CN117581971A - 一种改良牡蛎酶解蛋白粉基料风味的工艺及应用 - Google Patents

一种改良牡蛎酶解蛋白粉基料风味的工艺及应用 Download PDF

Info

Publication number
CN117581971A
CN117581971A CN202410012114.1A CN202410012114A CN117581971A CN 117581971 A CN117581971 A CN 117581971A CN 202410012114 A CN202410012114 A CN 202410012114A CN 117581971 A CN117581971 A CN 117581971A
Authority
CN
China
Prior art keywords
oyster
flavor
protein powder
enzymolysis
powder base
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202410012114.1A
Other languages
English (en)
Inventor
曹文红
曾珊
李佳蔚
陈忠琴
谭明堂
高加龙
郑惠娜
林海生
秦小明
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Guangdong Ocean University
Original Assignee
Guangdong Ocean University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Guangdong Ocean University filed Critical Guangdong Ocean University
Priority to CN202410012114.1A priority Critical patent/CN117581971A/zh
Publication of CN117581971A publication Critical patent/CN117581971A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L17/00—Food-from-the-sea products; Fish products; Fish meal; Fish-egg substitutes; Preparation or treatment thereof
    • A23L17/50—Molluscs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L17/00—Food-from-the-sea products; Fish products; Fish meal; Fish-egg substitutes; Preparation or treatment thereof
    • A23L17/65—Addition of, or treatment with, microorganisms or enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L27/00—Spices; Flavouring agents or condiments; Artificial sweetening agents; Table salts; Dietetic salt substitutes; Preparation or treatment thereof
    • A23L27/10—Natural spices, flavouring agents or condiments; Extracts thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L27/00—Spices; Flavouring agents or condiments; Artificial sweetening agents; Table salts; Dietetic salt substitutes; Preparation or treatment thereof
    • A23L27/84—Flavour masking or reducing agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L29/00—Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof
    • A23L29/30—Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof containing carbohydrate syrups; containing sugars; containing sugar alcohols, e.g. xylitol; containing starch hydrolysates, e.g. dextrin
    • A23L29/35—Degradation products of starch, e.g. hydrolysates, dextrins; Enzymatically modified starches
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L5/00—Preparation or treatment of foods or foodstuffs, in general; Food or foodstuffs obtained thereby; Materials therefor
    • A23L5/20—Removal of unwanted matter, e.g. deodorisation or detoxification
    • A23L5/21—Removal of unwanted matter, e.g. deodorisation or detoxification by heating without chemical treatment, e.g. steam treatment, cooking
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L5/00—Preparation or treatment of foods or foodstuffs, in general; Food or foodstuffs obtained thereby; Materials therefor
    • A23L5/20—Removal of unwanted matter, e.g. deodorisation or detoxification
    • A23L5/27—Removal of unwanted matter, e.g. deodorisation or detoxification by chemical treatment, by adsorption or by absorption
    • A23L5/273—Removal of unwanted matter, e.g. deodorisation or detoxification by chemical treatment, by adsorption or by absorption using adsorption or absorption agents, resins, synthetic polymers, or ion exchangers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23P—SHAPING OR WORKING OF FOODSTUFFS, NOT FULLY COVERED BY A SINGLE OTHER SUBCLASS
    • A23P10/00—Shaping or working of foodstuffs characterised by the products
    • A23P10/30—Encapsulation of particles, e.g. foodstuff additives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Marine Sciences & Fisheries (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Meat, Egg Or Seafood Products (AREA)

Abstract

本发明提出了一种改良牡蛎酶解蛋白粉基料风味的工艺及应用，属于水产蛋白开发应用及食品风味技术领域，本发明方法针对现有的牡蛎酶解产物出现的腥臭味，采用多种脱腥法联合脱腥以达到彻底脱除腥味的目的，并对牡蛎酶解蛋白粉基料风味差和速溶性差的问题进行改良，本发明生产的牡蛎酶解蛋白粉基料色泽鲜艳、呈橙黄色，无腥味，同时具有芳草的清新气味和麦芽糊精的香甜，其适口性显著提高，可以直接作为健康食品冲调食用，也可以作为食品基料用于制作具有牡蛎风味、营养与功能性及颜色的各类食品。

