JP4780916B2 - デサチュラーゼ遺伝子、前記遺伝子によりコードされる酵素及びその使用 - Google Patents
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Description
18:1n−9=オレイン酸=OA
18:2n−6=リノール酸=LA
18:3n−6=γ−リノレン酸=GLA
18:3n−3=α−リノレン酸=ALA
18:4n−3=ステアリドン酸=STA
20:3n−6=ジホモ−γ−リノレン酸=DGLA
20:4n−6=アラキドン酸=AA
20:4n−3=エイコサテトラエン酸=ETA
20:5n−3=エイコサペンタエン酸=EPA
22:4n−6=アドレン酸
22:5n−3=ω3−ドコサペンタエン酸=DPA
22:6n−3=ドコサヘキサエン酸=DHA
PUFA=ポリ不飽和脂肪酸。
本発明のω3−デサチュラーゼ及びΔ12−デサチュラーゼ遺伝子によりコードされる酵素は少なくとも2個の不飽和と炭素数18以上の全長をもつPUFAの生産に不可欠である。単離したSaprolegnia diclina ω3−デサチュラーゼ遺伝子のヌクレオチド配列を配列番号25と図2に示す。この遺伝子は任意起源の全公知デサチュラーゼ遺伝子と配列が有意に相違する。コードされるω3−デサチュラーゼ酵素を配列番号26と図3に示す。単離したSaprolegnia diclina Δ12−デサチュラーゼ遺伝子のヌクレオチド配列を配列番号41と図6に示す。この遺伝子は任意起源の全公知デサチュラーゼ遺伝子と配列が有意に相違する。コードされるΔ12−デサチュラーゼ酵素を配列番号42と図76に示す。
本発明はΔ12位でPUFAを不飽和化し、上記ヌクレオチド配列によりコードされる配列番号42(図7)に示すアミノ酸配列に対して少なくとも約50%、好ましくは少なくとも約60%、より好ましくは少なくとも約70%、更に好ましくは少なくとも約80%、最も好ましくは少なくとも約90%のアミノ酸類似度又は一致度をもつ精製ポリペプチドにも関する。(50〜100%の全整数の類似度又は一致度も本発明の範囲に含む。)
「一致度」なる用語は特定の比較窓又はセグメントにおける2種の配列のヌクレオチド毎のベースでの関連度を指す。即ち、一致度とは2種のDNAセグメントの同一鎖(センス又はアンチセンス)間の同一、対応又は等価度として定義される。「配列一致度百分率」は2種の最適に整列させた配列を特定領域にわたって比較し、両者配列で塩基が一致する位置の数を測定してマッチする位置の数を求め、このような位置数を比較するセグメントの合計位置数で割って、その結果に100を掛けることにより計算される。最適配列整列はSmith & Waterman,Appl.Math.2:482(1981)のアルゴリズム、Needleman & Wunsch,J.Mol.Biol.48:443(1970)のアルゴリズム、Pearson & Lipman,Proc.Natl.Acad.Sci(USA)85:2444(1988)の方法及び関連アルゴリズムを実行するコンピュータープログラム(例えばClustal Macaw Pileup(http://cmgm.stanford.edu/biochem218/11Multiple.pdf;Higginsら,CABIOS.5L151−153(1989))、FASTDB(Intelligenetics)、BLAST(National Center for Biomedical Information;Altschulら,Nucleic Acids Research 25:3389−3402(1997))、PILEUP(Genetics Computer Group,Madison,WI)又はGAP、BESTFIT、FASTA及びTFASTA(Wisconsin Genetics Software Package Release 7.0,Genetics Computer Group,Madison,WI)により実施することができる。(米国特許第5,912,120号参照。)
本発明の趣旨では、「相補性」とは2種のDNAセグメント間の関連度として定義される。これは一方のDNAセグメントのセンス鎖が他方のDNAセグメントのアンチセンス鎖と適当な条件下でハイブリダイズして二重螺旋を形成する能力を測定することにより決定される。「相補鎖」とは規範的な塩基対合原理に基づいて所定配列と対合する配列として定義される。例えば、一方のヌクレオチド鎖の配列A−G−Tは他方の鎖のT−C−Aに「相補的」である。
「外来」遺伝子とは宿主生物に通常見い出されないが、遺伝子導入により宿主生物に導入される遺伝子を指す。外来遺伝子は非天然生物又はキメラ構築物に挿入された天然遺伝子を含むことができる。「トランスジーン」とは形質転換法によりゲノムに導入された遺伝子である。
ω3及びΔ12デサチュラーゼ酵素をコードする遺伝子を一旦単離したら、その後、ベクター又は構築物を使用することにより(個々に又は組合せて)原核又は真核宿主細胞に導入することができる。ベクター(例えばバクテリオファージ、コスミド又はプラスミド)はデサチュラーゼ酵素の一方又は両方をコードするヌクレオチド配列と、宿主細胞で機能的であり且つヌクレオチド配列によりコードされるデサチュラーゼの発現を誘導することが可能な任意プロモーターを含むことができる。プロモーターはヌクレオチド配列に機能的に連関又は機能的に連結している。(上述のように、調節配列(例えばプロモーター)がコーディング配列の転写又は発現に作用する場合にこの調節配列はコーディング配列に「機能的に連結している」と言う。)プロモーター(又は他の型の調節配列)はコーディング配列に直接連結している必要はない。適切なプロモーターとしては例えばアルコールデヒドロゲナーゼ、グリセルアルデヒド−3−リン酸デヒドロゲナーゼ、ホスホグルコイソメラーゼ、ホスホグリセレートキナーゼ、酸ホスファターゼ、T7、TPI、ラクターゼ、メタロチオネイン、サイトメロガロウイルス極初期、ホエイ酸蛋白質、グルコアミラーゼをコードする遺伝子に由来するプロモーターや、ガラクトースの存在下に活性化されるプロモーター(例えばGAL1及びGAL10)が挙げられる。更に、他の蛋白質、オリゴ糖、脂質等をコードするヌクレオチド配列や、ポリアデニル化シグナル(例えばSV−40T−抗原、オボアルブミン又はウシ成長ホルモンのポリAシグナル)、抗生物質耐性マーカー、栄養素要求マーカー等の他の調節配列もベクターに加えてもよい。構築物に加える配列の選択は所望発現産物、宿主細胞の種類、及び非形質転換細胞から形質転換細胞を分離するために提案される手段に依存する。
