95 por ciento del total de grasas .

Carbohidratos El contenido de carbohidratos es 25.0 gramos por ración de 236.80 mililitros (105.5 gramos por litro). Las fuentes de carbohidrato son 45 por ciento maltodextrina (un carbohidrato complejo) y 55 por ciento de sacarosa (una azúcar simple) , ambas fácilmente digeridas y absorbidas . El alto contenido de grasa y bajo contenido de carbohidratos de Oxepa se diseña para minimizar la producción de dióxido de carbono (C02) . Los niveles altos de C02 pueden complicar la desconexión en pacientes dependientes del ventilador. El bajo nivel de carbohidratos también puede ser útil para los pacientes que han desarrollado hiperglicemia inducida por tensión. Oxepa no tiene lactosa. El carbohidrato dietético, los aminoácidos a partir de proteína, y la fracción glicerol de las grasas se pueden convertir en glucosa dentro del cuerpo. A través de este proceso, se satisfacen los requisitos de carbohidrato de los tejidos que dependen de glucosa (tales como el sistema nervioso central y los glóbulos rojos) . Sin embargo, una dieta sin carbohidratos puede conducir a cetosis, excesivo catabolismo de -proteína del tejido, y pérdida de fluido y de electrólitos. Estos efectos se pueden evitar mediante la ingestión diaria de 50 a 100 gramos de carbohidrato digerible, si es adecuado el ingreso calórico. El nivel de carbohidratos en Oxepa también es suficiente para minimizar la gluconeogénesis, si se están satisfaciendo las necesidades de energía. Proteína Oxepa contiene 14.8 gramos de proteína por ración de 236.80 mililitros (62.5 gramos por litro). La proporción de caloría/nitrógeno total (150:1) satisface la necesidad de los pacientes estresados.

Oxepa proporciona suficiente proteína para promover el anabolismo y el mantenimiento de masa magra corporal sin precipitar problemas respiratorios. Los altos ingresos de proteína son una preocupación en pacientes con insuficiencia respiratoria. Aunque la proteína tiene poco efecto en la producción de dióxido de carbono, una dieta alta en proteínas aumentará el problema ventilatorio. Las fuentes de proteína de Oxepa son 86.8 por ciento de caseinato de sodio y 13.2 por ciento de caseinato de calcio. Todas las publicaciones y solicitudes de patentes mencionadas en esta memoria descriptiva son indicadoras del nivel de experiencia de los técnicos en el campo a los cuales se refiere esta invención. Todas las publicaciones y solicitudes de patentes se incorporan en la presente mediante referencia al mismo grado que si cada publicación individual o solicitud de patente específicamente e individualmente estuviera indicada como incorporada por referencia. Habiéndose descrito la invención completamente, será aparente a un técnico con experiencia ordinaria en el campo que se pueden hacer muchos cambios y modificaciones a la misma sin apartarse del espíritu o alcance de las reivindicaciones anexas .

Claims (51)

1. NOVEDAD DE LA INVENCIÓN Habiendo descrito la invención que antecede, se considera como una novedad y, por lo tanto, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes REIVINDICACIONES 1. Una construcción de ácido nucleico que comprende: una o más secuencias de nucleótidos representada en una SEQ ID NO: seleccionada entre el grupo que consiste en la SEQ ID N0:1, SEQ ID NO: 3 y la SEQ ID NO : 5 , en donde la una o más secuencias de nucleótidos está enlazada a una secuencia de nucleótidos heteróloga.
2. 2. Una construcción de ácido nucleico que comprende: una o más secuencias de nucleótidos representada en una SEQ ID NO: seleccionada entre el grupo que consiste en la SEQ ID N0:l, SEQ ID NO: 3 y la SEQ ID NO : 5 , en donde la una o más secuencias de nucleótidos está operablemente asociada con una secuencia de control de expresión funcional en una célula vegetal .
3. 3. La construcción de ácido nucleico de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 2 , caracterizada porque la secuencia de nucleótidos tiene un contenido promedio de A+T menor de aproximadamente 60 por ciento.
4. 4. La construcción de ácido nucleico de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 2, caracterizada porque la secuencia de nucleótidos se deriva de un hongo.
5. 5. La construcción de ácido nucleico de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 4, caracterizada porque el hongo es del género Mortierella .
6. 6. La construcción de ácido nucleico de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 5, caracterizada porque el hongo es de la especie alpina .
7. 7. Una construcción de ácido nucleico que comprende: una secuencia de nucleótidos que codifica un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos representada en la SEQ ID NO: 2, caracterizada porque la secuencia de nucleótidos está operablemente asociada con una secuencia de transcripción o control de expresión funcional en una célula vegetal, en donde la secuencia de nucleótidos codifica un polipéptido funcionalmente activo que desatura una molécula de ácido graso en el carbono 6 del extremo carboxilo de la molécula de ácido graso .
8. 8. Una construcción de ácido nucleico que comprende: una secuencia de nucleótidos que codifica un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos representada en la SEQ ID NO: 4, caracterizada porque la secuencia de nucleótidos está operablemente asociada con una secuencia de transcripción o control de expresión funcional en una célula vegetal, en donde la secuencia de nucleótidos codifica un polipéptido funcionalmente activo que desatura una molécula de ácido graso en el carbono 12 del extremo carboxilo de la molécula de ácido graso.
9. 9. Una construcción de ácido nucleico que comprende: una secuencia de nucleótidos que codifica un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos representada en la SEQ ID NO: 6, caracterizada porque la secuencia de nucleótidos está operablemente asociada con una secuencia de transcripción o control de expresión funcional en una célula vegetal, en donde la secuencia de nucleótidos codifica un polipéptido funcionalmente activo que desatura una molécula de ácido graso en el carbono 5 del extremo carboxilo de la molécula de ácido graso.
10. 10. Una construcción de ácido nucleico que comprende: cuando menos una secuencia de nucleótidos que codifica una desaturasa funcionalmente activa que tiene una secuencia de aminoácidos representada en una SEQ ID NO: seleccionada entre el grupo que consiste en la SEQ ID NO : 2 , SEQ ID NO : 4 y la SEQ ID NO: 6, en donde la secuencia de nucleótidos está operablemente asociada con un promotor funcional en una célula vegetal .
11. 11. La construcción de ácido nucleico de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 10, caracterizada porque la célula vegetal es una célula de semilla.
12. 12. La construcción de ácido nucleico de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 11, caracterizada porque la célula de semilla es una célula embrionaria.
13. 13. Una célula vegetal recombinante que comprende: Cuando menos una copia de una secuencia de ADN que codifica cuando menos una desaturasa de ácido graso de Mortierella alpina funcionalmente activa la cual da como resultado la producción de un ácido graso poli-insaturado, caracterizada porque la desaturasa de ácido graso tiene una secuencia de aminoácidos como se representa en la SEQ ID NO: seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO : 2 , SEQ ID NO : 4 , y SEQ ID NO: 6, en donde la célula se transformó con un vector que comprende la secuencia de ADN, y en donde la secuencia de ADN está operablemente asociada con una secuencia de control de expresión.
14. 14. La célula vegetal recombinante de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 13, caracterizada porque el ácido graso poli-insaturado se selecciona del grupo que consiste en ácido linoleico, ácido araquidónico, ácido gamalinolénico, ácido dihomo-gama-linolénico, ácido estearidónico y ácido eicosapentaenoico.
15. 15. La célula vegetal recombinante de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 13 , caracterizada porque la célula vegetal está enriquecida en un ácido graso seleccionado del grupo que consiste en 18:1, 18:2, 18:3 y 18:4.
16. 16. La célula vegetal recombinante de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 15, caracterizada porque la célula vegetal se selecciona del grupo que consiste en Brassica , frijol de soya, cártamo, maíz, lino y girasol.
17. 17. La célula vegetal recombinante de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 16, caracterizada porque la secuencia de control de expresión es endógena a la célula vegetal .
18. 18. Uno o más aceites vegetales expresado por la célula vegetal recombinante de la reivindicación 16.
19. 19. Un método para obtener biosíntesis de ácidos grasos poli-insaturados de cadena larga alterado que comprende los pasos de: cultivar una planta que tenga células que contienen un producto de la expresión de transgén la cual desature una molécula de ácido graso en el carbono 5 del extremo carboxilo de la molécula de ácido graso, en donde el transgén esté operablemente asociado con una secuencia de control de expresión, bajo condiciones mediante las cuales se expresa el transgén, mediante lo cual se altera la biosíntesis de ácidos grasos poli-insaturados de cadena larga.
20. 20. Un método para obtener biosíntesis de ácidos grasos poli-insaturados de cadena larga alterado que comprende los pasos de: cultivar una planta que tenga células que contienen uno o más transgenes, derivados de un hongo o alga, que codifica un producto de expresión de transgén que desatura una molécula de ácido graso en un carbono seleccionado del grupo que consiste en el carbono 5, carbono 6 y carbono 12 del extremo carboxilo de la molécula de ácido graso, en donde el uno o más transgenes está operablemente asociado con una secuencia de control de expresión, bajo condiciones mediante las cuales se expresa el uno o más transgenes, mediante lo cual se altera la biosíntesis de ácidos grasos poli-insaturados de cadena larga.
21. 21. El método de conformidad con lo reclamado en las reivindicaciones 19 o 20, caracterizado porque el ácido graso poli-insaturado de cadena larga se selecciona del grupo que consiste en ácido linoleico, ácido araquidónico, ácido gamalinolénico, ácido dihomo-gama-linolénico, ácido estearidónico y ácido eicosapentaenoico.
22. 22. Un aceite vegetal o fracción del mismo producido de conformidad con el método reclamado en las reivindicaciones 19 o 20.
23. 23. Un método para tratar o evitar la desnutrición que comprende administrar el aceite vegetal de la reivindicación 22 a un paciente en necesidad del tratamiento o prevención en una cantidad suficiente para efectuar el tratamiento o prevención.
24. 24. Una composición farmacéutica que comprende el aceite vegetal o la fracción de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 22 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
25. 25. La composición farmacéutica de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 24, caracterizada porque la composición farmacéutica está en la forma de un sólido o un líquido.
26. 26. La composición farmacéutica de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 25, caracterizada porque la composición farmacéutica está en la forma de una cápsula o tableta .
27. 27. La composición farmacéutica de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 24, caracterizada porque además comprende cuando menos un nutriente seleccionado del grupo ,que consiste en una vitamina, un mineral, un carbohidrato, una azúcar, un aminoácido, un ácido graso libre, un fosfolípido, un antioxidante, y un compuesto fenólico.
28. 28. Una fórmula nutrimental que comprende el aceite vegetal o la fracción del mismo de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 22.
29. 29. La fórmula nutrimental de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 28, caracterizado porque la fórmula nutrimental se selecciona del grupo que consiste en una fórmula para lactantes, un suplemento dietético, y un sustituto dietético .
30. 30. La fórmula nutrimental de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 29, caracterizada porque la fórmula para lactante, el suplemento dietético o el sustituto dietético está en forma de un líquido o un sólido.
31. 31. Una fórmula para lactantes que comprende el aceite vegetal o fracción del mismo de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 22.
32. 32. La fórmula para lactantes de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 31 que además comprende cuando menos un macronutriente seleccionado del grupo que consiste en aceite de coco, aceite de soya, aceite de cañóla, mono- y diglicéridos, glucosa, lactosa comestible, suero electrodializado, leche descremada electrodializada, suero de leche, proteína de soya, y otros hidrolizados de proteína.
33. 33. La fórmula para lactantes de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 32 que además comprende cuando menos una vitamina seleccionada del grupo que consiste en vitamina A, C, D, E y complejo B ,- y cuando menos un mineral seleccionado del grupo que consiste en calcio, magnesio, zinc, manganeso, sodio, potasio, fósforo, cobre, cloro, yodo, selenio, y hierro.
34. 34. Un suplemento dietético que comprende el aceite vegetal o la fracción del mismo de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 22.
35. 35. El suplemento dietético de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 34 que además comprende cuando menos un macronutriente seleccionado del grupo que consiste en aceite de coco, aceite de soya, aceite de cañóla, mono- y diglicéridos, glucosa, lactosa comestible, suero electrodializado, leche descremada electrodializada, suero de leche, proteína de soya, y otros hidrolizados de proteína.
36. 36. El suplemento dietético de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 35 que además comprende cuando menos una vitamina seleccionada del grupo que consiste en vitamina A, C, D, E y complejo B; y cuando menos un mineral seleccionado del grupo que consiste en calcio, magnesio, zinc, manganeso, sodio, potasio, fósforo, cobre, cloro, yodo, selenio, y hierro.
37. 37. El suplemento dietético de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 34 o la reivindicación 36, caracterizado porque el suplemento dietético se administra a un humano o un animal .
38. 38. Un sustituto dietético que comprende el aceite vegetal o la fracción del mismo de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 22.
39. 39. El sustituto dietético de conformidad con lo ' reclamado en la reivindicación 38 que además comprende cuando menos un macronutriente seleccionado del grupo que consiste en aceite de coco, aceite de soya, aceite de cañóla, mono- y diglicéridos, glucosa, lactosa comestible, suero electrodializado, leche descremada electrodializada, suero de leche, proteína de soya, y otros hidrolizados de proteína.
40. 40. El sustituto dietético de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 39 que además comprende cuando menos una vitamina seleccionada del grupo que consiste en vitamina A, C, D, E y complejo B; y cuando menos un mineral seleccionado del grupo que consiste en calcio, magnesio, zinc, manganeso, sodio, potasio, fósforo, cobre, cloro, yodo, selenio, y hierro.
41. 41. El sustituto dietético de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 38 o la reivindicación 40, caracterizado porque el suplemento dietético se administra a un humano o un animal.
42. 42. Un método para tratar un paciente que tiene una condición causada por ingestión o producción insuficiente de ácidos grasos poli-insaturados que comprende administrar al paciente el sustituto dietético de la reivindicación 38 o el suplemento dietético de la reivindicación 34 en una cantidad suficiente para efectuar el tratamiento.
43. 43. El método de la reivindicación 42, caracterizado porque el sustituto dietético o el suplemento dietético se administra enteralmente o parenteralmente.
44. 44. Un cosmético que comprende el aceite vegetal o la fracción del mismo de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 22.
45. 45. El cosmético de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 44, caracterizado porque el cosmético se aplica tópicamente.
46. 46. La composición farmacéutica de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 24, caracterizada porque la composición farmacéutica se administra a un humano o a un animal.
47. 47. Un alimento para animal que comprende el aceite vegetal o fracción del mismo de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 22.
48. 48. Una secuencia de nucleótidos aislada que comprende la secuencia de nucleótidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO:38-SEQ ID NO : 4 caracterizada porque la secuencia de nucleótidos se expresa en una célula vegetal.
49. 49. El método de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 20 caracterizado porque el hongo es Mortierella species .
50. 50. El método de conformidad con lo reclamado en la reivindicación 49 caracterizado porque el hongo es Mortierella alpina .