Description

一种改良牡蛎酶解蛋白粉基料风味的工艺及应用
技术领域
本发明属于水产蛋白开发应用及食品风味技术领域，尤其涉及一种改良牡蛎酶解蛋白粉基料风味的工艺及应用。
背景技术
牡蛎是四大养殖经济贝类之一，有着“海洋牛奶”的美称，牡蛎蛋白质含量达到干品的50.63％，总脂肪仅6.95％，是一种高蛋白、低脂肪的食品。而且多为具有生理活性的复合磷脂、EPA、DHA等。牡蛎蛋白氨基酸组成完善，婴幼儿所需的组氨酸和精氨酸含量较高，除20种常见氨基酸外，还含有多种游离氨基酸，尤以天然牛磺酸含量丰富。糖原及灰分分别占干品的22.41％和9.35％。牡蛎还富含钙、铁、锌、锰和硒等矿物质及微量元素，特别是锌和硒的含量丰富；其所涉及的生理功能主要有抗癌、抗衰老、抗毒性、治疗溃疡、提高食欲和增强组织再生能力等。
牡蛎经过酶解后多不饱和脂肪酸在脂肪氧合酶的作用产生醛类、酮类挥发性成分，醛类阈值较低，且部分醛类物质可与其他组分产生明显的风味重叠效果，而直链饱和醛、烯醛和二烯醛是由不饱和脂肪酸氧化产生的，是牡蛎酶解液中鱼腥味的主要来源。导致牡蛎酶解液的腥苦味加重，风味变差，已成为制约其加工利用的瓶颈问题。如其他水产品一样，牡蛎特有腥味及其酶解腥味严重影响牡蛎饮料的风味，因此脱除牡蛎蛋白酶解液的腥臭味是牡蛎蛋白饮料的关键技术之一。
牡蛎酶解液脱腥方法有包埋法、吸附法、发酵法、联合脱腥法等但这些方法会导致营养物质的部分损失，或存在操作复杂、成本较高等缺点。但这些方操作复杂、成本较高等缺点。虽然活性炭是人们研究的最早的不良气味的吸附剂，其有良好的稳定性，具有良好的腥臭成分吸附能力，但是最佳条件也会造成蛋白质损失率达到15.35％。而环糊精能够将小分子的物质包埋到环状糊精的穴内部，从而起到脱除异味的作用。但有时要完全掩盖，则需要较大的用量，从而影响溶液的口感和澄清度，而感官掩蔽法利用香辛料中的风味成分来掩盖水产品中的异味和酵母发酵脱除异味，牡蛎酶解液中腥味大部分被脱除，但是也会出现其他特殊的气味，造成气味不协调。目前在水产品脱除腥味成分方面的文献报道比较多，而牡蛎酶解液腥味脱除方面的研究报道较少。因此实际应用时常采用一种方法单独脱腥或者多种方法联合脱腥以达到彻底脱除腥味的目的，而现有的脱腥方法实际上未能真正解决牡蛎酶解液腥苦味的问题。
近几年虽然有少量的功能性牡蛎产品，如海王金牡蛎、阿胶牡蛎口服液及牡蛎全营养片等纷纷上市，但是由于销售价格比较昂贵，而且口感较差，影响了牡蛎产品的发展，目前市场上的牡蛎饮料主要针对功能性研究，口感单一的问题，配方中辅料添加主要以多种功能中药材和添加剂为主，在口感上略差于其他饮料，且都存在牡蛎肽的腥味，回味咸鲜味重的问题，口感不佳。例如市场上出现的蚝饮，由于带有牡蛎的清香，口感上是酸味和甜味调制的糖水加入牡蛎汁的口感，有牡蛎特有的鲜味，被消费者列入“黑暗饮料”，虽然主打功能性饮料，由于口感上的独特，限制了其饮料的发展。这是由于经过酶解降低牡蛎灰分含量，提高还原糖含量。牡蛎酶解液鲜味浓郁、口感饱满，无明显的酸味和苦味，且添加量越高的酶解液对食品风味的提升效果越明显，其对不同食品的鲜味和厚味有不同程度的增强效果。因此牡蛎肉嫩味美，具有独特的海鲜风味，是制备调味品的理想原料。以牡蛎酶解蛋白开发饮料产品，由于存在浓郁的牡蛎鲜味感，不符合消费者的蛋白饮料口感需求，难以实际应用及产业化。
因此要解决牡蛎酶解液的脱腥脱苦以及牡蛎饮料产品口感不佳，咸鲜味重，回味鲜味难消除的问题，以牡蛎酶解蛋白粉基料研制风味独特、无牡蛎腥味，营养齐全的牡蛎蛋白饮料将是一条促进牡蛎产业健康发展的新途径。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明提出了一种改良牡蛎酶解蛋白粉基料风味的工艺及应用，该方法针对现有的牡蛎酶解产物出现的腥臭味，采用多种脱腥法联合脱腥以达到彻底脱除腥味的目的，并对牡蛎酶解蛋白粉基料风味差和速溶性差的问题进行改良，本发明生产的牡蛎酶解蛋白粉基料色泽鲜艳、呈橙黄色，无腥味，同时具有芳草的清新气味和麦芽糊精的香甜，其适口性显著提高，可以直接作为健康食品冲调食用，也可以作为食品基料用于制作具有牡蛎风味、营养与功能性及颜色的各类食品。
为实现上述目的，本发明提供了以下技术方案：
一种改良牡蛎酶解蛋白粉基料风味的工艺，采用添加复合脱腥剂、活性炭吸附、包埋剂包埋和喷雾干燥的方法对牡蛎酶解产物进行处理。
进一步的，所述牡蛎酶解产物的制备方法如下：以去壳的牡蛎为原料，清洗牡蛎肉，在冰水浸泡条件下超声浸泡脱盐；加入去离子水后进行匀浆，均质分散，超声处理，调节均质分散后的混合液pH至中性，加入动物蛋白酶进行酶解反应，酶解结束后进行灭酶处理，得到牡蛎酶解产物(牡蛎酶解液)。
进一步的，所述改良牡蛎酶解蛋白粉基料风味的工艺如下：
以去壳的牡蛎为原料，反复多次清洗牡蛎肉至其干净，在冰水浸泡条件下超声浸泡脱盐；加入水后进行匀浆，均质分散，超声处理，超声时间为10min-20min，调节均质分散后的混合液pH至中性，加入动物蛋白酶进行酶解反应，酶解结束后将其加热至100℃灭酶活，得到牡蛎酶解产物；
将所述牡蛎酶解产物冷却至室温，添加复合脱腥剂和活性炭脱腥，脱腥处理后经过离心、过滤、浓缩，制成浓缩液；
将所述浓缩液使用麦芽糊精作为包埋剂进行包埋处理，过80目筛网，喷雾干燥制粉，即得到改良牡蛎酶解蛋白粉基料。
进一步的，所述在冰水浸泡条件下超声浸泡脱盐是在冰水中超声浸泡脱盐4-6次，每次浸泡超声的时间是15min-20min，每次所用的冰水体积为牡蛎肉质量的4-6倍。
进一步的，所述均质分散时，转速为4800rpm-5200rpm，均质时间为6min-10min；
所述匀浆时，牡蛎和水的料液比为1mg∶(4-5)mL。
进一步的，所述动物蛋白酶的酶活力为100000U/g；所述动物蛋白酶的加入量为均质分散后的混合物质量的1.4％-1.7％；
所述酶解反应时，反应温度为50℃-55℃，pH为6.5-7，反应时间为4h-6h。