適切な原核宿主細胞の例としては例えば大腸菌、枯草菌及びシアノバクテリア(例えばSpirulina種、即ち藍藻)等の細菌類が挙げられる。適切な真核宿主細胞の例としては例えば哺乳動物細胞、植物細胞、酵母細胞(例えばSaccharomyces cerevisiae、Saccharomyces carlsbergensis、Lipomyces starkey、Candida種(例えばYarrowia(Candida) lipolytica)、Kluyveromyces種、Pichia種、Trichoderma種又はHansenula種)、又は真菌細胞(例えば糸状菌細胞、例えばAspergillus、Neurospora及びPenicillium)が挙げられる。Saccharomyces cerevisiae(パン酵母)細胞を利用するのが好ましい。
上述のように、単離デサチュラーゼ遺伝子とこれらの遺伝子によりコードされるデサチュラーゼ酵素は多くの用途がある。例えば、遺伝子と対応する酵素は単独又は組合せて間接又は直接的にPUFAの生産に使用することができる。例えば、ω3−デサチュラーゼはETA、EPA、DPA、DHA等の生産に使用することができる。この関連で使用する場合、「直接」なる語は酵素が中間段階又は経路中間体を介さずに脂肪酸基質から所望脂肪酸産物への直接変換を触媒するために使用される状況(例えばAAからEPAへの変換)を含む。こうして得られた産物をその後、組成物で使用する。「間接」とは本発明のデサチュラーゼがデサチュラーゼにより脂肪酸基質から別の脂肪酸(即ち経路中間体)への変換(例えばAAからEPAへの変換)を触媒するために使用された後に、後者脂肪酸(EPA)が別のデサチュラーゼ又は非デサチュラーゼ酵素の使用によりに所望脂肪酸産物に変換(例えばエロンガーゼによるEPAからDPAへの変換)される状況を含む。これらのPUFA(即ち本発明のデサチュラーゼの活性により直接又は間接的に生産されたPUFA)は例えば栄養組成物、医薬組成物、化粧品及び動物飼料に添加することができ、これらのいずれも本発明に含まれる。このような使用について以下に詳述する。
本発明は栄養組成物を含む。本発明の趣旨では、このような組成物としては体内に取込まれると、(a)組織を滋養もしくは強化又はエネルギーを供給し、及び/又は(b)十分な栄養状態又は代謝機能を維持、回復又は補助するにように作用するヒト消費用(経腸的及び/又は非経腸的消費を含む)任意食品又は製剤が挙げられる。
本発明は本明細書に記載する方法によりデサチュラーゼ遺伝子を使用して生産された酸及び/又はその結果として得られる油の1種以上を含む医薬組成物も含む。具体的には、このような医薬組成物はPUFA及び/又は油の1種以上と医薬的に許容可能な標準周知非毒性キャリヤー、アジュバント又はビヒクル、例えばリン酸緩衝食塩水、水、エタノール、ポリオール、植物油、湿潤剤又はエマルション(例えば水/油エマルション)を含むことができる。組成物は液体形態でも固体形態でもよい。例えば、組成物は錠剤、カプセル剤、摂取可能液剤もしくは散剤、注射剤、又は局所軟膏もしくはクリームの形態とすることができる。例えば分散液の場合には必要粒度を維持し、界面活性剤を使用することにより適正な流動性を維持することができる。例えば糖類、塩化ナトリウム等の等張剤を加えると望ましい場合もある。このような不活性希釈剤以外に、湿潤剤、乳化懸濁剤、甘味料、調味料及び香料等のアジュバントを組成物に加えてもよい。
動物は要求及び条件の多くがヒトと同一であるので、上記医薬及び栄養組成物は動物(即ち哺乳動物、鳥類、爬虫類、トカゲ等を含む家畜又は非家畜)でもヒトと同様に利用できることに留意すべきである。例えば、本発明の油又は脂肪酸は動物飼料添加物、動物代用飼料、動物ビタミン又は動物局所軟膏に利用することができる。
機能的デサチュラーゼ酵素をコードする遺伝子を単離するために、cDNAライブラリーを構築した。Saprolegnia diclina培養物をジャガイモデキストロース培地(Difco #336,BD Diagnostic Systems,Sparks,Maryland)で室温にて4日間絶えず撹拌しながら増殖させた。チーズクロス数層で濾過することにより菌糸体を回収し、乳鉢乳棒を使用して液体窒素中で培養物を粉砕した。β−メルカプトエタノールを加えたRT緩衝液(Qiagen,Valencia,California)に細胞溶解液を再懸濁し、55℃で3分間インキュベートした。これらの溶解液を注射器で繰返し吸引するか又は「Qiashredder」(商品名)カラム(Qiagen)でホモジナイズした。「RNeasy Maxi」(商品名)キット(Qiagen)を製造業者のプロトコール通りに使用して全RNAを最終的に精製した。
実施例1に記載したSaprolegnia diclina cDNAライブラリーからの350個のランダムcDNAクローンの5’末端を配列決定した。GCGプログラム(Genetics Computer Group,Madison,Wisconsin)を「FastA」(商品名)アルゴリズムと併用して配列を6個の読み枠に翻訳し、クエリー配列と同一型の1群の配列の類似性を特にGenBankデータベース内で検索した。クローンの多くは公知遺伝子との蛋白質相同性により推定ハウスキーピング遺伝子として同定された。こうして8種のS.diclina cDNA配列を選択した。更に、全長S.diclina Δ5−デサチュラーゼ及びΔ6−デサチュラーゼ配列も使用した(下表1参照。)。次に、GCG市販「CodonFrequency」プログラムを使用することにより、これらの配列を使用して下表2に示すS.diclinaコドンバイアス表を作成した。