51. 51. Una secuencia de nucleótidos aislada seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO: 49 - SEQ ID NO: 50 en donde la secuencia se expresa en una célula vegetal. RESUMEN DE LA INVENCIÓN La presente invención se relaciona con composiciones y métodos para preparar ácidos grasos poli-insaturados de cadena larga en plantas, partes de plantas y células vegetales, tales como hojas, raíces, frutos y semillas. Las secuencias y construcciones de ácido nucleico que codifican desaturasas de ácido nucleico, incluyendo ?5-desaturasas , ?6-desaturasas y ?12 -desaturasas , se usan para generar plantas, partes de plantas y células vegetales transgénicas que contienen y expresan uno o más transgenes que codifican una - o más desaturasas. La expresión de las desaturasas con diferentes especificidades de sustrato en el sistema vegetal permiten la producción a gran escala de ácidos grasos poli-insaturados tales como el ácido docosahexanoico, ácido eicosapentaenoico, ácido c.-linolénico, ácido gama-linolénico, ácido araquidónico y similares para la modificación del perfil de ácidos grasos de vegetales partes de la planta y tejidos vegetales. La manipulación de los perfiles de ácidos grasos permite la producción de cantidades comerciales de aceites y productos vegetales novedosos . LISTADO DE SECUENCIAS (1) INFORMACIÓN GENERAL (i) SOLICITANTE: Calgene LLC y Abbott Laboratories Inc. (ii) TITULO DE LA INVENCIÓN: MÉTODOS Y COMPOSICIONES PARA LA SÍNTESIS DE CIDOS GRASOS POLI-INSATURADOS DE CADENA LARGA EN PLANTAS (iii) NUMERO. DE SECUENCIAS: 52 (2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO : 1 : (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 1617 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN genómico (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO : 1 : CGACACTCCT TCCTTCTTCT CACCCGTCCT AGTCCCCTTC AACCCCCCTC TTTGACAAAG 60 ACAACAAACC ATGGCTGCTG CTCCCAGTGT GAGGACGTTT ACTCGGGCCG AGGTTTTGAA 120 TGCCGAGGCT CTGAATGAGG GCAAGAAGGA TGCCGAGGCA CCCTTCTTGA TGATCATCGA 180 CAACAAGGTG TACGATGTCC GCGAGTTCGT CCCTGATCAT CCCGGTGGAA GTGTGATTCT 240 CACGCACGTT GGCAAGGACG GCACTGACGT CTTTGACACT TTTCACCCCG AGGCTGCTTG 300 GGAGACTCTT GCCAACTTTT ACGTTGGTGA TATTGACGAG AGCGACCGCG ATATCAAGAA 360 TGATGACTTT GCGGCCGAGG TCCGCAAGCT GCGTACCTTG TTCCAGTCTC TTGGTTACTA 420 CGATTCTTCC AAGGCATACT ACGCCTTCAA GGTCTCGTTC AACCTCTGCA TCTGGGGTTT 480 GTCGACGGTC ATTGTGGCCA AGTGGGGCCA GACCTCGACC CTCGCCAACG TGCTCTCGGC 540 TGCGCTTTTG GGTCTGTTCT GGCAGCAGTG CGGATGGTTG GCTCACGACT TTTTGCATCA 600 CCAGGTCTTC CAGGACCGTT TCTGGGGTGA TCTTTTCGGC GCCTTCTTGG GAGGTGTCTG 660 CCAGGGCTTC TCGTCCTCGT GGTGGAAGGA CAAGCACAAC ACTCACCACG CCGCCCCCAA 720 CGTCCACGGC GAGGATCCCG ACATTGACAC CCACCCTCTG TTGACCTGGA GTGAGCATGC 780 GTTGGAGATG TTCTCGGATG TCCCAGATGA GGAGCTGACC CGCATGTGGT CGCGTTTCAT 840 GGTCCTGAAC CAGACCTGGT TTTACTTCCC CATTCTCTCG TTTGCCCGTC TCTCCTGGTG 900 CCTCCAGTCC ATTCTCTTTG TGCTGCCTAA CGGTCAGGCC CACAAGCCCT CGGGCGCGCG 960 TGTGCCCATC TCGTTGGTCG AGCAGCTGTC GCTTGCGATG CACTGGACCT GGTACCTCGC 1020 CACCATGTTC CTGTTCATCA AGGATCCCGT CAACATGCTG GTGTACTTTT TGGTGTCGCA 1080 GGCGGTGTGC GGAAACTTGT TGGCGATCGT GTTCTCGCTC AACCACAACG GTATGCCTGT 1140 GATCTCGAAG GAGGAGGCGG TCGATATGGA TTTCTTCACG AAGCAGATCA TCACGGGTCG 1200 TGATGTCCAC CCGGGTCTAT TTGCCAACTG GTTCACGGGT GGATTGAACT ATCAGATCGA 1260 GCACCACTTG TTCCCTTCGA TGCCTCGCCA CAACTTTTCA AAGATCCAGC CTGCTGTCGA" 1320 GACCCTGTGC AAAAAGTACA ATGTCCGATA CCACACCACC GGTATGATCG AGGGAACTGC 1380 AGAGGTCTTT AGCCGTCTGA ACGAGGTCTC CAAGGCTGCC TCCAAGATGG GTAAGGCGCA 1440 GTAAAAAAAA AAACAAGGAC GTTTTTTTTC GCCAGTGCCT GTGCCTGTGC CTGCTTCCCT 1500 TGTCAAGTCG AGCGTTTCTG GAAAGGATCG TTCAGTGCAG TATCATCATT CTCCTTTTAC 1560 CCCCCGCTCA TATCTCATTC ATTTCTCTTA TTAAACAACT TGTTCCCCCC TTCACCG 1617 (2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO : 2 : (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 457 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: no relevante (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO : 2 : Met Ala Ala Ala Pro Ser Val Arg Thr Phe Thr Arg Ala Glu Val Leu 1 5 10 15 Asn Ala Glu Ala Leu Asn Glu Gly Lys Lys Asp Ala Glu Ala Pro Phe 20 25 30 Leu Met He He Asp Asn Lys Val Tyr Asp Val Arg Glu Phe Val Pro 35 40 45 Asp His Pro Gly Gly Ser Val He Leu Thr His Vai Gly Lys Asp Gly 50 55 60 Thr Asp Val Phe Asp Thr Phe His Pro Glu Ala Ala Trp Glu Thr Leu 65 70 75 80 Ala Asn Phe Tyr Val Gly Asp He Asp Glu Ser Asp Arg Asp He Lys 85 90 95 Asn Asp Asp Phe Ala Ala Glu Val Arg Lys Leu Arg Thr Leu Phe Gln 100 105 110 Ser Leu Gly Tyr Tyr Asp Ser Ser Lys Ala Tyr Tyr Ala Phe Lys Val 115 120 125 Ser Phe Asn Leu Cys He Trp Gly Leu Ser Thr Val He Val Ala Lys 130 135 140 Trp Gly Gln Thr Ser Thr Leu Ala Asn Val Leu Ser Ala Ala Leu Leu 145 150 155 160 Gly Leu Phe Trp Gln Gln Cys Gly Trp Leu Ala His Asp Phe Leu His 165 170 175 His Gln Val Phe Gln Asp Arg Phe Trp Gly Asp Leu Phe Gly Ala Phe 180 185 190 Leu Gly Gly Val Cys Gln Gly Phe Ser Ser Ser Trp Trp Lys Asp Lys 195 200 205 His Asn Thr His His Ala Ala Pro Asn Val His Gly Glu Asp Pro Asp 210 215 220 He Asp Thr His Pro Leu Leu Thr Trp Ser Glu His Ala Leu Glu Met 225 230 235 240 Phe Ser Asp Val Pro Asp Glu Glu Leu Thr Arg Met Trp Ser Arg Phe 245 250 r, 255 Met Val Leu Asn Gln Thr Trp Phe Tyr Phe Pro He Leu Ser Phe Ala 260 265 270 Arg Leu Ser Trp Cys Leu Gln Ser He Leu Phe Val Leu Pro Asn Gly 275 280 285 Gln Ala His Lys Pro Ser Gly Ala Arg Val Pro He Ser Leu Val Glu 290 295 300 Gln Leu Ser Leu Ala Met His Trp Thr Trp Tyr Leu Ala Thr Met Phe 305 310 315 320 Leu Phe He Lys Asp Pro Val Asn Met Leu Val Tyr Phe Leu Val Ser 325 33o 335 Gln Ala Val Cys Gly Asn Leu Leu Aia He Val Phe Ser Leu Asn His 340 345 350 Asn Gly Met Pro Val He Ser Lys Glu Glu Ala Val Asp Met Asp Phe 355 360 365 Phe Thr Lys Gln He He Thr Gly Arg Asp Val His Pro Gly Leu Phe 370 375 380 Ala Asn Trp Phe Thr Gly Gly Leu Asn Tyr Gln He Glu His His Leu 385 390 395 400 Phe Pro Ser Met Pro Arg His Asn Phe Ser Lys He Gln Pro Ala Val 405 4?o 4i5 Glu Thr Leu Cys Lys Lys Tyr Asn Val Arg Tyr His Thr Thr Gly Met 420 425 430 He Glu Gly Thr Ala Glu Val Phe Ser Arg Leu Asn Glu Val Ser Lys 435 440 445 Ala Ala Ser Lys Met Gly Lys Ala Gln 450 455 (2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO : 3 : (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 1488 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genómico) (xí) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO : 3 : GTCCCCTGTC GCTGTCGGCA CACCCCATCC TCCCTCGCTC CCTCTGCGTT TGTCCTTGGC 60 CCACCGTCTC TCCTCCACCC TCCGAGACGA CTGCAACTGT AATCAGGAAC CGACAAATAC 120 ACGATTTCTT TTTACTCAGC ACCAACTCAA AATCCTCAAC CGCAACCCTT TTTCAGGATG 180 GCACCTCCCA ACACTATCGA TGCCGGTTTG ACCCAGCGTC ATATCAGCAC CTCGGCCCCA 240 AACTCGGCCA AGCCTGCCTT CGAGCGCAAC TACCAGCTCC CCGAGTTCAC CATCAAGGAG 300 ATCCGAGAGT GCATCCCTGC CCACTGCTTT GAGCGCTCCG GTCTCCGTGG TCTCTGCCAC 360 GTTGCCATCG ATCTGACTTG GGCGTCGCTC TTGTTCCTGG CTGCGACCCA GATCGACAAG 420 TTTGAGAATC CCTTGATCCG CTATTTGGCC TGGCCTGTTT ACTGGATCAT GCAGGGTATT 480 GTCTGCACCG GTGTCTGGGT GCTGGCTCAC GAGTGTGGTC ATCAGTCCTT CTCGACCTCC 540 AAGACCCTCA ACAACACAGT TGGTTGGATC TTGCACTCGA TGCTCTTGGT CCCCTACCAC 600 TCCTGGAGAA TCTCGCACTC GAAGCACCAC AAGGCCACTG GCCATATGAC CAAGGACCAG 660 GTCTTTGTGC CCAAGACCCG CTCCCAGGTT GGCTTGCCTC CCAAGGAGAA CGCTGCTGCT 720 GCCGTTCAGG AGGAGGACAT GTCCGTGCAC CTGGATGAGG AGGCTCCCAT TGTGACTTTG 780 TTCTGGATGG TGATCCAGTT CTTGTTCGGA TGGCCCGCGT ACCTGATTAT GAACGCCTCT 840 GGCCAAGACT ACGGCCGCTG GACCTCGCAC TTCCACACGT ACTCGCCCAT CTTTGAGCCC 900 CGCAACTTTT TCGACATTAT TATCTCGGAC CTCGGTGTGT TGGCTGCCCT CGGTGCCCTG 960 ATCTATGCCT CCATGCAGTT GTCGCTCTTG ACCGTCACCA AGTACTATAT TGTCCCCTAC 1020 CTCTTTGTCA ACTTTTGGTT GGTCCTGATC ACCTTCTTGC AGCACACCGA TCCCAAGCTG 1080 CCCCATTACC GCGAGGGTGC CTGGAATTTC CAGCGTGGAG CTCTTTGCAC CGTTGACCGC 1140 TCGTTTGGCA AGTTCTTGGA CCATATGTTC CACGGCATTG TCCACACCCA TGTGGCCCAT 1200 CACTTGTTCT CGCAAATGCC GTTCTACCAT GCTGAGGAAG CTACCTATCA TCTCAAGAAA 1260 CTGCTGGGAG AGTACTATGT GTACGACCCA TCCCCGATCG TCGTTGCGGT CTGGAGGTCG 1320 TTCCGTGAGT GCCGATTCGT GGAGGATCAG GGAGACGTGG TCTTTTTCAA GAAGTAAAAA 1380 AAAAGACAAT GGACCACACA CAACCTTGTC TCTACAGACC TACGTATCAT GTAGCCATAC 1440 CACTTCATAA AAGAACATGA GCTCTAGAGG CGTGTCATTC GCGCCTCC 1488 (2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO : 4 : (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 399 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: no relevante (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO : 4 Met Ala Pro Pro Asn Thr He Asp Ala Gly Leu Thr Gin Arg His He 1 - --5 ío 15 Ser Thr Ser Ala Pro Asn Ser Ala Lys Pro Ala Phe Glu Arg Asn Tyr 20 25 30 Gln Leu Pro Glu Phe Thr He Lys Glu He Arg Glu Cys He Pro Ala 35 40 45 His Cys Phe Glu Arg Ser Gly Leu Arg Gly Leu Cys His Val Ala He 50 55 60 Asp Leu Thr Trp Ala "Ser Leu Leu Phe Leu Ala Ala Thr Gln He Asp 65 70 75 80 Lys Phe Glu Asn Pro Leu He Arg Tyr Leu Ala Trp Pro Val Tyr Trp 85 90 95 He Met Gln Gly He Val Cys Thr Gly Val Trp Val Leu Ala His Glu 100 105 110 Cys Gly His Gln Ser Phe Ser Thr Ser Lys Thr Leu Asn Asn Thr Val 115 120 125 Gly Trp He. Leu His Ser Met Leu Leu Val Pro Tyr His Ser Trp Arg 130 135 140 He Ser His Ser Lys His His Lys Ala Thr Gly His Met Thr Lys Asp 145 150 155 160 Gln Val Phe Val Pro Lys Thr Arg Ser Gln Val Gly Leu Pro Pro Lys 165 170 175 Glu Asn Ala Ala Ala Ala Val Gln Glu Glu Asp Met Ser Val His Leu 180 185 190 Asp Glu Glu Ala Pro He Val Thr Leu Phe Trp Met Val He Gln Phe 195 200 205 Leu Phe Gly Trp Pro Ala Tyr Leu He Met Asn Ala Ser Gly Gln Asp 210 215 220 Tyr Gly Arg Trp Thr Ser His Phe His Thr Tyr Ser Pro He Phe Glu 225 230 235 240 Pro Arg Asn Phe Phe Asp He He He Ser Asp Leu Gly Val Leu Ala 245 250 255 Ala Leu Gly Ala Leu He Tyr Ala Ser Met Gln Leu Ser Leu Leu Thr 260 265 270 Val Thr Lys Tyr Tyr He Val Pro Tyr Leu Phe Val Asn Phe Trp Leu 275 280 285 val Leu He Thr Phe Leu Gln Hxs Thr Asp Pro Lys Leu Pro His Tyr Z3U 295 3oo Arg Glu Gly Ala Trp Asn Phe Gln Arg Gly Ala Leu Cys Thr Val Asp 310 315 32 Arg Ser Phe Gly Lys Phe Leu Asp His Met Phe His Gly He Val His 325 330 335 Thr His Val Ala His His Leu Phe Ser Gln Met Pro Phe Tyr H1S Ala 340 f 345 350 Glu Glu Ala Thr Tyr His^eu Lys Lys Leu Leu Gly Glu Tyr Tyr