进一步的，所述复合脱腥剂为甜叶菊粉、青柠浊汁和红茶粉，质量比为1∶(2-4)∶(1-2)。
进一步的，所述甜叶菊粉的制备方法为：将甜叶菊破壁打碎后过100目筛网，得到所述甜叶菊粉；所述红茶粉制备方法为：将红茶破壁打碎后过100目筛网，得到所述红茶粉；所述青柠浊汁的制备方法为：将新鲜青柠榨汁，得到的汁即为青柠浊汁。
进一步的，每100mL所述牡蛎酶解产物中添加所述复合脱腥剂2g-10g。
进一步的，活性炭的加入量为破壁后牡蛎肉质量的1％。
进一步的，所述离心指的是：以9000rpm的转速离心20min。
进一步的，所述浓缩液中固形物质量为20-30％。
进一步的，所述包埋处理指的是：按照所述浓缩液按固形物质量的1-2倍添加麦芽糊精作为包埋剂进行搅拌包埋1-3h，3℃-5℃条件下水化过夜。
进一步的，所述喷雾干燥的进口温度为170℃-190℃，流速为9rpm-11rpm，出口温度为70℃-75℃。
一种根据上述工艺得到的改良牡蛎酶解蛋白粉基料作为可直接食用食品中的应用。
一种根据上述工艺得到的改良牡蛎酶解蛋白粉基料作为食品基料在制备具有牡蛎风味、营养的各类食品中的应用。
根据本发明工艺得到的改良牡蛎酶解蛋白粉基料色泽鲜艳、呈橙黄色，无腥味，同时具有芳草的清新气味和麦芽糊精的香甜，其适口性显著提高，可以直接作为健康食品冲调食用，也可以作为食品基料用于制作具有牡蛎风味、营养与功能性及颜色的各类食品。
与现有技术相比，本发明具有如下优点和技术效果：
(1)本发明采用酶法技术及现代分离技术制备牡蛎酶解蛋白粉基料，并在牡蛎酶解蛋白粉基料制备过程中采用感官掩蔽和物理吸附及喷雾干燥热反应的方法协同脱腥以达到彻底脱除腥味的目的，采用添加复合脱腥剂对腥味等不良气味起到掩蔽作用，同时丰富了牡蛎酶解液的整体气味，协调活性炭吸附彻底脱除腥味，同时喷雾干燥使脱腥后的牡蛎酶解蛋白粉基料的气味协调，带有清香的气味,与单一脱腥方法相比有效脱除腥味并改良风味，同时在一定程度上减少了营养成分的损失。
(2)本发明针对牡蛎蛋白粉基料的口感差，咸鲜味重的问题，采用复合脱腥剂在达到脱除腥味的同时可作为天然甜味剂和酸味剂对牡蛎酶解液的口感进行了改良，提高了适口性还在一定程度上明显掩盖了牡蛎本身的咸鲜味，同时赋予了复合脱腥剂的清香；采用麦芽糊精进行包埋，经过喷雾干燥有效改善了牡蛎蛋白粉基料的口感差，高温处理后增加麦芽糊精的香甜气味；同时包埋粉剂经喷雾干燥后有较高的得率以及较好的复溶性，改良牡蛎酶解蛋白粉基料冲泡后澄清透亮，色泽鲜艳、呈橙黄色，并且方法简单，绿色健康并减少成本，为后续基于牡蛎饮品开发的产品提供了可靠基础。
附图说明
构成本申请的一部分的附图用来提供对本申请的进一步理解，本申请的示意性实施例及其说明用于解释本申请，并不构成对本申请的不当限定。在附图中：
图1为原料(新鲜牡蛎)、实施例2及对比例1-6制品挥发性气味成分电子鼻比较结果；
图2为原料(新鲜牡蛎)、实施例2及对比例1-6制品感官评价气味特征比较结果；
图3为实施例1-3及对比例1-6制品滋味感官分析比较结果；
图4为实施例2及对比例1-6制品电子舌滋味分析比较结果；
图5为实施例2制备的改良牡蛎酶解蛋白粉基料实物图(左)及其冲调状态(右)；
图6为实施例1-3和对比例1-6制品复溶性对比图，其中A为实施例2，B为对比例1，C为对比例2，D为对比例3，E为对比例4，F为对比例5，G为对比例6；
图7为实施例1-3和对比例1-6制品得粉率对比图。
具体实施方式
现详细说明本发明的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本发明的限制，而应理解为是对本发明的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。
应理解本发明中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本发明。另外，对于本发明中的数值范围，应理解为还具体公开了该范围的上限和下限之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本发明内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。
除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本发明所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本发明仅描述了优选的方法和材料，但是在本发明的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时，以本说明书的内容为准。
在不背离本发明的范围或精神的情况下，可对本发明说明书的具体实施方式做多种改进和变化，这对本领域技术人员而言是显而易见的。由本发明的说明书得到的其他实施方式对技术人员而言是显而易见得的。本发明说明书和实施例仅是示例性的。
关于本文中所使用的“包含”、“包括”、“具有”、“含有”等等，均为开放性的用语，即意指包含但不限于。
本发明实施例中的室温指的是25±2℃。
本发明实施例所用各原料均为通过市售购买得到。
本发明实施例中的动物蛋白酶购自南宁庞博生物工程有限公司，酶活力为100000U/g。
本发明实施例中甜叶菊粉的制备方法为：将甜叶菊破壁打碎后过100目筛网，得到甜叶菊粉；红茶粉制备方法为：将红茶破壁打碎后过100目筛网，得到红茶粉；青柠浊汁的制备方法为：将新鲜青柠榨汁，得到的汁无需过滤即为青柠浊汁。
以下通过实施例对本发明的技术方案做进一步说明。
实施例1
S1.使用去壳的牡蛎为原料，反复清洗牡蛎肉至其干净后，在冰水中超声浸泡脱盐6次，每次浸泡超声的时间是15min，每次所用的冰水体积为牡蛎肉质量的6倍，使用破壁机进行打浆，按料液比1mg∶4mL的比例加去离子水匀浆，在均质分散机中均质分散，转速为5200rpm，均质时间为6min，放入超声装置中超声10min，调节均质后的混合液pH至7.0，在50℃、pH为7.0的条件下加入1.4wt％动物蛋白酶(即动物蛋白酶的加入量为均质分散后的混合物质量的1.4％，下同)，酶解4h后将其加热至100℃灭酶，得到牡蛎酶解产物；
