CN1195771C - 提纯5'－保护胸腺嘧啶核苷及其新型衍生物的方法 - Google Patents

提纯5'－保护胸腺嘧啶核苷及其新型衍生物的方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种有效的提纯5’-保护胸腺嘧啶核苷的方法，利用现有技术这种物质的高效生产是困难的。为了获得高纯度的5’-保护胸腺嘧啶核苷，通过获得一种包括含有羰基的溶剂的结晶体，杂质可以被分离出去。本发明能够很容易实现大量提纯高纯度的5’-保护胸腺嘧啶核苷，而利用现有技术不能形成工业规模。

Description

提纯5’-保护胸腺嘧啶核苷及其新型衍生物的方法
技术领域
本发明涉及一种提纯5’-保护胸腺嘧啶核苷及其衍生物的方法。本发明也涉及一种5’-保护胸腺嘧啶核苷的溶剂包合化合物，该化合物是通过本发明的方法获得的结晶体。
背景技术
5’-保护胸腺嘧啶核苷是一种最新研制出的用作反义DNA及其类似物的化合物原料。
最近几年，随着制造基因药物的发展，反义DNA药物及其类似物的制造也在迅速发展。同时，对于作为原料的DNA低聚物以及用于制备该低聚物的保护脱氧核苷的需求急速增长，因此，必须使用非常高纯度的中间产物来尽可能降低作为杂质的副产品的生成是十分必要的。
根据日本专利特开平6-507883和2000-264897以及酶学刊物65期(1980)(Enzymo.，65(1980))的方法，传统的5’-保护胸腺嘧啶核苷是通过柱色谱法提纯的。利用这种方法，对于那些与提纯物在极性和结构方面有很大差距的杂质相对容易被分离，但是去掉那些有类似结构的杂质是困难的。特别是，在许多情况下，去掉特别令人头疼的杂质---3’-取代异构体是困难的。此外，因为这种方法需要体积很大的提纯设备，从将来大量生产和大量供应的观点来看，不得不说这种方法存在很大问题。
使用柱色谱法之外的方法去除杂质的尝试已经取得了。作为利用单一溶剂提纯方法的例子，日本专利特开平58-180500公开了一种利用苯来提纯的方法，但是在实际使用的过程中，该方法形成一种并有杂质的凝胶体而不是结晶体，因此，该方法是不切实际的。进而，该方法还有不利的一面，用作溶剂的苯是有毒的。日本专利特开平11-511480和PCT公开号WO200075154中公开了通过再沉淀提纯的方法。再沉淀的方法是一种在粗化合物溶于一种有机溶剂之后，通过加入一种不溶溶剂或者倒入一种不溶溶剂中进行强制沉淀化合物的方法。但其结果是提纯能力较低。另外，在工业中，恰当地控制可溶溶剂和不溶溶剂的比例也是很困难的。此外，如果这些溶剂混和比例不恰当，很容易导致油质化(oilification)或产生一种粘稠沉淀物，以致提纯失败。实际上，根据日本专利60-152495所述方法，在一些情况下，所获提纯物类似一种粘稠糖浆状物质，从工业的角度来考虑，这是一个问题。虽然通过再沉淀形成无定形体的方法现在已经公开了，但是通过结晶或再结晶获得一种结晶体的方法还不为人所知。
发明内容
为克服现有技术存在的问题，本发明的目的在于提供一种有效的工序，用于制备高纯度有5’-保护胸腺嘧啶核苷化合物方法，这种方法不需要特殊的设备。
经过本发明人对上述目的的深入细致研究，已经发现使用一种羰基化合物如乙酸丁酯、4-甲基-2-戊酮，5’-保护胸腺嘧啶核苷可以作为一种含有溶剂的溶剂化配合物制得，并且可以利用结晶或再结晶的提纯方法来提纯，从而使本发明得以实现。