Val " 360 365 Tyr Asp Pro Ser Pro He Val Val Ala Val Trp Arg Ser Phe Arg Glu 375 380 Cys Arg Phe Val Glu Asp Gln Gly Asp Val Val Phe Phe Lys Lys 390 395 (2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO : 5 : (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 1483 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genómico) (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO : 5 : GCTTCCTCCA GTTCATCCTC CATTTCGCCA CCTGCATTCT TTACGACCGT TAAGCAAGAT 60 GGGAACGGAC CAAGGAAAAA CCTTCACCTG GGAAGAGCTG GCGGCCCATA ACACCAAGGA 120 CGACCTACTC TTGGCCATCC GCGGCAGGGT GTACGATGTC ACAAAGTTCT TGAGCCGCCA 180 TCCTGGTGGA GTGGACACTC TCCTGCTCGG AGCTGGCCGA GATGTTACTC CGGTCTTTGA 240 GATGTATCAC GCGTTTGGGG CTGCAGATGC CATTATGAAG AAGTACTATG TCGGTACACT 300 GGTCTCGAAT GAGCTGCCCA TCTTCCCGGA GCCAACGGTG TTCCACAAAA CCATCAAGAC 360 GAGAGTCGAG GGCTACTTTA CGGATCGGAA CATTGATCCC AAGAATAGAC CAGAGATCTG 420 GGGACGATAC GCTCTTATCT TTGGATCCTT GATCGCTTCC TACTACGCGC AGCTCTTTGT 480 GCCTTTCGTT GTCGAACGCA CATGGCTTCA GGTGGTGTTT GCAATCATCA TGGGATTTGC 540 GTGCGCACAA GTCGGACTCA ACCCTCTTCA TGATGCGTCT CACTTTTCAG TGACCCACAA 600 CCCCACTGTC TGGAAGATTC TGGGAGCCAC GCACGACTTT TTCAACGGAG CATCGTACCT 660 GGTGTGGATG TACCAACATA TGCTCGGCCA TCACCCCTAC ACCAACATTG CTGGAGCAGA 720 TCCCGACGTG TCGACGTCTG AGCCCGATGT TCGTCGTATC AAGCCCAACC AAAAGTGGTT 780 - TGTCAACCAC ATCAACCAGC ACATGTTTGT TCCTTTCCTG TACGGACT C TGGCGTTCAA 840 GGTGCGCATT CAGGACATCA ACATTTTGTA CTTTGTCAAG ACCAATGACG CTATTCGTGT 900 CAATCCCATC TCGACATGGC ACACTGTGAT GTTCTGGGGC GGCAAGGCTT TCTTTGTCTG 960 GTATCGCCTG ATTGTTCCCC TGCAGTATCT GCCCCTGGGC AAGGTGCTGC TCTTGTTCAC 1020 GGTCGCGGAC ATGGTGTCGT CTTACTGGCT GGCGCTGACC TTCCAGGCGA ACCACGTTGT 1080 TGAGGAAGTT CAGTGGCCGT TGCCTGACGA GAACGGGATC ATCCAAAAGG ACTGGGCAGC" 1140 TATGCAGGTC GAGACTACGC AGGATTACGC ACACGATTCG CACCTCTGGA CCAGCATCAC 1200 TGGCAGCTTG AACTACCAGG CTGTGCACCA TCTGTTCCCC AACGTGTCGC AGCACCATTA 1260 TCCCGATATT CTGGCCATCA TCAAGAACAC CTGCAGCGAG TACAAGGTTC CATACCTTGT 1320 CAAGGATACG TTTTGGCAAG CATTTGCTTC ACATTTGGAG CACTTGCGTG TTCTTGGACT 1380 CCGTCCCAAG GAAGAGTAGA AGAAAAAAAG CGCCGAATGA AGTATTGCCC CCTTTTTCTC 1440 CAAGAATGGC AAAAGGAGAT CAAGTGGACA TTCTCTATGA AGA r 1483 (2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO : 6 : (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 446 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: no relevante (D) TOPOLOGÍA: lineal (Ü) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO : 6 : Met Gly Thr Asp Gln Gly Lys Thr Phe Thr Trp Glu Glu Leu Ala Ala 1 5 10 15 His Asn Thr Lys Asp Asp Leu Leu Leu Ala He Arg Gly Arg Val Tyr 20 25 30 Asp Val Thr Lys Phe Leu Ser Arg His Pro Gly Gly Val Asp Thr Leu 35 40 45 Leu Leu Gly Ala Gly Arg Asp Val Thr Pro Val Phe Glu Met Tyr His 50 55 60 Ala Phe Gly Ala Ala Asp Ala He Met Lys Lys Tyr Tyr Val Gly Thr 65 70 75 80 Leu Val Ser Asn Glu Leu Pro He Phe Pro Glu Pro Thr Val Phe His 85 90 95 Lys Thr He Lys Thr Arg Val Glu Gly Tyr Phe Thr Asp Arg Asn He 100 105 110 Asp Pro Lys Asn Arg Pro Glu He Trp Gly Arg Tyr Ala Leu He Phe 115 120 125 Gly Ser Leu He Ala Ser Tyr Tyr Ala Gln Leu Phe Val Pro Phe Val 130 135 140 Val Glu Arg Thr Trp Leu Gln Val Val Phe Ala He He Met Gly Phe 145 150 155 160 Ala Cys Ala Gln Val Gly Leu Asn Pro Leu His Asp Ala Ser His Phe 165 170 175 Ser Val Thr His Asn Pro Thr Val Trp Lys He Leu Gly Ala Thr His 180 185 190 Asp Phe Phe Asn Gly Ala Ser Tyr Leu Val Trp Met Tyr Gln His Met 195 200 205 Leu Gly His His Pro Tyr Thr Asn He Ala Gly Ala Asp Pro Asp Val 210 215 * 220 Ser Thr Ser Glu Pro Asp Val Arg Arg He Lys Pro Asn Gln Lys Trp 225 230 235 240 Phe Val Asn His He Asn Gln His Met Phe Val Pro Phe Leu Tyr Gly 245 250 255 Leu Leu Ala Phe Lys Val Arg He Gln Asp He Asn He Leu Tyr Phe 260 265 " 270 Val Lys Thr Asn Asp Ala He Arg Val Asn Pro He Ser Thr Trp His 275 280 285 Thr Val Met Phe Trp Gly Gly Lys Ala Phe Phe Val Trp Tyr Arg Leu 290 295 . 300 He Val Pro Leu Gln Tyr Leu Pro Leu Gly Lys Val Leu Leu Leu Phe 305 310 315 320 Thr Val Ala Asp Met Val Ser Ser Tyr Trp Leu Ala Leu Thr Phe Gln 325 330 335 Ala Asn His Val Val Glu Glu Val Gln Trp Pro Leu Pro Asp Glu Asn 340 345 350 Gly He He Gln Lys Asp Trp Ala Ala Met Gln Val Glu Thr Thr Gln 355 360 365 Asp Tyr Ala His Asp Ser His Leu Trp Thr Ser He Thr Gly Ser Leu 370 375 380 Asn Tyr Gln Ala Val His His Leu Phe Pro Asn Val Ser Gln His His 385 390 395 400 Tyr Pro Asp He Leu Ala He He Lys Asn Thr Cys Ser Glu Tyr Lys 405 410 415 Val Pro Tyr Leu Val Lys Asp Thr Phe Trp Gln Ala Phe Ala Ser His 420 425 430 Leu Glu His Leu Arg Val Leu Gly Leu Arg Pro Lys Glu Glu 435 440 445 ) ' INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO : 7 : ( i ) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA : (A) LONGITUD : 355 aminoácidos (B) TIPO : aminoácido ( C) TIPO D? CADENA : no relevante (D) TOPOLOGÍA : lineal ( ii ) TIPO DE MOLÉCULA : péptido ( i ) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA : SEQ ID NO : 7 Glu Val Arg Lys Leu Arg Thr Leu Phe Gln Ser Leu Gly Tyr Tyr Asp 1 5 10 15 Ser Ser Lys Ala Tyr Tyr Ala Phe Lys Val Ser Phe Asn Leu Cys He 20 25 30 Trp Gly Leu Ser Thr Val He Val Ala Lys Trp Gly Gln Thr Ser Thr 35 40 • 45 Leu Aia Asn Val Leu Ser Ala Ala Leu Leu Gly Leu Phe Trp Gln Gln 50 55 60 Cys Gly Trp Leu Ala His Asp Phe Leu His His Gln Val Phe Gln Asp 65 70 75 80 Arg Phe Trp Gly Asp Leu Phe Gly Ala Phe Leu Gly' Gly Val Cys Gln 85 90 95 Gly Phe Ser Ser Ser Trp Trp Lys Asp Lys His Asn Thr His His Ala 100 105 110 Ala Pro Asn Val His Gly Glu Asp Pro Asp He Asp Thr His Pro Leu 115 120 125 Leu Thr Trp Ser Glu His Ala Leu Glu Met Phe Ser Asp Val Pro Asp 130 135 140 Glu Glu Leu Thr Arg Met Trp Ser Arg Phe Met Val Leu Asn Gln Thr 145 150 155 160 Trp Phe Tyr Phe Pro He Leu Ser Phe Ala Arg Leu Ser Trp Cys Leu 165 170 175 Gln Ser He Leu Phe Val Leu Pro Asn Gly Gln Ala His Lys Pro Ser 180 185 190 Gly Ala Arg Val Pro He Ser Leu Val Glu Gln Leu Ser Leu Ala Met 195 200 205 His Trp Thr Trp Tyr Leu Ala Thr Met Phe Leu Phe He Lys Asp Pro 210 215 220 Val Asn Met Leu Val Tyr Phe Leu Val Ser Gln Ala Val Cys Gly Asn 225 230 235 240 Leu Leu Ala He Val Phe Ser Leu Asn His Asn Gly Met Pro Val He 245 250 255 Ser Lys Glu Glu Ala Val Asp Met Asp Phe Phe Thr Lys Gln He He 260 265 270 Thr Gly Arg Asp Val His Pro Gly Leu Phe Ala Asn Trp Phe Thr Gly 275 280 285 Gly Leu Asn Tyr Gln He Glu His His Leu Phe Pro Ser Met Pro Arg 290 295 300 His Asn Phe Ser Lys He Gln Pro Ala Val Glu Thr Leu Cys Lys Lys 305 310 315 320 Tyr Asn Val Arg Tyr His Thr Thr Gly Met He Glu Gly Thr Ala Glu 325 330 335 Val Phe Ser Arg Leu Asn Glu Val Ser Lys Ala Ala Ser Lys Met Gly 340 345 350 Lys Ala Gln 355 (2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO : 8 : (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 104 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: no relevante (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: Val Thr Leu Tyr Thr Leu Ala Phe Val Ala Ala Asn Ser Leu Gly Val 1 5 10 15 Leu Tyr Gly Val Leu Ala Cys Pro Ser Val Xaa Pro His Gln He Ala 20 25 30 Ala Gly Leu Leu Gly Leu Leu Trp He Gln Ser Ala Tyr He Gly Xaa 35 40 45 Asp Ser Gly His Tyr Val He Met Ser Asn Lys Ser Asn Asn Xaa Phe 50 55 60 Ala Gln Leu Leu Ser Gly Asn Cys Leu Thr Gly He He Ala Trp Trp 65 70 75 80 Lys Trp Thr His Asn Ala His His Leu Ala Cys Asn Ser Leu Asp Tyr 85 90 95 Gly Pro Asn Leu Gln His He Pro 100 (2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO : 9 : (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 252 aminoácidos (B) TIPO : aminoácido ( C) TIPO DE CADENA : no relevante (D ) TOPOLOGÍA : l ineal ( ii ) TIPO DE MOLÉCULA : péptido (xi ) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA : SEQ ID NO : 9 : Gly Val Leu Tyr Gly Val Leu Ala Cys Thr Ser Val Phe Ala His Gln 1 5 10 15 He Ala Ala Ala Leu Leu Gly Leu Leu Trp He Gln Ser Ala Tyr He 20 25 30 Gly His Asp Ser Gly His Tyr Val He Met Ser Asn Lys Ser Tyr Asn 35 40 45 Arg Phe Ala Gln Leu Leu Ser Gly Asn Cys Leu Thr Gly He Ser He 50 55 60 Ala Trp Trp Lys Trp Thr His Asn Ala His His Leu Ala Cys Asn Ser 65 70 75 80 Leu Asp Tyr Asp Pro Asp Leu Gln His He Pro Val Phe Ala Val Ser 85 90 95 Thr Lys Phe Phe Ser Ser Leu Thr Ser Arg Phe Tyr Asp Arg Lys Leu 100 105 110 Thr Phe Gly Pro Val Ala Arg Phe Leu Val Ser Tyr Gln His Phe Thr 115 120 125 Tyr Tyr Pro Val Asn Cys Phe Gly Arg He Asn Leu . Phe He Gln Thr 130 135 140 Phe Leu Leu Leu Phe Ser Lys Arg Glu Val Pro Asp Arg Ala Leu Asn 145 150 155 160 Phe Ala Gly He Leu Val Phe Trp Thr Trp Phe Pro Leu Leu Val Ser 165 170 175 Cys Leu Pro Asn Trp Pro Glu Arg Phe Phe Phe Val Phe Thr Ser Phe 180 185 190 Thr Val Thr Ala Leu Gln His He Gln Phe Thr Leu Asn His Phe Ala 195 200 205 Ala Asp Val Tyr Val Gly Pro Pro Thr Gly Ser Asp Trp Phe Glu Lys 210 215 220 Gln Ala Ala Gly Thr He Asp He Ser Cys Arg Ser Tyr Met Asp Trp 225 230 235 240 Phe Phe Gly Gly Leu Gln Phe Gln Leu Glu His His 245 250 (2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 10: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 125 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: no relevante (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 10 Gly Xaa Xaa Asn Phe Ala Gly He Leu Val Phe Trp Thr Trp Phe Pro 1 5 10 15 Leu Leu Val Ser Cys Leu Pro Asn Trp Pro Glu Arg Phe Xaa Phe Val 20 25 30 Phe Thr Gly Phe Thr Val Thr Ala Leu Gln His He Gln Phe Thr Leu 35 40 45 Asn His Phe Ala Ala Asp Val Tyr Val Gly Pro Pro Thr Gly Ser Asp 50 55 60 Trp Phe Glu Lys Gln Ala Ala Gly Thr He Asp He Ser Cys Arg Ser 65 70 75 80 Tyr Met Asp Trp Phe Phe Cys Gly Leu Gln Phe Gln Leu Glu His His 85 90 95 Leu Phe Pro Arg Leu Pro Arg Cys His Leu Arg Lys Val Ser Pro Val 100 105 no Gly Gln Arg Gly Phe Gln Arg Lys Xaa Asn Leu Ser Xaa 115 120 125 .2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 11: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 131 aminoácidos (B ) TIPO : aminoácido ( C) TIPO DE CADENA : no relevante (D) TOPOLOGÍA : lineal ( ii ) TIPO DE MOLÉCULA : péptido (xi ) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA : SEQ ID NO : 11 Pro Ala Thr Glu Val Gly Gly Leu Ala Trp Met He Thr Phe Tyr Val 1 5 10 15 Arg Phe Phe Leu Thr Tyr Val Pro Leu Leu Gly Leu Lys Ala Phe Leu 20 25 30 Gly Leu Phe