Saqprolegnia diclina等の真菌は図1に示すPUFA生合成経路を介してアラキドン酸(AA)やエイコサペンタエン酸(EPA)等の多様なPUFAを産生する。Saprolegnia diclina(ATCC56851)の脂肪酸組成を分析した処、合計脂質の15.42%がAAであり、合計脂質の12.2%がEPAであることが判明した(表5参照)。多量に存在する他の中間体はリノール酸(LA)だけであった。これはS.diclinaが非常に活性なΔ6及びΔ5−デサチュラーゼと共に、図1に示す経路を介して中間体にシャントするエロンガーゼももつことを示す。この生物ではEPAの百分率が高いので、AA(20:4n−6)をEPA(20:5n−3)に変換することが可能な活性なω3−デサチュラーゼ(基質がC18脂肪酸である場合には「Δ15」デサチュラーゼに同義であり、基質がC20脂肪酸である場合には「Δ17」デサチュラーゼに同義であり、基質がC22脂肪酸である場合には「Δ19」デサチュラーゼに同義である)が存在すると予想される。
蛋白質モチーフ1:NH3−TRAAIPKHCWVK−COOH
プライマーRO1144(フォワード):5’−ATC CGC GCC GCC ATC CCC AAG CAC TGC TGG GTC AAG−3’(配列番号1)。
蛋白質モチーフ2:NH3−ALFVLGHDCGHGSFS−COOH
このプライマーはヒスチジンボックス1(下線部)を含む。
プライマーRO1119(フォワード):5’−GCC CTC TTC GTC CTC GGC CAY GAC TGC GGC CAY GGC TCG TTC TCG−3’(配列番号2)。
プライマーRO1118(リバース):5’−GAG RTG GTA RTG GGG GAT CTG GGG GAA GAR RTG RTG GRY GAC RTG−3’(配列番号3)。
蛋白質モチーフ3:NH3−PYHGWRISHRTHHQN−COOH
このプライマーはヒスチジンボックス2(下線部)を含む。
プライマーRO1121(フォワード):5’−CCC TAC CAY GGC TGG CGC ATC TCG CAY CGC ACC CAY CAY CAG AAC−3’(配列番号4)。
プライマーRO1122(リバース):5’−GTT CTG RTG RTG GGT CCG RTG CGA GAT GCG CCA GCC RTG GTA GGG−3’(配列番号5)。
蛋白質モチーフ4:NH3−GSHF D/H P D/Y SDLFV−COOH
プライマーRO1146(フォワード):5’−GGC TCG CAC TTC SAC CCC KAC TCG GAC CTC TTC GTC−3’(配列番号6)。
プライマーRO1147(リバース):5’−GAC GAA GAG GTC CGA GTM GGG GTW GAA GTG CGA GCC−3’(配列番号7)。
蛋白質モチーフ5:NH3−WS Y/F L/V RGGLTT L/I DR−COOH
プライマーRO1148(リバース):5’−GCG CTG GAK GGT GGT GAG GCC GCC GCG GAW GSA CGA CCA−3’(配列番号8)。
蛋白質モチーフ6:NH3−HHDIGTHVIHHLFPQ−COOH
この配列は第3のヒスチジンボックス(下線部)を含む。
プライマーRO1114(リバース):5’−CTG GGG GAA GAG RTG RTG GAT GAC RTG GGT GCC GAT GTC RTG RTG−3’(配列番号9)。
蛋白質モチーフ7:NH3−H L/F FP Q/K IPHYHL V/I EAT−COOH
プライマーRO1116(リバース):5’−GGT GGC CTC GAY GAG RTG GTA RTG GGG GAT CTK GGG GAA GAR RTG−3’(配列番号10)。
蛋白質モチーフ8:NH3−HV A/I HH L/F FPQIPHYHL−COOH
このプライマーは第3のヒスチジンボックス(下線部)を含み、植物ω3−デサチュラーゼとC.elegans ω3−デサチュラーゼとの相違を説明するものである。
プライマーRO1118(リバース):5’−GAG RTG GTA RTG GGG GAT CTG GGG GAA GAR RTG RTG GRY GAC RTG−3’(配列番号11)。
(実施例1からの)S.diclina cDNAライブラリープラスミドDNA又はS.diclinaゲノムDNAを鋳型として使用し、実施例3に開示した縮重プライマーの各種セットをPCR増幅反応で使用した。種々の異なるDNAポリメラーゼと反応条件もPCR増幅に使用した。これらの反応には「Platinum Taq」(商品名)DNAポリメラーゼ(Life Technologies Inc.,Rockville,Maryland)、又はcDNAポリメラーゼ(Clonetech,Palo Alto,California)、又はTaq PCR−mix(Qiagen)を異なるアニール温度で使用した。
1.Synechocystis種由来ω3(Δ15)−デサチュラーゼ(Accession #D13780)と161アミノ酸オーバーラップで一致度37.9%。
2.Picea abies色素体ω3−デサチュラーゼ(Accession #AJ302017)と113アミノ酸オーバーラップで一致度40.7%。
3.Zea mays FAD8脂肪酸デサチュラーゼ(Accession #D63953)と128アミノ酸オーバーラップで一致度35.9%。
これらのプライマー(配列番号12〜15)をpBluescript SK(+)ベクターオリゴヌクレオチド:RO898:5’−CCC AGT CAC GAC GTT GTA AAA CGA CGG CCA G−3’(配列番号16)と併用した。
RO899:5’−AGC GGA TAA CAA TTT CAC ACA GGA AAC AGC−3’(配列番号17)。
RO1185(リバース):5’−GGT AAA AGA TCT CGT CCT TGT CGA TGT TGC−3’(配列番号18)。
RO1186(リバース):5’−GTC AAA GTG GCT CAT CGT GC−3’(配列番号19)。
RO1187(リバース):5’−CGA GCG AGT ACG TGA GGT ACG CGT AC−3’(配列番号20)。