这样，本发明包括以下部分：
(1)一种提纯式(1)表示的5’-保护胸腺嘧啶核苷的方法，
Figure C0211971300061
其中R1表示任意的取代三苯甲基；R2表示氢或低级烷基；R3表示氢、卤素或取代羟基，该方法包括以下步骤：
在液体介质中，获得式〔1〕化合物的包合结晶体，该包合结晶体中含有包合溶剂；以及从液体介质中收回包合结晶体。
(2)一种根据上述部分(1)提纯5’-保护胸腺嘧啶核苷的方法，其中，所述包合的溶剂是一种羰基化合物，如(2)式表示
其中R4表示低级烷基；R5表示低级的烷基或低级的烷氧基；
(3)一种根据上述部分(2)的提纯方法，其中，所述羰基化合物是乙酸丁脂或4-甲基-2-戊酮；
(4)一种根据上述(1)到(3)任意部分的提纯方法，其中，粗制备物包括(1)式的化合物和下面(3)式的化合物：
Figure C0211971300072
其中R6表示氢或任意取代三苯甲基，R1、R2和R3和与上述表示相同；所述粗制备物溶于液体介质中，经过从液体介质中回收(1)式化合物形成的包合结晶体，(3)式的化合物留在了液体介质中。
(5)一种根据上述(1)到(4)任意部分的提纯方法，其中，(1)式的化合物为如下(4)式所表示的化合物
(6)一种根据上述(1)到(5)任意部分的提纯方法，其中，(1)式化合物的含有包合溶剂的包合结晶体从由包合溶剂组成的液体介质中再结晶。
(7)一种根据上述(1)到(6)任意部分的提纯方法，其中，液体介质是由单一包合溶剂组成。
(8)一种由(5)式表示的包合化合物
Figure C0211971300081
其中m和n分别代表任意的整数，R1、R2、R3、R4和R5与上述表示相同；
(9)一种由(6)式表示的包合化合物
其中R7表示正丁氧基或异丁基；m和n与上述表示相同。
具体实施方式
下面将对本发明作详细的描述。
(1)式中R1是取代的或未被取代的三苯甲基，一个三苯甲基在它的三个苯环的至少一个苯环上可以有一个或几个取代基，在该苯环上取代可以在2-，3-或4-的位置上或者在其中两个或更多位置上。当一个苯环有二个或更多的取代基，多数取代基可以是相同的或者由至少两种不同类型组成。当两个或更多的苯环被取代时，这些取代的苯环可以是相同的或者由至少两种不同类型组成，其中包括一种情况，两个或三个取代环具有相同的取代基或不同的取代基。
三苯甲基团在苯基上的取代基的例子包括烷基如甲基、乙基和异丙基；烷氧基如甲氧基、乙氧基、正丙氧基和异丙氧基；硝基；取代的或未取代的氨基如氨基、甲氨基、乙氨基、正丙氨基、异丙氨基、二甲氨基和二乙氨基；卤素如氟、氯、溴或碘；酰基如甲酰基、乙酰基、丙酰基和苯甲酰基；酰氧基如甲酰氧基、乙酰氧基、丙酰氧基和苯甲酰氧基；和酰胺如甲酰胺、乙酰胺和苯酰胺。当存在多数取代物基时，每种取代基都可以独立的从上述基团中选择。在上述各种取代基中的烷基团优选为具有1-7个碳原子的低级烷基，更优选为具有上述具体例子的碳原子数的烷基团。
任意的取代三苯甲基的例子包括(但并不限于此)三苯甲基、4-甲氧三苯甲基、4，4’-二甲氧三苯甲基、4，4’，4”-三甲氧三苯甲基、4-甲基三苯甲基和4，4’-二甲基三苯甲基。
在R2上的低级烷基可以直链或支链的，也可以是环形。烷基上可以有另外的取代基。低级烷基的例子包括具有1-7个碳原子的烷基团如甲基、乙基、正丙基、异丙基、丁基、环丙基、环丙甲基和环苯基。