S2.将牡蛎酶解产物冷却至室温，添加复合脱腥剂(甜叶菊粉、青柠浊汁和红茶粉按1∶2∶1的质量比混合均匀)，添加复合脱腥剂后将溶液pH调至7.0，加入活性炭(活性炭的加入量为破壁后牡蛎肉质量的1％)，牡蛎酶解产物与复合脱腥剂的添加比例为100mL∶2g。脱腥处理后经过离心(9000rpm离心20min)、过滤、浓缩，制成固形物含量为30％的浓缩液；
S3.按浓缩液的固形物含量的1倍添加麦芽糊精作为包埋剂进行搅拌包埋1h，3℃水化过夜，过80目筛网，喷雾干燥(喷雾干燥的进口温度为170℃，流速为9rpm，出口温度为70℃)制粉，即得到改良牡蛎酶解蛋白粉基料。
实施例2
S1.使用去壳的牡蛎为原料，将牡蛎肉反复清洗干净后，在冰水中超声浸泡脱盐5次，每次浸泡超声的时间是18min，每次所用的冰水体积为牡蛎肉质量的5倍。使用破壁机进行打浆，按料液比1mg∶4mL的比例加去离子水匀浆，在均质分散机中均质分散，转速为5000rpm，均质时间为8min，放入超声装置中超声15min，调节均质后的混合液pH至7.0，在50℃、pH为7.0的条件下加入1.6wt％动物蛋白酶，酶解4h后将其加热至100℃灭酶，得到牡蛎酶解产物；
S2.将牡蛎酶解产物冷却至室温，添加复合脱腥剂(甜叶菊粉、青柠浊汁和红茶粉按1∶3∶2的质量比混合均匀)，添加复合脱腥剂后将溶液pH调至7.0，加入活性炭(活性炭的加入量为破壁后牡蛎肉质量的1％)，牡蛎酶解产物与复合脱腥剂的添加比例为100mL∶5g。脱腥处理后经过离心(9000rpm离心20min)、过滤、浓缩，制成固形物含量为30％的浓缩液；
S3.按浓缩液的固形物含量的1.5倍添加麦芽糊精作为包埋剂进行搅拌包埋2h，4℃过夜，过80目筛网，进行喷雾干燥(喷雾干燥的进口温度为180℃，流速为10rpm，出口温度为75℃)制粉，即得到改良牡蛎酶解蛋白粉基料。
实施例3
S1.使用去壳的牡蛎为原料，将牡蛎肉反复清洗干净后，在冰水中超声浸泡脱盐4次，每次浸泡超声的时间是20min，每次所用的冰水体积为牡蛎肉质量的4倍。使用破壁机进行打浆，按料液比1mg∶5mL的比例加水匀浆，在均质分散机中均质分散，转速为4800rpm，均质时间为10min，放入超声装置中超声20min，调节均质后的混合液pH至6.5，在55℃、pH为6.5的条件下加入1.7wt％动物蛋白酶，酶解6h后将其加热至100℃灭酶，得到牡蛎酶解产物；
S2.将牡蛎酶解产物冷却至室温，添加复合脱腥剂(甜叶菊粉、青柠浊汁和红茶粉按1∶4∶2的质量比混合均匀)，添加复合脱腥剂后将溶液pH调至7.0，加入活性炭(活性炭的加入量为破壁后牡蛎肉质量的1％)，牡蛎酶解产物与复合脱腥剂的添加比例为100mL∶8g。脱腥处理后经过离心(9000rpm离心20min)、过滤、浓缩，制成固形物含量为20％的浓缩液；
S3.按浓缩液的固形物含量的2倍添加麦芽糊精作为包埋剂进行搅拌包埋3h，5℃过夜，过80目筛网，进行喷雾干燥(喷雾干燥的进口温度为190℃，流速为11rpm，出口温度为75℃)制粉，即得到改良牡蛎酶解蛋白粉基料。
对比例1
同实施例2，不同之处在于不进行脱腥处理，直接将牡蛎酶解产物离心，取上清液后过滤、浓缩，制成固形物含量为30％的浓缩液，进行喷雾干燥后得到牡蛎酶解蛋白粉基料。
对比例2
同实施例2，不同之处仅在于S2为：将牡蛎酶解产物冷却至室温后，添加活性炭脱腥，活性炭的加入量为破壁后牡蛎肉质量的1％，50℃条件水浴脱腥50min，然后添加安琪酵母(安琪酵母的加入量为破壁后牡蛎肉质量的1％)，40℃条件水浴脱腥60min。离心、取上清液后过滤、浓缩，制成固形物含量为30％的浓缩液。
对比例3
同实施例2，不同之处仅在于S2为：将牡蛎酶解产物冷却至室温后，添加红茶浓缩液脱腥，牡蛎酶解产物与红茶浓缩液的比为500mL∶10g，离心、取上清液后过滤、浓缩，制成固形物含量为30％的浓缩液。
红茶浓缩液由10g∶200mL(红茶∶水)的茶水，在85℃条件下反复浸提3次后混合，浓缩至100mL制得。
对比例4
同实施例2，不同之处仅在于：步骤S3中将喷雾干燥换成冷冻干燥。冷冻干燥在冷冻干燥机中进行，冷冻干燥机的升华干燥真空度为45Pa、升华干燥温度为38℃、解析干燥真空度为23Pa、解析干燥温度为55℃、装载量为7.00kg/m2。冷冻干燥72h，收集冻干粉即为牡蛎酶解蛋白粉基料。
对比例5
同实施例2，不同之处仅在于：步骤S3中不进行包埋，进行喷雾干燥制粉，即得到改良牡蛎酶解蛋白粉基料。
对比例6
同实施例2，不同之处仅在于包埋时将包埋剂麦芽糊精换成等质量的α-环糊精。
试验例：
1.测试上述实施例和对比例的得粉率(％)，计算方法如下：
2.感官值
选择经过专业训练的10名感官评定人员从外观质地、冲泡前后色泽、溶解状态、口感、香气5个指标，参照感官评分标准对各个实施例以及对比例制备的牡蛎蛋白粉基料(以下简称制品)进行评价。为减少实验较大偏差，规定实验前1天内评定人员禁食刺激性食物或者饮料，每评定1组样品都需用纯净水漱口。感官评分见表1。各实施例与对比例制品的理化指标见表2。
表1感官评分表
表1各实施例与对比例制品理化指标表
表3各实施例与对比例营养成分表
含量/每100g 能量 蛋白质 碳水化合物 脂肪 钠 锌
实施例1 385.74KJ 10.10g 83.77g 1.14g 147mg 38.7mg
实施例2 386.54KJ 10.16g 83.84g 1.07g 146mg 38.6mg
实施例3 385.61KJ 10.07g 83.79g 1.10g 148mg 38.8mg
对比例1 384.20KJ 10.28g 81.18g 2.04g 146mg 32.5mg