SDD17蛋白質により触媒される反応の基質特異性と分類を決定するために、sdd17をSaccharomyces cerevisiae(SC334)で異種発現させた。S.cerevisiaeはOA(18:1n−9)よりも脂肪酸を合成することができないため、バックグラウンド酵素活性が検出されないので、OAよりも長い基質に及ぼす酵素活性を測定するために使用するのに理想的なシステムである。適切な脂肪酸基質を外部から宿主に供給し、細胞に取込ませ、形質転換sdd17遺伝子の発現された蛋白質に作用させることができる。
変換率%=[産物%]/[産物%+基質%]X100
実施例3に記載したようにpYES2酵母発現ベクターにクローニングしたsdd17から構成されるpRSP20構築物を他のデサチュラーゼ及びエロンガーゼとの同時発現試験に使用した。pYX242酵母発現ベクターにクローニングしたS.diclina由来Δ5−デサチュラーゼ遺伝子(配列番号27)を含む構築物であるpRSP3を酵母にpRSP20と同時形質転換した。形質転換プロトコールは実施例4に記載した通りとした。このΔ5−デサチュラーゼはDGLAからAAへ、及びETAからEPAへの変換を触媒する。ロイシンとウラシルを欠損する最小培地(DOB[−Leu−Ura])で同時形質転換細胞を選択した。
Saprolegnia diclina(ATCC56851)の脂肪酸組成の分析によると、相当量のLAの存在が判明し、非常に活性なΔ12−デサチュラーゼの存在が示唆された(表5)。Δ12−デサチュラーゼはOAを基質として使用し、OAからLAへの変換を触媒する(図1参照)。Δ12−デサチュラーゼは植物、真菌及び昆虫のみに存在し、ヒトを含む哺乳動物には存在しない。従って、LAはin vivo合成できないのでヒトにおける「必須」脂肪酸である。LAを更に不飽和化及び伸長すると、GLA、AA、及びEPA等の重要な細胞内化合物が生産される。
蛋白質モチーフ1:NH3−P N/E FTIKEIR D/E A/C IPAHCF−COOH
プライマーRO967(フォワード):5’−CCG SAG TTC ACS ATC AAG GAG ATC CGC GAS KSC ATC CCG GCC CAC TGC TTC−3’(配列番号30)。
蛋白質モチーフ2:NH3−MP H/F YHAEEAT V/Y H I/L KK A/L−COOH
プライマーRO968(リバース):5’−GRS CTT CTT GAK GTG GWM SGT GGC CTC CTC GGC GTG GTA GWR CGG CAT−3’(配列番号31)。
蛋白質モチーフ3:NH3−P L/V YW A/I C/M/A QG V/I V L/G/C TGVW−COOH
プライマーRO964(フォワード):5’−CCS STC TAC TGG GCC TGC CAG GGT RTC GTC CTC ACS GGT GTC TGG−3’(配列番号32)。
プライマーRO965(フォワード):5’−CCS STC TAC TGG ATC RYS CAG GGT RTC GTC KGY ACS GGT GTC TGG−3’(配列番号33)。
蛋白質モチーフ4:NH3−HVAHH L/F FS T/Q MPHYHA−COOH
プライマーRO966(リバース):5’−GGC GTG GTA GTG CGG CAT SMM CGA GAA GAR GTG GTG GGC GAC GTG−3’(配列番号34)
オリゴヌクレオチドに使用した縮重コードはR=A/G;Y=C/T;M=A/C;K=G/T;W=A/T;S=C/G ;B=C/G/T;D=A/G/T;H=A/C/T;V=A/C/G;N=A/C/G/Tである。
S.diclinaからΔ12−デサチュラーゼ遺伝子のフラグメントを単離するために、実施例1からのS.diclina cDNAライブラリーを鋳型として使用してPCRを遂行した。プライマーは(RO964+RO966)、(RO965+RO966)、及び(RO967+RO968)の組合せで使用した。「Taq PCR Master Mix」(商品名)ポリメラーゼ(Qiagen)を使用して100μl容量中でPCRを実施した。各プライマー10pmolをcDNAライブラリーDNA1μlと併用した。増幅は次のように実施した。94℃で4分間の初期変性後に94℃で1分間、47℃で1分間、72℃で2分間を25サイクル実施した。72℃で5分間の最終伸長サイクルを実施した後に4℃で反応を終了した。
このΔ12−デサチュラーゼ(SDD12)により触媒される反応の基質特異性と分類を決定するために、sdd12をSaccharomyces cerevisiae(SC334)で異種発現させた。上述のように、S.cerevisiaeはOAを越える脂肪酸を合成することができないため、バックグラウンド酵素活性が検出されないので、OAよりも長い基質に及ぼす酵素活性を測定するために、それは理想的なシステムである。適切な脂肪酸基質を外部から宿主に供給し、これらの基質を細胞に取込ませ、形質転換sdd12遺伝子の発現したΔ12−デサチュラーゼに作用させることができる。
変換率%=[産物%]/[産物%+基質%]X100
表7は酵母で発現させた場合のΔ12−デサチュラーゼの酵素活性を示す。ここでは、発現させた場合のpRSP11クローンはOA基質の35.8%をLAに変換することができ、Δ12−デサチュラーゼ活性を示した。
詳細な説明に記載したPUFAは種々の栄養補給剤、乳児用調製物、代用栄養剤及び他の栄養溶液で利用することができる。
A.Isomil(登録商標)鉄分配合調製豆乳:
用途:牛乳アレルギー又は過敏症の乳児、幼児及び成人用飲料。乳糖を避けなければならない疾患(ラクターゼ欠損症、乳糖不耐症及びガラクトース血症)の患者への栄養補給。
−牛乳蛋白アレルギー又は過敏症の症状を避けるために大豆蛋白単離物を使用。
−乳糖に関連する下痢を避けるために無乳糖処方とした。
−浸透圧性下痢の危険を減らすために低浸透圧(240mOs/kg水)とした。
−炭水化物吸収を増進すると共に、損傷した消化管の吸収能を越える危険を減らすために複合炭水化物(コーンシロップと蔗糖)を使用。
−鉄欠乏症の予防を助長するために100カロリー当たり1.8mgの鉄(硫酸第一鉄として)を配合。
−推奨値のビタミンとミネラルを配合。
−推奨値の必須脂肪酸を提供するために植物油を配合。
−乳白色、乳状コンシステンシー及びよい香り。
用途:乳幼児の下痢の食物管理用短期摂取食。