Phe He Val Arg Phe Leu Glu Ser Asn Trp Phe Val Trp 35 40 45 Val Thr Gln Met Asn His He Pro Met His He Asp His Asp Arg Asn 50 55 60 Met Asp Trp Val Ser Thr Gln Leu Gln Ala Thr Cys Asn Val His Lys 65 70 75 80 Ser Ala Phe Asn Asp Trp Phe Ser Gly His Leu Asn Phe Gln He Glu 85 90 95 His His Leu Phe Pro Thr Met Pro Arg His Asn Tyr His Xaa Val Ala 100 105 110 Pro Leu Val Gln Ser Leu Cys Ala Lys His Gly He Glu Tyr Gln Ser 115 120 125 Lys Pro Leu 130 (2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO : 12 : (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 87 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: no relevante (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi ) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA : SEQ ID NO : 12 : Cys Ser Pro Lys Ser Ser Pro Thr Arg Asn Met Thr Pro Ser Pro Phe 5 10 15 He Asp Trp Leu Trp Gly Gly Leu Asn Tyr Gln He Glu His His Leu 20 25 30 Phe Pro Thr Met Pro Arg Cys Asn Leu Asn Arg Cys Met Lys Tyr Val 35 40 45 Lys Glu Trp Cys Ala Glu Asn Asn Leu Pro Tyr Leu Val Asp Asp Tyr 50 55 60, , Phe Val Gly Tyr Asn Leu Asn Leu Gln Gln Leu Lys Asn Met Ala Glu 65 70 75 80 Leu Val Gln Ala Lys Ala Ala 85 ( 2 ) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO : 13 : ( i ) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA : (A) LONGITUD : 143 aminoácidos (B) TIPO : aminoácido (C) TIPO DE CADENA : no relevante (D) TOPOLOGÍA : lineal ( ii ) TIPO DE MOLÉCULA : péptido (xi ) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA : SEQ ID NO : 13 Arg His Glu Ala Ala Arg Gly Gly Thr Arg Leu Ala Tyr Met Leu Val 1 5 10 15 Cys Met Gln Trp Thr Asp Leu Leu Trp Ala Ala Ser Phe Tyr Ser Arg 20 25 30 Phe Phe Leu Ser Tyr Ser Pro Phe Tyr Gly Ala Thr Gly Thr Leu Leu 35 40 45 Leu Phe Val Ala Val Arg Val Leu Glu Ser His Trp Phe Val Trp He 50 55 60 Thr Gln Met Asn His He Pro Lys Glu He Gly His Glu Lys His Arg 65 70 75 80 Asp Trp Ala Ser Ser Gln Leu Ala Ala Thr Cys Asn Val Glu Pro Ser 85 90 95 Leu Phe He Asp Trp Phe Ser Gly His Leu Asn Phe Gln He Glu His 100 105 110 His Leu Phe Pro Thr Met Thr Arg His Asn Tyr Arg Xaa Val Ala Pro 115 120 125 Leu Val Lys Ala Phe Cys Ala Lys His Gly Leu His Tyr Glu Val 130 135 140 (2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 14: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 186 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: no relevante (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 14 Leu His His Thr Tyr Thr Asn He Ala Gly Ala Asp, Pro Asp Val Ser 1 5 10 15 Thr Ser Glu Pro Asp Val Arg Arg He Lys Pro Asn Gln Lys Trp Phe 20 25 30 Val Asn His He Asn Gln His Met Phe Val Pro Phe Leu Tyr Gly Leu 35 40 45 Leu Ala Phe Lys Val Arg He Gln Asp He Asn He Leu Tyr Phe Val 50 55 60 Lys Thr Asn Asp Ala He Arg Val Asn Pro He Ser Thr Trp His Thr 65 70 75 80 Val Met Phe Trp Gly Gly Lys Ala Phe Phe Val Trp Tyr Arg Leu He 85 90 95 Val Pro Leu Gln Tyr Leu Pro Leu Gly Lys Val Leu Leu Leu Phe Thr 100 105 110 Val Ala Asp Met Val Ser Ser Tyr Trp Leu Ala Leu Thr Phe Gln Ala 115 120 125 Asn Tyr Val Val Glu Glu Val Gln Trp Pro Leu Pro Asp Glu Asn Gly 130 135 140 He He Gln Lys Asp Trp Ala Ala Met Gln Val Glu Thr Thr Gln Asp 145 150 155 160 Tyr Ala His Asp Ser His Leu Trp Thr Ser He Thr Gly Ser Leu Asn 165 170 175 Tyr Gln Xaa Val His His Leu Phe Pro His 180 185 (2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 15: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 5 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: no relevante (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 15 is Xaa Xaa His His 5 (2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 16: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 446 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: no relevante (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi ) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA : SEQ ID NO : 16 Met Ala Ala Gln He Lys Lys Tyr He Thr Ser Asp Glu Leu Lys Asn 1 5 ?o 15 His Asp Lys Pro Gly Asp Leu Trp He Ser He Gln Gly Lys Ala Tyr 20 25 30 Asp Val Ser Asp Trp Val Lys Asp His Pro Gly Gly Ser Phe Pro Leu 35 40 45 Lys Ser Leu Ala Gly Gln Glu Val Thr Asp Ala Phe Val Ala Phe His 50 55 60 Pro Ala Ser Thr Trp Lys Asn Leu Asp Lys Phe Phe Thr Gly Tyr Tyr 65 70 75 80 Leu Lys Asp Tyr Ser Val Ser Glu Val Ser Lys Val Tyr Arg Lys Leu 85 90 95 Val Phe Glu Phe Ser Lys Met Gly Leu Tyr Asp Lys Lys Gly His He 100 105 110 Met Phe Ala Thr Leu Cys Phe He Ala Met Leu Phe Ala Met Ser Val 115 120 125 Tyr Gly Val Leu Phe Cys Glu Gly Val Leu Val His Leu Phe Ser Gly 130 135 140 Cys Leu Met Gly Phe Leu Trp He Gln Ser Gly Trp He Gly His Asp 145 150 155 160 Ala Gly His Tyr Met Val Val Ser Asp Ser Arg Leu Asn Lys Phe Met 165 170 175 Gly He Phe Ala Ala Asn Cys Leu Ser Gly He Ser He Gly Trp Trp 180 185 190 Lys Trp Asn His Asn Ala His His He Ala Cys Asn Ser Leu Glu Tyr 195 200 205 Asp Pro Asp Leu Gln Tyr He Pro Phe Leu Val Val Ser Ser Lys Phe 210 215 220 Phe Gly Ser Leu Thr Ser His Phe Tyr Glu Lys Arg Leu Thr Phe Asp 225 230 235 240 Ser Leu Ser Arg Phe Phe Val Ser Tyr Gln His Trp Thr Phe Tyr Pro 245 250 255 He Met Cys Ala Ala Arg Leu Asn Met Tyr Val Gln Ser Leu Hs Met 260 265 270 Leu Leu Thr Lys Arg Asn Val Ser Tyr Arg Ala Gln Glu Leu Leu Gly 275 280 . 285 Cys Leu Val Phe Ser He Trp Tyr Pro Leu Leu Val Ser Cys Leu Pro 290 295 300 Asn Trp Gly Glu Arg He Met Phe Val He Ala Ser Leu Ser Val Thr 305 310 315 320 Gly Met Gln Gln Val Gln Phe Ser Leu Asn His Phe. , Ser Ser Ser Val 325 330 335 Tyr Val Gly Lys Pro Lys Gly Asn Asn Trp Phe Glu Lys Gln Thr Asp 340 345 350 Gly Thr Leu Asp He Ser Cys Pro Pro Trp Met Asp Trp Phe His Gly 355 360 365 Gly Leu Gln Phe Gln He Glu His His Leu Phe Pro Lys Met Pro Arg 370 375 380 Cys Asn Leu Arg Lys He Ser Pro Tyr Val He Glu Leu Cys Lys Lys 385 390 395 400 His Asn Leu Pro Tyr Asn Tyr Ala Ser Phe Ser Lys Ala Asn Glu Met 405 410 415 Thr Leu Arg Thr Leu Arg Asn Thr Ala Leu Gln Ala Arg Asp He Thr 420 425 430 Lys. Pro Leu Pro Lys Asn Leu Val Trp Glu Ala Leu His Thr 435 440 445 ( 2 ) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO : 17 : ( i ) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA : (A) LONGITUD : 359 aminoácidos (B) TIPO : aminoácido (C) TIPO DE CADENA : no relevante (D) TOPOLOGÍA : lineal ( ii ) TIPO DE MOLÉCULA : péptido (xi ) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA : SEQ ID NO : 17 Met Leu Thr Ala Glu Arg He Lys Phe Thr Gln Lys Arg Gly Phe Arg 1 5 10 5 Arg Val Leu Asn Gln Arg Val Asp Ala Tyr Phe Ala Glu His Gly Leu 20 25 30 Thr Gln Arg Asp Asn Pro Ser Met Tyr Leu Lys Thr Leu He He Val 35 40 45 Leu Trp Leu Phe Ser Ala Trp Ala Phe Val Leu Phe Ala Pro Val He 50 55 60 Phe Pro Val Arg Leu Leu Gly Cys Met Val Leu Ala He Ala Leu Ala 65 70- 75 80 Ala Phe Ser Phe Asn Val Gly His Asp Ala Asn His Asn Ala Tyr Ser 85 90 95 Ser Asn Pro His He A=n Arg Val Leu Gly Met Thr Tyr Asp Phe Val 100 105 110 Gly Leu Ser Ser Phe Leu Trp Arg Tyr Arg His Asn Tyr Leu His His 115 120 125 Thr Tyr Thr Asn He Leu Gly His Asp Val Glu He His Gly Asp Gly 130 135 14P. Ala Val Arg Met Ser Pro Glu Gln Glu His Val Gly He Tyr Arg Phe 145 150 155 160 Gln Gln Phe Tyr He Trp Gly Leu Tyr Leu Phe He Pro Phe Tyr Trp 165 170 175 Phe Leu Tyr Asp Val Tyr Leu Val Leu Asn Lys Gly Lys Tyr His Asp 180 185 190 His Lys He Pro Pro Phe Gln Pro Leu Glu Leu Ala Ser Leu Leu Gly 195 200 205 He Lys Leu Leu Trp Leu Gly Tyr Val Phe Gly Leu Pro Leu Ala Leu 210 215 220 Gly Phe Ser He Pro Glu Val Leu He Gly Ala Ser Val Thr Tyr Met 225 230 235 240 Thr Tyr Gly He Val Val Cys Thr He Phe Met Leu Ala His Val Leu 245 250 255 Glu Ser Thr Glu Phe Leu Thr Pro Asp Gly Glu Ser Gly Ala He Asp 260 265 270 Asp Glu Trp Ala He Cys Gln He Arg Thr Thr Ala Asn Phe Ala Thr 275 280 285 Asn Asn Pro Phe Trp Asn Trp Phe Cys Gly Gly Leu Asn His Gln Val 290 295 300 Thr His His Leu Phe Pro Asn He Cys His He His Tyr Pro Gln Leu 305 310 315 320 Glu Asn He He Lys Asp Val Cys Gln Glu Phe Gly Val Glu Tyr Lys 325 330 335 Val Tyr Pro Thr Phe Lys Ala Ala He Ala Ser Asn Tyr Arg Trp Leu 340 345 350 Glu Ala Met Gly Lys Ala Ser 355 (2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 18: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 365 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: no relevante (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:lí Met Thr Ser Thr Thr Ser Lys Val Thr Phe Gly Lys Ser He Gly Phe 1 5 10 15 Arg Lys Glu Leu Asn Arg Arg Val Asn Ala Tyr Leu Glu Ala Glu Asn 20 25 30 He Ser Pro Arg Asp Asn Pro Pro Met Tyr Leu Lys, Thr Ala He He 35 40 45 Leu Ala Trp Val Val Ser Ala Trp Thr Phe Val Val Phe Gly Pro Asp 50 55 60 Val Leu Trp Met Lys Leu Leu Gly Cys He Val Leu Gly Phe Gly Val 65 70 75 80 Ser Ala Val Gly Phe Asn He Ser His Asp Gly Asn His Gly Gly Tyr 85 90 95 Ser Lys Tyr Gln Trp Val Asn Tyr Leu Ser Gly Leu Thr His Asp Ala 100 105 110 He Gly Val Ser Ser Tyr Leu Trp Lys Phe Arg His Asn Val Leu His 115 120 125 His Thr Tyr Thr Asn He Leu Gly His Asp Val Glu He His Gly Asp 130 135 140 Glu Leu Val Arg Met Ser Pro Ser Met Glu Tyr Arg Trp Tyr His Arg 145 150 155 160 Tyr Gln His Trp Phe He Trp Phe Val Tyr Pro Phe He Pro Tyr Tyr 165 170 175 Trp Ser He Ala Asp Val Gln Thr Met Leu Phe Lys Arg Gln Tyr His 180 185 190 Asp His Glu He Pro Ser Pro Thr Trp Val Asp He Ala Thr Leu Leu 195 200 205 Ala Phe Lys Ala Phe Gly Val Aia Val Phe Leu He He Pro He Ala 210 215 220 Val Gly Tyr Ser Pro Leu Glu Ala Val He Gly Ala Ser He Val Tyr 225 230 235 240 Met Thr His Gly Leu Val Ala Cys Val Val Phe Met Leu Ala His Val 245 250 255 He Glu Pro Ala Glu Phe Leu Asp Pro Asp Asn Leu His He Asp Asp 260 265 270 Glu Trp Ala He Ala Gln Val Lys Thr Thr Val Asp Phe Ala Pro Asn 275 280 285 Asn Thr He He Asn Trp Tyr Val Gly Gly Leu Asn Tyr Gln Thr Val 290 295 300 His His Leu Phe Pro His He Cys His He His Tyr Pro Lys He Ala 305 310 315 320 Pro He Leu Ala Glu Val Cys Glu Glu Phe Gly Val Asn Tyr Ala Val 325 330 335 His Gln Thr Phe Phe Gly Ala Leu Ala Ala Asn Tyr Ser Trp Leu Lys 340 345 350 Lys Met Ser He Asn Pro Glu Thr Lys Ala He Glu Gln 355 360 365 (2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 19: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 35 