对比例2 368.82KJ 7.06g 83.39g 0.78g 136mg 38.1mg
对比例3 369.45KJ 7.13g 83.32g 0.85g 135mg 31.86mg
对比例4 382.13KJ 8.16g 83.21g 1.85g 132mg 28.8mg
对比例5 370.57KJ 7.21g 82.98g 1.09g 278mg 51.6mg
对比例6 370.93KJ 7.13g 83.24g 1.05g 131mg 32.46mg
原料(新鲜牡蛎)、实施例2及对比例1-6制品挥发性气味成分电子鼻比较结果见图1，由图1电子鼻数据表明，对比例1不进行脱腥处理，直接制备牡蛎酶解后的牡蛎蛋白粉，经过酶解反应后，含有较高的氮氧化合物质和硫化物。对比例2只添加1wt％的活性炭和酵母进行脱腥，活性炭可以有效地吸附牡蛎酶解后的腥味，经过酵母发酵后，产生清香的气味，对比例3中只添加红茶浓缩液进行脱腥，脱腥处理后带有红茶的清香。说明电子鼻能有效区分原料和脱腥处理后的牡蛎酶解蛋白粉基料。根据每个传感器所能感应的灵敏物质分析，牡蛎本身均含有较多的硫化物和含氮氧化合物质，其中原料的含氮氧化合物质和硫化物感应值高于其他，实施例2中使用复合脱腥剂处理后，制备的牡蛎酶解蛋白粉基料中氮氧化合物和含硫化合物明显少于原料和对比例1未经过脱腥处理的酶解牡蛎粉。与其他对比例的脱腥方法相比，实施例2的脱腥方法处理效果更好，无牡蛎特有的藻腥味，并带有芳草的清香。
原料(新鲜牡蛎)、实施例2及对比例1-6制品感官评价气味特征比较结果见图2，原料、实施例2及对比例1-6制品滋味感官分析比较结果见图3，由图2气味感官评分雷达图数据可明显看出牡蛎原料匀浆液呈现出明显的青草味，其次是鱼腥味、水果香和贝肉香及哈喇味。对比例1不进行脱腥处理，经酶解后鱼腥味和蛤蜊味极显著增，这可能与酶解过程中发生的脂质氧化反应相关；青草味极显著下降，水果香显著下降，贝肉香基本维持不变。说明不进行脱腥处理，酶解后整体风味变差。对比例2和对比例3两种脱腥方法对酶解后鱼腥味和哈喇味都显著降低，对比例2有发酵后的清香，对比例3赋予了茶叶的清香，对比例4和对比例6与实施例1-3无明显气味变化，但对比例5冷冻干燥后腥味物质明显突出。但是实施例1-3对酶解后牡蛎风味改善更明显，并显著提高了芳草香和水果香，改善效果更明显。结合滋味的感官评分结果图3分析，对比例1不进行脱腥处理，经酶解后的牡蛎蛋白粉口感差，咸鲜味重，口感偏咸；对比例2和对比例3的脱腥方法处理后虽然对牡蛎蛋白粉的腥味问题有很大的改善，但是在口感上没有很明显的改良效果；而实施例2通过添加复合脱腥剂，甜叶菊粉作为天然甜味剂和矫味剂，柠檬浊汁作为酸味剂，进行脱腥处理后，在达到脱除腥味的同时对牡蛎酶解液的口感进行了改良，使改良牡蛎酶解蛋白粉基料有酸甜口感，无苦味，在一定程度上改良了牡蛎酶解蛋白粉口感差、咸鲜味重、口感偏咸的问题，在一定程度上能减弱牡蛎酶解蛋白粉咸鲜回味重的难题。
实施例2及对比例1-6制品电子舌滋味分析比较结果见图4，可知实施例2使用复合脱腥剂处理后，咸味和鲜味与对比例1-6对比明显降低，对比例1中未经过改良后的牡蛎酶解蛋白粉鲜味值为4.20，实施例2的鲜味值降低至0.10。说明使复合脱腥剂处理能有效地解决牡蛎酶解蛋白粉基料特有的咸鲜味回味过重的问题，咸味能得有效减弱，鲜味分别降低了95.71％。与对比例2和对比例3相比鲜味降低76.34％和78.22％。原因是因为实施例中添加了青柠浊汁增加酸味，酸味在一定程度上能有效减弱咸味，而且添加的茶味的回味也在一定程度上减弱鲜味的回味，实施例2使用的复合脱腥剂能有效地改善牡蛎酶解蛋白粉基料的口感。结合图3的感官评分柱形图可知，实施例2的感官评分较高，采用实施例的方法比例处理后的牡蛎酶解蛋白粉基料腥味和苦味脱除及风味改良，咸鲜味掩盖效果更好。
实施例2制备的改良牡蛎酶解蛋白粉基料实物图(左)及其冲调状态(右)见图5，可知实施例2制备的改良牡蛎酶解蛋白粉基料色泽鲜艳、呈橙黄色，无腥味，同时具有芳草的清新气味和麦芽糊精的香甜，其适口性显著提高，可以直接作为健康食品冲调食用，也可以作为食品基料用于制作具有牡蛎风味、营养与功能性及颜色的各类食品。并且本发明的方法简单，绿色健康并减少成本，为后续基于牡蛎饮品开发的产品提供了可靠基础。
使用一种脱腥剂进行脱腥，虽然能起到脱腥作用，但存在活性物质损失大，或因添加量过大而引入新的异味等缺点。本发明通过几种脱腥剂对物料进行联合脱腥，不同脱腥剂由于脱腥原理不同而起到互补作用，不同脱腥剂产生的协同增效作用也能使脱腥效果更佳。本发明的原理是通过渗透压多次冲洗脱盐，通过水解度为指标优化后动物蛋白酶酶解方式制备牡蛎酶解液，联合使用感官掩蔽法添加复合脱腥剂，利用青柠、甜叶菊及红茶的香气，掩盖牡蛎的腥臭味，同时青柠中的柠檬酸、甜叶菊中的甜菊糖苷和红茶中的茶多酚，改善了酶解液的口感风味，采用活性炭吸附等对酶解液进行脱腥处理，可以获得较好的脱腥效果，极大改善了酶解液的风味品质。使用麦芽糊精包埋联合喷雾干燥技术，高温进行美拉德反应，不仅改善酶解液风味，实施例1-3麦芽糊精包埋提高了牡蛎粉的得粉率，分别为86.32％、84.15％，85.67％，不添加麦芽糊精包埋对比例5得粉率仅为45.60％，酶解液在喷雾干燥的时候附着沾壁，造成大量损失，虽然喷雾干燥对与冷冻干燥得粉率相差不大，但冷冻干燥的成本高，耗时长，冷冻后牡蛎本身的腥味物质突出。本发明通过多种方法协同改良牡蛎蛋白粉基料的风味，可以起到较好的腥味去除效果，而且在一定程度的上掩盖了咸鲜味的回味，改良口感，在一定程度上减少营养损失，并提高了牡蛎蛋白粉基料的得粉率和复溶性。
以上，仅为本申请较佳的具体实施方式，但本申请的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本申请揭露的技术范围内，可轻易想到的变化或替换，都应涵盖在本申请的保护范围之内。因此，本申请的保护范围应该以权利要求的保护范围为准。