−特に下痢管理用として大豆繊維からの食物繊維を加えた最初の乳児用調製乳である。
−乳児の軽度から重度の下痢期間に水状軟便期間を短くすることが臨床的に判明した。
−乳児の栄養要件を満足するように栄養学的に完全である。
−L−メチオニンを添加した大豆蛋白単離物は乳児の全必須アミノ酸の必要値を満足するか又はこれを上回る。
−乳糖に関連する下痢を避けるために無乳糖処方とした。
−浸透圧性下痢の危険を減らすために低浸透圧(240mOs/kg水)とした。
−炭水化物吸収を増進すると共に、損傷した消化管の吸収能を越える危険を減らすために複合炭水化物(コーンシロップと蔗糖)を使用。
−米国小児科学会栄養委員会により推奨され、乳児用調製乳法に規定されるビタミン及びミネラル値を満足するか又はこれを上回る。
−鉄欠乏症の予防を助長するために100カロリー当たり1.8mgの鉄(硫酸第一鉄として)を配合。
−推奨値の必須脂肪酸を提供するために植物油を配合。
用途:牛乳蛋白アレルギーもしくは過敏症又は蔗糖不耐の乳児、幼児及び成人用飲料。乳糖と蔗糖を避けなければならない疾患の患者への栄養補給。
−牛乳蛋白アレルギー又は過敏症の症状を避けるために大豆蛋白単離物を使用。
−乳糖に関連する下痢を避けるために無乳糖処方とした(炭水化物源はPolycose(登録商標)グルコースポリマーである)。
−蔗糖不耐患者のために無蔗糖とした。
−浸透圧性下痢の危険を減らすために低浸透圧(180mOs/kg水)とした。
−鉄欠乏症の予防を助長するために100カロリー当たり1.8mgの鉄(硫酸第一鉄として)を配合。
−推奨値のビタミンとミネラルを配合。
−推奨値の必須脂肪酸を提供するために植物油を配合。
−乳白色、乳状コンシステンシー及びよい香り。
用途:大豆摂取を必要とする場合。
用途:乳児用調製物を必要とする場合:1歳未満で授乳の中断を決定した場合、授乳の補完が必要な場合、又は授乳を採用しない際の日常食として。
−良好な成長に適した品質と量の蛋白質を配合すると共に、熱変性により乳関連腸内失血の危険を減らした。
−(二重均質化)植物油ブレンドに由来する脂肪を使用し、吸収し易い必須リノール酸を提供する。
−ヒト母乳に似た割合で乳糖として炭水化物を配合した。
−成長中の臓器へのストレスを最小限にするために低腎溶質負荷とした。
−粉末、濃厚液及び即製形態。
用途:退院後の未熟児の特殊栄養要件を満たす。Similac NeoCareは成長の遅れを取り戻し、発育を助けるために必要な付加熱量、蛋白質、ビタミン及びミネラルを提供するために開発された栄養学的に完全な処方である。
−熱量とビタミン補給の必要を減らす。標準処方(20Cal/液量オンス)よりも高熱量(22Cal/液量オンス)。
−未熟児の特殊消化要件を満足し易くするために中鎖トリグリセリド(MCToil)を加えた高吸収脂肪ブレンドを配合。
−入院中に開始した栄養補給を延長するためにより高レベルの100カロリー当たり蛋白質、ビタミン及びミネラルを配合。
−骨鉱化作用を改善するためにカルシウム及びリン量を高くした。
用途:ヒト母乳と混合するか又は出産時体重の少ない乳児にヒト母乳の代用として与える。
A.ENSURE(登録商標)
用途:ENSUREは経口栄養補給剤として食事と共にもしくは食間に使用するか又は代用食として適量を使用することを主目的とする低残渣液体食品である。ENSUREは無乳糖無グルテンであり、低コレステロール食を含む調整食に使用するのに適している。主に経口補給剤であるが、経管供給することもできる。
−調整食摂取患者。
−危険な栄養状態にある高齢患者。
−不随意体重減少患者。
−病気又は手術から回復中の患者。
−低残渣食が必要な患者。
用途:ENSURE BARSは食間又は食事と共に補充する完全にバランスのとれた補助栄養である。他のスナック菓子に代用する美味しく栄養分の高い代用食である。ENSURE BARSは1本当たり乳糖含有量が<1gであり、チョコレートファッジブラウニーフレーバーは無グルテンである。(ハニーグラハムクランチフレーバーはグルテンを含む。)
患者状態:
−付加熱量、蛋白、ビタミン及びミネラルを必要とする患者。
−十分な熱量と栄養を取込めない者に特に有用である。
−噛む能力と飲込む能力のある者。
−落花生アレルギー又は任意型のナッツアレルギーのある者には使用できない。
大豆蛋白単離物 74%
乳蛋白 26%。
部分加水分解綿実油及び大豆油 76%
キャノーラ油 8%
高オレイン酸サフラワー油 8%
コーン油 4%
大豆レシチン 4%。
高果糖コーンシロップ 24%
ブラウンシュガー 21%
マルトデキストリン 12%
蜂蜜 11%
クリスプライス 9%
グリセリン 9%
大豆多糖 7%
オート麦ぬか 7%。
用途:ENSURE HIGH PROTEINは食事に付加熱量、蛋白、ビタミン及びミネラルを必要とする者のための濃縮高蛋白液体食品である。経口栄養補給剤として食事と共にもしくは食間に使用するか又は代用食として適量を使用することができる。ENSURE HIGH PROTEINは無乳糖無グルテンであり、一般外科手術又は股関節骨折から回復中の者や、圧迫潰瘍の危険のある患者が使用するのに適している。
−付加熱量、蛋白、ビタミン及びミネラルを必要とする患者、例えば一般外科手術又は股関節骨折から回復中の者、圧迫潰瘍の危険のある患者及び低コレステロール食患者。
−低飽和脂肪。
−1回分当たり総脂肪6g、コレステロール<5mgを含有。
−濃厚でクリーミーな食感。
−優良な蛋白、カルシウム並びに他の必須ビタミン及びミネラル源。
−低コレステロール食用。
−無乳糖で消化し易い。
バニラシュプリーム:−D水、糖質(蔗糖)、マルトデキストリン(トウモロコシ)、カゼイン酸カルシウム及びナトリウム、高オレイン酸サフラワー油、大豆蛋白単離物、大豆油、キャノーラ油、クエン酸カリウム、第三リン酸カルシウム、クエン酸ナトリウム、塩化マグネシウム、第二リン酸マグネシウム、人工フレーバー、塩化ナトリウム、大豆レシチン、塩化コリン、アスコルビン酸、カラゲナン、硫酸亜鉛、硫酸第一鉄、酢酸α−トコフェリル、ゲランガム、ナイアシンアミド、パントテン酸カルシウム、硫酸マンガン、硫酸第二銅、パルミチン酸ビタミンA、塩酸チアミン、塩酸ピリドキシン、リボフラビン、葉酸、モリブデン酸ナトリウム、塩化クロム、ビオチン、ヨウ化カリウム、セレン酸ナトリウム、フィロキノン、ビタミンD3及びシアノコバラミン。