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: otro ácido nucleico (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 19: CCAAGCTTCT GCAGGAGCTC TTTTTTTTTT TTTTT 35 (2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 20: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 32 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: otro ácido nucleico (A) DESCRIPCIÓN: /desc = "oligonucleótido sintético" (ix) CARACTERÍSTICA: (A) NOMBRE/CLAVE : misc_feature (B) LUGAR: 21 (D) OTRA INFORMACIÓN: /número=l /nota= "N=Inosina o citosina" (ix) CARACTERÍSTICA: (A) NOMBRE/CLAVE : misc_feature (B) LUGAR: 27 (D) OTRA INFORMACIÓN: /número=2 /nota= "N=Inosina o citosina" (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 20 CUACUACUAC UACAYCAYAC NTAYACNAAY AT 32 (2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 21: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 27 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: otro ácido nucleico (A) DESCRIPCIÓN: /desc = "oligonucleótido sintético" (ix) CARACTERÍSTICA: (A) NOMBRE/CLAVE: misc_feature (B) LUGAR: 13 (D) OTRA INFORMACIÓN: /número=l /nota= "N=Inosina o citosina" '(ix) CARACTERÍSTICA: (A) NOMBRE/CLAVE : misc_feature (B) LUGAR: 19 (D) OTRA INFORMACIÓN: /número=2 /nota= "N=Inosina o citosina" (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 21 CAUCAUCAUC AUNGGRAANA RRTGRTG 27 (2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 22: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 33 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: otro ácido nucleico (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 22 CUACUACUAC UAGGAGTCCT CTACGGTGTT TTG 33 (2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 23 (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 33 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: otro ácido nucleico (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 23 CAUCAUCAUC AUATGATGCT CAAGCTGAAA CTG 33 (2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 24: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 5 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: no relevante (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 24: Gln Xaa Xaa His His 1 5 (2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 25: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 39 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: otro ácido nucleico (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 25 CUACUACUAC UACTCGAGCA AGATGGGAAC GGACCAAGG 39 (2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 26: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 39 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: otro ácido nucleico ( i) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 26 CAUCAUCAUC AUCTCGAGCT ACTCTTCCTT GGGACGGAG 39 (2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 27 (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 47 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: otro ácido nucleico (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 27 CUACUACUAC UATCTAGACT CGAGACCATG GCTGCTGCTC CAGTGTG 47 (2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 28: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 40 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: otro ácido nucleico (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 28 CAUCAUCAUC AUAGGCCTCG AGTTACTGCG CCTTACCCAT 40 (2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 29: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 37 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: otro ácido nucleico (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 29 CUACUACUA CUAGGATCCA TGGCACCTCC CAACACT 37 (2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 30: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 42 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: otro ácido nucleico (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 30: CAUCAUCAU CAUGGTACCT CGAGTTACTT CTTGAAAAAG AC 42 (2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 31: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 1219 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: otro ácido nucleico (Contig Editado 2692004) (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 31: GCACGCCGAC CGGCGCCGGG AGATCCTGGC AAAGTATCCA GAGATAAAGT CCTTGATGAA 60 ACCTGATCCC AATTTGATAT GGATTATAAT TATGATGGTT CTCACCCAGT TGGGTGCATT 120 TTACATAGTA AAAGACTTGG ACTGGAAATG GGTCATATTT GGGGCCTATG CGTTTGGCAG 180 TTGCATTAAC CACTCAATGA CTCTGGCTAT TCATGAGATT GCCCACAATG CTGCCTTTGG 240 CAACTGCAAA GCAATGTGGA ATCGCTGGTT TGGAATGTTT GCTAATCTTC CTATTGGGAT 300 TCCATATTCA ATTTCCTTTA AGAGGTATCA CATGGATCAT CATCGGTACC TTGGAGCTGA 360 TGGCGTCGAT GTAGATATTC CTACCGATTT TGAGGGCTGG TTCTTCTGTA CCGCTTTCAG 420 AAAGTTTATA TGGGTTATTC TTCAGCCTCT CTTTTATGCC TTTCGACCTC TGTTCATCAA 480 CCCCAAACCA ATTACGTATC TGGAAGTTAT C ATACCGTG GCACAGGTCA CTTTTGACAT 540 TTTAATTTAT TACTTTTTGG GAATTAAATC CTTAGTCTAC ATGTTGGCAG CATCTTTACT 600 TGGCCTGGGT TTGCACCCAA TTTCTGGACA TTTTATAGCT GAGCATTACA TGTTCTTAAA 660 GGGTCATGAA ACTTACTCAT ATTATGGGCC TCTGAATTTA CTTACCTTCA ATGTGGGTTA 720 TCATAATGAA CATCATGATT TCCCCAACAT TCCTGGAAAA AGTCTTCCAC TGGTGAGGAA 780 AATAGCAGCT GAATACTATG ACAACCTCCC TCACTACAAT TCCTGGATAA AAGTACTGTA 840 TGATTTTGTG ATGGATGATA CAATAAGTCC CTACTCAAGA ATGAAGAGGC ACCAAAAAGG 900 AGAGATGGTG CTGGAGTAAA TATCATTAGT GCCAAAGGGA TTCTTCTCCA AAACTTTAGA 960 TGATAAAATG GAATTTTTGC ATTATTAAAC TTGAGACCAG TGATGCTCAG AAGCTCCCCT 1020 GGCACAATTT CAGAGTAAGA GCTCGGTGAT ACCAAGAAGT GAATCTGGCT TTTAAACAGT 1080 CAGCCTGACT CTGTACTGCT CAGTTTCACT CACAGGAAAC TTGTGACTTG TGTATTATCG 1140 TCATTGAGGA TGTTTCACTC ATGTCTGTCA TTTTATAAGC ATATCATTTA AAAAGCTTCT 1200 AAAAAGCTAT TTCGCCAGG 1219 (2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 32: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 655 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: otro ácido nucleico (Contig Editad 2153526) ( i) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 32: TTACCTTCTA CGTCCGCTTC TTCCTCACTT ATGTGCCACT ATTGGGGCTG AAAGCTTCCT 60 GGGCCTTTTC TTCATAGTCA GGTTCCTGGA AAGCAACTGG TTTGTGTGGG TGACACAGAT 120 GAACCATATT CCCATGCACA TTGATCATGA CCGGAACATG GACTGGGTTT CCACCCAGCT 180 CCAGGCCACA TGCAATGTCC ACAAGTCTGC CTTCAATGAC TGGTTCAGTG GACACCTCAA 240 CTTCCAGATT GAGCACCATC TTTTTCCCAC GATGCCTCGA CACAATTACC ACAAAGTGGC 300 TCCCCTGGTG CAGTCCTTGT GTGCCAAGCA TGGCATAGAG TACCAGTCCA AGCCCCTGCT 360 GTCAGCCTTC GCCGACATCA TCCACTCACT AAAGGAGTCA GGGCAGCTCT GGCTAGATGC 420 CTATCTTCAC CAATAACAAC AGCCACCCTG CCCAGTCTGG AAGAAGAGGA GGAAGACTCT 480 GGAGCCAAGG CAGAGGGGAG CTTGAGGGAC AATGCCACTA TAGTTTAATA CTCAGAGGGG 540 GTTGGGTTTG GGGACATAAA GCCTCTGACT CAAACTCCTC CCTTTTATCT TCTAGCCACA 600 GTTCTAAGAC CCAAAGTGGG GGGTGGACAC AGAAGTCCCT AGGAGGGAAG GAGCT 655 (2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 33: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 304 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: otro ácido nucleico ( Conti Editado 3506132) (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:33: GTCTTTTACT TTGGCAATGG CTGGATTCCT ACCCTCATCA CGGCCTTTGT CCTTGCTACC 60 TCTCAGGCCC AAGCTGGATG GCTGCAACAT GATTATGGCC ACCTGTCTGT CTACAGAAAA 120 CCCAAGTGGA ACCACCTTGT CCACAAATTC GTCATTGGCC ACTTAAAGGG TGCCTCTGCC 180 AACTGGTGGA ATCATCGCCA CTTCCAGCAC CACGCCAAGC CTAACATCTT CCACAAGGAT 240 CCCGATGTGA ACATGCTGCA CGTGTTTGTT CTGGGCGAAT GGCAGCCCAT CGAGTACGGC 300 AAGA ' 304 (2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 34: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 918 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: otro ácido nucleico (Contig Editad 3854933) (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 34: CAGGGACCTA CCCCGCGCTA CTTCACCTGG GACGAGGTGG CCCAGCGCTC AGGGTGCGAG 60 GAGCGGTGGC TAGTGATCGA CCGTAAGGTG TACAACATCA GCGAGTTCAC CCGCCGGCAf 120 CCAGGGGGCT CCCGGGTCAT CAGCCACTAC GCCGGGCAGG ATGCCACGGA TCCCTTTGTG 180 GCCTTCCACA TCAACAAGGG CCTTGTGAAG AAGTATATGA ACTCTCTCCT GATTGGAGAA 240 CTGTCTCCAG AGCAGCCCAG CTTTGAGCCC ACCAAGAATA AAGAGCTGAC AGATGAGTTC 300 CGGGAGCTGC GGGCCACAGT GGAGCGGATG GGGCTCATGA AGGCCAACCA TGTCTTCTTC 360 CTGCTGTACC TGCTGCACAT CTTGCTGCTG GATGGTGCAG CCTGGCTCAC CCTTTGGGTC 420 TTTGGGACGT CCTTTTTGCC CTTCCTCCTC TGTGCGGTGC TGCTCAGTGC AGTTCAGGCC 480 CAGGCTGGCT GGCTGCAGCA TGACTTTGGG CACCTGTCGG TCTTCAGCAC CTCAAAGTGG 540 AACCATCTGC TACATCATTT TGTGATTGGC CACCTGAAGG GGGCCCCCGC CAGTTGGTGG 600 AACCACATGC ACTTCCAGCA CCATGCCAAG CCCAACTGCT TCCGCAAAGA CCCAGACATC .660 AACATGCATC CCTTCTTCTT TGCCTTGGGG AAGATCCTCT CTGTGGAGCT TGGGAAACAG 720 AAGAAAAAAT ATATGCCGTA CAACCACCAG CACARATACT TCTTCCTAAT TGGGCCCCCA 780 GCCTTGCTGC CTCTCTACTT CCAGTGGTAT ATTTTCTATT TTGTTATCCA GCGAAAGAAG 840 TGGGTGGACT TGGCCTGGAT CAGCAAACAG GAATACGATG AAGCCGGGCT TCCATTGTCC 900 ACCGCAAATG CTTCTAAA 918 (2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 35: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 1686 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: otro ácido nucleico (Contig Editado 2511785) (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 35: GCCACTTAAA GGGTGCCTCT GCCAACTGGT GGAATCATCG CCACTTCCAG CACCACGCCA 60 AGCCTAACAT CTTCCACAAG GATCCCGATG TGAACATGCT GCACGTGTTT GTTCTGGGCG 120 AATGGCAGCC CATCGAGTAC GGCAAGAAGA AGCTGAAATA CCTGCCCTAC AATCACCAGC 180 ACGAATACTT CTTCCTGATT GGGCCGCCGC TGCTCATCCC CATGTATTTC CAGTACCAGA 240 TCATCATGAC CATGATCGTC CATAAGAACT GGGTGGACCT GGCCTGGGCC GTCAGCTACT 300 ACATCCGGTT CTTCATCACC TACATCCCTT TCTACGGCAT CCTGGGAGCC CTCCTTTTCC 360 TCAACTTCAT CAGGTTCCTG GAGAGCCACT GGTTTGTGTG GGTCACACAG ATGAATCACA 420 TCGTCATGGA GATTGACCAG GAGGCCTACC GTGACTGGTT CAGTAGCCAG CTGACAGCCA 480 CCTGCAACGT GGAGCAGTCC TTCTTCAACG ACTGGTTCAG TGGACACCTT AACTTCCAGA 540 TTGAGCACCA CCTCTTCCCC ACCATGCCCC GGCACAACTT ACAC*_AGATC GCCCCGCTGG 600 TGAAGTCTCT ATGTGCCAAG CATGGCATTG AATACCAGGA GAAGCCGCTA CTGAGGGCCC 660 TGCTGGACAT CATCAGGTCC CTGAAGAAGT CTGGGAAGCT GTGGCTGGAC GCCTACCTTC 720 ACAAATGAAG CCACAGCCCC CGGGACACCG TGGGGAAGGG GTGCAGGTGG GGTGATGGCC 780 AGAGGAATGA TGGGCTTTTG TTCTGAGGGG TGTCCGAGAG GCTGGTGTAT GCACTGCTCA 840 CGGACCCCAT GTTGGATCTT TCTCCCTTTC TCCTCTCCTT TTTCTCTTCA CATCTCCCCC 900 ATAGCACCCT GCCCTCATGG GACCTGCCCT