在R3上的卤素为氟、氯、溴或碘。在R3上的取代羟基表示由一种一般是对于羟基的保护基团的取代基取代的羟基，这种取代基如羧酸盐、磺酸盐、醚、氨基甲酸乙酯和甲硅烷基。对于羟基的保护基团的例子包括未取代或取代的烷基如甲基、乙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、戊基、苯甲基、2-甲氧苯甲基、3-甲氧苯甲基、4-甲氧苯甲基、2-甲苯甲基、3-甲苯甲基、4-甲苯甲基、甲氧乙基、乙氧乙基、苄氧甲基、苄氧乙基、乙酸基甲基、乙酸基乙基、苯甲酰甲基、苯甲酰乙基、甲氧乙氧乙基、炔丙基和烯丙基；烷基如苯基、2-甲氧苯基、3-甲氧苯基、4-甲氧苯基、4-苯基苯、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基；酰基如甲酰基、乙酰基、丙酰基、苯甲酰基、2-甲氧苯甲酰基、3-甲氧苯甲酰基、4-甲氧苯甲酰基、2-甲基苯甲酰基、3-甲基苯甲酰基、4-甲基苯甲酰基、2-硝基苯甲酰基、3-硝基苯甲酰基、4-硝基苯甲酰基、4-苯基苯甲酰基、2-氯苯甲酰基、3-氯苯甲酰基、4-氯苯甲酰基；氨基甲酸乙酯如甲酰胺羰基、二二甲基甲酰胺基、甲基甲酰胺基、乙基甲酰胺基、二乙基甲酰胺基和苯基甲酰胺基；磺酸盐如甲磺酰、乙磺酰、苯磺酰、2-甲基苯磺酰、3-甲基苯磺酰、4-甲基苯磺酰、三氟甲磺酰、三氯甲磺酰；甲硅烷基如三甲基甲硅烷基、三乙基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基、叔丁基二苯基甲硅烷基。
在R3上取代的羟基的例子包括甲氧基、乙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、苄氧基、2-甲氧苯氧基、3-甲氧苯氧基、4-甲氧苯氧基、2-甲基苯氧基、3-甲基苯氧基、4-甲基苯氧基、甲氧乙氧基、乙氧乙氧基、苄氧甲氧基、苄氧乙氧基、乙酸甲氧基、乙酸乙氧基、苯甲酸甲氧基、苯甲酸乙氧基、甲氧乙氧基、炔丙氧基、烯丙氧基、苯氧基、2-甲氧苯氧基、3-甲氧苯氧基、4-甲氧苯氧基、4-苯基苯氧基、2-吡啶氧基、3-吡啶氧基、4-吡啶氧基、甲酰氧基、乙酰氧基、丙酰氧基、苯甲酰氧基、2-甲氧苯甲酰氧基、3-甲氧苯甲酰氧基、4-甲氧苯甲酰氧基、2-甲基苯甲酰氧基、3-甲基苯甲酰氧基、4-甲基苯甲酰氧基、2-硝基苯甲酰氧基、3-硝基苯甲酰氧基、4-硝基苯甲酰氧基、4-苯基苯甲酰氧基、2-氯苯甲酰氧基、3-氯苯甲酰氧基、4-氯苯甲酰氧基、甲酰胺氧基、二甲基甲酰胺氧基、甲基甲酰胺氧基、乙基甲酰胺氧基、二乙基甲酰胺氧基、苯基甲酰胺氧基、甲磺酰氧基(methanesulfonyloxy)、乙磺酰氧基、苯磺酰氧基、2-甲基苯磺酰氧基、3-甲基苯磺酰氧基、4-甲基苯磺酰氧基、三氟甲酰胺氧基、三氯甲酰胺氧基、三甲基甲硅烷氧基、三乙基甲硅烷氧基、叔丁基二甲基甲硅烷氧基、叔丁基二苯基甲硅烷氧基。
在对于羟基的保护基的上述不同取代基中的烷基团优选为具有1-7个碳原子的低级烷基，更优选为具有上述具体例子中的碳原子数目的低级烷基。
(2)式中R4和R5上的低级烷基的例子包括具有1-7个碳原子的烷基团如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、2-甲基丁基、戊基、正己基、环戊基、环己基和正庚基。R5上的低级烷氧基的例子包括具有1-6个碳原子的烷氧基团如甲氧基、乙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基和戊氧基。