Claims (10)

1.一种改良牡蛎酶解蛋白粉基料风味的工艺，其特征在于，采用添加复合脱腥剂、活性炭吸附、包埋剂包埋和喷雾干燥的方法对牡蛎酶解产物进行处理。
2.根据权利要求1所述的改良牡蛎酶解蛋白粉基料风味的工艺，其特征在于，所述牡蛎酶解产物的制备方法如下：以去壳的牡蛎为原料，清洗牡蛎肉，在冰水浸泡条件下超声浸泡脱盐；加入水后进行匀浆，均质分散，超声处理，调节均质分散后的混合液pH至中性，加入动物蛋白酶进行酶解反应，酶解结束后进行灭酶处理，得到牡蛎酶解产物。
3.根据权利要求2所述的改良牡蛎酶解蛋白粉基料风味的工艺，其特征在于，所述在冰水浸泡条件下超声浸泡脱盐是在冰水中超声浸泡脱盐4-6次，每次浸泡超声的时间是15min-20min，每次所用的冰水体积为牡蛎肉质量的4-6倍。
4.根据权利要求2所述的改良牡蛎酶解蛋白粉基料风味的工艺，其特征在于，所述均质分散时，转速为4800rpm-5200rpm，均质时间为6min-10min；
所述匀浆时，牡蛎和水的料液比为1mg∶(4-5)mL。
5.根据权利要求2所述的改良牡蛎酶解蛋白粉基料风味的工艺，其特征在于，所述动物蛋白酶的酶活力为100000U/g；所述动物蛋白酶的加入量为均质分散后的混合物质量的1.4％-1.7％；
所述酶解反应时，反应温度为50℃-55℃，pH为6.5-7，反应时间为4h-6h。
6.根据权利要求1所述的改良牡蛎酶解蛋白粉基料风味的工艺，其特征在于，所述复合脱腥剂为甜叶菊粉、青柠浊汁和红茶粉，质量比为1∶(2-4)∶(1-2)。
7.根据权利要求1所述的改良牡蛎酶解蛋白粉基料风味的工艺，其特征在于，每100mL所述牡蛎酶解产物中添加所述复合脱腥剂2g-10g。
8.根据权利要求1所述的改良牡蛎酶解蛋白粉基料风味的工艺，其特征在于，所述喷雾干燥的进口温度为170℃-190℃，流速为9rpm-11rpm，出口温度为70℃-75℃。
9.一种根据权利要求1-8任一项所述的工艺得到的改良牡蛎酶解蛋白粉基料作为可直接食用食品中的应用。
10.一种根据权利要求1-8任一项所述的工艺得到的改良牡蛎酶解蛋白粉基料作为食品基料在制备具有牡蛎风味、营养的各类食品中的应用。
CN202410012114.1A 2024-01-02 2024-01-02 一种改良牡蛎酶解蛋白粉基料风味的工艺及应用 Pending CN117581971A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202410012114.1A CN117581971A (zh) 2024-01-02 2024-01-02 一种改良牡蛎酶解蛋白粉基料风味的工艺及应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202410012114.1A CN117581971A (zh) 2024-01-02 2024-01-02 一种改良牡蛎酶解蛋白粉基料风味的工艺及应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN117581971A true CN117581971A (zh) 2024-02-23