カゼイン酸ナトリウム及びカルシウム 85%
大豆蛋白単離物 15%。
高オレイン酸サフラワー油 40%
キャノーラ油 30%
大豆油 30%。
蔗糖 60%
マルトデキストリン 40%。
蔗糖 70%
マルトデキストリン 30%。
用途:ENSURE LIGHTは経口栄養補給剤として食事と共にもしくは食間に使用することを目的とする低脂肪液体食品である。ENSURE LIGHTは無乳糖無グルテンであり、低コレステロール食を含む調整食に使用するのに適している。
−ENSUREよりも脂肪が50%少なく、熱量が20%少ない補給剤で付加栄養を必要とする正常体重又は超過体重患者。
−食事が適正ではなく、付加栄養を必要とする健康な成人。
−低脂肪及び低飽和脂肪。
−1回分当たり総脂肪3g、コレステロール<5mgを含有。
−濃厚でクリーミーな食感。
−優良なカルシウム並びに他の必須ビタミン及びミネラル源。
−低コレステロール食用。
−無乳糖で消化し易い。
フレンチバニラ:−D水、マルトデキストリン(トウモロコシ)、糖質(蔗糖)、カゼイン酸カルシウム、高オレイン酸サフラワー油、キャノーラ油、塩化マグネシウム、クエン酸ナトリウム、クエン酸カリウム、第二リン酸カリウム、第二リン酸マグネシウム、天然及び人工フレーバー、第三リン酸カルシウム、セルロースゲル、塩化コリン、大豆レシチン、カラゲナン、食塩(塩化ナトリウム)、アスコルビン酸、セルロースガム、硫酸第一鉄、酢酸α−トコフェリル、硫酸亜鉛、ナイアシンアミド、硫酸マンガン、パントテン酸カルシウム、硫酸第二銅、塩酸チアミン、パルミチン酸ビタミンA、塩酸ピリドキシン、リボフラビン、塩化クロム、葉酸、モリブデン酸ナトリウム、ビオチン、ヨウ化カリウム、セレン酸ナトリウム、フィロキノン、ビタミンD3及びシアノコバラミン。
カゼイン酸カルシウム 100%。
高オレイン酸サフラワー油 70%
キャノーラ油 30%。
蔗糖 51%
マルトデキストリン 49%。
蔗糖 47.0%
コーンシロップ 26.5%
マルトデキストリン 26.5%。
用途:ENSURE PLUSは通常蛋白濃度で付加熱量及び栄養を必要とする場合に使用する高熱量低残渣液体食品である。経口栄養補給剤として食事と共にもしくは食間に使用するか又は代用食として適量を使用することを主目的とする。ENSURE PLUSは無乳糖無グルテンである。主に経口栄養補給剤であるが、経管供給することもできる。
−量を制限しながら通常蛋白濃度で付加熱量及び栄養を必要とする患者。
−体重増加又は健康体重の維持を必要とする患者。
−濃厚でクリーミーな食感。
−良好な必須ビタミン及びミネラル源。
バニラ:−D水、コーンシロップ、マルトデキストリン(トウモロコシ)、コーン油、カゼイン酸ナトリウム及びカルシウム、糖質(蔗糖)、大豆蛋白単離物、塩化マグネシウム、クエン酸カリウム、第三リン酸カルシウム、大豆レシチン、天然及び人工フレーバー、クエン酸ナトリウム、塩化カリウム、塩化コリン、アスコルビン酸、カラゲナン、硫酸亜鉛、硫酸第一鉄、酢酸α−トコフェリル、ナイアシンアミド、パントテン酸カルシウム、硫酸マンガン、硫酸第二銅、塩酸チアミン、塩酸ピリドキシン、リボフラビン、パルミチン酸ビタミンA、葉酸、ビオチン、塩化クロム、モリブデン酸ナトリウム、ヨウ化カリウム、亜セレン酸ナトリウム、フィロキノン、シアノコバラミン及びビタミンD3。
カゼイン酸ナトリウム及びカルシウム 84%
大豆蛋白単離物 16%。
コーン油 100%。
コーンシロップ 39%
マルトデキストリン 38%
蔗糖 23%。
コーンシロップ 36%
マルトデキストリン 34%
蔗糖 30%。
用途:ENSURE PLUS HNは熱量及び蛋白必要値が高いか又は耐容量の低い者を対象とした栄養学的に完全な高熱量高窒素液体食品である。経口補充用として使用してもよいし、完全経管栄養補充用として使用してもよい。ENSURE PLUS HNは無乳糖無グルテンである。
−手術又は外傷後のように熱量及び蛋白必要値が高い患者。
−耐容量が低い早期満腹患者。
−補助又は完全栄養。
−経口又は経管供給。
−1.5CaVmL。
−高窒素。
−高熱量密度。
バニラ:−D水、マルトデキストリン(トウモロコシ)、カゼイン酸ナトリウム及びカルシウム、コーン油、糖質(蔗糖)、大豆蛋白単離物、塩化マグネシウム、クエン酸カリウム、第三リン酸カルシウム、大豆レシチン、天然及び人工フレーバー、クエン酸ナトリウム、塩化コリン、アスコルビン酸、タウリン、L−カルニチン、硫酸亜鉛、硫酸第一鉄、酢酸α−トコフェリル、ナイアシンアミド、カラゲナン、パントテン酸カルシウム、硫酸マンガン、硫酸第二銅、塩酸チアミン、塩酸ピリドキシン、リボフラビン、パルミチン酸ビタミンA、葉酸、ビオチン、塩化クロム、モリブデン酸ナトリウム、ヨウ化カリウム、亜セレン酸ナトリウム、フィロキノン、シアノコバラミン及びビタミンD3。
用途:ENSURE POWDER(水で再構成)は経口栄養補給剤として食事と共にもしくは食間に使用することを主目的とする低残渣液体食品である。ENSURE POWDERは無乳糖無グルテンであり、低コレステロール食を含む調整食に使用するのに適している。
−調整食摂取患者。
−危険な栄養状態にある高齢患者。
−病気/手術から回復中の患者。
−低残渣食が必要な患者。
−混合し易く簡便。
−低飽和脂肪。
−1回分当たり総脂肪9g、コレステロール<5mgを含有。
−高ビタミン及びミネラル。
−低コレステロール食用。
−無乳糖で消化し易い。
カゼイン酸ナトリウム及びカルシウム 84%
大豆蛋白単離物 16%。
コーン油 100%。
コーンシロップ 35%
マルトデキストリン 35%
蔗糖 30%。
用途:ENSURE PUDDINGは食事と共にもしくは食間に使用する非液体形態でバランスのとれた栄養を提供する濃厚栄養補給剤である。コンシステンシー調整食(例えば軟食、ピューレ又は全液)や、飲込み障害のある者に適している。ENSURE PUDDINGは無グルテンである。
−コンシステンシー調整食(例えば軟食、ピューレ又は全液)摂取患者。
−飲込み障害のある患者。
−濃厚でクリーミーな良好な食感。
−良好な必須ビタミン及びミネラル源。
−冷蔵不要で簡便。
−無グルテン。
バニラ:−D脱脂乳、水、糖質(蔗糖)、部分水素化大豆油、改質食物澱粉、硫酸マグネシウム、ラクチル酸ステアロイルナトリウム、第二リン酸ナトリウム、人工フレーバー、アスコルビン酸、硫酸亜鉛、硫酸第一鉄、酢酸α−トコフェリル、塩化コリン、ナイアシンアミド、硫酸マンガン、パントテン酸カルシウム、FD&Cイエロー#5、クエン酸カリウム、硫酸第二銅、パルミチン酸ビタミンA、塩酸チアミン、塩酸ピリドキシン、リボフラビン、FD&Cイエロー#6、葉酸、ビオチン、フィロキノン、ビタミンD3及びシアノコバラミン。
脱脂乳 100%。
水素化大豆油 100%。
蔗糖 56%
乳糖 27%
改質食物澱粉 17%。
蔗糖 58%
乳糖 26%
改質食物澱粉 16%。
用途:ENSURE WITH FIBERは強化食物繊維及び栄養を利用できる者を対象とした栄養学的に完全な繊維含有液体食品である。ENSURE WITH FIBERは低残渣食を必要としない者に適している。経口又は経管供給することができ、通常食の栄養補給剤として又は適量を代用食として使用することができる。ENSURE WITH FIBERは無乳糖無グルテンであり、低コレステロール食を含む調整食に使用するのに適している。
−強化食物繊維及び栄養を利用できる患者。
−低飽和脂肪、高ビタミン及びミネラルの新規改良処方。
−1回分当たり総脂肪6g、コレステロール<5mgを含有。
−濃厚でクリーミーな食感。
−良好な繊維源。
−優良な必須ビタミン及びミネラル源。
−低コレステロール食用。
−無乳糖無グルテン。
バニラ:−D水、マルトデキストリン(トウモロコシ)、糖質(蔗糖)、カゼイン酸ナトリウム及びカルシウム、オート麦繊維、高オレイン酸サフラワー油、キャノーラ油、大豆蛋白単離物、コーン油、大豆繊維、第三リン酸カルシウム、塩化マグネシウム、クエン酸カリウム、セルロースゲル、大豆レシチン、第二リン酸カリウム、クエン酸ナトリウム、天然及び人工フレーバー、塩化コリン、リン酸マグネシウム、アスコルビン酸、セルロースガム、塩化カリウム、カラゲナン、硫酸第一鉄、酢酸α−トコフェリル、硫酸亜鉛、ナイアシンアミド、硫酸マンガン、パントテン酸カルシウム、硫酸第二銅、パルミチン酸ビタミンA、塩酸チアミン、塩酸ピリドキシン、リボフラビン、葉酸、塩化クロム、ビオチン、モリブデン酸ナトリウム、ヨウ化カリウム、セレン酸ナトリウム、フィロキノン、ビタミンD3及びシアノコバラミン。
カゼイン酸ナトリウム及びカルシウム 80%
大豆蛋白単離物 20%。
高オレイン酸サフラワー油 40%
キャノーラ油 40%
コーン油 20%。
マルトデキストリン 66%
蔗糖 25%
オート麦繊維 7%
大豆繊維 2%。
マルトデキストリン 55%
蔗糖 36%
オート麦繊維 7%
大豆繊維 2%。
OxepaはARDS患者又はその危険のある患者の食事管理を目的とする低炭水化物高密度熱量経腸栄養製剤である。エイコサペンタエン酸(魚油由来EPA)、γ−リノレン酸(ルリヂサ油由来GLA)及び高レベル酸化防止剤を含有する特許付与された油ブレンドを含む特殊な成分組合せをもつ。
−Oxepaは8液量オンス缶当たり22.2g(93.7g/L)の脂肪を含有している。
−脂肪源はキャノーラ油31.8%、中鎖トリグリセリド(MCT)25%、ルリヂサ油20%、魚油20%、及び大豆レシチン3.2%からなる油ブレンドである。Oxepaの典型的な脂肪酸プロフィルを表Bに示す。
−Oxepaは表VIに示すようにバランスのとれた量のポリ不飽和脂肪酸、モノ不飽和脂肪酸及び飽和脂肪酸を提供する。
−脂肪ブレンドの25%に相当する中鎖トリグリセリド(MCT)は胆汁酸により乳化されずに腸管に吸収されるので胃を空にし易い。
−炭水化物含量は8液量オンス缶当たり25.0g(105.5g/L)である。
−炭水化物源はマルトデキストリン(複合炭水化物)45%と蔗糖(単純糖)55%であり、いずれも消化吸収し易い。
−Oxepaは二酸化炭素(CO2)生産を最小にするように高脂肪低炭水化物である。CO2レベルが高いと、人工呼吸器依存患者の呼吸器取りはずしが難しくなる可能性がある。低レベル炭水化物はストレス性高血糖症を発症した患者にも有用であると思われる。
−Oxepaは無乳糖である。
−Oxepaは8液量オンス缶当たり14.8g(62.5g/L)の蛋白質を含有している。
−総熱量対窒素比(150:1)はストレス負荷患者の必要量を満たす。
−Oxepaは呼吸問題を生じずに同化とやせ細った体格の維持を助長するために十分な蛋白を提供する。高蛋白摂取量は呼吸不全患者で問題となる。蛋白はCO2生産に殆ど影響しないが、高蛋白食は換気欲求を増す。
−Oxepaの蛋白源はカゼイン酸ナトリウム86.8%とカゼイン酸カルシウム13.2%である。
−Oxepaの蛋白系のアミノ酸プロフィルは米国科学アカデミーにより設定された高品質蛋白標準を満たすか又はそれを上回る。
Claims (31)
- デサチュラーゼ活性をもつポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むか又はこれに相補的な単離ヌクレオチドであって、前記ポリペプチドのアミノ酸配列が配列番号26及び配列番号42から構成される群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも90%の配列一致度をもつ前記単離ヌクレオチド。
- 配列番号25及び配列番号41から構成される群から選択されるヌクレオチド配列の少なくとも90%を含み、かつデサチュラーゼ活性をもつポリペプチドをコードする単離ヌクレオチド、又はこれに相補的な単離ヌクレオチド。
- 前記配列が配列番号25及び配列番号41から構成される群から選択される請求項2に記載の単離ヌクレオチド。
- ポリ不飽和脂肪酸を基質として利用する機能的に活性なデサチュラーゼをコードする請求項2又は3に記載の単離ヌクレオチド。
- 前記配列がSaprolegnia diclinaに由来する請求項1又は2に記載の単離ヌクレオチド。
- 請求項1又は2に記載の前記単離ヌクレオチドによりコードされる精製ポリペプチド。
- ポリ不飽和脂肪酸基質を前記基質のω3炭素で不飽和化し、配列番号26を含むアミノ酸配列に対して少なくとも90%のアミノ酸一致度をもつ精製ポリペプチド。
- 前記ポリペプチドが炭素原子数20の脂肪酸基質を不飽和化する請求項7に記載の精製ポリペプチド。
- ポリ不飽和脂肪酸基質を前記基質のΔ12炭素で不飽和化し、配列番号42に対して少なくとも90%のアミノ酸一致度をもつ精製ポリペプチド。
- 前記ポリペプチドが炭素原子数18の脂肪酸基質を不飽和化する請求項9に記載の精製ポリペプチド。
- (a)配列番号25及び配列番号41から構成される群から選択されるヌクレオチド配列に対して少なくとも90%の配列一致度をもつヌクレオチドを単離する段階と、
(b)段階(a)の前記単離ヌクレオチド配列を含むベクターを構築する段階と、
(c)段階(a)の前記単離ヌクレオチド配列によりコードされるデサチュラーゼの発現に十分な時間及び条件下に段階(b)の前記ベクターを宿主細胞に導入する段階を含む、デサチュラーゼの生産方法。 - a)配列番号25及び配列番号41から構成される群から選択されるヌクレオチド配列に対して少なくとも90%の配列一致度をもつヌクレオチドであって、かつデサチュラーゼ活性をもつポリペプチドをコードする単離ヌクレオチドを、b)調節配列に機能的に連結してなるベクター。
- 請求項12に記載の前記ベクターを含む宿主細胞。
- 前記宿主細胞が哺乳動物細胞、昆虫細胞、植物細胞及び真菌細胞から構成される群から選択される真核細胞である請求項13に記載の宿主細胞。
- 前記ベクターの前記単離ヌクレオチド配列の発現の結果として、前記宿主細胞の野生型では産生されないポリ不飽和脂肪酸を産生する前記宿主細胞が得られる請求項14に記載の宿主細胞。
- 請求項12に記載の前記ベクターを含む植物細胞、植物又は植物組織であって、前記ベクターの前記ヌクレオチド配列の発現の結果として、前記植物細胞、植物又は植物組織によりポリ不飽和脂肪酸が産生される前記植物細胞、植物又は植物組織。
- 前記ベクターがリノール酸、エイコサテトラエン酸及びエイコサペンタエン酸から構成される群から選択されるポリ不飽和脂肪酸の産生を誘導する請求項16に記載の植物細胞、植物又は植物組織。
- 請求項12に記載の前記ベクターを含むトランスジェニック植物であって、前記ベクターの前記ヌクレオチド配列の発現の結果として、前記トランスジェニック植物の種子中でポリ不飽和脂肪酸が産生される前記トランスジェニック植物。
- 請求項16に記載の前記植物細胞、植物又は植物組織から植物油を単離することを含む、ポリ不飽和脂肪酸又はポリ不飽和脂肪酸を含む植物油の製造方法。
- (a)配列番号25及び配列番号41から構成される群から選択されるヌクレオチド配列に対して少なくとも90%の配列一致度をもつヌクレオチドを単離する段階と、
(b)段階(a)の前記単離ヌクレオチド配列を含むベクターを構築する段階と、
(c)段階(a)の前記単離ヌクレオチド配列によりコードされるデサチュラーゼの発現に十分な時間及び条件下に段階(b)の前記ベクターを宿主細胞に形質転換する段階と、
(d)ω3−デサチュラーゼとΔ12−デサチュラーゼから構成される群から選択される前記発現されたデサチュラーゼを脂肪酸基質に暴露することにより、前記基質を前記デサチュラーゼによって所望のポリ不飽和脂肪酸産物に触媒的に変換する段階を含む、ポリ不飽和脂肪酸の生産方法。 - 前記発現されたデサチュラーゼがω3−デサチュラーゼであるとき、夫々前記基質がジホモγ−リノレン酸又はアラキドン酸であり、前記産物ポリ不飽和脂肪酸がエイコサテトラエン酸又はエイコサペンタエン酸である請求項20に記載の方法。
- 前記発現されたデサチュラーゼがΔ12−デサチュラーゼであるとき、前記基質ポリ不飽和脂肪酸がオレイン酸であり、前記産物ポリ不飽和脂肪酸がリノール酸である請求項20に記載の方法。
- (e)段階(d)の前記ポリ不飽和脂肪酸産物をデサチュラーゼとエロンガーゼから構成される群から選択される1種以上の酵素に暴露することにより、段階(d)のポリ不飽和脂肪酸産物を別のポリ不飽和脂肪酸産物に触媒的に変換する段階を、段階(d)の後に更に含む請求項20に記載の方法。
- 段階(d)の前記発現されたデサチュラーゼがω3−デサチュラーゼであるとき、夫々前記産物ポリ不飽和脂肪酸がエイコサテトラエン酸又はエイコサペンタエン酸であり、前記別のポリ不飽和脂肪酸がエイコサペンタエン酸又はω3−ドコサペンタエン酸である請求項23に記載の方法。
- 段階(d)の前記発現されたデサチュラーゼがΔ12−デサチュラーゼであるとき、前記産物ポリ不飽和脂肪酸がリノール酸であり、前記別のポリ不飽和脂肪酸がγ−リノレン酸である請求項23に記載の方法。
- 前記別のポリ不飽和脂肪酸を最終ポリ不飽和脂肪酸に変換するために前記別のポリ不飽和脂肪酸をデサチュラーゼとエロンガーゼから構成される群から選択される1種以上の酵素に暴露する段階、を更に含む請求項23に記載の方法。
- 段階(d)の前記発現されたデサチュラーゼがω3−デサチュラーゼであるとき、前記最終ポリ不飽和脂肪酸がω3−ドコサペンタエン酸とドコサヘキサエン酸から構成される群から選択される請求項26に記載の方法。
- 段階(d)の前記発現されたデサチュラーゼがΔ12−デサチュラーゼであるとき、前記最終ポリ不飽和脂肪酸がジホモ−γ−リノレン酸、アラキドン酸、アドレン酸、ω6−ドコサペンタエン酸、エイコサテトラエン酸、ステアリドン酸、エイコサペンタエン酸、ω3−ドコサペンタエン酸及びドコサヘキサエン酸から構成される群から選択される請求項26に記載の方法。
- 配列番号26及び配列番号42から構成される群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも90%のアミノ酸一致度をもち、かつデサチュラーゼ活性をもつポリペプチドに脂肪酸基質を暴露することにより、前記脂肪酸基質をポリ不飽和脂肪酸に触媒的に変換する段階を含む、ポリ不飽和脂肪酸の生産方法。
- 前記ポリペプチドがω3−デサチュラーゼであるとき、夫々前記脂肪酸基質がジホモ−γ−リノレン酸又はアラキドン酸であり、前記産物ポリ不飽和脂肪酸がエイコサテトラエン酸又はエイコサペンタエン酸である請求項29に記載の方法。
- 前記ポリペプチドがΔ12−デサチュラーゼであるとき、前記脂肪酸基質がオレイン酸であり、前記ポリ不飽和脂肪酸がリノール酸である請求項29に記載の方法。
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