在本发明中用于制备包合结晶体的包合溶剂优选为具有(2)式表示的羰基团的羰基化合物。这种溶剂的例子包括丙酮、2-丁酮、3-戊酮、2，4-二甲基-3-戊酮、4-甲基-2-戊酮、3-甲基-2-丁酮、甲基乙酸酯、乙基乙酸酯、正丙基乙酸酯、异丙基乙酸酯、正丁基乙酸酯、叔丁基乙酸酯、异丁基乙酸酯、戊基乙酸酯、正戊基乙酸酯、正己基乙酸酯、环己基乙酸酯、正丙基丙酸酯、异丙基丙酸酯。这些羰基化合物通常在溶剂中单独使用，但也可以将两种或多种羰基化合物按一定比例混和使用。可选择的，多数羰基化合物可以预先混和来制备要使用的混合溶剂。
形成包合结晶体的液体介质可以是单一的包合溶剂或者包合溶剂和在形成包合结晶体中不含有的溶剂按一定比例混和的混合体。例如，单一羰基化合物溶剂或一种由两种或多种羰基化合物组成的溶剂混合物可以和其它溶剂按一定比例混和。所述其它溶剂可以是任何一种可以混和的溶剂，例如，醇类如甲醇、乙醇和异丙醇；酮类如丙酮、甲基乙基酮和甲基异丁基酮；腈类如乙腈和丙腈；醚类如二乙基醚、二异丙基醚、二氧杂环己烷、四氢呋喃(THF)；芳香烃类如苯、甲苯、异丙基苯、二甲苯、1，3，5-三甲基苯、二异丙基苯、三异丙基苯；脂肪烃类如戊烷、己烷、环己烷和石油醚；卤代烃如二氯甲烷、氯仿、二氯乙烷和氯丁烷；吡啶类如吡啶、二甲基吡啶、喹啉；叔胺如三乙胺、三丁胺；和极性溶剂如二甲基甲酰胺(DMF)，二甲基咪唑啉酮(DMI)、二甲基亚砜(DMSO)。混合物中其它溶剂占羰基化合物总重量的百分比优选为100％，较优选为20％，更优选为10％。
此处使用“包含一种溶剂的包合结晶体”术语表示溶剂起着一种形成晶体结构的辅助作用，以使结晶体以一定的形式形成，其中溶剂包含在晶格中，或者通过晶体和溶剂之间的弱的相互作用形成一种配合物。包合形式和晶体结构并没有特别的限定。
就在溶剂中(1)式的化合物量低于其保和溶解度而言，在结晶和再结晶中羰基化合物溶剂的量并没有特别限定，但是溶剂的量是(1)式化合物总重量的5-150倍较为适宜，更佳为8-50倍。
对于结晶和再结晶的温度并没有特殊限定，但是最好在-10℃到溶剂或液体介质的沸点范围内。一般来说，经过一次再结晶进行提纯就足够了，但是，更高纯度的提纯要经过重复再结晶来实现，对于再结晶的液体介质最好是由单一包合的溶剂组成并且在结晶和再结晶中使用同一种单一溶剂为更好。
根据本发明的提纯方法所获得的包合化合物的优选部分为上述(6)式所表示的化合物，其中，m和n表示任一整数，优选的整数从1-5。
如上所述，本发明能够进行有效地提纯5’-保护胸腺嘧啶核苷。
在下述实施例中将对本发明详细描述。但本发明并不意味着局限于
实施例的范围。
实施例1
5’-O-(4，4’-二甲氧三苯甲基)胸腺嘧啶核苷和(4-甲基-2-戊酮(2∶1)配合物的制备。
将56g的二甲氧三苯甲基氯化物(0.165mol)加入搅拌的500ml含有40.0g的胸腺嘧啶核苷(0.165mol)的吡啶溶液中，然后将该混合物在室温条件下搅拌3小时。将16.7g的碳酸氢钠加入混合物中，所得的混合物在室温下搅拌30分钟并且在减压环境下蒸发。将500ml的甲基异丁基酮(MIBK)加入剩余物中。将500ml的水加入搅拌混合物中并且搅拌10分钟。然后，分离有机层并用500ml水冲洗。有机层在减压环境下蒸发，剩余物从900ml的甲基异丁基酮中再结晶从而得到一种结晶状产物，该产物通过过滤收集。结晶状产物在50℃真空干燥达到恒重，从而得到67.3g的产物。NMR光谱显示，每分子的结晶状产物包含0.5分子的4-甲基-2-戊酮。DSC分析显示在137℃有一个锐利的吸热峰值(66.8J/G)，表明此该产物是结晶体。通过TG-DTA分析，经干燥发现，所获得的恒重的结晶体包含0.5分子4-甲基-2-戊酮，结晶体的重量直到温度升高到吸热反应的温度(122℃-132℃)，其重量才逐渐减小，这表明溶剂并不是粘附在结晶体上。通过带有反相十八烷基化硅胶柱，使用乙腈和水的混和物(75/25)作为洗提液，使用一种UV探测器(254nm)的高性能色谱法(HPLC)分析，表明其纯度为99.5％。最多的杂质是3’，5’-O-双(4，4’-二甲氧三苯甲基)胸腺嘧啶核苷，所占HPLC峰值面积为0.3％，产出率为67％。
NMRδ(CDCl3)：8.7(s，1H)，7.6(s，1H)，7.2-7.4(m，9H)，6.8(m，4H)，6.4(t，1H)，4.6(m，1H)，4.1(m，1H)，3.8(s，6H)，3.4(m，2H)，2.3-2.5(m，3H：包括MIBK中的CH2)，2.1(m，1.5H：包括MIBK中的COCH3)，1.7(m，0.5H：包括MIBK中的CH)，1.5(s，3H)，0.9(d，3H：包括MIBK中的CH3×2)(MIBK：4-甲基-2-戊酮的简写)；
IR：cm-1(KBr)：3163，1698，1608，1509，1259，1177，1098，1033，830。
实施例2
5’-O-(4，4’-二甲氧三苯甲基)胸腺嘧啶核苷和(正丁基乙酸酯(2∶1)配合物的制备。
将56g的二甲氧三苯甲基氯化物(0.165mol)加入搅拌的500ml含有40.0g的胸腺嘧啶核苷(0.165mol)的吡啶溶液中，然后将该混合物在室温条件下搅拌3小时。将16.7g的碳酸氢钠加入混合物中，所得的混合物在室温下搅拌30分钟并且在减压环境下蒸发。将500ml的正丁基乙酸酯加入剩余物中。将500ml的水加入搅拌混合物中并且搅拌10分钟。然后，分离有机层并用500ml水冲洗。有机层在减压条件下蒸发。剩余物从900ml的正丁基乙酸酯中再结晶从而得到一种结晶状产物，该产物通过过滤收集。结晶状产物在50℃真空干燥达到恒重，从而得到74.6g的产物。通过带有反相十八烷基化硅胶柱，使用乙腈和水的混和物(75/25)作为洗提剂，使用一种UV探测器(254nm)的高性能色谱法(HPLC)分析，表明其纯度为99.6％。最多的杂质是3’，5’-O-双(4，4’-二甲氧三苯甲基)胸腺嘧啶核苷，所占HPLC峰值面积为0.3％，产出率为75％。
NMRδ(CDCl3)：0.9(t，1.5H：包括正丁基乙酸酯中的CH3)，1.4(m，1H：包括正丁基乙酸酯中的CH2)，1.5(s，3H)，1.6(m，1H：包括正丁基乙酸酯中的CH2)，2.0(s，1.5H：包括正丁基乙酸酯中的CH3)，2.3(m，1H)，2.4(m，1H)，2.6(m，1H：包括正丁基乙酸酯中的OCH2)，3.3(dd，1H)，3.4(dd，1H)，3.8(s，6H)，4.1(m，1H)，4.6(m，1H)，6.4(m，1H)，6.8(m，4H)，7.3(m，7H)，7.4(m，2H)，7.6(s，1H)，8.9(s，1H).
参考例1
3’，5’-O-双(4，4’-二甲氧三苯甲基)胸腺嘧啶核苷的制备。
在实施例1中通过再结晶获得的滤液浓缩，浓缩物通过柱色谱法(乙基乙酸酯/己烷)提纯。提纯的部分被浓缩得到一粉未，将该粉未分散到二异丙基醇中，由此形成的沉淀通过过滤和干燥回收，因此，获得一种白色粉未状标定化合物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ：8.1(1H，s)，7.5-7.2(18H，m)，6.8(8H，m)，6.4(1H，m)，4.4(1H，m)，4.1(0.33H，m)，3.8(1H，m)，3.8(12H，s)，3.2(1H，m)，2.9(1H，m)，1.9(2H，m)，1.4(3H，m)，1.2(2H，d，J＝6Hz)。
参考例2
5’-O-(叔-丁基二甲基甲硅烷基)胸腺嘧啶核苷的制备。
将胸腺嘧啶核苷(15.0g)溶于200ml的DMF中。将8.16g的咪唑加到所得溶液中，然后加入10.8g的叔-丁基二甲基甲硅烷氯化物。进一步加入100mlDMF并且在室温下搅拌溶液。两小时后，用乙基乙酸酯进行萃取并且将有机层用饱和氯化钠水溶液冲洗，并且用无水硫酸镁干燥。萃取物浓缩之后，目标化合物通过柱色谱法(甲醇/氯仿)制得了包括目标化合物的分馏溶液并将其浓缩从而得到了11.3g的标定化合物(产出率51％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ：9.2(1H，br)，7.5(1H，s )，6.4(1H，dd，J＝5.6，8.4Hz)，4.5(1H，m)，4.1(1H，m)，3.9(1H，dd，J＝2.8，11.2Hz)，3.8(1H，dd，J＝2.4，11.2Hz)，2.9(1H，m)，2.4(1H，m)，2.1(1H，m)，1.9(3H，m)，0.9(9H，s)，0.1(6H，s)。
参考例3
5’-O-(叔-丁基二甲基甲硅烷基)-3’-O-(4，4’-二甲氧三苯甲基)胸腺嘧啶核苷的制备。
将5’-O-(叔-丁基二甲基甲硅烷基)胸腺嘧啶核苷(11.3g)溶于100ml的无水吡啶中。将4，4’-二甲氧三苯甲基氯化物(11.4g)加到所得溶液中，进一步加入140ml的无水吡啶，在60℃下搅拌。完全反应后，用碳酸氢钠将混和物中和并将吡啶蒸馏出去。用乙基乙酸酯进行萃取并且将萃取物用饱和氯化钠水溶液冲洗，并且用无水硫酸镁干燥。萃取物浓缩并用柱色谱法(乙基乙酸酯/己烷)提纯，得到了14.9g的标定化合物(产出率71％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ：8.2(1H，s)，7.8(1H，s)，7.5-7.3(9H，m)，6.8(4H，m)，6.4(1H，dd，J＝5.6，5.6Hz)，4.3(1H，m)，4.1(1H，m)，4.0(1H，m)，3.8(6H，s)，3.7(1H，dd，J＝1.6，11.2Hz)，3.3(1H，dd，J＝8.8，11.2Hz)，2.0(1.5H，m)，1.9(3H，s)，1.7-1.5(2H，m)，1.3(1.5H，m)，0.8(9H，s)，0.1(3H，s)，0.04(3H，s)。
参考例4
3’-O-(4，4’-二甲氧三苯甲基)胸腺嘧啶核苷的制备。
将5’-O-(叔-丁基二甲基甲硅烷基)-3’-O-(4，4’-二甲氧三苯甲基)胸腺嘧啶核苷(14.9g)溶于200ml的干燥THF中。将叔丁铵氟化物的THF溶液(25ml)加到所得溶液中，进一步加入100ml的干燥THF，在室温下搅拌溶液。8小时后，用乙基乙酸酯浓缩并萃取，萃取物用饱和氯化钠水溶液冲洗，并且用无水硫酸镁干燥。然后萃取物通过柱色谱法(乙基乙酸酯/己烷)浓缩和提纯。提纯物分散到氯仿中，并在溶液中倒入己烷。沉淀物经过滤回收和干燥，从而获得了12.2g白色粉未状标定化合物。(产出率98％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ：8.7(1H，s)，7.7(1H，s)，7.5-7.2(9H，m)，6.8(4H，m)，6.1(1H，dd，J＝5.6，8.8Hz)，4.0(1H，m)，3.8(6H，s)，3.7(1H，m)，3.3(1H，m)，2.3(1H，m)，1.9(1H，m)，1.87(3H，s)，1.7(1H，m)。
对比例1
对于去除杂质如3’-取代异构体〔3’-O-(4，4’-二甲氧三苯甲基)胸腺嘧啶核苷〕或3’，5’-多取代物〔3’，5’-O-双(4，4’-二甲氧三苯甲基)胸腺嘧啶核苷〕的能力，现对下述两种提纯方法做比较，一种是使用4-甲基-2-戊酮(MIBK)的再结晶方法，另一种是使用可溶性溶剂二氯甲烷和不可溶溶剂己烷进行再沉淀方法。另外，比较两种方法中产物〔5’-O-(4，4’-二甲氧三苯甲基)胸腺嘧啶核苷〕的回收并且将所获得的结晶体进行热分析(TG-DTA：吸热峰值，DSC：吸热峰值和吸热能量)。
表1
粗结晶体 提纯溶剂
MIBK     二氯甲烷/己烷
3’-异构体     4.0％ 0％     0.29％
多取代化合物     5.0％ 0.24％     0.61％
产出率 91％     81％
DSC
吸热峰值 122/132℃     105℃
TG-DTA
吸热峰值 137℃     109℃
吸热能量 66.8J/G     6.2J/G
(1)对比例1的HPLC条件(多取代形成物量的分析)：
柱：Develosil TMS-UG-5，150mm×Φ4.6
流动速率：1.0mL/min
柱温度：40℃
探测波长：254nm
流动相：梯度条件(见表2)
表2
    时间(分钟)     液体B(体积％)
    0     20
    15     70
    35     100
    40     100
    45     20
    60     停止
[液体A]
100mL的100mM三乙胺乙酸(PH7)/880mL的水/20mL的乙腈。
[液体B]
100mL的100mM三乙胺乙酸(PH7)/900mL的乙腈。
(2)对比例1的HPLC条件(3’-异构体量的分析)：
柱：Develosil TMS-UG-5，150mm×Φ4.6
流动相：乙腈-水(55∶45)
流动速率：1.0mL/min
柱温度：40℃
探测波长：254nm
(3)热分析条件(TG-DTA)：
装置：SHIMADZU TG/DTA320(SII)
温度上升速率：10℃/min
气体测温法：氮气条件，200ml/min
(4)示差扫描量热法条件
装置：DSC-7(Perkin Elmer)
温度上升速率：10℃/min
根据本发明，一种批量生产的方法能够比传统方法更有效地生产高纯度的5’-保护胸腺嘧啶核苷。

Claims (8)

1.提纯式〔1〕表示的5’-保护胸腺嘧啶核苷的方法，
其中，R1表示三苯甲基、4-甲氧基三苯甲基或4，4’-二甲氧基三苯甲基；R2表示氢或C1-C7的烷基；R3表示氢、卤素或由C1-C7的烷基或C1-C7的烷氧基取代的羟基，
该方法包括以下步骤：
在含有单一包合溶剂的液体介质中，获得式〔1〕化合物的包合结晶体；以及
从液体介质中收回上述包合结晶体，
其中，
所述液体介质是含有羰基化合物，并选择性地含有甲苯、戊烷、环己烷和石油醚中的至少一种，并且，
所述包合溶剂是式〔2〕表示的羰基化合物：
其中，R4表示甲基；R5表示C1-C4的烷基或C1-C4的烷氧基。
2.根据权利要求1所述的提纯式〔1〕表示的5’-保护胸腺嘧啶核苷的方法，其中羰基化合物为乙酸丁脂或4-甲基-2-戊酮。
3.根据权利要求1或2所述的提纯式〔1〕表示的5’-保护胸腺嘧啶核苷的方法，其中粗制备物包括式〔1〕表示的化合物和下面式〔3〕表示的化合物：
其中，R6表示氢或三苯甲基、4-甲氧基三苯甲基或4，4’-二甲氧基三苯甲基，R1、R2和R3的定义与权利要求1中的定义相同；所述粗制备物溶于液体介质中，经过从液体介质中回收式〔1〕化合物形成的包合结晶体，式〔3〕化合物留在了液体介质中。
4.根据权利要求1所述的提纯式〔1〕表示的5’-保护胸腺嘧啶核苷的方法，其中，式〔1〕化合物是下面式〔4〕所表示的化合物。
5.根据权利要求1所述的提纯式〔1〕表示的5’-保护胸腺嘧啶核苷的方法，其中，式〔1〕化合物的含有包合溶剂的包合结晶体从由包合溶剂组成的液体介质中再结晶。
6.根据权利要求1所述的提纯式〔1〕表示的5’-保护胸腺嘧啶核苷的方法，其中，液体介质是由单一包合溶剂组成。
7.式〔5〕表示的包合化合物
其中，m和n分别代表1～5的整数，并且，R1、R2、R3、R4和R5的定义与权利要求1中的定义相同。
8.根据权利要求7所述的包合化合物，其进一步由式〔6〕表示
其中，R7表示正丁氧基或异丁基；m和n分别代表1～5的整数。
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