Family

ID=89916914

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202410012114.1A Pending CN117581971A (zh) 2024-01-02 2024-01-02 一种改良牡蛎酶解蛋白粉基料风味的工艺及应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN117581971A (zh)

Citations (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH11318379A (ja) * 1998-05-15 1999-11-24 Tanabe Seiyaku Co Ltd 飲食品の風味改善方法および風味改善剤
CN102273706A (zh) * 2011-06-20 2011-12-14 广东海洋大学 一种牡蛎蛋白饮料的制备方法
CN102742873A (zh) * 2012-07-23 2012-10-24 广东海洋大学 一种牡蛎方便食品的制备方法
WO2015135501A1 (zh) * 2014-03-14 2015-09-17 嘉必优生物工程（武汉）有限公司 一种微生物油及其制备方法、一种微胶囊
CN105581282A (zh) * 2015-12-16 2016-05-18 渤海大学 一种脱腥牡蛎酶解汁的制备方法
US20170362629A1 (en) * 2015-11-05 2017-12-21 Infinitus (China) Company Ltd Oyster peptide capable of enhancing sexual function, and preparation method and application thereof
CN108085355A (zh) * 2017-12-22 2018-05-29 大连深蓝肽科技研发有限公司 一种微胶囊化牡蛎低聚肽的制备方法
CN110684816A (zh) * 2019-10-11 2020-01-14 广东海洋大学深圳研究院 一种高品质牡蛎蛋白肽的制备方法及其应用
CN111109552A (zh) * 2020-01-03 2020-05-08 中国海洋大学 一种脱腥脱苦的牡蛎全营养粉制备方法
US20200260768A1 (en) * 2019-02-19 2020-08-20 Paragon Flavors, Inc. System and method for flavor encapsulation
WO2020232975A1 (zh) * 2019-05-23 2020-11-26 华南理工大学 从牡蛎酶解液中分离出的一种呈味肽及其制备方法与应用
CN114403339A (zh) * 2022-01-28 2022-04-29 河西学院 一种利用甜叶菊叶和马铃薯泥降低植物中风味物质含量的方法