CCCTCAGCCG TCAGCCATCA GCCATGGCCC 960 TCCCAGTGCC TCCTAGCCCC TTCTTCCAAG GAGCAGAGAG GTGGCCACCG GGGGTGGCTC 1020 TGTCCTACCT CCACTCTCTG CCCCTAAAGA TGGGAGGAGA CCAGCGGTCC ATGGGTCTGG 1080 CCTGTGAGTC TCCCCTTGCA GCCTGGTCAC TAGGCATCAC CCCCGCTTTG GTTCTTCAGA 1140 TGCTCTTGGG GTTCATAGGG GCAGGTCCTA GTCGGGCAGG GCCCCTGACC CTCCCGGCCT 1200 GGCTTCACTC TCCCTGACGG CTGCCATTGG TCCACCCTTT CATAGAGAGG CCTGCTTTGT 1260 TACAAAGCTC GGGTCTCCCT CCTGCAGCTC GGTTAAGTAC CCGAGGCCTC TCTTAAGATG 1320 TCCAGGGCCC CAGGCCCGCG GGCACAGCCA GCCCAAACCT TGGGCCCTGG AAGAGTCCTC 1380 CACCCCATCA CTAGAGTGCT CTGACCCTGG GCTTTCACGG GCCCCATTCC ACCGCCTCCC 1440 CAACTTGAGC CTGTGACCTT GGGACCAAAG GGGGAGTCCC TCGTCTCTTG TGACTCAGCA 1500 GAGGCAGTGG CCACGTTCAG GGAGGGGCCG GCTGGCCTGG AGGCTCAGCC CACCCTCCAG 1560 CTTTTCCTCA GGGTGTCCTG AGGTCCAAGA TTCTGGAGCA ATCTGACCCT TCTCCAAAGG 1620 CTCTGTTATC AGCTGGGCAG TGCCAGCCAA TCCCTGGCCA TTTGGCCCCA GGGGACGTGG 1680 GCCCTG 1686 (2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 36: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 1843 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: otro ácido nucleico (Contig 2535 (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 36: GTCTTTTACT TTGGCAATGG CTGGATTCCT ACCCTCATCA CGGCCTTTGT CCTTGCTACC 60 TCTCAGGCCC AAGCTGGATG GCTGCAACAT GATTATGGCC ACCTGTCTGT CTACAGAAAA 120 CCCAAGTGGA ACCACCTTGT CCACAAATTC GTCATTGGCC ACTTAAAGGG TGCCTCTGCC 180 AACTGGTGGA ATCATCGCCA CTTCCAGCAC CACGCCAAGC CTAACATCTT CCACAAGGAT 240 CCCGATGTGA ACATGCTGCA CGTGTTTGTT CTGGGCGAAT GGCAGCCCAT CGAGTACGGC 300 AAGAAGAAGC TGAAATACCT GCCCTACAAT CACCAGCACG AATACTTCTT CCTGATTGGG 360 CCGCCGCTGC TCATCCCCAT GTATTTCCAG TACCAGATCA TCATGACCAT GATCGTCCAT 420 AAGAACTGGG TGGACCTGGC CTGGGCCGTC AGCTACTACA TCCGGTTCTT CATCACCTAC 480 ATCCCTTTCT ACGGCATCCT GGGAGCCCTC CTTTTCCTCA ACTTCATCAG GTTCCTGGAG 540 AGCCACTGGT TTGTGTGGGT CACACAGATG AATCACATCG TCATGGAGAT TGACCAGGAG 600 GCCTACCGTG ACTGGTTCAG TAGCCAGCTG ACAGCCACCT GCAACGTGGA GCAGTCCTTC 660 TTCAACGACT GGTTCAGTGG ACACCTTAAC TTCCAGATTG AGCACCACCT CTTCCCCACC 720 ATGCCCCGGC ACAACTTACA CAAGATCGCC CCGCTGGTGA AGTCTCTATG TGCCAAGCAT 780 GGCATTGAAT ACCAGGAGAA GCCGCTACTG AGGGCCCTGC TGGACATCAT CAGGTCCCTG 840 AAGAAGTCTG GGAAGCTGTG GCTGGACGCC TACCTTCACA AATGAAGCCA CAGCCCCCGG 900 GACACCGTGG GGAAGGGGTG CAGGTGGGGT GATGGCCAGA GGAATGATGG GCTTTTGTTC 960 TGAGGGGTGT CCGAGAGGCT GGTGTATGCA CTGCTCACGG ACCCCATGTT GGATCTTTCT 1020 CCCTTTCTCC TCTCCTTTTT CTCTTCACAT :TCCCCCATA GCACCCTGCC CTCATGGGAC 1080 CTGCCCTCCC TCAGCCGTCA GCCATCAGCC ATGGCCCTCC CAGTGCCTCC TAGCCCCTTC 1140 TTCCAAGGAG CAGAGAGGTG GCCACCGGGG GTGGCTCTGT CCTACCTCCA CTCTCTGCCC 1200 CTAAAGATGG GAGGAGACCA GCGGTCCATG GGTCTGGCCT GTGAGTCTCC CCTTGCAGCC 1260 TGGTCACTAG GCATCACCCC CGCTTTGGTT CTTCAGATGC TCTTGGGGTT CATAGGGGCA 1320 GGTCCTAGTC GGGCAGGGCC CCTGACCCTC CCGGCCTGGC TTCACTCTCC CTGACGGCTG 1380 CCATTGGTCC ACCCTTTCAT AGAGAGGCCT GCTTTGTTAC AAAGCTCGGG TCTCCCTCCT 1440 GCAGCTCGGT TAAGTACCCG AGGCCTCTCT TAAGATGTCC AGGGCCCCAG GCCCGCGGGC 1500 ACAGCCAGCC CAAACCTTGG GCCCTGGAAG AGTCCTCCAC CCCATCACTA GAGTGCTCTG 1560 ACCCTGGGCT TTCACGGGCC CCATTCCACC GCCTCCCCAA CTTGAGCCTG TGACCTTGGG 1620 ACCAAAGGGG GAGTCCCTCG TCTCTTGTGA CTCAGCAGAG GCAGTGGCCA CGTTCAGGGA 1680 GGGGCCGGCT GGCCTGGAGG CTCAGCCCAC CCTCCAGCTT TTCCTCAGGG TGTCCTGAGG 1740 TCCAAGATTC TGGAGCAATC TGACCCTTCT CCAAAGGCTC TGTTATCAGC TGGGCAGTGC 1800 CAGCCAATCC CTGGCCATTT GGCCCCAGGG GACGTGGGCC CTG 1843 ( 2 ) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO : 37 : ( i ) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA : (A) LONGITUD : 2257 pares de bases (B) TIPO : ácido nucleico ( C) TIPO DE CADENA : s imple (D) TOPOLOGÍA : lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: otro ácido nucleico (Contig Editad 253538a) (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 37: CAGGGACCTA CCCCGCGCTA CTTCACCTGG GACGAGGTGG CCCAGCGCTC AGGGTGCGAG 60 GAGCGGTGGC TAGTGATCGA CCGTAAGGTG TACAACATCA GCGAGTTCAC CCGCCGGCAT 120 CCAGGGGGCT CCCGGGTCAT CAGCCACTAC GCCGGGCAGG ATGCCACGGA TCCCTTTGTG 180 GCCTTCCACA TCAACAAGGG CCTTGTGAAG AAGTATATGA ACTCTCTCCT GATTGGAGAA 240 CTGTCTCCAG AGCAGCCCAG CTTTGAGCCC ACCAAGAATA AAGAGCTGAC AGATGAGTTC 300 CGGGAGCTGC GGGCCACAGT GGAGCGGATG GGGCTCATGA AGGCCAACCA TGTCTTCTTC 360 CTGCTGTACC TGCTGCACAT CTTGCTGCTG GATGGTGCAG CCTGGCTCAC CCTTTGGGTC 420 TTTGGGACGT CCTTTTTGCC CTTCCTCCTC TGTGCGGTGC TGCTCAGTGC AGTTCAGCAG 480 GCCCAAGCTG GATGGCTGCA ACATGATTAT GGCCACCTGT CTGTCTACAG AAAACCCAAG 540 TGGAACCACC TTGTCCACAA ATTCGTCATT GGCCACTTAA AGGGTGCCTC TGCCAACTGG 600 TGGAATCATC GCCACTTCCA GCACCACGCC AAGCCTAACA TCTTCCACAA GGATCCCGAT 660 GTGAACATGC TGCACGTGTT TGTTCTGGGC GAATGGCAGC CCATCGAGTA CGGCAAGAAG 720 AAGCTGAAAT ACCTGCCCTA CAATCACCAG CACGAATACT TCTTCCTGAT TGGGCCGCCG 780 CTGCTCATCC CCATGTATTT CCAGTACCAG ATCATCATGA CCATGATCGT CCATAAGAAC 840 TGGGTGGACC TGGCCTGGGC CGTCAGCTAC TACATCCGGT TCTTCATCAC CTACATCCCT 900 TTCTACGGCA TCCTGGGAGC CCTCCTTTTC CTCAACTTCA TCAGGTTCCT GGAGAGCCAC 960 TGGTTTGTGT GGGTCACACA GATGAATCAC ATCGTCATGG AGATTGACCA GGAGGCCTAC 1020 CGTGACTGGT TCAGTAGCCA GCTGACAGCC ACCTGCAACG TGGAGCAGTC CTTCTTCAAC 1080 GACTGGTTCA GTGGACACCT TAACTTCCAG ATTGAGCACC ACCTCTTCCC CACCATGCCC 1140 CGGCACAACT TACACAAGAT CGCCCCGCTG GTGAAGTCTC TATGTGCCAA GCATGGCATT 1200 GAATACCAGG AGAAGCCGCT ACTGAGGGCC CTGCTGGACA TCATCAGGTC CCTGAAGAAG 1260 TCTGGGAAGC TGTGGCTGGA CGCCTACCTT CACAAATGAA GCCACAGCCC CCGGGACACC 1320 GTGGGGAAGG GGTGCAGGTG GGGTGATGGC CAGAGGAATG ATGGGCTTTT GTTCTGAGGG 1380 GTGTCCGAGA GGCTGGTGTA TGCACTGCTC ACGGACCCCA TGTTGGATCT TTCTCCCTTT 14 0 CTCCTCTCCT TTTTCTCTTC ACATCTCCCC CATAGCACCC TGCCCTCATG GGACCTGCCC 1500 TCCCTCAGCC GTCAGCCATC AGCCATGGCC CTCCCAGTGC CTCCTAGCCC CTTCTTCCAA 1560 GGAGCAGAGA GGTGGCCACC GGGGGTGGCT CTGTCCTACC TCCACTCTCT GCCCCTAAAG 1620 ATGGGAGGAG ACCAGCGGTC CATGGGTCTG GCCTGTGAGT CTCCCCTTGC AGCCTGGTCA 1680 CTAGGCATCA CCCCCGCTTT GGTTCTTCAG ATGCTCTTGG GGTTCATAGG GGCAGGTCCT 1740 AGTCGGGCAG GGCCCCTGAC CCTCCCGGCC TGGCTTCACT CTCCCTGACG GCTGCCATTG 1800 GTCCACCCTT TCATAGAGAG GCCTGCTTTG TTACAAAGCT CGGGTCTCCC TCCTGCAGCT 1860 CGGTTAAGTA CCCGAGGCCT CTCTTAAGAT GTCCAGGGCC CCAGGCCCGC GGGCACAGCC 1920 AGCCCAAACC TTGGGCCCTG GAAGAGTCCT CCACCCCATC ACTAGAGTGC TCTGACCCTG 1980 GGCTTTCACG GGCCCCATTC CACCGCCTCC CCAACTTGAG CCTGTGACCT TGGGACCAAA 2040 GGGGGAGTCC CTCGTCTCTT GTGACTCAGC AGAGGCAGTG GCCACGTTCA GGGAGGGGCC 2100 GGCTGGCCTG GAGGCTCAGC CCACCCTCCA GCTTTTCCTC AGGGTGTCCT GAGGTCCAAG 2160 ATTCTGGAGC AATCTGACCC TTCTCCAAAG GCTCTGTTAT CAGCTGGGCA GTGCCAGCCA 2220 ATCCCTGGCC ATTTGGCCCC AGGGGACGTG GGCCCTG 2257 (2; INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 38: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 411 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: aminoácido (Traducción de Contig 2692004) (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 38: His Ala Asp Arg Arg Arg Glu He Leu Ala Lys Tyr Pro Glu He 1 5 10 15 Lys Ser Leu Met Lys Pro Asp Pro Asn Leu He Trp He He He 20 25 30 Met Met Val Leu Thr Gln Leu Gly Ala Phe Tyr He Val Lys Asp 35 40 45 Leu Asp Trp Lys Trp Val He Phe Gly Ala Tyr Ala Phe .Gly Ser 50 55 60 Cys He Asn His Ser Met Thr Leu Ala He His Glu He Ala His 65 70 75 Asn Ala Ala Phe Gly Asn Cys Lys Ala Met Trp Asn Arg Trp Phe 80 85 90 Gly Met Phe Ala Asn Leu Pro He Gly He Pro Tyr Ser He Ser 95 100 105 Phe Lys Arg Tyr His Met Asp His His Arg Tyr Leu Gly Ala Asp 110 115 120 Gly Val Asp Val Asp He Pro Thr Asp Phe Glu Giy Trp Phe Phe 125 130 135 Cys Thr Ala Phe Arg Lys Phe He Trp Val He Leu Gln Pro Leu 140 145 150 Phe Tyr Ala Phe Arg Pro Leu Phe He Asn Pro Lys Pro He Thr 155 160 165 Tyr Leu Glu Val He Asn Thr Val Ala Gln Val Thr Phe Asp He 170 175 180 Leu He Tyr Tyr Phe Leu Gly He Lys Ser Leu Val Tyr Met Leu 185 190 195 Ala Ala Ser Leu Leu Gly Leu Gly Leu His Pro He Ser Gly His 200 205 210 Phe He Ala Glu His Tyr Met Phe Leu Lys Gly His Glu Thr Tyr 215 220 225 Ser Tyr Tyr Gly Pro Leu Asn Leu Leu Thr Phe Asn Val Gly Tyr 230 235 240 His Asn Glu His His Asp Phe Pro Asn He Pro Gly Lys Ser Leu 245 250 255 Pro Leu Val Arg Lys He Ala Ala Glu Tyr Tyr Asp Asn Leu Pro 260 265 270 His Tyr Asn Ser Trp He Lys Val Leu Tyr Asp Phe Val Met Asp 275 280 285 Asp Thr He Ser Pro Tyr Ser Arg Met Lys Arg His Gln Lys Gly 290 295 300 Glu Met Val Leu Glu Xaa He Ser Leu Val Pro Lys Gly Phe Phe 305 310 315 Ser Lys Thr Leu Asp Asp Lys Met Glu Phe Leu His Tyr Xaa Tnr 320 325 330 Xaa Asp Gln Xaa Cys Ser Glu Ala Pro Leu Ala Gln Phe Gln Ser 335 340 345 Lys Ser Ser Val He Pro Arg Ser Glu Ser Gly Phe Xaa Thr Val 350 355 360 Ser Leu Thr Leu Tyr Cys Ser Val Ser Leu Thr Gly Asn Leu Xaa 365 370 375 Leu Val Tyr Tyr A.rg His Xaa Gly Cys Phe Thr His Val Cys His 380 385 390 Phe He Ser He Ser Phe Lys Lys Leu Leu Lys Ser Tyr Phe Ala 400 405 410 (2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 39: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 218 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: aminoácido (Traducción de Contíg 2153526) (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 39: Tyr Leu Leu Arg Pro Leu Leu Pro His Leu Cys Ala Thr He Gly 1 5 10 15 Ala Glu Ser Phe Leu Gly Leu Phe Phe He Val Arg Phe,Leu Glu 20 25 30 Ser Asn Trp Phe Val Trp Val Thr Gln Met Asn His He Pro Met 35 40 45 His He Asp His Asp Arg Asn Met Asp Trp Val Ser Thr Gln Leu 50 55 60 Gln Ala Thr Cys Asn Val His Lys Ser Ala Phe Asn Asp Trp Phe 65 70 75 Ser Gly His Leu Asn Phe Gln He Glu His His Leu Phe Pro Thr 80 85 90 Met Pro Arg His Asn Tyr His Lys Val Ala Pro Leu Val Gln Ser 95 100 105 Leu Cys Ala Lys His Gly He Glu Tyr Gln Ser Lys Pro Leu Leu 110 115 120 Ser Ala Phe Ala Asp He He His Ser Leu Lys Glu Ser Gly Gln 125 130 135 Leu Trp Leu Asp Ala Tyr Leu His Gln Xaa Gln Gln Pro Pro Cys 140 145 150 Pro Val Trp Lys Lys Arg Arg Lys Thr Leu Glu Pro Arg Gln Arg 155 160 165 Gly Ala Xaa Gly Thr Met Pro Leu Xaa Phe Asn Thr Gln Arg Gly 170 175 180 Leu Gly Leu Gly Thr Xaa Ser Leu Xaa Leu Lys Leu Leu Pro Phe 185 190 195 He Phe Xaa Pro Gln Phe Xaa Asp Pro Lys Trp Gly Val Asp Thr 200 205 210 Glu Val Pro Arg Arg Glu Gly Ala 215 ( 2 ) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO : 40 : ( i ) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA : (A) LONGITUD : 71 aminoácidos (B) TIPO : aminoácido (C) TIPO DE CADENA : simple (D) TOPOLOGÍA : l ineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: aminoácido (Traducción de Conti 3506132) (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 40: Val Phe Tyr Phe Gly Asn Gly Trp He Pro Thr Leu He Thr Ala 1 5 10 15 Phe Val Leu Ala Thr Ser Gln Ala Gln Ala Gly Trp Leu Gln His -20 25 30 Asp Tyr Gly His Leu Ser Val Tyr Arg Lys Pro Lys Trp Asn His 35 40 45 Leu Val His Lys Phe Val He Gly His Leu Lys- Gly Ala Ser Ala 50 55 60 Asn Trp Trp Asn His Arg His Phe Gln His His Ala Lys Pro Asn 65 70 75 Leu Gly Glu Trp Gln Pro He Glu Tyr Gly Lys Xaa 80 85 ,'2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 41: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 306 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: aminoácido (Traducción de Contig 3854933) (xi ) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA : SEQ ID NO : 41 : Gln Gly Pro Thr Pro Arg Tyr Phe Thr Trp Asp Glu Val Ala Gln 1 5 10 15 Arg Ser Gly Cys Glu Glu Arg Trp Leu Val He Asp Arg Lys Val 20 25 30 Tyr Asn He Ser Glu Phe Thr Arg Arg His Pro Gly Gly Ser Arg 35 40 45 Val He Ser. His Tyr Ala Gly Gln Asp Aia Thr Asp Pro Phe Val 50 55 60 Ala Phe His He Asn Lys Gly Leu Val Lys Lys Tyr Met Asn Ser 65 70 75 Leu Leu He Gly Glu Leu Ser Pro Glu Gln Pro Ser Phe Glu Pro 80 85 90 Thr Lys Asn Lys Glu Leu Thr Asp Glu Phe Arg Glu Leu Arg Ala 95 100 105 Thr Val Glu Arg Met Gly Leu Met Lys Ala Asn His Val Phe Phe 110 115 120 Leu Leu Tyr Leu Leu His He Leu Leu Leu Asp Gly Ala Ala Trp 125 130 135 Leu Thr Leu Trp Val Phe Gly Thr Ser Phe Leu Pro Phe Leu Leu 140 145 150 Cys Ala Val Leu Leu Ser Ala Val Gln Ala Gln Ala Gly Trp Leu 155 160 165 Gln His Asp Phe Gly His Leu Ser Val Phe Ser Thr Ser Lys Trp 170 175 180 Asn His Leu Leu His His Phe Val He Gly His Leu Lys Gly Ala 185 190 195 Pro Ala Ser Trp Trp Asn His Met His Phe Gln His His Ala Lys 200 205 210 Pro Asn Cys Phe Arg Lys Asp Pro Asp He Asn Met His Pro Phe 215 220 225 Phe Phe Ala Leu Gly Lys He Leu Ser Val Glu Leu Gly Lys Gln 230 235 240 Lys Lys Lys Tyr Met Pro Tyr Asn His Gln His Xaa Tyr Phe Phe 245 250 255 Leu He Gly Pro Pro Ala Leu Leu Pro Leu Tyr Phe Gln Trp Tyr 260 265 270 He Phe Tyr Phe Val He Gln Arg Lys Lys Trp Val Asp Leu Ala 275 280 285 Trp He Ser Lys Gln Glu Tyr Asp Glu Ala Gly Leu Pro Leu Ser 90 295 300 Thr Ala Asn Ala Ser Lys 305 (2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 42: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 566 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: simple (D) TOPOLOGÍA: lineal ( ii ) TIPO DE MOLÉCULA : aminoácido (Traducción de Conti 2511785 ) (xi ) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA : SEQ ID NO : 42 :. His Leu Lys Gly Ala Ser Ala Asn Trp Trp Asn His Arg, Kis Phe 1 5 10 15 Gln His His Ala Lys Pro Asn He Phe His Lys Asp Pro Asp Val 20 25 30 Asn Met Leu His Val Phe Val Leu Gly Glu Trp Gln Pro He Glu 35 40 45 Tyr Gly Lys Lys Lys Leu Lys Tyr Leu Pro Tyr Asn His Gln His 50 55 60 Glu Tyr Phe Phe Leu He Gly Pro Pro Leu Leu He Pro Met Tyr 65 70 75 Phe Gln Tyr Gln He He Met Thr Met He Val His Lys Asn Trp 80 85 90 Val Asp Leu Ala Trp Ala Val Ser Tyr Tyr He Arg Phe Phe He 95 100 105 Thr Tyr He Pro Phe Tyr Gly He Leu Gly Ala Leu Leu Phe Leu 110 115 120 Asn Phe He Arg Phe Leu Glu Ser His Trp Phe Val Trp Val Thr 125 130 135 Gln Met Asn His He Val Met Glu He Asp Gln Glu Ala Tyr Arg 140 145 150 Asp Trp Phe Ser Ser Gln Leu Thr Ala Thr Cys Asn Val Glu Gln 155 160 165 Ser Phe Phe Asn Asp Trp Phe Ser Gly His Leu Asn Phe Gln He 170 175 180 Glu His His Leu Phe Pro Thr Met Pro Arg His Asn Leu His Lys 185 190 195 He Ala Pro Leu Val Lys Ser Leu Cys Aia Lys His Gly He Glu 200 205 210 Tyr Gln Glu Lys Pro Leu Leu Arg Ala Leu Leu Asp He He Arg 215 220 225 Ser Leu Lys Lys Ser Gly Lys Leu Trp Leu Asp Ala Tyr Leu His 230 235 240 Lys Xaa Ser His Ser Pro Arg Asp Thr Val Gly Lys Gly Cys Arg 245 250 255 Trp Gly Asp Gly Gln Arg Asn Asp Gly Leu Leu Phe Xaa Gly Val 260 265 270 Ser Glu Arg j_,eu Val Tyr Ala Leu Leu Thr Asp Pro Met Leu Asp 275 280 285 Leu Ser Pro Phe Leu Leu Ser Phe Phe Ser Ser His Leu Pro His 290 295 300 Ser Thr Leu Pro Ser Trp Asp Leu Pro Ser Leu Ser Arg Gln Pro 305 310 315 Ser Ala Met Ala Leu Pro Val Pro Pro Ser Pro Phe Phe Gln Gly 320 325 330 Ala Glu Arg Trp Pro Pro Gly Val Ala Leu Ser Tyr Leu HlS Ser 335 340 345 Leu Pro Leu Lys Met Gly Gly Asp Gln Arg Ser Met Gly Leu Ala 350 355 360 Cys Glu Ser Pro Leu Ala Ala Trp Ser Leu Gly He Thr Pro Ala 365 370 375 Leu Val Leu Gln Met Leu Leu Gly Phe He Gly Ala Gly Pro Ser 380 385 390 Arg Ala Gly Pro Leu Thr Leu Pro Ala Trp Leu His Ser Pro Xaa 400 405 410 Arg Leu Pro Leu Val His Pro Phe He Glu Arg Pro Ala Leu Leu 415 420 425 Gln Ser Ser Gly Leu Pro Pro Ala Ala Arg Leu Ser Thr Arg Gly 430 435 440 Leu Ser Xaa Asp Val Gln Gly Pro Arg Pro Ala Gly Thr Ala Ser 445 450 455 Pro Asn Leu Gly Pro Trp Lvs Ser Pro Pro Pro His His Xaa Ser 460 465 470 Ala Leu Thr Leu Gly Phe His Gly Pro His Ser Thr Ala Ser Pro 475 480 485 Thr Xaa Ala Cys Asp Leu Gly Thr Lys Gly Gly Val Pro Arg Leu 490 495 500 Leu Xaa Leu Ser Arg Gly Ser Gly His Val Gln Gly Gly Ala Gly 505 510 515 Trp Pro Gly Gly Ser Ala His Prc Pro Ala Phe Pro Gln Gly Val 520 525 530 Leu Arg Ser Lys He Leu Glu Gln Ser Asp Pro Ser Pro Lys Ala 535 540 545 Leu Leu Ser Ala Gly Gln Cys Gln Pro He Pro Gly His Leu Ala 550 555 560 Pro Gly Asp Val Gly Pro Xaa 565 (2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 43: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 619 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: aminoácido (Traducción de Conti 2535) (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:43: Val Phe Tyr Phe Gly Asn Gly Trp He Pro Thr Leu He Thr Ala 1 5 10 15 Phe Val Leu Ala Thr Ser Gln Ala Gln Ala Gly Trp Leu Gln His 20 25 30 Asp Tyr Gly His Leu Ser Val Tyr Arg Lys Pro Lys Trp Asn His 35 40 45 Leu Val His Lys Phe Val He Gly His Leu Lys Gly Ala Ser Ala 50 55 60 Asn Trp Trp Asn His Arg His Phe Gln His His Ala Lys Pro Asn 65 70 75 He Phe His Lys Asp Pro Asp Val Asn Met Leu His Val Phe Val 80 85 90 Leu Gly Glu Trp Gln Pro He Glu Tyr Gly Lys Lys Lys Leu Lys 95 100 105 Tyr Leu Pro Tyr Asn His Gln His Glu Tyr Phe Phe Leu He Gly 110 115 120 Pro Pro Leu Leu He Pro Met Tyr Phe Gln Tyr Gln He He Met 125 130 135 Thr Met He Val His Lys Asn Trp Val Asp Leu Ala Trp Ala Val 140 145 150 Ser Tyr Tyr He Arg Phe Phe He Thr Tyr He Pro Phe Tyr Gly 155 160 165 He Leu Gly Ala Leu Leu Phe Leu Asn Phe He Arg Phe Leu Glu 170 175 180 Ser His Trp Phe Val Trp Val Thr Gln Met Asn His He Val Met 185 190 195 Glu He Asp Gln Glu Ala Tyr Arg Asp Trp Phe Ser Ser Gln Leu 200 205 210 Thr Ala Thr Cys Asn Val Glu Gln Ser Phe Phe Asn Asp Trp Phe 215 220 225 Ser Gly His Leu Asn Phe Gln He GJu His His Leu Phe Pro Thr 230 235 240 Met Pro Arg His Asn Leu His Lys He Ala Pro Leu Val Lys Ser 245 250 255 Leu Cys Ala Lys His Gly He Glu Tyr Gln Glu Lys Pro Leu Leu 260 265 270 Arg Ala Leu Leu Asp He He Arg Ser Leu Lys Lys Ser Gly Lys 275 280 285 Leu Trp Leu Asp Ala Tyr Leu His Lys Xaa Ser His Ser .Pro Arg 290 295 300 Asp Thr Val Gly Lys Gly Cys Arg Trp Gly Asp Gly Gln Arg Asn 305 310 315 Asp Gly Leu Leu Phe Xaa Gly Val Ser Glu Arg Leu Val Tyr Ala 320 325 330 Leu Leu Thr Asp Pro Met Leu Asp Leu Ser Pro Phe Leu Leu Ser 335 340 345 Phe Phe Ser Ser His Leu Pro His Ser Thr Leu Pro Ser Trp Asp 350 355 360 Leu Pro Ser Leu Ser Arg Gln Pro Ser Ala Met Ala Leu Pro Val 365 370 375 Pro Pro Ser Pro Phe Phe Gln Gly Ala Glu Arg Trp Pro Pro Gly 380 385 390 Val Ala Leu Ser Tyr Leu His Ser Leu Pro Leu Lys Met Gly Gly 400 405 410 Asp Gln Arg Ser Met Gly Leu Ala Cys Glu Ser Pro Leu Ala Ala 415 420 425 Trp Ser Leu Gly He Thr Pro Ala Leu Val Leu Gln Met Leu Leu 430 435 440 Gly Phe He Gly Ala Gly Pro Ser Arg Ala Gly Pro Leu Thr Leu 445 450 455 Pro Ala rp Leu His Ser Pro Xaa Arg Leu Pro Leu Val His Pro 460 465 470 Phe He Glu Arg Pro Ala Leu Leu Gln Ser Ser Gly Leu Pro Pro 475 480 485 Ala Ala Arg Leu Ser Thr Arg Gly Leu Ser Xaa Asp Val Gln Gly 490 495 500 Pro Arg Pro Ala Gly Thr Ala Ser Pro Asn Leu Gly Pro Trp Lys 505 510 515 Ser Pro Pro Pro His His Xaa Ser Ala Leu Thr Leu Gly Phe His 520 525 530 Gly Pro His Ser Thr Ala Ser Pro Thr Xaa Ala Cys Asp Leu Gly 535 540 545 Thr Lys Gly Gly Val Pro Arg Leu Leu Xaa Leu Ser Arg Gly Ser 550 555 560 Gly His Val Gln Gly Gly Ala Gly Trp Pro Gly Gly Ser Ala His 565 570 575 Pro Pro Ala Phe Pro Gln Gly Val Leu Arg Ser Lys He Leu Glu 580 585 590 Gln Ser Asp Pro Ser Pro Lys Ala Leu Leu Ser Ala Gly Gln Cys 595 600 605 Gln Pro He Pro Gly His Leu Ala Pro Gly Asp Val Gly Pro Xaa 610 615 620 (2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 44: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 757 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: aminoácido (Traducción de Conti 253538a) (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 44: Gln Gly Pro Thr Pro Arg Tyr Phe Thr Trp Asp Glu Val Ala Gln 1 5 10 15 Arg Ser Gly Cys Glu Glu Arg Trp Leu Val He Asp Arg Lys Val 20 25 30 Tyr Asn He Ser Glu Phe Thr Arg Arg His Pro Gly Gly Ser Arg 35 40 45 Val He Ser His Tyr Ala Gly Gln Asp Ala Thr Asp Pro Phe Val 50 55 60 Ala Phe His He Asn Lys Gly Leu Val Lys Lys Tyr Met Asn Ser 65 70 75 Leu Leu He Gly Glu Leu Ser Pro Glu Gln Pro Ser Phe Glu Pro 80 85 90 Thr Lys Asn Lys Glu Leu Thr Asp Glu Phe Arg Glu Leu Arg Ala 95 100 105 Thr Val Glu Arg Met Gly Leu Met Lys Ala Asn His Val Phe Phe 110 115 120 Leu Leu Tyr Leu Leu His He Leu Leu Leu Asp Gly Ala Ala Trp 125 130 135 Leu Thr Leu Trp Val Phe Gly Thr Ser Phe Leu Pro Phe Leu Leu 140 145 150 Cys Ala Val Leu Leu Ser Ala Val Gln Gln Ala Gln Ala Gly Trp 155 160 165 Leu Gln His Asp Tyr Gly His Leu Ser Val Tyr Arg Lys Pro Lys 170 175 180 Trp Asn His Leu Val His Lys Phe Val He Gly His Leu Lys Gly 185 190 195 Ala Ser Ala Asn Trp Trp Asn His Arg His Phe Gln His His Ala 200 205 210 Lys Pro Asn He Phe His Lys Asp Pro Asp Val Asn Met Leu His 215 220 225 Val Phe Val Leu Gly Glu Trp Gln Pro He Glu Tyr Gly Lys Lys 230 235 240 Lys Leu Lys Tyr Leu Pro Tyr Asn His Gln His Glu Tyr Phe Phe 245 250 255 Leu He Gly Pro Pro Leu Leu He Pro Met Tyr Phe Gln Tyr Gln 260 265 270 He He Met Thr Met He Val His Lys Asn Trp Val Asp Leu Ala 275 280 285 Trp Ala Val Ser Tyr Tyr He Arg Phe Phe He Thr Tyr He Pro 290 295 300 Phe Tyr Gly He Leu Gly Ala Leu Leu Phe Leu Asn Phe He Arg 305 310 315 Phe Leu Glu Ser His Trp Phe Val Trp Val Thr Gln Met Asn His 320 325 330 He Val Met Glu He Asp Gln Glu Ala Tyr Arg Asp Trp Phe Ser 335 340 345 Sex Gln Leu Thr Ala Thr Cys Asn Val Glu Gln Ser Phe Phe Asn 350 355 360 Asp -Trp Phe Ser Gly His Leu Asn Phe Gln He Glu His His Leu 365 370 , 375 Phe Pro Thr Met Pro Arg His Asn Leu His Lys He Ala Pro Leu 380 385 390 Val Lys Ser Leu Cys Ala Lys His Gly He Glu Tyr Gln Glu Lys 400 405 410 Pro Leu Leu Arg Ala Leu Leu. Asp He He Arg Ser Leu Lys Lys 415 420 425 Ser Gly Lys Leu Trp Leu Asp Ala Tyr Leu His Lys Xaa Ser His 430 435 440 Ser Pro Arg Asp Thr Val Gly Lys Gly Cys Arg Trp Gly Asp Gly 445 450 455 Gln Arg Asn Asp Gly Leu Leu Phe Xaa Gly Val Ser Glu Arg Leu 460 465 470 Val Tyr Ala Leu Leu Thr Asp Pro Met Leu Asp Leu Ser Pro Phe 475 480 485 Leu Leu Ser Phe Phe Ser Ser His Leu Pro His Ser Thr Leu Pro 490 495 500 Ser Trp Asp Leu Pro Ser Leu Ser Arg Gln Pro Ser Ala Met Ala 505 510 515 Leu Pro Val Pro Pro Ser Pro Phe Phe Gln Gly Ala Glu Arg Trp 520 525 530 Pro Pro Gly Val Ala Leu Ser Tyr Leu His Ser Leu Pro,Leu Lys 535 540 " 545 Met Gly Gly Asp Gln Arg Ser Met Gly Leu Ala Cys Glu Ser Pro 550 555 560 Leu Ala Ala Trp Ser Leu Gly He Thr Pro Ala Leu Val Leu Gln 565 570 575 Met Leu Leu Gly Phe He Gly Ala Gly Pro Ser Arg Ala Gly Pro 580 585 590 Leu Thr Leu Pro Ala Trp Leu His Ser Pro Xaa Arg Leu Pro Leu 595 600 605 Val His Pro Phe He Glu Arg Pro Ala Leu Leu Gln Ser Ser Gly 61° 615 620 Leu Pro Pro Ala Ala Arg Leu Ser Thr Arg Gly Leu Ser Xaa Asp 625 630 635 Val Gln Gly Pro Arg Pro Ala Gly Thr Ala Ser Pro Asn Leu Gly 640 645 650 Pro Trp Lys Ser Pro Pro Pro His His Xaa Ser Ala Leu Thr Leu 655 660 665 Gly Phe His Gly Pro His Ser Thr Ala Ser Pro Thr Xaa Ala Cys 670 675 680 Asp Leu Gly Thr Lys Gly Gly Val Pro Arg Leu Leu Xaa Leu Ser 685 690 695 Arg Gly Ser Gly His Val Gln Gly Gly Ala Gly Trp Pro Gly Gly 700 705 710 Ser Ala His Pro Pro Ala Phe Pro Gln Gly Val Leu Arg Ser Lys 715 720 725 He Leu Glu Gln Ser Asp Pro Ser Pro Lys Ala Leu Leu Ser Ala 730 735 740 Gly Gln Cys Gln Pro He Pro Gly His Leu Ala Pro Gly Asp Val 745 750 755 Gly Pro Xaa - (2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 45: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 746 ácidos nucleicos . (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: no relevante (D) ' TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ácido nucleico (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 45 CGTATGTCAC TCCATTCCAA ACTCGTTCAT GGGATCATAA ATATCAACAC ATTTACGCGC 60 CACTCCTCTA TGGTATTTAC ACACTCAAAT ATCGTACTCA AGATTGGGAA GCTTTTGTAA 120 AGGATGGTAA AAATGGTGCA ATTCGTGTTA GTGTCGCCAC AAATTTCGAT AAGGCCGCTT 180 ACGTCATTGG TAAATTGTCT TTTGTTTTCT TCCGTTTCAT CCTTCCACTC CGTTATCATA 240 GCTTTACAGA TTTAATTTGT TATTTCCTCA TTGCTGAATT CGTCTTTGGT TGGTATCTCA 300 CAATTAATTT CCAAGTTAGT CATGTCGCTG AAGATCTCAA ATTCTTTGCT ACCCCTGAAA 360 GACCAGATGA ACCATCTCAA ATCAATGAAG ATTGGGCAAT CCTTCAACTT AAAACTACTC 420 AAGATTATGG TCATGGTTCA CTCCTTTGTA CCTTTTTTAG TGGTTCTTTA AATCATCAAG 480 TTGTTCATCA TTTATTCCCA TCAATTGCTC AAGATTTCTA CCCACAACTT GTACCAATTG 540 TAAAAGAAGT TTGTAAAGAA CATAACATTA CTTACCACAT TAAACCAAAC TTCACTGAAG 600 CTATTATGTC ACACATTAAT TACCTTTACA AAATGGGTAA TGATCCAGAT TATGTTAAAA 660 AACCATTAGC CTCAAAAGAT GATTAAATGA AATAACTTAA AAACCAATTA TTTACTTTTG 720 ACAAACAGTA ATATTAATAA ATACAA 746 (2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 46: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 227 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: no relevante (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 46 Tyr Val Thr Pro Phe Gln Thr Arg Ser Trp Tyr His Lys Tyr Gln 1 5 10 15 His He Tyr Ala Pro Leu Leu Tyr Gly He Tyr Thr Leu Lys Tyr 20 25 30 Arg Thr Gln Asp Trp Glu Ala Phe Val Lys Asp Gly Lys Asn Gly 35 40 45 Ala He Arg Val Ser Val Ala Thr Asn Phe Asp Lys Ala Ala Tyr 50 55 60 Val He Gly Lys Leu Ser Phe Val Phe Phe Arg Phe He Leu Pro 65 70 75 Leu Arg Tyr His Ser Phe Thr Asp Leu He Cys Tyr Phe Leu He 80 85 90 Ala Glu Phe Val Phe Gly Trp Tyr Leu Thr He Asn Phe Gln Val 95 100 105 Ser His Val Ala Glu Asp Leu Lys Phe Phe Ala Thr Pro Glu Arg 110 115 120 Pro Asp Glu Pro Ser Gln He Asn Glu Asp Trp Ala He Leu Gln 125 130 135 Leu Lys Thr Thr Gln Asp Tyr Gly His Gly Ser Leu Leu Cys Thr 140 145 150 Phe Phe Ser Gly Ser Leu Asn His Gln Val Val His His Leu Phe 155 160 165 Pro Ser He Ala Gln Asp Phe Tyr Pro Gln Leu Val Pro He Val 170 175 180 Lys Glu Val Cys Lys Glu His Asn He Thr Tyr His He Lys Pro 185 190 195 Asn Phe Thr Glu Ala He Met Ser His He Asn Tyr Leu Tyr Lys 200 205 210 Met Gly Asn Asp Pro Asp Tyr Val Lys Lys Pro Leu Ala Ser Lys 215 220 225 Asp Asp Xaa \ 2 ) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 47 (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 494 ácidos nucleicos (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: no relevante (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ácido nucleico (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 47 TTTTGGAAGG NTCCAAGTTN ACCACGGANT NGGCAAGTTN ACGGGGCGGA AANCGGTTTT 60 CCCCCCAAGC CTTTTGTCGA CTGGTTCTGT GGTGGCTTCC AGTACCAAGT CGACCACCAC 120 TTATTCCCCA GCCTGCCCCG ACACAATCTG GCCAAGACAC ACGCACTGGT CGAATCGTTC 180 TGCAAGGAGT GGGGTGTCCA GTACCACGAA GCCGACCTCG TGGACGGGAC CATGGAAGTC 240 TTGCACCATT TGGGCAGCGT GGCCGGCGAA TTCGTCGTGG ATTTTGTACG CGACGGACCC 300 GCCATGTAAT CGTCGTTCGT GACGATGCAA GGGTTCACGC ACATCTACAC ACACTCACTC 360 ACACAACTAG TGTAACTCGT ATAGAATTCG GTGTCGACCT GGACCTTGTT TGACTGGTTG 420 GGGATAGGGT AGGTAGGCGG ACGCGTGGGT CGNCCCCGGG AATTCTGTGA CCGGTACCTG - 480 GCCCGCGTNA AAGT 494 (2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 48: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 87 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido ( C) TIPO DE CADENA : no relevante (D) TOPOLOGÍA : l ineal ( ii ) TIPO DE MOLÉCULA : péptido (xi ) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA : SEQ ID NO : 48 : Phe Trp Lys Xaa Pro Ser Xaa Pro Arg Xaa Xaa Gln Val Xaa Gly 1 5 10 15 Ala Glu Xaa Gly Phe Pro Pro Lys Pro Phe Val Asp Trp Phe Cys 20 25 30 Gly Gly Phe Gln Tyr Gln Val Asp His His Leu Phe Pro Ser Leu 35 40 45 Pro Arg His Asn Leu Ala Lys Thr His Ala Leu Val Glu Ser Phe 50 55 60 Cys Lys Glu Trp Gly Val Gln Tyr His Glu Ala Asp Leu Val Asp 65 70 75 Glv Thr Met Glu Val Leu His His Leu Gly Ser Val Ala Gly Glu 65 70 75 Phe Val Val Asp Phe Val Arg Asp Gly Pro Ala Met 80 85 (2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:49: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 520 ácidos nucleicos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: no relevante (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ácido nucleico (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 49: GGATGGAGTT CGTCTGGATC GCTGTGCGCT ACGCGACGTG GTTTAAGCGT CATGGGTGCG 60 CTTGGGTACA CGCCGGGGCA GTCGTTGGGC ATGTACTTGT GCGCCTTTGG TCTCGGCTGC 120 ATTTACATTT TTCTGCAGTT CGCCGTAAGT CACACCCATT TGCCCGTGAG CAACCCGGAG 180 GATCAGCTGC ATTGGCTCGA GTACGCGCGG ACCACACTGT GAACATCAGC ACCAAGTCGT 240 GGTTTGTCAC ATGGTGGATG TCGAACCTCA ACTTTCAGAT CGAGCACCAC CTTTTCCCCA 300 CGGCGCCCCA GTTCCGTTTC AAGGAGATCA GCCCGCGCGT CGAGGCCCTC TTCAAGCGCC 360 ACGGTCTCCC TTACTACGAC ATGCCCTACA CGAGCGCCGT CTCCACCACC TTTGCCAACC 420 TCTACTCCGT CGGCCATTCC GTCGGCGACG CCAAGCGCGA CTAGCCTCTT TTCCTAGACC 480 TTAATTCCCC ACCCCACCCC ATGTTCTGTC TTCCTCCCGC 520 (2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 50: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 153 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: no relevante (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 50: Met Glu Phe Val Trp He Ala Val Arg Tyr Ala Thr Trp Phe Lys 1 5 10 15 Arg His Gly Cys Ala Trp Val His Ala Gly Ala Val Val Gly His 20 25 30 Val Leu Val Arg Leu Trp Ser Arg Leu His Leu His Phe Ser Ala 35 40 45 Val Arg Arg Lys Ser His Pro Phe Ala Arg Glu Gln Pro Gly Gly 50 55 60 Ser Ala Ala Leu Ala Arg Val Arg Ala Asp His Thr Val Asn He 65 70 75 Ser Thr Lys Ser Trp Phe Val Thr Trp Trp Met Ser Asn Leu Asn 80 85 90 Phe Gln He Glu His His Leu Phe Pro Thr Ala Pro Gln Phe Arg 95 100 105 Phe Lys Glu He Ser Pro Arg Val Glu Ala Leu Phe Lys Arg His 110 115 120 Gly Leu Pro Tyr Tyr Asp Met Pro Tyr Thr Ser Ala Val Ser Thr 125 130 135 Thr Phe Ala Asn Leu Tyr Ser Val Gly His Ser Val Gly Asp Ala 140 145 150 Lys Arg Asp (2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 51: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 429 ácidos nucleicos (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: no relevante (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ácido nucleico (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 51 ACGCGTCCGC CCACGCGTCC GCCGCGAGCA ACTCATCAAG GAAGGCTACT TTGACCCCTC 60 GCTCCCGCAC ATGACGTACC GCGTGGTCGA GATTGTTGTT CTCTTCGTGC TTTCCTTTTG 120 GCTGATGGGT CAGTCTTCAC CCCTCGCGCT CGCTCTCGGC ATTGTCGTCA GCGGCATCTC 180 TCAGGGTCGC TGCGGCTGGG TAATGCATGA GATGGGCCAT GGGTCGTTCA CTGGTGTCAT 240 TTGGCTTGAC GACCGGTTGT GCGAGTTCTT TTACGGCGTT GGTTGTGGCA TGAGCGGTCA 300 TTACTGGAAA AACCAGCACA GCAAACACCA CGCAGCGCCA AACCGGCTCG AGCACGATGT 360 AGATCTCAAC ACCTTGCCAT TGGTGGCCTT CAACGAGCGC GTCGTGCGCA AGGTCCGACC 420 (2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 52 (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 125 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: no relevante (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 52 Arg Val Arg Pro Arg Val Arg Arg Glu Gln Leu He Lys Glu Gly 1 5 10 15 Tyr Phe Asp Pro Ser Leu Pro His Met Thr Tyr Arg Val Val Glu 20 25 30 He Val Val Leu Phe Val Leu Ser Phe Trp Leu Met Gly Gln Ser 35 40 45 Ser Pro Leu Ala Leu ?la Leu Gly He Val Val Ser Gly He Ser 50 55 60 Gln Gly Arg Cys Gly Trp Val Met His Glu Met Gly His Gly Ser 65 70 75 Phe Thr Gly Val He Trp Leu Asp Asp Arg Leu Cys Glu Phe Phe 65 70 75 Tyr Gly Val Gly Cys Gly Met Ser Gly His Tyr Trp Lys Asn Gln 80 85 90 His Ser Lys His His Ala Ala Pro Asn Arg Leu Glu His Asp Val 95 100 105 Asp Leu Asn Thr Leu Pro Leu Val Ala Phe Asn Glu Arg Val Val 110 115 120 Arg Lys Val Arg Pro 125