Patent Citations (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH11318379A (ja) * 1998-05-15 1999-11-24 Tanabe Seiyaku Co Ltd 飲食品の風味改善方法および風味改善剤
CN102273706A (zh) * 2011-06-20 2011-12-14 广东海洋大学 一种牡蛎蛋白饮料的制备方法
CN102742873A (zh) * 2012-07-23 2012-10-24 广东海洋大学 一种牡蛎方便食品的制备方法
WO2015135501A1 (zh) * 2014-03-14 2015-09-17 嘉必优生物工程（武汉）有限公司 一种微生物油及其制备方法、一种微胶囊
US20170362629A1 (en) * 2015-11-05 2017-12-21 Infinitus (China) Company Ltd Oyster peptide capable of enhancing sexual function, and preparation method and application thereof
CN105581282A (zh) * 2015-12-16 2016-05-18 渤海大学 一种脱腥牡蛎酶解汁的制备方法
CN108085355A (zh) * 2017-12-22 2018-05-29 大连深蓝肽科技研发有限公司 一种微胶囊化牡蛎低聚肽的制备方法
US20200260768A1 (en) * 2019-02-19 2020-08-20 Paragon Flavors, Inc. System and method for flavor encapsulation
WO2020232975A1 (zh) * 2019-05-23 2020-11-26 华南理工大学 从牡蛎酶解液中分离出的一种呈味肽及其制备方法与应用
CN110684816A (zh) * 2019-10-11 2020-01-14 广东海洋大学深圳研究院 一种高品质牡蛎蛋白肽的制备方法及其应用
CN111109552A (zh) * 2020-01-03 2020-05-08 中国海洋大学 一种脱腥脱苦的牡蛎全营养粉制备方法
CN114403339A (zh) * 2022-01-28 2022-04-29 河西学院 一种利用甜叶菊叶和马铃薯泥降低植物中风味物质含量的方法

Non-Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
WANG, ZHIJUN等: "Effect of Drying Process on the Formation of the Characteristic Flavor of Oyster (Crassostrea hongkongensis)", 《FOODS》, vol. 12, no. 11, 24 June 2023 (2023-06-24), pages 1 - 5 *
刘慧: "牡蛎蛋白饮料脱腥技术的研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库工程科技Ⅰ辑（电子期刊）》, vol. 2012, no. 06, 15 June 2012 (2012-06-15), pages 024 - 315 *
曹文红等: "牡蛎肉酶解工艺优化及其产物的分子质量分布研究", 《食品科技》, vol. 44, no. 7, 4 September 2019 (2019-09-04), pages 185 - 190 *
李婉等: "两款果香型牡蛎肽饮料的研制", 《食品研究与开发》, vol. 41, no. 19, 30 September 2020 (2020-09-30), pages 132 - 139 *
董庆亮等: "分子包埋技术制备脱腥牡蛎粉工艺的优化", 《食品与机械》, vol. 32, no. 07, 6 September 2016 (2016-09-06), pages 186 - 190 *
许旻等: "喷雾干燥法制备牡蛎肽粉的体内抗氧化活性研究", 《食品工业科技》, vol. 37, no. 5, 15 April 2016 (2016-04-15), pages 361 - 364 *
陈慧斌等: "牡蛎高品质加工关键技术的创新与应用", 《福建省自然科学基金申报》, 30 January 2022 (2022-01-30) *
魏好程等: "正交试验优化牡蛎酶解制粉加工工艺", 《食品科学》, vol. 34, no. 18, 8 July 2014 (2014-07-08), pages 92 - 97 *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR100971010B1 (ko) 멸치액젓 농축물을 이용한 ｍｓｇ 대체용 조미료 조성물 및그 제조방법
RU2460338C2 (ru) Натуральный заменитель соли
KR102185001B1 (ko) 반건조 오징어의 제조방법 및 이에 의해 제조된 반건조 오징어
KR20130001560A (ko) 야콘 피클의 제조방법
JP3503885B2 (ja) 魚介類エキスを原料とする発酵調味料
KR100316281B1 (ko) 어패류를이용한기능성인스턴트김치용조미료의제조방법
KR102077189B1 (ko) 닭가슴살 육포 또는 가루의 제조방법
CN117581971A (zh) 一种改良牡蛎酶解蛋白粉基料风味的工艺及应用
KR102275330B1 (ko) 콜라겐 양배추즙 및 그 제조방법
KR100867555B1 (ko) 명창젓갈의 제조방법
JP5636199B2 (ja) アムラの渋味を低減する方法
JP3761047B2 (ja) 調味料
CN113142435A (zh) 一种香梨柠檬复合型饮料及其制备方法
CN106418523A (zh) 一种稳定型软枣猕猴桃功能保健凝乳
KR101111288B1 (ko) 기능성 고추장 및 그 제조방법
KR102393428B1 (ko) 키토산수를 이용한 육류의 가공방법 및 이에 따라 키토산수 처리된 육류
KR20050087426A (ko) 복어추출물이 함유된 건강음료 조성물 및 이의 제조방법
KR20160058646A (ko) 조미 황태포 및 이의 제조방법
KR102303015B1 (ko) 고로쇠 수액을 함유하는 동태탕 육수의 제조방법
KR102611995B1 (ko) 장류를 이용한 육류용 주정 맛술
KR102361992B1 (ko) 제주 전통 발효음료 쉰다리 함유 고기국수용 육수와 그 제조방법
CN110115364B (zh) 一种补气血的药膳鸡肉粉调味料及其制备方法
KR102627911B1 (ko) 다용도 조미료 조성물
KR20120134308A (ko) 천연 발효의 고칼슘이 함유된 기능성 김치의 제조방법 및 상기 방법으로 제조된 김치
JPS603462B2 (ja) 調味料の製造方法および調味料

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination